RU2012130149A

RU2012130149A - Векторная система на основе aslv

Info

Publication number: RU2012130149A
Application number: RU2012130149/10A
Authority: RU
Inventors: Аксель ШАМБАХ; Кристофер БАУМ; Юлия Дебора ЗЮРТ
Original assignee: Медицинише Хохшуле Ганновер
Priority date: 2009-05-15
Filing date: 2010-05-17
Publication date: 2014-01-27
Also published as: DK2430167T3; EP2430167A1; DE102009021592A1; US20120172418A1; ES2534440T3; AU2010247368A1; AU2010247368B2; CA2766676C; WO2010130844A1; EP2430167B1; RU2566563C2; CA2766676A1; US8642570B2

Abstract

1. Вирусная РНК, имеющая 5'-область с R-областью и U5-областью из ASLV и расположенной относительно них в 3'-направлении сайт связывания праймера (PBS), сигнал упаковки (Ψ), кассету экспрессии, 3' U3-область и R-область, отличающаяся тем, что 3' U3-область имеет нуклеотидную последовательность, соответствующую SEQ ID NO: 1, в которой в результате делеции удалены по меньшей мере нуклеотиды с №28 по №186 включительно что практически приводит к элиминации промоторной и энхансерной активности 3' U3-области, причем в ее состав не входят никакие нуклеотидные последовательности, которые по меньшей мере частично кодируют вирусные структурные белки или донорный сайт сплайсинга (SD).2. Вирусная РНК по п.1, отличающийся тем, что на 3' конце последовательности полиаденелирования расположена делеция.3. Вирусная РНК по п.1, отличающаяся тем, что 3' U3-область имеет нуклеотидную последовательность, соответствующую SEQ ID NO: 1, и нуклеотиды с №200 по №206 дополнительно изменены в результате мутации с образованием частичной последовательности, в которой отсутствует ТАТА-бокс.4. Вирусная РНК по п.3, отличающаяся тем, что нуклеотиды с №200 по №206 изменены в результате мутации с образованием последовательности TGTCTAA.5. Вирусная РНК по п.1 или п.2, отличающаяся тем, что дополнительно в 3' U3-области нуклеотид №187 изменен в результате мутации на С и нуклеотид №189 изменен в результате мутации на Т.6. Вирусная РНК по п.1 или п.2, отличающаяся тем, что 3' U3-область имеет нуклеотидную последовательность, соответствующую SEQ ID NO: 1, из которой в результате делеции дополнительно удалены нуклеотиды с №187 по №.202.7. Вирусная РНК по п.1 или п.2, отличающаяся тем, что 3' U3-область имеет или состоит из �

Claims

1. Вирусная РНК, имеющая 5'-область с R-областью и U5-областью из ASLV и расположенной относительно них в 3'-направлении сайт связывания праймера (PBS), сигнал упаковки (Ψ), кассету экспрессии, 3' U3-область и R-область, отличающаяся тем, что 3' U3-область имеет нуклеотидную последовательность, соответствующую SEQ ID NO: 1, в которой в результате делеции удалены по меньшей мере нуклеотиды с №28 по №186 включительно что практически приводит к элиминации промоторной и энхансерной активности 3' U3-области, причем в ее состав не входят никакие нуклеотидные последовательности, которые по меньшей мере частично кодируют вирусные структурные белки или донорный сайт сплайсинга (SD).

2. Вирусная РНК по п.1, отличающийся тем, что на 3' конце последовательности полиаденелирования расположена делеция.

3. Вирусная РНК по п.1, отличающаяся тем, что 3' U3-область имеет нуклеотидную последовательность, соответствующую SEQ ID NO: 1, и нуклеотиды с №200 по №206 дополнительно изменены в результате мутации с образованием частичной последовательности, в которой отсутствует ТАТА-бокс.

4. Вирусная РНК по п.3, отличающаяся тем, что нуклеотиды с №200 по №206 изменены в результате мутации с образованием последовательности TGTCTAA.

5. Вирусная РНК по п.1 или п.2, отличающаяся тем, что дополнительно в 3' U3-области нуклеотид №187 изменен в результате мутации на С и нуклеотид №189 изменен в результате мутации на Т.

6. Вирусная РНК по п.1 или п.2, отличающаяся тем, что 3' U3-область имеет нуклеотидную последовательность, соответствующую SEQ ID NO: 1, из которой в результате делеции дополнительно удалены нуклеотиды с №187 по №.202.

7. Вирусная РНК по п.1 или п.2, отличающаяся тем, что 3' U3-область имеет или состоит из последовательности, соответствующей SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3 или SEQ ID NO: 4.

8. Вирусная РНК по п.1 или п.2, отличающаяся тем, что 3' U3-область, включая 3' R-область, имеет или состоит из последовательности, соответствующей нуклеотидам с №3282 по №3372 SEQ ID NO: 5, последовательности, соответствующей нуклеотидам с №3282 по №3356 SEQ ID NO: 7, или последовательности, соответствующей нуклеотидам с №3282 по №3372 SEQ ID NO: 9.

9. Вирусная РНК по п.1 или п.2, отличающаяся тем, что удаленная в результате делеции последовательность в 3' U3-области заменена путем инсерции нуклеотидной последовательностью, которая не имеет ни промоторной, ни энхансерной последовательностей.

10. Вирусная РНК по п.1 или п.2, отличающаяся тем, что 3' U3-область содержит встроенную нуклеотидную последовательность, которая кодирует miPHK, shPHK, энхансер полиаденилирования, изолятор и/или последовательность, распознаваемую ДНК-рекомбиназой.

11. Вирусная РНК по п.1 или п.2, отличающаяся тем, что кассета экспрессии в направлении от 5'-конца к 3'-концу несет промотор, нуклеотидную последовательность, кодирующую трансген, и PRE.

12. Вирусная РНК по п.1 или п.2, отличающаяся тем, что нуклеотидная последовательность, которая в 5'-направлении примыкает к промотору, в направлении от 5'- к 3'-концу кодирует R-элемент, который примыкает к U5-элементу и сигналу упаковки.

13. Вирусная РНК по п.1 или п.2, отличающаяся тем, что нуклеотидная последовательность, которая расположена в 5'-направлении относительно кассеты экспрессии содержит или состоит из последовательности нуклеотидов с №922 по №1292 SEQ ID NO: 5.

14. Последовательность ДНК, содержащая промоторный элемент, который является функциональным и расположен в 5'-направлении относительно нуклеотидной последовательности, кодирующей вирусную РНК, отличающаяся тем, что нуклеотидная последовательность, которая кодирует вирусную РНК, имеет последовательность по одному из предыдущих пунктов.

15. Последовательность ДНК по п.14, отличающаяся тем, что нуклеотидная последовательность, кодирующая вирусную РНК, имеет 5' R-область и 5' U5-область с последовательностью, соответствующей нуклеотидам с №922 по №1022 SEQ ID NO: 5, а в 3'-направлении относительно нее 3' LTR, который имеет последовательность, соответствующую нуклеотидам с №3282 по №3452 SEQ ID NO: 5, или имеет последовательность, соответствующую нуклеотидам с №3282 по №3436 SEQ ID NO: 7, или имеет последовательность, соответствующую нуклеотидам с 3282 по №3452 SEQ ID NO: 9.

16. Вирусная частица, содержащая оболочечный белок, отличающаяся тем, что частица содержит вирусную РНК по одному из п.п.1-13.

17. Фармацевтическая композиция, предназначенная для применения в генной терапии, отличающаяся присутствием вирусной частицы по п.16.

18. Система для создания ретровирусных частиц с последовательностью ДНК, которая кодирует вирусную РНК, имеющая первую хелперную плазмиду, которая кодирует слитый белок gag-pro-pol, и вторую хелперную плазмиду, которая кодирует оболочечный белок, отличающаяся тем, что вирусная РНК имеет нуклеотидную последовательность по одному из п.п.1-13.

19. Система по п.18, отличающаяся тем, что последовательностью ДНК, кодирующей вирусную РНК, первой хелперной плазмидой и/или второй хелперной плазмидой трансфектируют эукариотическую клетку или их интегрируют в геном эукариотической клетки.

20. Система по одному из п.п.18-19, отличающаяся тем, что первая хелперная плазмида кодирует слитый белок gag-pro-pol и/или вторая хелперная плазмида кодирует вирусный оболочечный белок с использованием кодонов, которые адаптированы к наиболее часто встречающимся кодонам эукариотической клетки, которая их содержит.

21. Система по одному из п.п.18-19, отличающаяся тем, что первая хелперная плазмида кодирует слитый белок gag-pro-pol с помощью нуклеотидной последовательности, которая соответствует нуклеотидам с №1475 по №6291 SEQ ID NO: 14.

22. Способ получения вирусных частиц, заключающийся в том, что экспрессируют слитый белок gag-pro-pol и вирусный оболочечный белок в пакующей клетке, отличающийся тем, что вирусная РНК, которая транскрибируется с последовательности ДНК имеет нуклеотидная последовательность по одному из п.п.1-15.

23. Вирусная частица по п.16, предназначенная для применения в качестве фармацевтической композиции.

24. Вирусная частица по п.23, где фармацевтическая композиция предназначена для применения в качестве лекарственного средства для генетической модификации соматических зрелых клеток, гематопоэтических стволовых клеток или нечеловеческих эмбриональных стволовых клеток.