RU2003128421A - Новые гены, кодирующие новые протеолитические ферменты - Google Patents

Claims (28)

1. Выделенный полинуклеотид, гибридизуемый с полинуклеотидом, соответствующим последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO:1 - SEQ ID NO: 57, или последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO:58 - SEQ ID NO:114.

2. Выделенный полинуклеотид по п.1, гибридизуемый в условиях высокой жесткости с полинуклеотидом, соответствующим последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO:1 - SEQ ID NO:57, или последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO:58 - SEQ ID NO:114.

3. Выделенный полинуклеотид по п.1 или 2, полученный из нитчатых грибов.

4. Выделенный полинуклеотид по п.3, полученный из A.niger.

5. Выделенный полинуклеотид, кодирующий полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, соответствующую последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO:115 - SEQ ID NO:171, или его функциональные эквиваленты.

6. Выделенный полинуклеотид, кодирующий, по крайней мере, один функциональный домен полипептида, соответствующего последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO:115 - SEQ ID NO:171, или его функциональные эквиваленты.

7. Выделенный полинуклеотид, содержащий нуклеотидную последовательность, соответствующую последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO:1 - SEQ ID NO: 57, или последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO:58 - SEQ ID NO:114, или его функциональные эквиваленты.

8. Выделенный полинуклеотид, соответствующий последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO:1 - SEQ ID NO:57, или последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO:58 - SEQ ID NO:114.

9. Вектор, содержащий полинуклеотидную последовательность по любому из пп.1-8.

10. Вектор по п.9, отличающийся тем, что указанная полинуклеотидная последовательность по любому из пп.1-8, функционально присоединена к регуляторным последовательностям, подходящим для экспрессии указанной полинуклеотидной последовательности в подходящей клетке-хозяине.

11. Вектор по п.10, отличающийся тем, что указанной подходящей клеткой-хозяином являются нитчатые грибы.

12. Способ получения полинуклеотида по любому из пп.1-8 или вектора по любому из пп.9-11, включающий стадии культивирования клетки-хозяина, трансформированной указанным полинуклеотидом или указанным вектором, и выделения указанного полинуклеотида или указанного вектора из указанной клетки-хозяина.

13. Выделенный полипептид, соответствующий последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO:115 - SEQ ID NO:171, или его функциональные эквиваленты.

14. Выделенный полипептид по п.13, полученный из Aspergillus niger.

15. Выделенный полипептид, полученный путем экспрессии полинуклеотида по любому из пп.1-8 или вектора по любому из пп.9-11 в подходящей клетке-хозяине, например, в Aspergillus niger.

16. Рекомбинантная протеаза, содержащая функциональный домен полипептида протеазы.

17. Способ получения полипептида по любому из пп.13-16, включающий стадии трансформации подходящей клетки-хозяина выделенным полинуклеотидом по любому из пп.1-8 или вектором по любому из пп.9-11, культивирования указанной клетки в условиях, подходящих для экспрессии указанного полинуклеотида, и, необязательно, очистку кодируемого полипептида из указанной клетки или культуральной среды.

18. Рекомбинантная клетка-хозяин, включающая полинуклеотид по любому из пп.1-8 или вектор по любому из пп.9-11.

19. Рекомбинантная клетка-хозяин, экспрессирующая полипептид по любому из пп.13-16.

20. Рекомбинантная клетка-хозяин, содержащая полинуклеотид, кодирующий функционально инактивированный полипептид протеазы.

21. Рекомбинантная клетка-хозяин, в которой полинуклеотид, кодирующий полипептид протеазы, является, по крайней мере, частично делетированным.

22. Рекомбинантная клетка-хозяин по любому из пп.18-21, отличающаяся тем, что указанная клетка-хозяин происходит от вида Aspergillus, например, A.niger.

23. Рекомбинантная клетка-хозяин, которая является функционально дефицитной по протеазе, получаемая способом, включающим стадии:

a. in vitro-мутагенеза полинуклеотида по любому из пп.1-11,

b. трансформации клетки-хозяина, содержащей эндогенный ген, включающий полинуклеотидную последовательность, гибридизуемую с указанным мутагенизированным полинуклеотидом, полученным на стадии (а),

с. отбора и выделения рекомбинантных клеток-хозяев, в которых указанный эндогенный ген заменен мутагенизированным полинуклеотидом, полученным на стадии (а).

24. Очищенное антитело, взаимодействующее с полипептидом по любому из пп.13-16.

25. Гибридный белок, содержащий полипептидную последовательность по любому из пп.13-16.

26. Способ диагностики Aspergillus-инфекции в организме, включающий стадии:

а. выделения биологического образца из указанного организма, который, как предполагается, инфицирован Aspergillus,

b. выделения нуклеиновой кислоты из указанного образца,

с. определения, содержит ли указанная выделенная нуклеиновая кислота полинуклеотиды, гибридизуемые с полинуклеотидом по любому из пп.1-8.

27. Способ по п.26, отличающийся тем, что стадия (с) дополнительно включает амплификацию указанной выделенной нуклеиновой кислоты, осуществляемую предпочтительно посредством полимеразной цепной реакции.

28. Способ диагностики Aspergillus-инфекции в организме, включающий стадии:

а. выделения биологического образца из указанного организма, который, как предполагается, инфицирован Aspergillus,

b. взаимодействия указанного биологического образца с антителом по п.24,

с. детекции образования иммунокомплексов.