PT95955B

PT95955B - Processo de fabrico de um material para osteoplastia a partir de tecido osseo natural

Info

Publication number: PT95955B
Application number: PT95955A
Authority: PT
Inventors: Robert Boniface; Michel Faurie; Pablo Goldschmidt; Jean-Pierre Lontrade; Jacques Luyckx
Original assignee: Transphyto Sa
Priority date: 1989-11-22
Filing date: 1990-11-21
Publication date: 1998-01-30
Also published as: CA2069450C; ES2084713T3; ATE133076T1; CA2069450A1; DE69024970D1; GR3019166T3; WO1991007194A1; US5585116A; DE69024970T2; CN1052430A; FR2654625A1; BR9007861A; FR2654625B1; KR0169328B1; JP3101739B2; RU2104703C1; AU6885891A; EP0502055A1; OA09699A; TR25032A

Description

MEMÓRIA DESCRITIVA presente invento refere-se ao processo de fabrico de um material destinado à osteoplastia, bem como a um processo para a sua elaboração a partir de tecido ósseo de origem humana ou animal. Tem como objectivo, essencialmente, colocar à disposição dos cirurgiões, um material de substituição do osso, que seja biocompativel, não antigénico, osteocompatível, osteointegrável, etc..

Este invento tem como finalidade a produção de enxertos, retalháveis com a forma do defeito ósseo, permitindo aos cirurgiões utilizar um tal enxerto como alternativa quer ao auto-enxerto, permitindo assim evitar o segundo local operatório, quer ao alo-enxerto, devido aos inconvenientes e riscos que ele representa.

Este material está vantajosamente melhorado em relação aos da arte anterior devido ao seu processo de fabrico, partieularmente bem adaptado para fazer um enxerto ósseo em cirurgia reconstrutiva, traumatológica, ortopédica, maxilofacial ou mandibular, bem como em cirurgia dentária ou veterinária e, de uma maneira geral, cada vez que o local ósseo necessita de um enxerto.

A utilização de tecido ósseo de reposição ou de substituição não é uma técnica nova, datando as primeiras publicações científicas dos anos 1800 tendo-se, desde então, multiplicado: elas referem-se aos aio-enxertos e aos xeno-enxertos, cujos conteúdos relativos em minerais e proteínas podem variar em quaisquer proporções, segundo os processos. Paralelamente e posteriormente ao uso destes substituintes de osso de origem humana e animal, observou-se o desenvolvimento da utilização de enxertos de natureza mineral: corais, hidroxiapatites, cerâmicos, ou de natureza sintética, como os materiais poliméricos biodegradáveis.

Actualmente, as pesquisas efectuadas neste domínio, orientam-se no sentido da utilização de materiais mais próximos do osso, e especificamente do osso humano na sua estrutura e na

735

Ε 16493

-3sua composição, a fim de favorecer a integração do enxerto ósseo, que passa pelo reconhecimento pelo organismo, da nova estrutura implantada, e a sua colonização pelo mecanismo denominado de substituição rasteira, osso é um tecido vivo, em constante renovação, que passa pela destruição e reconstrução, simultâneas, da matéria óssea. No processo normal, mas também quando se implanta um material estranho, os osteoclastos reabsorvem o tecido antigo dando lugar a uma lacuna na qual os osteoblastos elaboram o tecido novo. Está sempre mantido o equilíbrio entre as quantidades de osso reabsorvido e as quantidades de osso formado de novo.

É óbvio que quanto mais a estrutura implantada se aproxima da do osso normal, mais facilitado vai estar este fenómeno.

É por isso que se prefere, actualmente, preparar materiais de substituição do osso a partir de tecidos ósseos naturais, que são, de preferência, de origem animal por razões éticas e práticas.

Sabe-se, de uma maneira geral, que uma desmineralização parcial favorece a integração de um enxerto ósseo. Este, é seguido, então, de diferentes etapas complementares que visam quer desproteinizar completamente o osso, quer actuar sobre a natureza das proteínas que ficam ainda ligadas à matriz óssea, quer ainda aumentar este teor em proteinas.

De entre a arte anterior citaremos, em particular, a patente americana U.S. 4 394 370 que descreve a fusão numa massa esponjosa, por meio de um ligante de glutaraldeído possuindo um efeito reticulante, de uma mistura constituída por osso pulverulento, desmineralizado, de origem humana e pó de colagénio reconstituído.

A Patente americana U.S. 4 743 259 combina uma desmineralização por ácido clorídrico com um enriquecimento em proteínas efectuado sobre uma primeira fracção de osso desmineralizado, por meio das proteínas extraídas de uma segunda fracção pela guanidina.

735

Ε 16493

-4Por outro lado, os pedidos de patentes francesas publicadas sob os números 2 582 517 e 2 582 518 propõem tratar fragmentos de osso, retirados antecipadamente de animais, mais particularmente de bovinos, pela desmineralização parcial e tanagem com o auxílio de glutaraldeído. Os elementos ósseos destinados a serem implantados pelo cirurgião, são recortados com a forma apropriada num osso de bovino, o qual foi submetido previamente a um tratamento, compreendendo uma etapa de deslipidação ou desengorduramento por um solvente orgânico, tal como etanol, uma etapa de desmineralização por um agente de extracção de cálcio, tal como ácido clorídrico, e uma etapa de tanagem com glutaraldeído, bem. como diversas lavagens.

A descrição destes últimos pedidos de patentes dão a entender que esta tanagem tem uma acção benéfica sobre as propriedades do osso tratado, pelo facto de que favorece uma reticulação das cadeias macromoleculares. Ora, constatou-se agora, que, ao contrário e em oposição às sugestões da arte anterior, o tratamento com glutaraldeído não provoca diminuição sensível das propriedades imunogénicas, enquanto que a re-habitação do osso implantado não é fornecida, como desejado, para assegurar a integração do enxerto ósseo. Além disso, os compostos químicos, como o glutaraldeído, têm o inconveniente de serem biologicamente tóxicos.

No início do presente invento, pôde-se observar que é essencial, para obter uma boa integração do enxerto ósseo, conservar o colagénio na matéria óssea, mantendo-o sob a forma específica que ele apresenta no osso natural, principalmente em colagénio do tipo I, permitindo conservar, simultaneamente, o aspecto microscópico do osso, e de lhe manter, assim, a sua estrutura espacial para suporte de uma colonização celular ulterior. Pôde-se observar, igualmente, que os tratamentos da arte anterior têm sensivelmente o mesmo efeito sobre o colagénio do osso do que sobre as outras proteínas que eles visam eliminar ou desnaturar, para se libertarem, da sua antigenicidade.

invento tem, portanto, como objecto, um processo de

735

E 16493

-5tratamento de um tecido ósseo de origem humana ou animal, que conduz a um material de substituição do osso, caracterizado por se conservar a estrutura óssea de origem, integrando colagénio do tipo I nao desnaturado, mas isento das proteínas antigénicas. Este invento resulta da descoberta surpreendente de que é possível efectuar sobre os tecidos ósseos naturais, uma etapa de extraeção selectiva das proteínas antigénicas, preservando o colagénio de estrutura.

Mais precisamente, o processo de acordo com o invento, é caracterizado por comportar pelo menos uma etapa de extraeção e/ou desnaturação selectiva das proteínas de estrutura, não colagénicas, efectuada por meio de um agente de extraeção selectiva ã base de ureia. A ureia é utilizada vantajosamente, no quadro do presente invento, sob a forma de uma solução aquosa, com uma concentração compreendida, geralmente, entre 2 e 10 M, e de preferência entre 5 e 8 ΜΑ sequência analítica do processo, de acordo com o invento, implicando a utilização da ureia ou de um agente de extraeção análogo, mostra que se provocam, assim, reacções que tendem a romper as cadeias macr©moleculares das proteínas indesejáveis que subsistem na estrutura do osso original, após as operações de deslipidação e de desmineralização parcial, em si mesmas clássicas, enquanto que o colagénio da estrutura não é praticamente atacado.

Uma etapa de lavagem ulterior, em si própria clássica, permite eliminar estas proteínas da matéria óssea no decurso do tratamento, selectivamente em relação ao colagénio de estrutura não desnaturado. Na realização do processo, de acordo com o invento, esta etapa de lavagem é efectuada, vantajosamente, a uma temperatura compreendida entre 30°C e 60°C, e de preferência da ordem dos 45°C a 55°C. Consegue-se deste modo, de uma forma benéfica para as propriedades finais da matéria a implantar em cirurgia óssea, um compromisso vantajoso entre a eliminação desejável das proteínas e a conservação do colagénio sob a forma não fanada.

735

Ε 16493

6Segundo as caracteristicas secundárias do invento, o processo pode implicar uma repetição da etapa essencial de extracção selectiva pela ureia, vantajosamente combinada com um outro agente capaz de romper as pontes de dissulfureto, tal como o mercaptoetanol, sendo esta etapa seguida, de cada vez, de uma etapa de lavagem apropriada.

Por outro lado, o processo global pode comportar, além disso, diversas etapas que são por si só clássicas, e nomeadamente de entre estas, uma etapa de extracção por um solvente iónico, constituído em particular por uma solução aquosa de um sal, tal como o cloreto de sódio.

Deve-se notar que, na realização prática do processo, de acordo com o invento, os agentes de extracção utilizados podem ser comodamente escolhidos de entre os compostos que não apresentam qualquer toxicidade relativamente ao organismo, o que não é o caso, por exemplo, do glutaraldeido utilizado na arte anterior.

Nos seus modos de concretização preferidos, o processo, acordo com o invento, condu2 a uma matéria óssea, na qual técnicas usuais de análise permitem revelar a presença colagénio de estrutura, em proporção vantajosamente entre 20 e 40¾ e de preferência da ordem de 25 a 35¾ de as de compreendida

É portanto claro que, no final do tratamento, o material obtido não contém a totalidade do colagénio de origem, do qual se sabe que representa à volta de 90¾ da matéria orgânica do osso seco desengordurado, com cerca de 95¾ de colagénio do tipo I, caracterizado por uma molécula de tropocolagénio formado por três cadeias polipeptídicas dispostas em hélice, compreendendo duas cadeias alfa-1 do tipo I e uma cadeia alfa-2 do tipo I, e cerca de 5¾ de colagénio do tipo III, que compreende três cadeias alfa-1 idênticas. Não obstante, só o colagénio facilmente extractável simultaneamente com as outras proteínas, é evacuado durante as operações clássicas de deslipidação e desmineralização, enquanto que o colagénio de estrutura se mantém, na sua maior parte, não atacado, quando se desnaturam com a ureia as

735

Ε 16493

-7outras proteínas não eliminadas previamente, essencialmente constituídas por proteoglicanos ou glicoproteínas antigénicas.

Ora, as qualidades do material obtido pelo processo do invento, nomeadamente a sua aptidão para a osteointegração, e também as suas propriedades mecânicas e a sua facilidade de ser talhado, parecem estar precisamente ligadas a esta presença de colagénio de origem, integrado na estrutura microporosa, e constituido principalmente por colagénio do tipo I. Deve-se notar, por outro lado, que o invento conduz, geralmente, a um enriquecimento relativo do colagénio em colagénio do tipo I, até um teor, por exemplo, de 97¾ de colagénio do tipo I para 3¾ de colagénio do tipo III.

Isto constata-se em relação ao material obtido, pelas técnicas de análise conhecidas de caracterização dos tipos de colagénios, que consistem, por exemplo, quer em observar o colagénio por imunofluorescência depois de o fazer reagir com anticorpos anti-colagénio do tipo I, quer em submetê-lo à acção do brometo de cianogénio para obter uma mistura de péptidos caracterizáveis, que são separados em função dos seus pesos moleculares e analisados por electroforese.

Mais frequentemente, o material, de acordo com o invento, apresenta uma composição compreendida entre as gamas apresentadas abaixo:

água	2 - 10 ou inferior a 1'
lipidos	1-15 ou < 15
cinzas	40 - 65
cálcio	10 - 25
fósforo	5-20
Ca/P	1 - 2,2
proteínas	30 - 45
colagénio	20 - 40

Descreve-se, agora, o invento mais detalhadamente, no quadro de exemplos particulares de realização do processo e de utilização clínica do material, que não são de forma alguma limitativos.

735

Ε 16493

-8EXEliPLQ I: Preparação do material em blocos

Utilizam-se, como material cfe partida, blocos de osso previamente cortados das epífises ou das diáfises de osso de bovinos, recentemente obtidos no matadouro. De acordo com a utilização desejada, prefere-se o osso esponjoso (epífises) ou o osso cortical (diáfises). No presente caso, em que se pretende uma boa resistência à compressão, efectuam-se, de preferência, cortes transversais de epífises, perpendiculares à rede trabecular .

Estes blocos são tratados, em primeiro lugar, seguindo uma etapa clássica de deslipidação do tecido ósseo, com uma mistura de clorofórmio/metanol ou etanol/diclorometano, sendo o volume da mistura deslipidante de cerca de 10 volumes para 1 parte de osso fresco de partida (10 1/kg). Esta etapa permite extrair os lípidos livres, os ácidos gordos, as lipoproteínas, associados à trama óssea. Ela é efectuada, aqui, da seguinte maneira: 400 g de blocos de osso são tratados com uma mistura de 4 1 de clorofórmio-metanol (2/3 - 1/3) a uma temperatura de 4°C durante 24 h, sob agitação.

Na sequência das operações, e salvo indicação em contrário, esta proporção de 10 volumes por uma parte de osso de partida, será mantida.

Os blocos são, em seguida, submetidos a uma etapa de desmineralização, efectuada por contacto com ácido clorídrico 0,6 M a 4°C, durante 6 h. Esta etapa é, em si, clássica, e pode-se fazer variar as condições de acordo com o descrito, por exemplo, na Patente Francesa 2 582 517, utilizando uma solução de ácido clorídrico de molaridade compreendida entre 0,1 M e 1 M, ou de um outro ácido mineral ou carboxílico, e/ou um agente orgânico capaz de complexar o cálcio do osso como o etileno-diamina-tetra-acético.

Em alternativa, pode-se prolongar o tempo de contacto com o HCl, por exemplo para 36 horas. De acordo com o tempo de tratamento, obtém-se um material com uma maior ou menor dureza, adaptado à desejada para utilização posterior.

735

Ε 16493

Ao longo desta etapa de desmineralização, retira-se, portanto, uma parte dos iões constituintes da hidroxiapatite ligada à trama colagénica óssea, tornando esta última mais acessível para as extracções posteriores.

A etapa seguinte consiste numa extracção, por contacto com uma solução aquosa de cloreto de sódio: os blocos são tratados com 4 1 de solução de cloreto de sódio 1 M à temperatura de 4°C, sob agitação, durante 36 horas.

Esta extracção permite eliminar, da matéria óssea, os componentes macromoleculares mais solúveis ou recentemente sintetizados. No extracto encontram-se os lipidos que haviam subsistido após os tratamentos precedentes, os proteoglicanos e os colagénios. Esta etapa permite não desnaturar a trama colagénica óssea, extraindo parcialmente alguns compostos antes de atacar, pelas etapas de extracção seguintes, os compostos matriciais mais resistentes.

Chega-se então à etapa essencial do invento, segundo a qual se colocam os blocos de osso em contacto com 4 1 de ureia 8 M à temperatura ambiente (20°C) durante 6 horas.

Esta etapa permite extrair moléculas tais como proteoglicanos e glicoproteínas, coíiipreendencb as glicoproteínas de estrutura que são as moléculas que apresentam a mais forte antigenicidade no osso, mas, por outro lado, sem desnaturar demasiado a trama conjuntiva colagénica.

Esta extracção é completada por uma nova extracção de finalidade semelhante, efectuada com o auxílio de 4 1 duma solução de mercapto-etanol a 0,2¾ na ureia 8 M à temperatura ambiente, durante 24 h.

No final do conjunto destas duas etapas de extracção selectiva, verifica-se que se extraíram os elementos glicoproteicos, não colagénicos, ou pelo menos desnaturaram-se de forma eficaz, impedindo, . assim, que o material a enxertar seja rejeitado pela antigenicidade natural das suas glicoproteínas que entram na composição macromolecular da trama óssea.

735

Ε 16493

Os diferentes solventes e reagentes utilizados ao longo das operações precedentes são era seguida eliminados por uma lavagem com o auxílio de 4 1 de água destilada a 55°C, durante 24 horas.

Depois segue-se um tratamento por um tampão fosfato 0,4 M a pH = 7,4, que é efectuada sob agitação durante 48 h a 35°C. Esta operação é seguida de uma lavagem com o auxilio de 2 1 de etanol, ã temperatura ambiente, durante 24 horas.

A lavagem com água pura permite retirar ou, de preferência, prosseguir a extracção dos lipidos, dos proteoglicanos, dos e das glicoproteínas. A temperatura de tratamento permite inibir as actividades enzimáticas presentes a saber, as das proteases endógenas, ou das colagénios utilizada, nos tecidos.

proteases exógenas de origem bacteriana, por exemplo, bem como de outras enzimas líticas.

Quanto à extracção com tampão fosfato, ela prossegue a eliminação dos componentes matriciais e/ou lipídicos, que poderiam estar ainda agarrados à trama óssea. Ela permite, igualmente, re-equilibrar o material ósseo em sais.

Enfim, a lavagem num banho de álcool, permite completar a extracção de componentes ainda fracamente associados ã trama colagénica, em particular dos lipidos residuais, mas facilita, sobretudo, a operação de isolamento ulterior.

Com efeito, os fragmentos ósseos tratados segundo o invento, para obter um material de osteoplastia, são finalmente escorridos, passados por álcool etílico e secos em estufa ventilada. Podem ser igualmente congelados e/ou liofilizados, para serem conservados até ã sua utilização. As porções individuais podem facilmente ser conformadas para obter as formas próprias a serem utilizadas. É assim que o material se pode apresentar sob a forma de blocos paralelepipédicos de diferentes dimensões, de troncos de pirâmide, de lamelas, de cilindros centro-medulares, de discos, etc.. As formas definitivas são então acondicionadas e esterilizadas por irradiação ionizante.

735

Ε 16493

-11EXEMPLO II: Estudo analítico

O material finalmente obtido foi submetido a exames microscópicos, bioquímicos e químicos.

a) Exame em microscopia óptica, luz óptica e polarizada. Mostra uma conservação da estrutura do tecido ósseo. Encontra-se, em particular, o aspecto característico da rede trabecular do tecido esponjoso. Verifica-se, em particular, que o colagénio se encontra com a sua disposição de origem, o que diferencia muito nitidamente o material de acordo com o invento dos eventuais produtos da arte anterior, que resultariam de um aporte de colagénio exógeno sobre qualquer suporte.

b) Exame em microscopia de fluorescência. Permite a caracterização da estrutura lamelar específica, muito próxima da do osso natural. A caracterização do colagénio do tipo I foi efectuada pela utilização de anticorpos anti-colagénios do tipo 1 específicos.

c) Na bioquímica, a tipagem com brometo de cianogénio, confirma que o colagénio é do tipo I. Realça-se a presença de péptidos alfa 1 CB7 e alfa 1 CB8. A presença de péptidos alfa 1 CB6 confirma a reticulação das cadeias e, portanto, a conservação parcial da estrutura espacial. Verifica-se igualmente a presença de alfa C B3.

Estes resultados, comparados com as substâncias de referência demonstram a presença de um colagénio do tipo 1 caracterizado.

d) Na química, uma média das análises efectuadas sobre quatro lotes resultantes da concretização do processo segundo o Exemplo I, dá os seguintes resultados:

735

Ε 16493

Dosaqem	% Média	Valores extremos
Perda na dessecação	6,8	6,3 - 7,3
Lípidos	10,8	7,4 - 14,0
Cinzas	48,4	44,6 - 53
Cálcio	16,8	15,5 - 18,0
Fósforo	11,5	8,8 - 13,4
Ca/P	1,49	1,22 - 1,86
Proteínas	36,8	35,4 - 38,5
Colagénio	30,2	29,5 - 30,7

EXEMPLO III Α: Preparação de um material em pó

Fragmentos retirados de ossos de bovinos, sem que haja necessidade de se preocupar com a orientação dos planos de corte, são tratados como descrito no exemplo I. São de seguida reduzidos a pó podendo este ser utilizados tal como está.

EXEMPLO III B: Preparação de um material moldado.

Como variante, a partir de pós com diferentes granulometrias, moldam-se peças com as formas desejadas com a ajuda de um ligante, o qual pode ser, vantajosamente, de origem biológica, mas também eventualmente, e de acordo com a utilização, um polímero sintético biodegradável.

No caso particular do presente invento, utilizou-se um material servindo de ligante e talhado de maneira a permitir a revascularização, tal como um polímero bio-absorvível, da série dos polilácticos, na proporção de 1 a 10 partes para 1 parte de pó de osso. Podia-se também utilizar fibrina na proporção de 1 ou 2 partes para 100 partes de osso. A granulometria dos pós varia de 1000 a 250 μ.

As formas definitivas são então esterilizadas por irradiação e acondicionadas em embalagem estéril.

EXEMPLO IV: Variantes do processo

Tratam-se blocos de osso bovino como no Exemplo 1, com a excepção de que se procede ã lavagem final com álcool, antes ou após a lavagem com água destilada, por uma nova etapa de deslipidação por uma mistura de clorofórmio e metanol, ou uma mistura de etanol e diclorometano.

735

Ε 16493

13Esta etapa permite conseguir a deslipidação da trama óssea conjuntiva e, portanto, eliminar as substâncias lipídicas, ácidos gordos ou lipoproteinas que se mantêm ainda ligadas à trama óssea. Uma deslipidação assim desenvolvida permite, por exemplo, a obtenção nas melhores condições, de um pó de osso de acordo com o Exemplo III, cuja composição em lípidos residuais é vantajosamente levada a uma taxa inferior a 5%.

De igual modo, pode ser oportuno adicionar duas etapas suplementares de deslipidação, o que permite então, obter um produto cuja taxa de lípidos residuais se torna negligenciável, a saber da ordem de 1 ou inferior a 1¾.

Bem entendido, nestas condições, as percentagens relativas dos outros constituintes encontram-se modificadas.

Por outro lado, fe2-se variar as condições das diferentes etapas de tratamento, nomeadamente nas concentrações, tempos de contacto e temperaturas, aplicando-as a blocos cujas três dimensões variam entre 8 e 30 centímetros. As condições utilizadas situam-se nos seguintes limites:

- extraeção com um solvente iónico, efectuada por meio de uma solução de NaCl 0,5 a 2 M, a uma temperatura de 2 a 5°C, durante 12 a 36 horas.

Solução aquosa de ureia, de concentração compreendida entre 5 e 10 M.

Solução aquosa de mercapto-etanol em ureia, contendo de 0,1 a 0,5%, em volume, de mercapto-etanol.

- Tempo de extraeção selectiva para esta solução, compreendida entre 12 e 36 horas à temperatura ambiente.

Obtiveram-se, assim, materiais satisfatórios em osteoplastia, cujos resultados de análise se situam dentro das gamas abaixo:

735

E 16493

Cinzas	50	a	62¾
Lipidos	0,5	a	5¾
Perda na dessecação	7	a	10¾
Proteínas (Kjeldahl)	33	a	45¾
Cálcio	15	a	22¾
Fósforo	10	a	17¾
Relação Ca/P H	1	a	2,:
Colagénio	33	a	38¾

(dosagem do colagénio segundo a hidroxiprolina)

Obtiveram-se os mesmos resultados nas variantes do invento, que consistem em passar pelo intermediário de um pó, como descrito no Exemplo III.

EXEMPLO V: Observação clinica de um gato macho castrado, com um ano de idade

Este animal foi vítima de um acidente (choque traumático por automóvel) que provocou uma fractura cominutiva do fémur direito ao nível da região trocanteriana e metafisária proximal. Utilizando o material de osteoplastia, segundo o invento, foi operado oito dias após o traumatismo, pela seguinte técnica: abordagem clássica da zona fracturada, encastramento de um bloco, preparado de acordo com o Exemplo I, no macisso trocanteriano reconstituído e síntese por reconstrução da diáfise femural com o auxílio do fixador externo de Pérot de pequeno tamanho (hastes transfixivas e filetadas com um diâmetro de 2 mm).

animal recuperou a função de marcha, corrida e salto, completamente normais. As radiografias efectuadas aos 60 e 90 dias, mostram uma reconstrução óssea satisfatória e uma aceitação do enxerto. Isto permitiu evitar as complicações de uma fractura podendo levar a uma amputação do membro no caso de não consolidação .

EXEMPLO VI: Cadela pastor alemão

Este animal foi vítima de um acidente de viação tendo provocado uma fractura diafisária cominutiva com esquirola. Foi operado rapidamente e procedeu-se à colocação de um enxerto heterólogo, preparado a partir de um bloco de osso de bovino,

735

E 16493

15tratado como no Exemplo I. 0 enxerto foi esculpido neste bloco de tal forma que se pôde obter uma montagem por encaixe ao nível das extremidades diafisárias femorais» fi solidificação da montagem de osteossíntese foi realizada pela aposição de uma placa direita de Pérot e aparafusada com o auxilio de um parafuso com um diâmetro de 3,5 mm, sobre a diáfise femoral.

animal reencontrou o seu apoio logo nos dias seguintes. Os controlos radiográficos efectuados aos trinta e sessenta dias mostraram a estabilidade da montagem e aceitação do enxerto.

EXEMPLO VII: Utilização do material de acordo com o invento sob a forma pulverizada para a recessão apical do incisivo lateral superior esquerdo de um paciente

A intervenção foi efectuada segundo uma técnica clássica: incisão semi-lunar com exerése do quisto e esterilização do local com laser CO2- A colocação do material de acordo com o invento, sob a forma pulverizada, obtido de acordo com o Exemplo III, foi efectuada misturando-o com soro fisiológico estéril e comprimindo-o no interior do geode ósseo sangrante. 0 retalho gengival é em seguida colocado em posição e suturado, e faz-se uma radiografia de controlo.

A observação ao 82 dia permite constatar um excelente inicio de cicatrização. Ao 82 dia a imagem radiográfica é de uma qualidade bem melhor que as obtidas com outros materiais de enchimento classicamente utilizados: a radio-opacidade do material de acordo com o invento aproxima-se da do osso alveolar humano.

Aos 15 dias e ao mês, as radiografias confirmam estes resultados. A cicatrização é perfeita e não houve manifestação de qualquer fenómeno de rejeição.

aspecto radiográfico permite afirmar que há integração do pó, o que, segundo a experiência do médico que efectuou esta operação, é absolutamente excepcional em relação ao que se observa com os outros produtos de enchimento conhecidos no mercado.

735

Ε 16493

16EXEMPLO VIII: Utilização do material de acordo com o invento para saneamento de duas bolsas paradentais num paciente de 50 anos

Após se rebater um retalho que se estende do incisivo central superior esquerdo ao 22 molar superior esquerdo, procede-se à esterilização da parte óssea e redicular das bolsas por uma destartarização profunda, curetagem e aplanamento radicular .

tecido de granulação ao nível gengival sobre o retalho e no interior das bolsas foi volatilizado com o auxílio de um laser CO2, depois, o periosteo e as bolsas foram enxaguadas com soro fisiológico.

Utilizaram-se dois blocos de material preparado de acordo com o Exemplo I. Estes blocos estéreis são talhados com as dimensões desejadas em condições rigorosamente estéreis. Estes dois blocos foram colocados à força, de forma a estabelecer um contacto estreito e servir de meio de contenção. Concluído este trabalho, procedeu-se à colocação em posição do retalho e à sua sutura.

Oito dias após a colocação do penso cirúrgico e após se tirar os pontos de sutura e limpeza da zona de intervenção, pôde-se constatar que alguns (2) pontos de sutura estavam soltos e que o recobrimento dos dois blocos não era perfeito, pois que estavam ainda um pouco visíveis. Apesar disso, o estado da cicatrização era satisfatório e, extraordinariamente, uma neo-gengiva, tal como a que se desenvolve normalmente ao nivel do periosteo quando este foi exposto, desenvolveu-se em cima de blocos. Há, portanto reconhecimento do material, de acordo com o invento, pela neogengiva. Isto é confirmado pelo controlo radiográfico.

Aos 15 dias, os dois blocos do material de acordo com o invento estavam internamente recobertos pelo retalho e pela neogengiva ao nivel das zonas descobertas.

Isto confirma que pela sua neutralidade ou pela sua

735

Ε 16493

-17estrutura próxima da do osso alveolar humano, o material de acordo com o invento integra-se perfeitamente e recobre-se de uma neo-gengiva como a partir do periosteo.

ft última radiografia, ao mês, permitiu confirmar que os dois blocos estavam perfeitamente integrados no seu local. Não se constatou qualquer fenómeno de rejeição. Por outro lado, os dentes já não se movem e o aspecto gengival tornou-se normal, o que é excepcional, dado os problemas da sutura no pós-operatório.

735

E 16493

Claims

1 - Processo de fabrico de um material para osteoplastia, por tratamento de um tecido ósseo de origem humana ou animal, earacterizado por compreender, pelo menos, uma etapa de extracção e/ou desnaturação selectiva das proteínas de estrutura não colagénicas, realizada por meio de um agente de extracção selectiva â base de ureia.

2 - Processo de acordo com a reivindicação 1, earacterizado por a ureia estar sob a forma de uma solução aquosa, a uma concentração compreendida entre 2 e 10 M, e, de preferência, entre 5 e 8 M.

3 - Processo de acordo com a reivindicação 1 ou 2, earacterizado por, previamente ã referida etapa de extracção selectiva, a referida matéria óssea ser submetida a tratamentos de deslipidação e desmineralização adequados.

4 - Processo de acordo com a reivindicação 1, earacterizado por a deslipidação ser efectuada por contacto com uma mistura de clorofórmio/metanol ou etanol/diclorometano, na proporção de cerca de 10 volumes por 1 parte de osso (10 1/kg).

5 ~ Processo de acordo com a reivindicação 3 ou 4, earacterizado por a desmineralização ser efectuada por meio de uma solução de ácido clorídrico de molaridade comprendida entre 0,1 M e 1 M.

6 - Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, earacterizado por a referida extracção selectiva ser seguida por uma etapa de extracção selectiva complementar, por meio de uma solução aquosa de ureia, a que se adicionou mercapto-etanol, presente, de preferência, a uma concentração compreendida entre 0,1 e 0,5¾ em volume.

7 - Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, earacterizado por a referida extracção selectiva ser precedida por uma etapa de extracção dos constituintes solúveis, num solvente iónico tal como o cloreto de sódio.

71 735

Ε 16493

-198 - Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado por, posteriormente à referida extracção seiectiva, compreender pelo menos uma operação de lavagem, que arrasta as glicoproteínas de estrutura desnaturadas.

9 - Processo de acordo com a reivindicação 8, caracterizado por a referida operação de lavagem ser efectuada a uma temperatura inferior a 60°C.

10 - Processo de acordo com a reivindicação 9, caracterizado por a referida operação de lavagem ser efectuada por meio de água destilada, a uma temperatura compreendida entre 30°C e 60°C, e de preferência da ordem de 45°C a 55°C.

11 - Processo de acordo com as reivindicações anteriores, caracterizado por o material conservar a estrutura óssea natural de origem, integrando colagénio do tipo I não desnaturado.

12 - Processo de acordo com a reivindicação 11, caracterizado por o material conter colagériio de estrutura, numa proporção compreendida entre 20 e 40¾ e, nomeadamente da ordem de 25 a 35¾.

13- Processo de acordo com as reivindicações 11 e 12, caracterizado por o material compreender uma proporção de lípidos inferior a 15^ associada a uma proporção de proteínas compreendida entre 30 e 45^ associada a uma proporção de cálcio de 10 a 25^ associada a uma proporção de fósforo de 5 a 20^ associada a um teor em água inferior a 10¾, sendo a proporção de Ca/P, vantajosamente, de 1 a 2,2,

14 - Processo de acordo com uma das reivindicações 11 a 13, caracterizado por o material se apresentar sob a forma de blocos paralelipipédicos, de troncos de pirâmide, de lamelas, de cilindros centromedulares, de discos ou de pó, ou ainda de pó amalgamado com o auxilio de um ligante que pode ser, vantajosamente, de origem biológica, tal como a fibrina, ou de origem sintética, tal como por exemplo um polímero sintético biodegradável .