RU2018118204A - Улучшенные эукариотические клетки для получения белка и способы их получения - Google Patents

Улучшенные эукариотические клетки для получения белка и способы их получения Download PDF

Info

Publication number
RU2018118204A
RU2018118204A RU2018118204A RU2018118204A RU2018118204A RU 2018118204 A RU2018118204 A RU 2018118204A RU 2018118204 A RU2018118204 A RU 2018118204A RU 2018118204 A RU2018118204 A RU 2018118204A RU 2018118204 A RU2018118204 A RU 2018118204A
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
sequences
cell
erv
protein
modified cell
Prior art date
Application number
RU2018118204A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2752529C9 (ru
RU2018118204A3 (ru
RU2752529C2 (ru
Inventor
Николас МЕРМО
Пьер-Оливер ДЮРО
Сандра БОССАРД
МЕРСЬЕ Филиппе ЛЕ
Original Assignee
Селексис С.А.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Селексис С.А. filed Critical Селексис С.А.
Publication of RU2018118204A publication Critical patent/RU2018118204A/ru
Publication of RU2018118204A3 publication Critical patent/RU2018118204A3/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2752529C2 publication Critical patent/RU2752529C2/ru
Publication of RU2752529C9 publication Critical patent/RU2752529C9/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
    • C12N15/90—Stable introduction of foreign DNA into chromosome
    • C12N15/902—Stable introduction of foreign DNA into chromosome using homologous recombination
    • C12N15/907—Stable introduction of foreign DNA into chromosome using homologous recombination in mammalian cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
    • C12N15/102—Mutagenizing nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • C12N15/861—Adenoviral vectors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0681—Cells of the genital tract; Non-germinal cells from gonads
    • C12N5/0682—Cells of the female genital tract, e.g. endometrium; Non-germinal cells from ovaries, e.g. ovarian follicle cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6806—Preparing nucleic acids for analysis, e.g. for polymerase chain reaction [PCR] assay
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/60—Fusion polypeptide containing spectroscopic/fluorescent detection, e.g. green fluorescent protein [GFP]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/20—Type of nucleic acid involving clustered regularly interspaced short palindromic repeats [CRISPRs]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2510/00—Genetically modified cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2511/00—Cells for large scale production
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
    • C12N2740/00011—Details
    • C12N2740/10011—Retroviridae
    • C12N2740/13011—Gammaretrovirus, e.g. murine leukeamia virus

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Claims (55)

1. Модифицированная клетка, содержащая
геном указанной клетки, при этом указанный геном содержит одно или более изменений, включающих
делеции,
добавления и/или
замены,
по меньшей мере одной нуклеиновой кислоты в одном или более, в целом, более, чем в 10, 20, 30, 40, 50, 60, 80, 90 или 100 эндогенных ретровирусных (ERV) элементах, которые являются частью указанного генома.
2. Модифицированная клетка по п. 1, отличающаяся тем, что указанная клетка представляет собой клетку млекопитающего, предпочтительно клетку линии клеток млекопитающего, такую как модифицированная клетка СНО, включая модифицированную СНО-K1.
3. Модифицированная клетка по п. 1 или 3, отличающаяся тем, что ERV-элементы происходят из гаммаретровирусных ERV, включая ERV вируса эпидемии коал (KoRV), ERV вируса опухоли молочной железы у мышей (MMTV), ERV вируса лейкоза мышей (MLV), и при этом указанные одно или более изменений адаптированы для подавления или исключения высвобождения одного или более, предпочтительно более, чем 60%, 70%, 80%, 90%, 95% или 100% указанных ERV.
4. Модифицированная клетка по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что указанные один или более (ERV) элементов представляют собой или происходят из гена gag, pol и/или env, предпочтительно из указанного гена gag, кодирующего белок МА (ядерного матрикса), СА (белок капсида), NC (белок нуклеокапсида), белки, кодирующие дополнительный домен, такие как рр12 или р6, и/или представляют собой длинные концевые повторы (LTR) ERV.
5. Модифицированная клетка по п. 4, отличающаяся тем, что указанный один или более ERV-элементов кодируют белок Gag (групповой антиген), белок Pol (обратная транскриптаза) и/или белок Env (оболочки).
6. Модифицированная клетка по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что указанные делеции, добавления или замены содержат более, чем 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 150 или 200 нуклеиновых кислот.
7. Модифицированная клетка по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что указанные изменения представляют собой добавления в форме направленных интеграций, и указанные один или более (ERV) элементов представляют собой или происходят по меньшей мере из одного гена gag, pol и/или env, предпочтительно генов gag, и последовательности указанного гена подвергнуты указанным направленным интеграциям трансгена, предпочтительно кодирующего маркерный белок, такой как GFP (зеленый флуоресцентный белок), и/или указанное изменение(-я) приводят к доминантно-негативному фенотипу.
8. Модифицированная клетка по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что указанные ERV-элементы получены из гена gag, и по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99% или все указанные элементы содержат указанные изменения.
9. Модифицированная клетка по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что указанные изменения содержатся в консенсусных последовательностях указанных EVR-элементов, при этом длина такой консенсусной последовательности может составлять по меньшей мере 5, 10, 15 или 20 пар оснований, предпочтительно длина составляет 15-25 или 30-50 пар оснований.
10. Модифицированная клетка по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что указанная модифицированная клетка не высвобождает или по существу не высвобождает ERV.
11. Модифицированная клетка по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что указанная модифицированная клетка содержит гетерологичные последовательности нуклеотидных кислот, которые кодируют, ингибируют или активируют по меньшей мере один белок пути рекомбинации, и/или гетерологичные последовательности нуклеиновых кислот, которые кодируют по меньшей мере одну последовательность или белок, подавляющий экспрессию по меньшей мере одного белка пути рекомбинации, предпочтительно HR, еще более предпочтительно Nbs1, Mre11, Rad51, лигазы 1 и/или лигазы 3.
12. Модифицированная клетка по п. 11, отличающаяся тем, что указанные гетерологичные последовательности нуклеотидных кислот присутствуют в виде вектора, который не интегрирован в геном указанной клетки.
13. Модифицированная клетка по любому из предшествующих пунктов, дополнительно содержащая гетерологичную донорную ДНК, предпочтительно в векторе, кодирующую по меньшей мере один маркерный белок, такой как GFP (зеленый флуоресцентный белок).
14. Модифицированная клетка по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что указанная клетка дополнительно содержит трансген.
15. Модифицированная клетка по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что указанный трансген представляет собой маркерный ген, кодирующий маркерный белок, такой как GFP, и/или обладающий терапевтической активностью белок, который предпочтительно интегрирован в геном.
16. Модифицированная клетка по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что указанная клетка представляет собой клетку СНО, и при этом по меньшей мере одно изменение представляет собой замену по меньшей мере одной миристоилированной аминокислоты в мотиве миристоилирования в одном или более ERV-элементов таком, как, например, ген gag или ERV-элементе, полученном из гена gag, на немиристоилированную аминокислоту, при этом указанная модифицированная клетка содержит по меньшей мере тразниентно
последовательности, как, например, в форме транзиентно экспрессированного вектора, кодирующего белки HR и/или MMEJ, такие как Pad51, Lig3, Ercc1, Pold3; и/или
- последовательности, как, например, последовательности миРНК, такие как миРНК11, или векторы, кодирующие указанные последовательности.
17. Модифицированная клетка по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что указанная клетка представляет собой клетку СНО, содержащую один или более указанных ERV-элементов, таких как ген gag или ERV-элемент, полученный из гена gag, который содержит мотив PPYP, и при этом (i) последовательности, кодирующие указанный мотив PPYP, и/или последовательности, содержащие вплоть до 20 нуклеиновых кислот, фланкирующие последовательности в (i), содержат указанное изменение.
18. Модифицированная клетка по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что указанная модифицированная клетка представляет собой клетку СНО и содержит делеции, добавления и/или замены по меньшей мере в одной последовательности, соответствующей SEQ ID NOS: 1, 2, 3, 4, или в последовательностях с более, чем 90% или 95% идентичностью последовательности к таким последовательностям, предпочтительно в границах ERV-элементов указанных последовательностей.
19. Модифицированная клетка по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что указанная модифицированная клетка представляет собой клетку СНО и содержит делеции, добавления и/или замену в консенсусной последовательности ERV группы 1, такой как SEQ ID NO: 30, или в последовательностях с более, чем 90% идентичностью последовательности к такой последовательности, и при этом указанная последовательность, содержащие такие делеции, добавления и/или замены, не кодирует функциональный белок Gag.
20. Способ улучшенного редактирования генома, включающий
(i) введение гетерологичной системы для введения одно- или двухцепочечных разрывов в последовательность целевой нуклеиновой кислоты, такой как консенсусная последовательность ERV-элемента, предпочтительно ERV-элемента, который представляет собой или который получен из гена gag, в клетку, предпочтительно в представляющую интерес клетку, и дополнительно
(ii) введение в указанную клетку
(a) гетерологичных последовательностей нуклеиновых кислот, кодирующих или активирующих по меньшей мере один белок по меньшей мере одного указанного пути рекомбинации, и/или
(b) гетерологичных последовательностей, кодирующих одну или более последовательностей таких, как, например, миРНК, или белки, подавляющие/снижающие экспрессию по меньшей мере одного белка по меньшей мере одного указанного пути рекомбинации, при этом указанная гетерологичная система (i) и/или последовательности (ii) (а) и/или (ii) (b) предпочтительно по меньшей мере транзиентно экспрессируются в представляющей интерес клетке.
21. Способ по п. 20, согласно которому указанные гетерологичные последовательности кодируют или активируют по меньшей мере один белок пути рекомбинации, в частности по меньшей мере один белок гомологичной рекомбинации (HR), в частности Rad51.
22. Способ по п. 20, согласно которому маркерный ген, такой как GFP, вставлен в указанную целевую нуклеотидную последовательность посредством гомологичной рекомбинации, и при этом клетки, содержащие указанный маркерный ген, предпочтительно являются отобранными.
23. Способ по любому из пп. 20-22, согласно которому указанные гетерологичные последовательности нуклеиновых кислот (а) кодируют или активируют белки MNR-комплекса, такие как Nbs1 и/или Mre11, и/или при этом указанные гетерологичные последовательности (b) кодируют последовательности или белки, подавляющие экспрессию по меньшей мере одного белка пути HR, такого как Rad51.
24. Способ по любому из пп. 20-23, согласно которому делеция или вставка введены в указанные один или более ERV-элементов посредством негомологичного соединения концов (NHEJ) или опосредованного микрогомологией соединения концов (MMEJ).
25. Способ по любому из пп. 20-24, согласно которому указанные гетерологичные последовательности представляют собой часть интегрирующих или неинтегрирующих векторов.
26. Способ по любому из пп. 20-25, согласно которому указанная не встречающаяся в природе система для введения одно- или двухцепочечных разрывов в целевую нуклеотидную последовательность представляет собой CRISPR/Cas9-систему или основанную на ней систему.
27. Способ по любому из пп. 20-26, согласно которому указанная клетка представляет собой клетку СНО, и при этом по меньшей мере одна миристоилированная аминокислота в мотиве миристоилирования в одном или более ERV-элементах заменена на немиристоилированную аминокислоту, причем указанный способ предпочтительно осуществляют во время транзиентной экспрессии последовательностей, кодирующих белки HR и/или MMEJ, такие как Pad51, Lig3, Ercc1, Pold3, и/или последовательностей, как, например, последовательностей миРНК, таких как siMRe11, или кодирующих их векторов.
28. Способ по любому из пп. 20-27, согласно которому указанная клетка представляет собой клетку СНО, содержащую в одном или более указанных ERV-элементах мотив PPYP, и при этом (i) последовательности, кодирующие указанный мотив PPYP, и/или последовательности, содержащие вплоть до 20 нуклеиновых кислот, фланкирующие указанные последовательности (i), содержат изменение, причем указанный способ предпочтительно осуществляют во время транзиентной экспрессии последовательностей РНК, подавляющих экспрессию белков HR, таких как Rad51.
29. Модифицированная клетка, при этом геном указанной клетки содержит одно или более изменений, включающих:
(a) делеции,
(b) добавления и/или
(c) замены,
по меньшей мере одной нуклеиновой кислоты в одном или более, в целом в более, чем 10, 20, 30, 40, 50, 60, 80, 90 или 100 эндогенных ретровирусных (ERV) элементах, и которая получена при помощи способов по любому из пп. 19-27.
30. Модифицированная клетка по п. 28, отличающаяся тем, что указанная клетка представляет собой клетку млекопитающего, предпочтительно клетку линии клеток млекопитающего, такую как модифицированная клетка СНО, включая модифицированную СНО-K1.
31. Набор, содержащий:
(i) в одной емкости по меньшей мере один неинтегрирующий вектор, кодирующий по меньшей мере нуклеазу, такую как CRISPR,
(ii) в той же или в дополнительной емкости по меньшей мере одну гидовую РНК или последовательность, кодирующую по меньшей мере одну гидовую РНК, нацеливающую на мотив в ERV-элементе,
(iii) в той же или в дополнительной емкости по меньшей мере одну миРНК или последовательность, кодирующую по меньшей мере одну миРНК, и
в дополнительной емкости инструкцию о том, как обеспечить попадание (i), (ii) и (iii) внутрь клетки.
32. Набор по п. 31, отличающийся тем, что указанные последовательности, кодирующие по меньшей мере одну гидовую РНК, нацеливающую на указанный мотив в ERV-элементе, и/или указанные последовательности, кодирующие по меньшей мере одну миРНК, являются частью вектора.
33. Набор по п. 32, отличающийся тем, что указанный вектор представляет собой неинтегрирующий вектор (i).
34. Набор по любому из пп. 31-33, отличающийся тем, что указанный ERV-элемент кодирует белок Gag.
35. Набор по п. 32, отличающийся тем, что указанный мотив представляет собой мотив миристоилирования или мотив PPXY, в частности мотив PPYP.
36. Набор по любому из пп. 31-35, отличающийся тем, что указанные миРНК направлены против гена пути HR.
RU2018118204A 2015-12-24 2016-12-23 Улучшенные эукариотические клетки для получения белка и способы их получения RU2752529C9 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201562387375P 2015-12-24 2015-12-24
US62/387,375 2015-12-24
PCT/EP2016/082567 WO2017109177A1 (en) 2015-12-24 2016-12-23 Improved eukaryotic cells for protein manufacturing and methods of making them

Publications (4)

Publication Number Publication Date
RU2018118204A true RU2018118204A (ru) 2020-01-24
RU2018118204A3 RU2018118204A3 (ru) 2020-11-06
RU2752529C2 RU2752529C2 (ru) 2021-07-29
RU2752529C9 RU2752529C9 (ru) 2021-12-29

Family

ID=57906589

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2018118204A RU2752529C9 (ru) 2015-12-24 2016-12-23 Улучшенные эукариотические клетки для получения белка и способы их получения

Country Status (13)

Country Link
US (2) US11739351B2 (ru)
EP (1) EP3394257A1 (ru)
JP (1) JP7370702B2 (ru)
KR (1) KR20180091099A (ru)
CN (1) CN108473982A (ru)
AU (1) AU2016375159B2 (ru)
CA (1) CA3003538A1 (ru)
HK (1) HK1253900A1 (ru)
IL (1) IL259221B (ru)
RU (1) RU2752529C9 (ru)
SG (1) SG11201805132YA (ru)
WO (1) WO2017109177A1 (ru)
ZA (1) ZA201804763B (ru)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20180054871A (ko) 2015-10-08 2018-05-24 프레지던트 앤드 펠로우즈 오브 하바드 칼리지 다중화 게놈 편집
US20210338815A1 (en) * 2018-08-31 2021-11-04 Yale University Compositions and methods for enhancing triplex and nuclease-based gene editing
EP3902910A1 (en) * 2018-12-24 2021-11-03 Selexis S.A. Characterization and inactivation of endogenous retroviruses in chinese hamster ovary cells
GB201909439D0 (en) * 2019-07-01 2019-08-14 Artios Pharma Ltd Novel construct
IL293517A (en) 2019-12-24 2022-08-01 Selexis Sa Directed integration for increased expression in mammalian genetic sequences

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030053991A1 (en) * 2000-10-04 2003-03-20 Kingsman Alan John Retinoic acid receptor beta-2, its agonists, and gene theraphy vectors for the treatment of neurological disorders
CA2522067C (en) * 2003-04-09 2010-07-06 Canadian Blood Services Detection, characterization and treatment of viral infection and methods thereof
KR20120099376A (ko) 2009-09-18 2012-09-10 셀렉시스 에스. 에이. 강화된 전이 유전자 발현과 공정 방법 및 그 산물
KR102235603B1 (ko) 2013-02-01 2021-04-05 셀렉시스 에스. 에이. 향상된 이식유전자 발현 및 가공
KR20180054871A (ko) 2015-10-08 2018-05-24 프레지던트 앤드 펠로우즈 오브 하바드 칼리지 다중화 게놈 편집

Also Published As

Publication number Publication date
EP3394257A1 (en) 2018-10-31
IL259221B (en) 2022-09-01
RU2752529C9 (ru) 2021-12-29
US20190194694A1 (en) 2019-06-27
IL259221A (en) 2018-07-31
AU2016375159A1 (en) 2018-05-10
RU2018118204A3 (ru) 2020-11-06
RU2752529C2 (ru) 2021-07-29
SG11201805132YA (en) 2018-07-30
ZA201804763B (en) 2019-07-31
AU2016375159B2 (en) 2022-12-15
CN108473982A (zh) 2018-08-31
CA3003538A1 (en) 2017-06-29
US20240093244A1 (en) 2024-03-21
KR20180091099A (ko) 2018-08-14
US11739351B2 (en) 2023-08-29
WO2017109177A1 (en) 2017-06-29
JP7370702B2 (ja) 2023-10-30
HK1253900A1 (zh) 2019-07-05
JP2018537986A (ja) 2018-12-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2018118204A (ru) Улучшенные эукариотические клетки для получения белка и способы их получения
US10017785B2 (en) Polypurine tract modified retroviral vectors
RU2018122636A (ru) Стабильные клеточные линии для продуцирования ретровирусов
ES2577929T3 (es) Recombinasa elaborada a medida para recombinar unos sitios diana asimétricos en una pluralidad de cepas de retrovirus
US8828718B2 (en) Gene transfer vectors comprising genetic insulator elements and methods to identify genetic insulator elements
RU2015133046A (ru) Двойной вектор для подавления вируса иммунодефицита человека
JP2018534937A5 (ru)
RU2018118964A (ru) Способ временной трансфекции для продуцирования ретровируса
ES2710708T3 (es) Recombinasa a medida bien tolerada y muy específica para recombinar los sitios diana asimétricos en una pluralidad de cepas de retrovirus
JP2019500030A5 (ru)
ES2744448T5 (es) Vectores para la expresión transgénica
CN102250950A (zh) 一种基于dna水平的乙型脑炎病毒复制子载体系统及其构建方法和应用
WO1987005048A1 (en) Plasmids which inhibit human t-cell lymphotropic virus type iii replication
MX2021002374A (es) Metodos y composiciones para producir un virus.
Leonardelli et al. 531. Computational pipeline for the identification of integration sites and novel method for the quantification of clone sizes in clonal tracking studies
RU2013115637A (ru) Усовершенствование генетических конструкций для повышения эффективности антивич терапии
Durosa et al. g-RETROVIRUS-AND LENTIVIRUS-DERIVED VECTORS FOR GENE TRANSFER AND THERAPY
EP4424822A1 (en) Designer recombinase for the precise excision of htlv-1-provirus
Ferreira Chimeric lentiviral vectors for gene therapy-Characterization of stable producer cells
US20060134137A1 (en) Transduction vector based on modified HIV-2
EP2586867A1 (en) Transient expression lentiviral vectors, preparation and uses thereof
Vink A hybrid lentivirus-transposon vector for safer gene therapy
Merten et al. 333. Vector Development by Molecular Evolution: A Selection Procedure for Envelope Proteins Pseudotyping Lentiviral Particles
Vasu et al. Improved Lentiviral Gene Delivery Tools for Stem Cells

Legal Events

Date Code Title Description
TH4A Reissue of patent specification