RU2019113381A - Способы очистки аденоассоциированных вирусов - Google Patents
Способы очистки аденоассоциированных вирусов Download PDFInfo
- Publication number
- RU2019113381A RU2019113381A RU2019113381A RU2019113381A RU2019113381A RU 2019113381 A RU2019113381 A RU 2019113381A RU 2019113381 A RU2019113381 A RU 2019113381A RU 2019113381 A RU2019113381 A RU 2019113381A RU 2019113381 A RU2019113381 A RU 2019113381A
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- sugar
- concentration
- sucrose
- aav
- loaded
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims 70
- 241000700605 Viruses Species 0.000 title claims 3
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 title 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims 52
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims 49
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims 49
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims 49
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 14
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 claims 8
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims 7
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 claims 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims 5
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims 4
- 239000012160 loading buffer Substances 0.000 claims 4
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 3
- 239000008366 buffered solution Substances 0.000 claims 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims 3
- 239000000047 product Substances 0.000 claims 3
- 241001164825 Adeno-associated virus - 8 Species 0.000 claims 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 claims 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims 2
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 claims 2
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 claims 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims 2
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims 2
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 241001655883 Adeno-associated virus - 1 Species 0.000 claims 1
- 241000702423 Adeno-associated virus - 2 Species 0.000 claims 1
- 241000202702 Adeno-associated virus - 3 Species 0.000 claims 1
- 241000580270 Adeno-associated virus - 4 Species 0.000 claims 1
- 241001634120 Adeno-associated virus - 5 Species 0.000 claims 1
- 241000972680 Adeno-associated virus - 6 Species 0.000 claims 1
- 241001164823 Adeno-associated virus - 7 Species 0.000 claims 1
- 241000649045 Adeno-associated virus 10 Species 0.000 claims 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 claims 1
- 101710163595 Chaperone protein DnaK Proteins 0.000 claims 1
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 claims 1
- 101710178376 Heat shock 70 kDa protein Proteins 0.000 claims 1
- 101710152018 Heat shock cognate 70 kDa protein Proteins 0.000 claims 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 claims 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 claims 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 claims 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 claims 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 claims 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 claims 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 claims 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 claims 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 claims 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 claims 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims 1
- 235000019362 perlite Nutrition 0.000 claims 1
- 239000010451 perlite Substances 0.000 claims 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 claims 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 claims 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 claims 1
- 238000003118 sandwich ELISA Methods 0.000 claims 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 claims 1
- 150000004043 trisaccharides Chemical class 0.000 claims 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/76—Viruses; Subviral particles; Bacteriophages
- A61K35/761—Adenovirus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/76—Viruses; Subviral particles; Bacteriophages
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
- C12N2750/00011—Details
- C12N2750/14011—Parvoviridae
- C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
- C12N2750/14133—Use of viral protein as therapeutic agent other than vaccine, e.g. apoptosis inducing or anti-inflammatory
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
- C12N2750/00011—Details
- C12N2750/14011—Parvoviridae
- C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
- C12N2750/14141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2750/14143—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
- C12N2750/00011—Details
- C12N2750/14011—Parvoviridae
- C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
- C12N2750/14151—Methods of production or purification of viral material
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Virology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Mycology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Claims (69)
1. Способ очистки полных капсидов аденоассоциированного вируса (AAV) от концентрированной фракции AAV, содержащей пустые капсиды AAV и полные капсиды AAV, предусматривающий:
(i) загрузку в зональный ротор а) концентрированной фракции AAV и b) по меньшей мере двух растворов сахара, каждый из которых характеризуется различной концентрацией сахара и каждый из которых содержит сахар в концентрации, эквивалентной концентрации сахарозы в диапазоне от приблизительно 45 % (в массовом отношении) до приблизительно 65% (в массовом отношении) сахарозы,
(ii) работу ультрацентрифуги, содержащей зональный ротор, в периодическом режиме, после чего образуется градиент сахара,
(iii) получение фракции градиента сахара для получения фракции AAV, причем по меньшей мере или приблизительно 60% частиц AAV во фракции AAV представляют собой полные капсиды AAV,
причем (A) объем растворов сахара больше или равен приблизительно 50% объема зонального ротора, (B) общий объем растворов сахара и фракции AAV меньше или равен объему зонального ротора, (C) отношение объема растворов сахара к объему фракции AAV меньше или равно единице или (D) их комбинация.
2. Способ по п. 1, при котором каждый раствор сахара содержит сахар в концентрации, эквивалентной концентрации сахарозы в диапазоне от приблизительно 50% (в массовом отношении) до приблизительно 60% (в массовом отношении) сахарозы.
3. Способ по п. 1 или 2, при котором каждый раствор сахара содержит сахар в концентрации, эквивалентной концентрации сахарозы в диапазоне от приблизительно 55% (в массовом отношении) до приблизительно 60% (в массовом отношении) сахарозы.
4. Способ по п. 1 или 2, при котором по меньшей мере один из растворов сахара содержит сахар в концентрации, эквивалентной концентрации сахарозы, превышающей приблизительно 50% (в массовом отношении) сахарозы.
5. Способ по любому из пп. 1-4, при котором по меньшей мере один из растворов сахара содержит сахар в концентрации, эквивалентной концентрации сахарозы, превышающей приблизительно 55% (в массовом отношении) сахарозы.
6. Способ по любому из пп. 1-5, при котором по меньшей мере один из растворов сахара содержит сахар в концентрации, эквивалентной концентрации сахарозы в диапазоне от приблизительно 60% (в массовом отношении) до приблизительно 65% (в массовом отношении) сахарозы.
7. Способ по любому из пп. 1, 2 или 4-6, при котором один раствор сахара содержит сахар в концентрации, эквивалентной концентрации сахарозы в диапазоне от приблизительно 52% (в массовом отношении) до приблизительно 58% (в массовом отношении) сахарозы, причем второй раствор сахара содержит сахар в концентрации, эквивалентной концентрации сахарозы в диапазоне от приблизительно 57% (в массовом отношении) до приблизительно 63% (в массовом отношении) сахарозы, и, необязательно, причем третий раствор сахара содержит сахар в концентрации, эквивалентной концентрации сахарозы в диапазоне от приблизительно 47% (в массовом отношении) до приблизительно 53% (в массовом отношении) сахарозы.
8. Способ по любому из пп. 1-7, при котором два раствора сахара загружают в зональный ротор.
9. Способ по любому из пп. 1, 2 или 4-8, при котором два раствора сахара загружают в зональный ротор и при котором один раствор сахара содержит сахар в концентрации, эквивалентной концентрации сахарозы в диапазоне от приблизительно 52% (в массовом отношении) до приблизительно 58% (в массовом отношении) сахарозы, и второй раствор сахара содержит сахар в концентрации, эквивалентной концентрации сахарозы в диапазоне от приблизительно 57% (в массовом отношении) до приблизительно 63% (в массовом отношении) сахарозы.
10. Способ по любому из пп. 1-7, при котором по меньшей мере три раствора сахара загружают в зональный ротор.
11. Способ по любому из пп. 1-7 или 10, при котором три раствора сахара загружают в зональный ротор.
12. Способ по любому из пп. 1, 2, 4-7, 10 или 11, при котором три раствора сахара загружают в зональный ротор и при котором один раствор сахара содержит сахар в концентрации, эквивалентной концентрации сахарозы в диапазоне от приблизительно 47% (в массовом отношении) до приблизительно 53% (в массовом отношении) сахарозы, второй раствор сахара содержит сахар в концентрации, эквивалентной концентрации сахарозы в диапазоне от приблизительно 52% (в массовом отношении) до приблизительно 58% (в массовом отношении) сахарозы, и третий раствор сахара содержит сахар в концентрации, эквивалентной концентрации сахарозы, в диапазоне от приблизительно 57% (в массовом отношении) до приблизительно 63% (в массовом отношении) сахарозы.
13. Способ по любому из пп. 1, 2 или 4-12, при котором на стадии (i) концентрированную фракцию AAV загружают перед раствором сахара, содержащим сахар в концентрации, эквивалентной концентрации сахарозы в диапазоне от приблизительно 52% (в массовом отношении) до приблизительно 58% (в массовом отношении) сахарозы, и причем раствор сахара, содержащий сахар в концентрации, эквивалентной концентрации сахарозы в диапазоне от приблизительно 52% (в массовом отношении) до приблизительно 58% (в массовом отношении) сахарозы загружают перед раствором сахара, содержащим сахар в концентрации, эквивалентной концентрации сахарозы в диапазоне от приблизительно 57% (в массовом отношении) до приблизительно 63% (в массовом отношении) сахарозы.
14. Способ по любому из пп. 1, 2, 4-7 или 10-13, при котором на стадии (i) концентрированную фракцию AAV загружают перед раствором сахара, содержащим сахар в концентрации, эквивалентной концентрации сахарозы от приблизительно 47% (в массовом отношении) до приблизительно 53% (в массовом отношении) сахарозы, причем раствор сахара, содержащий сахар в концентрации, эквивалентной концентрации сахарозы, находится в диапазоне от приблизительно 47% (в массовом отношении) до приблизительно 53% (в массовом отношении) сахарозы, загружают перед раствором сахара, содержащим сахар в концентрации, эквивалентной концентрации сахарозы в диапазоне от приблизительно 52% (в массовом отношении) до приблизительно 58% (в массовом отношении) сахарозы, и причем раствор сахара, содержащий сахар в концентрации, эквивалентной концентрации сахарозы в диапазоне от приблизительно 52% (в массовом отношении) до приблизительно 58% (в массовом отношении) сахарозы, загружают перед раствором сахара, содержащим сахар в концентрации, эквивалентной концентрации сахарозы в диапазоне от приблизительно 57% (в массовом отношении) до приблизительно 63% (в массовом отношении) сахарозы.
15. Способ по любому из пп. 1-14, при котором каждый раствор сахара загружают в зональный ротор в равных объемах.
16. Способ по любому из пп. 1-14, при котором раствор сахара с наименьшей концентрацией сахара загружают в зональный ротор в объеме, в два раза превышающем объем по меньшей мере одного из других растворов сахара в зональном роторе.
17. Способ по любому из пп. 1-14 или 16, при котором раствор сахара с наименьшей концентрацией сахара загружают в зональный ротор в объеме, равном по меньшей мере объему всех других растворов сахара, объединенных в зональном роторе.
18. Способ по пп. 1-14, 16 или 17, при котором раствор сахара с наименьшей концентрацией сахара загружают в зональный ротор в объеме, который по меньшей мере вдвое превышает объем раствора сахара с наибольшей концентрацией сахара, необязательно, причем объем раствора сахара с наибольшей концентрацией сахара равен объему раствора сахара с промежуточной концентрацией сахара.
19. Способ по любому из пп. 1-14 или 16-18, при котором по меньшей мере два раствора сахара загружают в зональный ротор, причем раствор сахара с наименьшей концентрацией сахара загружают в зональный ротор в объеме, который по меньшей мере вдвое больше объема по меньшей мере одного другого раствора сахара в зональном роторе.
20. Способ по любому из пп. 1-19, при котором по меньшей мере два раствора сахара загружают в зональный ротор, причем раствор сахара с наименьшей концентрацией сахара загружают в зональный ротор в объеме, равном объему по меньшей мере одному другому раствору сахара в зональном роторе.
21. Способ по любому из пп. 1-20, при котором раствор сахара с наименьшей концентрацией сахара загружают в зональный ротор в объеме, который составляет половину объема концентрированной фракции AAV.
22. Способ по любому из пп. 1-21, при котором отношение объема общего градиента сахара к объему фракции AAV, загруженной в зональный ротор, составляет от приблизительно 1:1 до приблизительно 1:5.
23. Способ по любому из пп. 1-22, при котором фракция AAV содержит забуференный раствор.
24. Способ по п. 23, при котором забуференный раствор содержит трис-HCl и NaCl.
25. Способ по п. 24, при котором концентрация трис-HCl составляет от приблизительно 20 до приблизительно 50 мМ, а концентрация NaCl составляет от приблизительно 150 до приблизительно 900 мМ.
26. Способ по любому из пп. 23-25, при котором буферный раствор характеризуется рН от приблизительно 7,4 до приблизительно 9,0.
27. Способ по любому из пп. 23-26, при котором забуференный раствор содержит 45-55% (в массовом отношении) этиленгликоля.
28. Способ по любому из предыдущих пунктов, при котором каждый раствор сахара содержит дисахарид или трисахарид.
29. Способ по п. 28, при котором дисахарид содержит сахарозу, мальтозу, лактозу и их комбинации.
30. Способ по любому из предыдущих пунктов, при котором каждый раствор сахара содержит сахарозу.
31. Способ по любому из предыдущих пунктов, при котором каждый из растворов сахара дополнительно содержит трис-HCl и NaCl.
32. Способ по п. 31, при котором концентрация трис-HCl составляет от приблизительно 20 до приблизительно 50 мМ, а концентрация NaCl составляет от приблизительно 150 до приблизительно 500 мМ.
33. Способ по п. 31 или 32, при котором буферный раствор характеризуется рН от приблизительно 7,4 до приблизительно 8,5.
34. Способ по любому из предыдущих пунктов, предусматривающий работу ультрацентрифуги на первой скорости вращения менее чем 10000 об/мин в течение менее чем 60 минут и на второй скорости вращения в диапазоне от приблизительно 30000 до приблизительно 40000 об/мин в течение минимум 4 часов.
35. Способ по любому из предыдущих пунктов, предусматривающий работу ультрацентрифуги на первой скорости вращения менее чем 10000 об/мин в течение менее чем 60 минут и второй скорости вращения в диапазоне от приблизительно 30000 до приблизительно 40000 об/мин в течение минимум 12 часов.
36. Способ по п. 34 или 35, при котором первая скорость вращения составляет от приблизительно 3000 до приблизительно 6000 об/мин, необязательно, приблизительно 4000 об/мин.
37. Способ по п. 34 или 36, при котором вторая скорость вращения составляет приблизительно 35000 об/мин и, необязательно, поддерживается в течение от приблизительно 4 до приблизительно 6 часов.
38. Способ по любому из пп. 34-36, при котором вторую скорость вращения поддерживают в течение по меньшей мере приблизительно 16 часов или по меньшей мере 20 часов.
39. Способ по любому из пп. 34-36 или 38, при котором вторая скорость вращения составляет приблизительно 35000 об/мин и, необязательно, поддерживается в течение от приблизительно 16 до приблизительно 20 часов.
40. Способ по любому из предыдущих пунктов, при котором концентрированная фракция AAV, загруженная в зональный ротор, содержит по меньшей мере 1×1012 капсидов AAV на мл.
41. Способ по любому из предыдущих пунктов, предусматривающий сбор супернатанта из клеточной культуры, содержащей клетки HEK293, трансфицированные тройной плазмидной системой.
42. Способ по п. 41, предусматривающий сбор супернатанта через приблизительно от 3 до приблизительно 5 дней после трансфекции клеток HEK293 или когда клеточная культура характеризуется плотностью клеток более чем или приблизительно 5×106 клеток/мл и жизнеспособностью клеток более чем 50%.
43. Способ по п. 41 или 42, предусматривающий фильтрацию собранного супернатанта с помощью глубокой фильтрации.
44. Способ по п. 43, предусматривающий фильтрацию собранного супернатанта через фильтр, содержащий целлюлозу и перлит и характеризующийся минимальной проницаемостью приблизительно 500 л/м2.
45. Способ по п. 43, предусматривающий фильтрацию собранного супернатанта через фильтр с минимальным размером пор приблизительно 0,2 мкм.
46. Способ по любому из предыдущих пунктов, предусматривающий (i) внесение фракции AAV в колонку для анионообменной хроматографии (AEX) в условиях, которые позволяют AAV проходить через хроматографическую колонку AEX, и (ii) сбор потока, содержащего AAV.
47. Способ по п. 46, при котором фракцию AAV вносят в хроматографическую колонку AEX с загрузочным буфером, содержащим от приблизительно 100 мМ до приблизительно 150 мМ NaCl, необязательно, причем рН загрузочного буфера составляет от приблизительно 8 до приблизительно 9.
48. Способ по п. 47, при котором загрузочный буфер содержит от приблизительно 115 мМ до приблизительно 130 мМ NaCl, необязательно, причем загрузочный буфер содержит от приблизительно 120 мМ до приблизительно 125 мМ NaCl.
49. Способ по любому из предыдущих пунктов, предусматривающий концентрирование фракции AAV с использованием системы ультра/диафильтрации.
50. Способ по п. 49, предусматривающий концентрирование фракции AAV с использованием системы ультра/диафильтрации до, после или до и после стадии, предусматривающей внесение фракции AAV в колонку для анионообменной хроматографии (AEX) в условиях, которые позволяют AAV протекать через хроматографическую колонку AEX.
51. Способ по любому из предыдущих пунктов, при котором удаляют белки клетки-хозяина.
52. Способ по п. 51, при котором белки клетки-хозяина представляют собой HSP70 и/или LDH.
53. Способ по любому из предыдущих пунктов, дополнительно предусматривающий инактивацию вирусов с липидной оболочкой фракции AAV растворителем и/или детергентом.
54. Способ по любому из предыдущих пунктов, дополнительно предусматривающий нанофильтрацию фракции AAV для удаления вирусов размером более чем 35 нм.
55. Способ по любому из предыдущих пунктов, дополнительно предусматривающий стадию завершающей очистки, предусматривающей проведение AEX-хроматографии с колонкой, содержащей гель типа «щупальца».
56. Способ получения продукта AAV, предусматривающий (i) трансфекцию клеток-хозяев тремя плазмидами, (ii) сбор супернатанта клеточной культуры, содержащей трансфицированные клетки-хозяева, и (iii) осуществление способа в соответствии с любым из пп. 1-55.
57. Способ по п. 56, при котором стадии способа выполняются в порядке, показанном на фиг. 1.
58. Способ по любому из предыдущих пунктов, предусматривающий исследование фракции AAV с помощью AAV-специфического ИФА.
59. Способ по п. 58, при котором способ не предусматривает стадию измерения активности с помощью количественной ПЦР.
60. Способ по п. 58 или 59, при котором AAV-специфический ИФА представляет собой специфический для AAV сэндвич-ИФА.
61. Способ по любому из предыдущих пунктов, причем способ предусматривает первый раствор сахара, содержащий сахар в концентрации, эквивалентной концентрации сахарозы приблизительно 55%, второй раствор сахара, содержащий сахар в концентрации, эквивалентной концентрации сахарозы приблизительно 60%, и, необязательно, третий раствор сахара, содержащий сахар в концентрации, эквивалентной концентрации сахарозы приблизительно 50%.
62. Способ по любому из предыдущих пунктов, при котором AAV представляет собой AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9 или AAV10.
63. Способ по любому из предыдущих пунктов, при котором AAV представляет собой AAV8.
64. Продукт AAV, полученный способом по любому из пп. 1-63.
65. Фармацевтическая композиция, содержащая продукт AAV, полученный способом по любому из пп. 1-63.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201662417775P | 2016-11-04 | 2016-11-04 | |
US62/417,775 | 2016-11-04 | ||
PCT/US2017/059967 WO2018128688A1 (en) | 2016-11-04 | 2017-11-03 | Adeno-associated virus purification methods |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2019113381A true RU2019113381A (ru) | 2020-12-04 |
RU2019113381A3 RU2019113381A3 (ru) | 2021-04-06 |
RU2773406C2 RU2773406C2 (ru) | 2022-06-03 |
Family
ID=
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
IL266162B2 (en) | 2023-11-01 |
IL266162A (en) | 2019-06-30 |
WO2018128688A1 (en) | 2018-07-12 |
KR20190073529A (ko) | 2019-06-26 |
JP7071348B2 (ja) | 2022-05-18 |
JP2020502997A (ja) | 2020-01-30 |
SG11201903890QA (en) | 2019-05-30 |
CN110168081A (zh) | 2019-08-23 |
FI3535388T3 (fi) | 2023-06-14 |
KR102482744B1 (ko) | 2022-12-30 |
PL3535388T3 (pl) | 2023-08-14 |
PT3535388T (pt) | 2023-06-27 |
US11000561B2 (en) | 2021-05-11 |
US20190365835A1 (en) | 2019-12-05 |
RU2019113381A3 (ru) | 2021-04-06 |
CA3040288A1 (en) | 2018-07-12 |
EP4234688A3 (en) | 2023-09-27 |
EP3535388A1 (en) | 2019-09-11 |
ES2948849T3 (es) | 2023-09-20 |
BR112019009033A2 (pt) | 2019-07-09 |
IL266162B1 (en) | 2023-07-01 |
EP3535388B1 (en) | 2023-05-31 |
US20210338752A1 (en) | 2021-11-04 |
AU2017391164B2 (en) | 2024-01-04 |
MX2019004784A (es) | 2019-08-12 |
AU2017391164A1 (en) | 2019-05-02 |
EP4234688A2 (en) | 2023-08-30 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP2020502997A5 (ru) | ||
EP3256574B1 (en) | Recombinant adeno-associated virus particle purification comprising an affinity purification step | |
KR102482744B1 (ko) | 아데노-연관 바이러스 정제 방법 | |
US20240060054A9 (en) | Recombinant adeno-associated virus particle purification with multiple-step anion exchange chromatography | |
Smith et al. | Serum-free production and column purification of adeno-associated virus type 5 | |
WO2019212921A1 (en) | Scalable clarification process for recombinant aav production | |
CN105861454A (zh) | 用于纯化重组aav载体的改进方法 | |
US20230183656A1 (en) | Methods and compositions for purifying adeno associated virus particles or adenoviruses | |
WO2022043926A1 (en) | Process for preparation of recombinant adeno-associated virus particle | |
RU2773406C2 (ru) | Способы очистки аденоассоциированных вирусов | |
WO2023085382A1 (ja) | ウイルスの精製方法 | |
WO2022045055A1 (ja) | pHの違いによる非エンベロープウイルスベクター粒子の調製方法 | |
WO2023174974A1 (en) | Methods and compositions for purifying adeno associated virus particles |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
HZ9A | Changing address for correspondence with an applicant |