RO119628B1 - Metodă de tratare a vinului cu manoproteine - Google Patents
Metodă de tratare a vinului cu manoproteine Download PDFInfo
- Publication number
- RO119628B1 RO119628B1 RO97-00827A RO9700827A RO119628B1 RO 119628 B1 RO119628 B1 RO 119628B1 RO 9700827 A RO9700827 A RO 9700827A RO 119628 B1 RO119628 B1 RO 119628B1
- Authority
- RO
- Romania
- Prior art keywords
- wine
- mannoproteins
- yeasts
- wines
- enzymatic digestion
- Prior art date
Links
- 235000014101 wine Nutrition 0.000 title claims abstract description 68
- 102100024023 Histone PARylation factor 1 Human genes 0.000 title claims abstract description 39
- 108010005335 mannoproteins Proteins 0.000 title claims abstract description 32
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 23
- 230000006862 enzymatic digestion Effects 0.000 claims abstract description 21
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims abstract description 20
- 230000008569 process Effects 0.000 claims abstract description 11
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 9
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 8
- 101001047783 Homo sapiens Histone PARylation factor 1 Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 36
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 36
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 claims description 15
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 10
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 claims description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 6
- 238000005251 capillar electrophoresis Methods 0.000 claims description 5
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 4
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 claims description 4
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 3
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 claims description 3
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 claims description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 claims description 3
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims description 3
- 239000011343 solid material Substances 0.000 claims description 2
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 abstract description 2
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 abstract description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 16
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 16
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 14
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 14
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 14
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 13
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 13
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 101100421854 Arabidopsis thaliana MSD1 gene Proteins 0.000 description 9
- 101100139861 Arabidopsis thaliana RL2 gene Proteins 0.000 description 9
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 9
- 235000020097 white wine Nutrition 0.000 description 9
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 229960003975 potassium Drugs 0.000 description 8
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 8
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 8
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 8
- 235000011042 metatartaric acid Nutrition 0.000 description 7
- 239000001369 metatartaric acid Substances 0.000 description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 7
- 230000029983 protein stabilization Effects 0.000 description 7
- FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N potassium nitrate Chemical compound [K+].[O-][N+]([O-])=O FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 235000020095 red wine Nutrition 0.000 description 6
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000000440 bentonite Substances 0.000 description 5
- 229910000278 bentonite Inorganic materials 0.000 description 5
- SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N bentoquatam Chemical compound O.O=[Si]=O.O=[Al]O[Al]=O SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 4
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 4
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 4
- 101710130006 Beta-glucanase Proteins 0.000 description 3
- 108010062580 Concanavalin A Proteins 0.000 description 3
- 208000006558 Dental Calculus Diseases 0.000 description 3
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 3
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 3
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-PQMKYFCFSA-N alpha-D-mannose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PQMKYFCFSA-N 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 3
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 3
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 3
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 3
- KYKNRZGSIGMXFH-ZVGUSBNCSA-M potassium bitartrate Chemical compound [K+].OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O KYKNRZGSIGMXFH-ZVGUSBNCSA-M 0.000 description 3
- 235000010333 potassium nitrate Nutrition 0.000 description 3
- 239000004323 potassium nitrate Substances 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 2
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 2
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric Acid Chemical class [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 2
- 101150058217 mec-10 gene Proteins 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 235000016337 monopotassium tartrate Nutrition 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 239000013074 reference sample Substances 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 235000002906 tartaric acid Nutrition 0.000 description 2
- 150000003892 tartrate salts Chemical class 0.000 description 2
- HBOMLICNUCNMMY-KJFJCRTCSA-N 1-[(4s,5s)-4-azido-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-5-methylpyrimidine-2,4-dione Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1O[C@H](CO)[C@@H](N=[N+]=[N-])C1 HBOMLICNUCNMMY-KJFJCRTCSA-N 0.000 description 1
- 238000009010 Bradford assay Methods 0.000 description 1
- 101100456535 Caenorhabditis elegans mec-15 gene Proteins 0.000 description 1
- 125000003535 D-glucopyranosyl group Chemical group [H]OC([H])([H])[C@@]1([H])OC([H])(*)[C@]([H])(O[H])[C@@]([H])(O[H])[C@]1([H])O[H] 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- NPYPAHLBTDXSSS-UHFFFAOYSA-N Potassium ion Chemical compound [K+] NPYPAHLBTDXSSS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 241000220317 Rosa Species 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- FNBBNRGOHBQXCM-UHFFFAOYSA-N [S].OC1=CC=CC=C1 Chemical compound [S].OC1=CC=CC=C1 FNBBNRGOHBQXCM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- 239000001785 acacia senegal l. willd gum Substances 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 238000000889 atomisation Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 108010045275 endo-1,6-beta-glucanase Proteins 0.000 description 1
- 238000001976 enzyme digestion Methods 0.000 description 1
- 238000005048 flame photometry Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000004508 fractional distillation Methods 0.000 description 1
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 1
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 230000009965 odorless effect Effects 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 150000004804 polysaccharides Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229940086065 potassium hydrogentartrate Drugs 0.000 description 1
- 229910001414 potassium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001472 potassium tartrate Substances 0.000 description 1
- 229940111695 potassium tartrate Drugs 0.000 description 1
- 235000011005 potassium tartrates Nutrition 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- WPPDXAHGCGPUPK-UHFFFAOYSA-N red 2 Chemical compound C1=CC=CC=C1C(C1=CC=CC=C11)=C(C=2C=3C4=CC=C5C6=CC=C7C8=C(C=9C=CC=CC=9)C9=CC=CC=C9C(C=9C=CC=CC=9)=C8C8=CC=C(C6=C87)C(C=35)=CC=2)C4=C1C1=CC=CC=C1 WPPDXAHGCGPUPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 238000006884 silylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012265 solid product Substances 0.000 description 1
- 230000003381 solubilizing effect Effects 0.000 description 1
- 235000018553 tannin Nutrition 0.000 description 1
- 229920001864 tannin Polymers 0.000 description 1
- 239000001648 tannin Substances 0.000 description 1
- 239000011975 tartaric acid Substances 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12H—PASTEURISATION, STERILISATION, PRESERVATION, PURIFICATION, CLARIFICATION OR AGEING OF ALCOHOLIC BEVERAGES; METHODS FOR ALTERING THE ALCOHOL CONTENT OF FERMENTED SOLUTIONS OR ALCOHOLIC BEVERAGES
- C12H1/00—Pasteurisation, sterilisation, preservation, purification, clarification, or ageing of alcoholic beverages
- C12H1/003—Pasteurisation, sterilisation, preservation, purification, clarification, or ageing of alcoholic beverages by a biochemical process
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12H—PASTEURISATION, STERILISATION, PRESERVATION, PURIFICATION, CLARIFICATION OR AGEING OF ALCOHOLIC BEVERAGES; METHODS FOR ALTERING THE ALCOHOL CONTENT OF FERMENTED SOLUTIONS OR ALCOHOLIC BEVERAGES
- C12H1/00—Pasteurisation, sterilisation, preservation, purification, clarification, or ageing of alcoholic beverages
- C12H1/12—Pasteurisation, sterilisation, preservation, purification, clarification, or ageing of alcoholic beverages without precipitation
- C12H1/14—Pasteurisation, sterilisation, preservation, purification, clarification, or ageing of alcoholic beverages without precipitation with non-precipitating compounds, e.g. sulfiting; Sequestration, e.g. with chelate-producing compounds
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/005—Glycopeptides, glycoproteins
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Physiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Distillation Of Fermentation Liquor, Processing Of Alcohols, Vinegar And Beer (AREA)
- Alcoholic Beverages (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Dairy Products (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Invenţia se referă la o metodă de tratare a vinului pentru stabilizarea lui faţă de sărurile tartrice şi proteinice. Conform invenţiei, la vin, se adaugă manoproteine extrase din pereţii celulari ai drojdiilor prin digestie enzimatică. Invenţia se mai referă la un procedeu de extracţie a manoproteinelor prin digestia enzimatică a drojdiilor - pentru utilizarea lor la tratamentul conform invenţiei- şi la manoproteina obţinută. ŕ
Description
Prezenta invenție se referă la o metodă de tratare a vinului în vederea stabilizării față de sărurile tartrice și față de proteine în vinurile albe, roze și roșii.
. Se cunoaște că în comercializarea vinurilor îmbuteliate se cere nu numai ca acestea să fie limpezi în momentul îmbutelierii, ci și să rămână astfel un anumit timp, în special în cazul vinurilor care sunt depozitate o perioadă relativ lungă.
în prezent, este cunoscut faptul că tratamentele de stabilizare a vinurilor nu sunt satisfăcătoare, dacă ne referim la precipitatele de săruri tartrice sau ale celor de proteine, denumite în oenologie ca depreciere tartrică și proteinică.
De fapt, în timpul depozitării vinurilor albe, deprecierea proteinică se manifestă prin turbiditate sau prin depozite specifice care apar în sticlă atunci când temperatura de depozitare a vinului este ridicată și/sau ca rezultat al îmbogățirii cu tanin din dop.
O soluție cunoscută implică tratarea musturilor și vinurilor cu bentonită, dar dozajele necesare în ce privește cerințele existente pot fi suficient de mari pentru a produce devieri de la caracteristicile organoleptice ale vinurilor astfel tratate.
S-au făcut și alte încercări de-a lungul liniilor enzimatice, folosind proteaze exogene sau pe bază de drojdii de bere, pentru a elimina proteinele responsabile de depreciere proteinică, însă rezultatele nu au fost satisfăcătoare.
S-a arătat recent că, în cursul depozitării vinurilor albe, îmbunătățirile observate în stabilitatea proteinică a acestora s-au datorat prezenței manoproteinelor eliberate de drojdiile de bere.
în ce privește precipitarea sărurilor tartrice care sunt prezente îndeosebi sub forma tartratului acid de potasiu, acestea sunt prezente sub formă suprasaturată în vinuri. în plus, în timpul stocării vinurilor pe timp de iarnă, frigul provoacă precipitate cristaline, dar în orice caz această precipitare se produce de asemenea în timp și devine vizibilă în sticle.
S-au găsit metode de stabilizare a acestor săruri tartrice, iar în prezent sunt cunoscute trei astfel de metode.
Prima soluție implică accelerarea precipitării prin menținerea vinului un număr de săptămâni la temperaturi negative, urmată de filtrarea lui pentru separarea cristalelor.
A doua soluție cuprinde o îmbunătățire a celei anterioare, prin adăugarea unor doze mari de cristale în vin, astfel încât tratamentul la temperatură scăzută devine mai eficient, iar durata lui este mai scurtă; filtrarea rămâne însă obligatorie pentru a scoate cristalele suplimentare și cele care s-au dezvoltat.
A treia soluție implică adăugarea de acid metatartric la vin, acest acid contracarând cristalizarea acizilor tartrici sub influența temperaturii joase. Efectul protector dispare imediat ce acidul metatartric hidrolizează, fenomen ce are loc cu atât mai rapid cu cât temperatura de depozitare a vinului este mai înaltă.
Soluțiile menționate mai sus nu sunt satisfăcătoare, întrucât primele două sunt îndelungate și costisitoare, alterând în plus caracteristicile organoleptice ale vinurilor tratate.
în ce privește a treia soluție, eficiența ei este de scurtă durată, fiind de aceea limitată la vinurile destinate consumului timpuriu, în plus față de faptul că este necesară introducerea în vin a unor compuși străini, neconținuți inițial în el.
Teste mai recente au demonstrat că manoproteinele extrase la cald din pereții celulari ai drojdiei de bere aparținând speciei Saccharomyces cerevisiae au un efect inhibitoriu asupra cristalizării sărurilor tartrice.
Procesul obținerii acestor manoproteine implică solubilizarea acestora la căldura de 100°C într-un mediu apos și colectarea lor fie directă, fie prin liofilizare sau precipitare cu etanol, cu uscarea precipitatului după centrifugare.
RO 119628 Β1
Eficacitatea preparatelor produse la testarea lor într-un mediu model nu a fost încă 1 verificată relativ la majoritatea vinurilor. în plus, prepararea, în modul descris mai sus, a manoproteinelor nu aduce nici o îmbunătățire stabilității vinurilor albe. 3
Problema pe care o rezolvă prezenta invenție este de a asigura tratarea vinurilor albe, roșii sau roze pentru a le stabiliza în ce privește precipitatele tartrice și proteinice, cu 5 un efect pe un termen suficient de lung ca să fie considerat permanent.
Metoda conform invenției înlătură dezavantajele menționate mai sus prin aceea că 7 include adăugarea, la vin, a manoproteinelor extrase din pereții celulari ai drojdiei, prin digestie enzimatică cu ajutorul unui amestec de β-1-3 și β-1-6 glucanaze. 9
Invenția prezintă un avantaj prin faptul că tratamentul prevede adăugarea unei substanțe biologice, obținută printr-un procedeu conform invenției, adică introducerea unei 11 substanțe permise de legile de control al vinurilor, numită substanță biologică, neavând miros și fiind complet solubilă în vin. 13
Conform invenției, drojdiile folosite aparțin speciei Saccharomyces cerevisiae, iar cantitatea de manoproteine folosite în vin este mai mică de 30 g/hl.15
Invenția se referă, de asemenea, la un procedeu pentru extracția manoproteinelor prin digestia enzimatică a drojdiei pentru utilizarea lor conform prezentei invenții în care:17
- pereții celulari ai drojdiei se incubează într-un mediu apos în prezența β-glucanazei;
- se separă produsul solid;19
- se concentreză faza lichidă în special prin ultrafiltrare;
- ca fază suplimentară, se usucă produsul obținut, în special prin liofilizare sau 21 atomizare, pentru a asigura o manipulare confortabilă.
Procedeul conform invenției se caracterizează totodată prin aceea că β-glucanaza 23 este de tipul β-1-3 și β-1-6.
Invenția mai prevede totodată o manoproteină obținută prin procedeul de mai sus, 25 care, analizată prin cromatografie lichidă la presiune înaltă pentru separare moleculară, ilustrează prezența unui pic caracteristic; analiza prin electroforeză SDS PAGE arată 27 prezența a două proteine de 41600 și 31800 daltoni, iar analiza prin electroforeză capilară arată prezența unui pic caracteristic, corespunzător manoproteinei de 31800 daltoni. 29
Se dau mai jos exemple de realizare a invenției în legătură și cu fig. 1...9, care reprezintă:31
- fig.1, cromatograma obținută prin cromatografie lichidă la presiune înaltă a manoproteinelor extrase prin digestie enzimatică;33
- fig. 2, cromatograma manoproteinelor extrase la căldură;
- fig. 3, graficul obținut prin electroforeză manoproteinelor extrase prin digestie enzi- 35 matică (MEE), comparat cu graficul manoproteinelor extrase prin digestie la căldură (MEC);
- fig. 4, fracțiuni de proteine obținute prin eluție cu clorură de sodiu;37
- fig. 5, indicele de turbiditate (NTU) pentru vinuri de referință și pentru vinuri tratate cu diverse fracțiuni;39
- fig. 6, fracțiuni de proteine obținute prin eluție cu a-D-manosidă;
- fig. 7, indicele de turbiditate (NTU) pentru vinuri de referință și vinuri tratate cu 41 diverse fracțiuni;
- fig. 8, comparație a concentrației de MP 32 în diverse fracțiuni;43
- fig. 9, procentul de MP 32 în MEC și MEE.
Procedeul conform invenției se realizează conform exemplului specific menționat în 45 cele ce urmează.
RO 119628 Β1
Se incubează la 40°C în apă pereții celulari, în special de Saccliăromyces cerevisiae, în prezența unui preparat de β-glucanază, și anume cea comercializată de firma Novo sub marca Glucanex. .
Acest preparat cuprinde activități de exo-p-(l-3)-glucanază,-endo-p-(1 -3)-glucanază. și βχο-(β-(1-6) glucanază;
Ulterior se separă materialul solid.
Se concentrează apoi faza lichidă în special prin ultrafiltrare.
Masa uscată a produsului corespunde substanțial cu 50% din masa pereților celulari introduși inițial în preparat.
Produsul cuprinde 88% polizaharide, 4% proteine și 8% substanțe nedeterminate, fapt datorat indubitabil hidratării acestuia.
Produsul este fără miros, solubil în apă și vinuri, și nu se blochează suprafețele filtrante utilizate pentru filtrarea vinurilor.
Cu referire la fig. 1 și 2, se poate sublinia că se observă o diferență considerabilă între graficele ilustrate în fiecare dintre aceste figuri prin detecție spectrofotometrică la 225 nm pentru proteine și prin detecție refractometrică pentru polizaharide.
într-adevăr, graficul din fig. 2 arată un prim pic (X) care corespunde volumului gol al coloanei și un al doilea pic (Z) ce corespunde volumului total al coloanei.
Se va nota că graficul din fig. 1 ilustrează un al doilea pic (Y) în imediata vecinătate a picului (X) al volumului gol al coloanei care este absent în graficul din fig. 2.
Procedeul conform invenției permite extracția și conservarea unei manoproteine specifice.
Pe de altă parte, manoproteinele analizate prin electroforeză capilară în condiții fără distorsiune peste o coloană de silice topită, care sunt extrase prin digestie enzimatică, prezintă un pic (W) care corespunde manoproteinei responsabile de termostabilizarea proteinelor din vinul alb.
Acest pic este absent în timpul analizei manoproteinelor extrase la căldură, folosind tot procedura de electroforeză capilară.
Ulterior, se efectuează teste pentru a verifica efectele manoproteinelor extrase prin metoda enzimatică bazată pe diverse tipuri de drojdie, toate aparținând speciei Saccharomyces cerevisiae, denumite MEE, față de stabilizarea tartică, pe de o parte, și asupra stabilizării proteinice, pe de altă parte.
/. Stabilizarea tartrică
Se cunosc două tipuri de teste:
1. Determinarea indicelui de stabilitate tartrică
Se introduce bitartrat de potasiu, în probele ce urmează a fi testate în cantități variabile, solubilizate prin încălzire la 30°C și răcite ulterior la - 4°C.
Cu cât este mai stabil mediul, cu atât este mai mare cantitatea de bitartrat de potasiu necesară pentru a determina cristalizarea.
Estimarea cristalizării se face vizual sau determinând, prin fotometrie cu flacără, diferența de concentrație a potasiului în vinul filtrat înainte și după trecerea la condiții de rece.
Un vin este considerat stabil, dacă adăugarea a 75 mg de bitartrat de potasiu la 100 ml de probă nu determină cristalizarea.
Testul în mediul model
Rezultatele testului sunt date mai jos și se bazează pe 100 ml de mediu model hidroalcoolic compus din:
- 1,1 g/l clorură de potasiu;
RO 119628 Β1
- 2,1 g/l acid tartric;
-10,5 g/l etanol.
Parametrul variabil este cantitatea de hidrogenotartrat de potasiu adăugat în doze de 0,50,75,100.și 125 mg.
Probele sunt testate comparativ cu adăugarea de acid metatartric (meta acid), manoproteine extrase la căldura (MEC) și trei sorturi de manoproteine extrase prin digestie enzimatică (MEE).
Rezultatele din tabelul care urmează ilustrează diferențele în concentrația (mg/l) probelor înainte și după răcire.
| THK mg/100 ml | 0 | 50 | 75 | 100 | 125 |
| Probă de referință | 0 | 0 | 40 | 100 | 180 |
| Meta acid 5 g/hl | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| Meta acid 10 g/hl | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| Meta acid 25 g/hl | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| MEC 10 g/hl | 0 | 0 | 30 | 100 | 180 |
| MEC 25 g/hl | 0 | 0 | 0 | 20 | 100 |
| MEC 50 g/hl | 0 | 0 | 0 | 0 | 40 |
| MEE1 10 g/hl | 0 | 0 | 0 | 0 | 120 |
| MEE1 25 g/hl | 0 | 0 | 0 | 60 | 100 |
| MEE1 50 g/hl | 0 | 0 | 0 | 40 | 100 |
| MEE2 10 g/hl | 0 | 0 | 60 | 80 | 120 |
| MEE2 25 g/hl | 0 | 0 | 0 | 0 | 60 |
| MEE2 50 g/hl | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| MEE3 10 g/hl | 0 | 0 | 80 | 120 | 180 |
| MEE3 25 g/hl | 0 | 0 | 0 | 60 | 180 |
| MEE3 50 g/hl | 0 | 0 | 0 | 0 | 180 |
Se poate vedea că precipitarea bitartratuIui de potasiu în mediul sintetic este inhibată complet de către acidul metatartric, dar și de către manoproteinele extrase prin acțiune enzimatică, chiar și eficacitatea la doze identice fiind lejer inferioară.
Testul cu un vin alb
Tabelul următor ilustrează rezulatele obținute cu acidul metatartric, manoproteinele extrase la căldură și manoproteinele extrase prin digestie enzimatică.
| THK mg/100 ml | 0 | 50 | 75 | 100 | 125 |
| Probă de referință | 0 | 20 | 40 | 60 | 80 |
| Meta acid 5 g/hl | 0 | 0 | 0 | 20 | 20 |
| Meta acid 10 g/hl | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
RO 119628 Β1
Tabel (continuare)
| Meta acid 25 g/hl | 0 | o | 0 | 0 | 0 |
| . MEC 10 g/hl | 0· | 20 | 40 | .40 | 60 |
| MEC 25 g/hl | 0 | 20 | 20 | 20 | 60 |
| MEC 50 g/hl | 0 | 0 | 40 | 40 | 40 |
| MEE1 10 g/hl | 0 | 20 | 20 | 20 | 20 |
| MEE1 25 g/hl | 0 | 0 | 0 | 60 | 100 |
| MEE1 50 g/hl | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| MEE2 10 g/hl | 0 | 0 | 0 | 20 | 60 |
| MEE2 25 g/hl | 0 | 0 | 0 | 0 | 20 |
| MEE2 50 g/hl | 0 | 0 | 0 | 0 | 20 |
| MEE3 10 g/hl | 0 | 0 | 0 | 20 | 20 |
| MEE3 25 g/hl | 0 | 0 | 0 | 0 | 40 |
| MEE3 50 g/hl | 0 | 0 | 0 | 40 |
Se poate vedea că probele de referință prezintă o precipitare tartrică la adăugarea a 50 mg/l, semn că vinul este instabil.
Acidul metatartric și una din manoproteinele extrase prin digestie enzimatică sunt capabile să prevină precipitarea până la adăugarea a 125 g/hl.
Celelalte manoproteine extrase prin digestie enzimatică produc rezultate foarte bune din moment ce orice vin care nu are precipitat la o doză de 75 g/hl se consideră a fi stabil.
Manoproteinele extrase la căldură nu au efect chiar la doze foarte mari.
2. Determinarea comportării la temperatură joasă
Acest test pentru comportarea la temperatură joasă implică ținerea probelor la temperatura joasă (-4°C) timp de 6 zile, o dată ce ele au fost filtrate printr-o membrană cu pori de 1 pm.
Absența oricărei cristalizări în aceste condiții permite ca vinurile testate să fie considerate stabile.
Rezultatele din tabelul de mai jos consemnează situația la diferite vinuri albe, roze și roșii.
xxx - cristalizare
ND - nedeterminat
O - cristalizare absentă
| Tipul vinului | Referință | Meta acid 10 g/hl | MEC 25 g/hl | MEE1 25 g/hl |
| Alb 1 | O | O | ||
| Alb 2 | O | O | ||
| Alb 3 | ND | - | O | |
| Alb 4 | ND | O |
RO 119628 Β1
Tabel (continuare)
| Tipul vinului | Referință | Meta acid 10 g/hl | MEC 25 g/hl ’ | MEE1 25 g/hl |
| Alb 5 . | ND | - | 0 | |
| Alb 6 | - | ND | - | 0 |
| Rose 1 | - | ND | - | O |
| Rose 2 | - | O | - | 0 |
| Roșu 1 | - | - | O | |
| Roșu 2 | - | - | - | 0 |
| Roșu 3 | - | - | - | O |
De notat că manoproteinele extrase prin digestia enzimatică a pereților celulari de drojdie preîntâmpină formarea de cristale la doze de 25 g/hl.
Rezultatul observației vizuale poate fi de asemenea confirmat prin determinarea diferenței de concentrație a potasiului din vinuri în mg/l, înainte și după răcire, așa cum se menționează în tabelele de mai jos:
Rezultatele obținute cu vinul alb nr. 3
| Manoproteina | 0 g/hl | 15 g/hl | 25 g/hl |
| MEC | 400 | 350 | 150 |
| MEE1 | 400 | 250 | 0 |
| MEE2 | 400 | 200 | 0 |
| MEE3 | 400 | 300 | 0 |
Rezultatele obținute cu vinul roze nr. 1
| Modalități diferite | Potasiu mg/l | Acid tartric (mg/l) |
| Referință | 80 | 150 |
| MEC 25 g/hl | 30 | 50 |
| MEE1 25 g/hl | 0 | 0 |
Rezultatele obținute la vinurile roșii nr.1, 2 și 3 corespund unui vin roșu nerafinat, unui vin roșu rafinat cu gelatină la 10 g/hl și unui vin roșu rafinat cu albumină de ou la 10 g/hl.
| Diferența de concentrație a potasiului (mg/1 | |||
| Diferite modalități | Vin nerafinat | Vin rafinat cu gelatină | Vin rafinat cu albumină de ou |
| Referință | 90 | 110 | 180 |
RO 119628 Β1
Tabel (continuare)
| Diferența de concentra | ie a potasiului (mg/1 | ||
| Diferite modalități | Vin nerafinat | Vin rafinat cu gelatină | . Vin rafinat cu albumină de ou |
| Meta acid 15 g/hl | 70 | 70 | 90 |
| Meta acid 250g/hl | 0 | 0 | 0 |
| MEC 15 g/hl | 90 | 110 | 130 |
| MEC 25 g/hl | 50 | 50 | 70 |
| MEE1 15 g/hl | 30 | 70 | 70 |
| MEE1 25 g/hl | 0 | 0 | 0 |
| Clei 15 g/hl | 90 | 70 | 140 |
| Clei 25 g/hl | 30 | 50 | 50 |
Se va observa că acidul metatartric produce bune observații începând de la 25 g/hl. Manoproteinele extrase prin digestie enzimatică au, de asemenea, o eficiență excelentă la o doză de 25 g/hl care, din nou, este concentrația care permite o stabilizare completă a celor trei vinuri: alb, roze și roșu.
Manoproteinele extrase cu căldură și gumă arabică în cantități acceptabile nu inhibă total precipitarea tartrului.
3. Durata eficienței
Mai multe teste au făcut posibil să se compare eficacitatea acidului metatartric și manoproteinelor obținute prin digestie enzimatică.
Testul constă în menținerea unei probe tratate la 30°C timp de 10 săptămâni și apoi expunerea ei la temperatură joasă. Cantitatea de potasiu înainte și după expunerea la temperatură joasă face posibilă aprecierea stabilității tartrice a vinului tratat cu extract (MEE1) și a instabilității vinului de referință sau a vinului tratat cu acid metatartric. într-adevăr, în timpul depozitării lui la 30°C, acidul metatartric hidrolizează și își pierde capacitatea de protecție: în plus, el eliberează acidul tartric care crește starea de suprasaturație a vinului și chiar favorizează cristalizarea tartrului.
| Diferența de concentrație a potasiului (mg/l) după 6 zile la -4°C | |
| Referință | 200 |
| Meta acid 10 g/hl | 260 |
| MEE1 25 g/hl | 0 |
II. Stabilizarea proteinică
Stabilizarea proteinică a vinurilor se determină cu testul așa numit sub căldură, care implică supunerea vinului la o temperatură de 80°C timp de 30 min. Turbiditatea se măsoară prin analiza nefelometrică exprimată în unități NTU. Cantitatea de bentonită necesară se corelează, astfel încât gradul de turbiditate să rămână mai mic de 2 NTU.
Tabelul care urmează ilustrează rezultatele obținute la cele trei tipuri de vinuri tratate cu diferite manoproteine.
RO 119628 Β1
| Diverse modalități | Turbiditate (NTU) | Cantitatea de bentonită (g/hl) |
| Vinul de referință 1 | 12 | 80 |
| Vin 1 + MEC 25 g/hl | 12 | 80 |
| Vin 1 + MEE1 25 g/hl | 4,4 | 30 |
| Vin 1 + MEE2 25 g/hl | 4,2 | 30 |
| Vin 1 + MEE3 25 g/hl | 4,3 | 30 |
| Vinul de referință 2 | 23,1 | 120 |
| Vin 2 + MEC 25 g/hl | 23,4 | 120 |
| Vin 2 + MEE1 25 g/hl | 10,5 | 60 |
| Vin 2 + MEE2 25 g/hl | 10 | 60 |
| Vinul de referință 3 | 13,8 | 90 |
| Vin 3 + MEC 25 G/HL | 14 | 90 |
| Vin 3 ‘ MEE1 25 g/hl | 6,2 | 50 |
| Vin 3 + MEE3 25 g/hl | 5,8 | 50 |
In ceea ce privește manoproteinele extrase prin digestie enzimatică, rezultatele arată în mod clar reducerea cantității de bentonită necesară pentru obținerean stabilității vinurilor. Reducerea cantității de bentonită este de 50 %.
în acest mod, calitățile organoleptice sunt afectate într-un grad relativ minor, iar vinurile sunt în special stabilizate pe o perioadă lungă fără alterarea gustului, întrucât manoproteinele extrase prin digestie enzimatică sunt neutre ca gust.
Testele realizate arată în totalitate avantajul conferit de manoproteinele extrase prin digestie enzimatică atât în ce privește inhibarea sărurilor de tartru, cât și în ce privește stabilizarea proteinică a vinurilor albe, și aceasta folosind cantități mici.
Devine acum convenabil să se acorde în continuare atenție manoproteinelor extrase prin digestie enzimatică, pentru a ilustra fracțiunea ce devine cea mai eficientă atât în ce privește sărurile acidului tartric, cât și referitor la stabilizarea proteinică.
în final, compoziția preparatelor de manoproteine extrase la căldură și prin metoda enzimatică poate fi comparată în mod direct. Se va observa din tabelul următor că manoproteinele obținute prin digestie enzimaică au un conținut proteinic distinct mai înalt.
| Manoproteine | % proteine | % polizaharide | % manoză | % glucoza |
| extrase la căldură | 4,2 | 93,8 | 92 | 8 |
| extrase enzimatic | 15 | 83,2 | 100 | 0 |
Conținutul în proteină se determină prin metoda BRADFORD (1976), iar conținutul de polizaharide prin metoda cu fenol sulfuric (MONTREUIL și SPIK, 1963).
Compoziția glucidă hidrolizabilă a porțiunii de polizaharidă se determină prin cromatografie în faza gazoasă a monozaharidelor eliberate prin hidroliză cu acid trifluoracetic și derivați prin sililare (LLAUBERES, 1988).
RO 119628 Β1
Preparatele de manoproteine extrase la căldură (MEC) și manoproteine extrase pe cale enzimatică (MEE) se analizează în detaliu prin electroforeză cu gel de poliacrilamidă în condiții denaturante (SDS PAGE), permițând o separare moleculară ale cărei rezultate sunt redate în tabelul care urmează.
| Greutate moleculară în kda (kilodaltoni) | |
| MEC | MEE |
| 77,8 | 77,8 |
| 70 | |
| 44,1 | 44,1 |
| 41,6 | |
| 35,2 | 35,2 |
| 31,8 | 31,8 |
| 30,3 | |
| 27,5 | 27,5 |
| 25,2 | 25,2 |
| 23,2 | 23,2 |
| 21,3 | 21,3 |
| 19,8 | 19,8 |
| 18,4 | 18,4 |
| 17,2 | 17,2 |
| 16 | 16 |
| 15,2 | 15,2 |
- ‘â
Se poate observa absența proteinelor la 70 kda în MEE și absența proteinelor la 30,3 kda și 41,6 kda în MEC.
Proteinele specifice în MEE sunt apoi izolate prin distilare fracționată.
Primul test: Cromatografie pe DEAE sefaroză
Extractul MEE brut (100 mg) se solubilizează în 1 ml de tampon cu fosfat având pH = 8,0.
Coloana DEAE se spală și apoi se eluează, în faze, cu NaCI 0,25 mol/l. Se colectează 3 ml de fracțiuni, iar proteinele se determină prin măsurarea absorbției la 280 nm. Fracțiunile care corespund celor trei picuri sunt colectate, dializate în contra apei și liofilizate (conform fig. 4).
Se adaugă 25 g/hl la un vin care este apoi supus unui test caloric pentru a determina capacitatea de stabilizare proteinică. Rezultatele sunt specificate în fig. 5.
Se va observa capacitatea de stabilizare proteinică a fracțiunii eluate cu NaCI (0,25 mol/l și efectul slab al fracțiunii nereținute (FNR) și al fracțiunii cu 0,5 mol/l.
Este posibil să se determine conținutul în proteină și în polizaharidă al MEE și al fiecăreia din fracțiunile eluate.
RO 119628 Β1
Așa cum se poate vedea din tabelul care urmează, fracțiunea care este activă la 1
0,25 moli/l conține 16 % proteină, 78 % polizaharidă, iar randamentul său de extracție este de 60%. ’3
| Randament (%) | proteine (%) | polizaharide (%} | |
| FNR | 25 | 12 | 86 |
| 0,25 moli/l | 60 | 16 | 78 |
| 0,5 moli/l | 15 | 16 | 81 |
Este astfel necesar să se purifice fracțiunea de 0,25 mol/l NaCI, prin cromatografie9 de afinitate cu ajutorul concanavalinei A (con A), o lectină care se leagă într-un mod reversibil cu moleculele ce cuprind reziduri de a-a-D manopiranosil și α-D glucopiranosil. 11
Este astfel posibil să se separe proteinele și manoproteinele din această fracțiune specifică de 0,25 mol/l NaCI.13
Extractul cu 0,25 moli/l NaCI (60 mg) se solubilizează într-o soluție tampon de citrat cu pH=5 și se depozitează într-o coloană sefaroză cu Con A.15
După spălarea cu soluția tampon și eluarea proteinelor lotul de compuși se supune acțiunii unei soluții α-D - manosidă de 0,5 moli/l.17
Se eluează manoproteinele din gel. Se colectează 3 ml de fracțiuni, iar analiza prin absorbție la 280 nm produce rezultatele ilustrate de curba din fig. 6.19
Se colectează, se dializează contra apei și se liofilizează fracțiunile ce corespund fiecărui vârf.21
Fiecare fracțiune se majorează pentru a produce o cantitate de 25 g/hl.
Testul de căldura dă rezultatele din fig. 7.23
Fracțiunea reținută se eluează cu o α-D-manosidă de 0,5 moli/l.
Această fracțiune, împreună cu altele, se măsoară pentru a determina proteinele și 25 polizaharidele.
| Randament (%) | proteine (%) | polizaharide (%) |
| DEAE (0,25 moli/l) 60 | 16 | 78 |
| Con A (FNR) 45 | 20 | 21 |
| Con A (FR) 15 | 8 | 90 |
Fracțiunea activă reprezintă 15 % din MEE. Această fracțiune cuprinde 8 % proteine și 90% manoză. 33
Este posibil ca mai sus să se realizeze o electroforeza în gel (SDS PAGE), care ilustrează că manoproteina responsabilă de stabilitatea proteinică a vinurilor albe are o greutate 35 moleculară de 31,8 kda sau MP32. Aceasta este singura proteină a cărei concentrație crește în timpul purificării. 37
| Greutatea moleculară în kda | ||
| MEE | DEAE (0,25 mole/l) | Con A (FR) |
| 77,8 | 77,8 | |
| 53 |
RO 119628 Bl
Tabel (continuare)
| Greutatea moleculară în kda | ||
| MEE | . DEAE (0,25 mole/l) | Con A.(FR) |
| 44.1 | 44.1 | |
| 41,6 | ||
| 35,2 | 35,2 | |
| 31,8 | 31,8 | 31,8 |
| 30,3 | ||
| 27,5 | ||
| 25,2 | ||
| 23,2 | ||
| 21,3 | ||
| 19,8 | 19,8 | 19,8 |
| 18,4 | 18,4 | |
| 17,2 | 17,2 | 17,2 |
| 16 | 16 | 16 |
| 15,2 | 15,2 | 15,2 |
Electroforeza capilară confirmă că MP32 este prezent în proporție de 2% în MEC și de 14% în MEE, conform fig. 9.
în ceea ce privește stabilizarea tartrică, manoproteinele se separă prin cromatografie lichidă la presiune înaltă, pentru separare moleculară conform dimensiunii lor, în două fracțiuni care se dializează în contra apei și se liofilizează.
Fracțiunile obținute P1 și P2 se adaugă la un vin alb în cantități diferite. Vinurile tratate se supun unui test la rece, iar concentrarea în potasiu face posibilă sesizarea cristalizării tartrice.
După analiză se va observa că MEE inhibă cristalizarea tartratului de potasiu de la 15 g/hl. Prima fracțiune PI nu reușește să inhibe această cristalizare dar, în contrast, fracțiunea P2 permite o stabilizare tartrică la o cantitate de 5 g/hl.
Analiza proteinelor și polizaharidelor conținute în diferite fracțiuni dă următoarele rezultate:
| proteine (%) | polizaharide (%) | |
| MEE | 15 | 83 |
| P1 | 5,3 | 84.5 |
| P2 | 8,7 | 90,3 |
Fracțiunea P2, care permite stabilizarea tartrică, se purifică prin cromatografie de afinitate cu ajutorul concanavalinei (Con A) în două fracțiuni, una fiind o fracțiune reținută (FR) iar cealaltă o fracțiune nereținută (FNR) lectină, cele două fracțiuni fiind colectate, dializate și liofilizate. ---12
RO 119628 Β1
După adăugarea în cantități diferite la un vin, se confirmă că fracțiunea nereținută (FNR) nu contribuie la inhibarea cristalizării sărurilor acidului tartric.
Fracțiunea reținută (FR) face posibil să se prevină cristalizarea la un volum de 1,25 g/hl.
Compoziția fracțiunilor active poate fi analizată din nou.
| proteine (%) | polizaharide (%) | |
| P2 | 8,7 | 90,3 |
| FR con A | 2,5 | 97,5 |
| FNR con A | 12 | 34 |
Ca urmare, fracțiunea activă cuprinde 2,5 % proteine și 97,5 % polizaharide.
Este apoi necesar să se determine prin electroforeză pe gel, produselor moleculare ale fracțiunilor purificate.
| Greutate moleculară în kda (kilodaltoni) | |||
| MEE | P1 | P2 | FR con A |
| 77,8 | 77,8 | ||
| 53,3 | |||
| 44,1 | 44,1 | ||
| 41,6 | 41,6 | 41,6 | |
| 35,2 | 35,2 | ||
| 31,8 | 31,8 | 31,8 | 31,8 |
| 30,3 | 30,3 | 30,3 | |
| 27,5 | 27,5 | 27,5 | |
| 25,2 | 25,2 | 25,2 | |
| 23,2 | 23,2 | ||
| 21,3 | 21,3 | ||
| 19,8 | 19,8 | ||
| 18,4 | 18,4 | ||
| 17,2 | 17,2 | 17,2 | 17,2 |
| 16 | 16 | 16 | |
| 15,2 | 15,2 | 15,2 | 15,2 |
Fracțiunea activă conține astfel numai patru manoproteine a căror greutate moleculară este 41,6; 31,8; 17,2; 15,2 kda.
Singura proteină care crește în concentrație este cea de 41,6 kda. Ca urmare, aceasta este o manoproteină responsabilă de stabilizarea tartrică.
Această moleculă poate totuși să fie extrasă numai și exclusiv din pereții celulari ai drojdiilor printr-un compus de glucanază β-1-3 și β-1-6. __
RO 119628 Β1
Cele de mai sus explică de ce manoproteinele extrase prin digestie enzimatică au această capacitate dublă de stabilizare a vinurilor și de ce ele sunt de un interes atât de mare având în vedere că substanțele folosite în. acest procedeu au fost deja aprobate de autoritățile care se ocupă de acest sector alimentar.
Claims (6)
- Revendicări1. Metodă de tratare a vinului în vederea stabilizării față de sărurile tartrice și față de proteine, caracterizată prin aceea că aceasta cuprinde adăugarea, la vinul respectiv, a unor manoproteine extrase din pereții celulari ai drojdiilor, prin digestia enzimatică cu ajutorul unui amestec de β-1-3 și β-1-6 glucanaze-
- 2. Metodă de tratare a vinului conform revendicării 1, caracterizată prin aceea că drojdiile aparțin speciei Saccharomyces cerevisiae.
- 3. Metodă de tratare, conform revendicărilor 1 sau 2, caracterizată prin aceea că manoproteinele adăugate în vin sunt într-o cantitate mai mică de 30 g/hl.
- 4. Procedeu de extracție a manoproteinelor prin digestie enzimatică a drojdiilor pentru aplicarea tratării, conform oricăreia din revendicările 1...3, caracterizat prin aceea că.- se incubează pereții celulari ai drojdiilor într-un mediu apos în prezența unui amestec de β-1-3 și β-1-6 glucanaze;- se separă materialele solide;- se concentrează faza lichidă în special prin ultrafiltrare;
- 5. Procedeu de extracție a manoproteinelor prin digestie enzimatică a drojdiilor pentru aplicarea tratării, conform revendicării 4, caracterizat prin aceea că acesta cuprinde o fază suplimentară de uscare a produsului obținut, în special uscarea prin congelare sau atomizare, de exemplu, în scopul manipulării ușoare.
- 6. Manoproteină obținută prin procedeul definit în revendicarea 4 sau 5, destinată realizării tratării vinului definită în revendicările 1...3, caracterizată prin aceea că analiza prin cromatografie lichidă la presiune înaltă, pentru separare moleculară, arată un pic caracteristic (Y), iar analiza prin electroforeză SDS PAGE arată prezența a două proteine de 41600 și 31800 daltoni, iar analiza prin electroforeză capilară arată prezența unui pic caracteristic, ce corespunde manoproteinei de 31800 daltoni.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR9413261A FR2726284B1 (fr) | 1994-10-31 | 1994-10-31 | Produit biologique pour la stabilisation physico-chimique d'un vin |
| PCT/FR1995/001426 WO1996013571A1 (fr) | 1994-10-31 | 1995-10-27 | Produit biologique pour la stabilisation physico-chimique des vins |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RO119628B1 true RO119628B1 (ro) | 2005-01-28 |
Family
ID=9468542
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RO97-00827A RO119628B1 (ro) | 1994-10-31 | 1995-10-27 | Metodă de tratare a vinului cu manoproteine |
Country Status (17)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6139891A (ro) |
| EP (1) | EP0789750B1 (ro) |
| AT (1) | ATE202598T1 (ro) |
| AU (1) | AU696819B2 (ro) |
| BG (1) | BG63507B1 (ro) |
| CA (1) | CA2203925A1 (ro) |
| DE (1) | DE69521520T2 (ro) |
| ES (1) | ES2160178T3 (ro) |
| FR (1) | FR2726284B1 (ro) |
| GR (1) | GR3036698T3 (ro) |
| HU (1) | HUT77456A (ro) |
| MD (1) | MD1620F2 (ro) |
| NZ (1) | NZ295194A (ro) |
| PT (1) | PT789750E (ro) |
| RO (1) | RO119628B1 (ro) |
| WO (1) | WO1996013571A1 (ro) |
| ZA (1) | ZA959224B (ro) |
Families Citing this family (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1997005272A1 (en) * | 1995-07-25 | 1997-02-13 | Quest International B.V. | Glycoprotein from yeast |
| EP0790316A3 (en) * | 1996-02-16 | 1999-02-10 | Quest International B.V. | Emulsifier from yeast |
| FR2750434B1 (fr) * | 1996-06-26 | 1998-08-21 | Applic De Rech Et De Conseils | Produit de stabilisation proteique des vins |
| FR2800076B1 (fr) * | 1999-10-22 | 2003-11-14 | Lesaffre & Cie | Mannoproteines solubles |
| NZ555707A (en) * | 2004-12-23 | 2010-03-26 | Dsm Ip Assets Bv | Process to improve activity of mannoprotein as wine stabiliser |
| WO2006067145A1 (en) * | 2004-12-23 | 2006-06-29 | Dsm Ip Assets B.V. | New mannoprotein with full solubility in wine and its application in the stabilisation of wine |
| JP5296531B2 (ja) | 2005-05-05 | 2013-09-25 | センシエント フレイバーズ エルエルシー | βグルカン及びマンナンの製造 |
| AU2008240794B2 (en) | 2007-04-20 | 2013-10-10 | Rymco International Ag | Peptide mixture as wine stabiliser |
| NZ579756A (en) * | 2007-04-20 | 2012-01-12 | Dsm Ip Assets Bv | Mannoprotein liquid formulation which is free of protease activity and uses thereof in the stabilisation of wine |
| FR2921260B1 (fr) | 2007-09-25 | 2012-08-24 | Lesaffre & Cie | Utilisation d'un nouvel agent naturel dans des compositions cosmetiques |
| WO2009092832A1 (es) * | 2008-01-21 | 2009-07-30 | Pedro Ignacio Gagliano | Procedimiento de inhibición de las precipitaciones tartáricas en el vino |
| ITPD20080022A1 (it) * | 2008-01-23 | 2009-07-24 | Enologica Vason Srl | Metodo di produzione di un prodotto per la stabilizzazione tartarica del vino, prodotto per la stabilizzazione e procedimento di stabilizzazione mediante detto prodotto. |
| US20120045542A1 (en) * | 2009-05-18 | 2012-02-23 | Dsm Ip Assets B.V. | Process to produce a wine or fruit juice stabliser |
| CN102051400B (zh) | 2009-11-06 | 2013-05-15 | 安琪酵母股份有限公司 | 一种酵母甘露糖蛋白产品的制备方法 |
| CN102168002B (zh) * | 2011-03-11 | 2012-07-18 | 杭州欧博酩庄酒业有限公司 | 一种葡萄酒酿造工艺 |
| FR3034101B1 (fr) | 2015-03-24 | 2019-07-12 | Lesaffre Et Compagnie | Extrait de levure et son utilisation pour le collage de mouts et de boissons |
| EP3138573A1 (en) | 2015-07-09 | 2017-03-08 | Danstar Ferment AG | Compositions and methods for stimulating immune responses in human and/or animal |
-
1994
- 1994-10-31 FR FR9413261A patent/FR2726284B1/fr not_active Expired - Lifetime
-
1995
- 1995-10-27 AU AU38483/95A patent/AU696819B2/en not_active Ceased
- 1995-10-27 ES ES95936620T patent/ES2160178T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1995-10-27 HU HU9800151A patent/HUT77456A/hu unknown
- 1995-10-27 WO PCT/FR1995/001426 patent/WO1996013571A1/fr not_active Ceased
- 1995-10-27 NZ NZ295194A patent/NZ295194A/xx not_active IP Right Cessation
- 1995-10-27 RO RO97-00827A patent/RO119628B1/ro unknown
- 1995-10-27 CA CA002203925A patent/CA2203925A1/fr not_active Abandoned
- 1995-10-27 MD MD97-0226A patent/MD1620F2/ro unknown
- 1995-10-27 AT AT95936620T patent/ATE202598T1/de not_active IP Right Cessation
- 1995-10-27 EP EP95936620A patent/EP0789750B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 1995-10-27 PT PT95936620T patent/PT789750E/pt unknown
- 1995-10-27 DE DE69521520T patent/DE69521520T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1995-10-27 US US08/817,937 patent/US6139891A/en not_active Expired - Fee Related
- 1995-10-31 ZA ZA959224A patent/ZA959224B/xx unknown
-
1997
- 1997-04-10 BG BG101400A patent/BG63507B1/bg unknown
-
2001
- 2001-09-24 GR GR20010401555T patent/GR3036698T3/el not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| NZ295194A (en) | 1999-01-28 |
| ZA959224B (en) | 1997-04-10 |
| US6139891A (en) | 2000-10-31 |
| AU3848395A (en) | 1996-05-23 |
| CA2203925A1 (fr) | 1996-05-09 |
| MD970226A (ro) | 1999-05-31 |
| EP0789750B1 (fr) | 2001-06-27 |
| DE69521520D1 (de) | 2001-08-02 |
| DE69521520T2 (de) | 2002-04-25 |
| BG101400A (en) | 1997-11-28 |
| ES2160178T3 (es) | 2001-11-01 |
| GR3036698T3 (en) | 2001-12-31 |
| WO1996013571A1 (fr) | 1996-05-09 |
| ATE202598T1 (de) | 2001-07-15 |
| FR2726284A1 (fr) | 1996-05-03 |
| PT789750E (pt) | 2001-12-28 |
| MD1620F2 (ro) | 2001-02-28 |
| EP0789750A1 (fr) | 1997-08-20 |
| FR2726284B1 (fr) | 1996-12-27 |
| AU696819B2 (en) | 1998-09-17 |
| BG63507B1 (bg) | 2002-03-29 |
| HUT77456A (hu) | 1998-04-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RO119628B1 (ro) | Metodă de tratare a vinului cu manoproteine | |
| Neumann et al. | Purification and properties of yeast invertase | |
| Vincenzi et al. | Foamability of Prosecco wine: Cooperative effects of high molecular weight glycocompounds and wine PR-proteins | |
| Mesquita et al. | Effect of wine composition on protein stability | |
| Fishman et al. | Effects of leukocytes on brain metabolism in granulocytic brain edema | |
| Shoseyov et al. | Endo-β-glucosidase from Aspergillus niger grown on a monoterpene glycoside-containing medium | |
| Canals et al. | Protein fraction analysis of white wine by FPLC | |
| Yokotsuka et al. | Polyphenol oxidase from grapes: precipitation, re-solubilization and characterization | |
| Eifler et al. | The lectins from Agaricus edulis. Isolation and characterization | |
| Kadner et al. | A Repressible Alkaline Phosphatase in Neurospora crassa: II. Isolation and Chemical Properties | |
| Bush et al. | Comparison of the properties of the pectin transeliminases of Penicillium digitatum and Penicillium italicum | |
| Hultin et al. | Specific unmasking of ribosomal proteins under the influence of chelating agents and increased ionic strength | |
| Botes et al. | Kaffircorn malting and brewing studies XVII—Purification and properties of sorghum malt α‐amylase | |
| Salazar et al. | Protein stabilization in sparkling base wine using zirconia and bentonite: influence on the foam parameters and protein fractions | |
| Jiang et al. | De‐esterification and transacylation reactions of pectinesterase from jelly fig (Ficus awkeotsang Makino) achenes | |
| Ogura et al. | Studies on chlorophyllase of tea leaves | |
| Vidmar et al. | Cellulolytic complex of Aspergillus niger under conditions for citric acid production. Isolation and characterization of two β-(1→ 4)-glucan hydrolases | |
| Nakanishi et al. | Characterization of thermostable invertase from wine grapes | |
| HSU et al. | Effects of variety, maturity and processing on pear juice quality and protein stability | |
| Sumida et al. | Purification and some properties of trehalase from Chaetomium aureum MS-27 | |
| Candiano et al. | Determination of a glycosyl subunit of human serum albumin by concanavalin A-Sepharose | |
| Nakanishi et al. | Purification and some properties of thermostable invertase from wine | |
| Luis | A study of proteins during grape maturation, juice preparation and wine processing | |
| Verity et al. | Membrane permeability of hepatic mitochondria and lysosomes studied by structure-linked enzyme changes | |
| CN112142866B (zh) | 一种具有降血糖效果的海蓬子多糖的提取方法 |