RU2012147173A

RU2012147173A - Рекомбинантное однодоменное антитело, способное специфически связывать фактор некроза опухолей человека, и его производные

Info

Publication number: RU2012147173A
Application number: RU2012147173/10A
Authority: RU
Inventors: Сергей Владимирович Тиллиб; Григорий Александрович Ефимов; Сергей Артурович Недоспасов; Андрей Алексеевич Круглов; Марина Сергеевна Друцкая
Priority date: 2012-11-07
Filing date: 2012-11-07
Publication date: 2014-05-20
Also published as: RU2530553C2

Abstract

1. Рекомбинантное однодоменное мини-антитело VHH и его производные, способные связывать белок фактор некроза опухолей человека и имеющие, по крайней мере, одну субъединицу, характеризующуюся последовательностью вариабельного домена, выбранной из последовательности аминокислот, представленной в SEQ ID NO:1, или последовательности SEQ ID NO:1, содержащей делецию, вставку, или замену одного или нескольких аминокислотных остатков и на 90% гомологичной последовательности, представленной в SEQ ID NO:1, и способной связывать белок фактор некроза опухолей человека, или последовательности на 90% гомологичной последовательности, представленной в SEQ ID NO:1, и способной связывать белок фактор некроза опухолей человека.2. Антитело по п.1, отличающееся тем, что его производное является биспецифическим антителом, способным избирательно связывать фактор некроза опухолей человека, производимый отдельной популяцией клеток иммунной системы, и включает, по крайней мере, одну дополнительную субъединицу, способную связывать один или несколько белков - поверхностных маркеров клеток, продуцирующих фактор некроза опухолей.3. Антитело по п.2, отличающееся тем, что указанное антитело способно блокировать биологическую активность фактора некроза опухолей, продуцируемого клетками макрофагально-моноцитарного ряда, связываясь с одним или несколькими поверхностными маркерами клеток макрофагально-моноцитарного ряда.4. Антитело по п.3, отличающееся тем, что указанное антитело способно связываться с одним или несколькими поверхностными маркерами клеток макрофагально-моноцитарного ряда, выбранными из группы, включающей белки CD11b, CD14, CD16, CD18, CD32, CD64, CD68, CD16

Claims

1. Рекомбинантное однодоменное мини-антитело VHH и его производные, способные связывать белок фактор некроза опухолей человека и имеющие, по крайней мере, одну субъединицу, характеризующуюся последовательностью вариабельного домена, выбранной из последовательности аминокислот, представленной в SEQ ID NO:1, или последовательности SEQ ID NO:1, содержащей делецию, вставку, или замену одного или нескольких аминокислотных остатков и на 90% гомологичной последовательности, представленной в SEQ ID NO:1, и способной связывать белок фактор некроза опухолей человека, или последовательности на 90% гомологичной последовательности, представленной в SEQ ID NO:1, и способной связывать белок фактор некроза опухолей человека.

2. Антитело по п.1, отличающееся тем, что его производное является биспецифическим антителом, способным избирательно связывать фактор некроза опухолей человека, производимый отдельной популяцией клеток иммунной системы, и включает, по крайней мере, одну дополнительную субъединицу, способную связывать один или несколько белков - поверхностных маркеров клеток, продуцирующих фактор некроза опухолей.

3. Антитело по п.2, отличающееся тем, что указанное антитело способно блокировать биологическую активность фактора некроза опухолей, продуцируемого клетками макрофагально-моноцитарного ряда, связываясь с одним или несколькими поверхностными маркерами клеток макрофагально-моноцитарного ряда.

4. Антитело по п.3, отличающееся тем, что указанное антитело способно связываться с одним или несколькими поверхностными маркерами клеток макрофагально-моноцитарного ряда, выбранными из группы, включающей белки CD11b, CD14, CD16, CD18, CD32, CD64, CD68, CD169, CD206, CD280, C3aR, C5aR, DC-SIGN, F4/80, MAC-1 или EMR1.

5. Антитело по п.2, отличающееся тем, что указанное антитело содержит последовательность аминокислот, представленную в SEQ ID NO:2, и способно связываться с поверхностным маркером клеток макрофагально-моноцитарного ряда, представляющим собой белок F4/80.

6. Фрагмент ДНК, кодирующий рекомбинантное однодоменное мини-антитело VHH или его производное по п.1.

7. Фрагмент ДНК по п.6, имеющий нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:3.

8. Способ получения антитела по п.1, включающий следующие стадии;

а) конструирование вектора, содержащего фрагмент ДНК по п.6 под промотором, обеспечивающим его экспрессию;

б) трансформацию клеток-продуцентов вектором, полученным на стадии а);

в) экспрессию антитела в клетках-продуцентах;

г) выделение и очистку антитела из клеток-продуцентов.

9. Композиция, содержащая терапевтически эффективное количество антитела по п.2, предназначенная для подкожного, или внутривенного, или внутримышечного введения, пригодная для лечения, и/или предупреждения, и/или облегчения состояния, связанного с воспалительным ответом, вызванным клетками макрофагально-моноцитарного ряда.

10. Способ подавления воспалительного ответа, вызванного клетками макрофагально-моноцитарного ряда, путем селективной блокировки ФНО, продуцируемого клетками макрофагально-моноцитарного ряда, включающий введение в организм человека композиции по п.9.

11. Способ по п.10, отличающийся тем, что нежелательный воспалительный ответ является причиной или одним из симптомов аутоиммунного или онкологического заболевания, включая ревматоидный артрит, псориаз, анкилозирующий спондилоартрит (болезни Бехтерева), хроническое воспаление стенки кишечника, вызванное микрофлорой - болезнь Крона.

12. Способ выявления и определения уровня фактора некроза опухоли человека в биологическом образце, включающий:

а) приведение в контакт биологического образца с антителом по п.1,

б) определение связывания указанного антитела с указанным образцом и

в) сравнение связывания, обнаруженного на стадии (б), со стандартом, соответствующим нормальному или повышенному уровню содержания фактора некроза опухоли человека.