RU1768641C - Способ вы влени GRероNема раLLIDUм - Google Patents

Abstract

Изобретение относитс  к медицинской микробиологии и может быть использовано при диагностике сифилиса. Цель изобретени  - повышение точности способа: Дл  вы-  влени  возбудител  сифилиса исследуемый материал помещают в камеру, выполненную из полиакриламиднсго гел  и обеспечивающую анаэробные услови , в которую затем ввод т питательную среду, содержащую в равных объемных соотношени х плазмол и 1-2%-ный раствор биологически активного концентрата сыворотки молока, полученного путем ферментативного гидролиза молочной сыворотки смесью микроорганизмов Streptococcus lactis 121/4, Streptococcus cremorls 244 хб/1, Lactobacterlum casei 18, Acetobacter aceti РД-10, Lactobacterium bulgaricum в пропорци х 1:1:2:2:1. Камеры инкубируют в течение 48 часов при 37°С с посто нным микроскопическим контролем посевом. Способ позвол ет вы вл ть возбудитель в тех случа х, когда серологический и микроскопический методы исследовани  не эффективны .

Description

Изобретение относитс  к медицинской микробиологии и может быть использовано при диагностике сифилиса,

Цель изобретени  - повышение точности способа.

Способ иллюстрируетс  следующими примерами.

Пример 1. Больной К, поступил о стационар с подозрением на сифилис. В стационаре больной всесторонне обследован: общий анализ крови и мочи без патологии, серологические реакции (реакци  Вассер- мана, РИФ, РИБТ) отрицательные. Общеприн тые , ежедневные исследовани  (в течение 6 дней) тканевой жидкости из эрозии на половом члене на бледную трепоне- му в темнополееом микроскопе не

позволили обнаружить возбудител  сифилиса . Исследовани  пунктата увеличенного пахового лимфоузла также не позволили обнаружить бледные трепонемы. На 7-й день обследовани  у больного параллельно с исследованием тканевой жидкости из зрозии под микроскопом в темном поле зрени  проведена инокул ци  исследуемого материала е углубление камеры из полиакрила- мидного гел .

Дл  изготовлени  микрокамер используют предметные и покровные стекла, геле- вые блоки и герметизирующа  замазка. С этой целью на предметное стекло кладут заранее приготовленный гелевый блок размером 5x5 - 10x10 мм с углублением 2x2 - бхб мм. В углубление гелевого блока микроVJ

О 00

о

пипеткой внос т материалы дл  исследовани  на бледные трепонемы и накрывают блок покровным стеклом. Покровное стекло скрепл ют с предметным стеклом герметизирующей замазкой, оставл л лишь небольшое отверстие ( г 3-4 мм) дл  заполнени  камеры питательной средой. Затем в камеру микропипеткой ввод т жидкую питательную среду, в состав которой входит смесь в объемном соотношении 1:1 плазмола и 1%- ный раствор биологически активного концентрата сыворотки молока, полученного путем ферментативного гидролиза молочной сыворотки смесью микроорганизмов Streptococcus lactls 121/4, Streptococcus cremorls 244 x 6/1, Lactobacterium easel 18, Acetobacter aceti РД-10, Lactobacterlum bulgaricum в пропорции 1:1:2:2:1, после чего закрывают герметизирующей замазкой отверстие , через которое вводитс  питательна  среда. Таким образом в камере создаютс  анаэробные услови . Камеру помещают в термостат при температуре +35° - 37°С и периодически провод т диагностический контроль в течение 48 часов содержимого микрокамеры под микроскопом в темном поле зрени  или в фазовоконтраст- ном микроскопе на наличие возбудител  сифилиса Дл  удобства наблюдени  камеру можно помещать в термостатный столик, который устанавливают на креплении предметного столика микроскопа. Диагностическое бэктериоскопическое исследование посева микрокамер необходимо проводить периодически в течение двух дней, т.к. тканевые бледные трепонемы дел тс  через каждые 30-33 часа. Вместе с тем необходимо проводить тщательное бактериоскопиче- ское исследование содержимого микрокамер и в первые часы после посева, поскольку труднодиагностируемые формы устойчивого выживани  трепонем-а-формы, цисты - в созданных благопри тных услови х могут реверсировать в обычные спирзле- видные формы, которые возможно обнаружить при микроскопическом исследовании в темном поле. Через 36 часов от момента посева исследуемого материала при микроскопии вы влены обычные спиралевидные бледные трепонемы с характерными дл  них видами движений, равномерными завитками и другими морфологическими свойствами, характерными дл  бледных трепонем. Больному поставлен диагноз: сифилис 1 серонегативный и назначено специфическое лечение.

П р и м е р 2. Больной А. обратилс  к врачу по новому эрозии на половом члене. Диагноз - эрозивный баланопостит. Стандартные серологические реакции на сифилис на момент обследовани  отрицательные . В отдел емом из эрозии и пунктате лимфоузла при обычной темнополевой микроскопии бледные трепонемы не обнаружены в течение 3-х дней исследовани . Начина  с 4-го дн  обследовани  больному параллельно с общеприн тым методом исследовани  проведена инокул ци  исследуемого материала из эрозии в микрокамеру,

0 заполненную питательной средой в соответствии с примером 1, но с использованием 2%-го гидролизата с последующим созданием анаэробных условий инкубировани  и помещением микрокамер в термо5 стат при +37°С. Проведенный микроскопический диагностический контроль позволил через б ч после проведенного посева обнаружить в посевном материале типичные бледные трепонемы с

0 характерными дл  них морфологическими свойствами и поставить больному диагноз: Сифилис 1 серонегативный и назначить специфическое лечение.

Таким образом, использование способа

5 позвол ет повысить способ диагностики сифилиса в тех случа х, когда бактериоскопи- ческий и серологический методы дают отрицательные результаты.

Данный способ может также использо0 ватьс  дл  исследовани  цикла развити  бледных трепонем, стадийности образовани  их форм, условий, при которых они воз- никают, и изучени  действи  антибиотикотерапии в системе In vivo,

5 Пример 3. В отмытые в физиологическом растворе камеры размером 1 см х 1 см х 0,3 см из полиакриламидною гел  через шприц или пастеровской пипеткой ввод т в имеющиес  одну или более полостей путем

0 прокола исследуемый материал, содержащий бледные трепонемы. Затем камеры им- плантируютвнутрибрюшинно

лабораторным животным (кроликам, белым мышам), а через определенное врем  извлекают из организма и подвергают микроско5 пированию. При необходимости из полостей камеры пастеровской пипеткой можно извлекать пробы дл  микроскопии под покровным стеклом или других целей, а камеру повторно имплантировать в орга0 низм лабораторного животного.

Формул а изо бретени   Способ вы влени  Treponema pallldum в исследуемом клиническом материале, о т личающийс  тем, что, с целью повыше5 ни  точности способа, исследуемый материал инокулируют в жидкую питательную среду, содержащую в равных объемных соотношени х плазмол и 1-2%-ный раствор биологически активного концентрата сыво

ротки молока, полученного путем фермента-acetl РД-10, Luctobacterlum bulgarlcum в сотивного гидролиза молочной сыворотки. отношении 1:1:2:2:1, и инкубацию посевов

смесью микроорганизмов Streptococcusпровод т в анаэробных услови х в микрокамеtactts 121/4, Streptococcus cremoris 244 ре, выполненной из полиакриламидного гел . хб/1, Lactobactedum easel 18, Acetobacter