RU1426089C - Способ очистки щелочной фосфатазы - Google Patents
Способ очистки щелочной фосфатазыInfo
- Publication number
- RU1426089C RU1426089C SU864152924A SU4152924A RU1426089C RU 1426089 C RU1426089 C RU 1426089C SU 864152924 A SU864152924 A SU 864152924A SU 4152924 A SU4152924 A SU 4152924A RU 1426089 C RU1426089 C RU 1426089C
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- alkaline phosphatase
- carried out
- activity
- sorbent
- preparation
- Prior art date
Links
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относитс к биотехнологии , а именно к препаративной биохимии. Цель изобретени - повышение удельной активности щелочной фосфатазы. Способ заключаетс вхроматографической очистке, причем в качестве сорбента используют фосфоцеллюлозу, сорбцию провод т при рН 5,3-6,5, а элюцмю - 8-12 мМ Na2HP04. Выход продукта по активности 80-84%, а удельна активность 750-770 ед./мг белка.
Description
Изобретение относитс к биотехнологии , а именно к препаративной биохимии, и используетс дл получени очищенной щелочной фосфатазы животного происхождени , котора находит применение в генной инженерии, иммуногистохимических процедурах и иммуноферментном анализе, научно-исследовательской работе.
Цель изобретени - повышение удельной активности щелочной фосфатазы.
Способ заключаетс в том. что очистку препарата щелочной фосфатазы провод т на ионообменном сорбенте, причем в качестве сорбента используют фосфоцеллюлозу . сорбцию провод т при рН 5.3-6.5, а элюцию - 8-12 мМ Na2HP04. Удельна активность полученной фосфатазы достигает 750-770 ед./мг белка против 70-194 ед./мг по известным способам.
Пример 1. 15 мг препарата щелочной фосфатазы. выделенной из тонкого кишечника тюлен (20 ед./мг белка), раствор ют в 10 мл 10 мМ фосфатного буфера рН 5.3, содержащего 1 мМ хлористого магни . Раствор фермента нанос т на колонку с фосфоцеллюлозой (26x280 мги), уравновешенной буфером А, и отмывают тем же буфером до оптической плотности раствора при 280 нм, равной 0,03, Фермент элюируют 10 мМ Na2HPO/5. Ионообменную хроматографию провод т при 4°С. Скорость элюции 30 мл/ч. Фракции, содержащие ферментную активность объедин ют и вычисл ют удельную активность полученного препарата щелочной фосфатазы, котора равна 750 ед,/мг белка. Выход по активности 80%.
Пример 2,15мг препарата щелочной фосфатазы тюлен (120 ед,/мг белка) раствор ют в 10 мл 10 мМ фосфатного буфера рН 5,8, содержащего 1 мМ хлористого магни . Раствор фермента нанос т на колонку с фосфоцеллюлозой (26x280 мм), уравновешенной буфером А, и отмывают ионообмен- никтем же буфером до А280 0,03, Фермент элюируют 10 мМ NaHPG. Ионообменную хроматографию провод т при 4°С. Скорость элюции 30 мл/ч. Фракции, содержащие ферментативную активность, объедин ют и вычисл ют активность полученного препарата щелочной фосфатазы. Удельна ;1ктивLO
ю
Ю
иость равна 770 ед./мг белка. Выход по активности 84%.
Пример 3. 15 мг препарата щелочной фосфатазы тюлен (120 ед./мг белка) раствор ют в 10 мл 10 мМ фосфатного буфера рН G.5, содержащего 1 мМ хлористого магни , Раствор фермента нанос т на колонку с фосфоцеллюлозой (26x280 мм), уравновешенной буфером А, и отмывают ионообмен- ник тем же буфером до А280 0,03. Фермент элюируют 10 мМ Na2HP04. Ионообменную хроматографию провод т при 4°С. Скорость элюции 30 мл/ч. Фракции, содержащие ферментативную активность, объедин ют и. вычисл ют активность полученного препарата щелочной фосфатазы. Удельна активность равна 755 ед,/мг белка, по активности 80%,
Верхн граница рН обусловлена тем, что при рН выше 6,5 сорбируемость щелочной фосфатазы на фосфоцеллюлозе резко уменьщаетс , что используетс при элюции.
Нижн граница рН обусловлена тем, что при рН ниже 5,3 наблюдаетс быстра денатураци щелочной фосфатазы.
П р и м е р 4. 15 мг препарата щелочной фосфатазы тюлен (НПО Биолар) раствор ют в 1-0 мл 10 мМ фосфатного буфера, рН 5,8 содержащего 1 мМ (буфер А). Раствор фермента нанос т на колонку с фосфо- ;.;,е/ш1олозой (26x280 мм), уравновешенной буферам 1/1, и отмувэтт тем же буфером до АЗШ, равной 0,03. Фермент элюируют 8 мМ Ма2НР04. Ионообменную хроматографию провод т при 4°С. Скорость элюцми 30 мл/ч. Фракции, содержащие фермеитатив- К УЮ актмзность, объедин ют и аычис/т ют 3.:т лвность полученного препарата щелочной фосфзтаэы, котора равна 760 ед./мг балка,
Пример 5. 15 мг препарата щелочной фосфатазы тюлен (НПО Биолар) раствор ют в 10 10 мМ фосфатного буфера рН
5
0
0
0
5
0
5
5,8, содержащего 1 мМ MgClj, Раствор фермента нанос т на колонку с фосфоцеллюлозой (26x280 мм), уравновешенной буфером А, и отмывают тем же буфером до А280, равной 0,03. Фермент элюируют 12 мМ NaaHPO/j, Ионообменную хроматографию провод т при . Скорость элюции 30 мл/ч. Фракции, содержащие ферментативную активность, объедин ют и вычисл ют активность полученного препарата щелочкой фосфатазы, котора равна 745 ед./мг белка.
При использовании растворов NaaHPO i концентрацией ниже 8 мМ резко ухудшаетс элюци щелочной фосфатазы с сорбента. Растворы iNJa2HPO i концентрацией выше 12 мМ элюируют не только щелочную фосфатз- зу, но и р д балластных белков, что приводит к понижению удельной активности целевого продукта.
При использовании вместо фосфата натри растворов NaCt вплоть до концентрации 0,5 М не наблюдаетс какой-либо десорбции фермента.
Изобретение поэвол ет создать простой и легко масштабируемый процесс выделени и очистки щелочной фосфатазы при небольших затратах материалов, рабочего и технологического времени и сырь .
Claims (1)
- Формула изобретени Способ очистки щелочной фосфатззы, зключающий адсорбцию препарата щелочной фосфатазы на ионообг-ченном сорбенте и злюцию целевого продукта водным буферным раствором, отличающийс тем, что, с целью повышени удельной активности целевого продукта, в качестве ионообменного сорбента используют фос- фоцеллюлозу, адсорбцию провод т при рН 5,3-6,5, а элюцию осуществл ют 8-12 мМ раствором натри фосфорнокислого одно- замещенного.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU864152924A RU1426089C (ru) | 1986-11-28 | 1986-11-28 | Способ очистки щелочной фосфатазы |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU864152924A RU1426089C (ru) | 1986-11-28 | 1986-11-28 | Способ очистки щелочной фосфатазы |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU1426089C true RU1426089C (ru) | 1992-11-07 |
Family
ID=21269680
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU864152924A RU1426089C (ru) | 1986-11-28 | 1986-11-28 | Способ очистки щелочной фосфатазы |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU1426089C (ru) |
-
1986
- 1986-11-28 RU SU864152924A patent/RU1426089C/ru active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Engstrom L, Biochim, Blophls,, Acta, 1961.V. 52, p, 36. Авторское свидетельство СССР Ns 1218677, кл. С 12 N 9/16. 1984. 2 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Colowick | [11] Separation of proteins by use of adsorbents | |
| Seegers et al. | Further studies on the purification of thrombin | |
| US7351801B2 (en) | Method, use and kit for separating albumin from contaminants in a liquid | |
| CA2034826A1 (en) | Process for the production of thrombin and high purity thrombin preparations thereby obtained | |
| Danishefsky et al. | Synthesis of heparin-sepharoses and their binding with thrombin and antithrombin-heparin cofactor | |
| US4259447A (en) | Process for the production of urokinase in pure condition | |
| Andersson | Recognition of phosphate groups by immobilized aluminium (III) ions | |
| HU219828B (hu) | Eljárás K-vitamin-függő proteinek izolálására és tisztítására | |
| RU1426089C (ru) | Способ очистки щелочной фосфатазы | |
| Lascu et al. | Rapid large-scale purification of pig heart nucleoside diphosphate kinase by affinity chromatography on Cibacron Blue 3G-A Sepharose | |
| RU2186849C2 (ru) | Способ очистки тромбиноподобной протеазы из змеиного яда | |
| JPH0466559B2 (ru) | ||
| US4160697A (en) | Method for purification of crude urokinase | |
| Wood et al. | The affinity chromatography of transketolase | |
| Pogell et al. | [32] Specific elution with substrate | |
| Kothari | Fractionation of DNA on a metal ion equilibrated cation exchanger: I. Chromatographic profiles of DNA on an IR-120 Al3+ column | |
| US4308204A (en) | Process for preparing the third component of the complement from human blood plasma | |
| RU2036236C1 (ru) | Способ очистки щелочной фосфатазы из тонкого кишечника тюленя | |
| RU1554377C (ru) | Способ очистки щелочной фосфатазы | |
| JPH0260316B2 (ru) | ||
| FI65629C (fi) | Foerfarande foer isolering av mb-kreatinkinas och testfoerpackning foer detta aendamaol | |
| JPS61224996A (ja) | マウスインタ−フエロンの精製法 | |
| SU874754A1 (ru) | Способ очистки дрожжевой гексокиназы | |
| JPS61181395A (ja) | マウスインタ−フエロンの精製法 | |
| JPH0795894A (ja) | リポコルチンの精製方法 |