RU2010123981A - Новый способ отделения и определения вирусной нагрузки в образце панкреатина - Google Patents
Новый способ отделения и определения вирусной нагрузки в образце панкреатина Download PDFInfo
- Publication number
- RU2010123981A RU2010123981A RU2010123981/10A RU2010123981A RU2010123981A RU 2010123981 A RU2010123981 A RU 2010123981A RU 2010123981/10 A RU2010123981/10 A RU 2010123981/10A RU 2010123981 A RU2010123981 A RU 2010123981A RU 2010123981 A RU2010123981 A RU 2010123981A
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- pancreatin
- sample
- viral load
- ultracentrifugation
- gradient
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
- C12Q1/24—Methods of sampling, or inoculating or spreading a sample; Methods of physically isolating an intact microorganisms
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Sampling And Sample Adjustment (AREA)
- Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
1. Способ отделения вирусной нагрузки от образца панкреатина, заключающийся в том, что осуществляют следующие стадии, на которых: ! а) приготавливают жидкий опытный образец панкреатина, пригодный для центрифугирования, из образца панкреатина, не изменяя его вирусной нагрузки; ! б) подвергают по меньшей мере одну определенную часть опытного образца панкреатина, полученного на стадии а) способа, по меньшей мере одному низкоскоростному центрифугированию в условиях, в которых вирусы, характеризующиеся константами седиментации ≥120 S, не образуют дебрис; ! в) отбрасывают все твердые отложения, которые необязательно образуются на стадии б) способа во время низкоскоростного центрифугирования, и сохраняют супернатант опытного образца панкреатина; ! г) подвергают по меньшей мере одну определенную часть супернатанта опытного образца панкреатина, полученного на стадии в) способа, первому ультрацентрифугированию в среде со ступенчатым градиентом, где продолжительность первого ультрацентрифугирования и относительную центробежную силу для первого центрифугирования выбирают таким образом, чтобы вирусная нагрузка количественно транспортировалась из супернатанта опытного образца панкреатина в первую целевую фракцию, находящуюся выше пограничного слоя или в пограничном слое между расположенным сверху компонентом градиента с наименьшей концентрацией и расположенным снизу компонентом градиента со следующей более высокой концентрацией, и количественно выделяют первую целевую фракцию, необязательно включающую любой дебрис, присутствующий после центрифугирования, которая содержит вирусную нагрузку, из супернат�
Claims (21)
1. Способ отделения вирусной нагрузки от образца панкреатина, заключающийся в том, что осуществляют следующие стадии, на которых:
а) приготавливают жидкий опытный образец панкреатина, пригодный для центрифугирования, из образца панкреатина, не изменяя его вирусной нагрузки;
б) подвергают по меньшей мере одну определенную часть опытного образца панкреатина, полученного на стадии а) способа, по меньшей мере одному низкоскоростному центрифугированию в условиях, в которых вирусы, характеризующиеся константами седиментации ≥120 S, не образуют дебрис;
в) отбрасывают все твердые отложения, которые необязательно образуются на стадии б) способа во время низкоскоростного центрифугирования, и сохраняют супернатант опытного образца панкреатина;
г) подвергают по меньшей мере одну определенную часть супернатанта опытного образца панкреатина, полученного на стадии в) способа, первому ультрацентрифугированию в среде со ступенчатым градиентом, где продолжительность первого ультрацентрифугирования и относительную центробежную силу для первого центрифугирования выбирают таким образом, чтобы вирусная нагрузка количественно транспортировалась из супернатанта опытного образца панкреатина в первую целевую фракцию, находящуюся выше пограничного слоя или в пограничном слое между расположенным сверху компонентом градиента с наименьшей концентрацией и расположенным снизу компонентом градиента со следующей более высокой концентрацией, и количественно выделяют первую целевую фракцию, необязательно включающую любой дебрис, присутствующий после центрифугирования, которая содержит вирусную нагрузку, из супернатанта опытного образца панкреатина;
д) подвергают первую целевую фракцию, полученную на стадии г) способа, второму ультрацентрифугированию, где второе ультрацентрифугирование осуществляют при относительной центробежной силе, превышающей относительную центробежную силу при первом ультрацентрифугировании, в градиентной среде того же типа, который используют для первого ультрацентрифугирования, где градиентная среда представляет собой градиентную среду с более высокой концентрацией по сравнению с концентрацией компонента градиента с наименьшей концентрацией в первой целевой фракции, и
е) получают вторую целевую фракцию, содержащую вирусную нагрузку, в результате отбрасывания верхних 75 об.% или более жидкости верхнего слоя, соответствующего первой целевой фракции, и получают нижнюю фракцию, соответствующую нижним 25 об.% или менее жидкости верхнего слоя, и полный слой градиентной среды с более высокой концентрацией за исключением любого дебриса, который необязательно присутствует после центрифугирования.
2. Способ по п.1, в котором после осуществления стадии е) способа дополнительно осуществляют стадию ж) способа, на которой количественно определяют вирусную нагрузку в образце панкреатина путем определения титра вирусной инфекции во второй целевой фракции, содержащей вирусную нагрузку.
3. Способ по п.2, в котором перед осуществлением количественного определения вирусной нагрузки разведенную или неразведенную вторую целевую фракцию фильтруют через микрофильтр.
4. Способ по п.1, в котором на стадии а) способа приготавливают суспензию опытного образца панкреатина путем объединения образца панкреатина со средой для клеточной культуры, пригодной для линии клеток, которую применяют для культивирования подлежащего исследованию типа вируса, или с соляным раствором и с одним или несколькими антибиотиками.
5. Способ по п.4, в котором по меньшей мере одну из стадий а)-е) осуществляют при охлаждении до температуры 0-15°С.
6. Способ по п.1, в котором низкоскоростное центрифугирование на стадии б) способа в каждом случае осуществляют при относительной центробежной силе менее 15000×g.
7. Способ по п.1, в котором низкоскоростное центрифугирование на стадии б) способа в каждом случае осуществляют при относительной центробежной силе, составляющей 8000-15000×g.
8. Способ по п.1, в котором низкоскоростное центрифугирование на стадии б) способа осуществляют в течение по меньшей мере 5 мин.
9. Способ по п.1, в котором первое ультрацентрифугирование на стадии г) способа осуществляют в течение по меньшей мере 9 ч.
10. Способ по п.1, в котором первое ультрацентрифугирование на стадии г) способа осуществляют при относительной центробежной силе менее 150000×g.
11. Способ по п.1, в котором второе ультрацентрифугирование на стадии д) способа осуществляют в течение по меньшей мере 2 ч.
12. Способ по п.11, в котором второе ультрацентрифугирование на стадии г) способа осуществляют при относительной центробежной силе более 150000×g.
13. Способ по п.1, в котором среда со ступенчатым градиентом, которую применяют на стадии г) способа, представляет собой ступенчатый двухфазный градиент сахарозы.
14. Способ по п.13, в котором среда со ступенчатым градиентом представляет собой градиент, состоящий из 50% (мас./об.) забуференного раствора сахарозы и 20% (мас./об.) забуференного раствора сахарозы.
15. Способ по п.1, в котором градиентная среда с более высокой концентрацией, применяемая на стадии д) способа, представляет собой градиентную среду, содержащую 50% (мас./об.) забуференного раствора сахарозы.
16. Способ по п.1, в котором образец панкреатина представляет собой образец свиного панкреатина.
17. Способ по п.1, в котором вирусная нагрузка в опытном образце панкреатина представляет собой ротавирус А коров, вирус энцефаломиокардита, цирковирус свиней, парвовирус свиней, ротавирус А свиней, тешовирус свиней, вирус гепатита Е свиней и/или вирус заболевания свиней с везикулярным синдромом.
18. Способ по одному из предыдущих пунктов, в котором образец панкреатина, применяемый в качестве исходного продукта, содержит по меньшей мере 5 г панкреатина.
19. Выделенная вторая целевая фракция, полученная способом по п.1.
20. Выделенная вторая целевая фракция по п.19, где на стадии а) способа по п.1 получают опытный образец панкреатина в виде суспензии опытного образца панкреатина путем объединения образца панкреатина со средой для культуры клеток, пригодной для линии клеток которую применяют для культивирования предназначенного для исследования типа вируса, или с соляным раствором и с одним или несколькими антибиотиками.
21. Выделенная вторая целевая фракция по п.20, в которой физиологический раствор представляет собой забуференный фосфатом физиологический раствор.
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US98832307P | 2007-11-15 | 2007-11-15 | |
US60/988,323 | 2007-11-15 | ||
EP07120740.1 | 2007-11-15 | ||
EP07120740 | 2007-11-15 | ||
PCT/EP2008/065586 WO2009063065A1 (en) | 2007-11-15 | 2008-11-14 | Novel process for separating and determining the viral load in a pancreatin sample |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2010123981A true RU2010123981A (ru) | 2011-12-20 |
RU2491341C2 RU2491341C2 (ru) | 2013-08-27 |
Family
ID=39030822
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2010123981/10A RU2491341C2 (ru) | 2007-11-15 | 2008-11-14 | Новый способ отделения и определения вирусной нагрузки в образце панкреатина |
Country Status (11)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP2222843B1 (ru) |
JP (1) | JP5473929B2 (ru) |
KR (1) | KR101562682B1 (ru) |
CN (1) | CN101821389B (ru) |
AU (1) | AU2008322853B2 (ru) |
BR (1) | BRPI0820628B1 (ru) |
CA (1) | CA2701340C (ru) |
MX (1) | MX2010003707A (ru) |
RU (1) | RU2491341C2 (ru) |
UA (1) | UA98820C2 (ru) |
WO (1) | WO2009063065A1 (ru) |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
PL3298139T3 (pl) | 2015-05-19 | 2022-01-31 | Scientific Protein Laboratories Llc | Sposób zmniejszenia lub inaktywacji zawartości wirusów i drobnoustrojów w sposobach wytwarzania pankreatyny |
IT201600079328A1 (it) * | 2016-07-28 | 2018-01-28 | Altergon Sa | Metodo migliorato per la decontaminazione di materiale biologico mediante partizione e inattivazione |
CN111735673A (zh) * | 2019-03-25 | 2020-10-02 | 广州医科大学附属第一医院 | 针对病原菌检测的液基薄层制片及其应用 |
CN114317465A (zh) * | 2021-12-28 | 2022-04-12 | 深圳康泰生物制品股份有限公司 | 蔗糖梯度离心溶液及其制备方法、流感裂解病毒疫苗制备工艺及病毒纯化工艺 |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3956483A (en) * | 1968-10-24 | 1976-05-11 | Wilson Pharmaceutical & Chemical Corporation | Preparing pancreatin |
CA2198317C (en) * | 1997-02-24 | 2003-01-07 | Mouhsine El Abboudi | Method for preparing pancreatin which contains low amounts of residual organic solvent and product thereof |
RU2205652C1 (ru) * | 2001-10-18 | 2003-06-10 | Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии СО РАМН | Способ выделения арбовирусов, в частности клещевого энцефалита |
ITMI20040891A1 (it) * | 2004-05-04 | 2004-08-04 | Ibsa Inst Biochimique Sa | Nuovo metodo per la partizione ed inattivazione di contaminanti virali e prionici |
RU2413532C2 (ru) * | 2005-07-29 | 2011-03-10 | Зольвай Фармасьютиклз Гмбх | Способ получения стерилизованного порошкообразного панкреатина |
CA2653127C (en) * | 2006-05-22 | 2015-09-15 | Solvay Pharmaceuticals Gmbh | Process for separating and determining the viral load in a pancreatin sample |
-
2008
- 2008-11-14 UA UAA201007033A patent/UA98820C2/ru unknown
- 2008-11-14 JP JP2010533598A patent/JP5473929B2/ja active Active
- 2008-11-14 RU RU2010123981/10A patent/RU2491341C2/ru active
- 2008-11-14 CA CA2701340A patent/CA2701340C/en active Active
- 2008-11-14 EP EP08849580.9A patent/EP2222843B1/en active Active
- 2008-11-14 CN CN2008801114680A patent/CN101821389B/zh active Active
- 2008-11-14 WO PCT/EP2008/065586 patent/WO2009063065A1/en active Application Filing
- 2008-11-14 MX MX2010003707A patent/MX2010003707A/es active IP Right Grant
- 2008-11-14 BR BRPI0820628-7A patent/BRPI0820628B1/pt active IP Right Grant
- 2008-11-14 AU AU2008322853A patent/AU2008322853B2/en active Active
- 2008-11-14 KR KR1020107007681A patent/KR101562682B1/ko active IP Right Grant
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
UA98820C2 (ru) | 2012-06-25 |
EP2222843A1 (en) | 2010-09-01 |
RU2491341C2 (ru) | 2013-08-27 |
WO2009063065A1 (en) | 2009-05-22 |
KR101562682B1 (ko) | 2015-10-22 |
BRPI0820628A2 (pt) | 2020-08-11 |
AU2008322853A1 (en) | 2009-05-22 |
MX2010003707A (es) | 2010-04-21 |
CA2701340C (en) | 2016-06-28 |
KR20100082777A (ko) | 2010-07-19 |
EP2222843B1 (en) | 2016-03-23 |
BRPI0820628B1 (pt) | 2021-09-08 |
CA2701340A1 (en) | 2009-05-22 |
CN101821389A (zh) | 2010-09-01 |
JP2011502525A (ja) | 2011-01-27 |
AU2008322853B2 (en) | 2014-03-20 |
JP5473929B2 (ja) | 2014-04-16 |
CN101821389B (zh) | 2012-05-30 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2008150623A (ru) | Способ выделения и определения вирусной нагрузки в образце панкреатина | |
US11649439B2 (en) | Biologic composition and method of manufacture | |
AR033993A1 (es) | Metodo para producir reovirus infeccioso y de mamifero, y composicion de reovirus | |
RU2010123981A (ru) | Новый способ отделения и определения вирусной нагрузки в образце панкреатина | |
Peyret | A protocol for the gentle purification of virus-like particles produced in plants | |
US20220403325A1 (en) | Particulate lyophilized platelet lysate compositions | |
JP5763894B2 (ja) | 細胞の分離方法 | |
AU677224B2 (en) | Preserved, non-infectious control cells for use in the identification of a disease through blood testing | |
CN112159796A (zh) | 一种人脐带来源的间充质干细胞原代分离的方法及应用 | |
CN102242173B (zh) | 一种石斑鱼虹彩病毒囊膜蛋白的提取方法 | |
McLaughlin et al. | Replication of bluetongue virus and epizootic hemorrhagic disease virus in pulmonary artery endothelial cells obtained from cattle, sheep, and deer | |
JP7317464B2 (ja) | マイコプラズマの有無の検査方法 | |
JPWO2015129764A1 (ja) | 目的細胞の純度が高い細胞集団の製造方法 | |
Akkina | Analysis of immunogenic determinants of bovine viral diarrhea virus. | |
US20160222357A1 (en) | Purification method for Embryo - derived Infectious Bronchitis Virus (lBV) | |
JP4684533B2 (ja) | 下層コロイド媒体からのフローティングにより生物サンプルを回収または除去する多段階法 | |
Marfin et al. | Colorado tick fever and related Coltivirus infections | |
CN103451157A (zh) | 一种从混合病毒样品中分离新型鸭呼肠孤病毒的方法 | |
Ikegami et al. | Inhibition of host and viral protein syntheses during infection at the nonpermissive temperature with ts mutants of reovirus 3 | |
Mizoguchi et al. | Hemagglutination and antigenic comparison of rabbit hemorrhagic disease virus | |
CN112611867A (zh) | 一种csfv的ifa抗体检测方法 | |
Lewanczuk et al. | Purification and stability of epizootic hemorrhagic disease virus | |
Wellemans | Ovine and Caprine Respiratory Syncytial | |
RU2005137475A (ru) | Мастер панели сывороток, содержащих и не содержащих hbsag и способ ее получения | |
RU2004116739A (ru) | Способ диагностики атеротромботического подтипа ишемического инсульта |