RU1792356C - Способ получени биологически активных веществ элеутерококка колючего ЕLеUтнеRососсUS SеNтIсоSUS RUpR. ет МахIм. - Google Patents

Abstract

Использование: биотехнологи , медицина . Сущность изобретени : биологически активные вещества элёутёрЬкокка колючего получают из биомассы, полученной и выращиваемой в два этапа на модифицированной питательной среде Мурасиге-Скуга. 3 табл. Ч- Ё

Description

Изобретение относитс  к биотехнологии и касаетс  способа получени  культуры ткани элеутерококка колючего, продуцирующей биологически активные вещества - фёнольные гликозиды (элеутерозиды), используемые в медицине в качестве общести- мулирующих препаратов, обладающих адаптогенным действием.

Известны способы получени  биологически активных веществ из культивируемых, клеток растений. Однако получаема  на искусственных питательных средах клеточна  биомасса накапливает, как правило, значительно меньше биологических веществ, чем это свойственно растени м в природе. В большинстве случаев спектр биологически активных вещества, идентифицируемых в культивируемых клетках, также резко отличаетс  от такового в исходных растени х.

Существуют различные способы получени  продуктивных клеточных культур. Свод тс  они чаще всего к подбору оптимальных условий культивировани  и подбору оптимальных составов питательных сред. Дл  элеутерококка такие способы не разработаны .

Цель изобретени  - разработка способа получени  культуры ткани эутерококка колючего , биомасса которой накапливает фе- нольные гликозиды (элеутерозиды), свойственные интактному растению.

Способ состоит , что культуру тканей элеутерококка получают на питательной среде Мурасиге-Скуга, дополненной 1 мг/л 2,4-Д и 0,1 мг/л кинетна, и в дальнейшем выращивают в пересадочной культуре на агаризованной либо жидкой питательной

XI

ю

N3 СО СЛ Qs

СО

среде Мурасиге-Скуга, дополненной 4 мг/л а- НУК и 1 мг/л БАП.

Пример. Различные части молодых листьев, стеблей или корней после поверхностной стерилизации общеприн тыми методами высаживают на питательную среду Мурасиге-Скуга, дополнительно содержащую 1 мг/л 2,4-Д и 0,1 мг/л кинетина. Пробирки или колбы с высаженными в асептических, услови х первичными эксплантатами перенос т 6 термостатированное темнрҐ г)С)Ме щеДие (t 24-28°C, относительна  влажность - 70-80%). Через 30-50 суток на эксплантатах по вл етс  каллус. На средах, содержащих другие концентрации ауксина и цитокинина каллусо- обрэзование не происходило (табл.1).

Полученные каллусы характеризуютс  медленным темпом роста и имеют коричневый цвет. С целью повышени  темпа роста каллуса и получени  пассируемой продуктивной культуры ее перенос т в жидкую или агаризованную питательную среду Мурасиге-Скуга , дополненную 4 мг/л а -НУК и 1 мг/л БАП. На других типах питательных сред пассируема  культура характеризуетс  более медленным темпом роста и темным цветом (табл.2).

Биомассу, полученную указанным способом , на 30-40 сутки роста отдел ют от питательной среды, высушивают до воздушно-сухого состо ни  при t и определ ют в ней наличие фенольных гликози- дов (элеутерозидов). Результаты хроматог- рафическогр анализа показывают наличие в полученной биомассе всех главных элеутерозидов , свойственных фармакопейному экстракту (табл.3).

Количественный анализ показал, что в 1 г сухой биомассы культивируемых клеток элеутерокохка содержитс  10,5 мг фенольных гликозидов и 167 мкг элеутерозида В. Продуктивность культуры тканей элеутеро- кокка по фенольным гликозидам и элеутеро- зиду В составл ет, соответственно, 116 мг и 1,47 мг на 1 л питательной среды на 20-е

сутки роста культуры.

Фор м у ла изобретени  Способ получени  биологически активных веществ элеутерококкз колючего

Eleutherococcus senticosus Rupr. et Maxim., включающий индукцию роста л выращивание биомассы культуры ткани на модифицированной питательной среде Мурасиге-Скуга и получение целевого про:

дукта, отл ича ю щийс тем, что индукцию роста биомассы провод т на питательной среде в присутствии 1 мг/л 2,4 Д и 0,1 мг/k кинетина, а выращивание биомассы осуществл ют в жидкой или на агазированной питательной среде в присутствии 4 мг/л а - нафтилуксусной кислоты и 1 мг/л 6-бензи- ламинопурина.

35Т а б л и ц а 1 Каллусообразование элеутерококка колючего на разных типах питательных сред

Примечание: - образование первичного каллуса - отсутствие каллусообразовани 

Таблицэ2

Темп роста кульивируемых клеток элеутерококка колючего на разных типах питательных сред

Примечание

Темп роста обозначен - отсутствие роста;

+ увеличение биомассы за пассаж не более чем в 2 раза; ++увеличение биомассы за пассаж не менее чем в 2,5 раза.

Таблица 3

Хроматографический анализ содержани  элеутерозидов в биомассе культивируемых

клеток

Продолжение табл.3