RU2021374C1

RU2021374C1 - Method of lysozyme-containing product preparing

Info

Publication number: RU2021374C1
Authority: RU
Inventors: У.Я. Каулиньш; А.А. Грасис; Л.Р. Вецмуктане
Original assignee: Латвийский сельскохозяйственный университет
Priority date: 1991-03-21
Filing date: 1991-03-21
Publication date: 1994-10-15

Abstract

FIELD: biotechnology, food industry. SUBSTANCE: egg protein is acidified and coagulated at 85-100 C following by removal of lysozyme-containing liquid phase and drying of remained protein mass at 83-95 C up to formation of water-insoluble lysozyme-containing product. Mass is stored well and behaves as immobilized enzymic preparation, and liquid phase is used for preparing of crystalline enzyme. EFFECT: improved method of lysozyme-containing product preparing.

Description

Изобретение относится к биотехнологии и пищевой промышленности, в частности к получению ферментных препаратов из пищевого сырья. Чаще всего применяемым в промышленных масштабах является способ выделения фермента из жидкого сырья в щелочной среде с добавлением неорганических солей, а именно к яичному белку добавляют хлористый натрий до получения 5%-ного раствора, и раствор при рН 9,5 выдерживают 48-72 ч для осаждения кристаллов лизоцима. The invention relates to biotechnology and the food industry, in particular to the production of enzyme preparations from food raw materials. The most commonly used on an industrial scale is a method for isolating an enzyme from liquid raw materials in an alkaline medium with the addition of inorganic salts, namely, sodium chloride is added to the egg white to obtain a 5% solution, and the solution is kept at a pH of 9.5 for 48-72 hours deposition of lysozyme crystals.

Наиболее близким к предложенному является способ получения лизоцима, согласно которому проводили детанурацию белка при температуре выше 60^oC с таким расчетом, чтобы коагулировалась основная масса посторонних белков, а лизоцим вымывают водой при рН ниже 6 в присутствии солей одновалентных металлов.Closest to the proposed one is a method for producing lysozyme, according to which protein was detuned at a temperature above 60 ^o C so that most foreign proteins coagulate and the lysozyme is washed with water at a pH below 6 in the presence of monovalent metal salts.

В круглодонную колбу вместимостью 1 л, помещенную в водяную баню при температуре ниже 100^oC, заливают 300 мл воды, подкисленной до рН 3,5 уксусной кислотой; при перемешивании добавляют 4 г натрия хлористого. После растворения соли при температуре раствора 95^oC и сильном перемешивании в течение 1 мин тонкой струей добавляют 100 мл яичного белка. После добавления всего раствора яичного белка полученную массу денатурированного белка отфильтровывают на воронке Бюхнера и промывают 50 мл раствора уксусной кислоты в воде, имеющего рН 3,5.In a round bottom flask with a capacity of 1 l, placed in a water bath at a temperature below 100 ^o C, pour 300 ml of water, acidified to pH 3.5 with acetic acid; with stirring, add 4 g of sodium chloride. After dissolving the salt at a solution temperature of 95 ^° C. and stirring vigorously for 1 minute, 100 ml of egg white is added in a fine stream. After adding the entire egg white solution, the resulting mass of denatured protein is filtered off on a Buchner funnel and washed with 50 ml of a solution of acetic acid in water having a pH of 3.5.

Фильтрат охлаждают и используют для выделения кристаллического лизоцима. The filtrate is cooled and used to isolate crystalline lysozyme.

Прототип имеет следующие недостатки:
1. После выделения лизоцима остается неиспользованным яичный белок, содержащий не менее 30% общей лизоцимной активности.The prototype has the following disadvantages:
1. After the isolation of lysozyme, egg white, containing at least 30% of the total lysozyme activity, remains unused.

2. Способ требует проведения ряда сложных операций, удорожающих готовый препарат. 2. The method requires a number of complex operations that increase the cost of the finished product.

С целью упрощения процесса полученную белковую массу при 83-95^oC высушивают до образования нерастворимого в воде лизоцимсодержащего продукта.In order to simplify the process, the resulting protein mass at 83-95 ^o C is dried to form a water-insoluble lysozyme-containing product.

Способ осуществляется следующим образом. The method is as follows.

Массу яичного белка подкисляют соляной кислотой до рН 5 и добавляют 0,5% натрия хлористого. Поднимают температуру до 85^oC в массе и фильтруют. Фильтрат используют для получения кристаллического лизоцима, а белковую массу сушат в сушильном шкафу при 85^oC и высушенную массу размельчают.The egg white mass is acidified with hydrochloric acid to pH 5 and 0.5% sodium chloride is added. Raise the temperature to 85 ^o C in the mass and filter. The filtrate is used to obtain crystalline lysozyme, and the protein mass is dried in an oven at 85 ^o C and the dried mass is crushed.

Лизоцимная активность порошка - 240 ед/мг (после первого вымачивания порошка), с равномерной эмиссией 20 ед/мг активности в 1 ч. The lysozyme activity of the powder is 240 u / mg (after the first soaking of the powder), with a uniform emission of 20 u / mg of activity per 1 h.

Лизоцим в организме действует как фактор защиты против инфекции, не расщепляется в желудочно-кишечном тракте и всасывается кишечной системой. Т. е. , разовые дозы лизоцима во время кормления животных действуют "ударным" способом, не обеспечивая непрерывную эмиссию фермента. Lysozyme in the body acts as a defense factor against infection, does not break down in the gastrointestinal tract and is absorbed by the intestinal system. That is, single doses of lysozyme during animal feeding act by the “shock” method, without providing continuous emission of the enzyme.

П р и м е р 1. 100 яиц с поврежденной скорлупой разбивают и отделяют белок от желтка. Получают 3,080 кг яичного белка. К 2,82 кг яичного белка добавляют НСl до рН 5 и 150 г натрия хлористого. Общий вес массы 3 кг. Массу на водяной бане подогревают до 85^oC и выдерживают при перемешивании в течение 15 мин. Фильтруют.PRI me R 1. 100 eggs with a damaged shell break and separate the protein from the yolk. Obtain 3.080 kg of egg white. HCl is added to 2.82 kg of egg white to pH 5 and 150 g of sodium chloride. The total weight of 3 kg. The mass in a water bath is heated to 85 ^o C and kept under stirring for 15 minutes Filtered.

Получают фильтрат около 400 мл (количество фильтрата зависит от зернистости массы) и около 2,6 кг белковой массы. Активность фильтрата 1230 ед/мл. Белковую массу высушивают в сушильном шкафу при 85^oC. Получают около 265 г грубозернистого материала, который размельчают.A filtrate of about 400 ml is obtained (the amount of filtrate depends on the grain size) and about 2.6 kg of protein mass. The activity of the filtrate is 1230 u / ml. The protein mass is dried in an oven at 85 ^o C. Receive about 265 g of coarse-grained material, which is crushed.

Полученный лизоцимсодержащий продукт характеризуется следующими показателями. The resulting lysozyme-containing product is characterized by the following indicators.

Активность водной вытяжки после первой 10-минутной экспозиции порошка при соотношениях белок-вода 1:10 равна 24,0 ед/мг. Активность водного раствора через 1 ч (при полном сливе водного раствора) 20 ед/мг белка. Активность после 2-го часа - 20,5 ед/мг белка, активность после 3-го часа - 20 ед/мг белка, активность после 4-го часа 20 ед/мг белка. Выделение лизоцима в течение 4 ч равномерное. The activity of the aqueous extract after the first 10-minute exposure of the powder at a protein-water ratio of 1:10 is 24.0 u / mg. The activity of the aqueous solution after 1 h (with complete draining of the aqueous solution) 20 u / mg protein. Activity after the 2nd hour - 20.5 u / mg of protein, activity after the 3rd hour - 20 u / mg of protein, activity after the 4th hour - 20 u / mg of protein. The release of lysozyme over 4 hours is uniform.

П р и м е р 2. Опыт проведен как по примеру 1. Белок высушивают в сушильном шкафу при температуре не более 95^oC. Полученная масса - стекловидные комки белого и коричневого цвета. Лизоцимная активность может быть определена только после осветления раствора. Она составляет около 20 ед/мг белка равномерно в течение 4 ч.PRI me R 2. The experiment was carried out as in example 1. The protein is dried in an oven at a temperature of not more than 95 ^o C. The resulting mass is glassy lumps of white and brown. Lysozyme activity can be determined only after clarification of the solution. It is about 20 units / mg protein evenly for 4 hours.

Лизоцим повышает уровень агглютинации патогенных микробов, искусственный иммунитет, лизирует клеточные оболочки микроорганизмов, т.е. совместно с другими лизосомальными ферментами обеспечивает внутриклеточное переваривание бактерии. Lysozyme increases the level of agglutination of pathogenic microbes, artificial immunity, lyses the cell walls of microorganisms, i.e. together with other lysosomal enzymes provides intracellular digestion of bacteria.

Известно, что концентрация лизоцима, угнетающая рост различных микробов, колеблется от 0,3 до 5,0 мг/мл (300-5000 ед/мл), хотя сравнительно малые количества в сыворотке крови (2-19 ед/мл) явно недостаточны для антимикробного воздействия. It is known that the concentration of lysozyme inhibiting the growth of various microbes ranges from 0.3 to 5.0 mg / ml (300-5000 units / ml), although relatively small amounts in the blood serum (2-19 units / ml) are clearly insufficient antimicrobial effects.

Установлено, что при разбавлении лизоцима сильно увеличивается суммарная активность. Т. е. при разбавлении 1 ед/мл активности раствора в 1000 раз, получается до 2500 ед/л раствора. It was found that upon dilution of lysozyme, the total activity greatly increases. That is, when diluting 1 unit / ml of solution activity 1000 times, up to 2500 unit / liter of solution is obtained.

В связи с этим при внутреннем приеме кристаллического лизоцима или активизированной массы может в желудочно-кишечном тракте образоваться сверхвысокая концентрация фермента, подавляющая действие полезных микроорганизмов. In this regard, with the internal intake of crystalline lysozyme or activated mass, an ultrahigh concentration of the enzyme can be formed in the gastrointestinal tract, which suppresses the action of beneficial microorganisms.

Предложенным способом можно получить препарат, исключающий перенасыщение фермента. The proposed method, you can get the drug, eliminating the oversaturation of the enzyme.

Это достигается удалением растворенного в жидкой фазе лишнего фермента; снижением степени эмиссии фермента из лизоцимактивного продукта путем уменьшения растворенности лизоцимсодержащего продукта. This is achieved by removing the excess enzyme dissolved in the liquid phase; reducing the degree of emission of the enzyme from the lysozyme product by reducing the solubility of the lysozyme-containing product.

Claims

METHOD FOR PRODUCING A LYSOCYMES CONTAINING PRODUCT, which provides for acidification of egg protein in the presence of salt, heating the resulting mass to a temperature of 85 ± 10 ^o C, separation of the obtained protein mass from the liquid phase, characterized in that, to simplify the method, the protein mass is dried at 83 - 95 ^o C until a water-insoluble lysozyme-containing product is formed.