RS65608B1 - Inhibitori arginaze i postupci za njihovo korišćenje - Google Patents

Description

Opis

Pozadina pronalaska

[0001] Arginaza je manganski metaloenzim koji katalizuje konverziju L-arginina u ureu i L-ornitin. Postoje dva izooblika: Arginaza 1 je citosolni enzim koji se prevashodno može naći u hepatocitima gde igra ključnu ulogu u uklanjanju amonijaka putem sinteze uree, a arginaza 2, mitohondrijski enzim koji se na visokom nivou eksprimira u bubrezima uključen u proizvodnju ornitina, prekursor za poliamine i proline koji su važni za ćelijsku proliferaciju, odnosno proizvodnju kolagena.

[0002] Iako L-arginin nije esencijalna aminokiselina pošto može da se obezbedi putem obnavljanja proteina kod zdravih odraslih osoba, povećana ekspresija i sekrecija arginaza dovodi do smanjenih nivoa L-arginina kod različitih fizioloških i patoloških stanja (npr. trudnoća, autoimune bolesti, kancer). Imunološke ćelije su naročito osetljive na smanjene nivoe L-arginina. Kada su suočene sa mikrookruženjem sa malim nivoom L-arginina, T-ćelije smanjuju svoju stopu proliferacije i smanjuju ekspresiju CD3ζ lanca, IFNy i litičkih enzima, što dovodi do smanjene responsivnosti T-ćelija. Dendritske ćelije odgovaraju na uslove smanjenog nivoa L-arginina tako što smanjuju svoju sposobnost da prezentuju antigene, a ćelije prirodne ubice smanjuju proliferaciju i ekspresiju litičkih enzima.

[0003] Tumori koriste višestruke imunosupresivne mehanizme za izbegavanje imunološkog sistema. Jedan od njih je smanjenje L-arginina putem povećanog nivoa arginaze u cirkulaciji, povećane ekspresije i sekrecije arginaze od strane tumorskih ćelija, i regrutovanje mijeloidno dobijenih supresorskih ćelija koje eksprimiraju i izlučuju arginazu. Zajedno, to dovodi do smanjenja L-arginina u tumorskom mikrookruženju i imunosupresivnog fenotipa. Pokazalo se da farmakološka inhibicija aktivnosti arginaze poništava imunološku supresiju indukovanu L-argininom na životinjskim modelima. Usled toga, postoji potreba za snažnim i selektivnim inhibitorima arginaze za poništavanje imunološke supresije i ponovnu aktivaciju antikancerskog imuniteta kod pacijenata, u vidu pojedinačnog agensa, ili u kombinaciji sa terapijama koje poništavaju dodatne imunosupresivne mehanizme. WO2011133653 otkriva određena jedinjenja za istu upotrebu, i otkrivena jedinjenja su u otvorenom obliku bez azota kao supstituent prstena.

Sažetak

[0004] U nekim otelotvorenjima, otkriveni su kristalni oblici (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamida (hemijska struktura prikazana ispod) u obliku D i u obliku E:

[0005] U nekim otelotvorenjima, otkrivena je farmaceutska kompozicija koja sadrži kristalni (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7] dodekan-3-il)-3-metilbutanamid oblika D ili oblika E, i farmaceutski prihvatljiv nosač.

[0006] U nekim otelotvorenjima, otkriven je postupak lečenja karcinoma koji se sastoji od davanja subjektu kome je to potrebno kristalnog (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1 -aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamida oblika D ili oblika E.

[0007] U nekim otelotvorenjima, otkrivena je farmaceutska kompozicija za lečenje karcinoma koja sadrži kristalni (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro [4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid oblika D ili oblika E.

[0008] U nekim otelotvorenjima, otkrivena je upotreba kristalnog (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekana -3-il)-3-metilbutanamid Forme D ili Forme E u proizvodnji leka za lečenje karcinoma.

[0009] U nekim otelotvorenjima, otkriven je kristalni (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid oblika D ili oblika E, za lečenje karcinoma.

[0010] U nekim otelotvorenjima, otkriven je (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-izopropil-2,2-dimetil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-6-on (hemijska struktura prikazana u nastavku) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0011] U nekim telotvorenjima, otkriven je kristalni (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-izopropil-2,2-dimetil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza -8-boraspiro[4.7]dodekan-6-on u obliku 1.

[0012] U nekim otelotvorenjima, otkrivena je farmaceutska kompozicija koja sadrži (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-izopropil-2,2-dimetil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-6-on ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili kristalni oblik 1 i farmaceutski prihvatljiv nosač.

[0013] U nekim telotvorenjima, otkriven je metod lečenja karcinoma koji se sastoji od davanja ispitaniku efikasne količine (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-izopropil-2,2-dimetil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-6-ona ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili kristalnog oblika 1.

[0014] U nekim otelotvorenjima, otkrivena je farmaceutska kompozicija za lečenje karcinoma koja sadrži (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-izopropil-2,2-dimetil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-6-on ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili kristalni oblik 1.

[0015] U nekim otelotvorenjima, otkriven (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-izopropil-2,2-dimetil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-6-on ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili kristalni oblik 1 za lečenje kancera.

[0016] U nekim otelotvorenjima, otkrivena je upotreba (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-izopropil-2,2-dimetil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-6-ona ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili kristalnog oblika 1 u proizvodnji leka za lečenje kancera.

Kratak opis crteža

[0017]

Slika 1 ilustruje dijagram rendgenske difrakcije praha (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hydroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamida oblika D.

Slika 2 ilustruje strukturu jednog kristala (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hydroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamida oblika D.

Slika 3 ilustruje tragove diferencijalne skenirajuće kalorimetrije (DSC) i termogravimetrijske analize (TGA) (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hydroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamida oblika D.

Slika 4 ilustruje dijagram gravimetrijske sorpcije pare (GVS) (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hydroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamida oblika D.

Slika 5 ilustruje dijagram rendgenske difrakcije praha za (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-isopropil-2,2-dimethil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-6-on oblika 1.

Slika 6 ilustruje strukturu jednog kristala za (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-isopropil-2,2-dimethil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-6-on oblika 1.

Slika 7 ilustruje tragove diferencijalne skenirajuće kalorimetrije (DSC) i termogravimetrijske analize (TGA) za (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-isopropil-2,2-dimethil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-6-on oblika 1.

Slika 8 ilustruje dijagram gravimetrijske sorpcije pare (GVS) za (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-isopropil-2,2-dimethil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-6-on oblika 1.

Slika 9 ilustruje dijagram rendgenske difrakcije praha (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hydroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamida oblika E.

Slika 10 ilustruje strukturu jednog kristala (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hydroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamida oblika E.

Slika 11 ilustruje tragove diferencijalne skenirajuće kalorimetrije (DSC) i termogravimetrijske analize (TGA) (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hydroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamida oblika E.

Slika 12 ilustruje dijagram gravimetrijske sorpcije pare (GVS) (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hydroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamida oblika E.

Detaljan opis

[0018] U nekim otelotvorenjima, otkriveni su kristalni oblici (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamida (hemijska struktura prikazana ispod) u obliku D i u obliku E:

[0019] U nekim otelotvorenjima, kristalni (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid oblika D ima XRPD obrazac koji sadrži najmanje jedan pik izražen kao 2θ±0,2° na oko 7,8°. U nekim otelotvorenjima, kristalni (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid oblika D ima XRPD obrazac koji sadrži najmanje jedan pik izražen kao 2θ±0,2° na oko 19,2°. U nekim otelotvorenjima, kristalni (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid oblika D ima XRPD obrazac koji sadrži najmanje jedan pik izražen kao 2θ±0,2° na oko 15,0°. U nekim otelotvorenjima, kristalni (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid oblika D ima XRPD obrazac koji sadrži najmanje jedan pik izražen kao 2θ±0,2° na oko 7,8° ili na oko 19,2°. U nekim otelotvorenjima, kristalni (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid oblika D ima XRPD obrazac koji sadrži najmanje jedan pik izražen kao 2θ±0,2° na oko 7,8° ili na oko 15,0°. U nekim otelotvorenjima, kristalni (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid oblika D ima XRPD obrazac koji sadrži najmanje jedan pik izražen kao 2θ±0,2° na oko 15,0° ili na oko 19,2°. U nekim otelotvorenjima, kristalni (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid oblika D ima XRPD obrazac koji sadrži najmanje jedan pik izražen kao 2θ±0,2° na oko 7,8°, na oko 19,2° ili na oko 15,0°. U nekim otelotvorenjima, kristalni (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid oblika D ima XRPD obrazac koji sadrži najmanje jedan pik izražen kao 2θ±0,2° izabranih između pikova navedenih u Tabeli 1. U nekim otelotvorenjima, kristalni (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid oblika D ima XRPD obrazac koji je suštinski sličan Slici 1.

[0020] U nekim otelotvorenjima, kristalni (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid oblika D karakterisan rendgenskom difrakcijom praha sadrži pikove sa sledećim vrednostima 2θ±0,2°: 7,8, 19,2 i 15,0 stepeni. U nekim otelotvorenjima, kristalni (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid oblika D ima rendgensku difrakciju praha koja dalje sadrži pikove na 16,4, 13,1 i 13,7 stepeni 2-teta ±0,2°.

[0021] U nekim otelotvorenjima, kristalni (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid oblika D karakterisan rendgenskom difrakcijom praha sadrži najmanje 3 pika odabrana između 7,8, 19,2, 15,0, 16,4, 13,1, 13,7, 26,4, 19,8, 17,9 i 22,5 stepeni 2θ±0,2°. U nekim otelotvorenjima, kristalni (S)-2-amino-N((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid oblika D karakterisan rendgenskom difrakcijom praha sadrži najmanje 5 pika odabrana između 7,8, 19,2, 15,0, 16,4, 13,1, 13,7, 26,4, 19,8, 17,9 i 22,5 stepeni 2θ±0,2°. U nekim otelotvorenjima, kristalni (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid oblika D karakterisan rendgenskom difrakcijom praha sadrži najmanje 7 pika odabrana između 7,8, 19,2, 15,0, 16,4, 13,1, 13,7, 26,4, 19,8, 17,9 i 22,5 stepeni 2θ±0,2°. U nekim otelotvorenjima, kristalni (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid oblika D karakterisan rendgenskom difrakcijom praha sadrži najmanje 9 pika odabrana između 7,8, 19,2, 15,0, 16,4, 13,1, 13,7, 26,4, 19,8, 17,9 i 22,5 stepeni 2θ±0,2°.

[0022] U nekim otelotvorenjima, kristalni (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid oblika D karakteriše kriva diferencijalne skenirajuće kalorimetrije (DSC) koja sadrži endoterm na oko 214 °C. U nekim otelotvorenjima, kristalni (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid oblika D ima DSC termogram koji sadrži endoterm dehidratacije sa početkom na oko 213 °C i vrhom na oko 214 °C. U nekim otelotvorenjima, kristalni (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid oblika D ima DSC termogram suštinski sličan slici 3.

[0023] U nekim otelotvorenjima, kristalni (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid oblika D ima TGA termogram koji pokazuje gubitak mase od oko 0,4 % pri zagrevanju od oko 25 °C do oko 150 °C i gubitak mase od oko 3,1 % pri zagrevanju od oko 150 °C do oko 225 °C. U nekim otelotvorenjima, kristalni (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il) -3-metilbutanamid oblika D ima TGA termogram suštinski sličan slici 3.

[0024] U nekim otelotvorenjima, kristalni (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid oblika D apsorbuje manje od oko 2% vode pri relativnoj vlažnosti (RV) od oko 70% i počinje da se raspada nakon oko 80% RV. U nekim otelotvorenjima, kristalni (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid oblika D ima GVS trag koji je suštinski sličan slici 4.

[0025] U nekim otelotvorenjima, otkrivene su farmaceutske kompozicije koje sadrže efikasnu količinu kristalnog (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro [4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamida oblika D i farmaceutski prihvatljiv nosač. U nekim otelotvorenjima, otkrivene su farmaceutske kompozicije koje sadrže efikasnu količinu (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[ 4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamida i farmaceutski prihvatljiv nosač, pri čemu je najmanje oko 85% (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso- 7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamida oblika D. U nekim otelotvorenjima, otkrivene su farmaceutske kompozicije koje sadrže efikasnu količinu (S)-2-amino- N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamida i farmaceutski prihvatljiv nosač, pri čemu je najmanje oko 90% (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamida oblika D. U nekim otelotvorenjima, otkrivene su farmaceutske kompozicije koje sadrže efikasnu količinu (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamida i farmaceutski prihvatljiv nosač, pri čemu je najmanje oko 95% (S)-2-amino-N-((3R,5R)- 8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamida oblika D. U nekim otelotvorenjima, otkrivene su farmaceutske kompozicije koje sadrže efikasnu količinu (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamida i farmaceutski prihvatljiv nosač, pri čemu je najmanje oko 96% (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]]dodekan-3-il)-3-metilbutanamida oblika D. U nekim otelotvorenjima, otkrivene su farmaceutske kompozicije koje sadrže efikasnu količinu (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamida i farmaceutski prihvatljiv nosač, pri čemu je najmanje oko 97% (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamida oblika D. U nekim otelotvorenjima, otkrivene su farmaceutske kompozicije koje sadrže efikasnu količinu (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3 -il)-3-metilbutanamida i farmaceutski prihvatljiv nosač, pri čemu je najmanje oko 98% (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamida oblika D. U nekim otelotvorenjima, otkrivene su farmaceutske kompozicije koje sadrže efikasnu količinu (S)-2-amino-N-((3R),5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamida i farmaceutski prihvatljiv nosač, pri čemu je najmanje oko 99% ( S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3metilbutanamida oblika D. U nekim otelotvorenjima, otkrivene su farmaceutske kompozicije koje sadrže efikasnu količinu (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamida i farmaceutski prihvatljiv nosač, pri čemu je najmanje oko 99,5% (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamida oblika D.

[0026] U nekim otelotvorenjima, kristalni (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid oblika E ima XRPD obrazac koji sadrži najmanje jedan pik izražen kao 2θ±0,2° na oko 12,3°. U nekim otelotvorenjima, kristalni (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid oblika E ima XRPD obrazac koji sadrži najmanje jedan pik izražen kao 2θ±0,2° na oko 18,8°. U nekim otelotvorenjima, kristalni (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid oblika E ima XRPD obrazac koji sadrži najmanje jedan pik izražen kao 2θ±0,2° na oko 9,3°. U nekim otelotvorenjima, kristalni (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid oblika E ima XRPD obrazac koji sadrži najmanje jedan pik izražen kao 2θ±0,2° na oko 12,3° ili na oko 18,8°. U nekim otelotvorenjima, kristalni (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid oblika E ima XRPD obrazac koji sadrži najmanje jedan pik izražen kao 2θ±0,2° na oko 12,3° ili na oko 9,3°. U nekim otelotvorenjima, kristalni (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid oblika E ima XRPD obrazac koji sadrži najmanje jedan pik izražen kao 2θ±0,2° na oko 18,8° ili na oko 9,3°. U nekim otelotvorenjima, kristalni (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid oblika E ima XRPD obrazac koji sadrži najmanje jedan pik izražen kao 2θ±0,2° na oko 12,3°, na oko 18,8° ili na oko 9,3°. U nekim otelotvorenjima, kristalni (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid oblika E ima XRPD obrazac koji sadrži najmanje jedan pik izražen kao 2θ±0,2° izabranih između pikova navedenih u Tabeli 1. U nekim otelotvorenjima, kristalni (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid oblika E ima XRPD obrazac koji je suštinski sličan Slici 9.

[0027] U nekim otelotvorenjima, kristalni (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid oblika E karakterisan rendgenskom

1

difrakcijom praha sadrži pikove sa sledećim vrednostima 2θ±0,2°: 12,3, 18,8 i 9,3 stepeni. U nekim otelotvorenjima, kristalni (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid oblika E ima rendgensku difrakciju praha koja dalje sadrži pikove na 14,2, 14,1 i 19,8 stepeni 2-teta ±0,2°.

[0028] U nekim otelotvorenjima, kristalni (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid oblika E karakterisan rendgenskom difrakcijom praha sadrži najmanje 3 pika odabrana između 12,3, 18,8, 9,3, 14,2, 14,1, 19,8, 26,2, 17,3, 7,1 i 25,4 stepeni 2θ±0,2°. U nekim otelotvorenjima, kristalni (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid oblika E karakterisan rendgenskom difrakcijom praha sadrži najmanje 5 pika odabrana između 12,3, 18,8, 9,3, 14,2, 14,1, 19,8, 26,2, 17,3, 7,1 i 25,4 stepeni 2θ±0,2°. U nekim otelotvorenjima, kristalni (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid oblika E karakterisan rendgenskom difrakcijom praha sadrži najmanje 7 pika odabrana između 12,3, 18,8, 9,3, 14,2, 14,1, 19,8, 26,2, 17,3, 7,1 i 25,4 stepeni 2θ±0,2°. U nekim otelotvorenjima, kristalni (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid oblika E karakterisan rendgenskom difrakcijom praha sadrži najmanje 9 pika odabrana između 12,3, 18,8, 9,3, 14,2, 14,1, 19,8, 26,2, 17,3, 7,1 i 25,4 stepeni 2θ±0,2°.

[0029] U nekim otelotvorenjima, kristalni (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid oblika E karakteriše kriva diferencijalne skenirajuće kalorimetrije (DSC) koja sadrži endoterm na oko 125 °C. U nekim otelotvorenjima, kristalni (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid oblika E ima DSC termogram koji sadrži endoterm dehidratacije sa početkom na oko 105 °C i vrhom na oko 125 °C. U nekim otelotvorenjima, kristalni (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid oblika E ima DSC termogram suštinski sličan slici 11.

[0030] U nekim otelotvorenjima, kristalni (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid oblika E ima TGA termogram koji pokazuje gubitak mase od oko 6,0 % pri zagrevanju od oko 25 °C do oko 135 °C i gubitak mase od oko 3,0 % pri zagrevanju od oko 125 °C do oko 225 °C. U nekim otelotvorenjima, kristalni (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il) -3-metilbutanamid oblika E ima TGA termogram suštinski sličan slici 11.

[0031] U nekim otelotvorenjima, kristalni (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid oblika E apsorbuje manje od oko 2% vode pri relativnoj vlažnosti (RV) od oko 80%. U nekim otelotvorenjima, kristalni (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid oblika D ima GVS trag koji je suštinski sličan slici 12.

[0032] U nekim otelotvorenjima, otkrivene su farmaceutske kompozicije koje sadrže efikasnu količinu kristalnog (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamida oblika E i farmaceutski prihvatljiv nosač. U nekim otelotvorenjima, otkrivene su farmaceutske kompozicije koje sadrže efikasnu količinu (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[ 4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamida i farmaceutski prihvatljiv nosač, pri čemu je najmanje oko 85% (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso- 7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamida oblika E. U nekim otelotvorenjima, otkrivene su farmaceutske kompozicije koje sadrže efikasnu količinu (S)-2-amino- N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamida i farmaceutski prihvatljiv nosač, pri čemu je najmanje oko 90% (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamida oblika E. U nekim otelotvorenjima, otkrivene su farmaceutske kompozicije koje sadrže efikasnu količinu (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamida i farmaceutski prihvatljiv nosač, pri čemu je najmanje oko 95% (S)-2-amino-N-((3R,5R)- 8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamida oblika E. U nekim otelotvorenjima, otkrivene su farmaceutske kompozicije koje sadrže efikasnu količinu (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamida i farmaceutski prihvatljiv nosač, pri čemu je najmanje oko 96% (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]]dodekan-3-il)-3-metilbutanamida oblika E. U nekim otelotvorenjima, otkrivene su farmaceutske kompozicije koje sadrže efikasnu količinu (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamida i farmaceutski prihvatljiv nosač, pri čemu je najmanje oko 97% (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamida oblika E. U nekim otelotvorenjima, otkrivene su farmaceutske kompozicije koje sadrže efikasnu količinu (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3 -il)-3-metilbutanamida i farmaceutski prihvatljiv nosač, pri čemu je najmanje oko 98% (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamida oblika E. U nekim otelotvorenjima, otkrivene su farmaceutske kompozicije koje sadrže efikasnu količinu (S)-2-amino-N-((3R),5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamida i farmaceutski prihvatljiv nosač, pri čemu je najmanje oko 99% ( S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamida oblika E. U nekim otelotvorenjima, otkrivene su farmaceutske kompozicije koje sadrže efikasnu količinu (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamida i farmaceutski prihvatljiv nosač, pri čemu je najmanje oko 99,5% (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamida oblika E.

[0033] U nekim otelotvorenjima, otkriveno je jedinjenje (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-izopropil-2,2-dimetil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-6-on (hemijska struktura prikazana u nastavku) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so. Jedinjenje može biti amorfno, kristalno ili njihova smeša.

[0034] U nekim otelotvorenjima, otkriven je kristalni (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-izopropil-2,2-dimetil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza -8-boraspiro[4.7]dodekan-6-on u obliku 1.

[0035] U nekim otelotvorenjima, kristalni (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-izopropil-2,2-dimetil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-6-on oblika 1 ima XRPD obrazac koji sadrži najmanje jedan pik izražen kao 2θ±0,2° na oko 11,6°. U nekim otelotvorenjima, kristalni (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-izopropil-2,2-dimetil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-6-on oblika 1 ima XRPD obrazac koji sadrži najmanje jedan pik izražen kao 2θ±0,2° na oko 8,2°. U nekim otelotvorenjima, kristalni (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-izopropil-2,2-dimetil-5-

1

oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-6-on oblika 1 ima XRPD obrazac koji sadrži najmanje jedan pik izražen kao 2θ±0,2° na oko 13.3°. U nekim otelotvorenjima, kristalni (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-izopropil-2,2-dimetil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza-8 -boraspiro[4.7]dodekan-6-on Forma 1 ima XRPD obrazac koji sadrži najmanje jedan pik izražen kao 2θ±0,2° na oko 11,6° ili na oko 8,2°. U nekim otelotvorenjima, kristalni (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-izopropil-2,2-dimetil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza-8 -boraspiro[4.7]dodekan-6-on Forma 1 ima XRPD obrazac koji sadrži najmanje jedan pik izražen kao 2θ±0,2° na oko 11,6° ili na oko 13,3°. U nekim otelotvorenjima, kristalni (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-izopropil-2,2-dimetil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza-8 -boraspiro[4.7]dodekan-6-on Forma 1 ima XRPD obrazac koji sadrži najmanje jedan pik izražen kao 2θ±0,2° na oko 8,2° ili na oko 13,3°. U nekim otelotvorenjima, kristalni (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-izopropil-2,2-dimetil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-6-on oblika 1 ima XRPD obrazac koji sadrži najmanje jedan pik izražen kao 2θ±0,2°izabran od oko 11,6°, oko 8,2° and about 13,3°. U nekim otelotvorenjima, kristalni (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-izopropil-2,2-dimetil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-6-on oblika 1 ima XRPD obrazac koji sadrži najmanje jedan pik izražen kao 2θ±0,2° izabran od pikova navedenih u tabeli 1 U nekim otelotvorenjima, kristalni (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-izopropil-2,2-dimetil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-6-on oblika 1 ima XRPD obrazac značajno sličan slici 5.

[0036] U nekim otelotvorenjima, kristalni (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-izopropil-2,2-dimetil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-6-on oblika 1 karakterisan rendgenskom difrakcijom praha sadrži najmanje 3 pika izabrana između 11,6, 8,2, 13,3, 16,4, 12,9, 17,4, 19,5, 16,6, 22,6 stepeni i 15,9 stepeni.2θ±0,2°. U nekim otelotvorenjima, kristalni (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-izopropil-2,2-dimetil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-6-on oblika 1 karakterisan rendgenskom difrakcijom praha sadrži najmanje 5 pika izabrana između 11,6, 8,2, 13,3, 16,4, 12,9, 17,4, 19,5, 16,6, 22,6 stepeni i 22,6 stepeni. 2θ±0,2°. U nekim otelotvorenjima, kristalni (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-izopropil-2,2-dimetil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-6-on oblika 1 karakterisan rendgenskom difrakcijom praha sadrži najmanje 7 pika izabrana između 11,6, 8,2, 13,3, 16,4, 12,9, 17,4, 19,5, 16,6, 22,6 stepeni i 15,9 stepeni.2θ±0,2°. U nekim otelotvorenjima, kristalni (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-izopropil-2,2-dimetil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-6-on oblika 1 karakterisan rendgenskom difrakcijom praha sadrži najmanje 9 pika izabrana između 11,6, 8,2, 13,3, 16,4, 12,9, 17,4, 19,5, 16,6, 22,6 stepeni i 15,9 stepeni.2θ±0,2°.

[0037] U nekim otelotvorenjima, kristalni (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-izopropil-2,2-dimetil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-6-on oblika 1 ima DSC termogram koji sadrži endoterm dehidratacije sa početkom na oko 82°C i maksimumom na oko 122°C. U nekim otelotvorenjima, kristalni (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-izopropil-2,2-dimetil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-6-on oblika 1 ima DSC termogram suštinski sličan slici 7.

[0038] U nekim otelotvorenjima, kristalni (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-izopropil-2,2-dimetil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-6-on oblika 1 ima TGA termogram koji pokazuje gubitak mase od oko 5,5% pri zagrevanju od oko 25°C do oko 150°C i gubitak mase od oko 3,2% pri zagrevanju od oko 150° C do oko 225 °C. U nekim otelotvorenjima, kristalni (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-izopropil-2,2-dimetil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-6-on ima TGA termogram suštinski sličan slici 7.

[0039] U nekim otelotvorenjima, kristalni (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-izopropil-2,2-dimetil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-6-on oblika 1 apsorbuje manje od oko 2% vode pri relativnoj vlažnosti (RV) od oko 80%. U nekim otelotvorenjima, kristalni (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-izopropil-2,2-dimetil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-6-on oblika 1 ima GVS trag suštinski sličan slici 8.

[0040] U nekim otelotvorenjima, otkrivene su farmaceutske kompozicije koje sadrže efikasnu količinu (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-izopropil-2,2-dimetil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-6-ona ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili kristalni oblik 1 i farmaceutski prihvatljiv nosač. U nekim otelotvorenjima, otkrivene su farmaceutske kompozicije koje sadrže efikasnu količinu (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-izopropil-2,2-dimetil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-6-ona ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so i farmaceutski prihvatljiv nosač, pri čemu je najmanje oko 85% (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-izopropil-2,2-dimetil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-6-on a oblika 1. U nekim otelotvorenjima, otkrivene su farmaceutske kompozicije koje sadrže efikasnu količinu (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-izopropil-2,2-dimetil-

1

5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-6-ona i farmaceutski prihvatljiv nosač, pri čemu je najmanje oko 90% (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-izopropil-2,2-dimetil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-6-ona oblika 1. U nekim otelotvorenjima, otkrivene su farmaceutske kompozicije koje sadrže efikasnu količinu (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-izopropil-2,2-dimetil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-6-ona i farmaceutski prihvatljiv nosač, pri čemu je najmanje oko 95% (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-izopropil-2,2-dimetil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-6-ona oblika 1. U nekim otelotvorenjima, otkrivene su farmaceutske kompozicije koje sadrže efikasnu količinu (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-izopropil-2,2-dimetil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-6-ona i farmaceutski prihvatljiv nosač, pri čemu je najmanje oko 96% (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-izopropil-2,2-dimetil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-6-ona oblika 1. U nekim otelotvorenjima, otkrivene su farmaceutske kompozicije koje sadrže efikasnu količinu (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-izopropil-2,2-dimetil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-6-ona i farmaceutski prihvatljiv nosač, pri čemu je najmanje oko 97% (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-izopropil-2,2-dimetil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-6-ona oblika 1. U nekim otelotvorenjima, otkrivene su farmaceutske kompozicije koje sadrže efikasnu količinu (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-izopropil-2,2-dimetil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7 -oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-6-on i farmaceutski prihvatljiv nosač, pri čemu najmanje oko 98% (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4- izopropil-2,2-dimetil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-6- je u obliku 1. U nekim otelotvorenjima, otkrivene su farmaceutske kompozicije koje sadrže efikasnu količinu (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-izopropil-2,2-dimetil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-6-ona i farmaceutski prihvatljiv nosač, pri čemu je najmanje oko 99% (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-izopropil-2,2-dimetil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-6-ona oblika 1. U nekim otelotvorenjima, otkrivene su farmaceutske kompozicije koje sadrže efikasnu količinu (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-izopropil-2,2-dimetil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-6-ona i farmaceutski prihvatljiv nosač, pri čemu je najmanje oko 99,5% (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-izopropil-2,2-dimetil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-6-ona oblika 1.

[0041] Termin „farmaceutski prihvatljiv nosač“ uključuje jedinjenja, supstance, kompozicije i/ili dozne oblike koji su, u okviru racionalne medicinske procene, pogodni za upotrebu u

1

kontaktu sa tkivima ljudi i životinja bez prekomerne toksičnosti, iritacija, alergijskih odgovora ili drugih problema ili komplikacija, na osnovu procene stručnjaka za oblast.

[0042] Otkrivene kompozicije mogu da budu u obliku koji je prikladan za oralnu upotrebu (na primer, kao tablete, lozenge, tvrde ili meke kapsule, vodene ili uljane suspenzije, emulzije, praškovi ili granule za disperziju, sirupi ili eliksiri), za topikalnu upotrebu (na primer, kao kremovi, masti, gelovi, ili vodeni ili uljani rastvori ili suspenzije), za primenu putem inhalacije (na primer, kao fino raspodeljeni prašak ili tečni aerosol), za primenu putem insuflacije (na primer, kao fino raspodeljeni prašak) ili za parenteralnu primenu (na primer, kao sterilni vodeni ili uljani rastvor za intravensko, supkutano ili intramuskularno doziranje ili kao supozitorija za rektalno doziranje).

[0043] Količina aktivnog sastojka koja se kombinuje sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih nosača za proizvodnju jednog doznog oblika nužno će zavisiti od domaćina koji se leči i konkretnog puta primene. Za više informacija o načinu primene i doznim režimima, upućujemo čitaoca na poglavlje 25.3, sveske 5, publikacije „Comprehensive Medicinal Chemistry“ (Corwin Hansch; Chairman of Editorial Board), Pergamon Press 1990.

[0044] U jednom aspektu, otkriveni su postupci za lečenje kancera kod ispitanika kome je to potrebno, koji obuhvataju davanje ispitaniku efektivne količine (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamida oblika D ili oblika E.

[0045] U jednom aspektu, otkriven je (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid oblika D ili oblika E za upotrebu u lečenju kancera.

[0046] U jednom aspektu, otkrivena je upotreba (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamida oblika D ili oblika E u proizvodnji leka za lečenje kancera.

[0047] U jednom aspektu, otkrivena je farmaceutska kompozicija koja sadrži (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid oblika D ili oblika E za upotrebu u lečenju kancera.

1

[0048] U jednom aspektu, otkriveni su postupci za lečenje kancera kod ispitanika kome je to potrebno, koji obuhvataju davanje ispitaniku efektivne količine (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-izopropil-2,2-dimetil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-6-ona ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili kristalnog oblika 1.

[0049] U jednom aspektu, otkriven je (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-izopropil-2,2-dimetil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-6-on ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili kristalni oblik 1 za upotrebu u lečenju kancera.

[0050] U jednom aspektu, otkrivena je upotreba (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-izopropil-2,2-dimetil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-6-ona ili njegove farmaceutski prihvatljivae soli ili kristalnog oblika 1 u proizvodnji leka za lečenje kancera.

[0051] U jednom aspektu, otkrivena je farmaceutska kompozicija koja sadrži (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-izopropil-2,2-dimetil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-6-on ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili kristalni oblik 1 za upotrebu u lečenju kancera.

[0052] Izraz "kancer" uključuje, na primer, karcinom bubrežnih ćelija, karcinom skvamoznih ćelija glave i vrata, kancer pluća (npr. kancer malih ćelija pluća (SCLC), ne-malih ćelija pluća (NSCLC), mezoteliom), kancer pankreasa, kolorektalni karcinom, karcinom dojke, akutna mijeloidna leukemija (AML), karcinom prostate, karcinom želuca, karcinom bešike, melanom, karcinom bubrega i karcinom jajnika. U nekim otelotvorenjima, kancer je metastazirao. U nekim otelotvorenjima, kancer je povezan sa modulacijom arginaze 1 i/ili arginaze 2.

[0053] U nekim otelotvorenjima, kancer je povezan sa povišenim nivoom arginaze 1 u plazmi. U nekim otelotvorenjima, kancer je povezan sa smanjenim nivoom arginina u plazmi. U nekim otelotvorenjima, kancer je povezan sa povišenim nivoom arginaze 1 u plazmi kao i sa smanjenim nivoom arginina u plazmi. U nekim otelotvorenjima, kancer povezan sa povišenim nivoom arginaze 1 u plazmi i/ili sa smanjenim nivoom arginina u plazmi uključuje karcinom renalnih ćelija, karcinom skvamoznih ćelija glave i vrata, kancer pluća (npr. mikrocelularni kancer pluća (SCLC), nemikrocelularni kancer pluća (NSCLC), mezoteliom), kancer pankreasa, kolorektalni kancer i kancer dojke.

1

[0054] U nekim otelotvorenjima, kancer izlučuje arginazu 2, na primer, akutna mijeloidna leukemija i kancer prostate.

[0055] U nekim otelotvorenjima, kancer je povezan sa tumorom pozitivnim na arginazu 1 koji infiltrira imunološke ćelije, na primer, kancer pluća (mikrocelularni kancer pluća (SCLC), nemikrocelularni kancer pluća (NSCLC), kancer želuca, kancer bešike, kolorektalni kancer, melanom, karcinom skvamoznih ćelija glave i vrata, kancer dojke, kancer prostate, kancer jajnika, kancer pankreasa i renalni kancer.

[0056] U jednom aspektu, otkriveni su postupci za inhibiciju arginaze kod ispitanika kome je to potrebno, koji obuhvataju davanje ispitaniku efektivne količine (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamida oblika D ili oblika E.

[0057] U jednom aspektu, otkriven je (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid oblika D ili oblika E za upotrebu u inhibiciji arginaze.

[0058] U jednom aspektu, otkrivena je upotreba (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamida oblika D ili oblika E u proizvodnji leka za inhibiciju arginaze.

[0059] U jednom aspektu, otkrivene su farmaceutske kompozicije koje sadrži (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid oblika D ili oblika E za upotrebu u inhibiciji arginaze.

[0060] U jednom aspektu, otkriveni su postupci za inhibiciju arginaze kod ispitanika kome je to potrebno, koji obuhvataju davanje ispitaniku efektivne količine (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-izopropil-2,2-dimetil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-6-ona ili kristalnog oblika 1.

1

[0061] U jednom aspektu, otkriven je (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-izopropil-2,2-dimetil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-6-on ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili kristalni oblik 1 za upotrebu u inhibiciji arginaze.

[0062] U jednom aspektu, otkrivena je upotreba (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-izopropil-2,2-dimetil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-6-ona ili njegove farmaceutski prihvatljivae soli ili kristalnog oblika 1 u proizvodnji leka za inhibiciju arginaze.

[0063] U jednom aspektu, otkrivene su farmaceutske kompozicije koje sadrže (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-izopropil-2,2-dimetil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-6-on ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili kristalni oblik 1 za upotrebu u inhibiciji arginaze.

[0064] Termin „arginaza“ obuhvata enzime koji sadrže mangan koji pripadaju porodici ureahidrolaza koji katalizuju peti i finalni korak u ciklusu uree i konvertuju L-arginin u L-ornitin i ureu. Termin „arginaza“ uključuje dva izozima enzima, npr. arginazu 1 koja deluje u ciklusu uree i locirana je primarno u citoplazmi jetre, i arginazu 2 koja je locirana u mitohondrijama nekoliko tkiva u telu i učestvuje u regulaciji koncentracija arginina/ornitina u ćeliji. U nekim otelotvorenjima, (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid oblika D ili oblika E, je selektivna za Arginazu 1. U nekim otelotvorenjima, (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid oblika D ili oblika E, je selektivna za Arginazu 2. U nekim otelotvorenjima, (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid oblika D ili oblika E inhibira i arginazu 1 i arginazu 2. U nekim otelotvorenjima, (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-izopropil-2,2-dimetil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-6-on ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili kristalni oblik 1 su selektivani za arginazu 1. U nekim otelotvorenjima, (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-izopropil-2,2-dimetil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-6-on ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili kristalni oblik 1 su selektivani za arginazu 2. U nekim otelotvorenjima, (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-izopropil-2,2-dimetil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-6-on ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili kristalni oblik 1 inhibiraju i arginazu 1 i arginazu 2.

2

[0065] Jezik „efikasna količina“ uključuje količinu (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamida oblika D ili oblika E ili (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-izopropil-2,2-dimetil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-6-on ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili kristalni oblik 1, koji će izazvati biološki ili medicinski odgovor kod ispitanika, na primer, smanjenje ili inhibiciju enzima ili aktivnosti proteina u vezi sa arginazom ili kancerom, ublažavanje simptoma kancera ili usporavanje ili odlaganje progresije kancera. U nekim otelotvorenjima, jezik „efikasna količina“ uključuje količinu (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamida oblika D ili oblika E ili (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-izopropil-2,2-dimetil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-6-ona ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili kristalni oblik 1 koji je kada se daje ispitaniku, efikasan da barem delimično umanji, inhibiraj, i/ili ublažavi kancer ili inhibira arginazu, i/ili smanji ili inhibira rast tumora ili proliferaciju ćelija kancera kod ispitanika.

[0066] Termin „ispitanik“ uključuje toplokrvne sisare, na primer, primate, pse, mačke, zečeve, pacove i miševe. U nekim otelotvorenjima, ispitanik je primat, na primer, čovek. U nekim otelotvorenjima, ispitanik boluje od kancera. U nekim otelotvorenjima, ispitaniku je potrebno lečenje (npr. ispitanik bi imao biološku ili terapijsku korist od lečenja). U nekim otelotvorenjima, pacijent boluje od kancera. U nekim otelotvorenjima, ispitanik ima povišen nivo arginaze 1 u plazmi. U nekim otelotvorenjima, ispitanik ima smanjen nivo arginina. U nekim otelotvorenjima, pacijent ima povišen nivo arginaze 1 u plazmi kao i smanjen nivo arginina. U nekim otelotvorenjima, ispitanik ima kancer koji izlučuje arginazu 2 (npr. akutna mijeloidna leukemija ili kancer prostate). U nekim otelotvorenjima, ispitanik ima tumor pozitivan na arginazu 1 koji infiltrira imunološke ćelije.

[0067] Termini „inhibirati“, „inhibicija“ ili „inhibirajuće“ podrazumevaju redukciju osnovne aktivnosti biološke aktivnosti ili procesa.

[0068] Termini „lečiti“, „lečenje“ i „tretman“ uključuju redukciju ili inhibiciju aktivnosti enzima ili proteina koja je povezana sa arginazom ili kod ispitanika, ublažavanje jednog ili više simptoma kancera, ili usporavanje ili odlaganje progresije kancera kod ispitanika. Termini „lečiti“, „lečenje“ ili „tretman“ takođe obuhvataju smanjenje ili inhibiciju rasta tumora ili proliferacije ćelija kancera kod ispitanika.

[0069] U nekim otelotvorenjimas, predmetna jedinjenja, npr., (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid i (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-izopropil-2,2-dimetil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-6-on, pokazuju međusobnu konverziju struktura između slobodne borne kiseline i boronatnog estra, kao što je ilustrovano u Šemi 1 ispod.

[0070] U nekim otelotvorenjima, predmetna jedinjenja, npr. (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan -3-il)-3-metilbutanamid i (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-izopropil-2,2-dimetil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-6-on, mogu biti u takvom obliku da se formira dativna veza između atoma azota pirolidinske grupe i atoma bora. U formiranju konvencionalne kovalentne veze, svaki atom dovodi jedan elektron u vezu, dok u dativnoj vezi (poznatoj i kao koordinatna veza), oba elektrona potiču iz istog atoma. Na primer, dativna veza između atoma azota i bora u ovom jedinjenju se formira deljenjem para elektrona iz atoma azota. Dativna veza u (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamidu i (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-izopropil-2,2-dimetil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-6-onu, može se predstaviti linijom sa strelicom u sledećoj strukturnoj formuli, respektivno:

Primeri

[0071] Aspekti predmetnog otkrića mogu biti dalje definisani putem upućivanja na sledeće neograničavajuće primere, koji detaljno opisuju pripremu određenih jedinjenja i intermedijera iz predmetnog otkrića, i postupaka za korišćenje jedinjenja iz predmetnog otkrića. Biće očigledno stručnjacima da mnoge modifikacije, i materijala i metoda, mogu biti izvedene bez odstupanja od opsega predmetnog pronalaska.

[0072] Osim ako nije drugačije navedeno:

(i) sve sinteze su izvođene na temperaturi okoline, tj. u rasponu od 17 do 25 °C, i u atmosferi inertnog gasa kao što je azot, ako nije drugačije navedeno;

(ii) uparavanja su obavljena pomoću rotacionog uparivača ili koristeći Genevac opremu ili Biotage v10 uparivač pod vakuumom, i postupci obrade su obavljeni nakon uklanjanja čvrstih ostataka pomoću filtracije;

(iii) prečišćavanja fleš hromatografijom su obavljena na automatizovanom Teledyne Isco CombiFlash<®>Rf ili Teledyne Isco CombiFlash<®>Companion<®>koristeći prethodno spakovane RediSep Rf Gold<™>kolone silika gela (20-40 µm, sferne čestice), GraceResolv<™>uloške (Davisil<®>silika gel) ili Silicycle uloške (40 - 63 µm).

(iv) preparativna hromatografija je obavljena na Gilson prep HPLC instrumentu sa UV prikupljanjem; alternativno, preparativna hromatografija je obavljena na Waters AutoPurification HPLC-MS instrumentu sa prikupljanjem aktiviranim putem MS i UV;

(v) hiralna preparativna hromatografija je izvedena na instrumentu Gilson sa UV prikupljanjem (233 injektor / frakcioni kolektor, 333 i 334 pumpe, 155 UV detektor) ili na instrumentu Varian Prep Star (2 x SD1 pumpe, 325 UV detektor, 701 frakcioni kolektor) pumpa radi sa Gilson 305 injektorom; alternativno, hiralna preparativna hromatografija je izvedena na instrumentu Waters Prep 100 SFC-MS sa prikupljanjem aktiviranim putem MS i UV, ili na instrumentu Thar MultiGram III SFC sa UV prikupljanjem.

(vi) prinosi, kada postoje, ne moraju biti maksimalni mogući;

2

(vii) generalno, strukture krajnjih proizvoda formule I potvrđene su pomoću nuklearne magnetne rezonance (NMR); vrednosti hemijskog NMR pomeranja izmerene su na delta skali [protonski spektri magnetne rezonance su određeni pomoću instrumenta Bruker Avance 500 (500 MHz), Bruker Avance 400 (400 MHz), Bruker Avance 300 (300 MHz) ili Bruker DRX (300 MHz)]; merenja su obavljena na temperaturi okoline, ako nije drugačije naznačeno; korišćene su sledeće skraćenice: s, singlet; d, dublet; t, triplet; q, kvartet; m, multiplet; dd, dublet dubleta; ddd, dublet dubleta dubleta; dt, dublet tripleta; bs, široki signal.

(viii) generalno, krajnji proizvodi formule I takođe su okarakterisani masenom spektrometrijom nakon tečne hromatografije (LCMS ili UPLC); UPLC je izveden pomoću UPLC uređaja Waters opremljenog masenim spektrometrom Waters SQ (temp. kolone 40 °C, UV = 220–300 nm ili 190-400 nm, mas. spek. = ESI sa prebacivanjem pozitivno/negativno) pri protoku od 1 ml/min koristeći sistem rastvarača od 97% A 3% B do 3% A do 97% B tokom 1,50 min (ukupno vreme ciklusa sa ekvilibracijom na početne uslove itd.1,70 min), gde A = 0,1% mravlja kiselina ili 0,05% trifluorsirćetna kiselina u vodi (za rad sa kiselinom) ili 0,1% amonijum hidroksid u vodi (za rad sa bazom) i B = acetonitril. Za kiselu analizu korišćena kolona je bila Waters Acquity HSS T3 (1,8 µm, 2,1 x 50 mm), za baznu analizu korišćena kolona je bila Waters Acquity BEH C18 (1,7 µm 2,1 x 50 mm). Alternativno, UPLC je izveden pomoću UPLC uređaja Waters opremljenog masenim spektrometrom Waters SQ (temp. kolone 30 °C, UV = 210-400 nm, mas. spek. = ESI sa prebacivanjem pozitivno/negativno) pri protoku od 1 ml/min koristeći gradijent rastvarača od 2 do 98% B tokom 1,5 min (ukupno vreme ciklusa sa ekvilibracijom na početne uslove 2 min), gde A = 0,1% mravlja kiselina u vodi i B = 0,1% mravlja kiselina u acetonitrilu (za rad sa kiselinom) ili A = 0,1% amonijum hidroksid u vodi i B = acetonitril (za rad sa bazom). Za kiselu analizu, korišćena je kolona Waters Acquity HSS T3 (1,8 µm, 2,1 x 30 mm), za baznu analizu korišćena je kolona Waters Acquity BEH C18 (1,7 µm, 2,1 x 30 mm); LCMS je izveden pomoću Waters Alliance HT (2795) opremljenog masenim spektrometrom Waters ZQ ESCi i kolonom Phenomenex Gemini-NX C18 (5 µm, 110A, 2,1 x 50 mm kolona pri protoku od 1,1 ml/min 95% A do 95% B tokom 4 min sa zadržavanjem 0,5 min, gde A = 0,1% mravlja kiselina i B = 0,1% mravlja kiselina u acetonitrilu (za rad sa kiselinom) ili A = 0,1% amonijum hidroksid u vodi i B = acetonitril (za rad sa bazom). Pored toga, LCMS je izveden pomoću Shimadzu UFLC opremljenog masenim spektrometrom Shimadzu LCMS-2020 i kolonom Waters HSS C18 (1,8 µm, 2,1 x 50 mm) ili Shimpack XR-ODS (2,2 µm, 3,0 x 50 mm) ili Phenomenex Gemini-NX C18 (3 µm, 3,0 x 50 mm) pri protoku od 0,7 ml/min (za kolonu Waters HSS C18), 1,0 ml/min (za kolonu Shim-pack XR-ODS) ili 1,2 ml/min (za Phenomenex Gemini-NX C18), 95% A do 95% B tokom 2,2 min uz zadržavanje 0,6 min, gde A = 0,1% mravlja kiselina ili 0,05% trifluorsirćetna kiselina u vodi (za rad sa kiselinom) ili 0,1% amonijum hidroksid ili 6,5 mM amonijum karbonat u vodi (za rad sa bazom) i B = acetonitril. Prijavljeni molekulski jon odgovara [M+H]+ ako nije drugačije naznačeno; za molekule sa više izotopskih obrazaca (Br, Cl, itd.), prijavljena vrednost je ona koja je dobijena za najnižu masu izotopa osim ako nije drugačije naznačeno.

(ix) prečišćavanje jonskom izmenom je obično obavljano koristeći SCX-2 (Biotage) uložak.

(x) čistoća intermedijera je procenjena pomoću tankoslojne hromatografije, masene spektroskopije, LCMS, UPLC/MS, HPLC (tečna hromatografija visokih performansi) i/ili NMR analize;

(xi) korišćene su sledeće skraćenice:-EtOAc: etil acetat

DMSO: dimetil sulfoksid

KHMDS: kalijum heksametildisilazan

MeOH: metanol

MeCN: acetonitril

LCMS: tečna hromatografija sa masenom spektrometrijom

rt ili RT: sobna temperatura

vod.: vodeni

THF: tetrahidrofuran

DCM: dihlormetan

DMF: dimetilformamid

HATU: (1-[bis(dimetilamino)metilen]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridinijum 3-oksid heksafluorfosfat)

HEPES: (4-(2-hidroksietil)-1-piperazinetanesulfonska kiselina)

2

XRPD rendgenska difrakcija praha

DSC diferencijalna skenirajuća kalorimetrija

TGA termogravimetrijska analiza

GVS gravimetrijska sorpcija pare

Primer 1: Sinteza (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hydroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamida oblika D.

Intermedijer 1: (2S,4R)-1-terc-butil 2-metil 4-azidopirolidin-1,2-dikarboksilat

[0073]

[0074] Metansulfonil hlorid (2,86 ml, 36,7 mmol) je dodat u kapima u rastvor (2S,4S)-1-tercbutil 2-metil 4-hidroksipirolidin-1,2-dikarboksilata (7,50 g, 30,6 mmol) i trietilamina (5,11 ml, 36,7 mmol) u DCM (38 ml) na 0 °C. Reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 1 h pre zagrevanja na sobnu temperaturu uz mešanje još 1 h. Reakciona smeša je razblažena dihlorometanom i isprana vodom. Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan do suva da bi se dobio 1-(terc-butil) 2-metil (2S,4S)-4-((metilsulfonil)oksi)pirolidin-1,2-dikarboksilat (9,9 g, 100% prinos) koji je korišćen bez daljeg prečišćavanja. m/z (ES<+>) [M+NH4]<+>= 341.

[0075] Natrijum azid (5,96 g, 91,7 mmol) je dodat u rastvor 1-(terc-butil) 2-metil (2S,4S)-4-((metilsulfonil)oksi)pirolidin-1,2-dikarboksilata (9,89 g, 30,6 mmol) u DMF (30 ml). Reakciona smeša je zagrejana do 50 °C i mešana preko noći. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature i koncentrovana. Dobijeni ostatak je razblažen sa EtOAc i ispran vodom. Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan do suva. Sirovi materijal je prečišćen hromatografijom na silika gelu (heksan/EtOAc) da bi se dobio proizvod (Intermedijer 1, 5,95 g, 72% prinos) kao smeša rotamera.<1>H NMR (300MHz, DMSO-d6) δ 1.33 i 1.40 (9H, s x2) rotamers, 2.08 - 2.22 (1H, m), 2.26- 2.41 (1H, m), 3.41 (1H, dt), 3.48 - 3.61 (1H, m), 3.65 i 3.68 (3H, s x2) rotamers, 4.22 (1H, dd), 4.30 - 4.43 (1H, m); m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 271.

2

Intermedijer 2: (2S,4R)-2-benzil 1-terc-butil 4-azidopirolidin-1,2-dikarboksilat

[0076]

[0077] Rastvor natrijum hidroksida (5,28 g, 132 mmol) u vodi (22 ml) je dodat u kapima u rastvor (2S,4R)-1-terc-butil 2-metil 4-azidopirolidin-1,2-dikarboksilata (intermedijer 1, 5,95 g, 22,0 mmol) u THF (44 ml) i MeOH (22 ml) na 0 °C. Reakciona smeša je mešana preko noći uz lagano zagrevanje do sobne temperature. Isparljive supstance su uklonjene in vacuo i vodeni sloj je zakiseljen do pH ~3 sa 5 M HCl i ekstrahovan sa DCM. Kombinovani organski slojevi su sušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani do suva da bi se dobila (2S,4R)-4-azido-1-(terc-butoksikarbonil)pirolidin-2-karbonska kiselina (5,64 g, 100% prinos) kao smeša rotameri koji su korišćeni bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (300MHz, DMSO-d6) δ 1.35 i 1.40 (9H, s x2) rotameri, 2.07 - 2.18 (1H, m), 2.26- 2.38 (1H, m), 3.34 - 3.44 (1H, m), 3.48 - 3.63 (1H, m), 4.09-4.17 (1H, m), 4.30 - 4.37 (1H, m); m/z (ES-) [M+HCOO]<->= 301.

[0078] Benzil bromid (2,83 ml, 23,8 mmol) je dodat u kapima u rastvor (2S,4R)-4-azido-1-(terc-butoksikarbonil)pirolidin-2-karboksilne kiseline (5,19 g, 19,9 mmol) i trietilamina (3,46). ml, 24,8 mmol) u DMF (60 ml) i reakciona smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Isparljive supstance su uklonjene in vacuo i rezultujući ostatak je rastvoren u EtOAc i ispran vodom. Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan do suva. Sirovi materijal je prečišćen hromatografijom na silika gelu (heksan/EtOAc) da bi se dobio proizvod (Intermedijer 2, 5,09 g, 74% prinos).<1>H NMR (300MHz, DMSO-d6) δ 1.26 i 1.39 (9H, s x2) rotameri, 2.11- 2.23 (1H, m), 2.31-2.43 (1H, m), 3.43 (1H, ddd), 3.50 -3.59 (1H, m), 4.25-4.40 (2H, m), 5.07-5.22 (2H, m), 7.31 -7.40 (5H, m); m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 347.

Intermedijer 3: (4R)-2-benzil 1-terc-butil 4-azido-2-(but-2-enil)pirolidin-1,2-dikarboksilat [0079]

2

[0080] (2S,4R)-2-benzil 1-terc-butil 4-azidopirolidin-1,2-dikarboksilat (intermedijer 2, 5,09 g, 14,7 mmol) i krotil bromid (2,27 ml, 22,0 mmol) rastvoreni su u THF (100 ml) i rastvor je ohlađen na -78 °C u atmosferi N2. Rastvor je tretiran dodatkom u kapima rastvora KHMDS (0.5M u toluenu, 44,1 ml, 22,0 mmol). Reakciona smeša je polako zagrejana do sobne temperature i mešana 3 h. Sirova reakciona smeša je ugašena vodom i isparljive materije su uklonjene in vacuo. Sirova smeša je razblažena pomoću DCM i slojevi su izdvojeni. Organski sloj je ispran slanom vodom, osušen na Na2SO4, filtriran i koncentrovan do suvoće. Sirovi materijal je prečišćen hromatografijom na silika gelu (heksan/EtOAc) da bi se dobio proizvod (intermedijer 3, 4,6 g, 78% prinos) kao smeša rotamera i E/Z olefina.<1>H NMR (300MHz, DMSO-d6) δ 1.26 - 1.43 (9H, m), 1.59 - 1.66 (3H, m), 2.07 - 2.17 (1H, m), 2.32 - 2.48 (2H, m), 2.57 - 3.12 (2H, m), 3.35 - 3.82 (1H, m), 4.20 - 4.38 (1H, m), 5.02 - 5.22 (2H, m), 5.24 - 5.41 (1H, m), 5.46 - 5.68 (1H, m), 7.28 - 7.42 (5H, m); m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 401.

Intermedijer 4: (4R)-2-benzil 1-terc-butil 4-azido-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)pirolidin-1,2-dikarboksilat

[0081]

[0082] Bis(1,5-ciklooktadien)diiridijum(I) dihlorid (772 mg, 1,15 mmol) i bis(difenilfosfino)metan (883 mg, 2,30 mmol) dodati su u balon sa okruglim dnom osušen u pećnici. Balon je zaptiven i pročišćen sa N2. Čvrste supstance su rastvorene u DCM-u (66 ml) i u rastvor je polako dodat 4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan (3,67 ml, 25,3 mmol). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 10 min. (4R)-2-benzil 1-terc-butil 4-azido-2-(but-2-enil)pirolidin-1,2-dikarboksilat (intermedijer 3, 4,60 g, 11,5 mmol) je dodat u reakciju kao rastvor u DCM (44 ml) i reakciona smeša je mešana preko noći.

Reakciona smeša je razblažena sa DCM i ugašena vodom. Slojevi su razdvojeni i vodeni sloj je ekstrahovan pomoću DCM. Kombinovani organski slojevi su sušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani do suva. Sirovi materijal je prečišćen hromatografijom na silika gelu

2

(heksan/EtOAc) da bi se dobio (4R)-2-benzil 1-terc-butil 4-azido-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)pirolidin-1,2-dikarboksilat (intermedijer 4, 2,7 g, 44% prinos).

Intermedijer 5: (2S,4R)-2-benzil 1-terc-butil 4-azido-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)pirolidin-1,2-dikarboksilat i Intermedijer 6: (2R,4R)-2-benzil 1-terc-butil 4-azido-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)pirolidin-1,2-dikarboksilat

[0083]

[0084] Prečišćeni materijal dobijen sintezom intermedijera 4 je podvrgnut hiralnom SFC (Chiralpak IG kolona, 21,2 x 250 mm, 5 µm, temperatura = 23 °C, mobilna faza = 0-7% MeOH (w/0,2% NH4OH):CO2, UV detekcija na 220 nm, opterećenje = 16,8 mg/inj, konc = 112,5 ng/ml u MeOH, brzina protoka = 70 ml/min, izlazni pritisak = 100 bar] da bi se dobila dva dijastereomera. Stereohemija za glavni dijastereomer Intermedijer 6 je dodeljena kao antiadicioni proizvod, a manji dijastereomer Intermedijer 5 kao sin-adicioni proizvod.

[0085] Intermedijer 5 (436 mg): (2S,4R)-2-benzil 1-terc-butil 4-azido-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)pirolidin- 1,2-dikarboksilat.<1>H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 0.58 - 0.70 (2H, m), 1.17 (12H, s), 1.25 -1.40 (13 H, m), 1.74-1.83 (1H, s), 2.00 - 2.11 (2H, m), 2.38-2.47 (1H, m), 3.07 - 3.16 (1H, m), 3.81 (1H, m), 4.29 - 4.34 (1H, m), 5.04 - 5.17 (2H, m), 7.34 - 7.39 (m, 5H); m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 529.

[0086] Intermedijer 6 (1,60 g): (2R,4R)-2-benzil 1-terc-butil 4-azido-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)pirolidin-1,2-dikarboksilat.<1>H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 0.56 - 0.73 (2H, m), 0.98 - 1.13 (1H, m), 1.17 (12H, s), 1.26 - 1.37 (13H, m), 1.66 - 1.79 (1H, m), 2.01 - 2.22 (2H, m), 2.34 - 2.47 (1H, m), 3.60 (1H, br dd), 4.29 - 4.35 (1H, m), 5.04 - 5.18 (2H, m), 7.31 - 7.40 (5H, m); m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 529.

2

Intermedijer 7: (2R,4R)-2-benzil 1-terc-butil 4-amino-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)pirolidin-1,2-dikarboksilat

[0087]

[0088] (2R,4R)-2-benzil 1-terc-butil 4-azido-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)pirolidin-1,2-dikarboksilat (intermedijer 6, 688 mg, 1,30 mmol) je rastvoren u etil acetatu (13 ml) i metanolu (4 ml) i tretiran sa Pd/C (10% tež, 346 mg, 0,325 mmol). Boca je opremljena balonom H2i suspenzija je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je filtrirana kroz dijatomejsku zemlju i isprana metanolom. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio proizvod (intermedijer 7, 500 mg, 93% prinos) koji je korišćen bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (300MHz, DMSO-d6) δ 0.67 (2H, t), 0.94-1.00 (1H, m), 1.17 (12H, s), 1.22 -1.38 (11H, m), 1.43 - 1.53 (1H, m), 1.85 (1H, d), 2.00 - 2.15 (2H, m), 3.23 (2H, dd), 3.58 - 3.61 (1H, m), 3.80 - 3.88 (1H, m), 8.96 (2H, m); m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 413.

Intermedijer 8: (2R,4R)-2-benzil 1-terc-butil4-((R)-2-(terc-butoksikarbonilamino)-3-metilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)pirolidin-1,2-dikarboksilat

[0089]

[0090] Trietilamin (0,21 ml, 1,5 mmol) i HATU (254 mg, 0,668 mmol) dodani su uzastopno u rastvor Boc-Val-OH (145 mg, 0,668 mmol) u DMF (2,9 ml) i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 30 min. (2R,4R)-4-amino-1-(terc-butoksikarbonil)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)pirolidin-2-karboksilna kiselina (intermedijer 7, 250 mg, 0,606 mmol) je dodata u reakcionu smešu kao rastvor u DMF (2,9 ml). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom noći. Sirova reakciona smeša je koncentrovana i direktno prečišćena hromatografijom na silika gelu (heksan/EtOAc) da bi se dobio proizvod (intermedijer 8, 250 mg, 67% prinos) kao smeša rotamera.<1>H NMR (300MHz, DMSO-d6) δ 0.64 - 0.73 (2H, m), 0.73 - 0.85 (6H, m), 1.13 - 1.14 (1H, m), 1.17 (12H, s), 1.22 - 1.42 (22H, m), 1.56 - 1.75 (1H, m), 1.79 - 1.97 (1H, m), 2.00 - 2.26 (2H, m), 3.08 - 3.24 (1H, m), 3.54 - 3.77 (2H, m), 4.12 -4.36 (1H, m), 6.58 (1H, t), 7.96 - 8.03 (2H, m); m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 584.

Intermedijer 9: (2R,4R)-4-((S)-2-amino-3-metibutanamido)-2-(4-borobutil)pirolidin-2-karboksilna kiselina

[0091]

[0092] Trifluorosirćetna kiselina (0,63 ml, 8,2 mmol) je dodata u rastvor (2R,4R)-1-(tercbutoksikarbonil)-4-((S)-2-(terc-butoksikarbonilamino)-3-metilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)pirolidin-2-karboksilna kiselina (intermedijer 8, 250 mg, 0,409 mmol) u DCM (4 ml). Dobijeni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi 1 h i zatim koncentrovan pod vakuumom. Sirova amino kiselina je rastvorena u Et2O (2 ml) i 1M vodenoj HCl (2 ml). Dodata je fenilborna kiselina (99 mg, 0,81 mmol) i bistri dvofazni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi 1 h. Reakciona smeša je razblažena vodom i isprana sa Et2O. Vodeni sloj je liofilizovan i prečišćen jonoizmenjivačkom hromatografijom (PoraPak Rxn CX 60 cc kolona). Željeni proizvod je eluiran iz kolone korišćenjem 2M amonijaka/metanola. Dobijeni materijal je dalje prečišćen hromatografijom reverzne faze (RediSep Rf Gold<®>C18Aq, 0 do 10% acetonitrila u vodi) da bi se dobio (2R,4R)-4-((S)-2-amino-3-metilbutanamido)-2-(4-boronobutil)pirolidin-2-karboksilna kiselina (intermedijer 9, 28 mg, 20% prinos) kao bela čvrsta supstanca i smeša rotamera.<1>H NMR (300MHz, D2O) δ 0.66 - 0.76 (2H, m), 0.85 (6H,

1

dd), 1.07 - 1.43 (4H, m), 1.55 - 1.68 (1H, m), 1.77 - 1.97 (2H, m), 2.13 - 2.33 (2H, m), 3.07 (1H, d), 3.08 - 3.16 (1H, m), 3.37 - 3.48 (1H, m), 4.27 - 4.40 (1H, m); m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 330.

Primer 1: (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hydroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid oblika D.

[0093]

[0094] Količina od 20,5 mg intermedijera 9 je suspendovana u 0,50 ml MeCN. Suspenzija je zagrejana na 75 °C i mešana na 75 °C tokom 1 sata. Suspenzija je zatim ohlađena do sobne temperature i čvrsta supstanca je filtrirana i osušena na vazduhu. Dobijen je kristalni materijal sa igličastim/štapićastim kristalima i označen kao (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7 ]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid oblika D.

[0095] Primer 1 je analiziran pomoću XRPD i rezultati su prikazani u tabeli ispod (Tabela 1) i prikazani na slici 1.

Tabela 1. XRPD pikoviza oblik D

2

[0096] Primer 1 je karakterisan pružanjem najmanje jedne od sledećih 2θ±0,2° vrednosti merenih korišćenjem CuKα zračenja: 7,8, 19,2 i 15,0°.

[0097] Monokristali Primera 1 su dobijeni sporim uparavanjem rastvora acetonitrila i analiza strukture monokristala je potvrdila da je Primer 1 anhidrovani oblik. Molekularna struktura Primera 1 prikazana je na slici 2. Kristalografski podaci: Prostorna grupa ortorombna P212121, dimenzije jedinične ćelije: a = 10.9250(6) Å, b = 12.9532(8) Å, c = 23.8051(14) Å, V = 3368.7(3) Å<3>.

[0098] Primer 1 je analiziran termičkim tehnikama. DSC analiza je pokazala da je oblik D imao endotermni događaj dehidrata sa početkom na oko 213 °C i vrhuncem na oko 214 °C. TGA je pokazao da primer 1 pokazuje gubitak mase od oko 0,4 % pri zagrevanju od oko 25 °C do oko 150 °C i gubitak mase od oko 3,1 % pri zagrevanju od oko 150 °C do oko 225 °C. Reprezentativni DSC/TGA termogram primera 1 prikazan je na slici 3.

[0099] Primer 1 je analiziran gravitacionom parnom sorpcijom. GVS analiza je pokazala da primer 1 apsorbuje manje od 2% vode pri relativnoj vlažnosti (RV) od 70% i da je počeo da se raspada nakon 80% RV. Reprezentativni GVS termogram Primera 1 prikazan je na slici 4.

Primer 2: (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-izopropil-2,2-dimetil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.71]dodekan- 6-one oblik 1 (adukt acetona) oblik 1

[0100]

[0101] Količina od 20,3 mg intermedijera 9 je suspendovana u 2,0 ml acetona. Čvrsta supstanca je rastvorena nakon što je dodato 200 µl H2O. Rastvarač je uklonjen uparavanjem u ambijentalnim uslovima. Dobijena čvrsta supstanca je suspendovana u 1,0 ml acetona i mešana na sobnoj temperaturi 3 dana. Nakon što je rastvarač osušen na vazduhu, dobijen je kristalni materijal (kristali u obliku štapa) acetonskog adukta i označen kao (3R,5R)-8-hidroksi-3-((S)-4-izopropil-2,2-dimetil-5-oksoimidazolidin-1-il)-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-6-on.

[0102] Primer 2 je analiziran XRPD i rezultati su prikazani u tabeli ispod (Tabela 2) i prikazani na slici 5.

Tabela 2. XRPD pikovi za adukt acetona

[0103] Primer 2 je karakterisan pružanjem najmanje jedne od sledećih 2θ±0,2° vrednosti merenih korišćenjem CuKα zračenja: 11,6, 8,2 i 13,3°.

[0104] Monokristali iz primera 2 dobijeni su sporim uparavanjem rastvora acetona/H2O. Analiza strukture monokristala potvrdila je da je aceton monohidrat. Molekularna struktura adukta acetona prikazana je na slici 6. Kristalografski podaci: Prostorna grupa ortorombna

4

P212121, dimenzije jedinične ćelije: a = 8.4752(8) Å, b = 13.7561(14) Å, c = 17.6681(16) Å, V = 2059.8(3) Å<3>.

[0105] Primer 2 je analiziran termičkim tehnikama. DSC analiza je pokazala da je adukt acetona imao endotermni događaj dehidrata sa početkom na 82 °C i vrhuncem na 122 °C. Drugi endotermni događaj dehidrata takođe je identifikovan sa početkom na 177 °C i vrhuncem na 182 °C. TGA je pokazao adukt acetona pokazuje gubitak mase od oko 5,5 % pri zagrevanju od oko 25 °C do oko 150 °C i gubitak mase od oko 3,2 % pri zagrevanju od oko 150 °C do oko 225 °C. Reprezentativni DSC/TGA termogram adukta acetona prikazan je na slici 7.

[0106] Primer 2 je analiziran gravitacionom parnom sorpcijom. GVS analiza je pokazala da adukt acetona apsorbuje manje od 2% vode pri relativnoj vlažnosti (RV) od 80%. Reprezentativni GVS termogram adukta acetona prikazan je na slici 8.

Primer 3: (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hydroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan 3-il)-3-metilbutanamid oblika E

[0107] Količina od 30 mg intermedijera 9 je suspendovana u 0,50 ml etil acetata, prethodno zasićenog vodom. Suspenzija je zagrejana na 75 °C i mešana na 75 °C tokom 1 sata. Suspenzija je zatim ohlađena do sobne temperature i čvrsta supstanca je filtrirana i osušena na vazduhu. Dobijen je kristalni materijal sa igličastim/štapićastim kristalima i označen kao (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7 ]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid oblika E.

[0108] Primer 3 je analiziran XRPD i rezultati su prikazani u tabeli ispod (Tabela 3) i prikazani na slici 9.

Tabela 3. XRPD pikovi za oblik E

[0109] Primer 3 je karakterisan pružanjem najmanje jedne od sledećih 2θ±0,2° vrednosti merenih korišćenjem CuKα zračenja: 12,3, 18,8 i 9,3°.

[0110] Monokristali Primera 3 su dobijeni sporim uparavanjem bistrog rastvora sa smešom rastvora acetonitrila i vode (odnos 20:1) i analiza strukture monokristala je potvrdila da je primer 3 monohidratni oblik. Molekularna struktura Primera 3 prikazana je na slici 10.

Kristalografski podaci: Prostorna grupa heksagonalnog P61, dimenzije jedinične ćelije: a = 14.4509(4) Å, b = 14.4509(4) Å, c = 14.6815(10) Å, V = 2655.2(2) Å<3>.

[0111] Primer 3 je analiziran termičkim tehnikama. DSC analiza je pokazala da je oblik E imao endotermni događaj dehidrata sa početkom na oko 105 °C i vrhuncem na oko 125 °C. Još jedan endotermni događaj dehidrata je takođe identifikovan sa širokim opsegom između oko 125 °C do oko 225 °C. TGA je pokazao da primer 3 pokazuje gubitak mase od oko 6,0 % pri zagrevanju od oko 25 °C do oko 135 °C i gubitak mase od oko 3,0 % pri zagrevanju od oko 125 °C do oko 225 °C. Reprezentativni DSC/TGA termogram acetona je prikazan na slici 11.

[0112] Primer 3 je analiziran gravitacionom parnom sorpcijom. GVS analiza je pokazala da primer 3 apsorbuje manje od 2% vode pri relativnoj vlažnosti (RV) od 80%. Reprezentativni GVS termogram Primera 3 prikazan je na slici 12.

Primer 4: Biološka aktivnost

[0113] Kristalni materijali oblika D (primer 1), oblika 1 (primer 2) i oblika E (primer 3) se pretvaraju u isti aktivni hemijski deo kada se rastvore u vodenom medijumu, npr., u fiziološkim uslovima. Inhibitorni efekti Primera 1 na aktivnost humane arginaze 1 i aktivnosti arginaze 2 kvantifikovani su merenjem formiranja tiol grupe iz tioarginina korišćenjem rekombinantne arginaze 1 ili arginaze 2 proizvedene iz E. coli. Tiol grupa je detektovana Elmanovim reagensom, 5,5'-ditiobis(2-nitrobenzojeva kiselina) (DTNB). DTNB reaguje sa tiolom dajući mešavinu disulfida i 2-nitro-5-tiobenzoeve kiseline (TNB) koja se kvantifikuje pomoću apsorbancije anjona (TNB2-) na 412 nm.

[0114] Testovi su vršeni u prozirnim pločama sa 384 bunarčića (Greiner kat. br.: 781101). Različite koncentracije primera 1 u 300 nl DMSO dozirane su u test ploče koristeći Echo akustični dozator, nakon čega je smesta usledilo zaptivanje i centrifugiranje ploča.

Dve prethodne smeše su pripremljene od reagenasa koji su odmrznuti neposredno pre dodavanja na test ploče. Prethodna smeša jedan je sadržala humanu arginazu 1 ili humanu arginazu 2, sa finalnom koncentracijom od 5 nM i 0,5 mM DTNB u test puferu, 45 mM HEPES pH 7,5, brij 35, 0,045% (m/V) i 100 µM MnCl2. Prethodna smeša dva je sadržala sveže odmrznuti 0,5 mM tioarginin u test puferu. Petnaest mikrolitara prethodne smeše jedan je dozirano na test ploče koje sadrže primer 1, centrifugirano i inkubirano tokom 30 minuta na sobnoj temperaturi pre dodavanja petnaest mikrolitara prethodne smeše dva.

[0115] Test ploče su centrifugirane pre očitavanja apsorbance na 412 nm na multimodalnom čitaču ploča Pherastar kako bi se sakupili podaci u terminu 0 (T0). Ploče su inkubirane na sobnoj temperaturi tokom 60 min pre ponovnog očitavanja za prikupljanje podataka u terminu 1 (T1). Podaci su dobijeni oduzimanjem A412 signala koji je izmeren u T0 (termin 0) od signala izmerenog u T1 (termin 1). Podaci su transformisani u % dejstva koristeći jednačinu:

% efekta jedinjenja = 100*[(X-min)/(max-min)],

gde X predstavlja normalizovanu vrednost za jedinjenje na osnovu min (vehikulum) i max (referentno jedinjenje) kontrole inhibicije.

[0116] Koncentracija primera 1 koja je inhibirala aktivnost za 50% (tj. IC50) izračunata je postavljanjem % dejstva u odnosu na koncentraciju testiranog jedinjenja i uklapanjem podataka koristeći algoritam Genedata Screener Smart fit. IC50primera 1 za arginazu 1 bio je 0,222 µM i 0.282 za arginazu 2.

Claims (12)

Patentni zahtevi

1. Kristalni (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid oblika D karakterisan rendgenskom difrakcijom praha koja sadrži (a) najmanje 3 pika odabrana između 7,8, 19,2, 15,0, 16,4, 13,1, 13,7, 26,4, 19,8, 17,9 i 22,5 stepena 2θ±0,2°; ili (b) najmanje 5 pikova izabranih između 7,8, 19,2, 15,0, 16,4, 13,1, 13,7, 26,4, 19,8, 17,9 i 22,5 stepena 2θ±0,2°.

2. Kristalni (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid oblika D prema patentnom zahtevu 1, dalje je karakterisan krivom diferencijalne skenirajuće kalorimetrije (DSC) koja sadrži endoterm na oko 214 °C.

3. Farmaceutska kompozicija koja sadrži kristalni (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid oblika D prema zahtevu 1 ili 2 i farmaceutski prihvatljiv nosač.

4. Farmaceutska kompozicija koja sadrži efikasnu količinu (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid prema patentnom zahtevu 1 ili 2 i farmaceutski prihvatljiv nosač, naznačen time, što najmanje oko 85%, ili najmanje oko 90%, ili najmanje oko 95%, ili najmanje oko 96%, ili najmanje oko 97%, ili najmanje oko 98%, ili najmanje oko 99%, ili najmanje oko 99,5% (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid je u obliku D.

5. Farmaceutska kompozicija za upotrebu u lečenju kancera koja sadrži efikasnu količinu kristalnog (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid blika D prema patentnom zahtevu 1 ili 2.

6. Kristalni (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid oblika D prema patentnom zahtevu 1 ili 2 za upotrebu u lečenju kancera.

7. Kristalni (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid oblika E karakterisan rendgenskom difrakcijom praha koja sadrži najmanje 3 pika odabrana između 12,3, 18,8, 9,3, 14,2, 14,1, 19,8, 26,2, 17,3, 7,1 i 25,4 stepena 2θ±0,2°; ili (b) najmanje 5 pikova izabranih između 12,3, 18,8, 9,3, 14,2, 14,1, 19,8, 26,2, 17,3, 7,1 i 25,4 stepena 2θ±0.2°.

8. Kristalni (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid Oblik E prema patentnom zahtevu 7, dalje karakterisan krivom diferencijalne skenirajuće kalorimetrije (DSC) koja sadrži endoterm na oko 125 °C.

9. Farmaceutska kompozicija koja sadrži kristalni (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid oblika E prema patentnom zahtevu 7 ili 8 i farmaceutski prihvatljiv nosač.

10. Farmaceutska kompozicija koja sadrži efikasnu količinu (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid oblika E prema patentnom zahtevu 7 ili 8 i farmaceutski prihvatljiv nosač, naznačen time što je najmanje oko 85%, ili najmanje oko 90%, ili najmanje oko 95%, ili najmanje oko 96%, ili najmanje oko 97%, ili najmanje oko 98%, ili najmanje oko 99%, ili najmanje oko 99,5% (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid u obliku E.

11. Farmaceutska kompozicija za upotrebu u lečenju kancera koja sadrži efikasnu količinu kristalnog (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid Forme E prema patentnom zahtevu 7 ili 8.

12. Kristalni (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidroksi-6-okso-7-oksa-1-aza-8-boraspiro[4.7]dodekan-3-il)-3-metilbutanamid oblika E prema patentnom zahtevu 7 ili 8 za upotrebu u lečenju kancera.

4