RU188424U1 - Дозированная форма для выделения днк - Google Patents
Дозированная форма для выделения днк Download PDFInfo
- Publication number
- RU188424U1 RU188424U1 RU2018128273U RU2018128273U RU188424U1 RU 188424 U1 RU188424 U1 RU 188424U1 RU 2018128273 U RU2018128273 U RU 2018128273U RU 2018128273 U RU2018128273 U RU 2018128273U RU 188424 U1 RU188424 U1 RU 188424U1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- dosage form
- urea
- silicon dioxide
- sodium chloride
- mixture
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M3/00—Tissue, human, animal or plant cell, or virus culture apparatus
- C12M3/02—Tissue, human, animal or plant cell, or virus culture apparatus with means providing suspensions
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
- C12N15/1003—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Virology (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Полезная модель относится к медицине и биологии и предназначена для использования при производстве наборов для выделения ДНК, применяемых при проведении молекулярно-генетических исследований. Дозированная форма для выделения ДНК включает ядро, содержащее совместно спрессованные мочевину, натрия хлорид и диоксид кремния, а также сплошную оболочку, состоящую, по меньшей мере, из одного гидрофобного ингредиента, выбранного из ряда: парафин и воск, и выполнена в виде глобулы или таблетки, при этом глобула имеет предпочтительный диаметр 2,0-4,0 мм, а таблетка имеет предпочтительный диаметр 2,0-4,0 мм и предпочтительную толщину 2,0-4,0 мм, причем содержание мочевины, натрия хлорида и диоксида кремния в ядре составляет, мас. %: мочевина - 67,5-80,0, натрия хлорид - 10,0-25,5 и диоксид кремния - 7,0-10,0. Техническим результатом полезной модели является увеличение срока хранения дозированной формы, предотвращение перекрестной контаминации реакционных смесей и обеспечение их пароизоляции.
Description
Полезная модель относится к медицине и биологии и предназначена для использования при производстве наборов для выделения ДНК, применяемых при проведении молекулярно-генетических исследований.
Выделение нуклеиновых кислот является основой пробоподготовки биологических образцов для молекулярно-генетических исследований: секвенирования, ПЦР и других.
Чаще всего для выделения нуклеиновых кислот (ДНК и РНК) используют модификации аналога, предложенного Boom W.R. с соавторами (US 5234809 от 10.08.1993), согласно которому в перечень стадий выделения нуклеиновых входят смешивание исходного материала с хаотропным веществом и твердой фазой, связывающей нуклеиновую кислоту. При этом хаотропное вещество может представлять собой соли гуанидина или мочевину, а в качестве твердой фазы, связывающей нуклеиновую кислоту, можно выбрать частицы диоксида кремния.
Основным недостатком данного аналога являются:
а) многостадийность пробоподготовки, в том числе в связи с дозированием компонентов, предварительным смешиванием подготавливаемой пробы, хаотропного компонента (вещества) и твердой фазы (в том числе диоксида кремния);
б) необходимость доведения до комнатной температуры замороженных или охлажденных растворов соли гуанидина и мочевины перед использованием;
в) ограниченный срок хранения растворов хаотропных компонентов и ограниченное число циклов их замораживания и размораживания при хранении.
Известен набор для выделения ДНК, состоящий из лизирующего буфера на основе 3-10 М раствора мочевины, связывающего буфера на основе 2,5-5 М хлористого натрия, промывочного буфера на основе 80% этанола, элюирующего буфера на основе 10 мМ Трис-HCl и 1 мМ Трилона Б с рН 8 и сорбента, отличающийся тем, что в качестве сорбента ДНК он содержит кристаллический кварцевый песок с размером частиц 10-50 мкм (RU 2539030 от 10.01.2015).
Известно также последовательное использование гуанидина гидрохлорида и диоксида кремния для выделения ДНК (WO 2004108925 от 16.12.2004).
Основными недостатками данных аналогов, согласно их описаниям, являются:
а) многостадийность пробоподготовки, в том числе в связи с дозированием компонентов, последовательным добавлением к биоматериалу хаотропного компонента (мочевины или гуанидина гидрохлорида), связывающего буфера и кремнийсодержащего сорбента (диоксида кремния или кристаллического кварцевого песка);
б) необходимость доведения до комнатной температуры замороженных или охлажденных растворов соли гуанидина и мочевины перед использованием;
в) ограниченный срок хранения растворов хаотропных компонентов и ограниченное число циклов их замораживания и размораживания при хранении;
г) некомпактность жидких компонентов набора.
Наиболее близким аналогом заявляемого технического решения - прототипом - является композиция для выделения и очистки нуклеиновых кислот, представляющая собой смесь твердых веществ, содержащую от 10 до 40 мас. % частиц, состоящих из нерастворимого в воде гидратированного магния силиката (например, талька), имеющего средний размер частиц от 0,8 до 2,5 μm (мкм), и от 20 до 70 мас. % кристаллического забуференного фосфатом солевого раствора, который легко растворим в воде для получения раствора, имеющего рН от 5,5 до 7,0 при температуре от 70 до 95°С. Известная композиция из смеси твердых веществ предпочтительно дозирована в виде таблетки или капсулы, имеющих определенный вес. Известная композиция также предпочтительно дополнительно содержит от 20 до 35 мас. % гидрофильного коллоида, эффективного для диспергирования смеси твердых веществ в воде, и может включать один или несколько нехаотропных лизирующих агентов (WO 2015132216 от 11.09.2015).
Имеются следующие основные недостатки прототипа, согласно его формуле и описанию:
а) ограничен срок хранения композиции за счет возможности использования нестойких нехаотропных лизирующих компоненетов;
б) отсутствие оболочки, как предотвращающей при хранении истирание прототипа в виде таблетки (так как истирание уменьшает дозировку активных компонентов в форме и, соответственно, дополнительно снижает срок ее хранения), так и создающей при выделении ДНК гидрофобный барьер, предотвращающий перекрестную контаминацию реакционных смесей и обеспечивающий их пароизоляцию при нагревании, которое ускоряет растворение хаотропного компонента, лизис клеток и высвобождение ДНК из связей с другими веществами (например, US 5234809 от 10.08.1993, KZ 26391 от 15.11.2012).
Главной задачей, решаемой заявляемым техническим решением, является получение компактной твердой дозированной формы для выделения ДНК с увеличенным сроком хранения, обеспечивающей пароизоляцию и предотвращающей перекрестную контаминацию реакционных смесей.
Поставленная задача реализуется за счет того, что дозированная форма для выделения ДНК включает ядро, содержащее совместно спрессованные мочевину, натрия хлорид и диоксид кремния, а также сплошную оболочку, состоящую, по меньшей мере, из одного гидрофобного ингредиента, выбранного из ряда: парафин и воск, и выполнена в виде глобулы или таблетки, при этом глобула имеет предпочтительный диаметр 2,0-4,0 мм, а таблетка имеет предпочтительный диаметр 2,0-4,0 мм и предпочтительную толщину 2,0-4,0 мм, причем содержание мочевины, натрия хлорида и диоксида кремния в ядре составляет, мас. %: мочевина - 67,5-80,0, натрия хлорид - 10,0-25,5 и диоксид кремния - 7,0-10,0.
В основу заявляемой полезной модели положена обеспечивающая решение поставленной задачи новая совокупность оригинальных отличительных признаков. Во-первых, это использование совместно спрессованных мочевины, натрия хлорида и диоксида кремния, выполняющих в заявляемой дозированной форма дополнительные функции, соответственно, как гигроскопичных компонентов (мочевина и натрия хлорид) и нерастворимого разрыхлителя - дезинтегратора (диоксид кремния), что обеспечивает увеличение срока хранения компактной дозированной формы для выделения ДНК, упрощает ее состав, исключая необходимость добавления дополнительного разрыхлителя, а при использовании дозированной формы для выделения ДНК обусловливает увеличение ее распадаемости, уменьшение стадий пробоподготовки и обеспечение оптимальной концентрации и необходимой для молекулярно-генетических исследований очистки ДНК в подготовленной пробе. Во-вторых, это наличие сплошной оболочки, предотвращающей истирание ядра глобулы или таблетки при хранении, в связи с чем дополнительно увеличивающей срок ее хранения, а также создающей гидрофобный барьер при выделении ДНК, предотвращающий перекрестную контаминацию реакционных смесей и обеспечивающий их пароизоляцию. Имеющаяся возможность изменять толщину оболочки в широких пределах обеспечивает полное покрытие реакционных смесей в известных емкостях (в том числе в имеющих различный объем пробирках) гидрофобным слоем из ингредиентов оболочки при дезинтеграции вариантов дозированной формы с эффективным выделением ДНК. Вышеизложенное позволяет при характеристике оболочки заявляемой дозированной формы не указывать предельные значения ее толщины в качестве отличительных признаков. Для облегчения извлечения выделенной ДНК из емкости, в которой проходила реакция, предпочтительно использовать толщину оболочки, минимально необходимую для предотвращения истирания ядра глобулы или таблетки при хранении и испарения воды из емкости при выделении ДНК, что обеспечивается предпочтительными размерами глобул и таблеток заявляемой дозированной формы, соответствующими внутренним диаметрам пробирок, обычно используемых для выделения ДНК.
Из патентно-технической литературы и практики молекулярно-генетических исследований неизвестно о дозированной форме для выделения ДНК, включающей твердые ингредиенты, которая была бы идентична заявляемой.
Отсюда правомерен вывод о соответствия заявляемого решения критерию «новизна».
Указанная выше совокупность существенных признаков необходима и достаточна для достижения технического результата - увеличения срока хранения дозированной формы, предотвращения перекрестной контаминации реакционных смесей и обеспечения их пароизоляции.
Предлагаемая дозированная форма может быть получена многократно, а, значит, заявляемое техническое решение соответствует критерию «промышленная применимость».
Предлагаемая дозированная форма апробирована в Обществе с ограниченной ответственностью «Микро Тех».
Сущность полезной модели поясняется на следующих примерах, показывающих увеличение срока хранения дозированной формы, предотвращение перекрестной контаминации реакционных смесей и обеспечение их пароизоляции. При этом приведенные примеры дозированной формы для выделения ДНК показывают конкретную реализацию заявляемой полезной модели, но не ограничивают объем притязаний формулы заявляемой полезной модели.
Пример 1. Получена дозированная форма для выделения ДНК, включающая ядро, содержащее совместно спрессованные мочевину, натрия хлорид и диоксид кремния, а также сплошную оболочку, состоящую из одного гидрофобного ингредиента - парафина, выполненная в виде глобулы с диаметром 2,0 мм. Соотношение мочевины, натрия хлорида и диоксида кремния составляло 67,5 мас. %, 25,5 мас. % и 7,0 мас. %, соответственно.
Полученный вариант заявляемой дозированной формы перед постановкой реакции хранился в течение 2 лет при комнатной температуре.
Для выделения ДНК использовались различные емкости (пробирки объемом от 1,5 мл до 2,5 мл).
Выделение ДНК проводили во время работы с образцами, полученными от других пациентов.
Для выделения ДНК биологический материал (материал слизистой оболочки цервикального канала шейки матки пациентки, инфицированной Ureaplasma urealyticum) вносили в емкость, содержащую 200 мкл физиологического раствора или известной транспортной среды, описанной, например, в методических указаниях МУ 1.3.1794-03 (http://base.garant.ru/4180235/1a3794674ba91fb6f13d1885dca9f9e1/ или http://www.lytech.ru/data/file/mu_131974_03.pdf). Затем вносили в емкость полученный вариант заявляемой дозированной формы, нагревали смесь до 65°С, взбалтывали смесь в течение 2 минут до полного распадения полученного варианта заявляемой дозированной формы, инкубировали смесь при 65°С 15 минут (при этих условиях объем смеси не уменьшился), центрифугировали при 12100 g в течение 5 секунд и декантировали надосадочную жидкость. К осадку добавляли 500 мкл 70% этилового спирта, полученную смесь взбалтывали, центрифугировали при 12100 g в течение 5 секунд и декантировали надосадочную жидкость. Осадок высушивали и вносили в емкость 60 мкл бидистиллированной воды или известного элюирующего буфера (http://www.nhm.ac.uk/content/dam/nhmwww/our-science/dpts-facilities-staff/Coreresearchlabs/te-buffer.pdf), полученную смесь взбалтывали, центрифугировали при 12100 g в течение 5 секунд. Надосадочную жидкость использовали для исследования методом классической ПЦР.
При использовании полученного варианта заявляемой дозированной формы по сравнению с использованием обычно используемых аналогичных жидких реагентов отмечено уменьшение в 3 раза числа ручных манипуляций.
В результате проведения классической ПЦР с использованием полученного варианта заявляемой дозированной формы установлен положительный результат ПЦР с праймерами для Ureaplasma urealyticum, что свидетельствует об обеспечении оптимальной концентрации и необходимой для молекулярно-генетических исследований очистки ДНК в подготовленной пробе. Перекрестной контаминации реакционных смесей не выявлено.
Пример 2. Получена дозированная форма для выделения ДНК, включающая ядро, содержащее совместно спрессованные мочевину, натрия хлорид и диоксид кремния, а также сплошную оболочку, состоящую из одного гидрофобного ингредиента - воска, выполненная в виде глобулы с диаметром 3,0 мм. Соотношение мочевины, натрия хлорида и диоксида кремния составляло 76,0 мас. %, 16,0 мас. % и 8,0 мас. %, соответственно.
Полученный вариант заявляемой дозированной формы перед постановкой реакции хранился в течение 2 лет при комнатной температуре.
Для выделения ДНК использовались различные емкости (пробирки объемом от 1,5 мл до 2,5 мл).
Выделение ДНК проводили во время работы с образцами, полученными от других пациентов.
Для выделения ДНК биологический материал (материал слизистой оболочки влагалища пациентки, инфицированной Candida albicans) вносили в емкость, содержащую 200 мкл физиологического раствора или известной транспортной среды, описанной, например, в методических указаниях МУ 1.3.1794-03 (http://base.garant.ru/4180235/1a3794674ba91fb6f13d1885dca9f9e1/ или http://www.lytech.ru/data/file/mu_131974_03.pdf). Затем вносили в емкость полученный вариант заявляемой дозированной формы, нагревали смесь до 65°С, взбалтывали смесь в течение 2 минут до полного распадения полученного варианта заявляемой дозированной формы, инкубировали смесь при 65°С 15 минут (при этих условиях объем смеси не уменьшился), центрифугировали при 12100 g в течение 5 секунд и декантировали надосадочную жидкость. К осадку добавляли 500 мкл 70% этилового спирта, полученную смесь взбалтывали, центрифугировали при 12100 g в течение 5 секунд и декантировали надосадочную жидкость. Осадок высушивали и вносили в емкость 60 мкл бидистиллированной воды или известного элюирующего буфера (http://www.nhm.ac.uk/content/dam/nhmwww/our-science/dpts-facilities-staff/Coreresearchlabs/te-buffer.pdf), полученную смесь взбалтывали, центрифугировали при 12100 g в течение 5 секунд. Надосадочную жидкость использовали для исследования методом классической ПЦР.
При использовании полученного варианта заявляемой дозированной формы по сравнению с использованием обычно используемых аналогичных жидких реагентов отмечено уменьшение в 3 раза числа ручных манипуляций.
В результате проведения классической ПЦР с использованием полученного варианта заявляемой дозированной формы установлен положительный результат ПЦР с праймерами для Candida albicans, что свидетельствует об обеспечении оптимальной концентрации и необходимой для молекулярно-генетических исследований очистки ДНК в подготовленной пробе. Перекрестной контаминации реакционных смесей не выявлено.
Пример 3. Получена дозированная форма для выделения ДНК, включающая ядро, содержащее совместно спрессованные мочевину, натрия хлорид и диоксид кремния, а также сплошную оболочку, состоящую из двух гидрофобных ингредиентов (смеси парафина с воском), выполненная в виде глобулы с диаметром 4,0 мм. Соотношение мочевины, натрия хлорида и диоксида кремния составляло 80,0 мас. %, 10,0 мас. % и 10,0 мас. %, соответственно.
Полученный вариант заявляемой дозированной формы перед постановкой реакции хранился в течение 2 лет при комнатной температуре.
Для выделения ДНК использовались различные емкости (пробирки объемом от 1,5 мл до 2,5 мл).
Выделение ДНК проводили во время работы с образцами, полученными от других пациентов.
Для выделения ДНК биологический материал (материал слизистой оболочки цервикального канала шейки матки пациентки, инфицированной Chlamydia trachomatis) вносили в емкость, содержащую 200 мкл физиологического раствора или известной транспортной среды, описанной, например, в методических указаниях МУ 1.3.1794-03 (http://base.garant.ru/4180235/1a3794674ba91fb6f13d1885dca9f9e1/ или http://www.lytech.ru/data/file/mu_131974_03.pdf). Затем вносили в емкость полученный вариант заявляемой дозированной формы, нагревали смесь до 65°С, взбалтывали смесь в течение 3 минут до полного распадения полученного варианта заявляемой дозированной формы, инкубировали смесь при 60°С 15 минут (при этих условиях объем смеси не уменьшился), центрифугировали при 12100 g в течение 5 секунд и декантировали надосадочную жидкость. К осадку добавляли 500 мкл 70% этилового спирта, полученную смесь взбалтывали, центрифугировали при 12100 g в течение 5 секунд и декантировали надосадочную жидкость. Осадок высушивали и вносили в емкость 60 мкл бидистиллированной воды или известного элюирующего буфера (http://www.nhm.ac.uk/content/dam/nhmwww/our-science/dpts-facilities-staff/Coreresearchlabs/te-buffer.pdf), полученную смесь взбалтывали, центрифугировали при 12100 g в течение 5 секунд. Надосадочную жидкость использовали для исследования методом классической ПЦР.
При использовании полученного варианта заявляемой дозированной формы по сравнению с использованием обычно используемых аналогичных жидких реагентов отмечено уменьшение в 3 раза числа ручных манипуляций.
В результате проведения классической ПЦР с использованием полученного варианта заявляемой дозированной формы установлен положительный результат ПЦР с праймерами для Chlamydia trachomatis, что свидетельствует об обеспечении оптимальной концентрации и необходимой для молекулярно-генетических исследований очистки ДНК в подготовленной пробе. Перекрестной контаминации реакционных смесей не выявлено.
Пример 4. Получена дозированная форма для выделения ДНК, включающая ядро, содержащее совместно спрессованные мочевину, натрия хлорид и диоксид кремния, а также сплошную оболочку, состоящую из одного гидрофобного ингредиента - парафина, выполненная в виде таблетки с диаметром 2,0 мм и толщиной 2,0 мм. Соотношение мочевины, натрия хлорида и диоксида кремния составляло 67,5 мас. %, 25,5 мас. %) и 7,0 мас. %, соответственно.
Полученный вариант заявляемой дозированной формы перед постановкой реакции хранился в течение 2 лет при комнатной температуре.
Для выделения ДНК использовались различные емкости (пробирки объемом от 1,5 мл до 2,5 мл).
Выделение ДНК проводили во время работы с образцами, полученными от других пациентов.
Для выделения ДНК биологический материал (кал больного, инфицированного Trichiuris trichiuria) вносили в емкость, содержащую 200 мкл физиологического раствора или известной транспортной среды, описанной, например, в методических указаниях МУ 1.3.1794-03 (http://base.garant.ru/4180235/1a3794674ba91fb6f13d1885dca9f9e1/ или http://www.lytech.ru/data/file/mu_131974_03.pdf). Затем вносили в емкость полученный вариант заявляемой дозированной формы, нагревали смесь до 60°С, взбалтывали смесь в течение 3 минут до полного распадения полученного варианта заявляемой дозированной формы, инкубировали смесь при 60°С 15 минут (при этих условиях объем смеси не уменьшился), центрифугировали при 12100 g в течение 5 секунд и декантировали надосадочную жидкость. К осадку добавляли 500 мкл 70% этилового спирта, полученную смесь взбалтывали, центрифугировали при 12100 g в течение 5 секунд и декантировали надосадочную жидкость. Осадок высушивали и вносили в емкость 60 мкл бидистиллированной воды или известного элюирующего буфера (http://www.nhm.ac.uk/content/dam/nhmwww/our-science/dpts-facilities-staff/Coreresearchlabs/te-buffer.pdf), полученную смесь взбалтывали, центрифугировали при 12100 g в течение 5 секунд. Надосадочную жидкость использовали для исследования методом классической ПЦР.
При использовании полученного варианта заявляемой дозированной формы по сравнению с использованием обычно используемых аналогичных жидких реагентов отмечено уменьшение в 3 раза числа ручных манипуляций.
В результате проведения классической ПЦР с использованием полученного варианта заявляемой дозированной формы установлен положительный результат ПЦР с праймерами для Trichiuris trichiuria, что свидетельствует об обеспечении оптимальной концентрации и необходимой для молекулярно-генетических исследований очистки ДНК в подготовленной пробе. Перекрестной контаминации реакционных смесей не выявлено.
Пример 5. Получена дозированная форма для выделения ДНК, включающая ядро, содержащее совместно спрессованные мочевину, натрия хлорид и диоксид кремния, а также сплошную оболочку, состоящую из одного гидрофобного ингредиента - воска, выполненная в виде таблетки с диаметром 3,0 мм и толщиной 3,0 мм. Соотношение мочевины, натрия хлорида и диоксида кремния составляло 76,0 мас. %, 16,0 мас. % и 8,0 мас. %, соответственно.
Полученный вариант заявляемой дозированной формы перед постановкой реакции хранился в течение 2 лет при комнатной температуре.
Для выделения ДНК использовались различные емкости (пробирки объемом от 1,5 мл до 2,5 мл).
Для выделения ДНК биологический материал (материал слизистой оболочки влагалища пациентки, инфицированной Candida albicans) вносили в емкость, содержащую 200 мкл физиологического раствора или известной транспортной среды, описанной, например, в методических указаниях МУ 1.3.1794-03 (http://base.garant.ru/4180235/1a3794674ba91fb6f13d1885dca9f9e1/ или http://www.lytech.ru/data/file/mu_131974_03.pdf). Затем вносили в емкость полученный вариант заявляемой дозированной формы, нагревали смесь до 60°С, взбалтывали смесь в течение 3 минут до полного распадения полученного варианта заявляемой дозированной формы, инкубировали смесь при 65°С 15 минут (при этих условиях объем смеси не уменьшился), центрифугировали при 12100 g в течение 5 секунд и декантировали надосадочную жидкость. К осадку добавляли 500 мкл 70% этилового спирта, полученную смесь взбалтывали, центрифугировали при 12100 g в течение 5 секунд и декантировали надосадочную жидкость. Осадок высушивали и вносили в емкость 60 мкл бидистиллированной воды или известного элюирующего буфера (http://www.nhm.ac.uk/content/dam/nhmwww/our-science/dpts-facilities-staff/Coreresearchlabs/te-buffer.pdf), полученную смесь взбалтывали, центрифугировали при 12100 g в течение 5 секунд. Надосадочную жидкость использовали для исследования методом классической ПЦР.
При использовании полученного варианта заявляемой дозированной формы по сравнению с использованием обычно используемых аналогичных жидких реагентов отмечено уменьшение в 3 раза числа ручных манипуляций.
В результате проведения классической ПЦР с использованием полученного варианта заявляемой дозированной формы установлен положительный результат ПЦР с праймерами для Candida albicans, что свидетельствует об обеспечении оптимальной концентрации и необходимой для молекулярно-генетических исследований очистки ДНК в подготовленной пробе. Перекрестной контаминации реакционных смесей не выявлено.
Пример 6. Получена дозированная форма для выделения ДНК, включающая ядро, содержащее совместно спрессованные мочевину, натрия хлорид и диоксид кремния, а также сплошную оболочку, состоящую из двух гидрофобных ингредиентов (смеси парафина с воском), выполненная в виде таблетки с диаметром 4,0 мм и толщиной 4,0 мм. Соотношение мочевины, натрия хлорида и диоксида кремния составляло 80,0 мас. %, 10,0 мас. % и 10,0 мас. %, соответственно.
Полученный вариант заявляемой дозированной формы перед постановкой реакции хранился в течение 2 лет при комнатной температуре.
Для выделения ДНК использовались различные емкости (пробирки объемом от 1,5 мл до 2,5 мл).
Выделение ДНК проводили во время работы с образцами, полученными от других пациентов.
Для выделения ДНК биологический материал (кровь больного гепатитом В) вносили в емкость, содержащую 200 мкл физиологического раствора или известной транспортной среды, описанной, например, в методических указаниях МУ 1.3.1794-03 (http://base.garant.ru/4180235/1a3794674ba91fb6f13d1885dca9f9e1/ или http://www.lytech.ru/data/file/mu_131974_03.pdf). Затем вносили в емкость полученный вариант заявляемой дозированной формы, нагревали смесь до 62°С, взбалтывали смесь в течение 3 минут до полного распадения полученного варианта заявляемой дозированной формы, инкубировали смесь при 62°С 15 минут (при этих условиях объем смеси не уменьшился), центрифугировали при 12100 g в течение 5 секунд и декантировали надосадочную жидкость. К осадку добавляли 500 мкл 70% этилового спирта, полученную смесь взбалтывали, центрифугировали при 12100 g в течение 5 секунд и декантировали надосадочную жидкость. Осадок высушивали и вносили в емкость 60 мкл бидистиллированной воды или известного элюирующего буфера (http://www.nhm.ac.uk/content/dam/nhmwww/our-science/dpts-facilities-staff/Coreresearchlabs/te-buffer.pdf), полученную смесь взбалтывали, центрифугировали при 12100 g в течение 5 секунд. Надосадочную жидкость использовали для исследования методом классической ПЦР.
При использовании полученного варианта заявляемой дозированной формы по сравнению с использованием обычно используемых аналогичных жидких реагентов отмечено уменьшение в 3 раза числа ручных манипуляций.
В результате проведения классической ПЦР с использованием полученного варианта заявляемой дозированной формы установлен положительный результат ПЦР с праймерами для вируса гепатита В, что свидетельствует об обеспечении оптимальной концентрации и необходимой для молекулярно-генетических исследований очистки ДНК в подготовленной пробе. Перекрестной контаминации реакционных смесей не выявлено.
Claims (4)
- Дозированная форма для выделения ДНК, характеризующаяся тем, что она включает ядро, содержащее совместно спрессованные мочевину, натрия хлорид и диоксид кремния, а также сплошную оболочку, состоящую, по меньшей мере, из одного гидрофобного ингредиента, выбранного из ряда: парафин и воск, и выполнена в виде глобулы или таблетки, при этом глобула имеет предпочтительный диаметр 2,0-4,0 мм, а таблетка имеет предпочтительный диаметр 2,0-4,0 мм и предпочтительную толщину 2,0-4,0 мм, причем содержание мочевины, натрия хлорида и диоксида кремния в ядре составляет, мас. %:
- мочевина - 67,5-80,0
- натрия хлорид - 10,0-25,5
- диоксид кремния - 7,0-10,0
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018128273U RU188424U1 (ru) | 2018-08-02 | 2018-08-02 | Дозированная форма для выделения днк |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018128273U RU188424U1 (ru) | 2018-08-02 | 2018-08-02 | Дозированная форма для выделения днк |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU188424U1 true RU188424U1 (ru) | 2019-04-11 |
Family
ID=66168840
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2018128273U RU188424U1 (ru) | 2018-08-02 | 2018-08-02 | Дозированная форма для выделения днк |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU188424U1 (ru) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5405951A (en) * | 1991-05-03 | 1995-04-11 | Becton Dickinson And Company | Solid phase extraction purification of DNA |
| RU2116795C1 (ru) * | 1996-07-10 | 1998-08-10 | Владимир Иванович Евтушенко | Набор для выделения днк |
| RU2539030C1 (ru) * | 2013-11-11 | 2015-01-10 | ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ "РОССИЙСКИЙ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР РАДИОЛОГИИ И ХИРУРГИЧЕСКИХ ТЕХНОЛОГИЙ" МИНИСТЕРСТВА ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ /ФГБУ "РНЦРХТ" Минздрава России/ | Набор для выделения днк |
| US20170081704A1 (en) * | 2014-03-07 | 2017-03-23 | Ifp Privates Institut Fur Produktqualitat Gmbh | Method and kit of parts for extraction of nucleic acids |
-
2018
- 2018-08-02 RU RU2018128273U patent/RU188424U1/ru active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5405951A (en) * | 1991-05-03 | 1995-04-11 | Becton Dickinson And Company | Solid phase extraction purification of DNA |
| RU2116795C1 (ru) * | 1996-07-10 | 1998-08-10 | Владимир Иванович Евтушенко | Набор для выделения днк |
| RU2539030C1 (ru) * | 2013-11-11 | 2015-01-10 | ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ "РОССИЙСКИЙ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР РАДИОЛОГИИ И ХИРУРГИЧЕСКИХ ТЕХНОЛОГИЙ" МИНИСТЕРСТВА ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ /ФГБУ "РНЦРХТ" Минздрава России/ | Набор для выделения днк |
| US20170081704A1 (en) * | 2014-03-07 | 2017-03-23 | Ifp Privates Institut Fur Produktqualitat Gmbh | Method and kit of parts for extraction of nucleic acids |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Wallace et al. | State of adenovirus 2 deoxyribonucleic acid in the nucleus and its mode of transcription: studies with isolated viral deoxyribonucleic acid-protein complexes and isolated nuclei | |
| US7622280B2 (en) | Emulsion compositions | |
| Hagan | Modeling viral capsid assembly | |
| JP4585123B2 (ja) | 生体材料からのｄｎａの単離方法 | |
| RU2578009C2 (ru) | Способ идентификации нативных пар фрагментов днк или рнк, присутствующих в одних и тех же живых клетках | |
| Sauvage et al. | Viral metagenomics and blood safety | |
| US9593325B2 (en) | Stable lysis buffer mixture for extracting nucleic acids | |
| JP2023511279A (ja) | 単一細胞シーケンシング | |
| RU188424U1 (ru) | Дозированная форма для выделения днк | |
| JP2000514666A (ja) | Ｒｎａおよびｄｎａの保存を目的とする培養ヒト細胞の凍結乾燥 | |
| Samarina et al. | Nuclear 30S RNP particles | |
| RU188425U1 (ru) | Дозированная форма для выделения днк | |
| Marchant et al. | The impact of CVB3 infection on host cell biology | |
| US20210214763A1 (en) | Emulsion based drug screening | |
| ES2731375T3 (es) | Procedimiento para el enriquecimiento de microvesículas | |
| Erikson | Replication of RNA viruses | |
| CN100334107C (zh) | 配体 | |
| RU171152U1 (ru) | Дозированная форма для полимеразной цепной реакции | |
| Chiu et al. | Composition and template activity of chromatin fractionated by isoelectric focusing | |
| RU2729223C1 (ru) | Дозированная форма для амплификации нуклеиновых кислот | |
| RU2764245C2 (ru) | Способ и состав для стабилизации нуклеиновых кислот, свободных от клеток, и клеток | |
| JP4386660B2 (ja) | Ｈｂｖ−ｒｎａを含むｈｂｖ粒子 | |
| Luis et al. | A Novel Vaccine RNA-peptide against HIV-1: Exosomes as Carrier in Viral Progression | |
| JP5377298B2 (ja) | 輸送培地に曝露した組織、細胞、またはウイルスから増幅可能な核酸を取得するための方法および組成物 | |
| RU2659197C2 (ru) | Способ выделения ДНК клинических изолятов Mycobacterium tuberculosis из ткани легкого |