PT95339A - Processo para a preparacao de composicoes oftalmicas contendo um sal de imidazolio como conservante - Google Patents

Description

Descrição referente à patente de invenção de IOLAB CORPORATION, norte--americana, industrial e comercial, estabelecida em 300 Iolab Drive, Claremont, Califórnia 017Π, Estados Unidos da América, (inventor: Herwing Janssen, residente na Bélgica), para "PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE COMPOSIÇÕES 0FTALMI3AS CONTINUO UM SAL DE IHIDAZOLIO COMO CONSERVANTE"

DESCRIÇÃO Â presente invenção refere-se em geral a conservantes utilizados em soluções oftálmicas e, mais particularmente, ã utilização de cloreto de sepazenio, ou de compostos semelhantes, como conservantes numa solução oftálmica. 0 cloreto de sepazÓnio é um derivado de imidazóllo quaternário que tem a seguinte fórmula estrutural

O s

+ cr 0 nome químico da IUPac para o cloreto de sepazónio é o cloreto de 1-[2,4-áicloro-j3-(2,4-diclorobenzi-

Ioxi)fenetil3-imidazolio, 0 cloreto áe sepazónio pode ser obtido na Janssen Farmacêutica de Beerse, Bélgica, 0 pedido de patente norte-americana N2. 3 991 202 refere que os sais de imidazólio, tais como o cloreto de sepazónio, são ateis como agentes anti-microbia-nos, 0 pedido de patente norte-americano N2, 3 991 202 refere que os sais de imidazólio podei» controlar organismos tais como Microsporum canis, Trichophyton mentagrophytes, Trichophy-ton rubrum, Pbielaphora verrucosa, Cryptoccus neoformans, Candida tropicalis, Candida albicans, Mucor espécie, Asperigil-lus fumigatus, Sporotrichum schenlii, espécie Saprolegnia, Salmonella pullorum gallinarum, Escàerichia coli, Fseudomonas aeruginosa, Erysipelothrlx isidiosa, Staphylocoecus hemolyticus e Streptococcus pyrogenes. As concentrações que se verificou serem eficazes tanto para combater os fungos como para combater as bactérias estavam compreendidas entre 0,1 e 10S em peso do sal do imidazílio.

Formulam-se as soluções oftálmicas para terem os seguintes atributos: um longo período de vida activa quando armazenadas, actividade anti-microbiana eficaz, conforto para o paciente, capacidade de penetração dos agentes activos e efeitos colaterais mínimos. As reaeções dos tecidos a estas preparações são frequentemente toleradas para se alcançar um ou mais dos beaificios específicos. Todavia, há frequentemente situações em que certos componentes específicos do férmoco podem induzir doenças iatrogenicas graves, anulando possivelmente quaisquer efeitos benéficos sobre o processo patológico primário» 0 cloreto áe benzil-aleónio (EAE) é o conservante de utilização mais ampla em soluções oftálmicas, hoje em dia. 0 ΒΑΚ I um poderoso detergente catíóaico que destroí as bactérias após atracçi© iónica. Pfister e outros, em Invest. Oftalmol« 15, 4, pãg. 246-259, Abril 1976, verificaram que as preparações que contém BAK podem causar graves roturas da membrana de plasma e morte celular na côrnea. Pfister e colaboradores utilizaram um microscópio áe varrimento electrónlco. (MVE) para estudar o efeito da aplicação tópica i φ de farmacos, veículos e conservantes (por exemplo o SAK) sobre a superfície do epitélio da córnea. 0 tratamento da côrnea com uma solução de BAK a 0,01% originou descantaçao das células |! das duas camadas mais superficiais. Quando ocorreu a morte celular, roturas snembranárias severas foram acompanhadas por i perda das mlcrovilosidades e roturas das junções íntimas inter-I -celulares* Pfister e outros verificaras que a utilização frequente de preparaçao que contem BAK pode actuar como um impedimento iatrogênico ao processo de cicatrizaçao epitelial | e pode diminuir o tempo de rotura da película lacrimal* ; Burstein e outros em Invest* Oftalmol, ;; Vis» Sei.* 10* pâg, 899-911, Outubro 1977* utilizaram a monoto-rização electrofisiológica contínua e o MVE para estudar os efeitos de concentrações muito baixas de conservantes (por ;j exemplo BAK, timerosal e anfotericina B) sobre a córnea. Burstein e outros verificaram que o BAK, a uma concentração tão baixa como 0,001%, momentaneamente aumentou o transporte ióni-j co, e depois diminuiu intensamente a resistência epitelial, com roturas graves das camadas celulares da superfície, que ocorrem simultaneamente com a diminuição da resistência. Burstein, em Invest. Qftamol. Vis* Sci.« 19, 3, págs. 308-313, Março 1989, verificou que o BAK causa um aumento progressivo j das lesões das células epiteliais da córnea para concentrações que variam entre 0,001% e 0,01%, tal como se determinou com o MVE. 0 BAK é comercialmente utilizado em soluções oftálmicas em concentrações compreendidas entre 0,004% e 0,02%. As investigações feitas com o MVE e referidas antes, revelaram que algumas lesões das células epiteliais da superfície resultarão para concentrações mais baixas, e que lesões mais extensas resultarão para concentrações maiores. Há necessidade de encontrar um conservante que venha a ser utilizado em preparações oftálmicas, que não afecte de maneira adversa as células epiteliais da córnea. Âs datas dos artigos (por exemplo, 1976) sugerem que esta necessidade existe há muitos anos e ainda não foi satisfeita.

For esse mo tiro# m aspecto 4« presente invenção consiste em proporcionar um ccsserotate pera solações oftlliticas que seja tio eficaz ccmo o BAE* «as que não cause «s lesões das células epitelxais as sociadas ao F.AE.

Assim* a presente intenção proporciona ' u«a formulação oftálmica que incorpora como conservante um sal de imldazolio farmaceuticamente aceitável com r* formula I geral X,

J ;i si 1, I «7 ρ* (€Ε*5>»-Ατ-|I ' ar * Ar ^ a +

X <ϊ) ea que j n e um numere inteiro do t a Oj Ar^ rcprcaData tm grupo fenilo ou um grupo fenilo substituído com í» 2 ou t átomos de halogéno ou grupes alquilo ou alcozis (Cj-

J

Cada radical Ar, representa independes* temente «« grupo fenilo substituído com dois átomos de halogi-neof e |i X representa um aniso fnrmaceuticamente ji aceitarei· !| Pref erenciaí mente u ê um inteiro de | 2 a 4 e «ais preferencialnente et· | Ar^ representa prefereacialaerite um grupo fenilo não substituído· ; Os átomos de haiogeneo que substituem ΐ e grupo fenilo em Arg podes ser flúor, cloro* brouo ou iodo· Preferencialmente os átomos de helogeneo sao átomos de cloro*

Frefercaeial&snte t $ um aniao balogene-j to, tal coeo os anioes fluoreto, cloreto, brometo ou todato, j Heis pref erenciaIsente, o aniio e um sniio cloreto* Ainda |i«ais pre£ereacialnente o aal do imidasoli© é o cloreto de • aepazonlo. !

Os sais de iaidazólio da fórmula geral I podem ser utilizados como conservantes numa vasta variedade de produtos oftálmicos incluindo anti-infecciosos, composições esteróides e não esteróides, anfci-inflamatórios, descongestionantes, agentes anti-glaucoma, composições para irrigação, agentes de diagnóstico, composições de lágrimas artificiais, soluções para lentes de contacto e combinações dos produtos anteriormente referidos· Estas formulações podem encontrar--se sob a forma de soluções, suspensões, pomadas ou geles*

Os sais de imidazólio da formula geral I podem ser utilizados nos produtos anteriormente referidos em concentrações compreendidas entre cerca de 0,0151 e 0,03% em peso em relação á composição total. Verifica-se que as quantidades superiores a 0,03% em peso da composição total podem ser irritantes para o globo ocular.

As experiências que têm sido efectuaáas indicam que o cloreto de sepazónio á um conservante eficaz, e que a utilização do cloreto de sepazónio em soluções oftálmicas é mais segura que a utilização do BÂK nessas soluções oftálmicas. Essas experiências incluíram um ensaio de sensibilização da cobaia, um ensaio de eficácia do conservante e uma investiçãoçio comparativa das lesões oculares. 0s resultados do ensaio de sensibilização das cobaias indicavam que o cloreto de sepazónio não tem nenhuma tendência para a sensibilização por contacto. Pode--se concluir que os olhos não correm perigo de vir a ser sensibilizados por uma solução oftálmica que contenha o cloreto de sepazónio, 0 teste da eficácia do conservante foi efeetuado de acordo com as directrizes da Farmacopeia norte-americana. Em particular, testaram-se diversas concentrações do cloreto de sapazónio, para determinar o menor concentração que satisfaz as exigências da ”UFS XXI”, uma directriz da Farmacopeia norte--americana que exige actividade anti-microbiana para 5 pafcogá-neos diferentes que sejam nocivos para os olhos. Θ ensaio da eficácia do conservante, indicou que uma solução de cloreto de sepazónio a 0,015% satisfaz as exigências da TfPS XXI quanto à eficácia anti-microbiana. Usa solução de BAK a 0,02%, que ê a concentração encontrada mais frequentemente em soluções oftálmicas comercialmente disponíveis, também consegue satisfazer o que a UPS XXI recomenda nas suas áirectrizes.

As investigações que compararam as lesões ocalaras utilizaram o M¥S e a microscopia optica para avaliar as lesões epiteliais da córnea em coelhos brancos da Nova Zelândia, causadas pela administração de cloreto de sepazónio ou BAK. Bois grupos de coelhos foram seleccionados aleatoriamente, Num grupo, cada coelho recebeu gotas de cloreto de sepazonio num olho e gotas de BAK uo outro olho, tendo sido as gotas administradas de acordo com o esquema de "uso moderado”. Não houve diferença significativa nos efeitos do cloreto tle sepazonio e do BAK neste grupo. Noutro grupo, cada coelho recebeu gotas de cloreto de sepazónio num olho e gotas de BAK no outro, mas aqui as gotas foram administradas de acordo com o esquema de "uso exagerado". ¥erificou-se que o cloreto de sepazónio era menos lesivo para as células áo epitélio da córnea do que o BAK quando os coelhos foram submetidos a um esquema de uso exagerado. Pode concluir—se que o cloreto de sepazónio ê um conservante mais seguro que o BAK para soluções oftálmicas.

Os objectivos, aspectos e vantagens da presente invenção serão ohjecto de melhor compreensão a partir da seguinte descrição detalhada de um aspecto preferencial da invenção com referência aos desenhos em anexos nos quais as figuras representam; A figura 1 é uma reprodução fotolitográ-fica de uma córnea de coelho que foi tratada sob as condições de uso exagerado com o BAK; e A figura 2 é uma reprodução fotolitogrã-fica de uma córnea de coelho cue foi tratada sob as condições de uso exagerado com o cloreto de sepazónio·

Um corpo vivo pode tornar-se sensibilizado a substância que contactem repefcidamente as superfícies I; Ιί I; ι| Π j! j li |i ii

I

I ! I • f desse corpo durante um período de tempo prolongado. 0 teste de maximizaçao de Magnusson/Rligman na cobaia é um método aceite para determinar o potencial de uma substância como agente de sensibilização por contacto. 0 processo completo para o teste de maximização de Magnusson/Kligman na cabaia encontra-se na "BCLT 01-21-21-02-009”, de 12 de Outubro de 1987, e esse artigo está aqui incorporado como referência. 0 cloreto de sepazonio £oi testado quanto ãs suas propriedades de sensibilização utilizando-se o teste de maximização de Magnusson/Kligman na cobaia. Foram utilizadas dezasseis cobaias fêmeas hibridas da estirpe Ifalr-tley pesando cerca de 300 a 500 grama, obtidas nos laboratórios Charles River de Massachussetts. As cobaias foram divididas aleatóriamente em três grupos de tratamento sendo ua grupo tratado com cloreto de sepazonio, outro grupo tratado com 10% de formalina (controlo positivo) e o último grupo tratado com soro fisiológico (controlo negativo), ίϊσ primeiro dia de estudo, três pares de injecções intraáérmicas foram feitas na região dorsal de cada animal. Ho sétimo dia do estudo, os animais foram re-expostos às suas respectivas soluções através de aplicações cutâneas directas com emplastros de 2 por 4 cm. 0 ensaio final ocorreu no vigésimo primeiro dia do estudo, quando se fez uma aplicação eutãnea com um emplastro de 2 cm por 2 cm. No vigésimo segundo dia do estudo, procedeu-se ã remoção dos emplastros. No vigésimo terceiro dia os animais foram examinados para se detectar a sensibilização tal como ela é evidenciada pelas reacções dérmieas, variando entre uma reacção de eritema disseminado ligeiramente avermelhado até â tumefacção avermelhada intensa. Não havia evidência de sensibilização tanto nos animais tratados com cloreto de sepazonio como nos animais de controlo negativo. Todos os animais de controlo positivo se encontram sensibilizados. Pode concluir-se que o cloreto de sepazonio não tem tendência para induzir sensibilização de contacto e pode ser classificado como pertencendo ao grau 1 (fraco) dos sensibilizastes. Buranfce o estudo, os animais receberam grânulos alimentares para cobaia da marca Wayne e égua ad libitum. Nao se conhecem quaisquer - 7 - contaminantes ns alimentação ou na água que pudessem ter afec-tado os resultados do estudo.

Realizou-se um teste da eficácia do conservante para determinar a aais baixa concentração de clore-| to de aepazonio que seria susceptxvel de satisfazer as direc-! trizes da Farmacopeia norte-americana quanto à actividade i anti-microbiana* 0 teste para eficácia de conservantes da || "USP XXI" especifica cinco patogeneos diferentes para os quais ij o agente anti-microbiano deverá ser eficaz e esses organismos ; são: Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeroginosa, Echerichia ; coli, Candida albicans e Asperigillus niger. Esses cinco pato-

J !j gáneos são irritantes oculares comuns e sao os que mais difi-

II ;| culdades causam no que se refere ao conservante utilizado i i numa solução oftálmica* A carga microbiana* medida em termos I! de organismos por mililitro de produto* e o nível de sobrevi-| vencia» medido em termos de percentagem de organismos viáveis* ji foram monitorizados durante os vinte e oito dias que constitui- '! < ! ram o período de tempo do teste. 0 quadro 1 indica os resulta-; dos obtidos com o teste da eficácia de conservantes de acordo com a "USP XXI,}. ffilAPRO 1

Substancia Cone. (P/v) BAK 0,02%

Cloreto de se- pazónio G.03% 0.025% 0.02% 0.015% 0.01% 0.005%

Resultados

Satisfazr as exigências das directrizes da USP XXI para eficácia antimicrobia-na.

II «r tt ir lião eficaz para Pseudomonas aeruginosa Não eficaz para Pseudomonas aeruginosa ou Escherichia coli

Os microrganismos utilizados no teste ' de eficácia do conservante foram provenientes da Colecção j Americana de Culturas Tipo de RocKville, Maryland. 0 teste J de eficácia do conservante foi efectuado com BAK a G,G2%, ; a concentração tradicional para o BAK nas soluções oftálmicas, para indicar a eficácia comparativa do cloreto de sepazõnio. 0 quadro 1 indica que o cloreto de sepazõnio a 0,015% é tão ! eficaz como o BAK a 0,02% quanto ã capacidade de destruir patogeneos.

Efectuou-se um estudo comparativo utili-' zando uma serie de Draize modificada para comparar os efeitos irritantes oculares do sepazõnio a 0,015% e do BAK a 0,02%. : Procedeu-se ã comparação das lesões no etitõlio da cárnea ! provocadas por uma solução de cloreto de sepazõnio a 0,015% I administrada 4 vezes por dia, recorrendo ao MVE, em quatro i coelhos brancos da Nova Zelândia* Os resultados desses estudos indicam que o cloreto de sepazõnio provocou mudanças mínimas no epitõlio da cárnea enquanto o BAK apresentou o seu perfil muito característico de lesões do epitõlio da cárnea. A avaliação visual utilizada no teste de Draize pode não revelar mudanças da cárnea que resultam do uso intenso. Todavia, efectuou-se uma avaliação comparativa utilizando a microscopia optiea e o MVE para observar as mudanças do epitõlio da cárnea apás tratamento com o BAK a 0,02% j ou com cloreto de sepazõnio a 0,015%* A solução de BAK a 0,02% j _ ^

foi preparada por diluição sequencial de uma solução de BAK a 1%. A solução de cloreto de sepazõnio a 0,015% foi preparada por diluição sequencial de uma solução de cloreto de sepazõnio a 1%* A matéria prima não tratada para a preparação áo cloreto de sepazõnio encontra-se disponível na Janssen Pharmaceutics de Beerse, Bélgica.

Agruparam-se aleatoriamente coelhos brancos da Nova Zelândia em dois grupos de tratamento de cinco animais cada um. Uma avaliação completa por lâmpada de fenda com fluoresceína indicou que os coelhos tinham olhos normais e saudáveis. Os coelhos do grupo 1 receberam duas - 9- gotas de BAE s 0,02% nus olho e duas gotas de cloreto de sepa-zénio a 0,015% no outro olho cada trinta minutos, para um total de k doses (uso moderado). Os coelhos do grupo 2 receberam duas gotas do BAIC s 0,02% nua olho e duas gotas de 0,015% de sepazénio no outro olho cada três minutos para um total de 20 doses (uso exagerado).

Vinte minutos depois dos coelhos terem recebido as duas ultimas gotas oftálmicas, foram sacrificados e os globos oculares foram imeáiatamente enucleados e fixados com fixador de KarnovsKy a 1/2 « As cárneas foram removidas e deixadas no fixador durante trinta minutos. Efectuou-se o processamento tanto com o MVE como por microscopia optica utilizando um corte, com os bordos em bisel, colocado nua fixador fresco. Utilizou-se o sistema de classificação proposto por Burstein em Invest. Oohthalmol. Vis. Sei.. Março 1980, página 300-313, para avaliar as fotografias do MVE para as lesões do epitelio da cárnea. 0 quadro 2 indica o sistema de classificação que atribui um índice numérico de 0 a 5 variando com a gravidade das lesões que forem evidenciadas por perda das raicrovilosiáades, retraeção do volume das células (enrugamento), perda da forma hexagonal (esferização), retraeção das junções celulares, escamação das células e áreas de descamaçao. QUADRO 2

Avaliação numérica das lesões da superfície cornea índice Descrição 0 Não há lesões visível vista por MVEt menos de 2% das células a descamar; nao hã enrugamento ou membrana lisa; microvilosidades normais. 1 Algum enrugamento ou alisamento da superfície da célula; numeros reduzidos de microvilosidades nas células, vistas como "escuras” com pequena ampliação 2 Enrugamento proeminente e achatamento da maior parte das superfícies celulares; observa-se alguma descamaçao dos bordos celulares. 2 Aparente descamação celular e levantamento das células mais antigas e escurasj camada celular mais superficial sem rupturas nítidas e intensas» 4 Esfoliação da camada celular do topo, segunda camada íntacta por baixo dela? prevenção do compromisso I a longo prazo das propriedades de barreira. f ji 5 Segunda camada de células encontra-se jã a descamar ji por baixo da primeira, revelando as membranas da |i terceira camada? resistência fisiológica do epitêlio ! da córnea, gravemente comprometida. | Ho grupo 1, o índice médio da lesão i para os olhos tratados com BAK foi de 1,2 - 0,12 e o xndice I! „ * ;;medio de lesão para os olhos tratados com cloreto de sepazonio !:foi de 1,2 - 0,26. Os dois índices nac foram significativamente diferentes.

Elo grupo 2, todos os pares de olhos demonstraram menos lesões epiteliais com o cloreto de sepazonio do que com o BAK, G índice médio de lesão para os olhos tratados com BAK foi de 4,0 - 0,16. 0 índice médio de lesão para o cloreto de sepazonio (p=* 0,02) é sigaificativamente menor do que o índice obtido com o BAK. Quando comparados com os olhos tratados com o soro fisiológico tamponado com fosfato |(SFTF) (veículo de controlo), os olhos tratados com BAK do ;grupo 2 apresentaram lesões significativamente mais intensas ; (p= 0,002), enquanto os olhos do grupo 2 tratados com cloreto I de sepazonio não foram significativamente diferentes dos controlos tratados com SFTF. | Se se compararem as figuras 1 e 2, ! pode verificar-se que ha menos lesão èpitelial evidente na j córnea tratada com o cloreto de sepazonio do que na córnea |tratada com o BAK, A microscopia optica, com hematoxilina e eosina utilizadas como corantes, corrobora as alterações j patológicas vistas com o M¥E« - 11 -

• I

Claims (2)

1. Apesar da presente invenção ter sido descrita nos seus aspectos preferenciais, os especialistas na matéria verificarão que ê possível efeetuar pequenas variações na fornia e na concentração do conservante, no espírito e no âmbito dâ presente invenção. li l| 11 R Π V IIB I C I C 5 S S - 1« - Processo para a preparaçao de uma composição oftalmica caracterizado por se incorporar como ingrediente activo um sal de imidasolio de formula I jj—J--(CE2)n-Ar1 v 2
2. 2 CH2-p-0-€H„~âr Ar» em que n e um numero inteiro entre 1 e 6; Ar, e fenilo ou fenilo substituído com 1, 2 ou 3 átomos de halogéneos, grupos alquilo (C^-Cg) ou alcoxi (C^-C^)í cada Ar„ é independentemante um grupo fenilo substituído com 4Ú dois átomos de halogéneo} e X é um anião farmaceuticamente aceitável, numa quantidade compreendida entre 0,015% e 0,03% em peso da composição total em associação cora uma composição oftalmica sem conservante. I • j i • i 12 - - 23 Processo de acordo com a reivindicação 1» caracterizado por π ser usn número inteiro entre 2 e 4» l ' - 3* - j Processo de acordo com a reivindicação j: 1 ou 2, caracterizado por Ar, sem um grupo fenilo insufcstituído I' !; 43 - Processo de acorde com a reivindicação1 a 3, caracterizado por X ser ue aniao cloreto. ! Processo de acordo com as reivindicações de 1 a 4, caracterizado por o sal de imidazolio ser cloreto de sepazõnio. |í !! - 6a - li Processo de acordo com ss reivindicações dela?, caracterizado por a composição estar sob a forma de uma solução suspensão, unguento ou gel. i i A requerente reivindica a prioridade i ido pedido no Heino Unido, apresentado em IS de Setembro de 11989, sob o IIa. 3921072.3. i Lisboa, 18 de Setembro de 1990 - 13 - • I