PT91204B - Processo para a preparacao de derivados de 3-piranona e de seus analogos - Google Patents

Description

Este invento relaciona-se com inibidores da reductase HMG-CoA de fórmulas estruturais (I) e (II) .

(I) (II) em que:

R^ é seleccionado a partir de (1) alquilo Cj-jQ (2) alquilo ^^-10 ' ^etT1 9^{ue um ou ma}i^s substituintes é seleccionado a partir de:

(a) halogénio, (b) hidroxi , (c) alcoxi C₁_₁₀ (d) alcoxicarbonilo ₅ (e) aciloxi , (f) ciclo-alquilo C^_g, (g) fenilo, (h) fenilo substituído, em que os substituintes são X e Y, (i) alquil C^^SÍO)

	< □ >	ciclo-alquilo Cn n-S(0) , 3-8 n
	(k)	fenil-S(O) , n'
	(1)	fenil-S(O) substituído, em que os substi n tuintes são X e Y, e
	(m)	oxo;
(3)	alcoxi	Cl-10'
(4 )	alcenilo C2

(5) ciclo-alquilo C_{o o},

J — o (6) ciclo-alquilo θ substituído, em que um substituinte é seleccionado a partir de:

(a) alquilo (b) alquilo substituído, em que o substituinte é seleccionado a partir de (i ) halogénio, ( ii ) hidroxi, (iii) alcoxi ^cj_2Q' (iv) alcoxicarbonilo C. _c, l-o (v) aciloxi (vi) fenilo, (vii) fenilo substituído em que os substituintes são X e Y

	(viii)	alquil ^θ-δ(Ο)η
	(ix)	ciclo-alquil C-, oS(0) 3-8 n
	(x)	fenil-S-(0) n
	(xi )	fenil-S(O) substituído em n que os substituintes são X Y, e
	(xii)	0X0 ,
(c)	alquil C1_1Q	-S(°)n,
(d)	ciclo-alquil	C3-8-SIO)n
(e)	fenil-S(0)

-10(7) (8) (9) (10 ) (11) (12) (13) (14 ) (15) (16) (17) (f) fenil-S(O)_n substituído, em que os substituintes são X e Y, (g) halogénio, (h) hidroxi, (i) alcoxi (j) alcoxicarbonilo , (k) aciloxi (1 ) fenilo, e (m) fenilo substituído em que os substituintes são X e Y;

fenilo;

fenilo substituído, em que os substituintes são X e Y; amino;

alquilamino ;

dilalquil ^ ) amino;

fenilamino;

fenilamino substituído, em que os substituintes são Y e Y; fenil-alquilamino fenil-alquilamino substituído, em que os substituintes são X e Y; um membro seleccionado a partir de (a) piperidinilo, (b) pirrolidinilo, (c) piperazinilo, (d) morfonilo, e (e) tiomorfolinilo; e

R^S em que R^ é seleccionado a partir de (a) alquilo (b) fenilo, e (c) fenilo substituído, em que os substituintes são X e Y;

^R2 é H, CH₃ ou CH₂OH;

-11X e Y são são independentemente seleccionados a partir de:

(a) OH, (b) halogénio, (c) alcoxi (d) trifluorometilo, (e) alquil C^_₃~carboniloxi, (f) fenilcarboniloxi (g) alcoxi Ci^-carbonilo, (h) feniloxicarbonilo, (i) hidrogénio (j ) alquilo C^_₅;

Z é seleccionado a partir de:

(1) hidrogénio;

(2) alquilo ?

(3) alquilo C^_ç.-substituído, em que o substituinte é seleccionado a partir de

(a)	fenilo,
(b)	dimetilamino
(c)	acetilamino,

(4) 2,3-hidroxipropilo; halogénio é Cl ou F;

ji é uma ligação somples ou uma ligação dupla; e sais farmacêu ticamente aceitáveis do composto (II) em que Z é hidrogénio.

Excepto quando especificamente djs finido o contrário, os termos alquilo, alcenilo, acilo, ariloxi e alcoxi incluem ambos as espécies de cadeia li near e de cadeia ramificada do termo.

Um modo de realização deste inven to è a classe dos compostos de fórmulas (I) e (II) em que:

(1) alquilo ;

(2) alquilo substituído, em que um ou mais subs^

-12tituintes é seleccionado a partir de:

(a) halogénio, (b) hidroxi, (c) alcoxi C₁__1Q, (d) alcoxicarbonilo C. _c, i-5 ' (e) aciloxi , (f) ciclo-alquilo C.

□ —o (g) fenilo, (h) fenilo substituído, em que os substituin-

(í)	tes são X e oxo;	Y, e
ciclo-	alquilo θ	/
ciclo-	alquilo C-, o J — □	substituído, em que um substi
tuinte	é seleccionado a partir de
(a)	alquilo	10 '
(b)	alquilo	, substituído, em que o subs
	tituinte é	seleccionado a partir de
	(i)	halogén io,
	(ii)	hidroxi ,
	(iii)	alcoxi ,
	(iv)	aciloxi
	(v)	alcoxicarbonilo Ch ,
	( VI )	fenilo,
	(vii )	fenilo substituído, em que os substituintes são X e Y, e
	(viii)	oxo,

(c) halogénio, (d) hidroxi, (e) alcoxi , (f) alcoxicarbonilo (g) aciloxi (h) fenilo, (i) fenilo substituído, em que os substituintes são X e Y;

(5 )	fenilamino;
(6 )	fenilamino substituído, em que os substituintes
	sao X e Y;
(7)	fenil-alquilamino e
(8)	fenil-alquilamino substituído, em que os
	substituintes são X e Y;

X e Y são, independentemente seleccionados a partir de:

(a) OH, (b) F, (c) trifluorometilo, (d ) alcoxi ^C2._3 ' (e) hidrogénio, (f) alquilo C^__

Numa subclasse estão os compostos de fórmulas (I) e (II), em que é alquilo .

A ilustração desta sub-classe são aqueles compostos das fórmulas (I) e (II), em que:

R^ é 2-butilo ou 2-metil-2-butilo; e

R2 é H ou CH^

Para exemplificar esta sub-classe estão os compostos seguintes:

(1) 6(R)-/2-78(S)-(2 -metilbutiriloxi)-2(S),6-dimetil-3-oxol,2,3,7,8,8a(R)-hexa-hidronaftil-1 (S)yetil_/-4(R) -hidroxi3,4,5,6-tetra-hidro-2H-piran-2-ona;

(2) 6(R)~[2[Ò (S)-(2,2-dimetil-butiriloxi)-2(S), 6-dimetil-3-oxo-1,2,3,7,8,8a (R )-hexa-hidronaf til-1 (S)yetil_/-4(R)-hidroxi-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-piran-2-ona;

(3) 6(R)-/2-fB(S)-(2-metilbutiriloxi)-2(S)-metil-3-oxo-l,2 ,

3,7,8,8a (R ) -hexa-hidronaf til-1 (S )_7etil7-4 (R) -hidroxi3,4,5,6-tetra-hidro-2H-piran-2-ona;

-14(4) 6(R)-/2-/8(S)-(2,2-dimetilbutiriloxi)-2(S)-metil-3-οχοl,2,3,7,8,8a(R) -hexa-hidronaf til-1 (S ),7etil7-4 (R)-hidroxi3.4.5.6- tetra-hidro-2H-piran-2-ona;

(5) 6 (R )-/2-/Ί3 ( S )-(2,2-dimetilbutiriloxi )-2 (S ) , 6(R/-dimetii3-oxo-1,2,3,5,6,7,8,8a(R) -octa-hidronaf til-1 (S )_7etil_7-4 (R)-hidroxi-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-piran-2-ona;

(6) 6(R)-/2-f8(S)-(2,2-d imetilbutiriloxi)-2(S)-metil-3-oxol,2,3,5,6,7,8,8a(R ) - octa-hidronaf til-1 (S)_7etil7-4(R)-hidroxi-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-piran-2-ona;

(7) 6 (R )-/2-/8 ( S ) - ( 2-metilbutiriloxi )-2 (S ) , 6(R)-dimetil-3oxo-1,2,3,5,6,7,8,8a (R) -octa-hidronaf til-1 (S)_/etil7-4 (R ) hidroxi-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-piran-2-ona;

(8) 6(R)-/2-/’8(S)-(2-metilbutiriloxi)-2(S)-metil-3-oxo-l,2,3, 5,6,7,8,8a(R) -octa-hidronaf til-1 (S )_7etil7-4 (R ) -hidroxi3.4.5.6- tetra-hidro-2H-piran-2-ona.

Os compostos de fórmulas (I) e (II), em que R₂ é metilo e .a é uma ligação dupla, podem ser preparados a partir da lovastatina ou da simvastatina ou de seus análogos que têm um grupo 6-metilo, através de um dos procedimentos microbianos seguintes:

(a) adição do substrato a uma cultura em crescimento da Nocardia autotrópica através de um período de incubação adequada, seguido pelo isolamento, e derivação, se desejado;

(b) recuperação de uma cultura do microorganismos bioconverti do e contacto das células recolhidas com o substrato; ou (c) preparação de um extrato que contém enzima, livre sz células, a partir de células do microorganismo bioconvertido e contacto deste extrato com o substrato.

Cultivo do microorganismo por bioconversão do género Nocarda pode ser realizado por meios convencionais, num meio de cultura convencional, que contém os nutrientes bem conhecidos para utilização com estes microorga-15-

nismos. Deste modo, como é bem conhecido, esse meio de cultura contém fontes de carbono assimiláveis e de azoto assimiláveis e normalmente sais inorgânicos. Exemplos de fontes de carbono assimilável incluem a glucose, a sacarose, a amido, a glicerina, geleia de milho míudo, melaços e óleo de feijão de soja. Exemplos de fontes de azoto assimilével incluem sólidos de feijão de soja (incluindo alimento de feijão de soja e farinha de feijão de soja), sementes de trigo, extractos de carne, peptona, licor precipitado de milho, levedura seca e sais de amónio, como sulfato de amónio. Se necessário, sais inorgânicos, como cloreto de sódio, cloreto de potássio, carbonato de cálcio ou fosfatos, podem também estarem incluídos. Também, se necessário, outros aditivos capazes de promoverem a produção de enzimas de hidroxilação podem ser empregues em · combinações apropriadas. A técnica de cultura particular não é crítica ao processo do invento e quaisquer técnicas convencionalmente usadas para a cultura dos microorganismos podem igualmente ser empregues no presente invento. Contudo, em geral , as técnicas empregues serão escolhidas tendo em consideração a eficácia industrial. Deste modo, a cultura líquida é geralmente preferida e o método de cultura em profundidade é o mais conveniente do ponto de vista industrial.

A cultura será normalmente realizada sob condições aeróbicas e a uma temperatura na gama desde os 202 aos 372C, mais preferencialmente desde os 262 aos 282C.

método (a) é realizado por adição do substrato ao meio de cultura durante o curso da cultura. O ponto preciso durante a cultura ao qual o composto de partida é adicionado variará, dependendo no equipamento de cultura, da composição do meio, da temperatura do meio de cultura e de outros factores, mas é preferencialmente no tempo quando a capacidade de hidroxilação do microorganismo começa ao aumentar e isto é normalmente 1 ou 2 dias depois começar a cultura do microorganismo. A quantidade de substrato adiciona-

-16do é preferencialmente desde 0,01 a 5,0%, em peso do meio, mais preferêncialmente desde 0,05 a 0,5%, e.g., desde 0,05 a 0,1%, em peso. Depois da adição do substrato, a cultura é continuada aerobicamente, normalmente a uma temperatura nas gamas propostas acima. A cultura é normalmente continuada durante um período de desde 1 a 2 dias depois da adição do substrato .

No método (b), a cultura do microorganismo é primeiro realizada sob condições como as para atin_ gir o seu máximo de capacidade de hidroxilação; esta capacidade normalmente atinge um máximo entre 4 e 5 dias depois co começo da cultiva embora este período seja variável, dependendo da natureza e da temperatura do meio, das espécies do microorganismo e de outros factores. A capacidade de hidroxilação da cultura pode ser monotorizada através da tiragem de amostras da cultura em intervalos adequados, determinando a capacidade de hidroxilação da amostra pelo seu contacto com um substrato sob condições padrão e determinação da quantidade do produto obtido e fazendo a variação desta capacidade versus o tempo num gráfico. Quando a capacidade de hidroxilação atinge o seu ponto máximo, a cultura é parada e as células microbianas são recolhidas. Desta maneira atinge-se por sujeição da cultura a separação por centrifugação, por filtração ou por métodos de separação conhecidos similares. As células totais do microorganismo cultivado assim recolhido, preferencialmente são depois lavadas com um líquido de lavagem adequado, como uma solução salina fisiológica ou uma solução tampão apropriada .

O contacto das células recolhidas do microorganismo do género Nocardia com o substrato é geralmente efectuado num meio aquoso, por exemplo, numa solução tampão de fosfato a um valor de pH desde 5 a 9. A tempestade de reacção está preferentemente na gama desde 202 a 459, mais preferêncialmente na gama desde 20° aos 30°C. A concentração do substrato no meio reaccional está preferêncialmente na gama

-17desde 0,01 a 5,0%, em peso. O tempo permitido para a reacção é preferêncialmente desde 1 a 5 dias, embora, isto possa variar dependendo de concentração deste substrato na mísutra reaccional, da temperatura reaccional, da capacidade de hidroxilação do microorganismo (que pode, naturalmente, variar de espécie a espécie e também, como explicado acima, depende do tempo de cultura) e de outros factores.

extracto que contém enzima, livre de células empregue no método (c) pode ser obtido por quebra de todas as células do microorganismo obtido, como descrito em relação ao método (b) por meios físicos ou químicos, por exemplo por moagem ou por tratamento ultrassónico para originar uma massa celular desintegrada, ou por tratamento com um agente activo da superfície ou um enzima para produzir uma solução celular. O extracto livre de célula resultante é depois contactado com o substrato sob as mesmas condições como estão descritas acima em relação ao método (b).

O microorganismo útil no novo processo deste invento é do género Nocardia. De importância particular são conhecidas as estirpes do microorganismo, Nocardia autotrófica, as sub-espécies canberrice, ATCC 35203 da cultura MA-6181 e as sub-espécies amethystina ATCC 35204 da cultura ΜΑ-6180-da colecção da cultura de Merck & Co., Inc. Rahway,

New Jersey. Uma amostra da cultura designada por ATCC 35203 e ATCC 35204 está disponível na colecção da cultura permanente da American Type Culture Collection a 12301 Parklawn Drive, Rockville, MD 20852.

Depois de estar, completa a reacção de conversão por qualquer dos métodos anteriores, o composto desejado pode ser directamente isolado, separado ou purificado pelos métodos convencionais. Por exemplo, a separação e a purificação podem ser efectuadas por filtração da mistura reaccional, extracção do filtrado resultante com um sclvente orgânico imiscível em água (como acetato de etilo), destilação

do solvente do extracto, sujeição do composto em bruto resultante a uma cromatografia em coluna, (por exemplo em sílica gel ou alumínio) e eluição de coluna com um eluente apropriado, especialmente num dispositivo de CLAR.

Quando a porção acilo das fórmulas (I) ou (II) é outra do que 2-metilbutirilo ou 2,2-dimetilbutirilo, a porção acilo de lovastatina pode ser hidrolizada e o grupo hidróxilo re-esterifiçado com um haleto de alcanoílo apropriado, seguido do procedimento da Patente dos E.U. 4,444,784. O haleto de alcanoílo pode ser formado através de transformações padrão como substituição com um haleto de alquilo ou outro electrófilo apropriado num sítio C-H acídico num material de partida apropriada. Ver por exemplo a Patentes dos E.U. 4,766,145 e as aplicações em apêndice permitidas S.N. 205,406 e S.N. 205,407, datadas de Junho 10, 1988.

O material de partida (1) em que R2 é Ci^OH pode ser preparado seguindo os procedimentos na aplicação em co-apêndice S.N. 254,525, datada de Outubro 6, 1988 .

Os compostos de fórmula (I) e (II) podem também ser preparadas seguindo a metodologia sintética do esquema 1.

-19ESQUEMA 1

BUjNF

HO Ac

= Um grupo protector do hidroxi como o tri-alquil-sililo R ₂ = H, CH₃ ou CH₂OT

-200 material de partida (1) é tratado com um reagente adequado para a protecção do grupo álcool na lactona na posição 4. Os exemplos adequados são cloretos tri-alquil-sililos, cloretos da dialquil-sililos e di-hidropiranos.

O dieno (2) é tratado com um agente de halogenação como o cloreto de fenil-selenilo ou brometo de fenil-selenilo ou cloreto de fenil-sulfinilo, preferêncialmente cloreto de fenil-selenilo, em aproximadamente numa razão equimolar num solvente inerte em cerca de -802C, durante aproximadamente 20 minutos; ilustrativo desses solventes inertes são o cloreto de metiieno, éter e semelhante. Depois de um trabalho padrão o resíduo do produto é dissolvido num solvente etéreo, arrefecido a cerca de 02C e oxidado com um agente como peróxido de hidrogénio a 30% ou um peroxi-ácido como ácido peróxido-benzóico, para originar um análogo de halohidrina (3).

O intermediário (3) é tratado com um agente de redução de haleto como hidreto de tri-alquil-estanho ou um hidreto de tri-aril-estanho, preferêncialmente hidreto de tri-n-butil-estanho e um iniciador de radical como azobis-isobutironitrilo (AIBN) num solvente inerte como benzeno a uma temperatura entre os 702C e os 1002C, preferêncialmente cerca da 902C, durante 0,5 a 5 horas, preferêncialmente 2 horas, para obter um composto (4).

O composto (4) é tratado com clorocromato de piridinio (CCP) ou óxido de alumínio em tolueno para originar a enona (5). O composto (5) é contactado com trifluorometano-sulfonato de trimetil-sililo e com uma amina, para originar o dieno do éter trimetil-sililo (6).

O composto (6) é tratado com acetato de paládio em acetonitrilo para formar adienona (7). Grupos protectores do hidróxilo são removidos através do trata-21-

mento com fluoreto de amónio de tetrabutilo e com ácido acéti co em tetrahidrofurano, para originar o produto (I).

A enona (5) pode ser convertida a compostos de fórmula (I), em que a^ é uma ligação simples atra vés de tratamento com fluoreto de amónio de tetrabutilo em ácido acético.

Em alternativa os compostos de fórmula (I) podem ser preparados pelo seguinte esquema 2 deli neado esquematicamente:

-22ESQUEMA 2

Ο¹·

(Β) (9) (dba)₃Pd₂, THF (iPrO)₃P 55°C

pirazole

PCC

(12)

Cl)

-23O material de partida de dieno (1) é convertido aos epóxidos (8) e (9) por tratamento com ácido m-cloro-peroxibenzóico, a cerca de 02C. A mistura dos epóxidos é depois contactado com tris(dibenzilideno-acetona)-dipaládio(0) e tri-isoprcpoxi de fosfina para originar a mistura de dienos hidroxi (10) e (11). Esta mistura é depois oxidizada com PCC, atenuado com 3,5-dimetil-pirazole, para originar o composto 5-ona (12) e o produto (I).

A enona (5) do Esquema (1) pode também ser formada a partir do epóxido com o hidroxilo protegido (9) ou da mistura de epóxidos (8) e (9) como mostrado a seguir:

O composto (5) pode ser empregue no esquema (1) para formar o produto (I).

Quando as condições reaccionais das transformações químicas anotadas anteriormente são prejudiciais aos substituintes na porção 8-aciloxi, o grupo acetoxi pode ser empregue como grupo protector, que depois da ela-24boração em hidrólise, acilado de Patente dos qualquer parte na molécula, pode ser removido por para dar o derivado 8-hidroxi , que depois pode ser acordo com os procedimentos gerais, descritos na E.U. 4.661.483.

Quando o produto formado pelas vias reaccionais sintéticas descritas atrás não está na forma desejada daquele composto, então esse produto pode ser sujeito a uma ou mais outras reacções como hidrólise, desililação, salinificação, esterificação, acilação, amonólise ou lactonização, através de métodos convencionais.

Sais de metais preferidos são sais com metais alcalinos, como sódio ou potássio, metais alcalino terrosos, como cálcio ou magnésio ou sais com outros metais como alumínio, ferro, zinco, cobre, níquel ou cobalto, dos quais os sais de metais alcalinos, de metais alcalino terrosos, e de alumínio são preferidos sendo os sais de sódio, de cálcio e de alumínio os mais preferidos.

formar sais arginina, a

Os amino-ácidos preferidos para de amino-ácidos são amino-ácidos básicos, como a lisina, o ácido ct,^5-diaminobutírico ou a ornitina.

As aminas preferidas para formar sais de amina incluem dibenzilamina, etilenodiamina, morfolina, e tris-(hidroximetil)aminometano. Também preferido é amónia para formar o sal de amónio.

Os ésteres são preferêncialmente os esteres de alquilo, como os ésteres de metilo, de etilo, de propilo, de isopropilo, de butilo, de isobutilo, ou de pentilo, dos quais o éster metilo é o preferido. Contudo, outros ésteres como os estéres de fenil-alquilo , dimetilamino-alquilo , ou acetilamino-alquilo podem ser empregues se desejado.

-25Os sais de metais dos ácidos carboxílicos de fórmula (II) podem ser obtidos pelo contacto de um hidróxido ou de um carbonato com o ácido carboxilico de fórmula (II). O solvente aquoso empregue é preferencialmente água, ou pode ser uma mistura de água com um solvente orgânico, preferêncialmente um álcool (como metanol ou etanol), uma cetona (como acetona), um hidrocarboneto alifático (como hexano) ou um éster (como acetato de etilo). É preferido usar, uma mistura com um solvente orgânico hidrofílico com água. Estas reacções são normalmente conduzidas a uma temperatura ambiente, mas elas podem, se desejado, ser conduzidas com aque cimento ou arrefecimento.

Sais de amina de ácidos carboxílicos de fórmula (II) podem ser obtidos pelo contacto de uma amina num solvente aquoso com o ácido carboxilico de fórmula (II). Solventes aquosos adequados incluem água e misturas de água com álcoois (como metanol ou etanol), éteres (como éter dietílico e tetra-hidrofurano), nitrilo (como acetonitrilos) ou cetonas (como acetona); é preferido usar acetona aquosa como solvente para esta reacção. A reacção é preferencialmente realizada a uma temperatura ambiente ou abaixo, mais preferencialmente uma temperatura desde os 5° aos 10°C. A reacção imediatamente chega ao seu final. Em alternativa, um sal de metal do ácido carboxilico de fórmula (II) (que pode ser obtida como descrito acima) pode ser dissolvido num solvente aquoso, após o qual um sal do ácido mineral (por exemplo o hidrocloreto) da amina desejada é adicionada, empregando as mesmas condições reaccionais quando a amina sozinha é reagida com o ácido carboxilico de fórmula (II) e o produto desejado é depois obtido por metátese.

Os sais de amino-ácido dos ácidos carboxílicos de fórmula (II) podem ser obtidos por contacto de um amino-ácido em solução aquosa, com o ácido carboxilico de fórmula (II). Os solventes aquosos adequados incluem a água e mistura de água com álcoois (como metanol ou etanol) ou éte-26res (como tetra-hidrofurano).

Os esteres, preferencialmente os estéres de alquilo, dos ácidos carboxílicos de fórmula (II) podem ser obtidos por contacto do ácido carboxilico de fórmula (II) com um álcool apropriado, preferencialmente na presença de um catalisador ácido, por exemplo um ácido mineral (como ácido clorídrico ou ácido sulfúrico), um ácido de Lewis (por exemplo trifluoreto de soro) ou uma resina de permuta iónica acídica. 0 solvente empregue para esta reacção não é crítico, com a condição de que são adversamente afecta a reacção; os solventes adequados incluem o álcool por si só, o benzeno, o cloroformio, os éteres e semelhante. Em alternativa, o produto desejado pode ser obtido por contacto do ácido carboxilico de fórmula (II) com um diazoalcano, em que a porção alcano pode ser substituído ou não substituído. Esta reacção é normalmente efectuada pelo contacto do ácido com uma solução etérea do diazoalcano. Como outra alternativa, o éster pode ser obtido pelo contacto de um sal de um metal do ácido carboxílico de fórmula (II) com um haleto, preferêncialmente um haleto de alquilo, num solvente adequado, ; os solventes preferidos incluem a dimetil-formamida, o tetra-hidrofurano, o dimetil-sulfóxido e acetona. Finalmente, os ésteres podem também ser obtidos a partir da lactona de fórmula (I) por reacção com um alcóxido apropriado num alcanol absoluto. Todas as reacções para a produção de ésteres são preferencialmente efectuados a cerca da temperatura ambiente, mas, se necessário pela natureza so sistema reaccional, as reacções podem ser conduzidas com aquecimento ou arrefecimento.

As lactonas dos ácidos carboxílicos de fórmula (I) podem ser obtidas por lactonização dos ácidos carboxílicos de fórmula (II), sob condições vulgares conhecidas daqueles que são peritos no ramo.

A actividade de inibição de reductase HMG-CoA intrínseca dos compostos reivindicados, é medida

-27em in vitro pelo procedimento publicado em J, Med. Chem., 28, p. 347-358 (1985).

Representativo das actividades inibitórias da reductase HMG-CoA intrínsecas dos compostos reivindicados é a potência zelativa do 6 (R )-/2-/.8 ( S ) - ( 2,2-dimetilbutiriloxi)-2(S)-6-dimetil-3-oxo-l,2,3,7,8,8a(R)-tetra-hidro-2H-piran-2-ona, que exibe um valor de ΟΙ^θ de 2 ng/ml, quando comparado a um valor ΟΙ,-θ de 4,2 ng/ml para a sinvastatina. 0 composto de 6(R)-/2-/8(S)-(2,2-dimetilbutiriloxi)-2{S), 6(R)-dimetil-3-oxo-l,2,3,5,6,7,8,8a(R)-octa-hidro-naftil-l(S)Jetil7-4(R)-hidroxi-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-piran-2-ona, exibe um ΟΙ^θ de 20 ng/ml.

Os compostos deste invento são úteis como agentes anti-hipercolesterolémicos para o tratamento de arteriocleroses , hiperlipedemia, hipercolesterolemia familiar e doenças semelhantes, em humanos. Eles podem ser administrados oralmente ou parentéricamente na forma de uma cápsula, um comprimido, uma preparação injéctavel ou semelhante. É normalmente desejável a utilização da via oral. As doses podem ser variadas, dependendo da idade, na gravidade, do peso corporal e de outras condições do paciente humano, mas a dosagem diária para os adultos está na gama desde cerca de 2 mg a 2000 mg (preferencialmente de 10 a 100 mg). Doses superiores podem ser favoravelmente empregues, se necessário.

Os compostos deste invento podem também ser co-administrados com polímeros catiónicos não tóxicos farmacêuticamente aceitáveis capazes de ligarem os ácidos do bilis numa forma não reabsorvável na via gastro-intestinal. Os exemplos destes polímeros incluem a colestiramina, o colestipol e o poli/di-haleto de metil-(3-trimetilaminopropil)imino-trimetileno/. As quantidades relativas dos compostos deste invento e destes polímeros encontra-se entre 1:100 e 1:15.000.

-28Incluído no âmbito deste invento está o método de tratamento da arteroscleorose, da hipercolasterolemia familiar ou da hiperlipidemia, que compreende a administração a um paciente em necessidade desse tratamento, de uma quantidade terapêuticamente eficaz, não tóxica dos compostos de fórmula (I) ou (II) ou de suas composições farmacêuticas .

Os exemplos seguintes ilustram a preparação dos compostos de fórmulas (I) e (II) e da sua incorporação em composições farmacêuticas e estas não devem ser consideradas como limitadoras do invento indicados nas reivindicações em apêndice, a esta memória descritiva.

EXEMPLO 1

Preparação de 6(R)-/2-/8(S)-(2,2-dimetilbutiriloxi)-2(S),6-dimetil-3-oxo-l, 2,3,7,8,8a (R )-hexa-hidronaf yil-1 (S )_7etil7-4 (R ) -hidroxi-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-piran-2-ona

Utilizando o procedimento geral para a bioconversão do sal de sódio do ácido 7-/1,2,6,7,8,8a(R)-hexa-hidro-2(S),6(R)-dimetil-8(S)-(2,2-dimetilbutirilox i)1(S )-naftil7-3(R),5(R)-di-hidroxi-heptanoíco, como descrito na aplicação da patente em co-apêndice com o N°. de Série 254.525 datado de Outubro 6, 1988 o composto em epígrafe foi isolado como produto secundário.

Os meios seguintes que foram utilizados nas reacções de bioconversão estão descritos a seguir:

-29Meio A

Extracto de Levedura

Extracto de malte

Sopa de nutriente

Dextrose

PH 7,4

Gramas por litro de água destilada

4,0

10,0

4,0

4,0

O meio foi esterilizado durante minutos, aos 1212C.

Meio B Gramas por litro de água destilada

Dextrose 10,0 Polipeptona 2,0 Extracto de carne 1,0 Licor precipitado de milho 3,0 PH 7,0

O meio foi esterelizado durante minutos, aos 1212C.

-30I. Condições de cultura e Bioconversão

Um tubo liofilizado de Nocardia autotrófica subsp. canberrica ATCC 35204 (MA-6180) foi usado para inocular planos inclinados de agar 18 x 175 (Meio A) que foram incubadas aos 27QC, durante 7 dias. A cultura em plano inclinado foi lavada com 5 ml de meio B estéril e transferido para um frasco de 250 ml, que contém 50 ml de meio estéril B. Neste primeiro estágio a semente cresceu, aos 27°C, num agitador de 220 rpm e, depois de 24 horas, 2 ml foram transferidos para outro frasco de meio B estéril.

Durante o crescimento sob estas condições, a segunda semente foi usada para iniciar a cultura de bioconversão: 20 ml da cultura de semente foi colocada em 400 ml de meio B estéril, num frasco de 2 1. Depois a cultura cresceu durante 24 horas, 80 mg de sal de sódio do ácido 7-/1,2,6,7,8,8a(R)-hexa-hidro-2(S) ,6(R)-dimetil-8(S ) -(2,2-dimet ilbutiriloxi )l(S)-naftil_7-3(S),5(R)-di-hidroxi-heptanóico foram adicionados, a cada frasco. A incubação foi continuada durante 28 horas ou até que nenhum ácido 7-/l,2,6,7,8,8a(R)-hexa-hidro-2(S),6(R)-dimetil-8(S)-(2,2-dimetilbutiriloxi)-1 ( S )-naf til_7-3 (R ), 5 (R )-di-hidroxi-heptanoíco possa ser detectado por CLAR. Todo o caldo foi clarificado por centrifugação seguido por filtração através do papel de filtro Whatman N2.2.

¹¹· Métodos de CLAR

Alicôtas de todo o caldo devem ser analizados para derivados do ácido 7-/1,2,6,7,8,8a(R)-hexa-hidro-2(S),6(R)-dimetil-8(S)-(2,2-dimetilbutiriloxi)-1(S)-naftilJ-3(R),5(R)-dihidroxi-heptanoíco, por CLAR. O caldo filtrado deve ser injectado directamente (10 a 20 ul) ou depois de diluição com metanol. Os compostos foram separados

-31em colunas de fase invertida, utilizando um gradiente desde 35 a 45 por cento de acetonitrilo aquoso, a velocidade de fluxos na gama.entre 1 e 3 ml/min. A adição do ácido acético glacial ou H^PO^ (0,1 ml/1 de fase móvel) foi necessário para a separação dos ácidos livres. Os derivados do ácido 7-/1,2,6, 7,8,8a(R)-hexa-hidro-2(S),6(R)-dimetil-8(S)-(2,2-dimetilbutiriloxi )-1 (S )-naf til_7-3 (R ) , 5 (R )-dihidroxi-heptanóico foram detectados por monotirização de absorvância aos 238 nm, assim como a razão das adservâncias de 238 nm/228 nm. Os produtos desejados, os 6(R)-/2-/l3(S)-(2-alquilaciloxi)-2(S),6-dimetil-3-oso-l,2,3,7,8,8a(R) -hexa-hidronaf til-1 (S )_7etilJ7-4 (R ) -hidro-xi-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-piran-2-ona, foram detectados por monitorização da absorvância a 293 nm.

III. 6(R)-/2-/8(S)-(2,2-dimetilbutiriloxi)-2(S),6-dimetil-3-oxo-1,2,3,7,8,8a(R)-hexa-hidronaftil-l(S )_7etil7-4 (R ) hidroxi-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-piran-2-ona

Seguindo o procedimento geral descrito acima, o pH de todo o caldo da bioconversão de vinte kilogramas do sal de sódio do ácido 7-/1,2,6,7,8,8a(R)-hexa-hidro-2(S) ,6(R)-dimetil-8(S)-(2,2-dimetilbutiriloxi)-l(S ) -naf111/-3(R),5(R)-di-hidroxi-heptanoíco (12.700 litros) foi ajustado a 4,0 com ácido sulfúrico 2N e foi depois extractado com acetato de etilo (2 x 4500 1). A extracção de todo o caldo foi seguido por uma extracção de uma solução de acetato de etilo com bicarbonato de sódio IN (20% em volume) e o extracto aquoso foi depois lavado com acetato de etilo. Ao extracto aquoso foi depois adicionado metil-isobutil-cetona (MIBC,

570 1), e o pH de fase aquoso foi ajustado a 3,1 usando ácido sulfúrico 7,2 N. 0 extracto MIBC de fase aquosa acidificada foi depois separada da fase aquosa, que foi depois extractado com MIBC por uma segunda vez (570 1). Os extractos de MIBC foram combinados, filtrados através de uma área de diatomáceas azeotropicamente seco e concentrado in vacuo a 870 litros. A

-32solução de MIBC foi aquecida aos 952C, e depois tratado com ácido trifluoroacético (0,9 1) em MIBC (23 1). Depois de cerca de 15 minutos, a mistura foi arrefecida aos 252C e lavada sucessivamente com bicarbonato de sódio IN (0,5 volumes) e água (2 x 0,5 volumes). A fase orgânica foi concentrada in vacuo e o resíduo dissolvido em acetonitrilo, que foi depois diluído em acetonitrilo a 30% usando tampão de fosfato 0,02 M e pH = 7. Alicôtas (1/3) que contêm aproximadamente 700 mg de 6(R)-/2-/8(S)-(2,2-dimetilbutriloxi)-6-hidroxi-metil-2(S)-metil-l,2,6,7,8,8a(R) -hexa-hidronaf til-1 (S)_7etil7~4 (R)-hidroxi-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-piran-2-ona foram cromatografados sobre uma coluna SP-207 (300 1, copolímero brominado de estireno e divinilbenzeno, Mitsubishi Co.). A eluição com acetonitri lo/tampão (30%, 37%, 47%, 57%) e acetonitrilo/água (67%) originou o produto em epígrafe anterior e o composto 6-hidroximetilo, numa mistura. O produto desejado pode ser ainda purificado por remoção da maior parte do composto 6-hidroximetilo, por cristalização, por dissolução da mistura em acetato de isopropilo (ACIP) ou éter de metil-t-butilo (EMTB) e depois adição da solução de um solvente não polar (n-heptano, ciclo-hexano ou éter de petróleo).

IV. Isolamento de 6(R)-/2-/8(S)-(2,2-dimetilbutiriloxi)-2(S),

6-dimetil-3-oxo-l,2,3,7,8,8a(R)-hexa-hidronaftil-l(S)_7 etil7-4(R)-hidroxi-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-piran-2-ona

Os licores mães de cristalização do Passo III foram concentrados a um óleo e depois dissolvidos em tolueno:metanol:acetonitrilo (8:1:1, V:V:V) a um volume final de 100 ml. Esta solução foi carregar uma coluna de 10 litros de Sephadex LH-20 (Pharmacia Inc.) equilibrada com hexano : tolueno : metanol (3:1:1, V:V:V) e eluído com este solvente a uma velocidade de fluxo de 100 ml/min.

-330 composto desejado eluido entre 11 a 14 volumes da coluna e o eluente cortado quando rico do composto foi concentrado a um sólido. O produto foi ainda purificado por CLAR em fase invertida preparativo numa coluna C^g (21,4 mm Dl x 30 cm) eluido com um gradiente linear, iniciando-se 10 minutos depois da injecção de acetonitrilo a 25% em água a acetonitrilo a 75% em água, durante 40 minutos com uma velocidade de fluxo de 10 ml/min. As fracções contendo o produto' desejado (eluição aos 29 minutos) foram combinados e concentradas para originar cerca de 400 mg do produto desejado na forma cristalina.

] 3

Dados de RMN- C (CO^Cl^, £_c=53,8 ppm)

ppm	ppm	ppm
9r4	36,5	67,0
10f 6	36.8 /	76.0
24,1	37,7	123.1 124.5
24,3 1	39’ 0
	39.6	144,3
24.9	42.7	154,9
32,.9	43,3	17CL2
33,4	63.1 !	177,6 203,4

Ά análise por EM mostrou um ião M⁺ fraco a m/z 432 e iões fragmento a m/z 316 e 173 (base).

O espectro UV exibiu um -Amax = 290 nm, com E = 21.900.

De um modo semelhante Nocardia au totrophica subsp. canberrica ATCC 35203 (MA6181) foi utiliza da na reacção de bioconversão com o sal de sódio do ácido

7-/l,2,6,7,8,8a(R)-hexa-hidro-2(S), 6(R) -dimetil-8(S) — (2,2 — -dimetilbutiriloxi )-1 (S )-naf til_7-3 (R ) , 5 (R ) -dihidroxi-hepta nóico para produzir os produtos desejados.

Adicionalmente, o sal de sódio do ácido 7-/Ύ ,2,6,7,8,8a(R)-hexa-hidro-2 (S ) ,6 (R) -dimetil-8 (S)(2-meti lbutiriloxi )-1 (S )-naf til_7-3 (R ) , 5 (R )-dihidroxi-hepta nóico, o sal de sódio da lovastatina de anel aberto, foi sujeito a reacções de bioconversão análogas utilizando quer a N. autotrophica subsp. amethystina ATCC 35240 (MA6180) quer a N. autotrophica subsp. canberrica ATCC 35203 (MA6181) para produzir 6 (R ) - /2-/8 ( S ) -(2-metilbutiriloxi)—2(S),6-dimetil-3-oxo-l,2,3,7,8,8a(R) -hexa-hidronaf til /-1 (S)_/-etil7-4(R) -hidr£ xi-3,4,5,6-tetrahidro-2H-piran-2-ona.

EXEMPLO 2

Preparação da 6 (R )-/2-/8 ( S ) - (2,2-dimetilbutiriloxi )-2 (S ) , 6-di. metil-3-oxo-l,2,3,5,6,7,8,8a(R)-octa-hidronaftil-l(S)J⁷-etil_7-4(R)-hidroxi-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-piran-2-ona

Trinta miligramas do produto dieno na do exemplo 1 (R^ = 2-metil-2-butilo, a = dupla ligação), dissolvidos em 3 ml de acetato de etilo, foram hidrogenados (1 atm temperatura ambiente) sobre 6 mg de paládio a 10% sobre carvão durante 30 horas. A remoção do

-34catalizador por filtração e evaporização do solvente, tendo-se obtido o composto em epígrafe. IV (filme): 1718 cm\ 1665 cm^-1. EM(IE): m/z 434 (M⁺).

EXEMPLO 3

Preparação do 6(R)-/2-/8(S)-(2,2-dimetilbutiriloxi)-2(S),6-dimetil-3-oxo-l ,2,3,7,8, 8a(R)-hexa-hidronaftil-1 (S )_7etil_/-4 (R ) -hidroxi-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-piran-2-ona (a) 6 (R )-/2-/8 (S ) - (2,2-d imetilbutiriloxi)-2(S),6(R)-dimetil-l,2,6,7,8,8a(R )-hexa-hidronaf til-1 (S )Jetil7-4 (R ) - (_t-butildimetil-sililoxi) - 3,4,5,6-tetra-hidro-2H-piran-2-ona (2 ¹ )

O cloreto de Terc.-butildimetil-sililo (8 g; 52 mmol) foi adicionado a uma solução agitada de 6(R)-/2-/8(S)-(2,2-dimetilbutiriloxi)-2(S),6(R)-dimetil-1,2,6,

7,8,8a (R )-hexa-hidronaf til-1 ( S )_7etil_7-4 (R ) -hidroxi-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-piran-2-ona (20 g; 48 mmol) e imidazole (6,8 g; 0,1 mol) em DMF (150 ml), aos 0°C. A mistura resultante foi agitada aos OSC, durante 5 minutos, depois foi aquecida até à temperatura ambiente e agitada, durante 5 horas. A análise em CCF de uma alicôta indicou que a reacção estava completa. A mistura reaccional foi vazada em água fria e extractada com éter. O extracto etéreo foi lavado com ácido clorídrico diluído, água e uma solução de bicarbonato de sódio a 5%. Depois de secagem sobre MgSO^, o extracto orgânico foi filtrado e o filtrado foi concentrado _in vacuo para obter o produto desejado na forma de um óleo viscoso, incolor: RMN (CDCl^)^ 0,84

(3H ,	t, J =	7Hz ) ,	0,89	(3H,	d, J = 7Hz ) ; 0,90 (9H, s	); i,09
(3H ,	d, J =	7Hz) ;	1,11	(3H,	s); 1,12 (3H, s) ; 4,30 (	H , m ) ·
4,60	( H , m )	; 5,33	(H,	m ) ; 5	,51 (H, m); 5,77 (H, d de	d, J = 10
6Hz )	) 5,98	(H, d,	J =	10Hz )

íb) 6R-/2-/U(S)-cloro-4a(S)-hidroxi-8(S)-(2,2-dimetilbutiriloxi ) - 2(S),6(R)-dimetil-l,2,4a,5,6,7,8,8a(S)-octa-hidronaftil-l(S)_7etil_7-4 (R ) - (t-butildimetil-sililoxi )-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-piran-2-ona (3¹)

Uma solução de cloreto de fenil-selenilo (10 g; 52 mmol) em cloreto de metileno (50 ml) foi adicionada, gota a gota, a uma solução agitada do composto 2' (25,2 g; 48 mmol) em cloreto de metileno (350 ml) arrefecida num banho de gelo/i-propanol seco (-782C). A mistura resultante foi agitada aos -78SC, durante 20 minutos, vazada em água fria (300 ml) e extractada com éter duas vezes (400 ml, depois 150 ml). Os extractos combinados foram secos (MgSO^), filtrados e concentrados para obter um resíduo oleoso que foi disso^ vido em tetra-hidrofurano (300 ml). Esta solução foi arrefecida num banho de gelo (02C), e peróxido de hidrogénio a 30% (15 ml) foi adicionado. A mistura resultante foi agitada aos 0QC, durante 5 minutos, depois aquecida à temperatura ambiente e a agitação foi continuada durante 1 hora. A mistura reaccional foi vazada em água fria e extractada com clorofórmio três vezes (400 ml, depois 2 x 100 ml). Os extractos combinados foram secos (MgSO^), filtrados e concentrados para originar um resíduo que foi purificado por cromatografia flash numa coluna de sílica gel. A eluição com hexano:acetato de etilo (5:1/V:V) removeu as impurezas. Outra eluição com hexano: acetato de etilo (4:1/V:V) forneceu o composto em epígrafe na forma de uma goma amarela, que mais tarde solidificou, por espera: p.f. 117-82C, RMN (CDC1₃) § 0,075 (3H, s); 0,08 (3H, s); 0,85 (3H, t, J = 7Hz); 0,88 (9H, s); 0,89 (3H, d, J = 7Hz); 1,15 (3H, s); 1,16 (3H, s); 1,32 (3H, d, J = 7Hz); 1,58 (2H, q,

-36J = 7Hz); 3,39 (H, s); 4,05 (H, largo); 4,30 (H, m); 4,60 (H, m); 5,32 (H. m); 5,59 (H, D, J = 11Hz); 5,79 (H, d de d, J = 11, 6Hz).

Análise calculada para C^Hç-^ClO^Si: C, 63,61; H, 9,13.

Encontrado: C, 63,80; H, 9,04.

(c) 6(R)-ú2-2f4a(S)-hidroxi-8(S)-(2,2-dimetilbutiriloxi-2 (S ) , 6(R)-dimetil-l,2,4a,5,6,7,8,8a(S)-octa-hidronaftil-1(S etil_7-4(R) - (t-butildimetil-sil iloxi-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-piran-2-ona (4' )

Hidreto de tributiltina (7,06 ml; 26,25_mmol) e azo-bis-isobutironitrilo (AIBN) (0,82 g; 5,0 mmol) foram adicionados a uma solução magneticamente agitada de cloro-hidrina (3/ ) (8,78 g; 15 mmol) em benzeno (100 ml).

A solução resultante foi refluxada durante 2 horas, arrefecida e^concentrada in vacuo a um óleo amarelo viscoso, que foi agitada com éter preferido (200 ml) a -15°C (banho de gelo/ acetona) para originar 4_' na forma de um sólido incolor, fofo (6,9 g, p.f. 97-92C). O filtrado foi extractado com CH^CN (4 x 50 ml) para remoção de todo o produto contido no éter preferido. Os extractos de CH^CN foram combinados e concentrados a um óleo incolor, que foi purificado por cromatografia flash numa coluna de sílica gel. A eluição com etil-acetona/hexano (1:3/V:V) originou um sólido incolor (1,0 g) que foi agitado como éter preferido (25 ml) aos 02C, para remoção de alguns resíduos de estanho. A mistura foi filtrada para fornecer o produto 4_' na forma de um sólido incolor. P.F. 103-42C, RMN (CDC1₃) 8 0,07 (3H, s); 0,08 (3H, s); 0,88 (9H, s); 1,15 (3H, s); 1,16 (3H, s); 1,20 (3H, d, J = 7Hz) ; 2,78 (H, s); 4,28 (H, m); 4,58 (H, m); 5,30 (H, m); 5,58 (H, d, J = 10Hz); 5,67 (H, dd, J = 10, 5Hz).

-37Análise Calculada para C^jH^^O^Si: C, 67,59; H, 9,88.

Encontrado: C, 67,20; H, 9,99.

(d) 6R-/2-/3-oxo-8(S)-(2,2-dimetilbutiriloxi-2 (S)6 (R)-dimetil-1,2,3,5,6,7,8,8a-octa-hidronaf til-1 (S)_7-etil_7-4(R)-(jt-butildimetil-sililoxi)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-piran-2-ona (5 ' )

7,2 g (12 mmol) do composto (4') foi combinado com 60 ml de tolueno e 42 g de clorocromato de piridínio/óxido de alumínio. A mistura foi agitada e aquecida num banho de vapor, durante 20 minutos, após os quais a CCF indicou que a reacção estava completa. A mistura foi arrefecida, filtrada e os sólidos lavados com tolueno quente (4 x 50.ml). O solvente foi evaporado para originar uma goma âmbar. RMN (CDC1₃)^ 0,073 (3H, s); 0,079 (3H, s); 0,804 (3H, t, J = 7Hz); 0,881 (9H, s); 1,026 (2H, d, J = 6 Hz); 1,036 (3H, d,

J = 6 Hz); 1,10 (6H, largo, s); 2,55 - 2,66 (3H, m); 4,276 (H, m); 4,588 (H, m); 5,42 (H, m); 5,910 (H, d, J = 1,5 Hz) (e) 6(R)-/2-/8(S)-(2,2-dimetilburiloxi )-2(S) ,6(R)-dimetil-3-(trimetil-sililoxi)-l,2,6,7,8,8a(R)-hexa-hidro-l(S)J7-etilJ-4(R)-(t-butil-dimetil-sililoxi)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-piran-2-ona. (6*) produto de goma âmbar do Passo 3d foi dissolvido em cloreto de metileno e arrefecido aos 0°C sob azoto. A solução foi tratada com trietilamina (7,2 ml;

mmol) seguido por adição lenta de trifluorometano-sulfonato de trimetil-sililo (5,4 ml; 28 mmol) enquanto que a temperatura é mantida abaixo das 39C. Depois de agitação aos 0°C, durante 15 minutos (CCF indicou que a reacção estava completa aos 5 minutos) a solução escura foi diluída com cloreto de

-38metileno (100 ml) lavada com NHCO^ saturada (100 ml), seco e o solvente foi evaporado.

(f) 6(R)-/2-/8(S)-(2,2-dimetilbutiriloxi)-2(S),6-dimetil-3-oxo-1,2,3,7,8,8a(R)-hexa-hidronaftil-l (S)_7etilJ7-4 (R ) - (t_-butil-dimetil-sililoxi )-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-piran-2-ona ( 7 ' ) resíduo âmbar escuro do Passo (3e) foi dissolvido em acetonitrilo/tetra-hidrofurano. Acetato de paládio (II) (3,0 g; 13,0 mmol) foi adicionado à mistura e a mistura agitada à temperatura ambiente, durante 22 horas, ao fim do qual a C.C.F. mostrou que a reacção estava completa. A mistura foi filtrada através de uma placa de 3 cm, de sílica gel e depois lavado com acetato de etilo (150 ml), e o solvente evaporado . RMN (CDClg) § 0,076 (3H, s); 0,082 (3H, s); 0,752 (3H, t, J = 7 Hz); 0,883 (9H , s); 1,033 (3H, d, J = 7 Hz); 1,059 (3H, s); 1,065 (3H, s); 1,804 (3H, s); 4,295 (H, m); 4,606 (H, m); 5,408 (H, m); 5,781 (H, largo s); 6,136 (H, largo s).

(g) 6 ( R )-/2-/8 (S ) - ( 2,2 -dimetil-butiriloxi)-2(S),6-dimetil-3-oxo-l,2,3,7,8,8a(R)-hexa-hidronaftil-l(S)_7etil_7-4(R)-hidroxi-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-furan-2-ona (I)

A goma castanho escura do Passo (3f) foi dissolvida em tetra-hidrofurano e a isto foi adicionado uma mistura de fluoreto de tetra-n-butil-amónio (30 ml) e ácido acético (5,6 ml). A mistura combinada foi agitada, aos 50QC, durante 4 horas, arrefecida, diluída com éter etílico (400 ml) lavada com água (5 x 100 ml), seca e o solvente evaporado. 0 resíduo solidificou a uma massa castanha. A massa castanha foi cromatografada numa coluna LP de 50 mm, usando

-39hexano-acetato de etilo, 1:1 para as primeiras 10 fracções (fracções de 25 ml) depois 1:2 para a fracção 11, depois 1:4 0 produto em epígrafe foi encontrado nas fracções 25-53, p.f. 160-1742C. Este produto cromatografado foi depois recristalizado a partir de acetato de etilo (30 ml)-hexano (30 ml). Depois de seco aos 602C, durante 2 horas, sob um vácuo, o composto em epígrafe foi obtido com P.F. 179-1802C.

RMN (CDC1₃) $ 0,758 (3H, t, J = 7,4 Hz); 1,035 (3H, d, J =

7,4 Hz); 1,063 (3H, s); 1,069 (3H, s); 1,867 (3H, s); 2,63 (H, ddd, J = 1,47; 3,64; 12,6 Hz); 2,749 (H, dd, J = 4,94; 12,6 Hz); 4,398 (H, m); 4,645 (H, m); 5,424 (H, m); 5,781 (H, largo s); 6,138 (H, largo)

Análise calculada para ^25^36°6^: C, 69,42; H, 8,39

Encontrado: C, 69,73; H, 8,54

EXEMPLO 4

Preparação do 6(R)-/2-/3-oxo-8(S)-(2,2-dimetilbutiriloxi)-2(S), 6(R)-dimetil-l,2,3,5,6,7,8 , 8a-octa-hidronaf til-1 ( S )_7etilj7·-4(R)-hidroxi-2,4,5,6-tetra-hidro-2H-piran-2-ona.

Uma solução do composto (5‘) (500 mg; 0,9 mmol) do Exemplo 3, em ácido acético (42 ml) e água (15 ml) foi aquecida aos 70SC, durante 3 horas. Depois de arre fecimento, a mistura reaccional foi diluída com água e extractada com éter. O extracto de etanol foi lavado com água cinco vezes, depois lavado com bicarbonato de sódio aquoso e salmoura. Depois de secagem e filtração, o filtrado foi evaporado para obtenção de um resíduo, que foi purificado por cromatogra fia flash numa coluna de sílica gel. A eluição da coluna com

-4030% de acetona em cloreto de metileno originou o composto em epígrafe na forma de um sólido: p.f. 117-89C; RMN (CDCl^) 0,80 (3H, t, J = 7 Hz); 1,02 (3H, d, J = 7 Hz); 1,04 (3H, d, J = 7 Hz); 1,10 (6H, s); 2,64 (H, m de d, J = 18 Hz); 2,72 (H, d de d, J = 18, 4 Hz); 4,3 (H, m); 4,65 (H, m); 5,44 (H, m ) ; 5,92 (H , largo).

Análise calculado para ^-25^38^^6¹ C, 69,09; H, 8,81 Encontrado: C, 68,85; H, 8,65

EXEMPLOS 5-9

Seguindo o procedimento do Exem pio 3 e substituindo uma quantidade equivalente de reagente (A) para simvastatina no passo (a), o produto (B) é formado.

B

5	R1	= 2-butilo,	R2 = CH3;
6	R1	= 2-butilo,	R2 = H;
7	R1	= 2-metil-2	-butilo, R2 = H;
8	R1	= 2-metil-2	-butilo, R2 - CH2OH;
9	R1	= 2-butilo,	r2 = ch2oh.

EXEMPLO 10

Preparação dos Sais de Amónio dos Compostos II

A lactona (1,0 mmol) do Exemplo 1 é dissolvido com agitação em NaOH O,1N (1,1 mmol) à temperatura ambiente. A solução resultante é arrefecida e acidificada por adição gota a gota, de HCL IN. A mistura resultante é extractada com éter dietílico e o extracto lavado com salmoura e seco (MgSO^). O MgSO^ é removido por filtração e o filtrado saturado com amónia (gás) para dar uma goma que solidificada fornece o sal de amónio.

EXEMPLO 11

Preparação dos sais alcalinos e alcalino terrosos dos compostos II .

-42A uma solução de 42 mg de lactona do Exemplo 1 em 2 ml de etanol é adicionada a 1 ml de NaOH aquosa (1 equivalente). Depois de uma hora à temperatura ambiente, a mistura é lavada à secura in vacuo, para originar o sal de sódio desejado.

De um modo idêntico, o sal de potássio é preparado usando um equivalente de hidróxido de potássio, e o sal de cálcio, usando um equivalente de CaO.

EXEMPLO 12

Preparação de Sais de Etilenodiamina dos compostos II

A uma solução de 0,50 g de sal de amónio do Exemplo 10 em 10 ml de metanol é adicionado 0,75 ml de etilenodiamina. O metanol é retirado sob vácuo para obter o sal de etilenodiamina desejado.

EXEMPLO 13

Preparação dos Sais de Tris(hidroximetilJamino-etano dos compostos II

-43A uma solução de 202 mg do sal de amónio do Exemplo 10 em 5 ml de metanol é adicionado a uma solução de 60,5 mg de tris(hidroximetil)amino-etano em 5 ml de metanol. O solvente é removido in vacuo, para obter o sal tris(hidroximetil)aminoetano desejado.

EXEMPLO 14

Preparação de Sais de L-Lisina dos compostos II

Uma solução de 0,0001 mole de LLisina e de 0,0011 mole de sal de amónio do Exemplo 10 em 15 ml de etanol a 85% é concentrada até à secura in vacuo, para originar o sal de L-lisina desejada.

Identicamente, são preparados os sais de L-arginina, de L-ornitina, e de N-metilglucamina.

EXEMPLO 15

Preparação dos Sais de tetrametilamónio dos Compostos II

-44Uma mistura de 68 mg do sal de amónio do Exemplo 10 em 2 ml de cloreto de metileno e de 0,08 ml de hidróxido de tetrametilamónio a 24% em metanol é diluída com éter, para originar o sal de tetrametilamónio desejado .

EXEMPLO 16

Preparação dos Estéres de Metilo dos Compostos II

A uma solução de 400 mg de lactona do Exemplo 1 em 100 ml de metanol absoluto é adicionado 10 ml de metóxido de sódio 0,lM em metanol absoluto. Esta solução é deixada ficar à temperatura ambiente durante um hora, depois é diluída com água e extractada duas vezes com acetato de etilo. A fase orgânica é separada, seca (NazSO^), filtrada e evaporada in vacuo, para originar o éster de metilo desejado.

Numa maneira idêntica, pela utilização de quantidades equivalentes de propand, butanol, isobutanol, t-butanol, álcool amílico, álcool isoamílico, 2-dimetilaminoetanol, álcool benzílico, 2-acetamido-etanol e semelhante, os ésteres correspondentes são obtidos.

-45EXEMPLO 17

Preparação de Ácidos di-hidroxi Livre

O sal de Sódio do composto II do Exemplo 11 é dissolvido em 2 ml de etanol:água (1:1, V:V) e adicionado a 10 ml de ácido clorídrico IN a partir da qual o ácido di-hidroxi é extractado com acetato de etilo, O extracto orgânico é lavado uma vez com água, seco (Na₂SC>₄) e evaporado in vacuo, a uma temperatura do banho, que não excede os 302C. Os derivados do ácido dihidroxi são lentamente revertidos à lactona origem correspondente, por espera, mas é estável a pH acima dos 7.

EXEMPLO 18

Como um modo de realização específico de uma composição deste invento, 20 mg da lactona, do Exemplo 1, é formulada com lactose finamente dividida suficien te para originar uma quantidade total de 580 a 590 mg para ir encher cápsulas de gelatina duras de dimensão .

Claims (3)

lâ. - Processo para a formação de um composto de fórmula (I) (I) em que: R^ é seleccionado a partir de:

1-10 n (ix) C-, _o cicloalquil-S (O) ,

3-8 n' (x) fenil-S(O) , n ' (xi) fenil substituído-S(O) no qual os substituintes são X e Y, e (xii) oxo, (c) ^cj_jq alquil-S(O) (d) C-, _o cicloalquil-S (0)

(1) ^C3__^q alquilo;

(1) alquilo ;

(1) alquilo ;

(2) alquilo substituído no qual um ou mais substituinte(s) é(são) seleccionado(s) de entre:

(a) halogénio, (b) hidroxi (c) ^cj_jq alcoxi, (d) ç. alcoxicarbonilo, (e) C^_ç. aciloxi, (f) cicloalquilo, (g) fenilo, (h) fenilo substituído no qual os substituintes são X e Y, (i) _Cl alquil-S(O)_n na qual n é 0-2, (j) C-. _o cicloalquil-S(O) , ^J 3-8 n' (k) fenil-S(O) n

(l) fenil substituido-S(O) no qual os substituintes são X e Y, e (m) oxo;

(3) C₃_₁₀ alcoxi;

(4) C₂_₃q alcenilo;

(5) Cg g cicloalquilo;

(6) C_{o o} cicloalquilo substituído no qual um subsj — o tituinte é seleccionado de entre:

alquilo,

-58(b) ^cj_jQ alquilo substituído em geral o substituinte é seleccionado de entre:

(i) halogénio, (ii) hidroxi, (iii) alcoxi;

(iv) j- alcoxicarbonilo, (v) C_x aciloxi (vi) fenilo (vii) fenilo substituído no qual os substituintes são X e Y (viii) C. alquil-S(O) ,

(2) alquilo substituído, em que um ou mais substituinte(s) é seleccionado a partir de:

(a) halogénio, (b) hidroxi, (c ) alcoxi iq, (d) alcoxi ()-carbonilo, (e) aciloxi , (f) ciclo-alquilo C^_g, (g) fenilo, (h) fenilo substituído, em que os substituintes são X

-53e Y, (i) alquil(J-S(Ο)_n, em que n é O a 2, (jl ciclo-alquil C_{o Q}-S(O) , (k) fenil-S(O) , n

(l) fenil-S(0)_nsubstituído, em que os substituintes são X e Y, e (m ) oxo;

( 3 ) alcoxi ;

(4) alcenilo ^c2-10' (5) ciclo-alquilo ^c2_gl (6) ciclo-alquilo Cg_gSubstituido, em que um substituinte é seleccionado a partir de (a) alquilo ^c1_^q (b) alquilo substituído, em que o substituinte é seleccionado a partir de:

(i ) halogénio, (ii) hidroxi, (iii) alcoxi C_ θ (iv) alcoxi C^_j--carbonilo, (v ) aciloxi , (vi ) fenilo, (vii) fenilo substituído, em que os substituintes são X e Y, (viii) alquil C₁__1Q-S(O)_n, (ix) ciclo-alquil C_{o o}-S(0) ,

3-8 n' (x) fenil-S(O) , n

(xi) fenil-S(O) substituído, em que os substituintes são X e Y, e (xii) oxo;

(c ) alquil-C₁_₁₀-S(O)_n, (d) ciclo-alquil C₃_₈__s(Q)n, (e) fenil-S(O) , n ' (f ) fenil-S(O) substituído, em n são X e Y, que os substituintes (g) halogénio, (h) hidroxi, (i) alcoxi iq, <j) alcoxi ^-carbonilo, (k) aciloxi , (1) fenilo, e (m ) fenilo substituído, em que os substituintes são

X e Y;

(7 ) fenilo, (8) fenilo substituído, em que os substituintes são X e Y;

(9 ) amino;

(10) alquilamino ;

(11) di(alquil C^_₃)-amino;

(12) fenilamino;

(13) fenilamino substituído, em que os substituintes são X e y;

(14) fenil-alquil ^θ-amino;

(15) fenil substituído-alquil-C^_^g-amino, em que os substituintes são X e Y;

(16) um membro seleccionado a partir de:

(a) piperidinilo,

(b) pirrolidinilo, (c) piperazinilo, (d) morfolinilo, e (e) tiomorfolinilo; e

(17) RgS, em que Rg é seleccionado a partir de

(a ) alquilo C₁__1Q, (b) fenilo, e (c ) fenilo substituído, em que os substituintes são X e Y;

R₂ é H, CHg ou CH₂OH;

X e Y são seleccionados a partir de:

(a ) OH, (b) halogénio, (c ) trifluorometilo, (d) alcoxi , (e) alquil g-carbioniloxi; (f ) fenil-carboniloxi, (g) alcoxi ^-carbonilo, (h) feniloxicarbonilo,

(i ) hidrogénio, (j) alquilo ;

halogénio é Cl ou F;

caracterizado por compreender o tratamento de um composto (11)

-56( i ) hidrogénio, (j) alquilo ;

halogénio é Cl ou F;

caracterizado por compreender o tratamento de um composto (11)

ΟΌ com clorocromato de piridina para originar o composto

4ã. - Processo para a preparação de um composto de fórmula I

-57em que:

é seleccionado de entre:

(2) alquilo ^c^_^q substituído, em que um ou mais substituinte (s) é seleccionado a partir de:

a) halogénio,

b) hidroxi,

c) alcoxi C₁__1Q,

d) alcoxi (C^ g )-carbonilo, e ) aciloxi ,

f) ciclo-alquilo ,

g) fenilo,

-48(xii) oxo;

(c) alquil-C₁__1Q-S(0)_n, (d) ciclo-alquil g-S(O)n' (e) fenil-S(O) , (f) fenil-S(O)_n substituído, em que os substituintes são X e Y, (q) halogénio, (h ) hidroxi, (i) alcoxi ^c1_₁q, (j) alcoxi C^_g-carbonilo, (k) aciloxi £. , (l) fenilo, e (m) fenilo substituído, em que os substituintes são X e Y;

(7) fenilo, (8) fenilo substituído, em que os substituintes são X e ³ Y;

(9) amino;

(10) alquilamino (11) di(alquil C^_ç. )-amino ;

(12) fenilamino;

(13) fenilamino substituído, em que os substituintes são X e y;

(14) fenil-alquil ^θ-amino;

(15) fenil substituído-alquil-C^_^g-amino, em que os substituintes são X e Y;

(16) um membro seleccionado a partir de:

(a) piperidinilo,

-49(b) pirrolidinilo, (c) piperazinilo, (d) morfolinilo, e (e) tiomorfolinilo; e

17) R-^S, em que R₃ é seleccionado a partir de (a) alquilo ^cj_₁₀, (b) fenilo, e (c) fenilo substituído, em que os substituintes são X e Y;

R₂ é H, CH₃ ou CH₂OH;

X e Y são seleccionados a partir de:

(a) OH, (b) halogénio, (c) trifluorometilo (d ) alcoxi ' (e) alquil C^_₃-carboniloxi;

(f) fenil-carboniloxi, (g) alcoxi C^_₃~carbonilo, (h) feniloxicarbonilo, (i) hidrogénio, (j) alquilo ;

halogénio é Cl ou F ;

a. é uma ligação dupla ou a. é uma ligação simples; caracterizado por compreender o tratamento de um composto (7) em que

R'₂ é H, CH₃ ou CH₂OT;

T é trimetilsililo, trietilsililo, terc.-butil-dimetilsililo, terc.-butildifenilsililo, ou tri-isopropilsililo com (a) fluoreto de tetra-n-butilamónio e ácido acético ou com (b) ácido fluorídrico aquoso em acetonitrilo para originar o composto (I).

2ã. - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por ainda compreender o composto (6 ) em que

T e são cada um independentemente, seleccionados tir de:

trimetilsililo, trietilsililo, tri-isopropilsililo, -butildimetilsililo, ou terc.-butilfenilsililo;

com acetato de paládio (II) para originar o composto (7 que a é uma ligação dupla.

a parterc., em

3ã.

Processo para a formação do composto da fórmula (I)

CO em que é seleccionado a partir de:

3-8 n (e) fenil-S(O) n

(f) fenil substituído-S(O) no qual os substin tuintes são X e Y, (g) halogénio, (h) hidroxi, (i) Ci_iq alcoxi, (j) C₁_₅ alcoxicarbonilo, (k) aciloxi, (l) fenilo, e (m) fenilo substituído no qual os substituintes

são X e Y; (7) fenilo; (8) fenilo substituído no qual e Y; (9) amino; (10 ) j- alquilamino; (11) di(^ci_ 5 alquil)amino; (12 ) fenilamino; (13 ) fenilamino substituído no são X e Y; (14) fenil- ^C1 10 ^a^9^u^^^am^^no‘ (15) fenil- Οχ ιθ alquilamino no são X e Y; (16) um membro seleccionado de (a) piperidinilo, (b) pirrolidinilo, (c) piperazinilo, (d) porfolino, (e ) tiomorfolinilo; e (17) R^S no qual Rg é seleccion (a) Οχ iq alquilo (b) fenilo, e (c) fenilo substituído : são X e Y

X e Y são seleccionados de entre:

(a) (b) (c) (d) (e) (f) (g) (h) (i) (j) halogénio

OH, halogénio, trifluorometilo,

C^_₃ alcoxi,

C^_₃ alquilcarboniloxi, fenilcarboniloxi,

C^_₃ alcoxicarbonilo, feniloxicarbonilo, hidrogénio, alquilo, é Cl ou F caracterizado por compreender a cultura de microorganismo Nocardia autotrophica, subespécie canberrica (ATCC 35203) ou subespécie amethystina (ATCC 35 204) num meio nutriente contendo fontes assimiláveis de azoto e carbono e sal de sódio

-61sob condições aerobicas até que uma quantidade substancial do composto seja produzida e isolamento do composto assim produzido .