RU2015109081A - ПЛАЗМИДНЫЙ ВЕКТОР pET-His8-TrxL-AciP1, ШТАММ БАКТЕРИИ Eschrichia coli BL21(DE3)/pET-His8-TrxL-AciP1 ДЛЯ ЭКСПРЕССИИ АНТИМИКРОБНОГО ПЕПТИДА АЦИПЕПСИНА-1 И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ УКАЗАННОГО ПЕПТИДА - Google Patents

ПЛАЗМИДНЫЙ ВЕКТОР pET-His8-TrxL-AciP1, ШТАММ БАКТЕРИИ Eschrichia coli BL21(DE3)/pET-His8-TrxL-AciP1 ДЛЯ ЭКСПРЕССИИ АНТИМИКРОБНОГО ПЕПТИДА АЦИПЕПСИНА-1 И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ УКАЗАННОГО ПЕПТИДА Download PDF

Info

Publication number
RU2015109081A
RU2015109081A RU2015109081/10A RU2015109081A RU2015109081A RU 2015109081 A RU2015109081 A RU 2015109081A RU 2015109081/10 A RU2015109081/10 A RU 2015109081/10A RU 2015109081 A RU2015109081 A RU 2015109081A RU 2015109081 A RU2015109081 A RU 2015109081A
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
acip1
trxl
his8
pet
fusion protein
Prior art date
Application number
RU2015109081/10A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2580031C2 (ru
Inventor
Сергей Владимирович Баландин
Павел Валерьевич Пантелеев
Илья Александрович Болосов
Ольга Валерьевна Шамова
Владимир Николаевич Кокряков
Татьяна Владимировна Овчинникова
Original Assignee
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова Российской академии наук (ИБХ РАН)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное бюджетное учреждение науки институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова Российской академии наук (ИБХ РАН) filed Critical Федеральное государственное бюджетное учреждение науки институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова Российской академии наук (ИБХ РАН)
Priority to RU2015109081/10A priority Critical patent/RU2580031C2/ru
Publication of RU2015109081A publication Critical patent/RU2015109081A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2580031C2 publication Critical patent/RU2580031C2/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/461—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from fish
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/20—Fusion polypeptide containing a tag with affinity for a non-protein ligand
    • C07K2319/21—Fusion polypeptide containing a tag with affinity for a non-protein ligand containing a His-tag
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/35—Fusion polypeptide containing a fusion for enhanced stability/folding during expression, e.g. fusions with chaperones or thioredoxin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/62—DNA sequences coding for fusion proteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/70—Vectors or expression systems specially adapted for E. coli
    • C12N15/72—Expression systems using regulatory sequences derived from the lac-operon
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2330/00—Production
    • C12N2330/50—Biochemical production, i.e. in a transformed host cell
    • C12N2330/51—Specially adapted vectors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2510/00—Genetically modified cells
    • C12N2510/02—Cells for production
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2800/00—Nucleic acids vectors
    • C12N2800/22—Vectors comprising a coding region that has been codon optimised for expression in a respective host

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

1. Плазмидный вектор pET-His8-TrxL-Acip1 для экспрессии в клетках Escherichia coli антимикробного пептида аципенсина-1 в составе гибридного белка His8-TrxL-Acip1, состоящий из двух фрагментов ДНК:- BglII/XhoI-фрагмента с нуклеотидной последовательностью SEQ ID No. 2, содержащего промотор транскрипции Т7 РНК-полимеразы, lac-оператор, участок связывания рибосомы и участок, кодирующий аффинную метку, белок тиоредоксин и аципенсин-1;- BglII/XhoI-фрагмента плазмиды pET31b(+), содержащего терминатор транскрипции Т7 РНК-полимеразы, сайт инициации репликации, ген β-лактамазы и ген lac-penpeccopa (lacI).2. Штамм бактерии Escherichia coli BL21(DE3)/pET-His8-TrxL-Acip1 - продуцент гибридного белка His8-TrxL-Acip1, получаемый путем трансформации клеток родительского штамма BL21(DE3) плазмидным вектором pET-His8-TrxL-Acip1 по п. 1.3. Способ получения антимикробного пептида аципенсина-1, включающий экспрессию гибридного белка His8-TrxL-Acip1 в штамме-продуценте Escherichia coli BL21(DE3)/pET-His8-TrxL-Acip1 по п. 2, лизис клеток, аффинную очистку гибридного белка His8-TrxL-Acip1 на металлохелатном носителе, расщепление гибридного белка His8-TrxL-Acip1 бромцианом по остатку метионина, введенному между последовательностями аципенсина-1 и тиоредоксина, повторную металлохелатную очистку и очистку целевого пептида методом обращенно-фазовой ВЭЖХ.

Claims (3)

1. Плазмидный вектор pET-His8-TrxL-Acip1 для экспрессии в клетках Escherichia coli антимикробного пептида аципенсина-1 в составе гибридного белка His8-TrxL-Acip1, состоящий из двух фрагментов ДНК:
- BglII/XhoI-фрагмента с нуклеотидной последовательностью SEQ ID No. 2, содержащего промотор транскрипции Т7 РНК-полимеразы, lac-оператор, участок связывания рибосомы и участок, кодирующий аффинную метку, белок тиоредоксин и аципенсин-1;
- BglII/XhoI-фрагмента плазмиды pET31b(+), содержащего терминатор транскрипции Т7 РНК-полимеразы, сайт инициации репликации, ген β-лактамазы и ген lac-penpeccopa (lacI).
2. Штамм бактерии Escherichia coli BL21(DE3)/pET-His8-TrxL-Acip1 - продуцент гибридного белка His8-TrxL-Acip1, получаемый путем трансформации клеток родительского штамма BL21(DE3) плазмидным вектором pET-His8-TrxL-Acip1 по п. 1.
3. Способ получения антимикробного пептида аципенсина-1, включающий экспрессию гибридного белка His8-TrxL-Acip1 в штамме-продуценте Escherichia coli BL21(DE3)/pET-His8-TrxL-Acip1 по п. 2, лизис клеток, аффинную очистку гибридного белка His8-TrxL-Acip1 на металлохелатном носителе, расщепление гибридного белка His8-TrxL-Acip1 бромцианом по остатку метионина, введенному между последовательностями аципенсина-1 и тиоредоксина, повторную металлохелатную очистку и очистку целевого пептида методом обращенно-фазовой ВЭЖХ.
RU2015109081/10A 2015-03-16 2015-03-16 ПЛАЗМИДНЫЙ ВЕКТОР pET-His8-TrxL-Acip1, ШТАММ БАКТЕРИИ Escherichia coli BL21(DE3)/pET-His8-TrxL-Acip1 ДЛЯ ЭКСПРЕССИИ АНТИМИКРОБНОГО ПЕПТИДА АЦИПЕНСИНА-1 И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ УКАЗАННОГО ПЕПТИДА RU2580031C2 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2015109081/10A RU2580031C2 (ru) 2015-03-16 2015-03-16 ПЛАЗМИДНЫЙ ВЕКТОР pET-His8-TrxL-Acip1, ШТАММ БАКТЕРИИ Escherichia coli BL21(DE3)/pET-His8-TrxL-Acip1 ДЛЯ ЭКСПРЕССИИ АНТИМИКРОБНОГО ПЕПТИДА АЦИПЕНСИНА-1 И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ УКАЗАННОГО ПЕПТИДА

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2015109081/10A RU2580031C2 (ru) 2015-03-16 2015-03-16 ПЛАЗМИДНЫЙ ВЕКТОР pET-His8-TrxL-Acip1, ШТАММ БАКТЕРИИ Escherichia coli BL21(DE3)/pET-His8-TrxL-Acip1 ДЛЯ ЭКСПРЕССИИ АНТИМИКРОБНОГО ПЕПТИДА АЦИПЕНСИНА-1 И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ УКАЗАННОГО ПЕПТИДА

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2015109081A true RU2015109081A (ru) 2015-07-20
RU2580031C2 RU2580031C2 (ru) 2016-04-10

Family

ID=53611502

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2015109081/10A RU2580031C2 (ru) 2015-03-16 2015-03-16 ПЛАЗМИДНЫЙ ВЕКТОР pET-His8-TrxL-Acip1, ШТАММ БАКТЕРИИ Escherichia coli BL21(DE3)/pET-His8-TrxL-Acip1 ДЛЯ ЭКСПРЕССИИ АНТИМИКРОБНОГО ПЕПТИДА АЦИПЕНСИНА-1 И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ УКАЗАННОГО ПЕПТИДА

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2580031C2 (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2618850C2 (ru) * 2016-06-14 2017-05-11 Федеральное государственное бюджетное учреждение науки институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова Российской академии наук (ИБХ РАН) Плазмидный вектор pET-mChBac75Na, штамм бактерии Eschrichia coli BL21(DE3/ pET-mChBac75Na для экспрессии антимикробного пептида минибактенецина ChBac7.5 Nα и способ получения указанного пептида

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2658781C1 (ru) * 2017-12-28 2018-06-22 Федеральное государственное бюджетное учреждение науки институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова Российской академии наук (ИБХ РАН) Пептид, обладающий противоопухолевой активностью

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2456345C1 (ru) * 2010-12-30 2012-07-20 Федеральное Государственное Бюджетное Учреждение Науки Институт Биоорганической Химии Им. Академиков М.М. Шемякина И Ю.А. Овчинникова Российской Академии Наук РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК pЕ-Trx-Lc-def, ШТАММ Escherichia coli ДЛЯ ЭКСПРЕССИИ АНТИМИКРОБНОГО ПЕПТИДА ДЕФЕНСИНА ЧЕЧЕВИЦЫ Lens culinaris И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ УКАЗАННОГО ПЕПТИДА

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2618850C2 (ru) * 2016-06-14 2017-05-11 Федеральное государственное бюджетное учреждение науки институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова Российской академии наук (ИБХ РАН) Плазмидный вектор pET-mChBac75Na, штамм бактерии Eschrichia coli BL21(DE3/ pET-mChBac75Na для экспрессии антимикробного пептида минибактенецина ChBac7.5 Nα и способ получения указанного пептида

Also Published As

Publication number Publication date
RU2580031C2 (ru) 2016-04-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Wang et al. Expanding targeting scope, editing window, and base transition capability of base editing in Corynebacterium glutamicum
US7846694B2 (en) Process for producing template DNA and process for producing protein in cell-free protein synthesis system with the use of the same
EA201991442A1 (ru) ТЕРМОСТАБИЛЬНЫЕ НУКЛЕАЗЫ Cas9
Eschenfeldt et al. New LIC vectors for production of proteins from genes containing rare codons
JP2017517268A5 (ru)
PH12017502281A1 (en) Thermostable cas9 nucleases
JP2017513479A5 (ru)
CN104837863A (zh) 用于提高表达的细菌提取物中选定蛋白的蛋白水解失活
JP2011522552A (ja) 化学的に修飾されたｒｎａの酵素的合成のための方法
EP3234146A1 (en) Selective optimisation of a ribosome binding site for protein production
RU2015109081A (ru) ПЛАЗМИДНЫЙ ВЕКТОР pET-His8-TrxL-AciP1, ШТАММ БАКТЕРИИ Eschrichia coli BL21(DE3)/pET-His8-TrxL-AciP1 ДЛЯ ЭКСПРЕССИИ АНТИМИКРОБНОГО ПЕПТИДА АЦИПЕПСИНА-1 И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ УКАЗАННОГО ПЕПТИДА
WO2022255865A1 (en) Gramp protein and tpr-chat protein for modulating a target mrna or target protein
Zhang et al. Engineered multiple translation initiation sites: a novel tool to enhance protein production in Bacillus licheniformis and other industrially relevant bacteria
Xie et al. High-yield soluble expression and simple purification of the antimicrobial peptide OG2 using the intein system in Escherichia coli
RU2016123389A (ru) Плазмидный вектор pET-mChBac75Na, штамм бактерии Eschrichia coli BL(DE3/ pET-mChBac75Na для экспрессии антимикробного пептида минибактенецина ChBac7Na и способ получения указанного пептида
RU2016129503A (ru) Плазмидный вектор pET-pPsLTP, штамм бактерии Escherichia coli BL21(DE3)Star/ pET-pPsLTP-продуцент пищевого аллергена гороха Pis s 3 и способ получения указанного аллергена
CN103710373B (zh) 一种原核融合表达载体及其应用
Afful et al. Overproduction and purification of highly active recombinant Pseudomonas aeruginosa str. PAO1 RNA polymerase holoenzyme complex
RU2010127458A (ru) РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК pPA-OPRF, КОДИРУЮЩАЯ СИНТЕЗ РЕКОМБИНАНТНОГО БЕЛКА F НАРУЖНОЙ МЕМБРАНЫ PSEUDOMONAS AERUGINOSA, ШТАММ ESCHERICHIA coli PA-OPRF-ПРОДУЦЕНТ РЕКОМБИНАНТНОГО БЕЛКА F НАРУЖНОЙ МЕМБРАНЫ PSEUDOMONAS AERUGINOSA, И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РЕКОМБИНАНТНОГО БЕЛКА F НАРУЖНОЙ МЕМБРАНЫ PSEUDOMONAS AERUGINOS
RU2011142855A (ru) РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК pPA-OPRFI, КОДИРУЮЩАЯ СИНТЕЗ ГИБРИДНОГО РЕКОМБИНАНТНОГО БЕЛКА F-I НАРУЖНОЙ МЕМБРАНЫ PSEUDOMONAS AERUGINOSA, ШТАММ ESCHERICHIA COLI PA-OPRFI-ПРОДУЦЕНТ ГИБРИДНОГО РЕКОМБИНАНТНОГО БЕЛКА F-I НАРУЖНОЙ МЕМБРАНЫ PSEUDOMONAS AERUGINOSA, И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИБРИДНОГО РЕКОМБИНАНТНОГО БЕЛКА F-I НАРУЖНОЙ МЕМБРАНЫ PSEUDOMONAS AERUGINOSA
RU2012139928A (ru) РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК pPA-OPRF-ETA, КОДИРУЮЩАЯ СИНТЕЗ ГИБРИДНОГО РЕКОМБИНАНТНОГО БЕЛКА, ВКЛЮЧАЮЩЕГО АМИНОКИСЛОТНЫЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ БЕЛКА F НАРУЖНОЙ МЕМБРАНЫ И ЭКЗОТОКСИНА А PSEUDOMONAS aeruginosa, ШТАММ ESCHERICHIA coli PA-OPRF-ETA - ПРОДУЦЕНТ ГИБРИДНОГО РЕКОМБИНАНТНОГО БЕЛКА, ВКЛЮЧАЮЩЕГО АМИНОКИСЛОТНЫЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ БЕЛКА F НАРУЖНОЙ МЕМБРАНЫ И ЭКЗОТОКСИНА А PSEUDOMONAS aeruginosa, И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИБРИДНОГО РЕКОМБИНАНТНОГО БЕЛКА, ВКЛЮЧАЮЩЕГО АМИНОКИСЛОТНЫЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ БЕЛКА F НАРУЖНОЙ МЕМБРАНЫ И ЭКЗОТОКСИНА А PSEUDOMONAS aeruginosa
Babich et al. Expression of recombinant L-phenylalanine ammonia-lyase in Escherichia coli
JP2017529833A5 (ru)
RU2015139726A (ru) Рекомбинантная плазмидная ДНК pER-APHC3, кодирующая гибридный белок, способный к автокаталитическому расщеплению с образованием APHC3, штамм Eschrichia coli C3030/pER-APHC3 продуцент указанных белков и способ получения рекомбинантного APCH3
Maestas Exploration of the RHO Factor

Legal Events

Date Code Title Description
QB4A Licence on use of patent

Free format text: LICENCE

Effective date: 20170213