RU2015129623A - Рекомбинантный фрагмент ДНК, кодирующий альфа-фетопротеин (АФП) человека, содержащий "медленные" кодоны, кодирующие лейцин, экспрессионная плазмида, содержащая указанный фрагмент, клетка Saccharomyces cerevisiae, трансформированная указанной плазмидой, и способ получения рекомбинантного АФП человека - Google Patents

Рекомбинантный фрагмент ДНК, кодирующий альфа-фетопротеин (АФП) человека, содержащий "медленные" кодоны, кодирующие лейцин, экспрессионная плазмида, содержащая указанный фрагмент, клетка Saccharomyces cerevisiae, трансформированная указанной плазмидой, и способ получения рекомбинантного АФП человека Download PDF

Info

Publication number
RU2015129623A
RU2015129623A RU2015129623A RU2015129623A RU2015129623A RU 2015129623 A RU2015129623 A RU 2015129623A RU 2015129623 A RU2015129623 A RU 2015129623A RU 2015129623 A RU2015129623 A RU 2015129623A RU 2015129623 A RU2015129623 A RU 2015129623A
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
afp
saccharomyces cerevisiae
dna fragment
plasmid
recombinant
Prior art date
Application number
RU2015129623A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2617943C2 (ru
Inventor
Сергей Владимирович Беневоленский
Екатерина Александровна Вавилова
Игорь Вячеславович Дудич
Сергей Сергеевич Зацепин
Елена Владимировна Морозкина
Лидия Николаевна Семенкова
Юрий Игоревич Остроумов
Original Assignee
Общество с ограниченной ответственностью "Научно-производственное предприятие "Ферментные технологии" (ООО "НПП "Ферментные технологии")
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Общество с ограниченной ответственностью "Научно-производственное предприятие "Ферментные технологии" (ООО "НПП "Ферментные технологии") filed Critical Общество с ограниченной ответственностью "Научно-производственное предприятие "Ферментные технологии" (ООО "НПП "Ферментные технологии")
Priority to RU2015129623A priority Critical patent/RU2617943C2/ru
Publication of RU2015129623A publication Critical patent/RU2015129623A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2617943C2 publication Critical patent/RU2617943C2/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C12N1/16—Yeasts; Culture media therefor
    • C12N1/18—Baker's yeast; Brewer's yeast
    • C12N1/185—Saccharomyces isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/80—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi
    • C12N15/81—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi for yeasts
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
    • C12P21/02—Preparation of peptides or proteins having a known sequence of two or more amino acids, e.g. glutathione
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
    • C12R2001/85—Saccharomyces
    • C12R2001/865—Saccharomyces cerevisiae

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Claims (9)

1. Рекомбинантный фрагмент ДНК, кодирующий белок, обладающий активностью альфа-фетопротеина (АФП) человека, оптимизированный для экспрессии в клетках дрожжей Saccharomyces cerevisiae, отличающийся тем, что указанный фрагмент ДНК содержит "медленные" кодоны, кодирующие L-аминокислотные остатки лейцина, соответствующие положениям 13, 24, 52, 68, 72, 79, 86, 107, 119, 160, 161, 194, 199, 200, 239, 307, 311, 315, 332, 346, 352, 361, 362, 372, 382, 392, 399, 403, 408, 445, 450, 451, 465, 496, 534, 537, 549, 560 и 588 в нативной последовательности АФП человека.
2. Рекомбинантный фрагмент ДНК по п. 1, отличающийся тем, что указанный фрагмент ДНК кодирует АФП с нативным сайтом гликозилирования, соответствующим положению 232 в нативной последовательности АФП человека, представляющим собой L-аминокислотный остаток аспарагина, либо без него.
3. Рекомбинантный фрагмент ДНК по п. 1 или 2, отличающийся тем, что указанный фрагмент ДНК характеризуется последовательностью нуклеотидов, представленной в перечне последовательностей под номером SEQ ID NO: 9 или 10.
4. Рекомбинантная плазмида для экспрессии рекомбинантного АФП человека в клетках Saccharomyces cerevisiae, в следующей последовательности по существу состоящая из промотора GAL1, пре-про участка секреции MFα, фрагмента ДНК по п. 1, участка терминации транскрипции гена CYC1 дрожжей, фрагмента Ty8 гена TyA, гена устойчивости к ампициллину, фрагмента Ty8 гена TyA и маркера селекции URA3 дрожжей.
5. Рекомбинантная плазмида по п. 4, отличающаяся тем, что указанной плазмидой является плазмида pTy8/rhAFPmut_CU или pTy8/rhAFP_CU, представленные на Фиг. 8 и 10 соответственно.
6. Клетка Saccharomyces cerevisiae, трансформированная плазмидой по п. 4 и обладающая способностью к секреции рекомбинантного АФП человека в культуральную жидкость.
7. Клетка по п. 6, отличающаяся тем, что указанной клеткой является клетка штамма Saccharomyces cerevisiae YBS247+/AFPmut_CU или клетка штамма Saccharomyces cerevisiae YBS247+/AFP_CU.
8. Способ получения рекомбинантного АФП человека, содержащий стадии культивирования клеток по п. 6 в питательной среде и выделения рекомбинантного АФП человека из культуральной жидкости.
9. Способ по п. 8, отличающийся тем, что используют клетки штамма Saccharomyces cerevisiae YBS247+/AFPmut_CU или клетки штамма Saccharomyces cerevisiae YBS247+/AFP_CU.
RU2015129623A 2015-07-17 2015-07-17 Рекомбинантный фрагмент ДНК, кодирующий альфа-фетопротеин (АФП) человека, содержащий "медленные" кодоны, кодирующие лейцин, экспрессионная плазмида, содержащая указанный фрагмент, клетка Saccharomyces cerevisiae, трансформированная указанной плазмидой, и способ получения рекомбинантного АФП человека RU2617943C2 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2015129623A RU2617943C2 (ru) 2015-07-17 2015-07-17 Рекомбинантный фрагмент ДНК, кодирующий альфа-фетопротеин (АФП) человека, содержащий "медленные" кодоны, кодирующие лейцин, экспрессионная плазмида, содержащая указанный фрагмент, клетка Saccharomyces cerevisiae, трансформированная указанной плазмидой, и способ получения рекомбинантного АФП человека

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2015129623A RU2617943C2 (ru) 2015-07-17 2015-07-17 Рекомбинантный фрагмент ДНК, кодирующий альфа-фетопротеин (АФП) человека, содержащий "медленные" кодоны, кодирующие лейцин, экспрессионная плазмида, содержащая указанный фрагмент, клетка Saccharomyces cerevisiae, трансформированная указанной плазмидой, и способ получения рекомбинантного АФП человека

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2015129623A true RU2015129623A (ru) 2017-01-23
RU2617943C2 RU2617943C2 (ru) 2017-04-28

Family

ID=58450993

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2015129623A RU2617943C2 (ru) 2015-07-17 2015-07-17 Рекомбинантный фрагмент ДНК, кодирующий альфа-фетопротеин (АФП) человека, содержащий "медленные" кодоны, кодирующие лейцин, экспрессионная плазмида, содержащая указанный фрагмент, клетка Saccharomyces cerevisiae, трансформированная указанной плазмидой, и способ получения рекомбинантного АФП человека

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2617943C2 (ru)

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5206153A (en) * 1990-06-27 1993-04-27 Snow Brand Milk Products Co., Ltd. Method of producing human α-fetoprotein and product produced thereby
US6331611B1 (en) * 1991-09-27 2001-12-18 Mcgill University Expression and purification of cloned human alpha-fetoprotein
EA011606B1 (ru) * 2004-07-14 2009-04-28 Эдуард Борисович Татулов Способы получения и применения рекомбинантного альфа-фетопротеина

Also Published As

Publication number Publication date
RU2617943C2 (ru) 2017-04-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2012320421B2 (en) Regulatable promoter
GB2582100A (en) CAS12C Compositions and methods of use
JP7448977B2 (ja) 組換えヒト血清アルブミンの高発現のための遺伝子工学操作された細菌の構築
CN108949869B (zh) 无碳源阻遏毕赤酵母表达系统、其建立方法及应用
EP2669375B1 (en) Yeast of the genus pichia modified to express high levels of a mpp1 homolog and process for producing protein
JP2014526884A5 (ru)
RU2015104984A (ru) Способ создания дивергентных кодон-оптимизированных больших повторяющихся последовательностей днк
RU2015135980A (ru) Клетки-хозяева и способы использования
JP2020509755A5 (ru)
US11913016B2 (en) Synthetic yeast cells and methods of making and using the same
AU2019214587B2 (en) Endoplasmic reticulum targeting signal
RU2015129623A (ru) Рекомбинантный фрагмент ДНК, кодирующий альфа-фетопротеин (АФП) человека, содержащий "медленные" кодоны, кодирующие лейцин, экспрессионная плазмида, содержащая указанный фрагмент, клетка Saccharomyces cerevisiae, трансформированная указанной плазмидой, и способ получения рекомбинантного АФП человека
EP2723875A2 (en) Recombinant yeast expressing agt1
Li et al. A novel protein expression system-PichiaPink™-and a protocol for fast and efficient recombinant protein expression
CN104480126A (zh) 一种卵形鲳鲹过氧化物还原酶基因
RU2016133705A (ru) Новый полипептид системы цитохрома р450 с повышенной ферментной активностью
EP3027752B1 (en) Signal sequence for protein expression in pichia pastoris
EP3015549B1 (en) Novel polypeptide, and use thereof
CN103243118A (zh) 用毕赤酵母表达系统高效表达glp-1人重组蛋白方法
Amadea et al. Expression of Pichia pastoris-derived secreted insulin precursor
WO2014208583A1 (ja) 新規ポリペプチド及びその用途
CN102827784A (zh) 重组鲫鱼mbsp表达菌株及其构建方法
Beisenov et al. Expression of sheep pox viral A27L and L1R proteins in prokaryotic and eukaryotic systems
Nonaka et al. Marker-free Insertion of a Series of C-terminal Epitopes Based on the 50: 50 Method in Saccharomyces cerevisiae
WO2013100713A2 (ko) 효모 염색체 통합 또는 산업 스트레인 형질전환용 효모 발현 벡터, 그리고 이들의 용도