RU2018147083A - Генотерапевтический ДНК-вектор на основе генотерапевтического ДНК-вектора VTvaf17, несущий целевой ген Cas9 для гетерологичной экспрессии этого целевого гена в клетках человека и животных при реализации различных методов геномного редактирования, способ получения и применения генотерапевтического ДНК-вектора, штамм Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17-Cas9, несущий генотерапевтический ДНК-вектор, способ его получения, способ производства в промышленных масштабах генотерапевтического ДНК-вектора - Google Patents

Claims (8)

1. Генотерапевтический ДНК-вектор на основе генотерапевтического ДНК-вектора VTvaf17, несущий целевой ген Cas9, для гетерологичной экспрессии этого целевого гена в клетках человека и животных при реализации различных методов геномного редактирования, при этом генотерапевтический ДНК-вектор VTvaf17-Cas9 имеет нуклеотидную последовательность SEQ ID №1.

2. Генотерапевтический ДНК-вектор на основе генотерапевтического ДНК-вектора VTvaf17, несущий целевой ген Cas9 по п. 1, отличающийся тем, что созданный генотерапевтический ДНК-вектор VTvaf17- Cas9 по п. 1 за счет ограниченного размера векторной части VTvaf17, не превышающей 3200 п.н., обладает способностью эффективно проникать в клетки человека и животных и экспрессировать клонированный в него целевой ген Cas9.

3. Генотерапевтический ДНК-вектор на основе генотерапевтического ДНК-вектора VTvaf17, несущий целевой ген Cas9 по п. 1, отличающийся тем, что в составе генотерапевтического ДНК-вектора отсутствуют нуклеотидные последовательности вирусного происхождения и отсутствуют гены антибиотикорезистентности, обеспечивая возможность его безопасного применения для реализации различных методов геномного редактирования геномов человека и животного, в том числе при генетической терапии человека и животного.

4. Способ получения генотерапевтического ДНК-вектора на основе генотерапевтического ДНК-вектора VTvaf17, несущего целевой ген Cas9 по п. 1, заключающийся в том, что генотерапевтический ДНК-вектор VTvaf17-Cas9 по п. 1 получают следующим образом: кодирующую часть целевого гена Cas9 клонируют в ДНК-вектор VTvaf17 и получают генотерапевтический ДНК-вектор VTvaf17- Cas9.

5. Способ применения генотерапевтического ДНК-вектора на основе генотерапевтического ДНК-вектора VTvaf17, несущего целевой ген Cas9 по п. 1. для гетерологичной экспрессии этого целевого гена в клетках человека и животных, заключающийся во введении генотерапевтического ДНК-вектора по п. 1 в клетки, органы и ткани человека или животного совместно с gRNA и/или во введении в органы и ткани человека или животного аутологичных клеток человека или животного, трансфицированных генотерапевтическим ДНК-вектором по п. 1 совместно с gRNA или в сочетании обозначенных способов.

6. Способ получения штамма Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17- Cas9, который заключается в электропорации компетентных клеток штамма Escherichia coli SCS110-AF генотерапевтическим ДНК-вектором по п. 1 и последующей селекцией стабильных клонов штамма с использованием селективной среды.

7. Штамм, полученный по п.6, Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17- Cas9, несущий генотерапевтический ДНК-вектор по п. 1 для его наработки с возможностью культивирования штамма без использования антибиотиков.

8. Способ производства в промышленных масштабах генотерапевтического ДНК-вектора по п. 1, заключающийся в масштабировании бактериальной культуры штамма по п.7 до количеств, необходимых для наращивания бактериальной биомассы в промышленном ферментере, после чего биомассу используют для выделения фракции, содержащей целевой ДНК-продукт - генотерапевтический ДНК-вектор VTvaf17- Cas9 по п. 1, многостадийно фильтруют и очищают хроматографическими методами.