RS63243B1 - Lečenje parkinsonove bolesti - Google Patents

Description

Opis

SRODNE PRIJAVE

[0001] Ova prijava ima prioritet indijske patentne prijave br. IN 201621019087 podnete 02.06.2016. i IN 201621019185 podnete 02.06.2016.

OBLAST PRONALASKA

[0002] Pronalazak se odnosi na jedinjenje Formule I

pri čemu je jedinjenje formule I izabrano od (5-{-[N'-(2-hloro-6-metilbenzoil)hidrazinkarbonil]-2-metil-fenil-etinil}-piridin-2-il)amida ciklopropankarboksilne kiseline ili N'-(2-hloro-6-metilbenzoil)-4-metil-3-[2-(3-hinolil)etinil]-benzohidrazida ili njegove farmaceutski prihvatljive soli za upotrebu u lečenju ili prevenciji Parkinsonove bolesti.

STANJE TEHNIKE

[0003] c-Abl je nereceptorska protein tirozin kinaza koja je uključena u različite ćelijske procese koji uključuju regulaciju preživljavanja, rasta i pokretljivosti ćelija. Inhibitori c-Abl kinaze kao što je imatinib (Gleevec<®>), nilotinib (Tasigna<®>), dasatinib (Sprycel<®>) i ponatinib (Iclusig<®>) su razvijeni i plasirani na tržište za kliničku upotrebu u lečenju hronične mijeloidne leukemije.

[0004] Nedavne studije su pokazale da c-Abl igra važnu ulogu u smrti neuronskih ćelija izazvanoj oksidativnim stresom (Wu et al., Cell Death Differ., 2016; 23:542-552). Objavljeno je da je c-Abl uključen u Parkinsonovu bolest (Gonfloni et al., Int. J. Cell Biol., 2012; 2012:1-7). Takođe, poznato je da se c-Abl aktivira dopaminergičkim stresom i dopaminergičkim neurotoksinima, tj. 1-metil-4-fenil-1,2,3,6-tetrahidropiridin (MPTP, enzimski pretvoren in vivo u svoj aktivni oblik MPP<+>) izaziva tirozinsku fosforilaciju parkina što dovodi do gubitka aktivnosti parkinove E3 ligaze. Ovo dovodi do akumulacije različitih supstrata parkina i na kraju do smrti dopaminergičkih neurona (Ko et al., PNAS, 2010; 107:16691-16696).

[0005] Parkinsonova bolest (PD) je uobičajena neurodegenerativna bolest koju karakteriše akumulacija proteina u intracelularnim inkluzijama označenim kao Levijeva tela i Levijevi neuritis i kasniji gubitak dopaminergičkih neurona. Retke porodične mutacije pružile su uvid u ovu hroničnu, progresivnu neurodegenerativnu bolest poput mutacije u α-sinukleinu i LRRK2 uzrokuju autozomno dominantnu PD, dok mutacije u DJ-1, PINK1 i parkin rezultira u autozomno-recesivnoj PD. Parkin je E3 ubikvitin ligaza, a smatra se da porodične mutacije narušavaju aktivnost E3 ligaze parkina (Ko et al., PNAS, 2010; 107:16691-16696).

[0006] Pokazalo se da c-Abl reguliše razlaganje dva proteina uključena u patogenezu PD, tj. parkin i α-sinuklein (Mahul-Mellier et al, Hum. Mol. Genet., 2014; 23:2858-2879). c-Abl fosforiliše parkin na tirozinu 143. Ova fosforilacija inhibira aktivnost parkinove E3 ubikvitin ligaze, što dovodi do akumulacije AIMP2 i FBP1 (suprstrati parkina) i gubitka parkinove citoprotektivne funkcije što dovodi do smrti ćelije (Ko et al., PNAS, 2010; 107:16691-16696; Imam et al., J. Neurosci., 2011; 31:157-163). Dalje, c-Abl reguliše klirens α-sinukleina, sinaptičkog proteina koji je snažno umešan u patogenezu PD. Opisan je dvosmerni odnos in vivo između α-sinukleina i c-Abl pri čemu povećanje ekspresije α-sinukleina olakšava njegovu fosforilaciju i naknadnu aktivaciju c-Abl. Suprotno tome, povećanje ekspresije i aktivacije c-Abl dovodi do akumulacije i agregacije α-sinukleina, što sugeriše da bi inhibicija c-Abl mogla predstavljati održivu strategiju za zaštitu dopaminergičkih neurona od akumulirane toksičnosti αsinukleina u PD (Hebron et al., Hum. Mol. Genet., 2013; 22:3315-3328; Hebron et al, Autophagy, 2013; 9:1249-1250).

[0007] Poznato je da inhibitori c-Abl kao što je nilotinib prelaze krvno-moždanu barijeru i štite dopaminergičke neurone u mišjem modelu PD indukovane sa 1-metil-4-fenil-1,2,3,6-tetrahidropiridinom (ovde označen kao MPTP) (Karuppagounder et al., Sci. Rep.2014; 4:4874). Pokazalo se da nilotinib povećava klirens α-sinukleina putem autofagije i štiti od gubitka dopaminergičkih neurona izazvanog akumulacijom α-sinukleina u ovom mišjem modelu PD (Hebron et al., Hum. Mol. Genet., 2013; 22:3315-3328; Imam et al., J. Neurosci., 2011; 31:157-163). Pored toga, US20150087653 otkriva postupak lečenja neurodegenerativnih bolesti koji sadrži primenu inhibitora tirozin kinaze kao što je nilotinib. Međutim, nilotinib ima nekoliko velikih neželjenih efekata povezanih sa lekovima. USFDA je izdala upozorenje u kutiji za Tasignu<®>kapsule jer je njegovo lečenje povezano sa potencijalno teškim srčanim nuspojavama (produžavanje QT intervala) i iznenadnom smrću pacijenata. Poznato je da dasatinib izaziva pleuralni izliv i krvarenje. Ponatinib je takođe povezan sa teškim neželjenim efektima koji uključuju tromboemboliju i vaskularnu okluziju. Imatinib nije snažan inhibitor Abl kinaze. Štaviše, i imatinib i dasatinib koji su supstrat P-glikoproteina (p-gp), pokazuju slabu koncentraciju u mozgu. Dakle, postoji potreba za potentnim inhibitorom Abl kinaze koji može preći krvno-moždanu barijeru i koji ne izaziva kardiovaskularne neželjene efekte.

SUŠTINA PRONALASKA

[0008] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje Formule I,

jedinjenje Formule I je odabrano od (5-{5-[N'-(2-hloro-6-metilbenzoil)hidrazinkarbonil]-2-metilfeniletinil}-piridin-2-il)amida ciklopropankarboksilne kiseline, u daljem tekstu označeno kao jedinjenje formule I.b, ili N'-(2-hloro-6-metilbenzoil)-4-metil-3-[2-(3-hinolil)etinil]-benzohidrazida, u daljem tekstu jedinjenje formule I.a, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, za upotrebu u lečenju ili prevenciji Parkinsonove bolesti.

OPIS SLIKA

[0009]

Sl. 1. Mikrografije iz koronalnih preseka koje prikazuju neurone pozitivne na tirozin hidroksilazu (TH), koji pokazuju prevenciju neurodegeneracije jedinjenjem Formule I.a.

Sl.2. Procenat površine TH-pozitivnih neurona pri primeni jedinjenja Formule I.a.

Sl.3. Integrisana gustina TH-imunoreaktivnosti pri primeni jedinjenja Formule I.a.

Sl.4. Mikrografije iz koronalnih preseka koje pokazuju neurone pozitivne na tirozin hidroksilazu (TH), koje pokazuju prevenciju neurodegeneracije jedinjenjem formule I.b.

Sl.5. Procenat površine TH-pozitivnih neurona pri primeni jedinjenja formule I.b.

Sl.6. Integrisana gustina TH-imunoreaktivnosti pri primeni jedinjenja Formule I.b.

DETALJAN OPIS PRONALASKA

[0010] U jednom aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I,

jedinjenje formule I je izabrano od (5-{5-[N'-(2-hloro-6-metilbenzoil)hidrazinkarbonil]-2-metilfeniletinil}-piridin-2-il)amida ciklopropankarboksilne kiseline ili N'-(2-hloro-6-metilbenzoil)-4-metil-3-[2-(3-hinolil)etinil]-benzohidrazid, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, za upotrebu u lečenju ili prevenciji Parkinsonove bolesti.

[0011] Pogodne farmaceutski prihvatljive soli jedinjenja pronalaska mogu biti soli neorganskih kiselina kao što su hlorovodonična kiselina, bromovodonična kiselina, fosforna kiselina i slično ili organskih kiselina kao što su, na primer, sirćetna kiselina, benzensulfonska kiselina, metansulfonska kiselina, benzojeva kiselina kiselina, limunska kiselina, glikolna kiselina, mlečna kiselina, fumarna kiselina, ćilibarna kiselina, adipinska kiselina, pimelinska kiselina, suberična kiselina, azelainska kiselina, jabučna kiselina, vinska kiselina ili aminokiseline, kao što su glutaminska kiselina ili asparaginska kiselina i slično. Jedan ili više atoma vodonika jedinjenja formule I mogu biti deuterisani, tj. supstituisani sa atomom deuterijuma.

[0012] WIPO publikacija WO2012098416 (publikacija '416) otkriva markuš grupu jedinjenja aktivnih kao inhibitori c-Abl kinaze i njihovu korist za lečenje kancera kao što je hronična mijelogena leukemija (CML). Jedinjenja formule I ovog pronalaska mogu se dobiti postupcima opisanim u WO2012098416 i WO2016185490.

[0013] Pronalazači su otkrili da su jedinjenja formule I ovog pronalaska moćni inhibitori Abl kinaze i da povoljno prelaze krvno-moždanu barijeru, što efektivno rezultira visokim odnosom koncentracije u mozgu prema plazmi za jedinjenje formule I i visokim terapijskim indeksom. Naročito, pronalazači su otkrili da je jedinjenje formule I, u terapeutski efektivnoj dozi, lišeno kardiovaskularnih neželjenih efekata kada se testira na njegov in vitro efekat na hERG kanal i njegov in vivo uticaj na EKG parametre kao što su QT interval, QTc interval, QTcf interval i puls kod svesnih pasa bigl i zamorčeta. Utvrđeno je da je jedinjenje formule I bezbedno jer nije pokazalo nikakav neprikladan efekat na EKG parametre i puls kao što je ovde opisano u primerima.

[0014] Jedinjenje formule I može se primenjivati oralno u obliku pogodnog oblika doze. Pogodan oblik doze može uključivati tabletu, pelete, kapsule, kesice, pelete u kesici, pelete u kapsuli, prah, granule i slično. Jedinjenje formule I može biti formulisano u oralnom obliku doze koji može uključivati farmaceutski prihvatljive ekscipijense koji su opštepoznati stručnjacima u ovoj oblasti. Remington's Pharmaceutical Sciences, šesnaesto izdanje, E.W. Martin (Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1980) opisuje farmaceutski prihvatljive nosače koji se mogu koristiti za pripremu odgovarajućeg oblika doze.

[0015] Sledeći primeri služe da ilustruju pronalazak bez ograničavanja pronalaska u njegovom obimu.

PRIMER 1

Inhibicija Abl kinaze

[0016] U konačnoj zapremini reakcije od 25 µL, Abl (humani) (5-10 mU) se inkubira sa 8 mM MOPS pH 7,0, 0,2 mM EDTA, 50 µM EAIYAAPFAKKK, 10 mM Mg(OAc)2i [γ-<33>P-ATP] [specifična aktivnost pribl. 500 cpm/pmol, koncentracija po potrebi). Reakcija se pokreće dodavanjem mešavine MgATP. Posle inkubacije od 40 minuta na sobnoj temperaturi, reakcija se zaustavlja dodavanjem 5 µL 3% rastvora fosforne kiseline. 10 µL reakcije se zatim nanese na P30 filter prostirku i ispere tri puta po 5 minuta u 75 mM fosforne kiseline i jednom u metanolu pre sušenja i scintilacionog brojanja.

[0017] Rezultati za reprezentativna jedinjenja Formule I dati su u Tabeli-2.

Tabela 2: Uporedne potencije inhibitora tirozin kinaze u c-Abl

PRIMER 2

Farmakokinetičke studije mozga/plazme

[0018] Da bi se utvrdilo da li jedinjenje Formule I.a prelazi krvno-moždanu barijeru, na miševe C57BL6 je oralno primenjivano 30 mg/kg jedinjenja Formule I.a, 100 mg/kg nilotiniba ili 30 mg/kg dasatiniba. U vremenskim tačkama od 1, 4 i 8 sati nakon tretmana, miševi su anestezirani izofluranom i 0,4 mL krvi je izvađeno iz retro-orbitalnog pleksusa u ependorfove epruvete koje sadrže 8 µL natrijum heparina kao antikoagulansa (100 IU/ml) i prebačene u posude za led. Uzorci krvi su odmah centrifugirani 7 minuta na 8500 obrtaja/min, 4°C. Plazma je odvojena u prethodno obeležene ependorf epruvete i čuvana na -70°C do dalje analize. Odmah nakon toga, miševi su žrtvovani, ceo mozak je uklonjen i ispran ledeno hladnim fosfatnim puferom (PBS) da bi se uklonila strana krv i osušen upijanjem. Uzorci moždanog tkiva su izmereni i homogenizovani u 1:2 zapremine PBS pomoću homogenizatora tkiva i čuvani u obeleženim bočicama na -70°C do dalje analize. Koncentracije jedinjenja Formule I.a u mozgu i plazmi su određene korišćenjem LC-MS tehnike.

[0019] Utvrđeno je da je odnos mozga prema plazmi značajno veći za jedinjenje Formule I.a u poređenju sa onim za nilotinib ili dasatinib (videti tabelu 3).

Tabela 3: Koncentracija jedinjenja u mozgu i plazmi.

PRIMER 3

Efikasnost u životinjskom modelu Parkinsonove bolesti za jedinjenje Formule I.a

[0020] Na C57BL/6 miševe (6-8 nedelja starosti, 25-30 g telesne težine) oralno su primenjivani vehikulum, jedinjenja Formule I.a (10 ili 30 mg/kg, jednom dnevno) tokom 7 dana. Na dan 7, ove životinje su primile četiri intraperitonealne injekcije neurotoksina, 1-metil-4-fenil-1,2,3,6-tetrahidropiridina (MPTP-HCl; 17 mg/kg slobodne baze; Sigma) u fiziološkom rastvoru u intervalima od 2 časa. Dnevno doziranje jedinjenja je nastavljeno još 7 dodatnih dana nakon poslednje injekcije MPTP. Ukratko, jedinjenje je primenjenivano 6 dana pre primene MPTP, na dan primene MPTP i 7 dana nakon primene MPTP. Sve životinje su žrtvovane 7 dana nakon primene MPTP i moždana tkiva su obrađena za imunohistohemijsku procenu. Standardna metoda avidin-biotina (Benno et al., Brain Res., 1982; 246:225-236) je korišćena za imunohistohemijsku detekciju tirozin hidroksilaze (TH). U početku, mozgovi su isečeni na nivou substantia nigra pars compacta (SNPc) pomoću kriostata i postavljeni na staklene pločice. Pločice sa isečcima mozga su ispirane 3x5 minuta u 0,1 M PBS. Isečci su prvo inkubirani 30 minuta na sobnoj temperaturi sa normalnim blokirajućim serumom u 0,1 M PBS sa 0,3% Triton X-100 i još 2 sata sa zečjim poliklonalnim antitelom na mišju tirozin hidroksilazu (Invitrogen) razblaženim 1:1000 u 0,1 M PBS sa normalnim blokirajućim serumom. Pločice sa isečcima su dalje ispirane 3x5 minuta u 0,1 M PBS i inkubirane 1 čas na sobnoj temperaturi sa biotinilovanim anti-zečjim antitelom (Vectastain<®>ABC komplet). Isečci su ispirani 3x5 minuta u 0,1 M PBS i inkubirani 1 čas na sobnoj temperaturi sa A i B rastvorima (Vectastain<®>ABC komplet) razblažen 1:50 u 0,1 M PBS. Posle 1 časa isečci su ispirani 3x5 minuta u 0,1 M PBS i inkubirani u 3,3'-diaminobenzidinu (DAB)/H2O2rastvoru (Sigma) približno 5-8 minuta (razvojni postupak je proveren pod mikroskopom za optimalan odnos signala-prema-šumu). Isečci su prvo ispirani 2x5 minuta u 0,1 M PBS i zatim 3x5 minuta u Milli-Q vodi. Pločice su prekrivene pokrovnom pločicom u rastvoru glicerola-želatina i držane na sobnoj temperaturi preko noći radi sušenja nakon čega su slike obojenih isečaka mozga snimljene pomoću kamere pričvršćene za mikroskop i analizirane pomoću NIH ImageJ<®>softvera (NIH, Bethesda, MD). Slike su analizirane pretvaranjem u 8-bitnu rezoluciju i optimalnu osvetljenost/kontrast. Pozadinski i pseudo signali na pojedinačnim slikama su uklonjeni i izmerena je površina pokrivena ćelijskim telima i vlaknima. Izračunat je procenat površine u poređenju sa ukupnom površinom slike i integrisanom gustinom. Dobijeni rezultati su upoređivani za bilo koju međugrupnu ili unutargrupnu varijaciju i statističku značajnost koristeći GraphPad Prism<®>6.0. Oralna primena jedinjenja Formule I.a značajno je sprečila neurodegeneraciju indukovanu MPTP, što se vidi iz mikrografija iz koronalnih isečaka koji pokazuju TH-pozitivne neurone (Sl. 1), određivanje procentualne površine TH-pozitivnih neurona (Sl.2) i integrisanu gustinu TH-imunoreaktivnosti (Sl. 3)

PRIMER 4

Efikasnost u životinjskom modelu Parkinsonove bolesti za jedinjenje formule I.b

[0021] Efikasnost jedinjenja Formule I.b za lečenje Parkinsonove bolesti je testirana istim postupkom kao što je opisano za jedinjenje Formule I.a u Primeru 3 iznad.

[0022] Dobijeni rezultati su upoređeni za bilo koju međugrupnu ili unutargrupnu varijaciju i statističku značajnost koristeći GraphPad Prism<®>6.0. Oralna primena jedinjenja formule I.b značajno je sprečila neurodegeneraciju izazvanu MPTP kao što se vidi iz mikrografija koronalnih isečaka koji pokazuju TH-pozitivne neurone (sl. 4), određivanje procentualne površine TH-pozitivnih neurona (sl.5) i integrisanu gustinu TH-imunoreaktivnosti (sl.6)

PRIMER 5

Elektrofiziološki postupci - Efekat na hERG K<+>kanal

[0023] Jedinjenje Formule I.a i I.b je testirano na kardiovaskularnu bezbednost u in vitro testu za određivanje inhibicije hERG K<+>kanala. Jedinjenja Formule I.a i I.b nisu pokazala nikakvu značajnu inhibiciju hERG struje u ispitivanoj koncentraciji.

[0024] Ispitivan je in vitro efekat jedinjenja Formule I.a i I.b na jonske struje u humanim embrionalnim ćelijama bubrega (HEK293) koje stabilno eksprimiraju humani „ether-a-go-go“-srodan gen (hERG). Dve koncentracije jedinjenja Formule I.a i I.b (1 i 10 µM) su testirane blizu fiziološke temperature.

[0025] Ćelije su prebačene u komoru za snimanje i superfuzionisane sa kontrolnim rastvorom nosača (HEPES-puferovani fiziološki rastvor 1 % dimetilsulfoksid 1 % goveđi serum albumin). Rastvor mikropipeta za snimanje „patch clamp“ cele ćelije sastavljen je od: kalijum aspartata, 130 mM; MgCl2, 5 mM; EGTA, 5 mM; ATP, 4 mM; HEPES, 10 mM; pH je podešen do 7,2 sa 10N KOH. Rastvor za mikropipete je pripremljen u serijama, podeljen na alikvote, čuvan zamrznut i sveža alikvota je odmrznuta svakog dana. Snimanje je obavljeno na temperaturi od 33 do 35°C korišćenjem kombinacije „in-line“ predgrejača rastvora, grejača komore i regulatora temperature povratne sprege. Temperatura je merena korišćenjem termistorske sonde u komori za snimanje. Mikropipete za snimanje „patch clamp“ napravljene su od staklenih kapilarnih cevi korišćenjem izvlakača za mikropipete P-97 (Sutter Instruments, Novato, Kalifornija). Za snimanje cele ćelije korišćeno je komercijalno pojačalo za „patch clamp“. Pre digitalizacije, zapisi struje su bili niskopropusni filtrirani na jednoj petini frekvencije uzorkovanja.

[0026] Ćelije koje stabilno eksprimiraju hERG držane su na -80 mV. Početak i inhibicija hERG kalijumove struje u stabilnom stanju zbog testiranih jedinjenja (Formula I.a i I.b) mereni su korišćenjem šablona impulsa sa fiksnim amplitudama (prepuls kondicioniranja 20 mV tokom 1 s; repolarizujuća testna rampa na -80 mV (-0,5 V) /s) ponavlja se u intervalima od 5 s). Svaki snimak se završavao konačnom primenom supra-maksimalne koncentracije referentne supstance (E-4031, 500 nM) da bi se procenio doprinos endogenih struja. Preostala neinhibirana struja je van mreže digitalno oduzeta od podataka da bi se odredila potencija test jedinjenja za inhibiciju hERG.

[0027] Jedinjenje Formule I.a inhibira hERG struju za (srednja vrednost ± SEM) 2,1 ± 0,4 % pri 1 µM (n = 3) i 9,7 ± 0,4 % pri 10 µM (n = 3) u poređenju sa 1,0 ± 0,6 % (n = 3) u kontroli vehikuluma (videti tabelu 4). Koncentracije jedinjenja Formule I.a veće od 10 µM nisu testirane zbog granice rastvorljivosti jedinjenja u kontroli vehikuluma. Pod sličnim uslovima, pozitivna kontrola (terfenadin, 60 nM) inhibirala je hERG kalijumovu struju za (srednja vrednost ± SD; n = 2) 82,8 ± 1,2 %, potvrđujući blagi efekat jedinjenja Formule I.a u njegovoj veoma visokoj koncentraciji u hERG K<+>kanalu. Kod poređenja, nilotinib pokazuje skoro 90% inhibicije pri koncentraciji od 1 µM (Tabela 5).

Tabela 4: Srednji procenat inhibicije hERG struje pri svakoj koncentraciji jedinjenja

Formule I.a i I.b.

Tabela 5: procenat inhibicije hERG struje nilotinibom<#>

PRIMER 6

Efekat jedinjenja formule I.a na QT, QTcintervale i puls kod svesnih pasa bigl

[0028] Jedinjenje Formule I.a je podvrgnuto in vivo testu za određivanje njegovog efekta na QT,

1

QTcb& QTcfintervale i puls kod svesnih pasa bigl.

[0029] Jedinjenje Formule I.a je primenjivano peroralnim (p.o.) putem u tri nivoa doze: 5, 15 i 30 mg/kg kod svesnih telemetrisanih mužjaka i ženki pasa bigl. Povraćanje se javilo kod dve životinje (1 mužjak i 1 ženka) tretirane sa grupom doze od 30 mg/kg jedinjenja Formule I.a 14 minuta nakon doziranja. Dakle, grupa tretirana dozom od 30 mg/kg nije uzeta u obzir za analizu podataka. Nije primećeno povraćanje sa dozama od 5 i 15 mg/kg.

[0030] Merenje EKG parametara (QT interval, QTcbinterval, QTcfinterval) i pulsa su izvođeni i beleženi u periodu od 2 sata pre primene leka (osnovna vrednost), i kontinuirano do 24 sata nakon primene. Svaka životinja je primila i vehikulum (placebo) i tri različite doze jedinjenja Formule I.a u različitim danima u latiničnom kvadratnom dizajnu, sa periodom ispiranja od minimum 96 sati. Posebnog dana, izvršeno je jedno dodatno oralno doziranje jedinjenja Formule I.a da bi se procenile koncentracije jedinjenja Formule I.a u plazmi u različitim vremenskim tačkama, da bi se izveli farmakokinetički (PK) parametri.

[0031] Podaci o EKG parametrima (QT interval, QTcbinterval, QTcfinterval) i puls su statistički upoređeni na sledeći način: Podaci placebo grupe na 0,5, 1, 1,5, 2, 3, 4, 5, 6, 8, 12 i 24 časa su upoređeni sa osnovnim podacima za istu grupa. Podaci različitih grupa tretiranih jedinjenjem Formule I.a su upoređeni sa odgovarajućim podacima placebo grupe. Analiza EKG zasnovana na objedinjenim podacima mužjaka i ženki pasa pokazala je da u poređenju sa početnom linijom, placebo tretman nije imao statistički značajan efekat ni na jedan od EKG parametara (QT interval, QTcbinterval, QTcfinterval) i puls. Jedinjenje formule I.a u dozama od 5 i 15 mg/kg nije imalo efekta na trajanja QT, QTcb, QTcfu poređenju sa placebom. Pored toga, drugi parametar kao što je puls ostao je nepromenjen.

[0032] PK analiza je pokazala sistemsko izlaganje jedinjenja Formule I.a u zavisnosti od doze kod životinja na koje su primenjivane različite doze jedinjenja Formule I.a. AUC0-infbio je u opsegu od 1925 do 4824, 6776 do 12756 i 25927 do 46749 h×ng/mL sa dozama od 5, 15 i 30 mg/kg jedinjenja Formule I.a, respektivno. Cmaxbio je u opsegu od 1218 do 2033, 2723 do 5323 i 9825 do 9967 ng/mL sa dozama od 5, 15 i 30 mg/kg jedinjenja Formule I.a, respektivno.

[0033] Rezultati ove studije su pokazali da jednokratna oralna primena jedinjenja Formule I.a do doze od 15 mg/kg nema efekta na kardiovaskularne funkcije kod svesnih pasa bigl. Nije bilo promene u EKG morfologiji ni na jednom nivou doze jedinjenja Formule I.a. Nije bilo razlika između polova u efektu lečenja na EKG parametre i puls.

PRIMER 7

Efekat jedinjenja formule I.b na QT, QTc intervale i puls kod anesteziranog zamorčeta

[0034] Efekat jedinjenja formule I.b na QT, QTc intervale i puls je proučavan na anesteziranom zamorčetu.

[0035] Mužjaci Dunkin-Hartley zamorčića telesne težine 300-400 g anestezirani su intraperitonealnom injekcijom uretana (1,5 g/kg). Urađena je traheotomija i životinji je dozvoljeno da spontano diše tokom eksperimenta. Leva jugularna vena je kateterizovana korišćenjem polietilenskog katetera napunjenog heparinizovanim fiziološkim rastvorom (100 IU/mL) za primenu leka. Elektrode su postavljene u poziciju odvoda II i snimljen je osnovni EKG.

[0036] Za različite životinje, prema telesnoj težini, doze jedinjenja Formule I.b su izmerene i pripremljene u 0,5 mL DMSO i primenjene putem spore intravenske infuzije primenjene tokom perioda od 10 minuta. EKG su snimljeni tokom i nakon završetka infuzije do 0,5 h. QT i RR intervali su mereni korišćenjem PowerLab 4SP<®>softvera. Podaci su analizirani na 1, 5 i 10 min tokom infuzije i 5, 10, 15 i 30 min nakon infuzije uz prosečno 9 otkucaja.

[0037] Nije bilo promene u QT intervalima pri primeni intravenske doze jedinjenja formule I.b od 1 mg/kg.

Claims (3)

Patentni zahtevi

1. Jedinjenje Formule I, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačeno time što je jedinjenje Formule I izabrano od

(5-15-[N'-(2-hloro-6-metilbenzoil)hidrazinkarbonil]-2-metil-feniletinil}-piridin-2-il)amida ciklopropankarboksilne kiseline ili N'-(2-hloro-6-metilbenzoil)-4-metil-3-[2-(3-hinolil)etinil]-benzohidrazida, za upotrebu u lečenju ili prevenciji Parkinsonove bolesti.

2. Jedinjenje, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu prema zahtevu 1, naznačeno time što jedinjenje Formule I je (5-{5-[N'-(2-hloro-6-metilbenzoil)hidrazinkarbonil]-2-metilfeniletinil}-piridin-2-il)amid ciklopropankarboksilne kiseline.

3. Jedinjenje, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu prema zahtevu 1, naznačeno time što jedinjenje Formule I je N'-(2-hloro-6-metilbenzoil)-4-metil-3-[2-(3-hinolil)etinil]-benzohidrazid