RU2014151048A

RU2014151048A - Получение гидрофобина trichoderma

Info

Publication number: RU2014151048A
Application number: RU2014151048A
Authority: RU
Inventors: Майкл Уорд
Original assignee: ДАНИСКО ЮЭс ИНК.
Priority date: 2012-05-21
Filing date: 2013-05-21
Publication date: 2016-07-10
Also published as: EP2852677A1; WO2013177153A1; MX2014013843A; CA2871140A1; CN104520434A; AU2013266516A1; US20150132800A1; JP2015518723A; KR20150018517A

Abstract

1. Способ получения гидрофобина, кодируемого геном, регулируемым индуцируемым промотором, включающий стадии:a) получения первой смеси, содержащей от примерно 5% до примерно 75% глюкозы и препарата целлюлазы;(b) инкубирования первой смеси при температуре и в течение времени, достаточного для получения индуцирующей питательной композиции, содержащей софорозу с концентрацией в интервале от 2 г/л до 25 г/л, генциобиозу с концентрацией в интервале от 35 г/л до 60 г/л и глюкозу; и(c) культивирования клетки-хозяина, содержащей последовательность, кодирующую гидрофобин, регулируемую индуцируемым софорозой промотором или индуцируемым генциобиозой промотором, с указанной индуцирующей питательной композицией, в количестве, эффективном для индуцирования образования гидрофобина.2. Способ по п. 1, где получаемый белок представляет собой гетерологичный гидрофобин.3. Способ по п. 1, где гидрофобин представляет собой гидрофобин I.4. Способ по п. 1, где гидрофобин представляет собой гидрофобин II.5. Способ по п. 1, где клетка модифицирована с помощью генной инженерии так, что она экспрессирует ген гидрофобина, регулируемый индуцируемым софорозой промотором или индуцируемым генциобиозой промотором.6. Способ по п. 5, где представляющий интерес белок регулируется промотором гена целлюлазы.7. Способ по п. 6, где промотор представляет собой промотор cbh1 из Trichoderma reesei.8. Способ по п. 5, где ген гидрофобина регулируется индуцируемым софорозой промотором.9. Способ по п. 5, где представляющий интерес белок регулируется индуцируемым генциобиозой промотором.10. Способ по п. 1, где клетка представляет собой клеткумицелиального гриба.11. Способ по п. 10, где мицелиальный гриб выбирают из группы, состоящей из Trichoderma, Humicola, Fusarium, Aspergillus, Neurospora, Penicillium, Cephalosporium, Mycelio

Claims

1. Способ получения гидрофобина, кодируемого геном, регулируемым индуцируемым промотором, включающий стадии:

a) получения первой смеси, содержащей от примерно 5% до примерно 75% глюкозы и препарата целлюлазы;

(b) инкубирования первой смеси при температуре и в течение времени, достаточного для получения индуцирующей питательной композиции, содержащей софорозу с концентрацией в интервале от 2 г/л до 25 г/л, генциобиозу с концентрацией в интервале от 35 г/л до 60 г/л и глюкозу; и

(c) культивирования клетки-хозяина, содержащей последовательность, кодирующую гидрофобин, регулируемую индуцируемым софорозой промотором или индуцируемым генциобиозой промотором, с указанной индуцирующей питательной композицией, в количестве, эффективном для индуцирования образования гидрофобина.

2. Способ по п. 1, где получаемый белок представляет собой гетерологичный гидрофобин.

3. Способ по п. 1, где гидрофобин представляет собой гидрофобин I.

4. Способ по п. 1, где гидрофобин представляет собой гидрофобин II.

5. Способ по п. 1, где клетка модифицирована с помощью генной инженерии так, что она экспрессирует ген гидрофобина, регулируемый индуцируемым софорозой промотором или индуцируемым генциобиозой промотором.

6. Способ по п. 5, где представляющий интерес белок регулируется промотором гена целлюлазы.

7. Способ по п. 6, где промотор представляет собой промотор cbh1 из Trichoderma reesei.

8. Способ по п. 5, где ген гидрофобина регулируется индуцируемым софорозой промотором.

9. Способ по п. 5, где представляющий интерес белок регулируется индуцируемым генциобиозой промотором.

10. Способ по п. 1, где клетка представляет собой клетку

мицелиального гриба.

11. Способ по п. 10, где мицелиальный гриб выбирают из группы, состоящей из Trichoderma, Humicola, Fusarium, Aspergillus, Neurospora, Penicillium, Cephalosporium, Myceliophthora, Thermomyces, Chrysosporium.

12. Способ по п. 11, где мицелиальный гриб представляет собой Trichoderma spp.

13. Способ по п. 12, где мицелиальный гриб представляет собой Trichoderma reesei.

14. Способ по п. 1, где препарат целлюлазы в указанной первой смеси составляет от примерно 0,5 г/л до примерно 50 г/л общего белка.

15. Способ по п. 14, где концентрация общего белка в указанной первой смеси изменяется от примерно 2 г/л до примерно 10 г/л.

16. Способ по п. 1, где первую смесь инкубируют при температуре от примерно 50°C до примерно 70°C.

17. Способ по п. 16, где первую смесь инкубируют в течение периода от 8 часов до 7 дней.

18. Способ по п. 1, где препарат целлюлазы представляет собой препарат целлюлазы Trichoderma reesei.

19. Способ по п. 1, где первую смесь инкубируют при температуре от примерно 50°C до примерно 65°C в течение периода от двух до трех дней.

20. Способ по п. 1, где первую смесь инкубируют при температуре примерно 65°C в течение периода от двух до трех дней.

21. Способ по п. 1, в котором указанный препарат целлюлазы представляет собой продукт Trichoderma reesei, модифицированной с помощью генной инженерии так, что она сверхэкспрессирует бета-глюкозидазу.

22. Способ по п. 1, где препарат целлюлазы представляет собой целиком композицию целлюлазы или обогащенную бета-глюкозидазой композицию целлюлазы.

23. Способ по п. 12, где последовательность(и) Trichoderma, кодирующая целлюлазу(ы), удалена(ы) или нарушена(ы).

24. Способ по п. 23, где клетка Trichoderma дополнительно модифицирована так, что ген egl5 нарушен или удален.

25. Способ по п. 1, где ген гидрофобина функционально связан с промотором cbh1, cbh2, egl1 или egl2, при этом экспрессия гидрофобина регулируется промотором cbh1, cbh2 или egl1, egl2.

26. Способ по п. 1, где молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая гидрофобин, содержит кодирующую последовательность hfb2.

27. Способ по п. 1, где глюкоза и софороза предоставлены в индуцирующей питательной композиции.

28. Способ по п. 26, где софороза присутствует в индуцирующей питательной композиции в количестве, составляющем от примерно 1 г/л до примерно 50 г/л.

29. Способ по п. 26, где глюкоза присутствует в индуцирующей питательной комопозиции в количестве, составляющем примерно 5-75% (вес/вес).

30. Способ по п. 1, где глюкоза присутствует в индуцирующей питательной комопозиции в количестве, составляющем примерно 60% (вес/вес), софороза присутствует в индуцирующей питательной композиции в количестве, составляющем примерно 12 г/л, молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая гидрофобин представляет собой кодирующую последовательность hfb2, кодирующая последовательность hfb2 функционально связана с промотором cbh1, посредством чего экспрессия гидрофобина регулируется промотором cbh1, и Trichoderma включает Trichoderma reesei, в которой одна или более кодирующих последовательностей cbh1, cbh2, egl1, egl5 и egl2 Trichoderma удалены или нарушены.