RU2014119996A

RU2014119996A - Обнаружение, выделение и анализ редких клеток в биологических жидкостях

Info

Publication number: RU2014119996A
Application number: RU2014119996/10A
Authority: RU
Inventors: Джавад ХОСРАВИ; Леонард Х. КЕЛЛНЕР; Хассан БЕННАНИ
Original assignee: Келлбенкс, Инк.
Priority date: 2011-11-14
Filing date: 2012-11-13
Publication date: 2015-12-27
Also published as: CA2855895A1; US20130122492A1; AU2012339755A1; US20150133332A1; WO2013074520A2; EP2780468A2; WO2013074520A3; CN104364389A

Abstract

1. Способ выделения или обогащения редких клеток из биологической жидкости млекопитающего, при этом указанный способ включает:обеспечение антитела, иммобилизованного на субстрате, причем указанное антитело связывается с поверхностным антигеном редкой клетки;осуществление контакта указанного иммобилизованного антитела с образцом биологической жидкости, причем указанная биологическая жидкость содержит редкую клетку и множество других клеток;осуществление инкубации указанного иммобилизованного антитела с указанным образцом биологической жидкости в условиях, подходящих для связывания антитела с поверхностным антигеном редкой клетки с образованием комплекса антитело - редкая клетка и множества несвязанных клеток; иотмывку комплекса антитело - редкая клетка для удаления не связанных клеток и обеспечения комплекса антитело - редкая клетка.2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что указанное антитело является специфичным по отношению к поверхностному антигену эмбриональной клетки.3. Способ по п. 2, отличающийся тем, что указанный поверхностный антиген эмбриональной клетки представляет собой антиген эмбрионального ядросодержащего эритроцита.4. Способ по п. 3, отличающийся тем, что указанное антитело представляет собой антитело 4В9.5. Способ по п. 1, отличающийся тем, что указанное млекопитающее представляет собой человека.6. Способ по п. 1, отличающийся тем, что указанная биологическая жидкость представляет собой кровь, плазму, амниотическую жидкость, мочу или суспензию клеток из биопсии ворсин хориона (БВХ).7. Способ обнаружения редкой клетки в биологической жидкости, при этом указанный способ включает:обеспеч�

Claims

1. Способ выделения или обогащения редких клеток из биологической жидкости млекопитающего, при этом указанный способ включает:

обеспечение антитела, иммобилизованного на субстрате, причем указанное антитело связывается с поверхностным антигеном редкой клетки;

осуществление контакта указанного иммобилизованного антитела с образцом биологической жидкости, причем указанная биологическая жидкость содержит редкую клетку и множество других клеток;

осуществление инкубации указанного иммобилизованного антитела с указанным образцом биологической жидкости в условиях, подходящих для связывания антитела с поверхностным антигеном редкой клетки с образованием комплекса антитело - редкая клетка и множества несвязанных клеток; и

отмывку комплекса антитело - редкая клетка для удаления не связанных клеток и обеспечения комплекса антитело - редкая клетка.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что указанное антитело является специфичным по отношению к поверхностному антигену эмбриональной клетки.

3. Способ по п. 2, отличающийся тем, что указанный поверхностный антиген эмбриональной клетки представляет собой антиген эмбрионального ядросодержащего эритроцита.

4. Способ по п. 3, отличающийся тем, что указанное антитело представляет собой антитело 4В9.

5. Способ по п. 1, отличающийся тем, что указанное млекопитающее представляет собой человека.

6. Способ по п. 1, отличающийся тем, что указанная биологическая жидкость представляет собой кровь, плазму, амниотическую жидкость, мочу или суспензию клеток из биопсии ворсин хориона (БВХ).

7. Способ обнаружения редкой клетки в биологической жидкости, при этом указанный способ включает:

обеспечение первого антитела, иммобилизованного на субстрате, причем указанное первое антитело связывается с первым поверхностным антигеном указанной редкой клетки;

осуществление контакта указанного иммобилизованного первого антитела с образцом биологической жидкости, причем биологическая жидкость содержит редкую клетку и множество других клеток;

осуществление инкубации иммобилизованного первого антитела с образцом биологической жидкости в условиях, подходящих для связывания указанного первого антитела с указанным первым поверхностным антигеном редкой клетки, с образованием комплекса первое антитело - редкая клетка и множества несвязанных клеток;

отмывку комплекса первое антитело - редкая клетка для удаления несвязанных клеток и обеспечения выделенного комплекса первое антитело - редкая клетка;

осуществление инкубации указанного комплекса первое антитело - редкая клетка со вторым антителом, которое связывается со вторым поверхностным антигеном редкой клетки, в условиях, подходящих для связывания указанного второго антитела со вторым поверхностным антигеном редкой клетки, с образованием комплекса первое антитело - редкая клетка - второе антитело; и

обнаружение второго антитела в комплексе первое антитело - редкая клетка - второе антитело и посредством этого обнаружение наличия редкой клетки в образце физиологической жидкости.

8. Способ по п. 7, отличающийся тем, что указанные первое или второе антитело является специфичными по отношению к поверхностному антигену эмбриональной клетки.

9. Способ по п. 8, отличающийся тем, что антитело, специфичное по отношению к поверхностному антигену эмбриональной клетки, представляет собой антитело 4В9.

10. Способ обнаружения редкой клетки в биологической жидкости, при этом указанный способ включает:

обеспечение первого антитела, иммобилизованного на субстрате, причем указанное первое антитело связывается с первым поверхностным антигеном редкой клетки;

осуществление контакта указанного иммобилизованного первого антитела с образцом биологической жидкости, причем указанная биологическая жидкость содержит редкую клетку и множество других клеток;

осуществление инкубации указанного иммобилизованного первого антитела с образцом биологической жидкости в условиях, подходящих для связывания указанного антитела с поверхностным антигеном редкой клетки, с образованием комплекса первое антитело - редкая клетка и множества несвязанных клеток;

отмывку комплекса первое антитело - редкая клетка для удаления несвязанных клеток;

осуществление лизиса редкой клетки из комплекса первое антитело - редкая клетка с образованием лизата, который содержит последовательность нуклеиновой кислоты, специфичную для редкой клетки, и осуществление инкубации указанных лизированных клеток с зондом нуклеиновой кислоты, который является комплементарным последовательности нуклеиновой кислоты, специфичной для редкой клетки, в условиях, подходящих для гибридизации указанного зонда нуклеиновой кислоты с последовательностью нуклеиновой кислоты, специфичной для редкой клетки, с образованием двухцепочечного комплекса; и

обнаружение двухцепочечного комплекса и посредством этого обнаружение присутствия редкой клетки в образце физиологической жидкости.

11. Способ по п. 10, отличающийся тем, что указанная биологическая жидкость представляет собой физиологическую жидкость человека.

12. Способ по п. 11, отличающийся тем, что биологическая жидкость представляет собой кровь, плазму, амниотическую жидкость, мочу или суспензию клеток из биопсии ворсин хориона (БВХ).

13. Способ по п. 12, отличающийся тем, что указанная редкая клетка представляет собой эмбриональную клетку.

14. Способ по п. 12, отличающийся тем, что двухцепочечный комплекс обнаруживают методом флуоресцентной гибридизации in situ (FISH).

15. Способ по п. 12, отличающийся тем, что последовательность нуклеиновой кислоты, специфичная для редкой клетки, является характерной для хромосомной аномалии.