RU2015135354A

RU2015135354A - Композиция палочковидных бактерий, устойчивых к желчи, секретирующих высокие уровни незаменимых аминокислот

Info

Publication number: RU2015135354A
Application number: RU2015135354A
Authority: RU
Inventors: Метте Динес КАНТОР; Патрик ДЕРККС; Инге Кнап; Ане КНАРРЕБОРГ; Томас Дюрманн ЛЕСЕР; Лунн БЕНТЕ
Original assignee: Кр. Хансен А/С
Priority date: 2008-12-19
Filing date: 2009-12-16
Publication date: 2018-12-26
Also published as: ES2404137T3; JP5711144B2; RU2015135354A3; BRPI0923016A8; EP2379704A1; US8741280B2; RU2011129790A; US20120003351A1; RU2564127C2; CN102300981A; PL2379704T3; WO2010069990A1; JP2012512638A; DK2379704T3; EP2379704B1; BRPI0923016A2

Claims

1. Композиция палочковидных бактерий (бацилл), включающая от 10⁵ до 10¹² КОЕ/г споровых клеток бацилл, где указанная композиция отличается тем, что:

(i): споры палочковидных бактерий быстро прорастают и растут из спор в вегетативные клетки в присутствии среды с солями желчных кислот, включающей 4 мМ и 6 мМ солей желчных кислот, и характеризуются тем, что споры палочковидных бактерий достигают точки роста вегетативных клеток 0,4 OD₆₃₀ менее чем за 18-19 ч, соответственно и где точка роста вегетативных клеток является точкой на кривой роста, в которой показатель OD начинает непрерывно повышаться (ввиду роста вегетативных клеток) и достигает OD₆₃₀ равного 0,4;

(I) где среда с солями желчных кислот является неселективной средой телячьего мясного бульона (VIB) дополненной смесью конъюгированных солей желчных кислот тауродеоксихолата и гликодеоксихолата и деконъюгированных солей деоксихолата в пропорциях 60% тауродеоксихолата, 30% гликодеоксихолата и 10% деоксихолата; а

OD анализ проводят, осуществляя следующие стадии:

(a): заполнение лунок пластины микротитратора 0,150 мл среды с солями желчных кислот содержащей 10⁸ спор палочковидных бактерий на мл среды (время ноль); и

(b): инкубирование пластины при температуре 37°C и атмосферном давлении, измерение показателей OD₆₃₀, используя спектрофотометр, с предварительным перемешиванием перед каждым снятием данных для получения репрезентативной кривой

роста во времени;

и

(ii) вегетативные клетки палочковидных бактерий продуцируют по меньшей мере одну незаменимую аминокислоту в количестве большем, чем клетки контрольных палочковидных бактерий DSM 19467, а количество продуцированной незаменимой аминокислоты измеряют в супернатанте стандартным ГХ-МС способом для водных образцов, примера 2, после 2 дней роста, при температуре 37°C в известной, стандартной ростовой среде примера 2.

2. Композиция палочковидных бактерий по п. 1, где споровые клетки палочковидных бактерий композиции присутствуют в виде высушенных (например, распылительной сушкой) споровых клеток.

3. Композиция палочковидных бактерий по п. 1 или 2, где клетки палочковидных бактерий представляют собой клетки B. subtilis.

4. Композиция палочковидных бактерий по п. 1 или 2, где споры палочковидных бактерий достигают точки роста вегетативных клеток по меньшей мере на 3 ч раньше, чем споровые клетки контрольной Bacillus subtilis, депонированной, как DSM 17231 при условиях (i) п. 1.

5. Композиция палочковидных бактерий по п. 1 или 2, где незаменимую аминокислоту выбирают из группы, состоящей из фенилаланина, валина, треонина, триптофана, изолейцина, метионина, лейцина, лизина, цистеина, тирозина, гистидина и аргинина.

6. Композиция палочковидных бактерий по п. 5, где незаменимую аминокислоту выбирают из группы, состоящей из валина, изолейцина

и лейцина.

7. Композиция палочковидных бактерий по п. 6, где незаменимая аминокислота представляет лейцин.

8. Композиция палочковидных бактерий по п. 1 или 2, где вегетативные клетки Bacillus предпочтительно продуцируют по меньшей мере одну незаменимую аминокислоту в количестве по меньшей мере в 4 раза большем, чем клетки контрольной Bacillus DSM 19467 при условиях (ii) п. 1.