PT96016B

PT96016B - Processo para a preparacao de uma composicao farmaceutica para a aplicacao subcutanea ou intramuscular contendo polipeptidos

Info

Publication number: PT96016B
Application number: PT96016A
Authority: PT
Inventors: Eric-Paul Paques
Original assignee: Centeon Pharma Gmbh
Priority date: 1989-11-29
Filing date: 1990-11-28
Publication date: 1998-06-30
Also published as: AU657466B2; JP3143470B2; ES2057339T3; DK0430200T3; IE64080B1; KR910009246A; JPH03170437A; DE3939346A1; CA2030988A1; CA2030988C; DE59006032D1; IE904292A1; US5691312A; PT96016A; ATE106746T1; EP0430200B1; AU6702990A; EP0430200A1

Description

SO PARA A PREPARAÇÃO DE UMA COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA PARA APLICAÇÃO SUBCUTÂNEA OU INTRAMUSCULAR CONTENDO POLIPÉPTIDOS

D E S C R I ÇÃO

A invenção refere-se a uma composição farmacêutica líquida para aplicação subcutânea (sc) ou intramuscular (im), contendo um polipéptido e pelo menos um aminoãcido, a um processo para a sua preparação, bem como ã utilização de um aminoácido numa solução de uo polipéptido, que seja adequado para aplicação sc ou im.

As formas de administração de proteínas de utilidade terapêutica estão limitadas, com poucas excepçoes, ã aplicaçao intravenosa. A aplicação oral de polipéptidos é em muitos casos mal sucedida, uma vez que os polipéptidos se degradam no tracto gastro-intestinal* Tentou-se jã, com a ajuda de vários métodos, por exemplo por microencapsalação em liposomas, desenvolver formas orais de administração de polipéptidos. Até agora, contudo, estes métodos so sao adequados para polipéptidos de baixo peso molecular.

Por esta razão, tem-se tentado administrar os polipéptidos por via sc ou im. Verificou-se contudo nessas tentativas que a aplicaçao sc ou im, em comparação com a aplicação intravenosa (iv) clássica, oferece uma multo

pior biodisponibilidade oa pode originar reacçoes locais de intolerância.

As formas de aplicação se e im oferecem contado potencialmente vantagens consideráveis em comparação com a aplicação iv* Ê» em particular, o caso da possibilidade de am auto tratamento para o paciente e de um efeito terapêutico de maior duração.

Na W0 86/06962 e EP-A-0 292 908 encontram-se descritos métodos para a aplicação sc oa ím de proteínas na presença de hidroxílamina ou metilamina* Sabe-se contudo» que estas substâncias» devido ã sua assimilibilidade limitada, só podem ser utilizadas em certas condições.

objectivo da presente invenção foi por isso o de conseguir um meio de tratamento contendo um polipéptido que seja adequado para aplicação sc ou im.

Conseguiu-se atingir este objectivo, introduzindo na solução que contêm o polipéptido pelo menos um aminoácido, um saí» um derivado ou um homólogo de um aminoécido. Pe preferência utiliza-se um aminoácido de configuração D ou L.

Verificou-se surpreendentemente, que a adição de uma tal substância melhora drasticamente a biodisponibilidade e a assimilibilidade de polípéptidos administrados por via sc ou im» possibilitando assim estas formas de aplicação,

Âs substâncias apropriadas para os fins de acordo com a invenção sao por exemplo lisina, ornitina» arginina, ácido diaminoplmélico, agmatina, creatinina, ácido guanidinoacêtico» acetilornitina, citrulina» ãcido arginino-succinico» ãcido tranexâmico ou acido epsilon-aminocapróico. Uma característica comum a todas elas é a presença de um grupo vâsico, na forma de um grupo amino ou guanidino.

Bevelou-se particularmente apropriada uma combinação de arginina e lisina, de preferência de 0*001 k 1 mol/1, em especial de 0.01 a 0*5 mol/1. A bioáisponibilida-

de dos polipeptídos aplicados por via sc oa im aumenta consideravelmente com uma tal adição, em comparação com uma solução que apenas contêm o polipeptido e, eventualmente, aditivos usuais como estabilizadores.

Esta influência benéfica das substâncias referidas sobre a biodisponibilidade e/ou melhoramento da assimilibilidade, observou-se em especial para a t-PA (”tissue plasminogen activator”, um mutante da t-PA, hirudina, uroquinase» AT III (anti-trombina III), factor XIII, EPO (eritropoietina), factor de von Willebrand e PPA (proteína 4 de placenta). Â actividade das proteínas, misturadas com as substâncias indicadas de acordo com a invenção, manteve-se inalterada mesmo após liofilizaçao e dissolução em agua esterilizada, antes da utilização»

Numa forma de execução do processo de acordo com a invenção, dialíza-se a solução contendo o polipeptido contra um tampão, por exemplo um tampão de fosfato Iris-glicina, acetato ou citrato, com uma concentração de 0.001 a 0.1 mol/1, de preferência de 0.01 a 0.5 mol/1, a um valor de pH de 2 a 10, de preferência de 4 a 9, contendo pelo menos um amínoécido, que pode conter um outro grupo amino ou guanidino, ou um derivado de um aminoácido, por exemplo lisina, ornitina, arginina, acido diaminopimélico, agmatina, creatinina, ãcido guanidinoacético, acetilornitina, citrulina, ãcido arginino-succínlco, ãcido tranexãmico ou ãcido epsilon-aminocapróico, de preferência lisina, ornitina ou arginina, numa concentração de 0.005 a 0.5 mol/1, de preferência de 0.01 a 0.3 mol/1, a uma temperatura âe 2 a 30°C, de preferência de 4 a 15°C.

A condutividade da solução de diálise é, de preferência, de 1 a 50 mSi (20°€), em especial de 5 a 30 mSi (20°C). Â osmodalidade situa-se entre 10 1 2000 mOsmol de preferência de 100 a 1000 mOsmol.

Terminada a diálise, ajusta-se a solução contendo o polipeptido, por concentração ou diluição, até â concentração ou diluição, atê ã concentração final dese-

jada. Filtra-se em seguida a solução em condições estéreis, coloca-se em recipientes e, conforme o caso, liofiliza-se âs soluções de acordo com a invenção são adequadas para utilização tanto em medicina humana como veterinária» Uma vez que se adicionam exclusivamente substâncias fisiologicamente assimiláveis, não se verificam, na aplicação das soluções de acordo com a invenção, nem inflamações, nem irritação da pele, nem danificação dos vasos sanguíneos·

Com as composições farmacêuticas de acordo com a invenção á agora possível, por aplicação sc ou im, atingir concentrações de polipeptidos no plasma, que possibilitam não só uma acção profilática como também terapêutica.

Os exemplos seguintes destinam-se a ilustrar a invenção»

Exemplo 1

Preparaçao das soluções de proteína para aplicação sc e im

1» Λ r-t-PA(^RÁcetilase) comprou-se à firma Boehringer Ingelheím

2. A uroquinase (UK) (^RActosol) comprou-se ã firma BehriírgwerKe

3» F XIII (^RFibrogramina) comprou-se â firma BeringwerKe

4» A antitrombina III (AT III) (^RKybernina) comprou-se ã firma BehringwerKe

5» A r-hiridina preparou-se de acordo com o processo da EP 0 316 650

6. 0 mutante r-t-PA(N^s 1) preparouse de acordo com o processo da EP 0 227 462

7» 0 factor de von Willebrand (vW) preparou-se de acordo com o processo da DE 39 04 354 (I mg de vW corresponde a 100 U de vW-qntigene)

8, Λ ΡΡ4 preparou-se de acordo coa o processo de EP 0 123 307

9» A r-eritropoietina (EPO) preparou-se de acordo com o processo da EP 0 123 307 (1 mg de EPO corresponde a 80 000 0 da EPO-antigene)

Âs proteínas 1 a 4 dissolveram-se ea água destilada.

Em seguida, dialisaram-se as proteínas 1 a 9 contra os seguintes tampões (Tabela 1).

μ β

μ ra

Λ

Φ

-PA Mutaate Uroquina- FXIII ATUI r-hirudina vW PP4 rEPO

* μ

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Após a diálise esterilizaram-se, em condiçSes estéreis, as soluções obtidas e congelaram-se a -20°C antes da utilização.

Exemplo 2

Aplicou-se 1 ml d cada uma das soluções preparadas no exemplo 1, por via sc e im (biceps femoralis) a animais (ratos ou coelhos), fia aplicação im distribuxu-se o volume total de I ml por 4 injecçoes.

Trataram-se os animais do seguinte modo:

Número de animais

Substancia Dose ratos coelhos testada por grupo

r-t-PA	3,3/8.2 mg/Xg	2	3
uroquinase	5 mg/Kg		3
F XIII	10 mg/Kg		3
AT III	10 mg/Xg		3
r-hirudina	10 mg/Xg	3
mutante de r-t-PA	1.7 mg/Xg	2
factor de von Willebrand	300 E/Kg		3
PP4	10 mg/Xg	3
EPO	2000 E/Xg		3

Apos 0, 15, 30, 60, 120, ISO, 240 e 340 minutos (mutante r-t-PA) ou 0» 30, 60, 120, 180, 240, 300, 360, 420 e 450 minutos (r-t-PA, hirudina, uroquinase, AT III» F XIII, factor de von Willebrand, EPO, pp4) retiraramse amostras de sangue (4· citrato). Centrifugaram-se as amostras de sangue imediatamente a seguir e congelou-se o plasma de citrato resultante a -20°C, antes da determinação. A concentração no plasma das substâncias a testar determinou-se do seguinte modo;

r-t-PA;	ELISA	(Fa. Biopool, Suécia)
Uroquinase;	ELISA	(Fa. Biopool, Suécia)
F XIIIj	teste	de actividade(Fa, BehringwerKe)
Ãntitromnina III B;	ELISA	(Fa, BehringwerKe)
r-hirudina:	ELISA	(Fa. BehringwerKe)
Mutante de r-t-PÂ;	ELISA	(Fa. Biopool, Suécia)
factor de von
Willebrand:	ELISA	(Fa. Stago, França)
PP4;	ELISA	(Fa. BehringwerKe)
r- eritropoietina;	ELISA	(Fa, BehringwerKe)

Os dados obtidos representaram-se graficamente como se mostra nas figuras 1 e 2. Es seguida calculou-se a área sob a curva (AUC » área sob a curva). Este valor exprime a biodisponibilidade e possibilita a comparação entre as diversas formas de administração. Os resultados mostra» que a aplicação das soluções de acordo com a invenção, com excepção da uroquinase e da hirudina, garantem uma biodisponibilidade claramente superior em especial por aplicação sc.

Descobriu-se surpreendentemente aue os sangramentos ocorrentes na aplicação sc e im de hirudina e de uroquinase, ao local de aplicação, ocorrem menos frequentemente com as formas de administração de acordo com a invenção, do que quando estas substâncias se aplicam nas formas de administraçao usuais.

0.05 M Tris

0.1 H NaCl

Hirudina

Uroquinase

Números de animais com sangramentos im sc

0.2 K arginina 0.2 H lisisa pH 7.5 0.05 H Tris O.lfí NaCl pH 7.5

0.2 M arginina 0.2 M lisina pH 7,5

3/3 2/3 (umanimal morreu em consequência dos sangramentos)

0/3 0/3

2/3

1/3

0/3

	I. Biodisponíbilidade da	t t-PÂ no rato (ratazana)
Tampão	Tipo de aplicação	n	ABC +	desvio. (%)
1	im	2	358 £	10	%
	SC	2	36 £	13	%
2	im	2	386 £	22
	SC	2	53 £	14	%
3	im	2	756 £	2	2
	SC	2	423 £	3	2
4	im	2	669 £	17	X
	SC	2	382 *	11	2
5	im (todos os animais	morreram)
	sc ( ”		)
7	im	2	184 +	18	%
	sc	2	87 £	2	%
8	xm	2	600 £	4	X
	Sc	2	320 £	12	%
9	io	2	610 £	10	2
	sc	2	290 4·	11	T

Tampao 1	Tipo de aplicação im	n 2	AUC 113	+ desvio
±	2 %
	sc	2	13	±	20 %
2	im	2	295	±	0.5
	sc	2	161		12 %
3	im	2	1524		13 %
	sc	2	1119		14 %
4	im	2	1414	+.	2 %
	sc	2	127?	±	21 %
5	im	2	32		5 %
	sc	2	34	+	10 %

im (todos os animais morreram imediatamente após a aplicação)

	sc (	n				)
7	im	2	30		12	%
	sc	2	39	+	9	%

III. Biodisponibilidade da antitrombina III (em coelhos)

Tampao	Tipo de aplicação	n	AUC 4- desvio <%)
1	im	3	450.000 + 28
	sc	3	57.000 ± 19
3	im	3	601.000 4· 15 «MK
i	sc	3	116.400 + 18

Tampão	Tipo áe aplicação	n	AOC «F desvio (%)
1	im	3	228*000	+ 25
	sc	3	35.000	* 12
3	im	3	60.600	± 23
	sc	3	62.000	* 20
V. Biodísponibilidade áe factor	áe von Willebraná	(em coelhos)
Tampão	Tipo áe aplicação	n	AUC + desvio (2)
1	ím	3	231 + «awA	14
	sc	3	61 ±	20
3	im	3	715 +	16
	sc	3	12 *	14

Claims

R Ε I V 1Κ D I C A ç δ E s — Jfi a.

Processo para a preparação de ama coaposlção farmacêutica para aplicaçao subcutânea ou intramuscular. contendo um polipeptido, caracterizado por se introduzir numa solução desse polipeptido pelo menos um aminoãcido ou um sal, um derivado ou um homologo de um aminoãcido.

- 2^a Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por o aminoãcido ter a configuração D ou L.

- 3^â Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por o aminoãcido ser um aminoãcido básico,

- 4^a Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por o aminoãcido ser lisina,ornitina, arginina, ãcido diaminopimelico, ágmativa, creatinina, ãcido guanidinoacético, aeetilornitina, citrulina, ãcido arginino succínico, ãcido tranexâmico ou ãcido epsiton-aminocaproico,

- 5^a Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por se utilizar arginina e lisina.

- 6^a Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por se introduzir o aminoãcido na solução numa concentração de 0,001 a 1 raol/I.

- 13 - 7^â Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por se introduzir o aminoácido numa concentração de 0,01 a 0,5 mol/1.

- 8^ã Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por a proteína (polipéptido) contida na composição farmacêutica ser t-PA, um mutante de t-PA, hirudina, uroquinase, AT III, F XIII, EPO, facotr de von Willebrand ou PP4.

A requerente reivindica a prioridade do pedido alema apresentado em 29 de Novembro de 1989, sob o N^s. P 39 39 346.1.