Claims (2)
1. Способ одновременной генодиагностики 4-х аллелей бета-казеина CSN2A1, CSN2B, CSN2A2, CSN2A3 у крупного рогатого скота, заключающийся в том, что проводят выделение ДНК из биологического материала, постановку полимеразной цепной реакции в режиме реального времени, с использованием трех реакционных смесей, содержащих разбавитель, Taq ДНК-полимеразу, три положительных и один отрицательный контрольный образец для каждой реакционной смеси, при подготовке к проведению реакции рассчитывают необходимый объем компонентов, исходя из количества исследуемых образцов плюс 4, реактивы смешивают, затем в подготовленные для ПЦР пробирки вносят по 20 мкл приготовленной ПЦР-смеси, в каждую ПЦР пробирку добавляют по 5 мкл контрольных и исследуемых образцов, пробирки помещают в амплификатор, при числе циклов амплификации равном 40, анализ полученных данных проводят путем сравнения амплифицированных участков генов, результаты интерпретируют на основании наличия или отсутствия пересечения кривой флуоресценции с установленной на соответствующем уровне пороговой линией.1. A method for simultaneous gene diagnostics of 4 beta-casein alleles CSN2 A1 , CSN2 B , CSN2 A2 , CSN2 A3 in cattle, which consists in isolating DNA from biological material, performing a polymerase chain reaction in real time, with using three reaction mixtures containing a diluent, Taq DNA polymerase, three positive and one negative control sample for each reaction mixture, in preparation for the reaction, calculate the required volume of components based on the number of test samples plus 4, the reagents are mixed, then in the prepared PCR tubes are filled with 20 μl of the prepared PCR mixture, 5 μl of control and test samples are added to each PCR tube, the tubes are placed in an amplifier, with the number of amplification cycles equal to 40, the analysis of the obtained data is carried out by comparing the amplified gene regions, the results are interpreted based on the presence or absence of intersection of the fluorescence curve with the threshold line set at the appropriate level.
2. Тест-система для осуществления способа по п. 1 методом постановки полимеразной цепной реакции в режиме реального времени, характеризующаяся тем, что включает реактивы в виде трех комплектов, каждый комплект состоит из компонентов: реакционная смесь, разбавитель, полимераза и 4 контрольных образца, ПЦР смесь с CSN2A1, CSN2B, CSN2A2, CSN2A3, содержащую 50 мМ KCl, 50 мМ TRIS-HCl, 250 нМ dNTP, 2,5 мМ MgCl2, праймеры - в концентрации 200 нМ, флуоресцентно-меченных олигонуклеотидных проб - в концентрации 200 нМ, имеющие следующие последовательности: SEQ ID NO 1, SEQ ID NO 2, SEQ ID NO 3, SEQ ID NO 4, SEQ ID NO 5, SEQ ID NO 6, SEQ ID NO 7, SEQ ID NO 8, *rev -используется обратная последовательность, разбавитель, 2,5 ед. Taq ДНК-полимеразы.2. A test system for implementing the method according to claim 1 by performing a polymerase chain reaction in real time, characterized in that it includes reagents in the form of three sets, each set consists of components: a reaction mixture, a diluent, a polymerase and 4 control samples, PCR mixture with CSN2 A1 , CSN2 B , CSN2 A2 , CSN2 A3 , containing 50 mM KCl, 50 mM TRIS-HCl, 250 nM dNTP, 2.5 mM MgCl 2 , primers - at a concentration of 200 nM, fluorescently labeled oligonucleotide probes - at a concentration of 200 nM, having the following sequences: SEQ ID NO 1, SEQ ID NO 2, SEQ ID NO 3, SEQ ID NO 4, SEQ ID NO 5, SEQ ID NO 6, SEQ ID NO 7, SEQ ID NO 8, * rev - reverse sequence is used, diluent, 2.5 units. Taq DNA polymerase.