RU2022132619A - Конъюгаты цитокинов для лечения аутоиммунных заболеваний - Google Patents

Claims (44)

1. Модифицированный полипептид интерлейкин 2 (IL-2) лечения аутоиммунного заболевания, содержащий:

по меньшей мере одну неприродную аминокислоту ковалентно присоединенную к конъюгирующему фрагменту, где полипептид IL-2 содержит область 10-133, 20-133, 30-133, 10-130, 20-130, 30-130, 10-125, 20-125, 30-125, 1-130 или 1-125 IL-2, где положения остатков относятся к положениям в SEQ ID NO: 1; и

где по меньшей мере одна неприродная аминокислота расположена в положении, которое снижает активность в рецепторной передаче сигнала к рецептору βγ интерлейкина 2 (IL-2Rβγ) или снижает рекрутинг субъединицы IL-2Rγ в комплекс IL-2/IL-2Rβ, но сохраняет значительную активацию рецептора αβγ интерлейкина 2 (IL-2Rαβγ), причем сниженная активность в рецепторной передаче сигнала сравнивается с активностью в рецепторной передаче сигнала между полипептидом IL-2 дикого типа и IL-2Rβγ и причем рекрутинг сравнивается с рекрутингом субъединицы IL-2Rγ полипептидом IL-2 дикого типа.

2. Модифицированный полипептид IL-2 по п. 1, в котором положение по меньшей мере одной неприродной аминокислоты выбрано из K9, Н16, L19, D20, N26, N88, Е100 и N119, где положения остатков относятся к положениям в SEQ ID NO: 1.

3. Модифицированный полипептид IL-2 по п. 1 или 2, где по меньшей мере одна неприродная аминокислота представляет собой аналог лизина или содержит ароматическую боковую цепь.

4. Модифицированный полипептид IL-2 по любому из пп. 1-3, где по меньшей мере одна неприродная аминокислота содержит N6-азидоэтокси-L-лизин (AzK), N6-пропаргилэтокси-L-лизин (PraK), BCN-L-лизин, норборнен-лизин, ТСО-лизин, метилтетразин-лизин, аллилоксикарбониллизин, п-ацетил-L-фенилаланин, п-азидометил-L-фенилаланин (pAMF), п-йод-L-фенилаланин, м-ацетилфенилаланин, п-пропаргилоксифенилаланин, п-пропаргилфенилаланин, 3-метилфенилаланин, фторированный фенилаланин, изопропил-L-фенилаланин, п-азидо-L-фенилаланин, п-бензоил-L-фенилаланин, п-бромфенилаланин, п-амино-L-фенилаланин, О-аллилтирозин, О-метил-L-тирозин, O-4-аллил-L-тирозин, 4-пропил-L-тирозин, фосфонотирозин, L-3-(2-нафтил)аланин, 2-амино-3-((2-((3-(бензилокси)-3-оксопропил)амино)этил)селанил)пропановую кислоту или 2-амино-3-(фенилселанил)пропановую кислоту.

5. Модифицированный полипептид IL-2 по любому из пп. 1-4, где конъюгирующий фрагмент содержит водорастворимый полимер.

6. Модифицированный полипептид IL-2 по п. 5, где водорастворимый полимер включает полиэтиленгликоль (PEG), поли(пропиленгликоль) (PPG), сополимеры этиленгликоля и пропиленгликоля, поли(оксиэтилированный полиол), поли(олефиновый спирт), поли(винилпирролидон), поли(гидроксиалкилметакриламид), поли(гидроксиалкилметакрилат), поли(сахариды), поли(а-гидроксикислоту), поли(виниловый спирт), полифосфазен, полиоксазолины (POZ), поли(N-акрилоилморфолин) или их комбинацию.

7. Модифицированный полипептид IL-2 по п. 6, где водорастворимый полимер включает PEG.

8. Модифицированный полипептид IL-2 по п. 7, где PEG имеет средневесовую молекулярную массу от приблизительно 10 кДа до приблизительно 85 кДа.

9. Модифицированный полипептид IL-2 по п. 7, где PEG имеет средневесовую молекулярную массу приблизительно 20 кДа, приблизительно 25 кДа, приблизительно 30 кДа, приблизительно 35 кДа, приблизительно 40 кДа, приблизительно 45 кДа или приблизительно 50 кДа.

10. Модифицированный полипептид IL-2 по любому из пп. 1-9, где конъюгирующий фрагмент связан по меньшей мере с одной неприродной аминокислотой модифицированного полипептида IL-2 через линкер.

11. Модифицированный полипептид IL-2 по п. 10, где линкер включает гомобифункциональный линкер, гетеробифункциональный линкер, расщепляемый или нерасщепляемый дипептидный линкер, спейсер или их комбинацию.

12. Модифицированный полипептид IL-2 по любому из пп. 1-11, где модифицированный полипептид IL-2 обладает снижением активности в рецепторной передаче сигнала к IL-2Rβγ, а снижение активности в рецепторной передаче сигнала к IL-2Rβγ является приблизительно 1-кратным, 2-кратным, 3-кратным, 4-кратным, 5-кратным, 6-кратным, 7-кратным, 8-кратным, 9-кратным, 10-кратным, 30-кратным, 50-кратным, 100-кратным, 200-кратным, 300-кратным, 400-кратным, 500-кратным, 1000-кратным или более к IL-2Rβγ относительно полипептида IL-2 дикого типа.

13. Модифицированный полипептид IL-2 по любому из пп. 1-12, отличающийся тем, что модифицированный полипептид IL-2 представляет собой функционально активный фрагмент полноразмерного полипептида IL-2.

14. Модифицированный полипептид IL-2 по любому из пп. 1-13, отличающийся тем, что модифицированный полипептид IL-2 включает N-концевую делецию.

15. Модифицированный полипептид IL-2 по п. 14, где N-концевая делеция включает делецию первых 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 20, 25 или 30 остатков с N-конца, где положения остатков относятся к положениям в SEQ ID NO: 1.

16. Модифицированный полипептид IL-2 по любому из пп. 1-15, отличающийся тем, что модифицированный полипептид IL-2 включает приблизительно 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичность последовательности к SEQ ID NO: 1.

17. Модифицированный полипептид IL-2 по любому из пп. 1-16, отличающийся тем, что модифицированный полипептид IL-2 способен вызывать экспансию CD4+ Т-регуляторных (Treg) клеток.

18. Модифицированный полипептид IL-2 по любому из пп. 1-16, где конъюгирующий фрагмент ослабляет или блокирует активность в рецепторной передаче сигнала IL-2 с IL-2Rβγ или снижает рекрутинг субъединицы IL-2Rγ в комплекс IL-2/IL-2Rβ.

19. Модифицированный полипептид IL-2 по любому из пп. 1-16, где пролиферация CD4+ Treg-клеток модифицированным комплексом IL-2/IL-2Rαβγ эквивалентна или больше, чем у полипептида IL-2 дикого типа.

20. Модифицированный полипептид IL-2 по любому из пп. 1-16, где модифицированный комплекс IL-2/IL-2Rαβγ индуцирует пролиферацию CD4+ Treg-клеток до популяции, достаточной для модулирования течения заболевания на животной модели.

21. Модифицированный полипептид IL-2 по любому из пп. 1-16, где модифицированный полипептид IL-2 проявляет первую активность в рецепторной передаче сигнала к IL-2Rβγ и вторую активность в рецепторной передаче сигнала к IL-2Rαβγ, где первая активность в рецепторной передаче сигнала по меньшей мере в 1 раз, 2 раза, 3 раза, 4 раза, 5 раз, 6 раз, 7 раз, 8 раз, 9 раз, 10 раз, 20 раз, 30 раз, 50 раз, 100 раз, 500 раз, 1000 раз или более ниже, чем вторая активность в рецепторной передаче сигнала.

22. Модифицированный полипептид IL-2 по п. 21, где первая активность в рецепторной передаче сигнала модифицированного полипептида IL-2 ниже, чем активность в рецепторной передаче сигнала полипептида IL-2 дикого типа к IL-2Rβγ.

23. Модифицированный полипептид IL-2 по п. 21, где вторая активность в рецепторной передаче сигнала модифицированного полипептида IL-2 ниже, чем активность в рецепторной передаче сигнала полипептида IL-2 дикого типа к IL-2Rαβγ.

24. Модифицированный полипептид IL-2 по любому из пп. 1-16, где модифицированный полипептид IL-2 дополнительно обеспечивает увеличение рекрутинга субъединицы IL-2Rα в полипептид IL-2, что приводит к активации рецептора αβγ интерлейкина 2 (IL-2Rαβγ), причем увеличение рекрутинга сравнивается с рекрутингом субъединицы IL-2Rα полипептидом IL-2 дикого типа.

25. Фармацевтическая композиция для лечения аутоиммунного заболевания, содержащая:

модифицированный полипептид IL-2 по любому из пп. 1-24; и

фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.

26. Фармацевтическая композиция по п. 25, отличающаяся тем, что фармацевтическая композиция составлена для системной доставки.

27. Фармацевтическая композиция по п. 25, отличающаяся тем, что фармацевтическая композиция составлена для парентерального введения.

28. Способ лечения аутоиммунного заболевания или нарушения у нуждающегося в этом субъекта, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества модифицированного полипептида IL-2 по любому из пп. 1-24 или фармацевтической композиции по любому из пп. 25-27.

29. Способ по п. 28, в котором аутоиммунное заболевание или нарушение включает очаговую алопецию, аутоиммунную гемолитическую анемию, аутоиммунный гепатит, дерматомиозит, сахарный диабет 1 типа, ювенильный идиопатический артрит, гломерулонефрит, болезнь Грейвса, синдром Гийена-Барре, идиопатическую тромбоцитопеническую пурпуру, миастению гравис, рассеянный склероз, пузырчатку/пемфигоид, пернициозную анемию, узелковый полиартериит, полимиозит, первичный билиарный цирроз печени, псориаз, ревматоидный артрит, склеродермию, синдром Шегрена, системную красную волчанку, тиреоидит, увеит, витилиго или гранулематоз Вегенера.

30. Способ по п. 28 или 29, дополнительно включающий введение дополнительного терапевтического средства.

31. Способ по п. 30, в котором модифицированный полипептид IL-2 и дополнительное терапевтическое средство вводят одновременно.

32. Способ по п. 30, в котором модифицированный полипептид IL-2 и дополнительное терапевтическое средство вводят последовательно.

33. Способ по п. 32, в котором модифицированный полипептид IL-2 вводят до введения дополнительного терапевтического средства.

34. Способ по п. 32, в котором модифицированный полипептид IL-2 вводят после введения дополнительного терапевтического средства.

35. Способ по любому из пп. 28-34, в котором субъектом является человек.

36. Способ увеличения популяции CD4+ регуляторных Т-клеток (Treg), включающий:

контактирование клетки с модифицированным полипептидом IL-2 по любому из пп. 1-24, или фармацевтической композицией по любому из пп. 25-27, в течение времени, достаточного для индуцирования образование комплекса с IL-2Rαβγ, стимулируя тем самым экспансию популяции Treg-клеток.

37. Способ по п. 36, отличающийся тем, что способ представляет собой способ in vitro.

38. Способ по п. 36, отличающийся тем, что способ представляет собой способ in vitro.

39. Способ по п. 36, отличающийся тем, что способ представляет собой способ ex vivo.