RU2002100084A - Гуалуронидаза, выделяемая из Hirudinaria manillensis, выделение, очистка и рекомбинантный метод получения - Google Patents
Гуалуронидаза, выделяемая из Hirudinaria manillensis, выделение, очистка и рекомбинантный метод полученияInfo
- Publication number
- RU2002100084A RU2002100084A RU2002100084/13A RU2002100084A RU2002100084A RU 2002100084 A RU2002100084 A RU 2002100084A RU 2002100084/13 A RU2002100084/13 A RU 2002100084/13A RU 2002100084 A RU2002100084 A RU 2002100084A RU 2002100084 A RU2002100084 A RU 2002100084A
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- protein
- gualuronidase
- seq
- molecular weight
- activity
- Prior art date
Links
- 241000500851 Poecilobdella manillensis Species 0.000 title claims 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 title claims 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 title claims 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims 16
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims 16
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims 4
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 claims 4
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 3
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims 3
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 claims 3
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 claims 3
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 claims 3
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 claims 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims 3
- 241000545744 Hirudinea Species 0.000 claims 2
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 claims 2
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 claims 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 2
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 claims 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims 2
- 102000035122 glycosylated proteins Human genes 0.000 claims 2
- 108091005608 glycosylated proteins Proteins 0.000 claims 2
- 238000000034 method Methods 0.000 claims 2
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 claims 1
- 108010062580 Concanavalin A Proteins 0.000 claims 1
- 208000021908 Myocardial disease Diseases 0.000 claims 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 claims 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 claims 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 claims 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims 1
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 claims 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 claims 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims 1
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 claims 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 claims 1
- 238000004191 hydrophobic interaction chromatography Methods 0.000 claims 1
- 230000002107 myocardial effect Effects 0.000 claims 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims 1
Claims (20)
1. Очищенный протеин, выделяемый из пиявок вида Hirudinaria manillensis, имеющий биологическую активность гуалуронидазы, на активность которого не оказывает влияния гепарин, отличающийся тем, что он имеет молекулярный вес 53-60 в зависимости от гликозилации.
2. Гликозилированный протеин по п.1, имеющий молекулярный вес 58 (±2).
3. Негликозилированный протеин по п.1, имеющий молекулярный вес 54 (±2).
4. Протеин по любому из пп.1-3, имеющий изоэлектрическую точку 7,2-8,0.
5. Протеин по любому из пп.1-4, имеющий аминокислотную последовательность, приведенную на фиг.7 и в SEQ ID No. 1.
6. Протеин по пп.1-5, имеющий специфическую энзиматаческую активность >100 кЕ/мг протеина.
7. Способ выделения и очистки протеина по в пп.1-6, который включает следующие стадии: (i) гомогенизация голов пиявок вида Hirudinaria manillensis с кислотным буфером и центрифугирование, (ii) осаждение сульфатом аммония верхнего слоя по стадии (i), (iii) катионобменная хроматография, (iv) конканавалин А колоночная хроматография, (v) хроматография с гидрофобным взаимодействием, (vi) колоночная хроматография на матрицах, покрытых фрагментами гуалуроновой кислоты, (vii) гельпроникающая хроматография, и необязательно (viii) энзиматическая или химическаядециклизация очищенного протеина.
8. Протеин, имеющий биологическую активность гуалуронидазы, на активность которого не оказывает влияния гепарин, и имеющий молекулярный вес 53-60, в зависимости от гликозилации, который можно получить по стадиям метода по п.7.
9. Протеин по п.8, имеющий специфическую энзиматическую активность >100 кЕ/мг протеина.
10. Последовательность ДНК, кодирующая протеин по пп.1 и 9.
11. Последовательность ДНК, кодирующая протеин по п.8, которая содержит какую-либо нуклеотидную последовательность, представленную на фиг.8 (SEQ. ID No. 2), фиг.9 (SEQ. ID No. 4) и фиг.10 (SEQ ID No. 6).
12. Рекомбинантный протеин, имеющий биологическую активность гуалуронидазы, кодируемый какой-либо из последовательностей ДНК по п.11.
13. Рекомбинантный протеин с биологической активностью гуалуронидазы и молекулярным весом 55-59, в зависимости от гликозилации, имеющий какую-либо аминокислотную последовательность, представленную на фиг.8, 9 и 10 (SEQ. ID №№ 3, 5, 7), или последовательность, которая гомологична упомянутым последовательностям по меньшей мере на 80%.
14. Вектор экспрессии, который включает последовательность ДНК по п.10 или 11.
15. Клетка-хозяин, пригодная для экспрессии протеина по п.12 или 13, трансформированная вектором по п.14.
16. Протеин по какому-либо из пп.1-6, 8, 9, 12 и 13 в качестве медикамента.
17. Фармацевтическая композиция, включающая, протеин по п.16 и фармацевтически приемлемый дилюэнт, носитель или эксципиент для него.
18. Фармацевтическая композиция, включающая дополнительно фармакологически активное соединение.
19. Фармацевтическая композиция по п.18, в которой фармакологически активным соединением является гепарин.
20. Применение протеина по какому-либо из пп.1-6, 8, 9, 12 и 13 в производстве медикаментов для лечения миокардических, кардиоваскулярных и тромботических расстройств и злокачественных новообразований.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP99111468.7 | 1999-06-12 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2002100084A true RU2002100084A (ru) | 2003-08-10 |
Family
ID=
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU95113418A (ru) | Полипептиды, способы получения, днк, вектор, клетка, применение полипептида, фармацевтические композиции | |
| US5401651A (en) | DNA encoding ENA-78, a neutrophil activating factor | |
| KR960703433A (ko) | 증가된 생물학적 활성을 갖는 끝이 잘린 케라틴세포성장인자(kgf) (a truncated keratinocyte growth factor(kgf) having increased biological activity) | |
| EP3428182A2 (en) | Anti-inflammatory peptides and composition comprising the same | |
| CA2067744A1 (en) | The human c3b/c4b receptor (cr1) | |
| US6905676B2 (en) | Amino-terminally truncated MCP-2 as chemokine antagonists | |
| CA2263889A1 (en) | P-selectin ligand proteins | |
| WO2002020766A3 (en) | G-csf analog compositions and methods | |
| JPH04504105A (ja) | フォリスタチンおよびその精製法 | |
| KR970705405A (ko) | 사람 케모킨 폴리펩타이드(Human Chemokine Polypeptides) | |
| JP2004531242A5 (ru) | ||
| EP1323730B1 (en) | Novel polypeptides and anti-hiv drugs containing the same | |
| US5599559A (en) | Calcium channel blocking polypeptide from agelenopsis aperta and therapeutic methods employing it | |
| Proost et al. | Chemical synthesis, purification and folding of the human monocyte chemotactic proteins MCP-2 and MCP-3 into biologically active chemokines | |
| CA2423616A1 (en) | Chemokine mutants in the treatment of multiple sclerosis | |
| CA2202519A1 (en) | Cloning, expression and characterization of a new form of phosphatidylinositol-3-kinase | |
| RU97105821A (ru) | Способ производства модифицированного ингибитора индуцированной коллагеном агрегации тромбоцитов паллидипина | |
| CN1036934C (zh) | 具有改善稳定性的异水蛭素的制备方法 | |
| RU2002100084A (ru) | Гуалуронидаза, выделяемая из Hirudinaria manillensis, выделение, очистка и рекомбинантный метод получения | |
| EP0240224A2 (en) | An alpha interferon analogue | |
| CA2004764C (en) | Ancrod proteins, their preparation and use | |
| US6277822B1 (en) | Family of peptides known as xenoxins | |
| US5627154A (en) | Calcium channel blocking polypeptides from Heteropoda venatoria | |
| JP2008518622A5 (ru) | ||
| KR0160934B1 (ko) | 효모에서 봉입체로 발현된 재조합 인 과립구 콜로니 자극인자의 정제방법 |