RU1772762C - Способ прогнозировани течени звенной болезни - Google Patents

Abstract

Изобретение относитс  к области медицины , в частности гастротерапии. Целью изобретени   вл етс  повышение точности прогнозировани  характера течени   звенной болезни. Это достигаетс  дополнительным определением у больных  звенной болезнью с наличием Compylobacter Pylori цитохимически в лимфоцитах активности дегидрогеназ и посто нной реакции торможени  миграции лейкоцитов с тканевыми антигенами. При снижении уровн  активности сукцинатдегидрогеназы относительно нормы в 1,5 раз, повышении уровн  активности альфа-глицерофосфатдегидрогеназы в 2,3 раза и величине индекса миграции лейкоцитов ниже 0.65 прогнозируют т желое течение  звенной болезни

Description

с/

С

Изобретение относитс  к области медицины , в частности, к гастроэнтерологии, и может быть использован дл  определени  дальнейшего характера течени   звенной болезни (ЯБ).

ЯБ, относ сь к наиболее часто распространенным заболевани м желудочно-кишечного тракта, чаще всего поражает лиц молодого, наиболее трудоспособного возраста . Заболевание носит хронический рецидивирующий характер Результатом этого  вл етс  инвалидизаци  больных и большие социально-экономические потери. 8 последнее врем  наблюдаетс  отчетлива  тенденци  к росту заболеваемости ЯБ, особенно среди лиц молодого возраста В св зи с этим разработка способа прогнозировани  дальнейшего течени  ЯБ представл ет большую практическую значимость, поскольку позвол ет подбирать адекватную терапию и выдел ть группы риска.

Известен способ прогнозировани  течени  ЯБ, основанный на выделении из слизистой оболочки желудка и 12-перстной кишки.

Указанный способ не может быть использован дл  прогнозировани  т жести течени  ЯБ, поскольку в группу больных, у которых вы вл ютс  СР, попадают лица лишь с симптомами желудочной диспепсии но без  звенного дефекта, что существенно снижает точность про ноза.

Известен также способ прогнозировани  т жести течени  ЯБ, прин тый нами за прототип, основанный на оценке метаболической активности лимфоцитов крови путем цитохимического определени  активности сукцинатдегидрогеназы (СДГ) и альфа-глицерофосфэтдегидрогеназы (альфаТФДГ) митохондрий лимфоцитов,

Недостатком данного способа  вл етс  его невысока  точность.

Кроме того, дегидрогеназна  активность лимфоцитов крови соответствует т жести течени  заболевани  на момент обострени , но не указывает на дальнейший прогноз ЯБ.

Целью предполагаемого изобретени   вл етс  повышение точности прогнозировани  течени  ЯБ.

Способ осуществл етс  следующим образом .

Iэтап - выделение СР из биоптатов СО желудка и 12-перстной кишки.

До начала лечени  и после рубцевани   звенного дефекта больным ЯБ утром натощак провод т ЭГДС с прицельной биопсией антрального отдела желудка и 12-перстной кишки (не менее 3 фрагментов из каждого участка). Полученные при биопсии фрагменты СО помещают в стерильные одноразовые пробирки с крышкой обьемом 1 мл, заполненные стерильным изотоническим раствором NaCI, и доставл ют в лабораторию не позднее 1 ч с момента проведени  биопсии. После этого с одним из фрагментов из каждого участка провод т тест на уреазопозитивность: фрагмент помещают в пробирку с 10,0 мл индикаторной смеси, содержащей мочевину и вещество-индикатор При наличии в биоптате СО СР рН среды мен етс  за счет разлож-ени  кампилобактери ми мочевины на аммиак и СОа. и смесь окрашиваетс  в красный цвет. Результаты теста оцениваютс  через 30 мин, 4, 8. 12, 16 и 24 ч. Тест считаетс  положительным при прохождении реакции не позже 4 ч.

Следующим этапом  вл етс  микроскопи  мазка биоптата (один фрагмент из каждого участка) с окрашиванием препарата по Граму дл  вы влени  спиралевидных микроорганизмов .

Далее провод т высевание микроорганизмов в микроаэробных услови х при содержании кислорода 5-10%. температуре 35-37°С и оптимальном значении рН от 5,5 до 8,5. Средой  вл етс  шоколадно-кров - ной агар. После этого проводитс  повторна  микроскопи  выращенной культуры микрооганизмов (окраски препаратов по Граму) дл  их окончательной идентификации

I1этап - определение дегидрогеназной активности лимфоцитов.

Дл  исследовани  беретс  свежеприготовленный мазок крови (утром натощак до начала лечени  и после рубцевани   звенного дефекта), который высушиваетс  на воздухе и затем в течение 30 с. фиксируетс  в фиксаторе (раствор 60% ацетона с трило- ном Б). После этого мазок дважды промываетс  в дистиллированной воде и высушиваетс  на воздухе).

Приготавливаетс  инкубационна  среда , состо ща  из 10 мл 9,2 М р-ра фосфатного буфера с рН 7,2-7,4, 10 мл

0 дистиллированной воды с растворенными в ней 13 мг пара-нитратетразоли  фиолетового , 20 мл дистиллированной воды с добавлением к ней 15 мг трилона-Б, общий обьем инкубационной среды равен 40 мл со сред5 ней рН 7,2-7,4.

Дл  вы влени  активности ферментов к 40 мл инкубационной среды прибавл ют 540 мг сукцината а (вы вление активности альфаТФДГ), мазок опускаетс  в один из

0 растворов и выдерживаетс  в нем в течение 2 ч при , после чего промываетс  водой и высушиваетс  на воздухе.

Дл  прокрашивани   дер мазок опускаетс  на 10-15 мин в 2%-ный раствор мети5 левого зеленого, промываетс  проточной водой и фиксируетс  в парах формалина в течение 30 мин.

После этого производ т световую микроскопию мазка (х40)-с подсчетом числа гра0 нул формазина в 50 клетках и дел т их на подгруппы с числом гранул от 0 до 4, 5-9, 10-14 и т.д.

Дл  построени  гистограмм распределени  лимфоцитов с различной активностью

5 СДГ и альфа-ГФДГ провод т определение средней активности фермента в указанных подгруппах и среднего количества лимфоцитов с определенной активностью фермента (М+) с вычислением достоверности

0 различи  (Р).

Дл  определени  активности СДГ и альфа-ГФДГ готовитс  не менее 2 мазков от каждого больного

111 этап - постановка реакции тормо5 жени  миграции лейкоцитов (РТМЛ).

Предварительно заранее производили выделение антигенного материала слизистой оболочки 12-перстной кишки, дл  чего после тщательного отмывани  из кишечни0 ка недоношенного эмбриона тщательно выдел ли СО и гомогенизировали с физиологическим раствором в соотношении 1:1, смесь подвергали дробному центрифугированию в течение 1 ч при 105 000 об/мин.

5 Перевод антигена в растворимое состо ние осуществл ли путем добавлени  папаина из расчета 0,1 мг на 1 мл супернатанта. Смесь выдерживали в термостате при температуре 37°С в течение 1 ч, центрифугировали при 88 700 об/мин и разгон ли на колонке с

сефадексом С 200, после чего отбирались фракции с максимальным содержанием белка (определ ли по методу Лоури). После диализной очистки и лиофилизации фракции использовались в концентрации 250 гам/мл, поскольку несцпецифическое торможение миграции при постановке РТМЛ у здоровых лиц наблюдалось при концентрации антигена 300 гам/мл.

Постановка РТМЛ осуществл лась двухкратно - до начала лечени  и после рубцевани   звенного дефекта. Пластиковые одноразовые чашки Петри диаметром 100 мм заливали 3% агаром Дифко, приготовлен ом на физиологическом растворе (рН 7.3) с добавлением 100 ЕД/мл пенициллина и 10 мгк/мл стрептомицина. Толщина сло  агара составл ла 2 мм. После застывани  в слое агара пробойником выбивали лунки диаметром 2,5 мм, в которые вносили побмкл лейковзвеси(1,5 млн клеток)и5мкл раствора антигена (опыт) или среды 199 (контроль). После инкубации чашек при 37°С в течение 24 часов агаровые блоки фиксировали 10 %-р-ром формалина (4 часа), осторожно снимали, чашки промывали дистиллированной водой и высушивали. Результат учитывали путем отбрасывани  изображени  полей миграции клеток на бумагу . Индекс миграции (ИМ) определ ли отношением средних величин площадей миграции в опыте и контроле по формуле:

им-Д1 -Д1 .

Д2-Д22

где Дч - средний диаметр 4 зон миграции в опыте;

Д2 - средний диаметр 4 зон миграции в контроле;

Д1 - средний диаметр 4 центральных лунок в опыте;

Д2 - средний диаметр 4 центральных лунок в контроле.

Контрольные и опытные исследовани  проводили в четырех параллельных лунках.

Нормы определившихс  показателей были отработаны на 20 здоровых добровольцах и составили: ИМ 0,81-1,21; СДГ 20,00 ± 10; альфа - ГФДГ 6.90 ± 0,06.

П р и м е р 1. Больной Г., 46 лет, инженер , и/б № 28690, находилс  в гастроэнтерологическом отделении с 24,11.87 по 23.12.87 с диагнозом:  звенна  болезнь желудка в стадии обострени .

Из анамнеза известно, что  звенной болезнью желудкз страдает в течение 15 лет с ежегодными (2-3) обострени ми. Насто щее обострение длитс  2 недели. Лекарственное лечение не производилось. Обьек- тивно: состо ние при поступлении удовлетворительное , кожные покровы и слизистые оболочки обычной окраски, периферические лимфоузлы и щитовидна  железа не увеличены. Аускультативно дыхание везикул рное . ЧД- 16 в мин. Тоны сердца приглушены , ритм правильный. АД - 135/75 мм рт.ст. ЧСС - 72 в мин. Живот пальпатарно

0 м гкий, болезненный в эпигастрии. Печень и селезенка не пальпируютс , перкуторно не увеличены. Стул ежедневный, оформленный , обычной окраски. ЭГДС:  зва угла желудка , см, умеренна  гипереми  в

5 указанной зоне. Луковица 12-перстной кишки без изменений. Результаты РТМЛ с кишечным антигеном: ИМ 0,41. СР вы влены всеми трем  методами в биоптатах из ант- рального отдела желудка. Дегидрогеназна 

0 активность лимфоцитов: СДГ- 12,8, альфа - ГФДГ - 16,9. После рубцевани   звенного дефекта СР в биоптатах антрального отдела сохран лись, ИМ в РТМЛ с кишечным антигеном составил 0,59. Активность СДГ - 13,4,

5 альфа - 15,8. Таким образом, у больного ЯБ с наличием в слизистой оболочке антрального отдела СР до начала лечени  и после рубцевани   звенного дефекта наблюдалось снижение уровн  активности СДГ с

0 1,56 и 1,49 раз соответствен но и повышение уровн  активности альфаТФДГ в 2,40 и 2,30 раза соответственно. Сохран лась сенсибилизаци  лимфоцитов к кишечному антигену , Прогноз в данном случае

5 неблагопри тный.

П р и м е р 2. Больной К.. 45 лет, водитель и/б № 23774, находилс  в гастроэнтерологическом отделении с 2.10.87 по 23.10.87 с диагнозом:  звенна  болезнь 12-перстной

0 кишки в стадии обострени .

Из анамнеза известно, что  зва вы влена впервые в амбулаторных услови х при ЭГДС 2 недели назад ( зва задней стенки луковицы 12-перстной кишки 0,5 см с пери5 ульцеровным отеком). Объективно: состо ние при поступлении удовлетворительное. Телосложение нормостеническое, кожные покровы и слизистые обычной окраски, периферические лимфоузлы и щитовидна  же0 леза не увеличены. Над гелкими аускультативно дыхание везикул рное. ЧД - 16 в мин. Тоны сердца звучные, ритм правильный . АД - 130/70 мм рт.ст. ЧСС - 74 в мин. Живот правильной формы, пальпатор5 но-болезненный в эпигастрии. Печень у нижнего кра  реберной дуги, селезенка не увеличена. Наличие СР установлено в ант- рал ьном отделе желудка (до начала лечени ). Активность СДГ составила 18,7. альфаТФДГ - 6 5 ИМ в РТМЛ с кишечным

антигеном 0,89. После рубцевани   звенного дефекта (лечение холиволитиками, витаминами , антацидами) СР в биоптатах обнаружено не было. РТМЛ с кишечным антигеном была по-прежнему отрицательной. Активность СДГ-19,1 альфа-ГФДГ - 7,0. Таким образом, у больного впервые вы вленной  звой луковицы 12-перстной кишки и отсутствием в слизистой оболочке желудка и 12-перстной кишки СР активность СДГ при обострении снизилась в 1,06 раз, а аль- фа-ГДФГ повысилась в 1.06 раз. После рубцевани   звы дегидрогеназна  активность также оставалась практически нормальной. Прогноз в данном случае благопри тный.

П р и м е р 3. Больной Ф., 37 лет, служащий , и/б № 29574, находилс  в гастроэнте- ролическом стационаре, с 3.12.87 по 13.1 .88 с диагнозом:  звенна  болезнь 12- перстной кишки в стадии обострени . Из анамнеза известно, что  звенной болезнью 12-перстной кишки страдает в течение 16 лет, с ежегодными осенне-весенними обострени ми . Насто щее обострение длитс  1 мес ц. Рецидив заболевани  верифицирован в амбулаторных услови х при ЭГДС ( з- ва на передней стенке луковицы 12-перстной кишки 0,5 см и на верхне-за- дней 0,4 мм, отек и гипереми  слизистой оболочки). При поступлении состо ние удовлетворительное, питание понижено, кожные покровы и видимые слизистые бледные ,  зык обложен густым белым налетом. Живот при пальпации м гкий, выраженна  болезненность при пальпации в элигастрии справа. Печень и селезенка не пальпируютс . СР до начала лечени  и после его окончани  не были вы влены ни в одном из отделов желудка и 12-перстной кишки. РТМЛ с кишечным антигеном составил до начала лечени  ИМ 0,56, после ИМОО, 81. Активность СДГ до начала лечени  - 18,2, после окончани  - 18,4, альфа-ГФДГ - 7,8 и 7,5, соответственно.

Таким образом, у больного с т желым течением ЯБ СР в слизистой оболочке обнаружены не были. Активность СДГ снизилась до начала лечени  относительно нормы в 1,09 раз, после лечени  - в 1,8 раз, активность альфа - ГФДГ повысилась в 1,13 и 1,08 раз соответственно. Несмотр  на длительный  звенный анамнез и частые обострени , функциональна  активность лимфоцитов и их энергообмен у данного больного достаточно сохранны, СР не вы влено . Это делает прогноз в данном случае благопри тным.

Точность предложенного способа 77%, Это означает, что из 40 обследованных больных ЯБ с т желым течением, про вл вшимс  длительным  звенным анамнезом,

частыми рецидивами и короткими периодами ремиссии с наличием в слизистой оболочке желудка или 12-перстной кишки СР активность СДГ была снижена относительно нормы в 1,5 раз и более, а активность

альфа-ГФДГ повышена относительно нормы в 2,3 раза и более у 31 больного (77,5%), что сопровождалось снижением ИМ в РТМЛ с кишечным антигеном ниже 9,65. после рубцевани   звенного дефекта СР сохранились у 30 больных (75%), однако дегидрогеназна  активность и функциональна  активность лимфоцитов оставались измененными . Данным больным необходимо проведение индивидуально подобранной

терапии, направленной в первую очередь на элиминацию микроорганизмов и стимул цию местных защитных механизмов. Терапи  должна быть более длительной, чем у остальных больных, проводитс  сочетанием

препаратов различных патогенетических групп, сочетатьс  с длительной поддерживающей терапией после рубцевани   звенного дефекта, а в р де случаев - с хирургическим лечением.

Таким образом, использование предлагаемого способа прогнозировани  т жести течени   звенной болезни позвол ет до начала проведени  терапии прогнозировать дальнейший характер течени  заболевани ,

целенаправленно индивидуально подбирать терапию и корректировать ее в дальнейшем после рубцевани   звенного дефекта.

40

Claims (1)

1. Формула изобретени 

   Способ прогнозировани  течени   звенной болезни включающий определение сукцинат- и а -глицерофосфатдегидрогеназной активности лимфоцитов крови, о т- личающийс  тем, что, с целью повышени  точности способа дополнительно исследуют и реакцию торможени  миграции лейкоцитов и определ ют наличие

   Campylobacter Pylore в биоптате слизистой оболочки желудка и при снижении уровн  активности сукцинатдегидрогеназы в 1,5 раза , повышени  уровн  активности а. -гли- церофосфатдегидрогеназы в 2,3 раза

   относительно нормы и величине индекса миграции лейкоцитов ниже 0,65 прогнозируют т желое течение заболевани .