RU2022109675A - Способ одновременной генодиагностики четырех мутантных аллелей бета-казеина у крупного рогатого скота и тест-система для его осуществления - Google Patents

Claims (2)

1. Способ одновременной генодиагностики 4-х аллелей бета-казеина CSN2^A1, CSN2^B, CSN2^A2, CSN2^A3 у крупного рогатого скота, заключающийся в том, что проводят выделение ДНК из биологического материала, постановку полимеразной цепной реакции в режиме реального времени, с использованием трех реакционных смесей, содержащих разбавитель, Taq ДНК-полимеразу, три положительных и один отрицательный контрольный образец для каждой реакционной смеси, при подготовке к проведению реакции рассчитывают необходимый объем компонентов, исходя из количества исследуемых образцов плюс 4, реактивы смешивают, затем в подготовленные для ПЦР пробирки вносят по 20 мкл приготовленной ПЦР-смеси, в каждую ПЦР пробирку добавляют по 5 мкл контрольных и исследуемых образцов, пробирки помещают в амплификатор, при числе циклов амплификации равном 40, анализ полученных данных проводят путем сравнения амплифицированных участков генов, результаты интерпретируют на основании наличия или отсутствия пересечения кривой флуоресценции с установленной на соответствующем уровне пороговой линией.

2. Тест-система для осуществления способа по п. 1 методом постановки полимеразной цепной реакции в режиме реального времени, характеризующаяся тем, что включает реактивы в виде трех комплектов, каждый комплект состоит из компонентов: реакционная смесь, разбавитель, полимераза и 4 контрольных образца, ПЦР смесь с CSN2^A1, CSN2^B, CSN2^A2, CSN2^A3, содержащую 50 мМ KCl, 50 мМ TRIS-HCl, 250 нМ dNTP, 2,5 мМ MgCl₂, праймеры - в концентрации 200 нМ, флуоресцентно-меченных олигонуклеотидных проб - в концентрации 200 нМ, имеющие следующие последовательности: SEQ ID NO 1, SEQ ID NO 2, SEQ ID NO 3, SEQ ID NO 4, SEQ ID NO 5, SEQ ID NO 6, SEQ ID NO 7, SEQ ID NO 8, *rev -используется обратная последовательность, разбавитель, 2,5 ед. Taq ДНК-полимеразы.