RS64381B1 - Postupci pripreme personalizovanih krvnih sudova - Google Patents

Postupci pripreme personalizovanih krvnih sudova

Info

Publication number
RS64381B1
RS64381B1 RS20230591A RSP20230591A RS64381B1 RS 64381 B1 RS64381 B1 RS 64381B1 RS 20230591 A RS20230591 A RS 20230591A RS P20230591 A RSP20230591 A RS P20230591A RS 64381 B1 RS64381 B1 RS 64381B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
whole blood
certain embodiments
concentration
tubular structure
blood sample
Prior art date
Application number
RS20230591A
Other languages
English (en)
Inventor
Raimund Strehl
Original Assignee
VeriGraft AB
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by VeriGraft AB filed Critical VeriGraft AB
Publication of RS64381B1 publication Critical patent/RS64381B1/sr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/3604—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix characterised by the human or animal origin of the biological material, e.g. hair, fascia, fish scales, silk, shellac, pericardium, pleura, renal tissue, amniotic membrane, parenchymal tissue, fetal tissue, muscle tissue, fat tissue, enamel
    • A61L27/3616—Blood, e.g. platelet-rich plasma
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/50—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. injectable or lubricating compositions, shape-memory materials, surface modified materials
    • A61L27/507—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. injectable or lubricating compositions, shape-memory materials, surface modified materials for artificial blood vessels
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61F—FILTERS IMPLANTABLE INTO BLOOD VESSELS; PROSTHESES; DEVICES PROVIDING PATENCY TO, OR PREVENTING COLLAPSING OF, TUBULAR STRUCTURES OF THE BODY, e.g. STENTS; ORTHOPAEDIC, NURSING OR CONTRACEPTIVE DEVICES; FOMENTATION; TREATMENT OR PROTECTION OF EYES OR EARS; BANDAGES, DRESSINGS OR ABSORBENT PADS; FIRST-AID KITS
    • A61F2/00—Filters implantable into blood vessels; Prostheses, i.e. artificial substitutes or replacements for parts of the body; Appliances for connecting them with the body; Devices providing patency to, or preventing collapsing of, tubular structures of the body, e.g. stents
    • A61F2/02—Prostheses implantable into the body
    • A61F2/04—Hollow or tubular parts of organs, e.g. bladders, tracheae, bronchi or bile ducts
    • A61F2/06—Blood vessels
    • A61F2/062—Apparatus for the production of blood vessels made from natural tissue or with layers of living cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/3604—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix characterised by the human or animal origin of the biological material, e.g. hair, fascia, fish scales, silk, shellac, pericardium, pleura, renal tissue, amniotic membrane, parenchymal tissue, fetal tissue, muscle tissue, fat tissue, enamel
    • A61L27/3625—Vascular tissue, e.g. heart valves
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/3683—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix subjected to a specific treatment prior to implantation, e.g. decellularising, demineralising, grinding, cellular disruption/non-collagenous protein removal, anti-calcification, crosslinking, supercritical fluid extraction, enzyme treatment
    • A61L27/3687—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix subjected to a specific treatment prior to implantation, e.g. decellularising, demineralising, grinding, cellular disruption/non-collagenous protein removal, anti-calcification, crosslinking, supercritical fluid extraction, enzyme treatment characterised by the use of chemical agents in the treatment, e.g. specific enzymes, detergents, capping agents, crosslinkers, anticalcification agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/38—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells
    • A61L27/3804—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells characterised by specific cells or progenitors thereof, e.g. fibroblasts, connective tissue cells, kidney cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/38—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells
    • A61L27/3839—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells characterised by the site of application in the body
    • A61L27/3882—Hollow organs, e.g. bladder, esophagus, urether, uterus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/50—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. injectable or lubricating compositions, shape-memory materials, surface modified materials
    • A61L27/54—Biologically active materials, e.g. therapeutic substances
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L33/00—Antithrombogenic treatment of surgical articles, e.g. sutures, catheters, prostheses, or of articles for the manipulation or conditioning of blood; Materials for such treatment
    • A61L33/0005—Use of materials characterised by their function or physical properties
    • A61L33/0011—Anticoagulant, e.g. heparin, platelet aggregation inhibitor, fibrinolytic agent, other than enzymes, attached to the substrate
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M21/00—Bioreactors or fermenters specially adapted for specific uses
    • C12M21/08—Bioreactors or fermenters specially adapted for specific uses for producing artificial tissue or for ex-vivo cultivation of tissue
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M25/00—Means for supporting, enclosing or fixing the microorganisms, e.g. immunocoatings
    • C12M25/14—Scaffolds; Matrices
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M29/00—Means for introduction, extraction or recirculation of materials, e.g. pumps
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M41/00—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation
    • C12M41/26—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation of pH
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M41/00—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation
    • C12M41/30—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation of concentration
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M41/00—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation
    • C12M41/30—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation of concentration
    • C12M41/34—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation of concentration of gas
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/66—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood sugars, e.g. galactose
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61F—FILTERS IMPLANTABLE INTO BLOOD VESSELS; PROSTHESES; DEVICES PROVIDING PATENCY TO, OR PREVENTING COLLAPSING OF, TUBULAR STRUCTURES OF THE BODY, e.g. STENTS; ORTHOPAEDIC, NURSING OR CONTRACEPTIVE DEVICES; FOMENTATION; TREATMENT OR PROTECTION OF EYES OR EARS; BANDAGES, DRESSINGS OR ABSORBENT PADS; FIRST-AID KITS
    • A61F2240/00—Manufacturing or designing of prostheses classified in groups A61F2/00 - A61F2/26 or A61F2/82 or A61F9/00 or A61F11/00 or subgroups thereof
    • A61F2240/001—Designing or manufacturing processes
    • A61F2240/002—Designing or making customized prostheses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/20—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices containing or releasing organic materials
    • A61L2300/21—Acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/20—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices containing or releasing organic materials
    • A61L2300/23—Carbohydrates
    • A61L2300/232—Monosaccharides, disaccharides, polysaccharides, lipopolysaccharides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/20—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices containing or releasing organic materials
    • A61L2300/23—Carbohydrates
    • A61L2300/236—Glycosaminoglycans, e.g. heparin, hyaluronic acid, chondroitin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/40—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices characterised by a specific therapeutic activity or mode of action
    • A61L2300/412—Tissue-regenerating or healing or proliferative agents
    • A61L2300/414—Growth factors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/40—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices characterised by a specific therapeutic activity or mode of action
    • A61L2300/42—Anti-thrombotic agents, anticoagulants, anti-platelet agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2430/00—Materials or treatment for tissue regeneration
    • A61L2430/40—Preparation and treatment of biological tissue for implantation, e.g. decellularisation, cross-linking

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Sustainable Development (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Surgery (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)

Description

Opis
UPUĆIVANJE NA POVEZANE PATENTNE PRIJAVE
[0001] Ova patentna prijava zahteva korist privremene patentne prijave SAD br.62/714,200, podnete 3. avgusta, 2018.
OBLAST OBELODANJENJA
[0002] Predmetno obelodanjenje se odnosi na personalizovane krvne sudove i postupke za pripremu personalizovanih krvnih sudova. U različitim otelotvorenjima, personalizovani krvni sudovi proizvedeni ovde razmatranim postupcima mogu biti korisni u transplantaciji sa poboljšanom kompatibilnošću domaćina, integracijom tkiva i smanjenom osetljivošću na trombozu.
POZADINA
[0003] Vaskularne bolesti predstavljaju ozbiljan i stalno rastući zdravstveni problem na globalnom nivou. Mogućnosti zamene oštećenih krvnih sudova danas su ograničene. Autologna transplantacija zahteva odgovarajući krvni sud u pacijentu i dovodi do morbiditeta na mestu doniranog organa. Dostupne su sintetičke zamene za krvne sudove, ali njima nedostaje biološka integracija u tkivu domaćina i dugoročna prohodnost. Postoji potreba za potpuno biološkim individualizovanim transplantacijama za pacijente.
[0004] Međunarodni broj patentne objave WO/2013/136184 obelodanjuje "postupke za recelularizaciju krvnih sudova;" na primer „za proizvodnju alogene vene, pri čemu se vena donora decelularizuje, a zatim recelularizaciju korišćenjem pune krvi ili matičnih ćelija koštane srži“.
[0005] Međunarodni broj patentne objave WO/2015/181245 obelodanjuje "postupke za recelularizaciju ventila u venama koje nose ventile;" na primer „za proizvodnju alogenoj venskog zaliska, pri čemu se vena koja nosi donorski zalistak celularizuje, a zatim ponovo celularizuje korišćenjem pune krvi ili matičnih ćelija koštane srži“.
REZIME OBELODANJENJA
[0006] Sadašnji pronalazak se odnosi na postupak pripreme personalizovanog krvnog suda, koji obuhvata dovođenje u kontakt površine acelularne tubularne strukture sa suspenzijom koja sadrži uzorak pune krvi od ispitanika kome je potreban personalizovani krvni sud, pri čemu se uzorak cele krvi razblaži u fiziološkom rastvoru, a pri čemu se kontaktiranje vrši 3 do 14 dana. U nekim otelotvorenjima, fiziološki rastvor održava koloidni onkotski pritisak ekstracelularnog okruženja, puferuje pH u CO2nezavisnoj materiji i/ili obezbeđuje ćelijski zaštitni ili antioksidativni efekat.
[0007] U nekim otelotvorenjima, populacija ćelija prisutnih u uzorku cele krvi popunjava strukturu.
[0008] U nekim otelotvorenjima, uzorak cele krvi sadrži jedan ili više nećelijskih faktora, pri čemu jedan ili više nećelijskih faktora pune krvi popunjavaju strukturu, i pri čemu jedan ili više nećelijskih faktora promovišu celularizaciju acelularne tubularne strukture i kompatibilnost krvnog suda sa domaćinom nakon presađivanja.
[0009] U nekim otelotvorenjima, nerazređeni uzorak pune krvi ili suspenzija koja sadrži uzorak cele krvi dalje sadrži antitrombotički faktor.
[0010] U nekim otelotvorenjima, antitrombotički faktor sadrži antikoagulantno sredstvo.
[0011] U nekim otelotvorenjima, antikoagulantno sredstvo sadrži heparin ili dekstran.
[0012] U nekim otelotvorenjima, heparin je prisutan u nerazređenom uzorku pune krvi ili suspenziji koja sadrži uzorak cele krvi u koncentraciji od oko 0,5 IU/mL do oko 150 IU/mL na početku kontakta sa površinom acelularne tubularne strukture.
[0013] U nekim otelotvorenjima, heparin je prisutan u nerazređenom uzorku pune krvi ili suspenziji koja sadrži uzorak cele krvi u koncentraciji od oko 6,7 IU/mL na početku kontakta sa površinom acelularne tubularne strukture.
[0014] U nekim otelotvorenjima, dekstran je dekstran-40.
[0015] U nekim otelotvorenjima, dekstran prisutan u nerazređenom uzorku pune krvi ili suspenziji koja sadrži uzorak cele krvi u koncentraciji od oko 1 g/L do oko 55 g/L na početku kontakta sa površinom acelularne tubularne strukture.
[0016] U nekim otelotvorenjima, antitrombotičko sredstvo sadrži askorbinsku kiselinu.
[0017] U nekim otelotvorenjima, askorbinska kiselina prisutna u nerazređenom uzorku pune krvi ili suspenziji koja sadrži uzorak cele krvi u koncentraciji od oko 0,2 µg/mL do oko 200 µg/mL na početku kontakta sa površinom acelularne tubularne strukture.
[0018] U nekim otelotvorenjima, koncentracija askorbinske kiseline prisutne u nerazređenom uzorku pune krvi ili suspenziji koja sadrži uzorak cele krvi u koncentraciji od oko 5 µg/mL na početku kontakta sa površinom acelularne tubularne strukture.
[0019] U nekim otelotvorenjima, antitrombotički faktor obuhvata acetilsalicilnu kiselinu.
[0020] U nekim otelotvorenjima, acetilsalicilna kiselina je prisutna u nerazređenom uzorku pune krvi ili suspenziji koja sadrži uzorak cele krvi u koncentraciji od oko 0,2 µg/mL do oko 200 µg/mL na početku kontakta sa površinom acelularne tubularne strukture.
[0021] U nekim otelotvorenjima, acetilsalicilna kiselina je prisutna u nerazređenom uzorku pune krvi ili suspenziji koja sadrži uzorak cele krvi u koncentraciji od oko 5 µg/mL na početku kontakta sa površinom celularne tubularne strukture.
[0022] U nekim otelotvorenjima, uzorak cele krvi ili suspenzija koja sadrži uzorak cele krvi dalje sadrži jednak ili veći od prosečnog fiziološkog nivoa populacije faktora rasta izabranog iz grupe koju čine: faktora stimulacije granulocitno-makrofagnih kolonija (GM-CSF), interleukin (IL)-3, IL-4, neutrofin (NT)-6, pleiotrofin (HB-GAM), midkin (MK), interferon inducibilni protein-10 (IP-10), faktor trombocita (PF)-4, monocitni hemotaktički protein-1 (MCP-1), RANTES (CCL-5, hemokin (C-C motiv) ligand 5), IL-8, IGFs, faktor rasta fibroblasta (FGF)-1, FGF-2, FGF-3, FGF-4, FGF-5, FGF-6, FGF-7, FGF-8, FGF-9, transformacioni faktor rasta beta (TGF)-β, VEGF, faktor rasta izveden iz trombocita (PDGF)-A, PDGF-B, HB-EGF, faktor rasta hepatocita (HGF), faktor nekroze tumora (TNF)-α, faktor rasta sličan insulinu (IGF)-1, i bilo koja njihova kombinacija(e).
[0023] U nekim otelotvorenjima, faktor rasta je faktor rasta fibroblasta (FGF)-2.
[0024] U nekim otelotvorenjima, FGF-2 je humani FGF-2.
[0025] U nekim otelotvorenjima, FGF-2 je prisutan u nerazređenom uzorku pune krvi ili suspenziji koja sadrži uzorak cele krvi u koncentraciji od oko 0,5 ng/mL do oko 200 ng/mL na početku kontakta sa površinom acelularne tubularne strukture.
[0026] U nekim otelotvorenjima, koncentracija FGF-2 prisutnog u nerazređenom uzorku pune krvi ili suspenziji koja sadrži uzorak cele krvi u koncentraciji od oko 10 ng/mL na početku kontakta sa površinom acelularne tubularne strukture.
[0027] U nekim otelotvorenjima, faktor rasta je faktor rasta vaskularnog endotela (VEGF).
[0028] U nekim otelotvorenjima, VEGF je humani VEGF.
[0029] U nekim otelotvorenjima, VEGF je prisutan u nerazređenom uzorku pune krvi ili suspenziji koja sadrži uzorak cele krvi u koncentraciji od oko 4 ng/mL do oko 800 ng/mL na početku kontakta sa površinom acelularne tubularne strukture.
[0030] U nekim otelotvorenjima, VEGF je prisutan u nerazređenom uzorku pune krvi ili suspenziji koja sadrži uzorak cele krvi u koncentraciji od oko 80 ng/mL na početku kontakta sa površinom celularne tubularne strukture.
[0031] U nekim otelotvorenjima, uzorak pune krvi ili suspenzija koja sadrži uzorak pune krvi dalje sadrži humani serum albumin, pri čemu je koncentracija humanog serumskog albumina na početku kontakta sa površinom acelularne tubularne skele oko 55 g/L do oko 105 g/L.
[0032] U nekim otelotvorenjima, fiziološki rastvor sadrži neorgansku so i puferski sistem.
[0033] U nekim otelotvorenjima, puferski sistem obuhvata sistem pufera nezavisan od CO2.
[0034] U nekim otelotvorenjima, CO2nezavisan puferski sistem sadrži fosfatni puferski sistem.
[0035] U nekim otelotvorenjima, fiziološki rastvor pokazuje osmotski pritisak suštinski sličan punoj krvi, koji je poželjno od oko 270 mOsm/kg H2O do oko 310 mOsm/kg H2O.
[0036] U nekim otelotvorenjima, fiziološki rastvor dalje sadrži onkotični faktor i/ili hranljivu materiju.
[0037] U nekim otelotvorenjima, onkotični faktor obuhvata serumski albumin.
[0038] U nekim otelotvorenjima, koncentracija humanog serumskog albumina VEGF je prisutna u nerazređenom uzorku pune krvi ili suspenziji koja sadrži uzorak cele krvi u koncentraciji od oko 55 g/L do oko 105 g/L na početku kontakta sa površinom acelularne tubularne strukture.
[0039] U nekim otelotvorenjima, hranljivi sastojak sadrži jedan ili više šećera, aminokiseline ili vitamina.
[0040] U nekim otelotvorenjima, šećer je D-glukoza.
[0041] U nekim otelotvorenjima, fiziološki rastvor sadrži faktor rasta i antitrombotički faktor, hranljivu materiju i onkotički faktor; pri čemu faktor rasta obuhvata humani FGF-2 i humani VEGF; pri čemu antitrombotički faktor sadrži jedan ili više od acetilsalicilne kiseline, heparina ili dekstrana; i pri čemu hranljiva materija sadrži D-glukozu.
[0042] U nekim otelotvorenjima, postupak ne zahteva kontaktiranje acelularne tubularne strukture sa medijumom ćelijske kulture nakon kontakta sa punom krvlju za pripremu personalizovanog krvnog suda.
[0043] U nekim otelotvorenjima, kontakt sa površinom acelularne tubularne strukture traje više od 4 dana, više od 5 dana, više od 6 dana, više od 7 dana.
[0044] U nekim otelotvorenjima, pri čemu je acelularne tubularne strukture u kontaktu sa suspenzijom koja sadrži uzorak cele krvi, a postupak dalje obuhvata praćenje više parametara okoline i/ili koncentracije hranljive materije tokom pripreme personalizovanog krvnog suda.
[0045] U nekim otelotvorenjima, postupci predmetnog obelodanjenja dalje obuhvataju podešavanje većeg broja parametara okoline.
[0046] U nekim otelotvorenjima, mnoštvo parametara okruženja obuhvata temperaturu, pH, kiseonik i/ili CO2.
[0047] U nekim otelotvorenjima, acelularna tubularna struktura je u kontaktu sa suspenzijom koja sadrži uzorak cele krvi, a postupak dalje obuhvata praćenje koncentracije hranljive materije u suspenziji.
[0048] U nekim otelotvorenjima, postupci predmetnog obelodanjenja dalje obuhvataju kontinuirano ili redovno prilagođavanje koncentracije hranljive materije.
[0049] U nekim otelotvorenjima, hranljiva materija je D-glukoza, i pri čemu se koncentracija D-glukoze podešava kontinuirano ili redovno da bi se održala koncentracija D-glukoze na oko 3 do oko 11 mmol/L.
[0050] U nekim otelotvorenjima, koncentracija D-glukoze u suspenziji se prati merenjem koncentracije D-glukoze u uzorku sakupljenom iz suspenzije.
[0051] U nekim otelotvorenjima, koncentracija D-glukoze u suspenziji se meri jednom dnevno.
[0052] U nekim otelotvorenjima, koncentracija D-glukoze u suspenziji se prati merenjem koncentracije D-glukoze pomoću senzora koji je u kontaktu sa suspenzijom.
[0053] U nekim otelotvorenjima, senzor je neprekidno u kontaktu sa suspenzijom tokom kontakta.
[0054] U nekim otelotvorenjima, D-glukoza se dodaje kada je izmerena koncentracija D-glukoze u suspenziji ispod 4 mmol/L.
[0055] U nekim otelotvorenjima, D-glukoza se dodaje da bi se postigla konačna koncentracija od 10 mmol/L D-glukoze u suspenziji.
[0056] U nekim otelotvorenjima, površina acelularne tubularne strukture je unutrašnja površina acelularne tubularne strukture.
[0057] U nekim otelotvorenjima, puna krv obuhvata perifernu krv ili krv iz pupčane vrpce.
[0058] U nekim otelotvorenjima, postupak dalje obuhvata praćenje koncentracije humanog serumskog albumina, pri čemu je koncentracija humanog serumskog albumina od oko 55 g/L do oko 105 g/L na početku kontakta sa površinom acelularne tubularne strukture.
[0059] U nekim otelotvorenjima, pri čemu dovođenje u kontakt sa acelularnom tubularnom strukturom dovodi do proliferacije i/ili diferencijacije većeg broja progenitornih ćelija u veći broj endotelnih ćelija.
[0060] U nekim otelotvorenjima, veći broj endotelnih ćelija ekspresuje VE-kadherin, AcLDL, vWF i/ili CD31.
[0061] U nekim otelotvorenjima, acelularna tubularna struktura je decelularizovani krvni sud.
[0062] U nekim otelotvorenjima, acelularna tubularna struktura je kontinuirano perfundirana suspenzijom ili punom krvlju.
[0063] U nekim otelotvorenjima, acelularna tubularna struktura se perfuzira brzinom od oko 0,1 mL do oko 50 mL u minuti.
[0064] U nekim otelotvorenjima, acelularna tubularna struktura se perfuzira brzinom od oko 2 mL u minuti.
[0065] U nekim otelotvorenjima, struktura je perfundirana zatvorenom recirkulacijom suspenzije ili cele krvi.
[0066] U nekim otelotvorenjima, kontinuirani kontakt je perfuzija koja se sprovodi korišćenjem bioreaktora.
[0067] U određenim otelotvorenjima, kontakt se sprovodi in vitro.
[0068] U nekim otelotvorenjima, kontakt se sprovodi na oko 8 °C do oko 40 °C.
[0069] U nekim otelotvorenjima, gde se kontakt sprovodi na oko 20 °C do oko 25 °C.
[0070] U nekim otelotvorenjima, personalizovani krvni sud je vena.
[0071] U nekim otelotvorenjima, vena je femoralna vena.
[0072] U nekim otelotvorenjima, postupci predmetnog obelodanjenja dalje obuhvataju procenu funkcije venskog ventila personalizovanog krvnog suda korišćenjem testa sposobnosti ventila.
[0073] Takođe je obelodanjen personalizovani krvni sud pripremljen postupkom bilo kog od postupaka za pripremu personalizovanog krvnog suda koji je ovde obelodanjen.
[0074] Takav personalizovani krvni sud je za implantaciju u ispitanika operacijom.
[0075] Obelodanjen, ali nije deo pronalaska kako se zahteva, je postupak hirurgije koja obuhvata implantaciju personalizovanog krvnog suda koji je ovde obelodanjen u ispitanika kome je to potrebno.
[0076] Drugi aspekt predmetnog obelodanjenja se odnosi na personalizovani krvni sud za upotrebu u postupku hirurgije, pri čemu postupak obuhvata implantaciju personalizovanog krvnog suda koji je ovde obelodanjen u ispitanika kome je to potrebno.
[0077] U nekim otelotvorenjima, ispitanik je čovek.
[0078] Takođe je obelodanjen bioreaktor za pripremu personalizovanog krvnog suda, bioreaktor koji sadrži peristaltičku pumpu, ambalaža koja sadrži otvor za uzorkovanje, prvi konektor i drugi konektor, pri čemu su prvi i drugi konektori direktno ili indirektno povezani sa ambalažom, pri čemu je svaki konektor povezan sa krajem tubularne strukture za pripremu personalizovanog krvnog suda pripremljenog postupcima koji su ovde obelodanjeni, pri čemu kada su prvi i drugi konektor povezani sa dva kraja tubularne strukture, peristaltička pumpa posreduje u cirkulaciji suspenzija ili rastvor u zatvorenom kolu.
[0079] U nekim otelotvorenjima, prvi i drugi konektor su Luer konektori.
[0080] U nekim otelotvorenjima, otvor za uzorkovanje je port za ubrizgavanje.
[0081] U nekim otelotvorenjima, bioreaktor dalje sadrži otvor za ubrizgavanje.
[0082] U nekim otelotvorenjima, otvor za injekciju je povezan sa rezervoarom D-glukoze.
[0083] U nekim otelotvorenjima, prva ambalaža je direktno povezan sa ambalažom pomoću cevi, i/ili druga ambalaža je direktno povezana sa ambalažom pomoću cevi.
[0084] U nekim otelotvorenjima, bioreaktor sadrži jedan ili više otvora za uzorke.
[0085] U nekim otelotvorenjima, bioreaktor dalje sadrži jedan ili više senzora za merenje nivoa glukoze.
[0086] U nekim otelotvorenjima, bioreaktor dalje sadrži modul za podešavanje pH vrednosti.
[0087] U nekim otelotvorenjima, bioreaktor dalje sadrži modul za podešavanje CO2.
[0088] Obelodanjen, ali ne i deo pronalaska kako se traži, je postupak za pripremu personalizovanog krvnog suda, postupak koji se sastoji od kontakta površine acelularne tubularne strukture sa komponentom sadržanom u celoj krvi, koja je obogaćena ili odabrana pre upotrebe u kontaktu površine.
[0089] U nekim otelotvorenjima, komponenta se bira između trombocita, ćelija sa jezgrom, proteina, faktora rasta, signalnih faktora, imunoglobulina, i bilo koje njihove kombinacije.
[0090] U nekim otelotvorenjima, komponenta je obogaćena centrifugiranjem, gradijentom centrifugiranja; ili izabrani selektivnim prianjanjem, filtracijom ili sortiranjem.
[0091] U nekim otelotvorenjima, površina je unutrašnja površina acelularne tubularne strukture.
KRATAK OPIS SLIKA
[0092]
Sl. 1A-1B su angiogrami lažno operisane vena cava (Sl.1A) i presađena P-TEV (FIG.1B). Metalne kopče su označene vrhovima strelica za lokalizaciju anastomoza.
Sl. 2A-2B su serije slika koje prikazuju bojenje hematoksilinom i eozinom (H&E) i 4',6-diamidino-2-fenilindol (DAPI) bojenje prirodne šuplje vene ("Native", Sl.2A) i P-TEV transplantacije ("P-TEV," Sl. 2B) iz susednih delova 3 dana, 2 nedelje, 17 dana i 4-5 nedelja nakon operacije.
Sl. 3A-3D prikazuju slike koje prikazuju celularizaciju šuplje vene dve nedelje nakon operacije. Sl. 3A-3D su serije imunohistograma koji pokazuju DAPI bojenje i CD31 imuno bojenje šuplje vene dve nedelje nakon operacije. Sl. 3A prikazuje prirodnu šuplju venu proksimalno od anastomoza. Sl.3B-3D prikazuju proksimalno (Sl.3B), centralni (Sl.3C), i distalni (Sl.3D) delovi P-TEV. Strelice ukazuju na CD31-pozitivne ćelije.
Sl. 4A-4D prikazuju slike koje prikazuju celularizaciju šuplje vene četiri nedelje nakon operacije. Sl.
4A-4D su serije imunohistograma koji pokazuju DAPI bojenje i CD31 imuno bojenje šuplje vene 4-5 nedelja nakon operacije. Sl. 4A prikazuje prirodnu šuplju venu proksimalno od anastomoza. Sl.4B-4D prikazuju proksimalno (Sl.4B), centralni (Sl.4C), i distalni (Sl.4D) delovi P-TEV. Strelice ukazuju na CD31-pozitivne ćelije.
Sl. 5A-5B prikazuju slike koje prikazuju morfologiju luminalnih ćelija četiri nedelje nakon operacije. Sl. 5A-5B je serija slika pri uvećanju od 40× koja prikazuje H&E bojenje prirodne šuplje vene (Sl. 5A) i transplantaciju P-TEV (Sl.5B) 4-5 nedelja nakon operacije. Strelice pokazuju endotelne ćelije u prirodnom tkivu i ćelije sa morfologijom nalik na endotelne ćelije u P-TEV transplantaciji.
DETALJAN OPIS OBELODANJENJA
[0093] Trenutno obelodanjenje se zasniva, između ostalog, na otkriću da su ćelije i nećelijski faktori u krvi bili u stanju da kondicioniraju acelularne tubularne strukture (npr., decelularizovani krvni sud ili bioštampana tubularna struktura) da proizvedu personalizovane krvne sudove. Sadašnje obelodanjenje dalje pruža, između ostalog, kontakt acelularnih tubularnih struktura sa bilo nerazređenim uzorcima pune krvi ili suspenzijom koja sadrži uzorak pune krvi razblaženog u fiziološkom rastvoru u in vitro procesu stvara personalizovane krvne sudove sa poboljšanom kompatibilnošću domaćina i smanjenom osetljivošću na trombozu.
[0094] Predmetno obelodanjenje se odnosi na postupak pripreme personalizovanog krvnog suda, koji obuhvata dovođenje u kontakt površine acelularne tubularne strukture sa suspenzijom koja sadrži uzorak pune krvi od ispitanika kome je potreban personalizovani krvni sud, pri čemu se uzorak cele krvi razblažuje u fiziološkom rastvoru. U nekim otelotvorenjima, površina acelularne tubularne strukture je unutrašnja površina acelularne tubularne strukture.
[0095] Kako se ovde koristi, termin "personalizovani krvni sud" odnosi se na tubularnu strukturu sposobnu da nosi krv kroz tkivo ili organ koji nije prirodni krvni sud. Tubularna struktura se može pripremiti decelularizacijom prirodnog krvnog suda od donatora, čime se dobija acelularna struktura, i rekondicionisana/recelularizacija strukture korišćenjem ćelija druge osobe. Acelularna struktura se takođe može dobiti sastavljanjem biokompatibilnog materijala in vitro (npr., bioštampanje ili samo-sastavljanje polimera). Kako se ovde koristi, termini "obnovljeno", "rekondicionirano" i "rekondicioniranje" se koriste da opišu modifikaciju acelularne strukture pomoću komponenti rastvora za recelularizaciju/rekondicioniranje (RC) koji sadrži punu krv. Kako se ovde koristi, termini "recelularizacija", "recelularizacija" i "recelularizacija" se koriste u oba konteksta i ne zahtevaju da inicijalni početni materijal ima ćelije koje su vezane. Personalizovani krvni sud može biti personalizovana vena, arterija ili kapilar. U određenim otelotvorenjima, personalizovani krvni sud je koristan da zameni prirodni krvni sud.
Priprema acelularne tubularne strukture od donatora
[0096] Postupak za pripremu personalizovanog krvnog suda kako je ovde obelodanjeno koristi acelularnu tubularnu strukturu. Kako se ovde koristi, termin "acelularna tubularna struktura" odnosi se na tubularnu strukturu koja je u suštini bez ćelija. Acelularna tubularna struktura se može pripremiti decelularizacijom izvornog krvnog suda donatora. Donator može biti čovek ili životinja iz odgovarajuće vrste. Acelularna struktura se takođe može dobiti sastavljanjem biokompatibilnog materijala in vitro (npr., bioštampanje ili samo-sastavljanje polimera).
[0097] Acelularna tubularna struktura se može pripremiti bilo kojim postupkom poznatim u tehnici, na primer, decelularizacijom prirodnog krvnog suda. Prirodni krvni sud može biti ljudskog porekla ili se može dobiti od odgovarajućih životinjskih vrsta. Tubularna struktura se može pripremiti postupcima kulture tkiva iz biokompatibilne strukture i ćelija in vitro i može poslužiti kao početni materijal za pripremu acelularne strukture. U određenim otelotvorenjima, acelularna tubularna struktura se dobija postupkom decelularizacije koja je ovde obelodanjena. U određenim otelotvorenjima, postupak za pripremu personalizovanog krvnog suda koji je ovde obelodanjen dalje obuhvata decelularizaciju prirodnog krvnog suda, čime se dobija acelularna tubularna struktura.
[0098] Kako se ovde koristi, termin "decelularizacija", "decelularizovan" ili "decelularizovanje" odnosi se na proces uklanjanja ćelija iz krvnog suda (uključujući bilo koji venski ventil u krvnom sudu). Efikasnu decelularizaciju diktiraju faktori kao što su gustina i organizacija tkiva, geometrijska i biološka svojstva koja se žele za krajnji proizvod i ciljana klinička primena. Decelularizacija krvnih sudova sa očuvanjem ECM integriteta i bioaktivnosti može biti optimizovana od strane stručnjaka, na primer, izborom specifičnih sredstava i tehnika tokom obrade.
[0099] Uspešna decelularizacija se definiše kao odsustvo ćelija, kao što su endotelne ćelije, ćelije glatkih mišića i jezgra u histološkim presecima korišćenjem standardnih histoloških procedura bojenja. Dok većina sredstava i postupaka za uklanjanje ćelija može da promeni sastav ECM-a i izazove određeni stepen ultrastrukturnog poremećaja, minimizacija ovih neželjenih efekata je poželjna. Postupci decelularizacije su poznati u tehnici, npr., u patentnoj objavi SAD br.2017/0071738.
[0100] Shodno tome, u određenim otelotvorenjima, procesom decelularizacije uklanjaju se sva jezgra, kao što je obelodanjeno postupkom poznatim u tehnici (npr., DAPI bojenje, kvantifikacija DNK). U određenim otelotvorenjima, proces decelularizacije smanjuje ili uklanja antigene HLA klase-I i antigene HLA klase-II, što je obelodanjeno postupkom poznatim u tehnici (npr., imunohistohemijski testovi za antigene HLA klase-I i klase-II).
[0101] U određenim otelotvorenjima, ECM komponente se u velikoj meri zadržavaju u procesu decelularizacije. Tokom i nakon procesa decelularizacije, morfologija i arhitektura ECM-a mogu se pregledati vizuelno i/ili histološki da bi se potvrdilo da proces decelularizacije nije ugrozio trodimenzionalnu strukturu i bioaktivnost ECM skele. Histološka analiza bojenjem (npr., H&E bojenje, Massonovo trihromsko bojenje ili Verhoeff-Van Gieson bojenje) može biti korisna za vizuelizaciju decelularizovane arhitekture krvnih sudova i očuvanja komponenti ECM, kao što su kolagen I, kolagen IV, laminin i fibronektin. Drugi postupci poznati u tehnici mogu se koristiti za određivanje očuvanja komponenti ECM, kao što su glikozaminoglikani i kolagen.
[0102] Za decelularizaciju krvnog suda može se koristiti jedno ili više rastvora za uklanjanje ćelija. Rastvor za uništavanje ćelija generalno uključuje najmanje jedan deterdžent, kao što je SDS, PEG ili Triton X.
Posebno poželjan deterdžent je Triton X (npr., Triton X-100). Rastvor za uništavanje ćelija može da sadrži organski rastvarač, npr., tri-n-butil fosfat (TNBP). Rastvor za ćelijski poremećaj takođe može imati znatno niži osmotski pritisak od krvi, čime se olakšava liza ćelija. Alternativno, rastvor za poremećaj ćelija može biti izotoničan. Rastvor za ćelijski poremećaj takođe može uključiti enzime kao što su, bez ograničenja, jedna ili više nukleaza (npr., DNaza ili RNaza) i proteinaze (npr., kolagenaze, dispaze ili tripsina). Rastvor za ćelijske poremećaje koje sadrži DNazu I može takođe uključiti kalcijum hlorid i magnezijum hlorid (A12858, Life Technologies) za aktiviranje enzima. U određenim otelotvorenjima, rastvor za uništavanje ćelija dalje sadrži jedan ili više inhibitora proteaze (npr., fenil metil sulfonil fluorid (PMSF), inhibitore kolagenaze). U određenim otelotvorenjima, rastvor za uništavanje ćelija može dalje da sadrži antibiotik (npr., penicilin, streptomicin ili amfotericin) ili etilendiamintetrasirćetnu kiselinu (EDTA).
[0103] U određenim otelotvorenjima, postupci perfuzije mogu da se koriste za lečenje krvnog suda (npr., vene koja ima ventil) rastvorima za decelularizaciju krvnog suda. Promena smera perfuzije (npr., antegradna i retrogradna) može pomoći u efikasnoj decelularizaciji vena koje nose ventil. Decelularizacija kako je ovde opisana u suštini uklanja ćelije koje oblažu vene koje nose ventile iznutra prema spolja, što dovodi do vrlo malog oštećenja ECM. U zavisnosti od veličine i težine krvnog suda i određenog deterdženta(a) i koncentracije deterdženta(a) u rastvoru za uništavanje ćelija, vena koja nosi ventil se generalno perfuzuje između 4 i 48 sati; ili između 8 i 24 sata sa medijumom za razbijanje ćelija. Uključujući ispiranja, krvni sud može biti perfuziran do oko 48 sati ili 24 sata za Triton X, oko 8 sati za TNBP, oko 16 sati za DNazu, oko 1 sat ukupno ispiranja i oko 48 sati završnog ispiranja. U nekim otelotvorenjima, iznad pomenuti postupak obilja se ponavlja tokom 1-14 ciklusa; 1-5 ciklusa; 2-4 ciklusa; 1-3 ciklusa; ili 2 ciklusa; ili 3 ciklusa; ili 4 ciklusa; ili 5 ciklusa; ili 6 ciklusa. U određenim otelotvorenjima, decelularizacija se vrši perfuzijom sa gorepomenutim reagensima neprekidno tokom 100 sati, 110 sati, 120 sati, 130 sati, 140 sati, 150 sati, 160 sati, 170 sati, 180 sati, 190 sati, 210 sati. sati, 220 sati, 230 sati, 240 sati, 250 sati, 260 sati, 270 sati, 280 sati, 290 sati, 300 sati, 310 sati, 320 sati, 330 sati, 340 sati, 350 sati ili više. Perfuzija je generalno prilagođena fiziološkim uslovima uključujući pulsirajući protok, brzinu i pritisak. Decelularizacija perfuzije kao što je ovde opisana može se u nekim otelotvorenjima uporediti sa decelularizacijom imerzije kao što je opisano, na primer, u patentu SAD br.6,753,181 i 6,376,244. U određenim otelotvorenjima, decelularizacija se sprovodi u skladu sa postupkom decelularizacije krvnog suda kao što je dato u Primeru 1 infra.
[0104] U određenim otelotvorenjima, acelularna tubularna struktura je sintetizovana i/ili sastavljena struktura, na primer, struktura dobijena sklapanjem biokompatibilnog materijala in vitro. Postupci pripreme takve strukture, na primer, bioštampanje ili samo-sastavljanje polimera, su poznate u tehnici, a neograničavajući primeri su dati u patentnim objavama SAD br.2017/0304503 i 2016/0354194.
[0105] Shodno tome, u određenim otelotvorenjima, postupak koji je ovde obelodanjen dalje obuhvata korak pripreme bioštampane strukture tubularnih krvnih sudova korišćenjem bioštampane polimerne strukture. Struktura za bioštampane krvne sudove se priprema na polimeru (prirodnom ili sintetičkom), koji može biti u obliku gela, sunđera, pene, flastera ili polutečnog/tečnog oblika. U određenim otelotvorenjima, bioštampana struktura je perfundirana punom krvlju ili punom krvlju razblaženom u rastvoru, na primer, suspenzijom, koja uključuje punu krv.
[0106] U određenim otelotvorenjima, ECM komponente se mogu dodati polimeru u obliku praha. U predmetnom obelodanjenju prašak za pripremu sastava prema predmetnom obelodanjenju se priprema tretiranjem tkiva hemikalijom, sušenjem zamrzavanjem hemijski tretiranog tkiva i homogenizacijom liofiliziranog tkiva. U određenim otelotvorenjima, prah je filamentan.
[0107] U određenim otelotvorenjima, bioštampana polimerna struktura može uključivati želatin i fibrin. Želatin i fibrin mogu formirati interpenetrirajuću polimernu mrežu koja imitira prirodni ECM i može biti optimizovana za vezivanje ćelija, bioštampanje, transparentnost i biokompatibilnost.
[0108] U određenim otelotvorenjima, komponente ECM-a su ili mogu biti izolovane i/ili prečišćene iz tkiva sisara (npr., svinja, krava, jagnje, koza, ovca, šimpanza, majmun, čovek, ili drugog primata) ili generisan korišćenjem rekombinantne DNK tehnologije koja uključuje gen ili fragmente gena sisara (npr., svinja, krava, jagnje, koza, ovca, šimpanza, majmun, čovek ili drugi primat) koji kodiraju odgovarajuću ECM komponentu (npr., kolageni, elastini, laminini, glikozaminoglikani, proteoglikani, antimikrobni lekovi, hemoatraktanti, citokini i faktori rasta) i eksprimirani iz odgovarajućeg sistema ekspresije (prokariotski ili eukariotski (npr., ćelije insekata, kvasca ili sisara), a zatim izolovani i/ili prečišćeni odgovarajućim postupkom u struci. U određenim otelotvorenjima, jedna ili više ECM komponenti se mogu dodati u polimernu strukturu za pripremu bioštampane polimerne strukture, a zatim se struktura perfuzira punom krvlju ili punom krvlju razblaženom u rastvoru, npr., suspenzijom, koja uključuje celu krv, za pripremu personalizovanog krvnog suda.
[0109] U nekim otelotvorenjima, tubularna struktura se može pripremiti postupcima kao što su 3D štampanje različitih materijala, samosastavljanje, hemijska ili biohemijska proizvodnja. U nekim otelotvorenjima, tubularna struktura se proizvodi od biološkog i nebiološkog početnog materijala.
Puna krv pacijenta
[0110] U nekim otelotvorenjima, populacija ćelija prisutnih u uzorku cele krvi popunjava strukturu. Puna krv pacijenta se može koristiti nerazređena ili razblažena fiziološkim perfuzionim rastvorom kao što je opisano u primerima 4-5 ili drugim rastvorima za zaštitu organa kao što su na primer Perfadex™, STEEN™, Euro Collins rastvor, rastvor za skladištenje u hladnom stanju Univerziteta Viskonsin ili Celsior® rešenje.
[0111] U nekim otelotvorenjima, puna krv sadrži perifernu krv (npr., perifernu vensku krv). U nekim otelotvorenjima, puna krv je periferna krv (npr., periferna venska krv). U određenim otelotvorenjima, puna krv sadrži krv iz pupčane vrpce. U određenim otelotvorenjima, puna krv je krv iz pupčane vrpce.
[0112] Termini "pacijent" i "ispitanik" se koriste naizmenično u predmetnom obelodanjenju i odnose se na čoveka ili ne-ljudsku životinju (npr., sisara). Neograničavajući primeri uključuju ljude, goveda, pacove, miševe, pse, mačke, majmune, koze, ovce, krave i jelene. U nekim otelotvorenjima, ispitanik je čovek.
Nerazređena puna krv pacijenta
[0113] Jedan aspekt predmetnog obelodanjenja se odnosi na postupak pripreme personalizovanog krvnog suda koji se sastoji od dovođenja u kontakt površine acelularne tubularne strukture sa nerazređenim uzorkom pune krvi od ispitanika kome je potreban personalizovani krvni sud, pri čemu se kontakt vrši za više od 2 dana.
[0114] U određenim otelotvorenjima, ćelije i/ili progenitorne ćelije prisutne u krvi popunjavaju strukturu. U nekim otelotvorenjima, populacija ćelija prisutnih u uzorku cele krvi popunjava strukturu. Termin "puna krv" odnosi se na krv uzetu iz tela, organa ili tkiva iz kojih nijedna komponenta nije uklonjena.
[0115] Stručnjak bi cenio da se tokom uzimanja pune krvi, mala zapremina antitrombotičkog sredstva može dodati tokom ili odmah nakon uzimanja uzorka krvi od ispitanika. Kada zapremina antitrombotičkog sredstva ne prelazi oko 5% ili najmanje 10% zapremine krvi sa kojom je antitrombotičko sredstvo pomešano, puna krv pripremljena na taj način smatra se nerazređenom. Slično tome, u određenim otelotvorenjima, puna krv može biti dopunjena sa jednim ili više drugih sredstava (npr., antitrombotičkim agensima, hranljivim materijama, razblaživačem, konzervansima i CO2nezavisnim puferskim sistemom), pri čemu je ukupna zapremina dodate supstance(i)) – ne uključujući bilo koji antitrombotički agens koji je prvobitno uveden u vreme uzimanja – ne prelazi oko 5% ili barem ne oko 10% zapremine cele krvi, dopunjena puna krv se smatra nerazređenom.
[0116] U određenim otelotvorenjima, postupak ne zahteva kontaktiranje acelularne tubularne strukture sa medijumom ćelijske kulture za pripremu personalizovanog krvnog suda. U određenim otelotvorenjima, puna krv se koristi u postupku koji je ovde obelodanjen u roku od oko 1 sat, oko 2 sata, oko 4 sata, oko 6 sati, oko 8 sati, oko 12 sati, oko 24 sata, oko 36 sati, oko 2 dana , oko 3 dana ili oko nedelju dana nakon uzimanja cele krvi. U određenim otelotvorenjima, puna krv se čuva na oko 2 °C do oko 8 °C pre upotrebe u postupku.
Razređena puna krv pacijenta
[0117] U drugom aspektu, predmetni pronalazak se odnosi na dovođenje u kontakt acelularne tubularne strukture sa razblaženom punom krvlju pacijenta.
[0118] Puna krv pacijenta se smatra razblaženom ako je puna krv uzeta od pacijenta razblažena sa bilo kojom vrstom rastvora, pufera ili vodene tečnosti najmanje 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70% , 80%, 90%, 100%, 110%, 120%, 130%, 140%, 150%, 160%, 170%, 180%, 190% ili 200%. U nekim otelotvorenjima, uzorak cele krvi je razblažen 1:1, tj.1 zapremina pune krvi je pomešana sa 1 zapreminom razblaživača. U nekom otelotvorenju, uzorak cele krvi može biti razblažen 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8, 1:9 ili 1:10.
[0119] U određenim otelotvorenjima, puna krv se razblaži u fiziološkom rastvoru. U određenim otelotvorenjima, razblaživač je fiziološki rastvor koji sadrži dodatne onkotične i druge faktore kao što je opisano u primerima x-y ili druge rastvore konzervansa organa kao što je na primer Perfadek™ (videti Primer 5 ispod), STEEN™ (netoksični fiziološki rastvor soli koji sadrži humani serumski albumin i dekstran 40, ili rastvor kao što je opisano u SAD Pat. br.8,980,541) Euro Collins rastvor (videti Primer 5 u nastavku), rastvor za hladno skladištenje Univerziteta u Viskonsinu (videti Primer 5 ispod ) ili Celsior<®>rastvor (videti Primer 5 ispod). U određenim otelotvorenjima, fiziološki rastvor je STEEN™ rastvor.
[0120] U nekim otelotvorenjima, onkotični faktori koji se razmatraju da se koriste za regulisanje osmotskog pritiska fiziološkog rastvora obuhvataju serumski albumin, globulin ili fibrinogen. U nekim otelotvorenjima, onkotični faktor obuhvata serumski albumin. U nekim otelotvorenjima, želatin se može koristiti za regulisanje onkotskog pritiska rastvora.
[0121] Fiziološki rastvor može dalje da sadrži jedan ili više hranljivih sastojaka (npr., aminokiselina, monosaharid (npr., D-glukoza), vitamin, neorganski jon, element u tragovima i/ili so) i/ili faktore rasta, npr., u fiziološkim koncentracijama, da podrži preživljavanje, proliferaciju i/ili diferencijaciju ćelija. U nekim otelotvorenjima, hranljivi sastojak sadrži jedan ili više šećera, aminokiseline ili vitamina. U nekim otelotvorenjima, šećer je D-glukoza.
[0122] U nekim otelotvorenjima, fiziološki rastvor sadrži neorgansku so i puferski sistem. U nekim otelotvorenjima, puferski sistem obuhvata sistem pufera nezavisan od CO2. U nekim otelotvorenjima, CO2nezavisan puferski sistem sadrži fosfatni puferski sistem. Fiziološki rastvor može da sadrži bilo koji od dodatnih sredstava koja se dodaju celoj krvi ili razblaženoj punoj krvi kao što je opisano u nastavku.
Dodatna sredstva dodata u punu krv ili razblažene uzorke pune krvi
[0123] U nekim otelotvorenjima, dodatna sredstva koja su ovde opisana se dodaju uzorku cele krvi ili suspenziji pune krvi ili razblaženom uzorku pune krvi pre ili tokom kontakta acelularne tubularne strukture sa punom krvlju. Kao što je iznad objašnjeno, sve dok dodavanje faktora opisanih ovde ne razblaži celu krv sa više od 5 ili barem ne više od 10%, uzorak cele krvi se i dalje smatra nerazblaženim. Ako je uzorak cele krvi razblažen više od 15% sa faktorima koji su ovde opisani, onda se uzorak cele krvi smatra razblaženim.
[0124] U određenim otelotvorenjima, suspenzija sa punom krvlju ili razblaženom punom krvlju ili nerazređenom punom krvlju dalje sadrži sredstvo protiv tromboze. U određenim otelotvorenjima, antitrombotičko sredstvo je ili je uvedeno u celu krv pre kontakta sa acelularnom tubularnom strukturom. U određenim otelotvorenjima, antitrombotičko sredstvo sadrži antikoagulantno sredstvo. U određenim otelotvorenjima, antikoagulantno sredstvo sadrži heparin, dekstran. U određenim otelotvorenjima antitrombotičko sredstvo sadrži inhibitor trombocita kao što je askorbinska kiselina.
[0125] U određenim otelotvorenjima, antikoagulantno sredstvo sadrži heparin. Efikasne koncentracije heparina za sprečavanje koagulacije su poznate u struci. U nekim otelotvorenjima, heparin je prisutan u nerazređenom uzorku pune krvi ili suspenziji koja sadrži uzorak cele krvi u koncentraciji od oko 0,5 IU/mL do oko 150 IU/mL na početku kontakta sa površinom acelularne tubularne strukture. U određenim otelotvorenjima, koncentracija heparina na početku kontakta je oko 5 do oko 50 IU/ml. U određenim otelotvorenjima, koncentracija heparina na početku kontakta je oko 5, oko 6, oko 7, oko 8, oko 9, oko 10, oko 15 ili oko 20 IU/mL. U određenim otelotvorenjima, koncentracija heparina na početku kontakta je oko 6,7 IU/ml. U nekim otelotvorenjima bioreaktor sa tubulom i venom je prethodno ispran sa 50 IU/ml heparina u rastvoru PBS (na primer 1 sat), zatim se isprazni i napuni rastvorom krvi; i u različitim otelotvorenjima, razblaživanje 1:10 se dobija zamenom rastvora što dovodi do oko 5 IU/ml heparina u rastvoru krvi. U određenim otelotvorenjima koriste se vakutajneri koji sadrže 17 IU heparina/mL pune krvi što rezultira oko 8,5 IU heparina u rastvoru krvi.
[0126] U određenim otelotvorenjima, antikoagulantno sredstvo sadrži dekstran. Može se koristiti dekstran bilo koje prosečne molekulske mase. U određenim otelotvorenjima, dekstran ima prosečnu molekulsku masu od oko 40 kD, tj., dekstran je dekstran-40. U određenim otelotvorenjima, dekstran ima prosečnu molekulsku masu od oko 60 kD, tj., dekstran je dekstran-60. U određenim otelotvorenjima, dekstran ima prosečnu molekulsku masu od oko 70 kD, tj., dekstran je dekstran-70. U određenim otelotvorenjima, koncentracija dekstrana na početku kontakta je oko 1 do oko 55 g/L. U određenim otelotvorenjima, koncentracija dekstrana na početku kontakta je oko 1, oko 2, oko 3, oko 4, oko 4,5, oko 5, oko 10 ili oko 20 g/L. U određenim otelotvorenjima, koncentracija dekstrana na početku kontakta je oko 5 g/L.
[0127] U određenim otelotvorenjima, antitrombotičko sredstvo sadrži askorbinsku kiselinu. U određenim otelotvorenjima, koncentracija askorbinske kiseline na početku kontakta je oko 0,2 do oko 200 µg/ml. U određenim otelotvorenjima, koncentracija askorbinske kiseline na početku kontakta je oko 1, oko 5, oko 10, oko 20, oko 50 ili oko 100 µg/mL. U određenim otelotvorenjima, koncentracija askorbinske kiseline na početku kontakta je oko 5 µg/mL.
[0128] Dva ili više antitrombotičkih sredstava (npr., antikoagulansa) mogu se kombinovati u predmetnom pronalasku. U određenim otelotvorenjima, suspenzija sadrži dva ili više sredstva izabranih iz grupe koju čine heparin, dekstran (npr., dekstran-40) i askorbinska kiselina. U određenim otelotvorenjima, suspenzija sadrži heparin, dekstran (npr., dekstran-40) i askorbinsku kiselinu. Stručnjak bi cenio da kada se kombinuju dva ili više antitrombotičkih sredstava, bar jedan od njih može da se koristi u nižoj koncentraciji od koncentracije u kojoj bi se koristio sam. U određenim otelotvorenjima, suspenzija sadrži oko 6,7 IU/mL heparina, oko 6,7 mg/mL dekstrana-40 i oko 4,5 µg/mL askorbinske kiseline. U određenim otelotvorenjima, suspenzija je sadržala najmanje oko 6,7 IU/mL heparina, oko 6,7 mg/mL dekstrana-40 i oko 4,5 µg/mL askorbinske kiseline.
[0129] U određenim otelotvorenjima, suspenzija sa punom krvlju ili razblaženom punom krvlju ili nerazređenom punom krvlju dalje sadrži faktor rasta izabran iz grupe koju čine: faktora stimulacije granulocitno-makrofagnih kolonija (GM-CSF), interleukin (IL)-3, IL-4, neutrofin (NT)-6, pleiotrofin (HB-GAM), midkin (MK), interferon inducibilni protein-10 (IP-10), faktor trombocita (PF)-4, monocitni hemotaktički protein-1 (MCP-1), RANTES (CCL-5, hemokin (C-C motiv) ligand 5), IL-8, IGFs, faktor rasta fibroblasta (FGF)-1, FGF-2, FGF-3, FGF-4, FGF-5, FGF-6, FGF-7, FGF-8, FGF-9, transformacioni faktor rasta beta (TGF)-β, VEGF, faktor rasta izveden iz trombocita (PDGF)-A, PDGF-B, HB-EGF, faktor rasta hepatocita (HGF), faktor nekroze tumora (TNF)-α, faktor rasta sličan insulinu (IGF)-1, i bilo koja njihova kombinacija(e). U određenim otelotvorenjima, faktor rasta je ljudski faktor rasta. U određenim otelotvorenjima, koncentracija faktora rasta je jednaka prosečnom fiziološkom nivou populacije faktora rasta. U određenim otelotvorenjima, koncentracija faktora rasta je veća od prosečnog fiziološkog nivoa faktora rasta u populaciji. U određenim otelotvorenjima, faktor rasta je dopunjen kao rekombinantni protein.
[0130] U određenim otelotvorenjima, faktor rasta je faktor rasta fibroblasta (FGF)-2. U određenim otelotvorenjima, FGF-2 je humani FGF-2. U određenim otelotvorenjima, koncentracija FGF-2 na početku kontakta je oko 0,5 do oko 200 ng/ml. U određenim otelotvorenjima, koncentracija FGF-2 na početku kontakta je oko 10 ng/ml. U određenim otelotvorenjima, FGF-2 se dodaje pre kontakta u koncentraciji od oko 0,5 do oko 200 ng/ml (npr., oko 10 ng/ml). U određenim otelotvorenjima, FGF-2 je rekombinantni humani FGF-2 (rhFGF-2). U određenim otelotvorenjima, koncentracija rhFGF-2 na početku kontakta je oko 0,5 do oko 200 ng/ml (npr., oko 10 ng/ml).
[0131] U određenim otelotvorenjima, faktor rasta je faktor rasta vaskularnog endotela (VEGF). U određenim otelotvorenjima, VEGF je humani VEGF.. U određenim otelotvorenjima, koncentracija VEGF-a na početku kontakta je oko 4 do oko 800 ng/mL. U određenim otelotvorenjima, koncentracija VEGF na početku kontakta je oko 80 ng/ml. U određenim otelotvorenjima, VEGF se dodaje pre kontakta u koncentraciji od oko 4 do oko 800 ng/ml mL(npr., oko 80 ng/ml mL). U određenim otelotvorenjima, VEGF je rekombinantni humani VEGF (rhVEGF). U određenim otelotvorenjima, koncentracija rhVEGF na početku kontakta je oko 4 do oko 800 ng/mL(npr., oko 80 ng/mL).
[0132] U određenim otelotvorenjima, suspenzija sa punom krvlju ili razblaženom punom krvlju ili nerazređenom punom krvlju dalje sadrži acetilsalicilnu kiselinu. U određenim otelotvorenjima, koncentracija acetilsalicilne kiseline na početku kontakta je između 0,2 µg/mL i 200 µg/mL; ili 0,5 µg/mL i 100 µg/mL; ili 0,1 µg/mL i 50 µg/mL; ili 1 µg/mL i 25 µg/mL; ili 1 µg/mL i 10 µg/mL; ili 2 µg/mL i 10 µg/mL; ili 3 µg/mL i 8 µg/mL; ili 4 µg/mL i 6 µg/mL. U određenim otelotvorenjima, koncentracija acetilsalicilne kiseline na početku kontakta je oko 0,5 µg/mL; ili oko 1 µg/mL; ili oko 2 µg/mL; ili oko 3 µg/mL; ili oko 4 µg/mL; ili oko 5 µg/mL; ili oko 6 µg/mL; ili oko 7 µg/mL; ili oko 8 µg/mL; ili oko 8 µg/mL; ili oko 8 µg/mL; ili oko 9 µg/mL; ili oko 10 µg/mL; ili oko 25 µg/mL ili oko 50 µg/mL; ili oko 100 µg/mL; ili oko 200 µg/mL. U određenim otelotvorenjima, koncentracija acetilsalicilna kiselina početku kontakta je oko 5 µg/mL. U određenim otelotvorenjima, VEGF se dodaje pre kontakta u koncentraciji između 4 ng/mL i 800 ng/mL; ili između 10 ng/mL i 400 ng/mL; ili između 20 ng/mL i 200 ng/mL; ili između 40 ng/mL i 200 ng/mL; ili između 60 ng/mL i 100 ng/mL; ili između 70 ng/mL i 90 ng/mL.
[0133] U određenim otelotvorenjima, koncentracija humanog serumskog albumina (HSA) na početku kontakta je između 50 mg/mL i 150 mg/mL; ili između 50 mg/mL i 125 mg/mL; ili između 50 mg/mL i 100 mg/mL; ili između 60 mg/mL i 90 mg/mL; ili između 60 mg/mL i 80 mg/mL; ili između 65 ng/mL i 75 ng/mL. U određenim otelotvorenjima, koncentracija humanog serumskog albumina na početku kontakta je oko 55 do oko 105 mg/m, što je količina kada se puna krv razblaži u rastvoru za 2 puta. U određenim otelotvorenjima, koncentracija humanog serumskog albumina na početku kontakta je oko 45 do oko 69 mg/mL. U određenim otelotvorenjima, koncentracija HSA u rastvoru je oko 70 mg/ml, a koncentracija HSA u ljudskoj krvi je oko 45 mg/mL, a puna krv je razblažena u rastvoru, HSA u suspenziji sadrži celu krv je 55-60 mg/mL (tj., dvostruko razblaživanje pune krvi u rastvoru). U određenim otelotvorenjima, koncentracija humanog serumskog albumina nakon pune krvi se razblaži u rastvoru koji sadrži 2 puta, 3 puta, 4 puta, 5 puta, 6 puta, 7 puta, 8 puta, 9 puta, 10 puta, 11 puta, 12 puta, 13 puta, 14 puta, 15 puta, 16 puta, 17 puta, 18 puta, 19 puta ili 20 puta razblažen HSA.
[0134] U određenim otelotvorenjima, suspenzija sa punom krvlju ili razblaženom punom krvlju ili nerazređenom punom krvlju sadrži jedan ili više hranljivih sastojaka i/ili faktora rasta, npr., u fiziološkim koncentracijama, da podrži preživljavanje, proliferaciju i/ili diferencijaciju ćelija. U određenim otelotvorenjima, hranljivi sastojci se biraju iz grupe koju čine monosaharidi (npr., D-glukoza), aminokiseline (prirodne aminokiseline), vitamini, neorganski joni, elementi u tragovima, soli i bilo koje njihove kombinacije. U određenim otelotvorenjima, aminokiselina uključena kao hranljiva materija može biti jedna ili više od: L-ArgininHCl, L-Cistin2HCl, L-CistinHCl H2O, L-Histidin HCl H2O, L-Izoleucin, L-Leucin, L-LizinHCl, L-Metionin, L-Fenilalanin, L-Treonin, L-Triptofan, L-Tirozin2H2O L-Valin, L-Alanin, L-Asparagin, L-Asparaginska kiselina, L-Glutaminska kiselina, Glicin, L-Prolin, L-Serin i/ili L-Hidroksiprolin. U određenim otelotvorenjima, vitamin uključen kao hranljiva materija može biti jedan ili više od: K-Capantotenat, holin hlorid, folna kiselina, i-inozitol, niacinamid, piridoksal HCl, piridoksin HCl, riboflavin, tiamin HCl, biotin, vitamin B 12, para-aminobenzojeva kiselina, niacin, askorbinska kiselina, a-fos Kalciferol, Menadion, Vitamin A. U određenim otelotvorenjima, neorganski jon je uključen u obliku neorganske soli uključujući, ali ne ograničavajući se na CaCl2, KCl, MgSO4, NaCl, NaHCO3, NaHPO4, KNO3, NaSeO3, Ca(NO3)2, CuSO4, NaHPO4, MgCl2, Fe(NO3)3, CuSO4, FeSO4, i/ili KH2PO4.
[0135] U nekim otelotvorenjima, suspenzija sa punom krvlju ili razblaženom punom krvlju ili nerazblaženom punom krvlju sadrži oko 0,7% do oko 1,5% soli. U nekim otelotvorenjima, fiziološki rastvor sadrži oko 0,7%, oko 0,8%, oko 0,9% ili oko 1,0% soli.
[0136] U određenim otelotvorenjima, suspenzija sadrži pufer sistem nezavisan od CO2. U nekim otelotvorenjima, CO2nezavisan puferski sistem sadrži fosfatni puferski sistem. U nekim otelotvorenjima, CO2nezavisan puferski sistem sadrži fosfatni pufer i natrijum bikarbonat. U određenim otelotvorenjima, suspenzija dalje sadrži jedno ili više od: D-glukoze, fenol crvene, HEPES, natrijum piruvata, glutationa (redukovani), hipoksantina.Na, timidina, lipoične kiseline, putrescina 2HCl, bakto-peptona, timina, adenin sulfata, adenozin-5-trifosfata,-2-de, holesterola D-riboza, adenozin-5-fosfata, gvanina HCl, riboze, natrijum acetata, Tween 80, uracila i/ili ksantina Na.
[0137] U određenim otelotvorenjima, nećelijski faktor suspenzije pune krvi promoviše celularizaciju acelularne tubularne strukture, na primer, promovišući opstanak ćelije, proliferaciju i/ili diferencijaciju. U određenim otelotvorenjima, nećelijski faktor je nećelijska komponenta prisutna u punoj krvi. U određenim otelotvorenjima, nećelijski faktor krvi je faktor generisan iz pune krvi (npr., iz ćelija u celoj krvi) tokom kontakta. U određenim otelotvorenjima, nećelijski faktor krvi promoviše kompatibilnost domaćina, celularizaciju ili integraciju suda nakon presađivanja. Neograničavajući primeri nećelijskih faktora predmetnog pronalaska dati su u sledećoj tabeli:
[0138] Bilo koje od sredstava opisanih iznad, npr., antitrombotička sredstva, hranljive materije, razblaživač i puferski sistem nezavisan od CO2, može se uvesti u razblaživač (npr., fiziološki rastvor) i mešati u suspenziju nakon razblaživanja cele krvi. Alternativno, ili dodatno, može se uneti direktno u punu krv pre razblaženja i/ili u suspenziju nakon razblaživanja pune krvi.
[0139] U određenim otelotvorenjima, koncentracija hranljive materije u suspenziji se prati i podešava kontinuirano ili redovno. U određenim otelotvorenjima, hranljiva materija se bira iz grupe koju čine monosaharid (npr., D-glukoza), amino kiselina (npr., prirodna amino kiselina), vitamin, neorganski jon, element u tragovima i so. U specifičnom otelotvorenju, koncentracija D-glukoze u suspenziji se prati tokom kontakta, a D-glukoza se dodaje u suspenziju da bi se održala koncentracija D-glukoze na oko 3 do oko 11 mmol/L.
[0140] U određenim otelotvorenjima, koncentracija D-glukoze u suspenziji se prati merenjem koncentracije D-glukoze u uzorku sakupljenom iz suspenzije. U određenim otelotvorenjima, koncentracija D-glukoze u suspenziji se meri redovno, kao što je dva puta svaki dan, jednom svaki dan ili jednom u dva dana. U određenim otelotvorenjima, koncentracija D-glukoze u suspenziji se prati merenjem koncentracije D-glukoze pomoću senzora koji je u kontaktu sa suspenzijom. U određenim otelotvorenjima, senzor je neprekidno u kontaktu sa suspenzijom tokom kontakta. U određenim otelotvorenjima, D-glukoza se dodaje kada je izmerena koncentracija D-glukoze u suspenziji ispod 4 mmol/L. U određenim otelotvorenjima, D-glukoza se dodaje da bi se postigla konačna koncentracija od oko 7 mmol/L; oko 8 mmol/L; oko 9 mmol/l; ili oko 10 mmol/L D-glukoze u suspenziji. U nekim otelotvorenjima, nivoi glukoze se podešavaju dodavanjem osnovnog rastvora 1,1 M D-glukoze. U određenim otelotvorenjima dodavanje 0,91 µL osnovnog rastvora (na 1,1 M) po mL rastvora krvi dovodi do povećanja nivoa glukoze od 1 mmol/L. Kontinuirano praćenje pomoću senzora, opciono u kombinaciji sa automatskim dodavanjem D-glukoze u suspenziju, omogućava održavanje koncentracije D-glukoze u užem opsegu. Shodno tome, u određenim otelotvorenjima, koncentracija D-glukoze se održava na oko 5 do oko 8 mmol/L.
Nećelijski faktori krvi
[0141] U nekim otelotvorenjima, uzorak cele krvi sadrži jedan ili više nećelijskih faktora, pri čemu jedan ili više nećelijskih faktora pune krvi popunjavaju strukturu, i pri čemu jedan ili više nećelijskih faktora promovišu celularizaciju acelularne tubularne strukture i kompatibilnost krvnog suda sa domaćinom nakon presađivanja. Kako se ovde koristi, termin "nećelijski faktor" se odnosi na komponentu u suspenziji pune krvi koja ne sadrži kompletnu eukariotsku ćeliju. Nećelijski faktor može biti bilo koji tip molekula, uključujući ali bez ograničenja na protein, nukleinsku kiselinu, saharid, lipid, mali molekul, metalni jon ili konjugat ili njihovu kombinaciju.
[0142] Na primer, nećelijski faktor može biti faktor rasta. U nekim otelotvorenjima, faktor rasta se bira iz grupe koju čine: faktora stimulacije granulocitno-makrofagnih kolonija (GM-CSF), interleukin (IL)-3, IL-4, neutrofin (NT)-6, pleiotrofin (HB-GAM), midkin (MK), interferon inducibilni protein-10 (IP-10), faktor trombocita (PF)-4, monocitni hemotaktički protein-1 (MCP-1), RANTES (CCL-5, hemokin (C-C motiv) ligand 5), IL-8, IGFs, faktor rasta fibroblasta (FGF)-1, FGF-2, FGF-3, FGF-4, FGF-5, FGF-6, FGF-7, FGF-8, FGF-9, transformacioni faktor rasta beta (TGF)-β, VEGF, faktor rasta izveden iz trombocita (PDGF)-A, PDGF-B, HB-EGF, faktor rasta hepatocita (HGF), faktor nekroze tumora (TNF)-α, faktor rasta sličan insulinu (IGF)-1, i bilo koja njihova kombinacija(e).
[0143] U određenim otelotvorenjima, nećelijski faktor krvi je ćelijski fragment (npr., trombocit, ćelijska frakcija). U određenim otelotvorenjima, nećelijski faktor krvi je protein (npr., citokin, hemokin, faktor rasta, antitelo, fragment antitela, protein sistema komplementa ili enzim). U određenim otelotvorenjima, nećelijski faktor krvi je nukleinska kiselina (npr., cirkulišuća DNK, cirkulišuća RNK ili cirkulišuća miRNK). U određenim otelotvorenjima, nećelijski faktor krvi je ćelijski fragment (npr., monosaharid ili disaharid). U određenim otelotvorenjima, nećelijski faktor krvi je lipid (npr., masna kiselina, triglicerid ili holesterol). U određenim otelotvorenjima, nećelijski faktor krvi je mali molekul. U određenim otelotvorenjima, nećelijski faktor krvi je metalni jon.
[0144] U određenim otelotvorenjima, nećelijski faktor krvi je modifikovani oblik ili metabolit bilo kog od iznad navedenih molekula. Na primer, u određenim otelotvorenjima, nećelijski faktor krvi je segment proteina (npr., peptid ili polipeptid). U određenim otelotvorenjima, nećelijski faktor krvi je nukleinska kiselina sa jednom ili više modifikacija (npr., metilacija, 5' zatvaranje). U određenim otelotvorenjima, nećelijski faktor krvi je aldonska kiselina ili alditol saharida. U određenim otelotvorenjima, nećelijski faktor krvi je sterol. U određenim otelotvorenjima, nećelijski faktor krvi je konjugat bilo kog od molekula koji su ovde obelodanjeni, pri čemu su molekuli konjugovani kovalentno ili nekovalentno.
[0145] U određenim otelotvorenjima, koncentracija faktora rasta je jednaka prosečnom fiziološkom nivou populacije faktora rasta. U određenim otelotvorenjima, koncentracija faktora rasta je veća od prosečnog fiziološkog nivoa faktora rasta u populaciji. U određenim otelotvorenjima, faktor rasta je dopunjen kao izolovani, prečišćeni i/ili sintetički molekul.
[0146] Nećelijski faktor krvi može doprineti obnavljanju/recelularizaciji acelularne tubularne strukture na različite načine in vitro ili nakon implantacije. Na primer, u određenim otelotvorenjima, nećelijski faktor krvi promoviše vezivanje ili prianjanje ćelija na strukturu. U određenim otelotvorenjima, nećelijski faktor krvi promoviše proliferaciju progenitornih ćelija. U određenim otelotvorenjima, nećelijski faktor krvi promoviše diferencijaciju progenitornih ćelija u ćelije koje mogu da popune strukturu. U određenim otelotvorenjima, nećelijski faktor krvi inhibira apoptozu i/ili nekrozu ćelija i/ili progenitornih ćelija. U određenim otelotvorenjima, nećelijski faktor krvi promoviše uklanjanje ili maskiranje alogenog(ih) proteina(a) prisutnih na strukturi. U određenim otelotvorenjima, nećelijski faktor krvi promoviše taloženje autolognog(ih) proteina(a) na strukturu. U određenim otelotvorenjima, nećelijski faktor krvi promoviše kondicioniranje strukture da suzbije odbacivanje domaćina.
Kontaktiranje acelularne tubularne strukture sa punom krvlju pacijenta
[0147] Predmetno obelodanjenje obezbeđuje postupak pripreme personalizovanog krvnog suda, postupak koji obuhvata kontakt površine (npr., unutrašnje površine) acelularne tubularne strukture (npr., decilularizovanog krvnog suda ili bioštampane tubularne strukture) sa suspenzijom koja sadrži punu krv duže od 48 sati, čime se omogućava da se krv pusti u strukturu. U nekim otelotvorenjima, površina acelularne tubularne strukture je unutrašnja površina acelularne tubularne strukture.
[0148] Kako se ovde koristi, termin "kontakt", "dovođenje u kontakt" ili kontaktiranje" označava statičku inkubaciju, perfuziju, uvođenje, ubrizgavanje ili kultivaciju. Perfuzija može biti pulsna perfuzija, intervalna perfuzija, naizmenični smer i bez perfuzije. U nekim otelotvorenjima, acelularna tubularna struktura je kontinuirano perfundirana suspenzijom ili punom krvlju.
[0149] Termini "dan" i "dani" odnose se na ciklus(e) od 24 sata. U određenim otelotvorenjima, kontakt traje najmanje 4, najmanje 5, najmanje 6 ili najmanje 7 dana. U određenim otelotvorenjima, kontakt traje do 9, do 10, do 11, do 12 ili do 13 dana. U određenim otelotvorenjima, kontakt traje oko 7 do oko 9 dana. U određenim otelotvorenjima, kontaktiranje traje oko 3 dana, oko 4 dana, oko 5 dana, oko 6 dana, oko 7 dana, oko 8 dana, oko 9 dana, oko 10 dana, oko 11 dana, oko 12 dana, oko 13 dana ili oko 14 dana.
[0150] Acelularna tubularna struktura (npr., decelularizovani krvni sud ili bioštampana tubularna struktura) može biti u kontaktu sa nerazređenim uzorkom pune krvi ili suspenzijom koja sadrži razblaženu punu krv na bilo koji način poznat u struci. Na primer, u određenim otelotvorenjima, struktura je labava i suspendovana u suspenziji, opciono pri čemu se suspenzija protresa (npr., rotira) da bi se komponente ponovo mešale redovno ili kontinuirano. Rotacija tubularne strukture tokom perfuzije može biti kontinuirana/povremena, naizmenična ili intervalna.
[0151] U određenim otelotvorenjima, unutrašnja površina strukture je u kontaktu sa suspenzijom. U određenim otelotvorenjima, struktura je perfuzirana suspenzijom. U određenim otelotvorenjima, struktura je perfuzirana zatvorenom recirkulacijom suspenzije. U određenim otelotvorenjima, kontinuirani kontakt je perfuzija koja se sprovodi korišćenjem bioreaktora. U određenim otelotvorenjima, spoljašnja površina strukture je takođe u kontaktu sa suspenzijom. U drugim otelotvorenjima, spoljna površina strukture nije u kontaktu sa suspenzijom. U određenim otelotvorenjima, kontakt se sprovodi in vitro.
[0152] Perfuzija se može obaviti na bilo koji način. Na primer, u određenim otelotvorenjima, struktura se kontinuirano perfuzira suspenzijom. U određenim otelotvorenjima, struktura se perfuzira suspenzijom povremeno (npr., perfuzija u trajanju od 1 minuta u intervalu od 4 minuta). U određenim otelotvorenjima, perfuzija se sprovodi u jednom pravcu. U određenim otelotvorenjima, pojedinačni pravac je pravac antegradnog strujanja, npr., smer koji dozvoljava struktura(e) ventila u strukturi. U određenim otelotvorenjima, perfuzija se sprovodi u naizmeničnim smerovima (npr., promena smera svakih 5 minuta). Brzinu perfuzije može odrediti stručnjak u svetlu brojnih faktora, kao što su prečnik tubularne strukture, mehanička čvrstoća strukture, vreme potrebno da se ćelije sedimentiraju i viskozitet suspenzije. U određenim otelotvorenjima, struktura se perfuzira brzinom od oko 0,1 do oko 50 mL u minuti. U određenim otelotvorenjima, struktura se perfuzira brzinom od oko 2 ml u minuti. U zavisnosti od orijentacije strukture, rotacija tokom perfuzije (uključujući intervale) može biti korisna tako da unutrašnja površina strukture bude ravnomerno popunjena. U određenim otelotvorenjima, struktura se neprekidno rotira. U određenim otelotvorenjima, struktura se rotira povremeno (npr., za 30° svakih 5 minuta). Smer rotacije može biti konstantan ili naizmeničan. Prednost rotacije možda neće biti značajna tamo gde je struktura fiksirana vertikalno. Shodno tome, u određenim otelotvorenjima, struktura se ne rotira.
[0153] U specifičnim otelotvorenjima, struktura (npr., lumen strukture) je kontinuirano perfuzirana suspenzijom. U određenim otelotvorenjima, struktura se perfuzira brzinom od oko 0,1 do oko 50 mL u minuti (npr., oko 2 mL u minuti). U određenim otelotvorenjima, struktura je perfuzirana zatvorenom recirkulacijom suspenzije. U određenim otelotvorenjima, kontinuirani kontakt je perfuzija koja se sprovodi korišćenjem bioreaktora.
Praćenje uslova životne sredine tokom kontakta
[0154] U drugom aspektu, predmetno obelodanjenje obezbeđuje postupak za pripremu personalizovanog krvnog suda, postupak koji obuhvata dovođenje u kontakt površine acelularne tubularne strukture (npr., decelularizovanog krvnog suda ili bioštampane tubularne strukture) sa suspenzijom koja sadrži punu krv, pri čemu se mnoštvo parametara okoline (npr., temperatura, pH, sadržaj kiseonika i/ili sadržaj CO2) prati i prilagođava kontinuirano ili redovno.
[0155] U određenim otelotvorenjima, kontakt se izvodi na oko 8°C do oko 40°C. U određenim otelotvorenjima, kontakt se izvodi na oko 20 °C do oko 25 °C. U određenim otelotvorenjima, kontakt se sprovodi na oko 37 °C. U određenim otelotvorenjima, kontakt se izvodi na oko 20 °C, oko 21 °C, oko 22 °C, oko 23 °C, oko 24 °C ili oko 25 °C.
[0156] U određenim otelotvorenjima, kontakt se izvodi na oko pH 7,2 do oko pH 7,5. U određenim otelotvorenjima, kontakt se izvodi na oko pH 7,4.
[0157] U određenim otelotvorenjima, kontakt se sprovodi na oko 30 mmHg do oko 100 mmHg parcijalnog pritiska kiseonika. U određenim otelotvorenjima, kontakt se sprovodi na oko 30 mmHg do oko 40 mmHg parcijalnog pritiska kiseonika. U određenim otelotvorenjima, kontakt se sprovodi na oko 80 mmHg do 100 mmHg parcijalnog pritiska kiseonika. U određenim otelotvorenjima, kontaktiranje se izvodi pri parcijalnom pritisku kiseonika od oko 160 mmHg.
[0158] U određenim otelotvorenjima, kontakt se sprovodi na oko 38 mmHg do oko 76 mmHg parcijalnog pritiska ugljen-dioksida. U određenim otelotvorenjima, kontakt se sprovodi na oko 38 mmHg parcijalnog pritiska ugljen-dioksida. U određenim otelotvorenjima, kontakt se sprovodi na oko 76 mmHg parcijalnog pritiska ugljen-dioksida. U određenim otelotvorenjima, kontakt se sprovodi na oko 40 mmHg do oko 50 mmHg parcijalnog pritiska ugljen-dioksida.
[0159] U određenim otelotvorenjima, parametri životne sredine (npr., temperatura, pH, sadržaj kiseonika i/ili sadržaj CO2) se prate i prilagođavaju kontinuirano ili redovno tokom kontakta.
[0160] U drugom aspektu, predmetno obelodanjenje obezbeđuje postupak za pripremu personalizovanog krvnog suda, postupak koji obuhvata dovođenje u kontakt površine acelularne tubularne strukture (npr., decelularizovanog krvnog suda ili bioštampane tubularne strukture) sa suspenzijom koja sadrži punu krv, pri čemu se koncentracija hranljive materije u suspenziji kontinuirano prati ili redovno kontroliše.
[0161] U drugom aspektu, predmetno obelodanjenje obezbeđuje postupak za pripremu personalizovanog krvnog suda, postupak koji se sastoji od kontakta površine acelularne tubularne strukture (npr., decelularizovanog krvnog suda ili bioštampane tubularne strukture) sa suspenzijom koja sadrži punu krv, pri čemu se koncentracija D-glukoze u suspenziji prati tokom kontakta, a D-glukoza se dodaje u suspenziju da bi se održala koncentracija D-glukoze na oko 3 do oko 11 mmol/L.
[0162] U nekim otelotvorenjima, koncentracija D-glukoze u suspenziji se prati merenjem koncentracije D-glukoze u uzorku sakupljenom iz suspenzije. U nekim otelotvorenjima, koncentracija D-glukoze u suspenziji se meri jednom dnevno. U nekim otelotvorenjima, koncentracija D-glukoze u suspenziji se prati merenjem koncentracije D-glukoze pomoću senzora koji je u kontaktu sa suspenzijom. U nekim otelotvorenjima, senzor je neprekidno u kontaktu sa suspenzijom tokom kontakta.
[0163] U nekim otelotvorenjima, D-glukoza se dodaje kada je izmerena koncentracija D-glukoze u suspenziji ispod 4 mmol/L. U nekim otelotvorenjima, D-glukoza se dodaje da bi se postigla konačna koncentracija od 10 mmol/L D-glukoze u suspenziji.
Priprema acelularne tubularne strukture sa obogaćenom ili odabranom komponentom pune krvi
[0164] U određenim otelotvorenjima, predmetno obelodanjenje obezbeđuje postupak pripreme personalizovanog krvnog suda u kome se jedna ili više komponenti pune krvi obogaćuje i bira, a zatim dodaje na površinu acelularne tubularne strukture da dođe u kontakt sa unutrašnjom površinom strukture. Na primer, komponenta odabrana od trombocita, ćelija sa jezgrom, proteina, faktora rasta, signalnih faktora, imunoglobulina, i bilo koje njihove kombinacije može se dodati na unutrašnju površinu acelularne tubularne strukture. Komponenta može biti obogaćena ili odabrana, na primer, centrifugiranjem, gradijentnim centrifugiranjem, odvajanjem selektivnim prianjanjem, filtracijom ili sortiranjem (npr., FACS, MACS).
[0165] Termini "obogaćeni i odabrani" odnose se na supstancu i/ili entitet koji je odvojen od najmanje jedne komponente sa kojom je pomešan kada je prvobitno proizveden (bilo u prirodi ili u eksperimentalnom okruženju). U određenim otelotvorenjima, izolovana supstanca i/ili entitet je odvojen od najmanje 10%, najmanje 20%, najmanje 30%, najmanje 40%, najmanje 50%, najmanje 60%, najmanje 70%, najmanje 80%, najmanje 90%, najmanje 95% ili najmanje 99% bez komponenti sa kojima je prvobitno pomešan. U određenim otelotvorenjima, obogaćena i odabrana supstanca i/ili entitet se prečišćavaju. U određenim otelotvorenjima, obogaćena, odabrana i/ili prečišćena supstanca i/ili entitet je suštinski bez drugih komponenti. Kako se ovde koristi, izračunavanje procenta odvajanja ili čistoće ne uključuje ekscipijense (npr., pufer, rastvarač, vodu, itd.).
Personalizovani krvni sudovi
[0166] Postupak koja je ovde obelodanjen omogućava ćelijama i/ili progenitorskim ćelijama da naseljavaju površinu (npr., unutrašnju površinu) acelularne tubularne strukture (npr., decelularizovani krvni sud ili bioštampana tubularna struktura), čime se generiše personalizovani krvni sud. U određenim otelotvorenjima, ćelije sadrže endotelne ćelije. U određenim otelotvorenjima, ćelije sadrže ćelije glatkih mišića. U određenim otelotvorenjima, progenitorske ćelije sadrže endotelne progenitorne ćelije. U određenim otelotvorenjima, progenitorske ćelije obuhvataju matične ćelije glatkih mišića. Stručnjak bi razumeo da ćelije i/ili progenitorne ćelije mogu da popune strukturu na jedan ili više načina. Populacija strukture može nastati in vitro pre implantacije ili in vivo nakon implantacije. U određenim otelotvorenjima, ćelije se vezuju za strukturu. U određenim otelotvorenjima, progenitorne ćelije proliferišu i/ili se diferenciraju da bi stvorile ćelije potomstva, a ćelije potomstva se vezuju za strukturu.
[0167] U određenim otelotvorenjima, kontakt dovodi do proliferacije i/ili diferencijacije progenitornih ćelija u endotelne ćelije. U određenim otelotvorenjima, endotelne ćelije eksprimiraju VE-kadherin, AcLDL, vWF i/ili CD31. Rekondicionisana/recelularizovana struktura se može okarakterisati po prisustvu endotelnih i glatkih mišićnih ćelija. Tehnike imunohistohemije i imunofluorescencije dobro poznate običnom stručnjaku se koriste za otkrivanje prisustva ili odsustva endotelnih i glatkih mišićnih ćelija. Za vizuelizaciju prisustva endotelnih ćelija, antitela na CD31 (1:200) (Abcam, Nemačka) i vVF (1:100) (Santa Kruz, Nemačka) se mogu koristiti za bojenje obnovljenih/recelularizovanih struktura. Za vizuelizaciju ćelija glatkih mišića, antitelo protiv aktina glatkih mišića (1:50) (Abcam, Nemačka) se može koristiti za bojenje obnovljenih/recelularizovanih ventila. Prisustvo ćelija pozitivnih na ove markere u recelularizovanim strukturama detektuje se imunohistohemijom ili imunofluorescencijom. Glatke mišićne ćelije se takođe mogu identifikovati po morfologiji mišićnih ćelija u obliku vretena koje oblažu obnovljene/recelularizovane strukture.
[0168] Personalizovani krvni sudovi pripremljeni postupkom koji je ovde obelodanjen su korisni za implantaciju u ispitanika (npr., čoveka). U određenim otelotvorenjima, personalizovani krvni sud je koristan kao vena. U određenim otelotvorenjima, postupak dalje obuhvata korak procene funkcije venskog ventila (npr., korišćenjem in vitro testa sposobnosti zaliska) personalizovanog krvnog suda. Primeri in vitro testova sposobnosti ventila dati su u patentnoj objavi SAD br.2017/0071738. U određenim otelotvorenjima, funkcija venskog ventila se testira pre rekondicioniranja/recelularizacije. U određenim otelotvorenjima, funkcija venskog ventila se testira nakon rekondicioniranja/recelularizacije. U određenim otelotvorenjima, funkcija venskog ventila se testira i pre i posle rekondicioniranja/recelularizacije.
[0169] Funkcionalni personalizovani krvni sud nema curenje. Shodno tome, u određenim otelotvorenjima, postupak dalje obuhvata korak procene curenja. U struci su poznate različite metode za ispitivanje curenja. Na primer, u određenim otelotvorenjima, personalizovani krvni sud se ispere rastvorom (npr., fiziološki puferovanim rastvorom kao što je fiziološki rastvor sa fosfatnim puferom (PBS)), poželjno pri konstantnoj brzini, a na površini personalizovanog krvnog suda se posmatra akumulacija rastvora koja je rezultat curenja ili rupe. U određenim otelotvorenjima, curenje se testira pre rekondicioniranja/recelularizacije. U određenim otelotvorenjima, curenje se testira nakon rekondicioniranja/recelularizacije. U određenim otelotvorenjima, curenje se testira i pre i posle rekondicioniranja/recelularizacije.
[0170] U drugom aspektu, predmetno obelodanjenje obezbeđuje personalizovani krvni sud pripremljen bilo kojim od postupaka koji su ovde obelodanjeni. U određenim otelotvorenjima, personalizovani krvni sud sadrži acelularnu tubularnu strukturu (npr., decelularizovani krvni sud, opciono tretiran MMP-om, ili bioštampana tubularna struktura) uključujući nećelijske faktore kao što su ECM komponente/kompozicija krvnog suda sisara ili njegovog dela, ćelije ili funkcionalne ćelije mišića sa celim ili funkcionalnim ćelijama čoveka.
[0171] Personalizovani krvni sud prema predmetnom pronalasku dalje obuhvata ćelije kao što su, ali ne ograničavajući se na, matične ćelije ili progenitorne ćelije izvedene iz cele krvi, kao što su endotelne matične ćelije, endotelne progenitorne ćelije, glatke mišićne progenitorne ćelije, puna krv, periferna krv i sve populacije ćelija koje se mogu izolovati iz cele krvi. Progenitorske ćelije su definisane kao ćelije koje su posvećene diferencijaciji u jednu vrstu ćelija. Na primer, endotelne progenitorne ćelije označavaju ćelije koje su programirane da se diferenciraju u endotelne ćelije; glatke mišićne matične ćelije označavaju ćelije koje su programirane da se diferenciraju u ćelije glatkih mišića. Progenitorne ćelije u punoj krvi ili perifernoj krvi obuhvataju populaciju nepovezanih i/ili angažovanih ćelija, kao što su pluripotentne ćelije ili totipotentne ćelije.
[0172] U određenim otelotvorenjima, površina personalizovanog krvnog suda je u velikoj meri prekrivena ćelijama. U određenim otelotvorenjima, unutrašnja površina personalizovanog krvnog suda je u velikoj meri prekrivena endotelnim ćelijama. U određenim otelotvorenjima, endotelne ćelije eksprimiraju VE-kadherin, AcLDL, vWF i/ili CD31.
[0173] Stručnjak bi razumeo da ćelije i/ili progenitorne ćelije u krvi ne moraju da naseljavaju unutrašnju površinu strukture u meri u kojoj se obnovljena/recelularizovana struktura ne može razlikovati od prirodnih krvnih sudova. Kao što je ovde obelodanjeno, recelularizacija se može desiti in vitro kao i in vivo nakon implantacije, a struktura koja je delimično recelularizovana in vitro može biti dalje recelularizovana in vivo da bi se ponovo uhvatila morfologija i/ili funkcija prirodnih krvnih sudova. Bez obzira na to, endotelne ćelije sa nižom gustinom nego u prirodnim krvnim sudovima mogu takođe u velikoj meri pokriti unutrašnju površinu strukture usvajanjem šire morfologije, čime se vezuju za veću površinu po ćeliji.
[0174] Personalizovani krvni sudovi pripremljeni postupkom koji je ovde obelodanjen su korisni za implantaciju u ispitanika (npr., čoveka). U određenim otelotvorenjima, personalizovani krvni sud je koristan kao vena.
[0175] U određenim otelotvorenjima, acelularna tubularna struktura je izvedena iz vene (npr., pripremljena je decelularizacijom prirodne vene). U određenim otelotvorenjima, vena je u donjem ekstremitetu. Venski sistem donjih ekstremiteta uključuje duboke vene, koje leže ispod mišićne fascije i dreniraju mišiće donjih ekstremiteta; površne vene, koje su iznad duboke fascije i dreniraju mikrocirkulaciju kože; i perforirajuće vene koje prodiru u mišićnu fasciju i spajaju površne i duboke vene. Komunikacione vene povezuju vene unutar istog dela.
[0176] U određenim otelotvorenjima, vena je duboka vena. Duboke vene korisne za trenutne postupke uključuju, ali nisu ograničene na površnu femoralnu venu, koja povezuje poplitealnu venu sa zajedničkom femoralnom venom, i duboke vene lista (npr., prednje tibijalne, zadnje tibijalne i peronealne vene). U određenim otelotvorenjima, vena je femoralna vena. Duboke vene korisne za trenutne postupke obuhvataju, ali nisu ograničene na veliku potkožnu venu, prednju i zadnju pomoćnu veliku potkožnu venu, malu potkožnu venu (SSV) i interpotkožnu venu (poznatu kao Giacomini vena).
[0177] Većina vena ima venske ventile koji obezbeđuju jednosmerni protok krvi. Na primer, površne, duboke i najperforantnije vene u donjem ekstremitetu sadrže bikuspidne zaliske. Shodno tome, u određenim otelotvorenjima, acelularna tubularna struktura sadrži strukturu ventila, a struktura ventila je obnovljena/recelularizovana da bi se obezbedio funkcionalni venski ventil u personalizovanom krvnom sudu. Struktura ventila može biti izvedena ili iz prirodnog venskog ventila ili iz sinteze i/ili sklopa strukture.
Postupci procene funkcije venskog zaliska su poznati u struci, uključujući, ali ne ograničavajući se na, in vitro test sposobnosti ventila. U određenim otelotvorenjima, postupak dalje obuhvata procenu funkcije venskog ventila (npr., korišćenjem in vitro testa sposobnosti ventila) acelularne tubularne strukture.
[0178] U određenim otelotvorenjima, struktura ventila u acelularnoj tubularnoj strukturi se obnavlja/recelularizuje tokom rekondicioniranja/recelularizacije ostatka unutrašnje površine strukture, tj., ne preduzima se nikakav dodatni korak za specifično rekondicioniranje/recelularizaciju strukture ventila. U određenim otelotvorenjima, obnovljeni/recelularizovani ventili su CD31-pozitivni.
Rekondicionirani/recelularizovani zalisci takođe mogu biti aktin-pozitivni glatkih mišića, vWF-pozitivni i/ili biti okarakterisani prisustvom vretenastih ćelija glatkih mišića.
[0179] U određenim otelotvorenjima, personalizovani krvni sud je imao jednu ili više karakteristika prirodnog krvnog suda. U određenim otelotvorenjima, personalizovana vena pripremljena postupkom koji je ovde obelodanjen sadrži obnovljene/recelularizovane ventile koji imaju mehanička svojstva sile na prvom maksimumu iznad 0,8 N. U određenim otelotvorenjima, personalizovani krvni sud pripremljen postupkom koji je ovde obelodanjen ne pokazuje curenje kada se testira.
Postupci lečenja ili upotrebe
[0180] U drugom aspektu, predmetno obelodanjenje obezbeđuje personalizovani krvni sud koji je ovde obelodanjen za upotrebu u terapiji. U određenim otelotvorenjima, predmetno obelodanjenje obezbeđuje personalizovani krvni sud za upotrebu u transplantaciji kod ispitanika. U određenim otelotvorenjima, predmetno obelodanjenje obezbeđuje personalizovani krvni sud za upotrebu u lečenju bolesti krvnih sudova ili poremećaja kod ispitanika kome je to potrebno.
[0181] Termini "lečenje", "tretiranje" ili "tretman" i drugi gramatički ekvivalenti koji se koriste u predmetnom obelodanjenju uključuju ublažavanje, smanjivanje, poboljšanje ili prevenciju bolesti, stanja ili simptoma, sprečavanje dodatnih simptoma, ublažavanje ili prevenciju osnovnih metaboličkih uzroka simptoma, inhibiranje bolesti ili stanja, tj., zaustavljanje bolesti ili stanja, ublažavanje bolesti ili stanja, izazivanje regresije bolesti ili stanja, ublažavanje stanja izazvanog bolešću ili stanjem, ili zaustavljanje simptoma bolesti ili stanja, a imaju za cilj da uključuju profilaksu. Termini dalje uključuju postizanje terapeutske koristi i/ili profilaktičke koristi. Pod terapeutskom koristi se podrazumeva iskorenjivanje ili poboljšanje osnovnog poremećaja koji se leči. Takođe, terapeutska korist se postiže iskorenjivanjem ili ublažavanjem jednog ili više fizioloških simptoma povezanih sa osnovnim poremećajem, tako da se primećuje poboljšanje kod ispitanika, bez obzira na to što subjekt još uvek može biti pogođen osnovnim poremećajem.
[0182] Postupci koje su ovde obelodanjeni su posebno pogodni za stvaranje autologno projektovanih krvnih sudova. Oni imaju prednosti: (1) nisu imunogeni i stoga imaju minimalan rizik od odbacivanja transplantata ili neželjenog imunološkog odgovora; (2) otklanjanje potrebe za imunosupresijom, a samim tim i manji rizik za pacijenta nakon operacije i tokom njegovog života; (3) bez ograničenja dužine; (4) da su lakše dostupni u poređenju sa podudarnim donorskim venama ili autolognim venama; (5) sastavljena od prirodnih komponenti (tj., ECM, endotelnih ćelija i ćelija glatkih mišića), i stoga ima superiorne kvalitete u odnosu na uglavnom sintetičke i veštačke vene, uključujući očuvanje rezidualnih angiogenih faktora rasta i biomehaničkog integriteta; (6) zahteva invazivnu proizvodnju vene u odnosu na uzimanje autologne vene za transplantaciju; (7) omogućavanje brze i minimalno invazivne procedure korišćenjem pune krvi; (8) postaje celularizovan i biološki integrisan u telo ispitanika i njegove funkcije (popravka, rast, imunološka odbrana).
[0183] Shodno tome, u jednom aspektu, predmetno obelodanjenje obezbeđuje postupak operacije koji obuhvata implantaciju personalizovanog krvnog suda koji je ovde obelodanjen u ispitanika (npr., čoveka) kome je to potrebno. U drugom aspektu, predmetno obelodanjenje obezbeđuje personalizovani krvni sud koji je ovde obelodanjen za upotrebu u implantaciji u ispitanika (npr., čoveka) kome je to potrebno. U drugom aspektu, predmetno obelodanjenje obezbeđuje personalizovani krvni sud pripremljen bilo kojim od postupaka koji su ovde obelodanjeni, pri čemu je personalizovani krvni sud implantiran u ispitanika (npr., čoveka) operacijom.
[0184] U određenim otelotvorenjima, personalizovani krvni sud je autologan. Kako se ovde koristi, termin "autologan" znači da je krv korišćena u postupku pripreme personalizovanog krvnog suda od ispitanika koji prima implantaciju ili operaciju. U određenim otelotvorenjima, gde se personalizovani krvni sud proizvodi decelularizacijom prirodnog krvnog suda, donor prirodnog krvnog suda nije isti pojedinac kao primalac personalizovanog krvnog suda. U određenim otelotvorenjima, gde se personalizovani krvni sud proizvodi decelularizacijom prirodnog krvnog suda, prirodni krvni sud se dobija od pogodne životinjske vrste (npr., svinja, ovca, krava).
[0185] Postupci hirurgije koji su ovde obelodanjeni su korisni za lečenje različitih vaskularnih bolesti ili poremećaja. Shodno tome, u određenim otelotvorenjima, ispitanik ima vaskularnu bolest ili poremećaj, npr., vensku bolest ili poremećaj. U određenim otelotvorenjima, venska bolest ili poremećaj se bira iz grupe koju čine duboka venska tromboza (DVT), hronična venska insuficijencija (CVI) (tzv. postflebitički sindrom), proširene vene, venske ulceracije (npr., ulceracija vena na nozi) i rekurentni kancer duboke vene i/ili venski refluks noge). U određenim otelotvorenjima, personalizovani krvni sud se implantira, transplantira ili presađuje da zameni segment prirodnog krvnog suda koji je zahvaćen bilo kojim od vaskularnih bolesti ili poremećaja. U određenim otelotvorenjima, personalizovani krvni sud je vena i sadrži najmanje jedan venski ventil.
[0186] U određenim otelotvorenjima, postupak hirurgije leči, ublažava i/ili smanjuje jedan ili više simptoma uključujući tup bol, težinu ili grčeve u nogama, svrab i peckanje, bol koji se pogoršava kada stojite, bol koji postaje bolji kada se noge podignu, oticanje nogu, crvenilo nogu, promena boje kože oko zglobova (promena boje kože oko vena i zglobova), očvršćavanje i otvrdnuće kože na nogama i skočnim zglobovima (lipodermatoskleroza), čirevi na nogama i skočnim zglobovima i rane koje sporo zarastaju na nogama ili skočnim zglobovima.
[0187] U određenim otelotvorenjima, postupak hirurgije koji je ovde obelodanjen leči i/ili ublažava CVI. CVI definiše one manifestacije venske bolesti koje su rezultat ambulantne venske hipertenzije, definisane kao neuspeh da se smanji venski pritisak vežbanjem. U normalnim okolnostima, venski zalisci i mišićne pumpe donjih ekstremiteta ograničavaju nakupljanje krvi u venama donjih ekstremiteta. Otkazivanje mišićnih pumpi donjih ekstremiteta usled opstrukcije izlaznog toka, mišićno-fascijalne slabosti, gubitka pokretljivosti zgloba ili valvularne insuficijencije povezano je sa perifernom venskom insuficijencijom.
[0188] U određenim otelotvorenjima, postupak hirurgije koji je ovde obelodanjen leči i/ili ublažava vensku ulceraciju. Venske ulceracije su rane zbog nepravilnog funkcionisanja venskih zalistaka, obično nogu (tj., venske ulceracije nogu). Venski čirevi nastaju kada zalisci imaju smanjenu funkciju i povratni tok krvi uzrokuje nakupljanje krvi u venama i povećan pritisak u venama i kapilarima. To dovodi do drugih srodnih komplikacija, kao što su edem, zapaljenje, otvrdnuće tkiva, pothranjenost kože i venski ekcem. Venski čirevi su veliki, plitki, obezbojeni zbog curenja pigmenta koji sadrži gvožđe iz crvenih krvnih zrnaca u tkivo i mogu imati gnoj. Čirevi su najčešće locirani oko medijalnog ili lateralnog gležnja.
[0189] U određenim otelotvorenjima, postupak operacije koji je ovde obelodanjen vraća normalan venski pritisak donjih ekstremiteta. Na primer, tokom hodanja, venski pritisak donjih ekstremiteta se smanjuje sa približno 100 mm Hg (u zavisnosti od visine) na srednju vrednost od 18 mm Hg na oko 25 mm Hg u okviru 7 do 12 koraka. Slične promene pritiska se primećuju sa savijanjem gležnja u stojećem položaju ili podizanjem pete, prenoseći težinu na prednje stopalo (kretanje na prstima). Ambulatorni venski pritisak (AVP) se može odrediti korišćenjem igle od 21 merača za merenje odgovora na 10 pokreta prstiju, obično brzinom od 1 u sekundi, u dorzalnoj veni stopala. Kada se ponovo vrati u stojeći položaj, hidrostatički pritisak se vraća u proseku posle 31 sekunde. Incidencija ulceracije ima linearnu vezu sa povećanjem AVP iznad 30 mm Hg. Povećani AVP je takođe povezan sa vremenom punjenja vena za 90% manje od 20 sekundi. Za razliku od AVP, promene zapremine se mogu meriti neinvazivno pomoću pletizmografije. Brzi refluks (tj., vensko punjenje veće od 7 ml/sek) i disfunkcija pumpe u listu noge su povezani sa visokom incidencom ulceracija. Rekondicionirani/recelularizovani zalisci u venama, nakon presađivanja, vraćaju normalan AVP, normalan brzi refluks i/ili normalnu disfunkciju pumpe u listu noge. Poželjno, venski zalistak u personalizovanom krvnom sudu, nakon presađivanja, vraća normalnu toleranciju refluksnog pritiska od oko 100 mm Hg, i smanjuje se na srednju vrednost od oko 18 mm Hg do oko 25 mm Hg tokom hodanja 7 do 12 koraka.
[0190] U određenim otelotvorenjima, postupak operacije koji je ovde obelodanjen leči i/ili ublažava simptome zalistaka na butini koji ne rade. U određenim otelotvorenjima, lečenje i/ili ublažavanje simptoma se postiže obnavljanjem normalnog radnog odnosa između mišićnih pumpi i venskih zalistaka. Mišićne pumpe donjeg ekstremiteta uključuju pumpe stopala, potkolenice i butine. Među njima, pumpa u listu noge je najvažnija jer je najefikasnija, ima najveći kapacitet i stvara najveći pritisak (200 mm žive tokom mišićne kontrakcije). Normalni ekstremitet ima zapreminu teladi u rasponu od 1500 do 3000 cc, venski volumen od 100 do 150 cc i izbacuje preko 40% do 60% venske zapremine jednom kontrakcijom.
[0191] Tokom kontrakcije, gastroknemius i soleus mišići guraju krv u poplitealne i femoralne vene velikog kapaciteta. Rekondicionirani/recelularizovani ventili prema predmetnom obelodanjenju sprečavaju retrogradni tok (refluks) tokom naknadnog opuštanja, stvarajući negativan pritisak i izvlačeći krv iz površinskog u duboki sistem kroz kompetentne perforirajuće vene. Popravljeni/recelularizovani zalisci postepeno snižavaju venski pritisak dok se arterijski priliv ne izjednači sa venskim odlivom. Predmetno obelodanjenje obezbeđuje da kada prestane vežbanje kod subjekta, vene sa obnovljenim/recelularizovanim ventilima polako ispunjavaju kapilarni sloj, izazivajući spor povratak venskom pritisku u mirovanju.
[0192] Iako mišić okružuje vene butine, doprinos kontrakcije mišića butine venskom povratku je minimalan u poređenju sa pumpom mišića potkolenice. Pumpno dejstvo usled kompresije venskog pleksusa plantaže tokom kretanja pokreće pumpu u listu noge. Različite pumpe za noge rade zajedno sa kompetentnom funkcijom ventila za vraćanje venske krvi iz distalnog u proksimalni ekstremitet. Personalizovani krvni sudovi predmetnog obelodanjenja su za upotrebu u obnavljanju funkcionalnih pumpi za noge za vraćanje venske krvi iz distalnog u proksimalni ekstremitet.
Bioreaktori
[0193] U drugom aspektu, predmetno obelodanjenje obezbeđuje bioreaktor za pripremu personalizovanog krvnog suda, bioreaktor koji sadrži pumpu (na primer peristaltičku pumpu, gravitacionu pumpu, klipnu pumpu ili drugu prikladnu pumpu), ambalažu, prvi konektor i drugi konektor, pri čemu su prvi i drugi konektori direktno ili indirektno povezani sa svakim krajem konektora, pri čemu je svaki konektor povezan sa krajem tubularne strukture za pripremu personalizovanog krvnog suda pripremljenog bilo kojim od postupaka za pripremu personalizovanog krvnog suda koji su ovde obelodanjeni, pri čemu kada su prvi i drugi konektor povezani sa dva kraja tubularne strukture, pumpa posreduje u cirkulaciji suspenzije, cele krvi ili rastvora u zatvorenom krugu. U mnogim otelotvorenjima prednost je da je ovde korišćena pumpa (na primer peristaltička pumpa, gravitaciona pumpa, klipna pumpa ili druga pogodna pumpa) dovoljno nežna da se minimizira oštećenje krvnih zrnaca.
[0194] U određenim otelotvorenjima, bioreaktor dalje sadrži tubularnu strukturu (npr., acelularnu tubularnu strukturu (npr., decelularizovani krvni sud ili bioštampanu tubularnu strukturu)). U određenim otelotvorenjima, bioreaktor dalje sadrži suspenziju ili punu krv kako je ovde obelodanjeno za pripremu personalizovanog krvnog suda.
[0195] U određenim otelotvorenjima, najmanje dva dela bioreaktora su obezbeđena odvojeno, sa uputstvom za njihovo povezivanje po propisanom redosledu. Shodno tome, u jednom aspektu, predmetno obelodanjenje obezbeđuje komplet za sklapanje bioreaktora za pripremanje personalizovanog krvnog suda, bioreaktor koji sadrži peristaltičku pumpu, ambalažu, prvi konektor i drugi konektor, pri čemu prvi i drugi konektori mogu biti direktno ili indirektno povezani sa kontejnerom, pri čemu svaki konektor može biti povezan sa krajem tubularne strukture za pripremu personalizovanog krvnog suda pripremljenog bilo kojim od postupaka za pripremu personalizovanog krvnog suda koji su ovde obelodanjeni, pri čemu kada su prvi i drugi konektor povezani sa dva kraja tubularne strukture, peristaltička pumpa posreduje u cirkulaciji suspenzije ili rastvora u celom krvnom krugu. U određenim otelotvorenjima, komplet dalje sadrži tubularnu strukturu (npr., acelularnu tubularnu strukturu (npr., decelularizovani krvni sud ili bioštampanu tubularnu strukturu)).
[0196] U određenim otelotvorenjima, prvi i drugi konektor su Luer konektori. U određenim otelotvorenjima, prva ambalaža je direktno povezan sa ambalažom pomoću cevi, i/ili druga ambalaža je direktno povezana sa ambalažom pomoću cevi.
[0197] U određenim otelotvorenjima, bioreaktor sadrži otvor za uzorkovanje. U određenim otelotvorenjima, otvor za uzorkovanje je deo ambalaže. U određenim otelotvorenjima, otvor za uzorkovanje omogućava povlačenje uzorka suspenzije, pune krvi ili rastvora iz zatvorenog kruga. U određenim otelotvorenjima, otvor za uzorkovanje sadrži senzor za merenje temperature, pH i/ili koncentracije kiseonika, CO2ili hranljivih materija (npr., D-glukoze) u suspenziji, punoj krvi ili rastvoru.
[0198] U određenim otelotvorenjima, otvor za uzorkovanje je takođe koristan kao priključak za ubrizgavanje. U određenim otelotvorenjima, bioreaktor dalje sadrži otvor za ubrizgavanje. U određenim otelotvorenjima, otvor za ubrizgavanje je ili može biti povezan sa rezervoarom kiseonika, CO2ili hranljivim materijama (npr., D-glukoza).
[0199] U određenim otelotvorenjima, spoljna površina tubularne strukture je u kontaktu sa suspenzijom, punom krvlju ili rastvorom u ambalaži. Ovaj bioreaktor omogućava rekondicioniranje/recelularizaciju unutrašnje površine i spoljašnje površine tubularne strukture u isto vreme.
[0200] U određenim otelotvorenjima, bioreaktor dalje sadrži komoru koja obuhvata tubularnu strukturu, čime se omogućava kontakt spoljne površine tubularne strukture sa tečnošću u komori. Komora se takođe može sterilisati, održavajući tubularnu strukturu u aseptičnom stanju.
[0201] Stručnjak bi razumeo da se isti bioreaktor može koristiti za decelularizaciju prirodnog krvnog suda ili za kondicioniranje tubularne strukture. Odgovarajuću suspenziju, punu krv ili rastvor može izabrati stručnjak koji odgovara upotrebi.
[0202] Mogu se koristiti razne pumpe koje ne remete ćelijske i acelularne komponente u rastvoru krvi čak ni tokom dužeg perioda perfuzije. To mogu biti peristaltičke pumpe, gravitacione pumpe, klipne pumpe ili slično. Uključivanje otvora za uzorke u postavu bioreaktora omogućava sterilno uzorkovanje perfuzionog medijuma, kao i sterilno ubrizgavanje dodatnih komponenti bez otvaranja zatvorene petlje, a u nekim slučajevima čak i bez zaustavljanja perfuzije. U poboljšanoj verziji podešavanja bioreaktora, senzori raznih relevantnih parametara kao što su glukoza, pH, sadržaj kiseonika, sadržaj CO2, metaboliti i tako dalje mogu se spojiti u liniji u perfuzionu cev. Ovo omogućava kontinuirano praćenje procesa personalizacije tokom RC ili tokom DC, praćenje napretka i uspeha prekida i uklanjanja ćelije i DNK.
[0203] Drugi aspekt predmetnog obelodanjenja se odnosi na bioreaktor za pripremu personalizovanog krvnog suda, bioreaktor koji sadrži peristaltičku pumpu, ambalaža koja sadrži otvor za uzorkovanje, prvi konektor i drugi konektor, pri čemu su prvi i drugi konektori direktno ili indirektno povezani sa ambalažom, pri čemu je svaki konektor povezan sa krajem tubularne strukture za pripremu personalizovanog krvnog suda pripremljenog postupcima koji su ovde obelodanjeni, pri čemu kada su prvi i drugi konektor povezani sa dva kraja tubularne strukture, peristaltička pumpa posreduje u cirkulaciji suspenzija ili rastvor u zatvorenom kolu.
[0204] U nekim otelotvorenjima, prvi i drugi konektor su Luer konektori. U nekim otelotvorenjima, otvor za uzorkovanje je port za ubrizgavanje. U nekim otelotvorenjima, bioreaktor dalje sadrži otvor za ubrizgavanje. U nekim otelotvorenjima, otvor za injekciju je povezan sa rezervoarom D-glukoze. U nekim otelotvorenjima, prva ambalaža je direktno povezan sa ambalažom pomoću cevi, i/ili druga ambalaža je direktno povezana sa ambalažom pomoću cevi. U nekim otelotvorenjima, bioreaktor sadrži jedan ili više otvora za uzorke. U nekim otelotvorenjima, bioreaktor dalje sadrži jedan ili više senzora za merenje nivoa glukoze. U nekim otelotvorenjima, bioreaktor dalje sadrži modul za podešavanje pH-vrednosti. U nekim otelotvorenjima, bioreaktor dalje sadrži modul za podešavanje CO2.
[0205] Drugi aspekt predmetnog obelodanjenja se odnosi na postupak za pripremu personalizovanog krvnog suda, postupak koji obuhvata dovođenje u kontakt površine acelularne tubularne strukture sa komponentom sadržanom u celoj krvi, koja je obogaćena ili odabrana pre upotrebe u kontaktu sa površinom.
[0206] U nekim otelotvorenjima, komponenta se bira između trombocita, ćelija sa jezgrom, proteina, faktora rasta, signalnih faktora, imunoglobulina, i bilo koje njihove kombinacije.
[0207] U nekim otelotvorenjima, komponenta je obogaćena centrifugiranjem, gradijentom centrifugiranja, odvajanjem selektivnim prianjanjem, filtracijom ili sortiranjem. Mnogi postupci za obogaćivanje ili sortiranje komponenti su dobro poznati u struci. Neki primeri postupaka za sortiranje uključuju sortiranje ćelija aktivirano fluorescencijom (FACS) i magnetno aktivirano sortiranje ćelija (MACS).
Definicije
[0208] Podrazumeva se da postupci nisu ograničene na posebno opisana otelotvorenja, i kao takvi mogu da variraju. Takođe treba razumeti da se ovde korišćena terminologija koristi samo za opisivanje pojedinih otelotvorenja i nije namenjena da ograničava. Obim ove tehnologije biće ograničen samo priloženim patentnim zahtevima.
[0209] Kako se ovde koristi, određeni termini mogu imati sledeća definisana značenja. Kao što se koristi u specifikaciji i patentnim zahtevima, oblik jednine "a", "an" i "the" uključuje reference u jednini i množini osim ako kontekst jasno ne nalaže drugačije. Na primer, termin "ćelija" uključuje jednu ćeliju kao i više ćelija, uključujući njihove mešavine.
[0210] Kako se ovde koristi, termin "sadrži" treba da znači da sastavi i postupci uključuju navedene elemente, ali ne isključujući druge. "U suštini se sastoji iz" kada se koristi za definisanje sastava i postupaka, znači isključivanje drugih elemenata od bilo kakvog suštinskog značaja za sastav ili postupak. „Sastoji se iz“ će značiti isključivanje više od elemenata u tragovima drugih sastojaka za zahtevane sastave i značajne korake postupka. Otelotvorenja definisana svakim od ovih prelaznih uslova su u okviru predmetnog obelodanjenja. Shodno tome, predviđeno je da postupci i sastavi mogu uključiti dodatne korake i komponente (sadrže) ili alternativno uključuju korake i sastave bez značaja (koje se u suštini sastoje iz) ili alternativno, imajući u vidu samo navedene korake ili sastave postupka (koji se sastoje iz).
[0211] Termin "oko" se odnosi na bilo koju minimalnu promenu u navedenoj apsolutnoj vrednosti (npr., koncentracija ili količina sredstva) koja ne menja navedenu efikasnost, aktivnost, delovanje, rezultate, itd. U otelotvorenjima, termin "oko" može uključivati ±10% određene numeričke vrednosti ili tačke podataka. Termin "oko" uključuje navedenu vrednost (npr., "oko 1%" uključuje 1% kao i minimalne izmene istih).
[0212] Opsezi se mogu izraziti u ovom obelodanjenju kao od "oko" prve određene vrednosti, i/ili do "oko" druge određene vrednosti. Kada je takav opseg izražen, takođe se razmatra drugi aspekt koji uključuje od prve određene vrednosti i/ili do druge određene vrednosti. Slično tome, kada su vrednosti izražene kao aproksimacije, korišćenjem "oko", podrazumeva se da određena vrednost formira drugi aspekt. Dalje se podrazumeva da su krajnje tačke svakog od opsega značajne kako u odnosu na drugu krajnju tačku, tako i nezavisno od druge krajnje tačke. Takođe se podrazumeva da postoji određeni broj vrednosti otkrivenih u ovom obelodanjenju, i da je svaka vrednost takođe obelodanjena kao "oko" te određene vrednosti pored same vrednosti. Takođe se podrazumeva da se u celoj aplikaciji podaci pružaju u više različitih formata i da ovi podaci predstavljaju krajnje tačke i početne tačke i opsege za bilo koju kombinaciju tačaka podataka. Na primer, ako se obelodani određena tačka podataka „10“ i određena tačka podataka „15“, podrazumeva se da se više od, više ili jednako, manje od, manje ili jednako i jednako 10 i 15 smatra obelodanjenim, kao i između 10 i 15. Takođe se podrazumeva da se svaka jedinica između dve određene jedinice takođe obelodanjuje. Na primer, ako su 10 i 15 obelodanjeni, onda su 11, 12, 13 i 14 takođe obelodanjeni.
[0213] Kako se ovde koristi, termin "sadrži" treba da znači da sastavi i postupci uključuju navedene elemente, ali ne isključujući druge. "U suštini se sastoji iz" kada se koristi za definisanje sastava i postupaka, znači isključivanje drugih elemenata od bilo kakvog suštinskog značaja za sastav ili postupak. „Sastoji se iz“ će značiti isključivanje više od elemenata u tragovima drugih sastojaka za zahtevane sastave i značajne korake postupka. Otelotvorenja definisana svakim od ovih prelaznih uslova su u okviru predmetnog obelodanjenja. Shodno tome, predviđeno je da postupci i sastavi mogu uključiti dodatne korake i komponente (sadrže) ili alternativno uključuju korake i sastave bez značaja (koje se u suštini sastoje iz) ili alternativno, imajući u vidu samo navedene korake ili sastave postupka (koji se sastoje iz).
PRIMERI
Primer 1: Personalizovana vena projektovana tkivom (P-TEV)
[0214] Svinjski P-TEV transplantati su pripremljeni i testirani in vivo da bi se pokazali njihova bezbednost i izvodljivost. Konkretno, šuplja vena svinja je izabrana kao sistem zamene modela da oponaša veličinu i debljinu zida krvnih sudova ljudske femoralne vene.
Priprema P-TEV
[0215] Vena šuplja je izvađena iz leševa svinja i decelularizovana da bi se uklonile ćelije donora i DNK. Ukratko, segmenti vena su perfundirani uzastopno sa DC rastvorom 1, DC rastvorom 2 i DC rastvorom 3, uz korak ispiranja sterilnom vodom između različitih DC rastvora. U ovom primeru, korišćen je 24 sata Triton X, 8h TNBP i 16h DNaze. Segmenti vena su zatim temeljno isprani rastvorom DC baze i PBS tokom 1 sata i 48-časovno konačno pranje. Zatim su segmenti vena sterilisani u rastvoru za sterilizaciju i temeljno isprani u PBS-u (1-časovno sterilizaciono pranje i 48-časovno konačno pranje). Svaki sterilni segment vene DC je zatim prebačen u kontejner sa trajno pričvršćenom etiketom i zamrznut na -80 °C u PBS. Sastav rastvora koji se koristi u decelularizaciji i sterilizaciji dat je u Tabeli 1.
Tabela 1: Rastvori za decelularizaciju i sterilizaciju
[0216] Acelularnost decelularizovanih venskih struktura je verifikovana histološkim bojenjem hematoksilinom i eozinom (H&E) i 4',6-diamidino-2-fenilindolom (DAPI). Konkretno, plave tačke u H&E bojenju, koje predstavljaju jezgra, primećene su u neobrađenim venama, ali ne i u decelularizovanim uzorcima. Slično, fluorescencija iz DAPI, koja ukazuje na DNK, bila je detektirana u neobrađenim venama, ali ne i u decilularizovanim uzorcima. Sadržaj DNK u segmentima decelularizovanih vena je takođe procenjen korišćenjem Qubit™ fluorometra. Prosečan sadržaj dvolančane DNK (dsDNK) u uzorcima pre decelularizacije bio je 152 ng po mg tkiva, sa standardnom greškom srednje vrednosti (SEM) od 32 ng/mg. Nakon decelularizacije, uzorci su sadržali 0,5 ng dsDNK po mg tkiva, sa SEM od 0,04 ng/mg, što je bilo oko 0,3 ± 0,03 % neprerađenog materijala. Prema tome, decelularizacija je učinila venske skele u suštini bez DNK.
[0217] Za rekondicioniranje/recelularizaciju venskih struktura, uzorci periferne pune krvi (PVB) uzeti su od svinja primaoca rutinskom venepunkcijom u sterilnim 10 mL BD vakutajner staklenim epruvetama koje sadrže 17 IU/mL natrijum heparina. PVB je pomešan sa ex vivo rastvorom za perfuziju organa (STEEN™ rastvor) u odnosu 1:1, i dopunjen sa 10 ng/mL rekombinantnog humanog FGF-2 (rhFGF-2), 80 ng/mL rekombinantnog humanog VEGF (rhVEGF) i 5 µg/mL acetilsalicilne kiseline, čime se stvara autologna krvna suspenzija. Rekondicioniranje/recelularizacija je izvedena u zatvorenom bioreaktoru. Nakon prethodnog pranja sa PBS i prethodnog tretmana heparinom, venske strukture su kontinuirano perfuzirane krvnom suspenzijom u zatvorenoj recirkulaciji tokom 7 dana. Tokom perfuzije, nivo glukoze u krvnoj suspenziji je održavan između 3-11 mmol/L. Pod ovim uslovima, ćelijske i druge komponente iz suspenzije autologne krvi su ponovo popunile venske strukture.
Operacija
[0218] Obnovljeni/recelularizovani P-TEV su implantirani u svinje primaoce hirurškim putem. Konkretno, rez je napravljen kroz linea alba. Za prve dve svinje korišćena je konvencionalna tehnika za lokalizaciju šuplje vene: creva su držana po strani gazom namočenom u fiziološkom rastvoru i hirurškim kukicama, a deo šuplje vene između vene renalis i bifurkacije do vene femoralis je seciran od okolnog tkiva. Zbog formiranja crevne adhezije kod jedne od ove dve životinje, korišćena je poboljšana, retroperitonealna tehnika za lokalizaciju šuplje vene kod ostalih šest svinja (četiri su implantirane P-TEV, dve su bile podvrgnute lažnoj operaciji): peritoneum i trbušni zid su odvojeni do šuplje vene na desnoj strani, čime su creva ostala netaknuta. Za P-TEV transplantirane svinje, šuplja vena je presečena, a P-TEV od približno 4 cm je pričvršćen anastomozama od kraja do kraja. Kod lažno operisanih svinja, napetost vene nije dozvoljavala sečenje i šivenje na dva mesta kao kod P-TEV transplantata. Umesto toga, šuplja vena je presečena i zašivena jednom anastomozom.
[0219] Tokom operacije, svinje su sedirane tiletaminom, zolazepamom i medetomidinom, a zatim intubirane za anesteziju izofluranom. Buprenorfin je davan tokom operacije za ublažavanje bolova nakon operacije. Da bi se sprečila koagulacija i tromboza, sve svinje su tretirane peroralno sa 160 mg acetilsalicilne kiseline jednom dnevno nedelju dana pre operacije i sa 2 mg/kg rivaroksabana dva puta dnevno od jednog dana pre operacije do eutanazije. Pored toga, 10.000 IU heparina je dato intravenozno tokom operacije.
Stanje svinja posle operacije
[0220] Dve svinje su razvile crevnu adheziju nakon operacije i morale su biti eutanazirane pre planirane krajnje tačke zbog simptoma ileusa. Jedna je bila P-TEV svinja kod koje je šuplja vena lokalizovana konvencionalnom tehnikom. Moralo je biti eutanazirano 16 dana nakon operacije, a creva su pokazala masivne adhezije na disekciji. Druga je bila lažna svinja eutanazirana 7 dana nakon operacije. Ovoj svinji je tokom operacije pukao peritoneum, a creva su morala da se rukuju vlažnom gazom i udicama kao kod konvencionalne tehnike.
[0221] Nije primećena crevna adhezija tokom seciranja ostalih šest svinja. Među ovih šest životinja, jedna lažna svinja i tri P-TEV svinje su eutanazirane na planiranoj krajnjoj tački od 4-5 nedelja nakon operacije. Dve P-TEV svinje su morale biti ranije eutanazirane zbog komplikacija koje nisu povezane sa transplantacijom šuplje vene. Jedna je eutanazirana 3 dana nakon operacije, jer su popucali šavovi trbušnog zida. Drugi je eutanaziran 17 dana nakon operacije zbog preloma kolena na levoj prednjoj nozi.
Karakterizacija transplantiranih P-TEV
[0222] Angiografija je urađena pod anestezijom pre eutanazije jedne lažne svinje i tri P-TEV svinje koje su bile žive 4-5 nedelja nakon operacije. Kontrastna tečnost je ubrizgana u femoralnu venu, a šuplja vena je praćena uživo pomoću rendgenskog snimka C-luka. Kao što je prikazano na Sl.1A-1B, P-TEV (Sl.1B) i lažna (Sl.1A) operisane vene su obe bile otvorene sa slobodnim protokom krvi.
[0223] Nakon eutanazije svake svinje, pregledana je šuplja vena. Dve lažno operisane vene i šest P-TEV-a bili su otvoreni sa slobodnim protokom krvi bez znakova zgrušavanja ili tromboze. Prilikom makroskopskog pregleda nije uočen krvni ugrušak ili tromboza.
[0224] Vene su zatim isečene i pripremljene za H&E bojenje i DAPI bojenje. Kao što je prikazano na Sl.2A-2B, u P-TEV (Sl.2B) svinja eutanazirana 3 dana nakon operacije, ćelije su primećene u P-TEV graftu H&E i DAPI bojenjem. Trodnevni uzorak je analiziran kako je opisano. Uzorci nakon RC su takođe rutinski analizirani (oni su predstavljali poslednju fazu neimplantiranih P-TEV uzoraka). P-TEV graft je dobro celularizovan kod svinje eutanazirane 17 dana nakon operacije. Četiri do pet nedelja nakon operacije, broj ćelija u P-TEV (Sl.2B) izgledalo je da je jednako prirodnom tkivu (Sl.2A). Važno je da hiperplazija intime, glavna potencijalna komplikacija u ovom ispitivanju, nije primećena kod implantiranog P-TEV-a.
[0225] Imunohistohemijski okarakterisani su i uzorci vena. Kod svinja koje su eutanazirane dve nedelje nakon operacije, proksimalni, centralni i distalni delovi P-TEV-a su imali značajan broj ćelija, a CD31-pozitivne ćelije su se mogle identifikovati (Sl.3A-3D). Sl.3A prikazuje prirodnu šuplju venu proksimalno od anastomoza. Sl.3B-3D prikazuju proksimalno (Sl.3B), centralni (Sl.3C), i distalni (Sl.3D) delovi P-TEV. Strelice ukazuju na CD31-pozitivne ćelije.
[0226] Kod svinje eutanazirane 4-5 nedelja nakon operacije, proksimalni, centralni i distalni delovi P-TEV-a su imali sličnu ćelijsku gustinu kao prirodna šuplja vena, a lumen P-TEV-a je bio prekriven CD31-pozitivnim endotelnim slojem (Sl.4A-4D). Sl.4A-4D su serije imunohistograma koji pokazuju DAPI bojenje i CD31 imuno bojenje šuplje vene četiri nedelje nakon operacije. Sl.4A prikazuje prirodnu šuplju venu proksimalno od anastomoza. Sl.4B-4D prikazuju proksimalno (Sl.4B), centralni (Sl.4C), i distalni (Sl.
4D) delovi P-TEV. Strelice ukazuju na CD31-pozitivne ćelije.
[0227] Morfologija ćelija sličnih endotelu koje oblažu luminalnu površinu se praktično nije razlikovala od one prirodne šuplje vene (Sl.5A-5B). Sl.5A-5B je serija slika pri uvećanju od 40× koja prikazuje H&E bojenje prirodne šuplje vene (Sl.5A) i transplantaciju P-TEV (Sl.5B) četiri nedelje nakon operacije. Strelice pokazuju endotelne ćelije u prirodnom tkivu i ćelije sa morfologijom nalik na endotelne ćelije u P-TEV transplantaciji.
[0228] Ukratko, ovo in vivo ispitivanje sugeriše da je P-TEV siguran i izvodljiv za transplantaciju vene. Primer 2: Priprema fiziološkog perfuzionog rastvora:
[0229] 900 ml fiziološkog rastvora puferovanog Dulbekovim fosfatom (DPBS) sa kalcijumom i magnezijumom je neprekidno mešano na 60 rpm na sobnoj temperaturi. Polako je dodato 74 g humanog serumskog albumina nanošenjem praha na površinu tečnosti (da bi se izbeglo zgrušavanje) i mešano dok se potpuno ne rastvori. Penjenje je izbegnuto privremenim smanjenjem obrtaja. Zatim je u rastvor dodato 6,7 g dekstrana-40 i mešano dok se potpuno ne rastvori. pH je titrisan na 7,4 korišćenjem NaOH i konačna zapremina je podešena na 1000 ml korišćenjem DPBS sa kalcijumom i magnezijumom. Fiziološki perfuzioni rastvor se zatim sterilno filtrira korišćenjem sterilnog filtera koji se malo vezuje za proteine, alikvotnog dela od 25 ml u sterilnim epruvetama od 50 ml i čuva se na 2-8 °C do 12 meseci.
Primer 3: Priprema alternativnog fiziološkog rastvora za perfuziju (ne zahteva skup HSA):
[0230] 25 ml sterilne krvne plazme pacijenta stavljeno je u sterilnu epruvetu od 50 ml. Zatim je u plazmu dodato 1,5 ml 100g/L sterilno filtriranog osnovnog rastvora Dekstran-40 i rastvor je pažljivo mešan dok se potpuno ne pomeša. Sterilni fiziološki perfuzioni rastvor je čuvan na 2-8 °C do 7 dana.
Primer 4: Dodatne varijacije pripremljenog fiziološkog perfuzionog rastvora:
[0231] DPBS sa kalcijumom i magnezijumom koji sadrži 70 g/L HSA, 5 g/L dekstran-40 i 11 mmol/L glukoze
[0232] DPBS sa kalcijumom i magnezijumom koji sadrži 40 g/L HSA i 10 g/L dekstran-40
[0233] Ljudska krvna plazma koja sadrži dodatnih 30 g/L HSA i 5 g/L dekstran-40
[0234] Ljudska krvna plazma koja sadrži dodatnih 5 g/L dekstran-40 i ukupno 11 mmol/L glukoze [0235] DPBS sa kalcijumom i magnezijumom koji sadrži 70 g/L HSA, 5 g/L dekstran-60 i 11 mmol/L glukoze
Primer 5: Sastavi komercijalno dostupnih fizioloških perfuzionih rastvora:
[0236]
Primer 6: Priprema personalizovanog krvnog suda iz acelularne tubularne strukture pripremljene bioštampanjem
[0237] Primer 1 opisuje postupak pripreme personalizovanog krvnog suda korišćenjem decelularizovane tubularne strukture. Alternativno, personalizovani krvni sud se priprema od bioštampane acelularne tubularne strukture. Ukratko, bioštampana struktura za krvni sud se priprema na polimeru (prirodnom ili sintetičkom), koji je u obliku gela, sunđera, penaste forme, oblika flastera ili polutečnog/tečnog oblika. U ovom postupku, polimerna struktura se perfuzira punom krvlju ili punom krvlju razblaženom u rastvoru, na primer, suspenzijom, koja uključuje punu krv, za pripremu personalizovanog krvnog suda.
Primer 7: Implantacija personalizovanih krvnih sudova
[0238] Ispitanik kome je potreban transplantirani krvni sud je odabran, a personalizovani krvni sud pripremljen postupkom datim u Primerima 1 ili 2 predmetnog obelodanjenja se implantira/transplantira u ispitanika. Prati se prognoza ispitanika i oporavak nakon transplantacije.
[0239] Personalizovani krvni sud koji je ovde obelodanjen se koristi za lečenje različitih bolesti i poremećaja krvnih sudova, kao što su duboka venska tromboza (DVT), hronična venska insuficijencija (CVI), proširene vene, venske ulceracije (npr., venske ulceracije nogu) i rekurentni kancer nogu (npr., uzrokovan venskom hipertenzijom i dubokim venskim refluksom).
[0240] Konkretno, odabran je ispitanik koji ima bolest ili poremećaj krvnih sudova. Personalizovani krvni sud se ugrađuje ispitaniku hirurškim putem: uklanja se deo prirodnog krvnog suda koji je zahvaćen bolešću ili poremećajem; personalizovani krvni sud ili njegov funkcionalni segment se anastomozira na prirodni krvni sud, zamenjujući segment prirodnog krvnog suda koji je uklonjen. Hibridni krvni sud koji nastaje operacijom je funkcionalno sličan ili ekvivalentan prirodnom krvnom sudu i ublažava simptome uključujući tupi bol, težinu ili grčeve u nogama, svrab i peckanje, bol koji se pogoršava kada stojite, bol koji se poboljšava kada se noge podignu, oticanje nogu, crvenilo na površini nogu, promena boje kože oko zglobova, zadebljanje i otvrdnuće kože na nogama i skočnim zglobovima (lipodermatoskleroza), čirevi na nogama i skočnim zglobovima i rane koje sporo zarastaju na nogama ili skočnim zglobovima.
Primer 8
[0241] Proces recelularizacije/rekondicioniranja acelularne tubularne strukture za pripremu personalizovanog krvnog suda uključivao je mali uzorak pune krvi od pacijenta. U ovom primeru, proces recelularizacije/rekondicioniranja koji uključuje ćelijske, kao i nećelijske komponente (npr., trombocite, ćelije sa jezgrom, proteine, faktore rasta, signalne faktore, imunoglobuline) cele krvi se biraju ili obogaćuju za upotrebu u procesu. U jednom primeru, ćelijske kao i nećelijske komponente cele krvi su kombinovane sa punom krvlju. Alternativno, ćelijske kao i nećelijske komponente cele krvi se koriste umesto cele krvi u procesu recelularizacije/rekondicioniranja. Potonji proces se preduzima iz razloga vezanih za proces, i/ili radi optimizacije personalizacije krvnog suda. Obogaćivanje ili selekcija se vrši korišćenjem, na primer, centrifugiranja, gradijenta centrifugiranja, selektivne adhezije, hromatografije, filtracije ili sortiranja (FACS, MACS).
DRUGA OTELOTVORENJA
[0242] Treba razumeti da, iako je obelodanjenje opisao zajedno sa njegovim detaljnim opisom, prethodni opis ima za cilj da ilustruje, a ne ograničava obim obelodanjenja, koji je definisan obimom dodatih patentnih zahteva. Ostali aspekti, prednosti i modifikacije su u okviru sledećih patentnih zahteva. Sve ovde date definicije su uključene u svrhu razumevanja predmetnog predmeta i konstruisanja priloženih patentnih zahteva. Skraćenice koje se ovde koriste imaju svoje konvencionalno značenje u oblasti hemijske i biološke umetnosti.

Claims (20)

Patentni zahtevi
1. Postupak pripreme personalizovanog krvnog suda, koji obuhvata dovođenje u kontakt površine acelularne tubularne strukture sa suspenzijom koja sadrži uzorak pune krvi od ispitanika kome je potreban personalizovani krvni sud, pri čemu se uzorak pune krvi razblaži u fiziološkom rastvoru i pri čemu se kontakt vrši 3 do 14 dana.
2. Postupak prema patentnom zahtevu 1, gde populacija ćelija u uzorku pune krvi popunjava acelularnu tubularnu strukturu.
3. Postupak prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, gde uzorak cele krvi sadrži jedan ili više nećelijskih faktora, pri čemu jedan ili više nećelijskih faktora pune krvi popunjava strukturu, i pri čemu nećelijski faktori promovišu celularizaciju acelularne tubularne strukture i kompatibilnost suda sa domaćinom nakon presađivanja.
4. Postupak prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, gde suspenzija koja sadrži uzorak pune krvi dalje sadrži antitrombotički faktor.
5. Postupak prema patentnom zahtevu 4, gde antitrombotički faktor sadrži antikoagulantno sredstvo.
6. Postupak prema patentnom zahtevu 5, gde antikoagulantno sredstvo sadrži heparin ili dekstran.
7. Postupak prema patentnom zahtevu 6, gde je heparin prisutan u suspenziji koja sadrži uzorak pune krvi u koncentraciji od 0,5 IU/mL /- 10% do 150 IU/mL /- 10% na početku kontakta sa površinom acelularne tubularne strukture, opciono pri čemu je heparin u uzorku pune krvi prisutan u punom uzorku krvi u koncentraciji od 6,7 IU/mL /- 10% na početku kontakta sa površinom acelularne tubularne strukture.
8. Postupak prema patentnom zahtevu 6, gde je dekstran dekstran-40.
9. Postupak prema patentnom zahtevu 6, gde je dekstran prisutan u suspenziji koja sadrži uzorak pune krvi u koncentraciji od 1 g/L /- 10% do 55 g/L /- 10% na početku kontakta sa površinom acelularne tubularne strukture.
10. Postupak prema patentnom zahtevu 4, gde antitrombotičko sredstvo sadrži askorbinsku kiselinu.
11. Postupak prema patentnom zahtevu 10, gde je askorbinska kiselina prisutna u suspenziji koja sadrži uzorak cele krvi u koncentraciji od 0,2 µg/mL /- 10% do 200 µg/mL /- 10% na početku kontakta sa površinom acelularne tubularne strukture, opciono pri čemu je koncentracija askorbinske kiseline prisutna u suspenziji koja sadrži uzorak pune krvi u koncentraciji od 5 µg/mL /- 10% na početku kontakta sa površinom acelularne tubularne strukture.
12. Postupak prema patentnom zahtevu 4, gde antitrombotički faktor sadrži acetilsalicilnu kiselinu.
13. Postupak prema patentnom zahtevu 12, gde je acetilsalicilna kiselina prisutna u suspenziji koja sadrži uzorak pune krvi u koncentraciji od 0,2 µg/mL /- 10% do 200 µg/mL /- 10% na početku kontakta sa površinom acelularne tubularne strukture, opciono pri čemu je acetilsalicilna kiselina prisutna u suspenziji koja sadrži uzorak pune krvi u koncentraciji od 5 µg/mL /- 10% na početku kontakta sa površinom acelularne tubularne strukture.
14. Postupak prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, gde suspenzija koja sadrži uzorak pune krvi dalje sadrži jednak ili veći od prosečnog fiziološkog nivoa populacije faktora rasta izabranog iz grupe koju čine: faktor stimulacije granulocitno-makrofagnih kolonija (GM-CSF), interleukin (IL)-3, IL-4, neutrofin (NT)-6, plejotrofin (HB-GAM), midkin (MK), interferon inducibilni protein-10 (IP-10), faktor trombocita (PF)-4, monocitni hemotaktički protein-1 (MCP-1), RANTES (CCL-5, hemokin (C-C motiv) ligand 5), IL-8, IGF, faktor rasta fibroblasta (FGF)-1, FGF-2, FGF-3, FGF-4, FGF-5, FGF-6, FGF-7, FGF-8, FGF-9, transformacioni faktor rasta beta (TGF)-β, VEGF, faktor rasta izveden iz trombocita (PDGF)-A, PDGF-B, HB-EGF, faktor rasta hepatocita (HGF), faktor nekroze tumora (TNF)-α, faktor rasta sličan insulinu (IGF)-1, i bilo koja njihova kombinacija(e), poželjno pri čemu je faktor rasta faktor rasta fibroblasta (FGF)-2, opciono gde je FGF-2 ljudski FGF-2.
15. Postupak prema patentnom zahtevu 1, gde je kontakt u trajanju od 3 do 9 dana, i opciono, gde je kontakt u periodu od 4 do 9 dana.
16. Postupak prema bilo kom od prethodnih zahteva, gde je uzorak pune krvi razblažen u fiziološkom rastvoru za najmanje 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 100%, 110%, 120%, 130%, 140%, 150%, 160%, 170%, 180%, 190%, ili 200%, poželjno pri čemu je uzorak cele krvi razblažen 1:1.
17. Postupak prema patentnom zahtevu 14, gde se faktor rasta dodaje kao izolovani, prečišćeni i/ili sintetički molekul.
18. Postupak prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, gde postupak dalje obuhvata praćenje koncentracije hranljive materije u suspenziji, pri čemu je hranljivi sastojak D-glukoza, pri čemu se koncentracija D-glukoze prilagođava kontinuirano ili redovno da bi se održala koncentracija D-glukoze na 3 mmol/L /- 10%/L do 11 mmol, poželjno je održavati koncentraciju D-glukoze na 3 mmol/L /- 10% do 11 mmol, poželjno pri čemu se koncentracija D-glukoze održava na 5 mmol/L /-10% do 8 mmol/L /- 10%.
19. Postupak prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, gde se acelularna tubularna struktura kontinuirano perfuzira suspenzijom, opciono, pri čemu se acelularna tubularna struktura perfuzira brzinom od 0,1 mL /- 10% do 50 mL /- 10% po minutu, opciono pri brzini od 2 mL / - 10% u minuti, opciono pri čemu je struktura perfundirana sa zatvorenom recirkulacijom suspenzije, opciono pri čemu je kontinuirani kontakt perfuzija sprovedena korišćenjem bioreaktora.
20. Postupak prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, gde je acelularna tubularna struktura u kontaktu sa suspenzijom koja sadrži uzorak pune krvi, a postupak dalje obuhvata praćenje većeg broja parametara okoline i/ili koncentracije hranljive materije tokom pripreme personalizovanog krvnog suda, koji dalje obuhvata prilagođavanje mnoštva parametara okoline, pri čemu mnoštvo parametara okoline obuhvata temperaturu, pH, kiseonik i/il CO2.
RS20230591A 2018-08-03 2019-08-02 Postupci pripreme personalizovanih krvnih sudova RS64381B1 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201862714200P 2018-08-03 2018-08-03
PCT/IB2019/056621 WO2020026212A2 (en) 2018-08-03 2019-08-02 Methods of preparing personalized blood vessels
EP19779967.9A EP3830243B1 (en) 2018-08-03 2019-08-02 Methods of preparing personalized blood vessels

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS64381B1 true RS64381B1 (sr) 2023-08-31

Family

ID=68104680

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20230591A RS64381B1 (sr) 2018-08-03 2019-08-02 Postupci pripreme personalizovanih krvnih sudova

Country Status (23)

Country Link
US (3) US11471567B2 (sr)
EP (2) EP3830243B1 (sr)
JP (2) JP7208393B2 (sr)
KR (1) KR102530336B1 (sr)
CN (1) CN112805364A (sr)
AU (1) AU2019315049B2 (sr)
BR (1) BR112021001541B1 (sr)
CA (1) CA3107918A1 (sr)
DK (1) DK3830243T3 (sr)
ES (2) ES2988106T3 (sr)
FI (1) FI3830243T3 (sr)
HR (1) HRP20230834T1 (sr)
HU (1) HUE062715T2 (sr)
LT (1) LT3830243T (sr)
MX (1) MX2021001184A (sr)
PL (1) PL3830243T3 (sr)
PT (1) PT3830243T (sr)
RS (1) RS64381B1 (sr)
SG (2) SG11202101121YA (sr)
SI (1) SI3830243T1 (sr)
SM (1) SMT202300331T1 (sr)
WO (1) WO2020026212A2 (sr)
ZA (1) ZA202100888B (sr)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2021336557A1 (en) * 2020-09-04 2023-05-18 Annoviant, Llc Systems and methods for processing tissue
CN113855859A (zh) * 2021-05-28 2021-12-31 首都医科大学宣武医院 一种由脱细胞血管基质构建的可促进快速内皮化的小口径组织工程血管
KR102731728B1 (ko) * 2022-02-21 2024-11-18 한양대학교 에리카산학협력단 혈관 모델 생성 방법
CN115568441B (zh) * 2022-10-11 2025-12-12 山西省中医药研究院（山西省中医院） 一种化疗性静脉炎大鼠模型的构建方法
EP4683685A1 (en) 2023-03-21 2026-01-28 VeriGraft AB Nerve grafts for peripheral nerve regeneration

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH02274244A (ja) * 1989-04-14 1990-11-08 Yasunori Morohoshi 人工血管およびその製造法
US6376244B1 (en) 1999-12-29 2002-04-23 Children's Medical Center Corporation Methods and compositions for organ decellularization
US6689161B2 (en) * 2000-04-28 2004-02-10 Baylor College Of Medicine Decellularized vascular prostheses resistant to thrombus occlusion and immunologic rejection
ES2263674T5 (es) 2000-11-03 2011-04-01 Xvivo Perfusion Ab Disolución de evaluación y conservación .
NZ556610A (en) 2004-12-24 2010-11-26 Celxcel Pty Ltd An implantable biomaterial and a method of producing same
US20130323708A1 (en) 2009-07-01 2013-12-05 Massachusetts Institute Of Technology Isolated adult cells, artificial organs, rehabilitated organs, research tools, organ encasements, organ perfusion systems, and methods for preparing and utilizing the same
DK2782995T3 (en) 2012-03-16 2017-02-20 Novahep Ab BIOTECHNOLOGICAL MANUFACTURED ALLOGENT BLOOD
BR112016018452A2 (pt) 2014-02-12 2018-06-26 Toray Industries vaso sanguíneo artificial.
KR20180029274A (ko) 2014-05-27 2018-03-20 노바헵 아브 생체공학적 동종성 판막
JPWO2016068292A1 (ja) 2014-10-31 2017-08-17 富士フイルム株式会社 管状構造物、管状構造物を製造するための装置、及び管状構造物の製造方法
WO2016100869A1 (en) 2014-12-19 2016-06-23 Angiocrine Bioscience, Inc. Biocompatible implants comprising engineered endothelial cells
CN109715140B (zh) 2016-06-15 2022-06-24 通用医疗公司 使用生物正交反应进行的生物材料的代谢标记和分子增强

Also Published As

Publication number Publication date
JP2021532962A (ja) 2021-12-02
ZA202100888B (en) 2023-10-25
WO2020026212A2 (en) 2020-02-06
HRP20230834T1 (hr) 2023-11-10
US10980916B2 (en) 2021-04-20
JP2023052212A (ja) 2023-04-11
CN112805364A (zh) 2021-05-14
US20200038556A1 (en) 2020-02-06
US20230093436A1 (en) 2023-03-23
US11471567B2 (en) 2022-10-18
PL3830243T3 (pl) 2023-10-16
US12343451B2 (en) 2025-07-01
DK3830243T3 (da) 2023-08-07
EP3830243B1 (en) 2023-06-07
AU2019315049B2 (en) 2024-06-13
MX2021001184A (es) 2021-07-15
EP4194541A1 (en) 2023-06-14
EP3830243A2 (en) 2021-06-09
KR20210041581A (ko) 2021-04-15
CA3107918A1 (en) 2020-02-06
SI3830243T1 (sl) 2023-10-30
EP4194541B1 (en) 2024-06-26
BR112021001541A2 (pt) 2021-04-20
LT3830243T (lt) 2023-08-25
FI3830243T3 (fi) 2023-08-10
BR112021001541B1 (pt) 2023-05-09
SG10202112210SA (en) 2021-12-30
ES2953744T3 (es) 2023-11-15
US20200038555A1 (en) 2020-02-06
JP7303952B2 (ja) 2023-07-05
SG11202101121YA (en) 2021-03-30
EP4194541C0 (en) 2024-06-26
HUE062715T2 (hu) 2023-11-28
KR102530336B1 (ko) 2023-05-10
WO2020026212A3 (en) 2020-04-09
JP7208393B2 (ja) 2023-01-18
SMT202300331T1 (it) 2023-11-13
PT3830243T (pt) 2023-08-31
AU2019315049A1 (en) 2021-03-18
ES2988106T3 (es) 2024-11-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US12343451B2 (en) Methods of preparing personalized blood vessels
JP2017195900A (ja) 臓器および組織を脱細胞化および再細胞化する方法
JP2019088910A (ja) 臓器および組織の脱細胞化および再細胞化
EP4069262A1 (en) Methods of decellularization and recellularization of organs and portions of organs
JP2022526727A (ja) 摘出臓器の改善された脱細胞化
JP2017128606A (ja) 生物工学で作製された同種異系弁
HK40091846A (en) Methods of preparing personalized blood vessels
HK40091846B (en) Methods of preparing personalized blood vessels
Harpa et al. Pulmonary heart valve replacement using stabilized acellular xenogeneic scaffolds; effects of seeding with autologous stem cells
BR122023002098B1 (pt) Métodos para preparar vasos sanguíneos personalizados
Palek et al. Decellularized porcine vena cava grafts are fully repopulated after orthotopic implantation
HK40051978B (en) Methods of preparing personalized blood vessels
Ott et al. Tissue-derived matrices
Palek et al. Discover Applied Sciences
He Tissue engineering of the kidney using a whole organ decellularisation approach
JP2011130989A (ja) 抗血栓性修飾剤、医療用具、及び、多孔質コラーゲン
JP6515429B2 (ja) 人工血管、および、人工血管の製造方法