RO128694A2 - Tehnologie modernizată, pentru obţinerea microtuberculilor de cartof in vitro, mai mari de 10 mm şi mai mari de 1 g - Google Patents
Tehnologie modernizată, pentru obţinerea microtuberculilor de cartof in vitro, mai mari de 10 mm şi mai mari de 1 g Download PDFInfo
- Publication number
- RO128694A2 RO128694A2 ROA201200095A RO201200095A RO128694A2 RO 128694 A2 RO128694 A2 RO 128694A2 RO A201200095 A ROA201200095 A RO A201200095A RO 201200095 A RO201200095 A RO 201200095A RO 128694 A2 RO128694 A2 RO 128694A2
- Authority
- RO
- Romania
- Prior art keywords
- weeks
- medium
- growth
- vitro
- micro
- Prior art date
Links
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 title claims abstract description 28
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 title claims abstract description 28
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 title claims abstract description 23
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims abstract description 18
- ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N coumarin Chemical compound C1=CC=C2OC(=O)C=CC2=C1 ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims abstract description 5
- 235000010419 agar Nutrition 0.000 claims abstract description 5
- 241000206672 Gelidium Species 0.000 claims abstract description 4
- FAIXYKHYOGVFKA-UHFFFAOYSA-N Kinetin Natural products N=1C=NC=2N=CNC=2C=1N(C)C1=CC=CO1 FAIXYKHYOGVFKA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims abstract description 4
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 229960000956 coumarin Drugs 0.000 claims abstract description 4
- 235000001671 coumarin Nutrition 0.000 claims abstract description 4
- QANMHLXAZMSUEX-UHFFFAOYSA-N kinetin Chemical compound N=1C=NC=2N=CNC=2C=1NCC1=CC=CO1 QANMHLXAZMSUEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 229960001669 kinetin Drugs 0.000 claims abstract description 4
- 239000012882 rooting medium Substances 0.000 claims abstract description 4
- 229960004793 sucrose Drugs 0.000 claims abstract description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims abstract description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims description 21
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 20
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 17
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 9
- 102000029749 Microtubule Human genes 0.000 claims description 8
- 108091022875 Microtubule Proteins 0.000 claims description 8
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 8
- 210000004688 microtubule Anatomy 0.000 claims description 8
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 6
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 claims description 5
- 230000000442 meristematic effect Effects 0.000 claims description 5
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 claims description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 3
- 210000001099 axilla Anatomy 0.000 claims description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 3
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 claims description 3
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 claims description 3
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims description 3
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 claims description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 3
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 3
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 claims description 2
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 claims description 2
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 claims description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 claims description 2
- 238000003118 sandwich ELISA Methods 0.000 claims description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 claims 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 abstract 5
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Natural products CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 2
- 235000013681 dietary sucrose Nutrition 0.000 abstract 1
- -1 naphtyl acetic acid Chemical compound 0.000 abstract 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 abstract 1
- 230000000050 nutritive effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 3
- 241000609816 Pantholops hodgsonii Species 0.000 description 2
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 2
- 241000938605 Crocodylia Species 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000709769 Potato leafroll virus Species 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000012631 diagnostic technique Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 239000003349 gelling agent Substances 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 238000003825 pressing Methods 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
Prezenta invenţie se referă la o nouă tehnologie, pentru obţinereaa microtuberculilor de cartof pentru sămânţă, din colţi de cartof sănătoşi, inoculaţi pe mediu nutritiv de creştere şi înrădăcinare, MS 1962, din care, în camera de creştere, se obţin, după 3-4 săptămâni, plantule de 5-6 cm, care se supun microbutăşirii. Fiecare microbutaş este apoi inoculat în mediu MS 1962, aditivat cu acid alfanaftil acetic şi solidificat cu agar-agar. După 3-4 săptămâni, din microbutaşi, se formează o plantulă nouă, de 5-7 cm. Aceasta se secţionează în minibutaşi, operaţia repetându-se de câte ori este nevoie, cu un coeficient de multiplicare, la fiecare 3-4 săptămâni, de 4-5 ori. Minibutaşii rezultaţi se utilizează pentru producerea de microtuberculi, prin cultivarea acestora pe un mediu de bază solid MS1962, specific fazei de creştere şi înrădăcinare. Plantulele de 4-5 cm rezultate se inoculează apoi orizontal, câte 4-5/cutie, în acelaşi mediu. După 3-4 săptămâni, noilor plantule dezvoltate din fiecare internod, li se adaugă mediu de tuberizare, ce conţine kinetină, cumarină şi zaharoză, în concentraţie de 80-90 g/l. La 6-8 săptămâni, se recoltează microtuberculii, rezultând cea mai mare cantitate de microtuberculi >10 mm şi >1 g.
Description
în țara noastră există o problema destul de dificilă în programul național de producere de cartof pentru sămânță datorită presiunii mari de infecție, problemă ce poate fi depășită prin utilizarea înmulțirii in vitro a cartofului. Rezolvarea constă în obținerea unui material inițial corespunzător din punct de vedere fitosanitar, în menținerea libere de virusuri a noilor genotipuri create precum și în micropropagarea rapidă a celor mai valoroase creații.
Soiul, ca resursă biologică, constituie unul din cei mai importanți factori în realizarea unor producții mari, constante și economice, dar ca orice material biologic, se menține în producție un timp limitat. Degenerarea biologică, uzura morală, apariția și evoluția agenților patogeni, modificarea condițiilor tehnice și economice, cerințele pieții, constituie elemente principale în menținerea în producție un timp mai lung sau mai scurt.
în România se cultivă peste 200.000 ha cu cartof, fiind considerată cultură de importanță națională. La cartof, calitatea materialului de plantare este factorul esențial care determină calitatea și cantitatea recoltelor obținute, fiind cunoscut faptul că producția de cartof este determinată în procent de peste 50 % de calitatea materialului de plantare. Producerea cartofului pentru sămânță reprezintă o activitate științifică complexă, laborioasă, care necesită o preocupare mai mare decât producerea materialului semincer la culturile cu înmulțire prin sămânță adevărată, datorită în principal următoarelor cauze:
- diminuarea progresivă a producției determinată de degenerarea virotică și fiziologică;
- coeficientul de înmulțire foarte mic (1:4 — 1:10);
- conținutul ridicat de apă și sensibilitatea la vătămare a tuberculilor impune condiții speciale pentru păstrare;
- costurile aferente materialului pentru plantat sunt mari datorită normei de plantare ridicate.
Sistemul național pentru producerea și înmulțirea cartofului de sămânță a fost organizat în 1966. Schema aplicată este de 9 - 10 ani. Necesitatea îmbunătățirii cartofului pentru sămânță impune trecerea la o nouă schemă de producere a materialului de plantare prin introducerea culturilor de țesuturi in vitro și a tehnicii de diagnosticare ELISA.prin producerea microtuberculilor in vitro, institutul fiind singura unitate din țară care poate asigura necesarul cu cartof de sămânță din soiurile românești.
Prin dezvoltarea culturii in vitro de producere de microtuberculi, se mărește eficiența procesului de producere de sămânță atât sub aspect economic, cât și ca durată, această tehnică determinând o reducere cu 4 - 5 ani a timpului necesar față de metoda clasică, și în același timp se elimină o serie de lucrări adiacente, create de necesitatea menținerii unui stoc de material biologic reproductiv sănătos și care se utilizează in mod obișnuit în sistemul clasic.
FORM. B 01 - cititi Ghidul de completare ¢,-20 12-00°95 '
4 -02- 2012
PRODUCEREA DE MICROTUBERCULI IN VITRO
I. METODA CLASICĂ
1. Obținerea materialului inițial liber de virusuri utilizând culturile de meristeme
Pentru inițierea culturii de meristeme, tuberculii de cartof luati în studiu (câte 10 tuberculi pentru fiecare soi) sunt puși la încolțit, în condiții de laborator, la temperatura de 18°C, la lumină. După aproximativ 3 săptămâni colții au lungimea de cca. 2-3 cm, sunt detașați, dezinfectați si utilizați pentru obținerea inoculilor meristematici prin îndepărtarea micilor foliole ce înconjoară vârful de creștere până ce se observă domul meristematic cu primele primordiile foliare Excizarea meristemelor se face la lupa binoculară în hota cu flux de aer steril, pe o suprafață ce a fost în prealabil dezinfectată cu alcool 70°. După prelevare, explantul meristematic este introdus într-un mediu de cultură de dezvoltare, folosit la cartof, Murashige-Skoog (MS 1962) cu diverse variante hormonale. Culturile odată înființate, sunt transferate în camera de creștere , fiind expuse unui regim de lumină de 4000 lucși, cu o fotoperioadă de 16 ore lumină, 8 ore întuneric, la o temperatură de 22°C±2°C ziua, și 18-20°C±2°C noaptea. în cazul meristemelor viabile, după un timp, inoculii meristematici încep să crească și dezvoltă mici muguri care se transformă în plantule (funcție de soi 6-8 luni).
2.Multiplicarea “in vitro” a cartofului
Plantulele de cartof regenerate din meristeme sunt microbutășite, fiecare minibutaș conținând un nod cu frunzulița aferentă. Fiecare minibutașii este inoculat apoi într-un mediu nutritiv de cultură, Murashighe-Skoog (MS 1962) cu un adaus de acid alfanaftilacetic (ANA) în concentrație de 0,5 mg/l pentru stimularea creșterii și înrădăcinării. Mediul a fost solidificat cu 0,7% Agar-Agar iar pH-ul a fost ajustat la 5,8 cu KOH înainte de autoclavare. Sterilizarea recipientelor cu mediu a fost făcută la 120°C timp de 25' minute. După inocularea minibutașilor, operație efectuată in incinta hotei cu flux laminar steril, eprubetele sunt plasate în camera de creștere în aceleași condiții de temperatură și lumină ca la faza de inițiere a culturii din meristeme. După aproximativ 3-4 săptămâni (funcție de genotip) fiecare genotip s-a dezvoltat și a generat o nouă plantulă de cca. 5-7 cm, acestea au fost secționate din nou, nod per nod în minibutași. Fenomenul se repetă ori de câte ori este nevoie. Mediul de cultură utilizat a facilitat de fiecare dată, regenerarea din mugurele prezent la nivelul nodului, respectiv la axila fiecărei frunzulițe ( meristeme axilare) o plantulă completă cu o tulpiniță bine conformată și cu multe rădăcinuțe. Coeficientul de multiplicare este în jur de 4-5 la fiecare 3-4 săptămâni.
3.Identificarea infecției virale prin testul ELISA
Prima testare a plantulelor în vederea depistării prezenței infecției virale în vitroplantele regenerate din meristeme cu ajutorul testului ELISA, s-a făcut în faza în care plantulele erau dezvoltate, având frunzulițe și rădăcinuțe.
Materialul biologic este reprezentat de 90 de clone de cartof (din soiurile analizate) și fiecare clonă este testată pentru fiecare din virusurile PVX, PVY, PVM, PVS, PVA și virusul FORM. B 01 - cititi Ghidul de completare ^2012-00095-1 4 -02- 2012 răsucirii frunzelor (PLRV). Pentru testare, se recoltează 5-6 plantule din “in vitro” de la fiecare clonă de cartof din soiurile supuse devirozării și se extrage sucul prin presare la presa automată.
4.înființarea culturii in vitro pentru obținerea de microtuberculi in vitro
Punctul de plecare în producerea microtuberculilor sunt plantulele produse în ultima fază de multiplicare, adică minibutașii ce sunt inoculați in mediul de creștere si înrădăcinare MS. După 3-4 saptamani, se adauga mediul de microtuberizare care este un mediu lichid, de conține aceleași substanțe ca și mediul MS de creștere și inradacinare, dar cantitatea de soluție stoc este redusa la jumătate,fiind completat cu Kinetină, Cumarină și zaharoză în concentrație de 80-90 g/l.
Mediul de microtuberizare nu conține agar sau alți agenți gelifianți. în fiecare cutie de plastic ce conține câte 20 de minibutași, se toarnă 40 ml de mediu de microtuberizare sterilizat și răcit.. Microtuberizarea are loc la întuneric timp de 6-8 săptămâni , temperatura fiind de
5.Recoltarea microtuberculilor
Recoltarea se face separat, în funcție de soi, clonă iar microtuberculii din fiecare cutie sunt calibrați cu ajutorul a patru site cu orificiile de diferite dimensiuni (10; 7,1; 5; 3,15 mm) (Fig.1).
Fig.1 Microtuberculi recoltați si sortati
II. METODA MODERNIZATĂ DE PRODUCERE MCROTUBERCULI IN VITRO >10mm Șl >1g
III.
1. Obținerea materialului inițial liber de virusuri utilizând colții de cartof
In noua metoda de producere de microtuberculi in vitro, punctul de plecare il constituie coltul de cartof obtinut din tuberculi testati inițial prin testul DAS ELISA (Doble Antibody Sandwich ELISA), care sunt detașați, dezinfectați si introduși in mediul de cultură de creștere si inradacinare, utilizat la cartof, Murashige-Skoog (MS 1962. Culturile, sunt apoi transferate în camera de creștere , fiind expuse unui regim de lumină de 4000 lucși, cu o fotoperioadă de 16 ore lumină, 8 ore întuneric, la o temperatură de 22°C±2°C ziua, și 18-20°C±2°C noaptea. După aproximativ 3-4 saptamani, colții formează plantule bine dezvoltate de 5-6 cm care sunt supuse
FORM. B 01 - cititi Ghidul de completare ftr 2012-00095-Τ 4 -02- 20J2 microbutasirii.
Fiecare minibutașii este inoculat apoi într-un mediu nutritiv de cultură, Murashighe-Skoog (MS 1962) cu un adaus de acid alfanaftilacetic (ANA) în concentrație de 0,5 mg/l pentru stimularea creșterii și înrădăcinării. Mediul a fost solidificat cu 0,7% Agar-Agar iar pH-ul a fost ajustat la 5,8 cu KOH înainte de autoclavare. Sterilizarea recipientelor cu mediu a fost făcută la 120°C timp de 25' minute. După inocularea minibutașilor, operație efectuată in incinta hotei cu flux laminar steril, eprubetele sunt plasate în camera de creștere în aceleași condiții de temperatură și lumină ca la faza de creștere a culturii. După aproximativ 3-4 săptămâni s-a dezvoltat și a generat o nouă plantulă de cca. 5-7 cm, care au fost secționate din nou, nod per nod în minibutași. Fenomenul se repetă ori de câte ori este nevoie. Mediul de cultură utilizat a facilitat de fiecare dată, regenerarea din mugurele prezent la nivelul nodului, respectiv la axila fiecărei frunzulițe ( meristeme axilare) o plantulă completă cu o tulpiniță bine conformată și cu multe rădăcinuțe. Coeficientul de multiplicare este în jur de 4-5 la fiecare 3-4 săptămâni.
2.înființarea culturii in vitro pentru obținerea de microtuberculi in vitro
Punctul de plecare în producerea microtuberculilor in aceasta noua matoda sunt plantulele crescute in vitro din segmente uninodale (microbutași) de cartof ce sunt cultivate într-un mediu de bază solid M&S (Murashige-Skoog, 1962), specific fazei de creștere și înrădăcinare. Aceste plantule dezvoltate, de 4-5 cm înălțime se inoculează apoi orizontal, cate 4-5/cutie, in același mediul MS de creștere și înrădăcinare. După 3-4 saptamani din fiecare internod se vor dezvolta noi plantule, peste care se adauga 40 ml mediul de microtuberizare lichid, ce conține aceleași substanțe ca și mediul MS de creștere și inradacinare, dar cantitatea de soluție stoc este redusa la jumătate,fiind completat cu Kinetină, Cumarină și zaharoză în concentrație de 80-90 g/l. Microtuberizarea are loc la întuneric, temperatura fiind de 20±2°C.
FORM. B 01 - cititi Ghidul de completare < 2 Ο 1 2 - 0 Ο Ο 9 5 - ί 4 -02- 2012
3.Recoltarea microtuberculilor
După aproximativ 6-8 saptamani, funcție de genotip se recoltează microtuberculii si se calibrează (>1O; 7,1; 5 mm) si se cântăresc. Noua metoda produce cea mai mare cantitate de microtuberculi >10mm (Fig.2) si >1g. (Fig.3).
Fig.2 Microtuberculi >10mm
Fig.3 Microtuberculi >1g
Tehnologia pro du reni mici otub «miilor in vitro > 10 mm și -1 g
Microtuberculi > 1 Omm Microtuberculi > 1 gram
Fig.4 Schema modificata de producere microtuberculilor in vitro >10mm si >1g
FORM. B 01 - cititi Ghidul de completare
Γ
^-2012-00095-1 4 -02- 2012
III. Avantajele producerii de microtuberculi >10mm si >1g prin noua metoda
Caracteristicile tehnice ale microtuberculilor:
Metoda clasica tuberculi mici(3-5-9 mm);
- greutate 0,05-0,2-0,5 g;
timp de obținere a microtuberculilor pornind de la meristem: aproximativ 16-18 luni repaus vegetativ 6-8 luni funcție de soi;
deshidratare puternica pe timpul perioadei de vegetație datorita greutății foarte mici, deci pierderi destul de mari pe timpul păstrării (30%).
Metoda noua:
- tuberculi mari (10-15-20 mm);
greutate 0,5- 2,6 ;
timp de obținere a microtuberculilor pornind de la colt de carof sănătos: 6-8 luni repaus vegetativ 6-8 luni funcție de soi;
pierderile pe timpul repausului sunt mult mai mici (2%) plantați în tunel produc tuberculi normali.
Dr.ing. Nicoleta CHIRU
Dr.ing. Andreea Marinela NISTOR 1
Dr.ing. Sorin Claudian CHIRU
Director General INCDQSZ Brașov
Dr.ing. Sorin ClaudieĂ.CHIRU
Claims (3)
- METODA DE OBȚINERE A MCROTUBERCULILOR DE CARTOF IN VITRO >10mm SI >1GETAPELE METODEIEtapele metodei sunt identice cu cele folosite pentru producerea microtuberculilor in vitro. Elementul de noutate îl constituie:- înlocuirea explantelor meristematice folosite până în prezent cu prelevarea de colți din tuberculi de cartof sanatosi, testati si păstrați în anumite condiții;inocularea de plantule bine dezvoltate, de 4-5 cm , in poziție orizontala in mediul MS de creștere și înrădăcinare.Principalele etape ale metodei sunt:1. Obținerea materialului inițial liber de virusuri utilizând colții de cartofI »In noua metoda de producere de microtuberculi in vitro, punctul de plecare il constituie coltul de cartof obtinut din tuberculi testati inițial prin testul DAS ELISA (Double Antibody Sandwich ELISA), care sunt detașați, dezinfectați si introduși in mediul de cultură de creștere si înrădăcinare, utilizat la cartof, Murashige-Skoog (MS 1962). Culturile, sunt apoi transferate în camera de creștere , fiind expuse unui regim de lumină de 4000 lucși, cu o fotoperioadă de 16 ore lumină, 8 ore întuneric, la o temperatură de 22°C±2°C ziua, și 18-20°C±2°C noaptea. După aproximativ 3-4 saptamani, colții formează plantule bine dezvoltate de 5-6 cm care sunt supuse microbutasirii (multiplicării).Fiecare minibutașii este inoculat apoi într-un mediu nutritiv de cultură, MurashigheSkoog (MS 1962) cu un adaus de acid alfanaftilacetic (ANA) în concentrație de 0,5 mg/l pentru stimularea creșterii și înrădăcinării. Mediul a fost solidificat cu 0,7% Agar-Agar iar pHul a fost ajustat la 5,8 cu KOH înainte de autoclavare. Sterilizarea recipientelor cu mediu a fost făcută la 120°C timp de 25' minute. După inocularea minibutașilor, operație efectuată in incinta hotei cu flux laminar steril, eprubetele sunt plasate în camera de creștere în aceleași condiții de temperatură și lumină ca la faza de creștere a culturii. După aproximativ 3-4 săptămâni s-a dezvoltat și a generat o nouă plantulă de cca. 5-7 cm, care au fost secționate din nou, nod per nod în minibutași. Fenomenul se repetă ori de câte ori este nevoie. Mediul de cultură utilizat a facilitat de fiecare dată, regenerarea din mugurele prezent la nivelul nodului, respectiv la axila fiecărei frunzulițe ( meristeme axilare) o plantulă completă cu o tulpiniță bine conformată și cu multe rădăcinuțe. Coeficientul de multiplicare este în jur de 4-5 la fiecare 3-4 săptămâni.c\-2 Ο 1 2 - Ο Ο Ο 9 5 - ’ 4 -02- 2012
- 2.înființarea culturii in vitro pentru obținerea de microtuberculi in vitroPunctul de plecare în producerea microtuberculilor in aceasta noua matoda sunt plantulele crescute in vitro din segmente uninodale (microbutași) de cartof ce sunt cultivate întrun mediu de bază solid M&S (Murashige-Skoog, 1962), specific fazei de creștere și înrădăcinare. Aceste plantule dezvoltate, de 4-5 cm înălțime se inoculează apoi orizontal, cate 4-5/cutie, in același mediul MS de creștere și inradacinare. După 3-4 saptamani din fiecare internod se vor dezvolta noi plantule, peste care se adauga 40 ml mediul de microtuberizare lichid, ce conține aceleași substanțe ca și mediul MS de creștere și inradacinare, dar cantitatea de soluție stoc este redusa la jumătate,fiind completat cu Kinetină, Cumarină și zaharoză în concentrație de 80-90 g/l. Microtuberizarea are loc la întuneric, temperatura fiind de 20±2°C.
- 3.Recoltarea microtuberculilorDupă aproximativ 6-8 saptamani, funcție de genotip se recoltează microtuberculii si se calibrează (>10; 7,1; 5 mm) si se cântăresc. Noua metoda produce cea mai mare cantitate de microtuberculi >10mm si >1g.REZULTATE OBȚINUTENoutatea propunerii se concretizează prin adaptarea unei metode mai rentabile din punct de vedere economic comparativ cu cea folosită datorită producerii intr-un timp mai scurt de microtuberculi >10mm si >1g.Utilizarea noii metode a determinat o reducere cu 50% a timpului de producere a microtuberculilor in vitro, a obținerii de microtuberculi mai mari atat ca dimensiune cat si ca greutate si deci pierderile pe timpul repausului sunt mult mai mici (2%) comparativ cu metoda clasica unde pierderile pot ajungesi pana la 30% datorita deshidratării.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ROA201200095A RO128694B1 (ro) | 2012-02-14 | 2012-02-14 | Procedeu de obţinere a microtuberculilor de cartof in vitro, mai mari de 10 mm şi mai mari de 1 g |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ROA201200095A RO128694B1 (ro) | 2012-02-14 | 2012-02-14 | Procedeu de obţinere a microtuberculilor de cartof in vitro, mai mari de 10 mm şi mai mari de 1 g |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RO128694A2 true RO128694A2 (ro) | 2013-08-30 |
| RO128694B1 RO128694B1 (ro) | 2016-12-30 |
Family
ID=49030013
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ROA201200095A RO128694B1 (ro) | 2012-02-14 | 2012-02-14 | Procedeu de obţinere a microtuberculilor de cartof in vitro, mai mari de 10 mm şi mai mari de 1 g |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RO (1) | RO128694B1 (ro) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111374050A (zh) * | 2018-12-30 | 2020-07-07 | 甘肃康勤薯业有限公司 | 一种马铃薯试管薯的繁育方法 |
-
2012
- 2012-02-14 RO ROA201200095A patent/RO128694B1/ro unknown
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111374050A (zh) * | 2018-12-30 | 2020-07-07 | 甘肃康勤薯业有限公司 | 一种马铃薯试管薯的繁育方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RO128694B1 (ro) | 2016-12-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103190347B (zh) | 一种茶壶枣组织培养方法 | |
| Moradi et al. | Micropropagation of strawberry by multiple shoots regeneration tissue cultures | |
| JP2011083235A (ja) | 培養苗から多芽体の形成方法およびウイルスフリー種芋の生産方法 | |
| Rotino | Anther culture in eggplant (Solanum melongena L.) | |
| JP2021502052A (ja) | 胚救助技術による百山祖冷杉の苗を短い時間で得ることが出来る方法 | |
| Paek et al. | Micropropagation of Phalaenopsis orchids via protocorms and protocorm-like bodies | |
| Raju et al. | Mass propagation of Bambusa bambos (L.) Voss through in vitro culture | |
| Costa et al. | Advances observed in papaya tree propagation | |
| CN108077070A (zh) | 一种槭树组织培养用培养基及培养方法 | |
| CN109479718A (zh) | 一种文冠果组培苗的生根方法 | |
| da Costa et al. | Advances observed in papaya tree propagation | |
| CN101402937A (zh) | 普陀鹅耳枥种胚培养基及组培快繁方法 | |
| Choudhary et al. | Development of an efficient regeneration and rapid clonal multiplication protocol for three different Morus species using dormant buds as explants | |
| CN105145358A (zh) | 一种黄藤组织培养快繁方法 | |
| CN104488719A (zh) | 一种一步法诱导烟草单倍体植株的方法 | |
| Beruto et al. | In vitro culture of tree peony through axillary budding | |
| KR20180020475A (ko) | 기내배양에 의한 대나무 대량증식 방법 | |
| CN101611698B (zh) | 三尖杉离体胚培养及植株再生方法 | |
| RO128694A2 (ro) | Tehnologie modernizată, pentru obţinerea microtuberculilor de cartof in vitro, mai mari de 10 mm şi mai mari de 1 g | |
| CN104488709A (zh) | 一种花叶紫娇花鳞茎组织培养的方法 | |
| CN104770297B (zh) | 一种以金钱松叶片为外植体的金钱松植株再生方法 | |
| Akhtar | Somatic embryogenesis for efficient micropropagation of guava (Psidium guajava L.) | |
| Singh et al. | Plant tissue culture | |
| KR100302206B1 (ko) | 민두릅나무의 기내 대량생산방법 및 포지 이식방법 | |
| CN115918539B (zh) | 一种贵州地宝兰试管开花及结实的方法 |