RU2006105228A

RU2006105228A - Биотрансплантат, содержащий ядросодержащие клетки костного мозга, в том числе преддифференцированные в эндотелиальном и кардиомиоцитарном направлении, способ его получения (варианты) и способ лечения сердечной недостаточности (варианты)

Info

Publication number: RU2006105228A
Application number: RU2006105228/15A
Authority: RU
Inventors: Дмитрий Вадимович Гольдштейн (RU); Дмитрий Вадимович Гольдштейн; Андрей Витальевич Макаров (RU); Андрей Витальевич Макаров; Алла Анатольевна Ржанинова (RU); Алла Анатольевна Ржанинова; Тимур Хайсамудинович Фатхудинов (RU); Тимур Хайсамудинович Фатхудинов; Светлана Николаевна Горностаева (RU); Светлана Николаевна Горностаева; Алексей Вадимович Волков (RU); Алексей Вадимович Волков
Original assignee: ЗАО "РеМе Тэкс" (RU); ЗАО "РеМе Тэкс"
Priority date: 2006-02-21
Filing date: 2006-02-21
Publication date: 2007-09-10
Also published as: RU2314816C2

Claims

1. Биотрансплантат для лечения хронической сердечной недостаточности, характеризующийся тем, что он содержит ядросодержащие клетки костного мозга, полученного у взрослого донора, в том числе для аутологичной трансплантации, или из плодов на сроках гестации 17-20 недель.

2. Способ получения биотрансплантата для лечения хронической сердечной недостаточности, характеризующийся тем, что аспират костно-мозговой взвеси наслаивают на разделяющий градиент Ficoll-Hypaque, центрифугируют, интерфазу с ядросодержащими клетками собирают и ресуспендируют в гипотоническом буферном растворе для элиминации эритроцитов, центрифугируют, гемолизированный супернатант удаляют, далее клетки ресуспендируют в ростовой среде IMDM (Gibco, Grand Island), содержащей 0,58 г/л глютамина, 10% FBS (HyClone, USA), инсулин 0,4 мкМ, гентамицин 50 мкг/мл, гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор (GM-CSF) 25 нг/мл и интерлейкин-3 (IL-3) 10 нг/мл и HEPES 25 mM и культивируют из расчета 10⁶ клеток на см² при 37°С в атмосфере, содержащей 5% CO₂ и при 95% влажности, 7 суток, затем для повышения эффективности выделения ядросодержащих элементов, клеток CD 34+/CD45+, КОЕ-ГМ, КОЕ-ГЭММ 10% гидроксиэтилкрахмал (ГЭК) смешивают с пуповинной/плацентарной кровью в соотношении 1:1 и проводят седиментацию эритроцитов в течение 25 мин, далее супернатант собирают, а оставшуюся клеточную взвесь подвергают повторной седиментации, супернатант, выделенный после осаждения эритроцитов, дважды отмывают в среде RPMI 1640 путем центрифугирования с частотой оборотов 1500/мин в течение 10 мин и клеточный осадок отделяют.

3. Биотрансплантат для лечения хронической сердечной недостаточности, характеризующийся тем, что он содержит ядросодержащие клетки костного мозга, преддифференцированные в эндотелиальном направлении.

4. Способ получения биотрансплантата для лечения хронической сердечной недостаточности, характеризующийся тем, что ядросодержащие клетки костного мозга ресуспендируют в ростовой среде EndoCult^tm и высевают на 6-луночные планшеты, обработанные фибронектином по 5 миллионов на лунку, через 48 ч неприкрепившиеся клетки собирают и переносят в 24-луночный планшет в концентрации 0,5 миллиона клеток на лунку, через 3 дня после образования колоний клеток эндотелиальной линии ядросодержащие клетки костного мозга суспендируют в среде Х vivo-15 (BioWhittaker), содержащей дополнительно 1 нг\мл hVEGF, 0,1 мМ atorvastatin (Pfizer) и 20% собственной сыворотки пациента и высевают в плотности 6,4·10⁵ на 1 мм² на чашки, покрытые фибронектином, через 3 дня культивирования клетки снимают 0,5 мМ ЭДТА, отмывают дважды и ресуспендируют в конечном объеме среды X-vivo 10.

5. Биотрансплантат для лечения хронической сердечной недостаточности, характеризующийся тем, что он содержит ядросодержащие клетки костного мозга, преддифференцированные в кардиомиоцитарном направлении.

6. Способ получения биотрансплантата для лечения хронической сердечной недостаточности, характеризующийся тем, что на третьи сутки культивирования в среду вносят 5-азацитидин в концентрации 6 мкмоль/л, сутки инкубируют, далее среду заменяют на среду, содержащую 10% бычьей эмбриональной сыворотки, инсулин 0,4 мкМ/л, основной фактор роста фибробластов (bFGF) 20 нг/мл, культивируют 4-6 недель до кардиомиогенной дифференцировки.

7. Способ лечения хронической сердечной недостаточности, характеризующийся тем, что биотрансплантат вводят в нативную и/или стенозированную коронарную артерию и/или аортокоронарный шунт в виде суспензии.

8. Способ по п.7, где биотрансплантат вводят внутривенно капельно.

9. Способ по п.7, где ядросодержащие клетки костного мозга, в том числе преддифференцированные в эндотелиальном и кардиогенном направлении, вводят в физиологическом растворе или инфуколе.

10. Способ лечения хронической сердечной недостаточности, характеризующийся тем, что биотрансплантат вводят интрамиокардиально во время традиционных хирургических вмешательствах на открытом сердце, при этом клеточный биотрансплантат вводят на заключительном этапе операции путем множественных инъекций (30-50) по 0,1-0,2 мл клеточной суспензии.

11. Способ по п.10, где ядросодержащие клетки костного мозга, в том числе преддифференцированные в эндотелиальном и кардиогенном направлении, вводят в физиологическом растворе или инфуколе.