RU1836004C - Способ получени тетраплоидной ромашки матRIсаRIUм снамомILLа RесUтIтаL.,АстеRасеае - Google Patents

Abstract

Использование: биотехнологи , селекци  растений, фармацевтическа  промышленность . Сущность изобретени : получена нова  тетраплоидна  и богата  бизаболо- лом ромашка, цветки которой, высушенные при температуре, равной 40°С, содержат по меньшей мере 100 мг% хамазулена и по меньшей мере 200 мг% (-)-а-бизаболола, причем содержание прочих бизаболоидов превышает 50 мг%. Дл  получений данной ромашки тетраплоид iyio или диплоидную ромашку, в которой бизаболол представл ет собой основной компонент эфирного масла, подвергают различным операци м отбора и размножени . J З.П.Ф-ЛЫ, 2 табл.

Description

сл

с

-; Препараты из головок ромашки (CJiamomilla recutita (L.) Rauschert, синоним с |/1atricar1a chamomilla L. Asteraceae наход  вследствие их антифлогистического и спазмолитического действи  широкое терапевтическое применение и образует влажную составную часть растительного лекарственного богатства. При этом особое те запёвтическое значение имеют биологически активные вещества (-)- fir-бисаболол и хаиазулен. Поэтому хорошее ромашковое сырье должно иметь максимально возможное содержание этих обоих веществ.

| Встречающиес  в природе диплоидные ромашки  вл ютс  в отношении содержани  в них биологически активных веществ веЬьма неоднородными. В частности, из на- иб олее важных биологически активных веществ хамазулена и (-)-а-бисаболола представлен только один, или оба эти вещества полностью отсутствуют, или имеютс  вместе только в очень небольшом количестве , причем в таких случа х основные компоненты эфирного масла состо т из менее: действенных бисаболоидов (окиси А или В| бисаболона, окиси А бисаболола).1

Из немецкого патента № 2402802 изве-j стен сорт ромашки Degumill, который имеет одновременно высокое содержание (-}-(i- бисаболола и хамазулена. Содержание хамазулена и бисаболола этого сорта ромашки однако лишь тогда  вл етс  посто нным, когда предотвращаетс  любое вовлечение в скрещивание или постороннее опыление другими сортами ромашки, содержание бисаболола и хамазулена, в которых  вл етс  значительно более низким. Эта опасность скрещивани  посредством постороннего опылени  почти всегда имеет место, потому

00

Сл)

о о о

Ь.

Сл)

что зти дикие ромашки встречаютс  практически повсюду.

Теперь было обнаружено, что вообще из естественно встречающихс  попул ций ромашек либо диплоидных, либо тетраплоид- ных селекционных ромашек посредством определенных операций могут быть получены богатые бисабололом тетраплоидные растени  ромашки, которые, с одной стороны , не  вл ютс  более восприимчивыми по отношению к постороннему опылению естественно встречающимис  ромашками, а с другой стороны имеют одновременное высокое содержание хамазулена и (-)) а-бисаболола причем содержание (-)- а-бисаболола значительно превосходит содержание хамазулена и при этом прочие бисаболоиды практически не встречаютс  или встречаютс  лишь весьма в небольшом количестве. При этом, таким образом, существенное значение имеет то, что большое содержание основных биологически активных веществ (-)- а-бисаболола и хамазулена в случае соответствующей изобретению ромашки  вл етс  посто нным, т.е. остаетс  сохраненным при каждом размножении .

Изобретение относитс  к способу получени  новой тетраплоидной ромашки с предпочтительными и улучшенными свойствами. Нова  соответствующа  изобретени  тетраплоидна ; ромашка неожиданно отличаетс  по отношению к до сих пор известным ромашкам или сортам ромашек р дом новых и предпочтительных свойств.

В частности, она более не  вл етс  вос- .приимчивой по отношению к постороннему опылению естественно встречающимис  попул ци ми ромашек(дикие ромашки), как известный сорт DEGUMILL. По отношению к остальным известным диплоидным ромашкам и по отношению к сортам тетраплоидных ромашек соответствующа  предложенному способу ромашка неожиданно отличаетс  более высоким содержанием важного биологически активного вещества (-)-а-бисаболола (по меньшей мере 200 мг%), в то врем  как содержание остальных бисаболоидов (например, окиси бисаболола)  вл етс  очень незначительным и меньше чем 50 мг%. Так, например , известные и описанные в литературе сорта ромашек все имеют очень высокое родержание окисей бисаболола, которое как правило составл ет приблизительно 50% эфирного масла растительного сырь  (т.е. пр 1 %-ном содержании эфирного масла приблизительно 50 мг на 100 г растительного сырь ).

Далее, соответствующа  изобретению ромашка в противоположность к до сих пор известным сортам тетраплоидных ромашек в отношении ингредиентов  вл етс  гомогенной , причем свойства ромашек, содержащих хамазулен и (-)- а-бисаболол,  вл ютс  посто нными (т.е. вл ютс  гомозиготными ).

Кроме того, соответствующа  изобретению ромашка неожиданно отличаетс  от известных сортов тетраплоидных ромашек, например, одним или несколькими из следующих свойств: улучшенна  способность сем н к прорастанию, меньша  инвизи 

используемой трав нистой массы (т.е.большой урожай цветков), меньше содержание воды в цветках (т.е. лучший урожай высушенных цветков и более коротки периоды сушки), лучша  пригодность дл  механизированной уборки, потому что цветки в значительной степени локализованы в одной плоскости и большинство цветков цветут одновременно (вследствие этого также возможен единый срок сбора урожа ), лучша 

стойкость растительного сырь  (меньша  склонность к распаду и к образованию трухи ), особенно ароматный и типичный ромашковый запах. Названные последними преимуществами выступают, например,

когда помимо селекции по содержанию биологически активных веществ происходит еще селекци  по одному или нескольким из вышеназванных признаков, из отселекци- рованных растений получают семенной материал , снова провод т селекцию выращенного из этих сем н нового поколени  и эти меропри ти  повтор ют 3-5 раз. Задачей изобретени   вл етс  получение новой тетраплоидной ромашки с улучшейными свойствами, с увеличенным содержанием (-)-а-бисаболола.

Получение новой соответствующей изобретению ромашки происходит посредством того,что

а) тетраплоидизируют известные диплоидные ромашки у которых (-)- а -бисаболол представл ет собой основной компонент эфирного масла, провод т селекцию полученных таким образом тетраплоидных растений и снова отбирают из этих отобранных тетраплоидных растений растени , цветки которых, высушенные при температуре 40°С, имеют наименьшее содержание хамазулена равное 100 мг%, наименьшее содержание (-)-а-бисаболола равное 200 мг% и содержание отдельных бисаболоидов менее , чем 50 мг% (сбор цветков происходит в момент времени, когда расцвели 30-70% трубчатых цветков головки) и при необходимости за этим непосредственно следуют дальнейшие прочие операции селекциони- рогани  и размножени  (например, селекци  по материнской линии дл  вегетативного размножаемого посторонне- го опылител ), или

I б) из известных тетраплоидных ромашек , у которых (-)- а-бисаболол представл ет собой основной компонент эфирного ма ;ла, провод т селекцию растений, цветки KOI орых, высушенные при температуре равной 40°С.имеют наименьшее содержание хамазулена равное 100 мг%, наименьшее содержание (-)-а-бисаболола равное 200 мг &-и содержание прочих бисаболоидов не больше, чем 50 мг% (сбор цветков происходи; в момент времени, когда расцвели 30- 70% трубчатых цветков головки), и желании за этим непосредственно следуют дальнейшие обычные операции селекционировани  и размножени  (например, селекци  по материнской родословной дл  вегетативно размножаемого постороннего опылител ).

(Провод т селекцию пригодных диплот ид шх и тетраплоидных исходных ромашек посредством исследований отдельных растений . В общем необходимо исследовать из одной исходной попул ции, например, 1000-10000 растений, чтобы найти отдельные индивидуумы/которые имеют содержа- ни е (-)-а-бисэболола, соответствующее вы неуказанным критери м, и пригодны в качестве исходных ромашек. Из этих вы- бронных индивидуумов обычным способом получают семенной материал,его тетрапло- идизуруют..После завершенного тетраплои- дизировани  провод т селекцию теграплоидных растений из прочих диплоидных оставшихс  растений. Из полученных таким образом тетраплоидных растений, прр необходимости после предшествующего размножени  провод т селекцию всех растений, цветки которых, высушенные при , содержат, по меньшей мере 100 мг% хамазулена, по меньшей мере 200 мг% (-} опбисаболола и меньше, чем 50% прочих бисаболоидов. Сбор урожай этих цветков пр л этом происходит в стадии развити , когда раскрыты 30-70% всех трубчатых цвет- кои голоски. При необходимости за этим могут непосредственно следовать дополнительные операции селекционировани  и размножени , которые, например, вызывают улучшение в отношении следующих признаков или свойств: одновременный срок цветени , равномерное, основное ветвле ни|е и узка  зона цветени  (т.е. лучша  пригодность к механизированной уборке).

большие головки, лучша  стойкость растительного сырь , особенно ароматный запах.

В случае, если с самого начала происходит из тетраплоидных ромашек, то происхо- . дит лишь заранее указанна  селекци  таких растений, цветки которых, высушенные при 40°С, имеют, по меньшей мере 100 мг% хамазулена, по меньшей мере 200 мг% (-)-а-бисабололаименьше, чем50мг% прочих бисалоидов, причем также сбор урожа  этих цветков происходит в стадии развити , когда раскрыта 30-70% всех трубчатых цветков головки, также и в этом случае при необходимости могут непосредственно следовать дальнейшие операции селекционировани  и размножени , из которых как указано выше, вытекают дальнейшие улучшени .

Особенно предпочтительную ромашку получают, тогда, когда селекции по содержанию хамазулена и (-)-#-бисаболола провод т селекцию таких растений (известных и полученных согласно способу), содержание хамазулена, в которых равно, по меньшей мере 200 мг%, предпочтитетельно 250 мг%, а содержание (-)-а-бисаболола, в которых равно по меньшей мере 300 мг%, предпочтительно 400 мг% (содержание прочих бисаболоидов всегда меньше 50 мг%).

Тетраплоидизиррвание может, например , происходить самим по себе известным способом.

Тетраплоидизирование с помощью хи- .мических веществ происходит, например, при температуре между 0 и 35°С, предпочтительно между 12 и 30°С, в частности, между 15 и 25°С.

Применение происходит посредством, например, обработки сем н, верхушек побегов , корней (в частности, кончиков корней .или корней проростков), зав зей, плоскостей разреза на листь х и стебл х, клеточных суспензий из тк&ни меристем, культур коллуса или также посредством инжекции в прикорневую область стебл  или область пазушных почек. Химикалии в общем примен ютс  в виде растворов в воде, слабо спиртовых (содержание спирта, как правило , меньше 5%) или слабокислотных растворов . Водородный показатель слабо кислотных растворов лежим, например, в диапазоне 5.5-6,5, причем подкисление происходит, например, посредством низких органических алифатических кислот, как уксусна  кислота. Если примен ют спиртовые растворы, то они также могут быть слабо кислотными. Концентрации химикалиев в этих растворах могут, например, быть равны 0,01-0,5%. предпочтительно, 0,02-0,2%, в

частности 0,05-0,1%. Газообразные вещества примен ютс  как таковые при необходимости под давлением (например 1-10 бар). Продолжительность обработки равна, например, 1-36 час, предпочтитительно 2- 12 час, в частности 4-6 час.

Особенно благопри тной  вл етс  обработка колхицином при температурах 0- 35°С, предпочтительно 12-30°С, в частности, 15-25°С. Это может, например, произойти посредством того, что семена диплоидных исходных ромашек довод т до набухани  в 0,01-0,2%-ном, в частности, 0,02-0,1%-ном, предпочтительно 0,05%- ном растворе колхицина или погружают проросшие, в возрасте 5-7 дней, хорошо развитые проростки дисплоидной исходной ромашки (с зародышевыми листками ромашки , направленными вниз) в 0,1-0,2%- ный, в частности, 0,02-0,1 %-ный, предпочтительно 0,05%-ный раствор колхицина . В случае последнего способа отражающа  атмосфера должна иметь почти 100%-ную относительную влажность воздуха . Продолжительность обработки колхицином равна, например, 3-36 час, в частности 4-10 час. При применении проростков в общем  вл етс  достаточной продолжительность воздействи , достигающа  10 час. При использовании сем н продолжительность обработки может при известных услови х увеличитьс  до 36 час.

После обработки химикали ми набухшие семена, проростки или другие части растени  несколько раз ополаскивают водой . Набухшие семена, например, высеивают . Растени  с обработанными корн ми или другими част ми, или обработанные проростки пикируют в  щики дл  растений. Из обработанных таким образом сем н или проростков выращивают растени  (например , в таблице 3 температура между 18 и 25°С днем и 10-1б°С ночью) и отбирают растени , пыльцевые зерна которых приблизительно в 1,5 раза больше чем пыльцевые зерна исходного -материала, или имеют число хромосом соматических клеток равное 36. Если обработке химикали ми подвергают другие части растений (надземные или подземные части), то более позднему исследованию на прошедшую тетраплоиди- зацию подвергают исключительно происход щие из обработанных частей побеги, корни или цветки/семена. Если, например, предпринимаетс  обработка побега или пазухи , то затем исследуют на число хромосом только происход щий из этой пазухи или из этого отростка новый побег и образованные на нем листь  или семена.

Измерени  размеров пыльцевых зерен и подсчет хромосом могут например, быть проведены так, как указано в примере 3. Тетраплоидизирование лучами происходит , например, на семена или кончики корней при температурах между 0 и 35°С, предпочтительно 10-30°С, в частности, 15- 25°С. Сумма облучени : 5-50 Крад. Предпочтительными  вл ютс  гамма-лучи и

0 рентгеновские лучи.

В качестве ультрафиолетовых лучей и в расчет, например принимаютс  такие ультрафиолетовые лучи, длины волн которых лежат в диапазоне 400-30 нм,

5 предпочтительно 350 нм.

Облученные таким образом растени  или части растений затем также подвергают дальнейшей обработке, как после обработки химикали ми.

0 Применение высоких и низких температур .

В качестве высоких температур в расчет , например, принимаютс  температуры между 33 и 50°С, предпочтительно 42-45°С.

5 Действию этих температур, например, подвергаютс  набухшие семена, проростки, верхушки побегов и меристиматическа  ткань. Продолжительность обработки: например , 1-48 час, предпочтительно 12-24

0 часа.

В качестве низких температур в расчет, например, принимаютс : 0-5°С, предпочтительно 0,5-4°С, в частности, 2°С. Воздействию этих температур, например,

5 подвергаютс  набухшие семена, проростки, побеги и меристематическа  ткань. Продолжительность обработки, например, 1-100, предпочтительно 20-40 дней. Обработанные таким образом растени  или части рас0 тений также подвергают дальнейшей обработке, как после обработки химикали ми . Декапитирование проводитс  на молодых растени х на стебле, предпочтительно на конусе прорастани  верхушки, после об5 разовани  от 4 до 6 листьев или также черенках листьев или на боковых побегах. Возникающие ткани коллуса почки или побеги срезают, довод т до корнеобразова- ни , далее, культивируют в горшках и

0 провод т селекцию тетраплоидизирован- ных растений таким же образом, как и при обработке химикали ми.

От цветущих растений собираютс  трубчатые , цветки, пыльники которых наход тс 

5 в стадии первого митоза пыльцы. Пыльники забирают из цветковых почек посредством микроманипул тора и перенос т в чашки Петри, которые, наполнены, например, питательной средой по hltsch und hitsch (Таб- лица 1). Затем чашки Петри хран т при

температуре днем равной 28°С и при температуре ночью рапной 20°С, причем продолжительность дн  составл ет 16 час. После приблизительно четырех недель пыльники начинают вскрыватьс  и из них вырастают растени , В случае диплоидной родительской формы они  вл ютс  гаплоидными, в случае тетраплоидной родительской формы - дигаплоидными, после образовани  корней их сажают, например в горшки с садовой землей и о теплице довод т до цветени . Эти (ди) гаплоидные растени   вл ютс  стерильными, однако могут быть полиплоидизировзны посредством обработки химикали ми, причем возникают гомозиготные растени , которые затем могут далее размножатьс  через семена. Дальнейший образ действи  см.при обработке химикали ми (например, обработка колхицином )..

Водородный показатель среды установлен на 5,5

Из отселекционированных посредством измерени  размеров пыльцевых зерен и/или подсчета хромосом тетраплоидных растений ромашки, которые могут быть получены согласно вышеописанным возможност м , затем отбирают растени , которые имеют наименьшее содержание хамазулена равное 100 мг%, и наименьшее содержание бизаболола равное 200 мг%, в то врем , как содержание прочих бизаболоидов (в частности , окисей бизаболола) должно быть меньше 50 мг% (в пересчете на высушенные цветки, см.пример 1).

Отселекционировэнные таким образом Зрастени  после удалени  всех уже распустившихс  корзинок дают возможность отцвести в теплице при температуре равной 18-24°С днем и 12-14°С ночью и при продолжительности дн  равной, по меньшей мере, 14 час, причем за период времени равный 4 недел м с целью получени  семем чого материала собирают урожай всех голо- зок, которые отцвели и подошли вплотную к эаспаду. После сушки при температуре воздуха между 20 и 35°С получают, например, Семена репродукции соответствующей изобретению ромашки.

I В качестве дополнительных критериев дл  этой селекции могут быть еще дополни- уельно применены следующие: а) приблизительно одновременное цве- |ение;

j б) равномерное, основное ветвление и узка  зона цветени  равна  приблизитель- ijto 10 см, в частности, 5 см, i с) большие головки с внешним диаметром равным приблизительно 30 мм (20-40 фм), в частности 25-35 мм.

Применение дополнительных критериев о), б) и с) ведет, например, к высоким урожа м цветков и растительного сырь  и к лучшей пригодности дл  механизированной 5 уборки урожа .

Если исход т из уже известных тетраплоидных ромашек, то вышеописанна  селекци , а также при желании дополнительные операции селекции и раз- 0 множени  происходит аналогичным образом .

Последовательность посев-селекци , согласно вышеуказанному наименьшему содержанию хамазулена равному 100 мг% и 5 (-)-«- бизаболола равному, по меньшей мере 200 мг%, (другие бизаболоиды меньше 50 мг%), а также при известных услови х согласно дополнительным критери м а)-с) - получение семенного материала, может по- 0 втор тьс  3-5 раз.

За этим еще раз непосредственно следует последовательность посев - как указано выше селекции (при известных услови х клонирование) - получение семенного мате- 5 риала.

П р и м е р 1 (исходна  ромашка  вл етс  тетраплоидной).

Посредством индивидуальных, испытаний 10000 растений сорта тетраплоидной 0 ромашки на изменчивость, который был описан I. Sarkany (Herba Hungar, 4 (I). 125- 169(1925). было обнаружено, что на приблизительно 100 индивидумов приходитс  одно растение, которое в эфирном масле имеет 5 высокое содержание хамазулена, равное 20 весовым %, а также весовое содержание (-)-#-бисаболола, равное 50 весовым %, причем одновременно содержание прочих бисаболоидов (в частности, окиси (-)-#-би- 0 саболола)  вл етс  весьма малым (меньше, чем 5 весовых %). Была проведена селекци  этих индивидуумов, и они были подвергнуты следующим операци м:

Операци  1

5 Из последующего поколени  отселекци- онированных (как описано выше) тетраплоидных растений ромашки были отобраны индивидуумы, которые

а) приблизительно одновременно цве- 0 тут,

в) имеют равномерное, основное ветвление и узкую зону цветени , равную приблизительно 10 см, предпочтительно 5 см.

с) имеют большие головки с внешним 5 диаметром, равным приблизительно 30 мм, предпочтительно 25-35 мм,

д) достигают или превосход т наименьшее содержание хамазулена, равное 150 мг . % и бизаболола, равное 300 мг%, а содержание в них прочих бисаболоидов (в частности , окиси бесаболола)  вл етс  меньше 50 мг%. Все значени  относ тс  к головкам, которые были высушены при 40°С и сбор которых происходил в стадии, когда раскрыты 30-70% всех трубчатых цветков головки.

Эти растени  были клонированы. Дл  этого растени  (кленовые материнские растени ) были укорочены прежде всего на приблизительно 15 см длины побега, и при длине дн , равной 8-10 час и при температуре , равной 12-14°С были доведены до образовани  нового побега (короткие боковые побеги). Короткие побеги были обрезаны и посажены в смесь торф-песок. При приблизительно 100% относительной влажности воздуха, температуре воздуха, равной 15°С и продолжительности дн , равной 14 час, корнёобразование черенков продолжалось 7-14 дней.

Вместо указанного обычного клонировани  (размножение черенками) может также быть использовано размножение в колбе- способных к делению частей ткани растений (так называемое размножение растений методом культуры меристем). Дл  установлени  культуры ромашки пригодны различные части растений, предпочтительно верхушки побегов или пазушные почки.

После промывки растений с помощью Н20з удал ют при асептических услови х в ламинарном потоке (высокоэффективный фильтр взвешенного вещества со слабым турбулентным напорным потоком) верхушки побегов пазушных листьев и перенос т в пробирках, которые наполнены питательной средой, например, по murashige und SKoog (Physiol.Plant 15, 473-497,1962). Пробирки помещают в кондиционируемое помещение при условии продолжительности дн , равной 12-18, предпочтительно 16 час (достигаетс  посредством флюоросцентно- люминесцентных трубок), интенсивности света, равной 500-10000 люкс, предпочтительно 1000-3000 люкс и температуре, равной 15-30°С, предпочтительно22 27°С.

Как только эксплантаты показывают хороший рост, их перенос т на вышеназванную питательную среду, однако, с большей концентрацией цитокинина (цитокининами  вл ютс  фитогормоны, которые требуют клеточное деление) (например, 30 мг/л 6- изопентениладенина) и с небольшим количеством ауксина или вообще без ауксина (0-0.3 мг/л индолилуксуной кислоты. Впоследствии пазухи раст гиваютс  и образуютс  придаточные органы и в большом количестве пазушные почки). Они могут быть вышеуказанным образом удалены и выращены.

Предназначенные дл  размножени  растени  в большем количестве эксплантаты (3-ий пересев 3-ему поколениюразмно- жени ) после/увеличени  и формировани 

листьев на вышеназванной питательной среде перенос т на питательную почву, котора  содержит 10 мг/л индолилуксусной кислоты или 3 индолилмасл ной кислоты или 0,1-0,3 мг/л а -нафтилуксусной кислоты . При этом у растений происходит корнёобразование и после приблизительно 4 недель они могут быть посажены в горшки, наполненные стерилизованной садовой землей (пропаренна  в течение 12 ч при

температуре, равной 120°С) и далее, культивированы в теплице (при услови х, которые  вл ютс  обычными дл  традиционного размножени  черенками( табл. 2).

Операци  2

Полученные после операции 1 растени  совместно отцветают при изолированных услови х в теплице. Растени  при этом сто ли в 11-см-ых горшках, наполненных садовой землей, при температуре, равной 18-24°С днем и 12-14°С ночью. Продолжительность дн  равн лась приблизительно 14 час и в зимнее врем  года достигалась посредством дополнительного освещени 

(200 Вт/м ). Водоснабжение происходило, по потребности.

Из совокупности отселекционирован- ных индивидуумов непрерывно собирали за временный промежуток, равный 4 недел ми

те головки дл  получени  семенного материала , которые отцвели и были незадолго до распада. Сушка происходила в хорошо вен- тилируемом помещении при температуре воздуха между 20 и 30°С, затем семенной

материал был отсе н посредством щелевого сита 5x0,4 мм) и дополнительно очищен посредством вертикального пневмосепарато- ра.

Операци  3

Из полученного после операции 2 семенного материала была вз та выборочна  проба и из нее выращено приблизительно 2000-ное последующее поколение (экологические услови  как в случае операции 2) и

отселекционировано по тем же критери м а)-д) операции 1. С отселекционированны- ми, таким образом, индивидуумами затем поступили согласно операции 2. Операци .4

Из семенного материала согласно операции 3 одна часть была осенью посе на на двух различных участках. Участок I)

450мм, NN1 48.5° N2/115° О3 сумма годовых осадков равна 750 мм,

влажно умеренный климат

температура в  нваре от -10 до 0°С.

температура в июле от +10 до +20°С,

Участок II)

200м, NN, 42°М/1°С,

сумма годовых осадков равна 400 мм,

среднеземноморский климат, j температура в  нваре от 0 до +10°С, температура в июле от +20 до +30°С.

Посев происходил на обоих участках в конце сент бр /начале окт бр .

Полученные, таким образом, насаждение дл  полевых опытов провер ли и расценивали (оценивали) в отношении гомогенного роста, размера цветков и сбора урожа , кроме того, были исследованы выборочные пробы цветков на содержание биологически активных веществ. Из полевого насаждени  были снова отобраны те индивидуумы, которые соответствуют параметрам , названным в операции 1. Из них получают семенной материал согласно операции 2, последнее предложение.

1 - NN-северный нормальный нуль - урс вень мор ,

j 2° - N северна  широта (н град) 3° - О - восточна  долгота (н град)

Операци  5

С семенным материалом согласно операции 4 были повторены операции 3 и 4 в указанной последовательности и указанным способом.

Операци  6

Из полученного согласно операции 5 семейного материала были выращены приблизительно 1500 индивидуумов (экологические услови  такие же, как и в случае операции 2} и отселекционированы по тому же принципу, как указано в случае операции 1. Из отселекционированных, таким образом, растений были отобраны 34 индивидуума и клонированы согласно операции 1. По 10 растений каждого клона были посажены в случайном распределении на рафто нии 40x30 см на открытом грунте (участок 1, см операцию 4) в изолированном месте. Почвой был лесовидный суглинок, водородный показатель был равен 7,0. посадка происходила в начале июн , первый урожай сем н в середине июл , после этого растени  были снова обрезаны, расцвели еще раз и дали в середине/конце августа второй урожай семенного материала.

Получение сем н этого материала про- исх рдило согласно операции 2.

|Полученный. согласно операции 6 се- менИой материал  вл етс  семенным мате- риа|пом соответствующей изобретению ромашки.

Цветки растений из двух сем н репродукции (посев сент брь) (окт брь, урожай начало июн  следующего года), которые были собраны в момент времени, когда рзс 5 .крыты 30-70% трубчатых цветков, и которые затем немедленно были высушены в сушильном шкафу при температуре 40°С в течение 72 час, содержат, в пересчете на вес высушенных цветков (сухое вещество), на10 пример, по меньшей мере: 150 мг% хамазу- лена, 300 мг% (-)- а -бизаболола и не более 50 мг% прочих бизаболоидов.

Другие примерные данные соответствующей изобретению ромашки:

15 1.Рост

Стебель: вертикальный, незначительно разветвлен,

2.Листва

Лист: 2-3-кратно перистораздельный 0 Толщина: средн  

Перистый лист, цвет среднезеленый. Перистый лист (середина стебл ), пери- стость: от средне до сильно перистого

3.Соцветие

5 Корзинка (головка)

приблизительно 30 мм внешний диаметр ,

приблизительно 15 мм внутренний диаметр ,

0 вес единственной (высушенной) корзинки приблизительно 45 мг,

цветоносный побег, длина (мм): приблизительно 700, однако зависит от места возделывани  (климат), срока посева, почвы, 5 удобрени , обработки растени , погоды.

начало цветени  (день с 1-го  нвар ) приблизительно. 160-ый день (посев в сент бре , участок Фрайзинг, ФРГ, в противном случае в зависимости от вышеуказанных 0 факторов)

Цветение: с середины июн  (см.выше), соцветие без стебл , содержание эфирного масла (% от сухого вещества), прибли- зительно 1,0%. содержание азулена в 5 эфирном масле: по меньшей мере 15%

распад высушенного соцвети , цветковое сырье: незначительный, если урожай был собран перед раскрытием последнего трубчатого цветка, 0 диаметр в пыльцевых зерен 30 Мм,

длина сем н, приблизительно 1.25 мм число хромосом соматических клеток: 4п 36,

4.Плод

5 тыс чезернова  масса (ТКМ) сем н, 0,06-0.13 г,

5.Способность к прорастанию (KF) приблизительно 75%

6.Чистота: 94-95%

7, Другие признаки:

соотношение усушки свежий: сухой (цветок) От 5,5 до 6:

характерный ароматичный запах растительного сырь , тонкий ароматичный, типичный вкус чайного насто 

Кроме того могут иметь место следующие свойства: едина  высота растений (уравненность) с узкой зоной цветени , поэтому особенно пригодны дл  механизированного сбора урожа , большие головки, средневысокий урожай, основательно (3-5 кратно) разветвленна  форма.. .

Claims (2)

1. Способ получени  тетраплоидной ромашки Matrlcarium charnomtlla recutlta L, Acteraceae, заключающийс  в том, что у 1000-10000 растений диплоидной или Тетраплоидной ромашки определ ют в эфирном масле содержание (-)- о. -бисаболола, затем отбирают ромашки, у которых (-)-«- бисаболол представл ет со брй основной компонент эфирного масла и цветы кото-- рых, высушенные при температуре 40°С, содержат 100-250 мг% хамазулинэ, 50-400 мг% (-)- а -биеабололэ и менее 50 мг % про чих бисаолоидов, эти ромашки размножают отдельно от исходной попул ции, из этих растений отбирают по меньшей мере 10 индивидуумов , которые имеют одновременный срок цветени , величину головки цветка от 20 до 40 мм и 100-200 мг% хамазулина, 50-400 мг% (-)- а -бисаболола и менее 50 мг% прочих бисаболоидов :в расчете на сухую субстанцию, в случае необходимости отобранные дисплоидные или тетраплоид- ные растени  клонируют путем размножени  штеклингов, при котором растени  обрезают, довод т при температуре 12- 14°С до новой выгонки и полученные таким

Питательна  среда no hitsch und hitsch/Scienceiges/

образом короткие побеги высаживают при относительно высокой влажности воздуха и температуре 15°С в трофическую спесь или путем размножени  меристем, при котором вершины побегов или пазушные почки помещают на питательную среду и культивируют при температуре 15-30°С, а затем культивируют при относительно высокой влажности воздуха и температура около 15°С, полученным таким образом растени м дают отцвести в изолированных услови х в течение нескольких недель, снимают головки, которые наход тс  в стадии вегетации и 30-70% трубчатых цветов головок соцветий раскрыты, из полученного посевного материала потомство выращивают в изолированных услови х при температуре 18- 24°С, ночной температуре 12-14°С, в случае необходимости при дополнительном освещении , далее из полученных растений отбирают те растени , которые цветут в одно и тоже врем , имеют равномерное основное жилкование, величину головок соцветий от 20-40 мм, а также содержание 100-250 мг% 5 хамазулина, 50-400 мг% (-)- а -бисаболола и менее 50 мг% прочих бисаболоидов, из отобранных растений вновь получают посевной материал, в случае необходимости из этого посевного материала выращивают растени  в различных местност х и производ т, дополнительную селекцию по тем же критери м , повтор   указанные приемы 4-6 раз.

2. Способ по п. 1, от личающийс  тем, что исходную тетраплоидную ромашку получают путем обработки диплоидную ромашки химическим мутагенами при температуре 0-35°С или гамма, или рентгеновским, или ультразвуковым излучением при температуре 0-35°С 35-55°С, или 0-5°С.

5

0

0

5

0

Таблица 1

;NazMo04 x 2НаО

;CuS04x5H20

мл раствора из 7,45 г динатриевой соли этилендиаминтетрауксус- ;ной кислоты и 5,57 г FeSCM x7H20 на

миоинозита

Глицин

Никотинова  кислота Пиридоксин - HGI

Тиамин - HCI

Фолиева  кислота

Биотин

Сахароза

Готова  питательна  среда

piFCO-бакто-агар :Индолилуксусна  кислота

Питательна  среда по Murashlge Skoog, мг/л:

NH4N03

Са(ЫОз)2 х 4НаО

КЫОз

КН2Р04

MgS04x7H20

КС aFe Этилендиаминтетрауксусна  кислота

НзВОз

MnS04 x 4HaO ZnSCM x 7H20

KI

Индолилуксусна  кислота Фурфуриладенин

Тиамин Никотинова  кислота

Продолжение табл. 1

0.25 0.025

000мл 100

2

5

0,5 0,5 0,5 0,05 20 г

8г 0.1

Таблица 2

400 144 80 12.5 72 65 25 1.6 6,5 2,7

2,0 0,1 0.1 0,5

Пиридоксин

Глицин

Миониозит

Гидролиз казеина

Сахароза Очищенный агаровый порошок

Продолжение табл. 2

0.5

2,0

100

1000

2%

1%