RU2005116188A - Способ получения лекарственного средства для лечения миопии и заболеваний склеральной оболочки глаза, а также витреоретинопатии - Google Patents

Claims (1)

1. Способ получения лекарственного средства для лечения миопии и заболеваний склеральной оболочки глаза, а также витреоретинопатий, заключающийся в выделении из свежеэнуклеированных глаз крупного рогатого скота склеральной оболочки глаза, промывании ее в солевом водном физиологическом растворе, выдержку ткани склеры в солевом водном растворе, центрифугировании полученного раствора тканевого экстракта, осуществлении сбора надосадочной жидкости и разделении ее путем растворения в 100%-ном растворе сульфата аммония, дальнейшем фильтровании раствора через фильтровальную бумагу и диализовали его в мешках из целлюлозы против дистиллированной воды до полного удаления ионов сульфата аммония, полученный отдиализованный раствор далее разделяли методом изоэлектрофокусирования, собирали фракции кислых белков, объединяли их, диализовали до полного удаления сахарозы и амфолинов, далее полученный водный раствор фракционировали с помощью метода электрофореза, отличающийся тем, что выделяют ткань центральной области склеральной оболочки глаза путем удаления переднего сектора глаза, включая роговицу, переднюю камеру глаза, затем удаление стекловидного тела, сетчатки, пигментного эпителия сетчатки и сосудистой оболочки глаза, оставляя одну склеральную оболочку, дальнейшего удаления с внешней поверхности склеры глаз жировой и мышечной ткани, далее разрезают ткань склеры на крупные куски при температуре 20-25°С и давлении 730-760 мм рт.ст., центрифугируют тканевой экстракт при температуре 20-25°С и давлении 730-760 мм рт.ст., после изоэлектрофокусирования собирают фракции кислых белков (интервал рН 1,0-3,0), объединяют их, диализуют до полного удаления сахарозы и амфолинов в течение 10-14 дней при Т=4-7°С, Р атм, после изоэлектрофокусирования собирают фракции кислых белков (интервал pH 1,0-3,0), объединяют их, диализуют до полного удаления сахарозы и амфолинов в течение 10-14 дней при Т=4-7°С, Р атм, далее полученный водный раствор белка лиофильно высушивают на лиофильной сушке до получения сухого вещества, лиофилизат, представляющий собой белый хлопьевидный мелкодисперсный порошок далее фракционируют с помощью метода электрофореза в нативных условиях в 7,5-15%-ном полиакриламидном геле, собирают низкомолекулярную фракцию, содержащую регуляторный пептид, путем элюирования деионизованной водой из геля полученную фракцию диализуют против деионизованной воды в диализных мешках, отдиализованный белковый раствор далее повторно высушивают лиофильно до получения белого хлопьевидного мелкодисперсного порошка, из препарата регуляторного пептида, полученного после электрофореза, приготавливают исходный раствор пептида, растворяя сухой лиофилизованный порошок регуляторного пептида в физиологическом водно-солевом растворе (0,15 M NaCl, 1 мМ CaCl₂, 5 мМ KCl, 8,75 г NaCl, 0,111 г CaCl₂, 0,4 г KCl на 1 л деионизованной воды), определяют концентрацию регуляторного пептида в исходном растворе с помощью колориметрического метода с использованием бицинхониновой кислоты, приготавливают растворы регуляторного пептида в концентрациях, соответствующих 10^-1-10^-8 мг/мл, путем разбавления в физиологическом растворе в 10 раз исходного раствора при постоянном встряхивании после каждого разведения в 100-мл мерную колбу вносят 10 мл раствора регуляторного пептида в концентрации, соответствующей 10^-7 10^-8 мг/мл, и далее прибавляют физиологический раствор до объема 100 мл и перемешивают.