RU1517545C - Способ получени иммуносорбента - Google Patents
Способ получени иммуносорбентаInfo
- Publication number
- RU1517545C RU1517545C SU4138744A RU1517545C RU 1517545 C RU1517545 C RU 1517545C SU 4138744 A SU4138744 A SU 4138744A RU 1517545 C RU1517545 C RU 1517545C
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- immunosorbent
- protein
- immunoglobulin
- concentration
- aminopropylsilochrome
- Prior art date
Links
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Изобретение относитс к медицине, в чааности к иммумохимик и может быть иаюльэовано дл выделе м с помощью аффимюй хроматографии иммуноглобутмна G, а также FC-фрагментов и иммунных комплексов из крови и других биолсгичес- кихжидкоаей. С целью повышени емкоаи имму- носорбента по св зыванию иммуноглобулина G аминопропилсилохром активируют 12.0 13,0%-ным раствором глутарового альдегида, ко- валентио св зывают с ним бело А из Startiykxxxxus aureus при концентрации последнего в реакционной смеси 3.0 - 6,0 мг/мл с последующей обработкой и промывкой иммуносорбента извеаными способами В результате получают иммуносорбент с емкоаью по иммуноглобулину 23 - 32 мг/г сорбента который может быть использован дл выделени иммуноглобулинов не менее 20 раз1
Description
Изобретение относитс к медицине, в час ииэсти к иммунохимии, и может быть использовано дл выделени с помощью аффинной хроматографии иммуноглобулина G, а также FC-фрагментов и иммунных комплексов из крови и других биологических жидкостей.
Основными характеристиками иммуно- сорбента вл ютс его сорбционна емкость по иммуноглобулину G, устойчивость X воздействию микроорганизмов и ферментов , стабильность в процессе многократного использовани .
Цель изобретени - повышение сорбци- онной емкости иммуносорбента по иммуноглобулину G.
Поставленна цель достигаетс тем, что согласно способу получени иммуносорбента путем активации носител , промывки его буферными растворами, ковалентного св зывани белка А из Staphylococcus аигецз с активированным носителем и промывки полученного иммуносорбента буферными растоо рами, в качестве носител используют аминопропилсилохром, который активируют глутаровым альдегидом при концентрации 12-13%, а ковалентное св - зывание белка А с активированным носителем провод т при концентрации его 3-6 мг/мл с последующей обработкой иммунэ- сорбента и.эвестными приемами.
Предлагаемый способ выполн етс сле- ду1са1и 1 образом и включает в себ несколько jTanoB,
1. Промывка аминопрспилсилохрома 1,0 М раствором NaCI и дистиллированной подои.
. Активаци аминопропипсилохрома (производство Олаймского завода химреак- 1ивов) глутаровым альдегидом при концентрации i2-13% Бтечение2ч при комнатной температуре и рН 8,0.
3.Промыака активированного аминоп- ропилсипохрома дистиллированной водой и 0,1 М К-фосфатным буфером, рН 8,0.
4.Ковалентное св зывание белка А г. активированным аминопропилсилохромом с концентрацией белка А в реакционной смеси З-б мг/мл в течение 16-20 ч при комнатной температуре и рН 8,0.
5.Промывка иммуносорбеита 1 М раствором NaCI и 0,1 М К-фосфатным буфером, рЧ 7.0.
5 Восстановление свободных альдегидных грурп и стабилизаци св зи между белком А и силохромом обработкой иммуносорбента 0,1 М раствором NaBH) в течение 30 мин при 2-4 С и рН 7,0.
7. Промывка иммуносорбента последовательно растворами 1,0 М NaCI, 0,1 М Кфосфатного буфера, рН 7,0, 0.1 М уксусной кислоты, рН 3,0, и 0,1 М К-фосфатного буфера , рН 7,0.
Полученный иммуносорбент имеет сор5 бционную емкость по иммуноглобулину G 23-32 мг/мл и может быть использован не менее 20 раз дл выделени иммуноглобулинов без существенного изменени его емкости .
0 Пример 1. Активаци аминопропил- силохрома глутаровым альдегидом.
10 г аминопропилсилохрома последовательно промывают 1,0, М раствором NaCI и дистиллированной аодой, а затем внос т а
5 100 мл 12,5%-ного раствора глутарового альдегида, приготовленного в 0,075 М К- фосфатном буфере, рН 8,0. Реакционную смесь инкубируют на качалке в течение 2 ч при комнатной температуре. Активирован0 ный аминопропилсилохром промывают дистиллированной водой дл удалени глутарового альдегида, а затем 0,1 М К-фосфатным буфером, рН 8,0.
2. Иммобилизаци белка А.
510 г активированного аминопропилсилохрома внос т в 100 мл 0,1 М К-фосфатного буфера, рН 8,0, содержащего белок А с концентрацией 4,5 мг/мл, и смесь инкубируют на качалке при комнатной температуре в
0 течение 17 ч. Иммуносорбент промывают 1,0 М раствором NaCI и 0,1 М К-фосфатным буфером, а затем восстанавливают свободные альдегидные группы путем инкубации иммуносорбента 0,1 М раствором NaBH,
5 приготовленным на 0,1 М Na-фосфатном буфере , рН 7,0, в течение 30 мин при 2-4°С. Иммуносорбент промывают последовательно растворами 1,0 М NaCI, О 1 М К-фосфатного буфера, рИ 7,0.0,1 М уксусной кислоты,
0 рН 3.0, и 0,1 М К-фосфатного буфера, рН 7,0. Емкость полученного иммуносорбента по св зыванию иммуноглобулина G из свиной сыворотки составила 24,8 мг/г. Иммуноглобулин G был гомогенен при диск-злектрофо45 резе в 7,5%-ном полиакриламидном геле.
Пример 2. 1, Активацию аминопропилсилохрома провод т согласно примеру 1 при концентрации глутарового альдегида 50 13,0% в реакционной смеси.
2. Иммобилизацию белка А на аминоп- ропилсилохроме провод т согласно примеру 1 при концентрации белка А в реакционной смеси 6,0 мг/л. Емкость имму- 55 нссорбента по свиному иммуноглобулину G составила 31,7 мг/г. Иммуноглобулин G был гомогенен при дискзлектрофорезе в 7,5%- ном полиакриламидном геле.
Примерз. 1. Активацию аминопропилсилохрома провод т согласно примеру 1
/
при концентрации глутарового альдегида 12.0% в реакционной смеси.
2. Иммунобилизацию белка А на ами- нопропилсилохроме провод т согласно примеру 1 при концентрации белка А в ре- акционной смеси 3,0 мг/мл. Емкость имму- носорбента по свиному иммуноглобулину G составила 23,3 мг/г. Иммуноглобулин G был гомогенен при диск-электрофорезе в 7,5%- ном полиакриламидном геле.
Claims (1)
- Преимуществами способа вл ютс : упрощение процесса за счет исключени из него дефицитного носител - карбо1 Формула изобретениСПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММУНОСОР БЕНТА. включающий активацию носител активирующим агентом, промывку буферными растворами, ковалентное св зыва- ние белка А из Staphylococcus aureus с j ним с последующей обработкой и промывкой иммуносорбента. отличающийс тем.нилдиимидазольного производного силика- гел ;повышение емкости иммуносорбеита в 30-40 раз:расширение возможности использовани иммуносорбента дл крупномасштабного выделени иммуноглобулинов и повышени выхода иммуноглобулинов с низкой аффинностью к белку А.(56) Phnilps Т.М. at а1. J. of Chromatography, 1985. V. 327. p. 213-219.что, с мелью повышени емкости иммуносорбента , в качестве носител используют аминопропилсилохром. активацию его осуществл ют глутаровым альдегидом в концентрации 12.0 - 13.0%. а ковалентное св зывание провод т при концентрации; белка А в реакционной смеси 3.0 - 6.0 мг/мл.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU4138744 RU1517545C (ru) | 1986-10-27 | 1986-10-27 | Способ получени иммуносорбента |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU4138744 RU1517545C (ru) | 1986-10-27 | 1986-10-27 | Способ получени иммуносорбента |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU1517545C true RU1517545C (ru) | 1993-12-15 |
Family
ID=21264331
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU4138744 RU1517545C (ru) | 1986-10-27 | 1986-10-27 | Способ получени иммуносорбента |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU1517545C (ru) |
-
1986
- 1986-10-27 RU SU4138744 patent/RU1517545C/ru active
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US4168300A (en) | Method of removal of hepatitis virus | |
US4879340A (en) | Adsorbent composed of porous beads of chitosan and adsorption method using same | |
KR890001927B1 (ko) | 섬유질 헤마글루티닌의 정제방법 | |
SU1523046A3 (ru) | Способ очистки человеческого @ -интерферона | |
CN101185880A (zh) | 一种用于抗体清除的血液净化吸附剂及其制备方法 | |
EP0332323B1 (en) | Carrier for affinity chromatography immobilized with antibodies and preparation thereof | |
JPS5853757A (ja) | 免疫アフイニテイクロマトグラフイ−用吸着体及びその製法 | |
CA1101847A (en) | Process for the concentration of a placenta-specific glycoprotein | |
RU1517545C (ru) | Способ получени иммуносорбента | |
US4232004A (en) | Antibody-specific solid phase immunoadsorbent, preparation thereof, and antibody purification therewith | |
SU1600633A3 (ru) | Способ очистки белкового токсина бактерий ВоRDетеLLа реRтUSSIS | |
EP0233620B1 (en) | Use of an adsorbent for purification of blood coagulation factor viii | |
Santin et al. | Adsorption of α-1-microglobulin from biological fluids onto polymer surfaces | |
CN100591694C (zh) | 自雁形目鸟类卵中选择性分离IgY抗体的方法及由此获得的IgY抗体 | |
JPS59118082A (ja) | アフイニテイ・クロマトグラフイによるス−パ−オキシデイツク・ジスムタ−ゼの精製法 | |
RU2736150C1 (ru) | Способ N2 получения сорбента на основе ковалентно иммобилизованного и химически модифицированного лизоцима для сорбции бактериальных эндотоксинов и сам сорбент | |
RU2736149C1 (ru) | Способ N1 получения сорбента на основе ковалентного иммобилизованного и химически модифицированного лизоцима для сорбции бактериальных эндотоксинов и сам сорбент | |
US4308204A (en) | Process for preparing the third component of the complement from human blood plasma | |
RU1780756C (ru) | Способ получени реагента дл типировани антигенов эритроцитов | |
SU1158029A3 (ru) | Способ количественного определени трийодтиронина | |
Hsu et al. | Purification of epidermidins, new antibiotics from staphylococci | |
JPS61152634A (ja) | 固定化生理活性物質の製造法 | |
Mori et al. | One-step purification of rabbit histidine rich glycoprotein by dye-ligand affinity chromatography with metal ion requirement | |
JPH0634633A (ja) | 鶏卵抗体固定化担体およびその製造方法 | |
Ayhan et al. | Protein A immobilized poly (methylmethacrylate-co-hydroxyethylmethacrylate) microbeads for IgG adsorption |