PT876393E - Derivados de 21-(2-oxo-tetrahidrofurano)-tio pregnano processo para a sua producao e composicoes farmaceuticas que os contem - Google Patents

Description

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DESCRIÇÃO "DERIVADOS DE 21-(2-OXO-TETRAHIDROFURANO)-TIO PREGNANO, PROCESSO PARA A SUA PRODUÇÃO E COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS QUE OS CONTÊM” A presente invenção relaciona-se com novos compostos anti-inflamatórios e anti-alérgicos da série do pregnano e com processos para a sua preparação. A presente invenção também se relaciona com formulações farmacêuticas contendo os compostos e com as suas utilizações terapêuticas, particularmente para o tratamento de doenças inflamatórias e alérgicas.

Os glucocorticosteróides que têm propriedades anti-inflamatórias são conhecidos e são largamente utilizados para o tratamento de patologias ou doenças inflamatórias tais como asma e rinite. Contudo, esses glucocorticosteróides podem sofrer da desvantagem de provocar efeitos sistémicos indesejados após a administração. As WO94/13690, W094/14834, W092/13873 e W092/13872 todas elas descrevem glucocorticosteróides que alegadamente possuem actividade anti-inflamatória associada a potência sistémica reduzida. A presente invenção proporciona um novo grupo de compostos que possuem actividade anti-inflamatória útil ao mesmo tempo que têm pouca ou nenhuma actividade sistémica. Assim, os compostos da presente invenção representam uma alternativa mais segura em relação àqueles glucocorticóides conhecidos que têm perfis pobres em termos de efeitos secundários.

Assim, de acordo com um aspecto da invenção, é proporcionado um composto de fórmula (I) 1

V

e seus solvatos, em que

Rl individualmente representa -0C(=0)Ci_6 alquilo; R2 individualmente representa hidrogénio, metilo (que pode ter a configuração α ou β) ou metileno; ou Ri e R2 conjuntamente representam —\ /R=

A —o r6 em que R5 e R6 são iguais ou diferentes e cada um representa hidrogénio ou Ci_6 alquilo; R3 e R4 são iguais ou diferentes e cada um representa hidrogénio ou halogéneo; e ---- representa uma ligação simples ou dupla.

Nas definições acima, o termo "alquilo" como um grupo ou parte de um grupo significa uma unidade alquilo de cadeia linear, ou, quando disponível, de cadeia ramificada. Por exemplo, pode representar uma função Ci_4 alquilo tal como representada por metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, n-butilo e t-butilo.

Os solvatos podem ser, por exemplo, hidratos. 2

( 11

Daqui em diante a referência a um composto de acordo com a invenção inclui tanto os compostos de fórmula (I) como os seus solvatos, particularmente solvatos farmaceuticamente aceitáveis.

Entender-se-á que a invenção inclui no seu âmbito todos os estereoisómeros dos compostos de fórmula (I) e as suas misturas.

Em particular os compostos de fórmula (I) contêm um centro assimétrico no ponto de ligação da unidade de lactona. Assim, a invenção inclui no seu âmbito tanto os diastereoisómeros neste centro assimétrico como as suas misturas.

Os diastereoisómeros e as suas misturas no centro assimétrico formado quando Ri e R2 conjuntamente representam

—<V A A —o r6 e R5 e R6 são diferentes também estão incluídos no âmbito da presente invenção. A ligação de enxofre à unidade de lactona pode ser feita aos átomos de carbono alfa, beta ou gama da lactona, α β

Um grupo preferidos de compostos da invenção são compostos de fórmula (I) em que Ri individualmente representa 0C(=0)Ci_6 alquilo, mais preferencialmente 0C(=0)Ci_3 alquilo, especialmente 0C(=0)etilo. Dentro deste grupo são geralmente preferidos os compostos em que R2 é metilo. 3 r y

Outro grupo preferido de compostos são os compostos de fórmula (I) em que Ri e R2 conjuntamente representam

—\ a A -0 Rs e R5 e R6 são iguais ou diferentes e cada um representa hidrogénio ou Ci_6 alquilo, particularmente hidrogénio ou Ci_3 alquilo, especialmente hidrogénio, metilo ou n-propilo. São preferidos os compostos de fórmula (I) em que R3 e R4, que podem ser iguais ou diferentes, representam cada um hidrogénio, flúor ou cloro, particularmente hidrogénio ou flúor. São especialmente preferidos os compostos em que ambos R3 e R4 são flúor.

Um grupo particularmente preferido de compostos da presente invenção são os compostos de fórmula (I) em que Ri é 0C(=0)Ci_6 alquilo, particularmente 0C(=0)Ci_3 alquilo, especialmente 0C(=0)etilo; R2 é metilo; R3 e R4, que podem ser iguais ou diferentes, representam cada um hidrogénio ou flúor, especialmente flúor; e ---- representa uma ligação simples ou dupla.

Um grupo adicional particularmente preferido de compostos da invenção são os compostos de fórmula (I) em que Ri e R2 conjuntamente representam

—\ A A -O Rí em que R5 e R6 são iguais ou diferentes e cada um representa hidrogénio ou Ci_6 alquilo, particularmente hidrogénio ou Ci_3 alquilo, especialmente hidrogénio, metilo ou n-propilo; R3 e 4

lí R4 que podem ser iguais ou diferentes representam cada um hidrogénio ou flúor, especialmente flúor; e ---- representa uma ligação simples ou dupla. São preferidos os isómeros R de compostos deste grupo em que R5 e R6 são diferentes.

Entender-se-á que a presente invenção abrange todas as combinações de grupos preferidos e particularmente preferidos acima referidos.

Os compostos de fórmula (I) incluem: 6 a,9 a-Difluoro-11β-hidroxi-16a-metil-21-(2-oxo-tetrahidro-furan-3-il-sulfanil)-17a-propioniloxi-pregn-4-eno-3,20-diona; 16a,17a-(R-Butilidenodioxi)-6a,9a-difluoro-11p-hidroxi-21-(2- oxo-tetrahidro-furan-3-il-sulfanil)-pregna-1,4-dieno-3,20-diona; 16a,17a-Butilidenodioxi-lip-hidroxi-21-(2-oxo-tetrahidro-furan- 3-il-sulfanil)-pregna-1,4-dieno-3,20-diona; 6a,9a-Difluoro-1Ιβ-hidroxi-l6a,17a-isopropilenodioxi-21-(2-oxo-tetrahidro-furan-5-il-sulfanil)-pregna-1,4-dieno-3,20-diona; 9a-Fluoro-11β-hidroxi-16α,17 a-isopropilenodioxi-21-(2-oxo- tetrahidro- furan-3-il-sulfanil)-pregna-1,4-dieno-3,20-diona; 9α-ΕΐυθΓθ-11β-1ιϊάΓθχί-16β-ιηβ^1-21-(2-οχο^β^3ΐιιάΓθ-^Γ3η-3-ί1-sulfanil)-17 α-propioniloxi-pregna-1,4-dieno-3,20-diona; e os seus solvatos.

Compostos de fórmula (I) preferidos incluem: 6a,9a-Difluoro-l^-hidroxi-16a-metil-21-(2-oxo-tetrahidro-furan-3-il-sulfanil)-17a-propioniloxi-pregna-l,4-dieno-3,20-diona; 6a, 9a-Dif luoro-l^-hidroxi-16a, 17a-isopropilenodioxi-21- (2-oxo- tetrahidro-furan-3-il-sulfanil)-pregna-1,4-dieno-3,2 0-diona; 6a, 9a-Dif luoro-l^-hidroxi-16a, 17 a-isopropilenodioxi-21- (2-oxo- tetrahidro-furan-3-il-sulfanil)-pregn-4-eno-3,20-diona; 6a,9a-Difluoro-11β-hidroxi-16a,17a-isopropilenodioxi-21-(2-oxo- tetrahidro-furan-4-il-sulfanil)-pregna-1,4-dieno-3,20-diona; 16a,17a-(R-Butilidenodioxi)-6a,9a-difluoro-1lβ-hidroxi-21-(2- oxo-tetrahidro-furan-4-il-sulfanil)-pregn-4-eno-3,20-diona; 5 16α,17α-(R-Butilidenodioxi)-6α,9a-difluoro-lip-hidroxi-21-(2-oxo-tetrahidro-furan-3-il-sulfanil)-pregn-4-eno-3,20-diona; e os seus solvatos.

Entender-se-á que cada um dos compostos de fórmula (I) acima referidos inclui os diastereoisómeros R e S individuais no centro assimétrico no ponto de ligação da unidade de lactona bem como as suas misturas. Entender-se-á adicionalmente que os compostos de fórmula (I) podem incluir os diastereoisómeros R e S individuais no centro assimétrico formado quando Ri e R2 conjuntamente representam

A -0 Rs em que Ri e R2 são diferentes, e as suas misturas. Assim, os diastereoisómeros R e S individuais isolados de forma a estarem substancialmente isentos do outro diastereoisómero i.e. puros e as suas misturas estão incluídos no âmbito da presente invenção. Um diastereoisómero R ou S isolado de forma a estar substancialmente isento do outro diastereoisómero, i.e. puro será isolado de tal forma que esteja presente menos do que 10%, preferencialmente menos do que 1% e.g. menos do que 0,1% do outro diastereoisómero.

Os compostos de fórmula (I) têm efeitos anti-inflamatórios ou anti-alérgicos potencialmente benéficos, particularmente por administração tópica, demonstrados, por exemplo, pela sua capacidade para se ligarem a receptores de glucocorticóides e para induzir uma resposta através desses receptores. Assim, os compostos de fórmula (I) são úteis no tratamento de patologias inflamatórias e/ou alérgicas. Além disso os compostos de fórmula (I) possuem a vantagem de ter pouca ou nenhuma actividade sistémica. Portanto, os compostos da invenção podem representar uma alternativa mais segura em relação àqueles glucocorticóides L—------- y anti-inflamatórios conhecidos que têm perfis pobres em termos de efeitos secundários.

Exemplos de estados patológicos em que os compostos da invenção têm utilidade incluem doenças da pele tais como eczema, psoriase, dermatite alérgica, neurodermatite, prurido e reacções de hipersensibilidade; estados inflamatórios do nariz, garganta ou pulmões tais como asma (incluindo reacções asmáticas induzidas por alérgenos), rinite (incluindo febre dos fenos), polipos nasais, doença pulmonar obstrutiva crónica, doença pulmonar intersticial, e fibrose; doenças inflamatórias do intestino tais como colite ulcerosa e doença de Crohn; e doenças auto-imunes tais como artrite reumatóide.

Os compostos da invenção também podem ser úteis no tratamento da conjuntiva e conjuntivite.

Será entendido pelos especialistas na matéria que a referência aqui feita a tratamento é extensiva a profilaxia bem como ao tratamento de doenças instaladas.

Tal como referido acima, os compostos de fórmula (I) são úteis em medicina humana ou veterinária, em particular como agentes anti-inflamatórios e anti-alérgicos.

Assim como aspecto adicional da invenção é proporcionado um composto de fórmula (I) ou um seu solvato fisiologicamente aceitável para utilização em medicina humana ou veterinária, particularmente no tratamento de doentes com patologias inflamatórias e/ou alérgicas.

De acordo com outro aspecto da invenção, é proporcionada a utilização de um composto de fórmula (I) ou um seu solvato fisiologicamente aceitável para o fabrico de um medicamento para o tratamento de doentes com patologias inflamatórias e/ou alérgicas. 7

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Num aspecto adicional ou alternativo, é proporcionado um método para o tratamento de um ser humano ou animal com uma patologia inflamatória e/ou alérgica, método esse que compreende a administração ao referido ser humano ou animal de uma quantidade eficaz de um composto de fórmula (I) ou de um seu solvato fisiologicamente aceitável.

Os compostos de acordo com a invenção podem ser formulados para administração em qualquer forma conveniente, e a invenção portanto também inclui no seu âmbito composições farmacêuticas, compreendendo um composto de fórmula (I) ou um seu solvato fisiologicamente aceitável conjuntamente, se desejado, em mistura com um ou mais diluentes ou veículos fisiologicamente aceitáveis.

Além disso, é proporcionado um processo para a preparação dessas composições farmacêuticas que compreende a mistura dos componentes.

Os compostos de acordo com a invenção podem, por exemplo, ser formulados para administração oral, bucal, sublingual, parentérica, local ou rectal, especialmente administração local.

Administração local, tal como aqui utilizada, inclui administração por insuflação e inalação. Exemplos de vários tipos de preparação para administração tópica incluem pomadas, loções, cremes, geles, espumas, preparações para administração por pensos transdérmicos, pós, pulverizadores, aerossoles, cápsulas ou cartuchos para utilização num inalador ou insuflador ou gotas (e.g. gotas oftálmicas ou nasais), soluções/suspensões para nebulização, supositórios, pessários, enemas de retenção ou comprimidos ou pastilhas para mastigar ou chupar (e.g. para o tratamento de úlceras aftosas) ou preparações lipossomais ou microencapsuladas. 8 f u

As pomadas, cremes e geles podem, por exemplo, ser formuladas com uma base aquosa ou oleosa com a adição de um agente espessante e/ou gelificante e/ou solventes adequados. Essas bases podem assim, por exemplo, incluir água e/ou um óleo tal como parafina liquida ou um óleo vegetal tal como óleo de amendoim ou óleo de rícino, ou um solvente tal como polietileno glicol. Agentes espessantes e agentes gelificantes que podem ser utilizados de acordo com a natureza da base incluem parafina mole, estearato de alumínio, álcool cetoestearílico, polietileno glicóis, gordura de algodão, cera de abelhas, carboxipolimetileno e derivados de celulose, e/ou monoestearato de glicerilo e/ou agentes emulsionantes não-iónicos.

As loções podem ser formuladas com uma base aquosa ou oleosa e em geral conterão também um ou mais agentes emulsionantes, agentes estabilizantes, agentes dispersantes, agentes de suspensão ou agentes espessantes.

Os pós para aplicação externa podem ser formados com o auxílio de qualquer base para pós adequada, por exemplo, talco, lactose ou amido. As gotas podem ser formuladas com uma base aquosa ou não-aquosa compreendendo também um ou mais agentes dispersantes, agentes solubilizantes, agentes de suspensão ou conservantes.

As composições para pulverização podem por exemplo ser formuladas como soluções ou suspensões aquosas ou como aerossoles administrados a partir de embalagens pressurizadas, tais como um inalador de dose medida, com a utilização de um propulsor liquefeito adequado. Uma composição em aerossol adequada para inalação pode ser ou uma suspensão ou uma solução e geralmente contém um composto de fórmula (I) e um propulsor adequado tal como um fluorocarboneto ou um clorofluorocarboneto contendo hidrogénio ou suas misturas, particularmente hidrofluoroalcanos, especialmente 1,1,1,2-tetrafluoroetano, 1,1,1,2,3,3,3-heptafluoro-n-propano ou uma sua mistura. A 9

I y composição em aerossol pode conter opcionalmente excipientes de formulação adicionais bem conhecidos na arte tais como tensoactivos e.g. ácido oleico ou lecitina e co-solventes e.g. etanol.

Com vantagem as formulações da invenção podem ser tamponadas pela adição de agentes tamponantes adequados.

As cápsulas e cartuchos para utilização num inalador ou insuflador, por exemplo de gelatina, podem ser formulados contendo uma mistura de pós para inalação de um composto da invenção e de uma base em pó adequada tal como lactose ou amido. Cada cápsula ou cartucho pode geralmente conter entre 20 pg-10 mg do composto de fórmula (I). Alternativamente, os compostos da invenção podem ser apresentados sem excipientes tais como lactose. A proporção do composto activo de fórmula (I) nas composições locais de acordo com a invenção depende do tipo exacto de formulação a ser preparada mas estará geralmente dentro da gama desde 0,001 até 10,0% em peso. Geralmente, contudo, para a maioria dos tipos de preparações a proporção utilizada vantajosamente situa-se dentro da gama desde 0,005 até 1% e preferencialmente 0,01 até 5%. Contudo, em pós para inalação ou insuflação a proporção utilizada estará dentro da gama desde 0,1-2%.

As formulações em aerossol são preferencialmente preparadas de tal modo que cada dose medida ou "descarga" de aerossol contém 20 ^g-2000 pg, preferencialmente cerca de 20 μg-500 μg de um composto de fórmula (I). A administração pode ser uma vez por dia ou várias vezes ao dia, por exemplo 2, 3, 4 ou 8 vezes, dando por exemplo 1, 2 ou 3 doses de cada vez. A dose diária total de um aerossol estará dentro da gama de 100 μg-10 mg, preferencialmente 200 μg-2000 μg. A dose diária global e a dose medida administrada por cápsulas e cartuchos num inalador 10

ou insuflador será normalmente o dobro das com formulações em aerossol.

As preparações tópicas podem ser administradas por uma ou mais aplicações por dia na área afectada; sobre áreas da pele podem ser utilizadas com vantagem compressas oclusivas. A administração continua ou prolongada pode ser realizada por um sistema de reservatório adesivo.

Para administração interna os compostos de acordo com a invenção podem, por exemplo, ser formulados de modo convencional para administração oral, parentérica ou rectal. As formulações para administração oral incluem xaropes, elixires, pós, grânulos, comprimidos e cápsulas que tipicamente contêm excipientes convencionais tais como agentes ligantes, enchimentos, lubrificantes, desintegrantes, agentes molhantes, agentes de suspensão, agentes emulsionantes, conservantes, sais tamponantes, agentes aromatizantes, corantes e/ou edulcorantes consoante for apropriado. Contudo, as formas unitárias de dosagem preferidas são como se descreve adiante.

As formas preferidas de preparação para administração interna são formas unitárias de dosagem i.e. comprimidos e cápsulas. Essas formas unitárias de dosagem contêm desde 0,1 mg até 20 mg preferencialmente desde 2,5 mg até 10 mg dos compostos da invenção.

Os compostos de acordo com a invenção podem em geral ser administrados por administração interna em casos em que está indicada a terapêutica adreno-cortical sistémica.

Em termos genéricos as preparações para administração interna podem conter desde 0,05 até 10% do principio activo dependendo do tipo de preparação envolvida. A dose diária pode variar desde 0,1 mg até 60 mg, e.g. 5-30 mg, dependendo da patologia a ser tratada, e da duração do tratamento desejada. 11

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As formulações de libertação lenta ou com revestimento entérico podem ser vantajosas, particularmente para o tratamento de doenças inflamatórias do intestino.

As composições farmacêuticas de acordo com a invenção também podem ser utilizadas em combinação com outro agente terapeuticamente activo, por exemplo, um agonista de adrenorreceptores β2, uma anti-histamina ou um anti-alérgico. A invenção proporciona assim, num aspecto adicional, uma combinação compreendendo um composto de fórmula (I) ou um seu solvato fisiologicamente aceitável com outro agente terapeuticamente activo, por exemplo, um agonista de adrenorreceptores β2, uma anti-histamina ou um anti-alérgico. A combinação acima referida pode ser convenientemente apresentada para utilização na forma de uma formulação farmacêutica e assim as formulações farmacêuticas compreendendo uma combinação tal como definidas acima conjuntamente com um diluente ou veiculo farmaceuticamente aceitável representam um aspecto adicional da invenção.

Os compostos individuais dessas combinações podem ser administrados sequencialmente ou simultaneamente em formulações farmacêuticas separadas ou combinadas. As doses apropriadas de agentes terapêuticos conhecidos serão prontamente determinadas pelos especialistas na matéria.

Os compostos de fórmula (I) e os seus solvatos podem ser preparados pela metodologia aqui descrita a seguir, constituindo um aspecto adicional desta invenção.

Assim, de acordo com um primeiro processo (A), um composto de fórmula (I) pode ser preparado por tratamento de um composto de fórmula (II) 12 u t*

em que Ri, R2, R3, R4 e ---- são como aqui definidos anteriormente para compostos de fórmula (I) e L representa um grupo de salda apropriado tal como um éster sulfonato e.g. um mesilato, tosilato ou triflato, ou L representa um halogéneo tal como Cl ou Br, com um composto de fórmula (III)

(III) e seus sais. A reacção de alquilação acima referida é preferencialmente realizada na presença de uma base tal como carbonato de potássio, hidreto de sódio ou metóxido de sódio e num solvente tal como tetrahidrof urano, acetona, dimetilformamida, dimetilacetamida ou sulfóxido de dimetilo, convenientemente a uma temperatura entre cerca de 0°C até 100°C e sob uma atmosfera inerte tal como azoto.

Alternativamente, a reacção de alquilação pode ser realizada utilizando uma base orgânica tal como uma amina terciária, e.g. trietilamina num solvente tal como tetrahidrofurano, diclorometano ou clorofórmio, convenientemente 13

y

a uma temperatura entre cerca de 0°C até 100°C e sob uma atmosfera inerte tal como azoto.

De acordo com um segundo processo (B), um composto de fórmula (I) pode ser preparado por tratamento de um composto de fórmula (IV)

(IV) e seus sais, em que Ri, R2, R3, R4 e ---- são como aqui definidos anteriormente, com um composto de fórmula (V) ou de fórmula (VI) (V)

(VI) em que Z representa um grupo de salda adequado (tal como Cl, Br ou OSO2A em que A é, por exemplo, Me, CF3, p-MeCgH4), ou OH. A alquilação de um composto de fórmula (IV) com um composto de fórmula (V) em que z representa um grupo de salda adequado tal como definido acima pode ser realizada por aplicação ou adaptação de métodos conhecidos, por exemplo, tal como descrito por Mitsukuchi et al., Chem. Pharm. Buli., 1989, 37, 3286-3293, que descrevem a utilização desses compostos na sintese de ésteres de cadeia aberta analogamente activos correspondentes às lactonas presentemente reivindicadas. 14

V

L-Cj ^

Assim, a alquilação pode ser realizada na presença de uma base tal como carbonato de potássio ou uma amina terciária e.g. trietilamina, num solvente adequado tal como tetrahidrofurano, dimetilformamida, diclorometano, clorofórmio ou uma cetona e.g. iso-butil metil cetona e sob uma atmosfera inerte tal como azoto.

Alternativamente, a alquilação pode ser realizada fazendo reagir um composto de fórmula (IV) com um composto de fórmula (V) em que Z representa OH na presença de uma carbodiimida ou outra semelhante ou utilizando metodologia de Vilsmeier tal como descrito por Barrett e Procopiou, Journal of the Chemical Society, Chemical Communications, 1995, 1403-1404.

Os processos gerais (A) e (B) referidos acima utilizando compostos de fórmula (III) ou (V) podem ser utilizados para preparar compostos de fórmula (I) em que S está ligado aos átomos de carbono alfa, beta ou gama do grupo lactona.

Os compostos de fórmula (I) em que S está ligado ao átomo de carbono beta do grupo lactona também podem ser preparados por reacção de um composto de fórmula (IV) com um composto de fórmula (VI) por adição de Michael na presença de uma base tal como carbonato de potássio ou uma amina terciária e.g. trietilamina e num solvente adequado tal como dimetilformamida ou tetrahidrofurano.

Os compostos de fórmula (I) também podem ser preparados a partir de outros compostos de fórmula (I) utilizando procedimentos de interconversão convencionais tais como transacetalização, epimerização, ou esterificação. Um processo para a preparação de um composto de fórmula (I) por interconversão de outro composto de fórmula (I) (processo C) constitui ainda um aspecto adicional da presente invenção. 15

Os compostos de fórmula (I) que têm uma ligação simples 1,2 podem ser preparados por redução parcial do correspondente composto com uma ligação dupla 1,2 por métodos convencionais. Assim, por exemplo, por hidrogenação do correspondente composto de fórmula (I) ou de um intermediário utilizado para a preparação de um composto de fórmula (I) utilizando um catalisador de paládio, convenientemente num solvente adequado e.g. acetato de etilo ou preferencialmente utilizando cloreto de tris(trifenilfosfina) ródio(I) (conhecido como catalisador de Wilkinson), convenientemente num solvente adequado tal como tolueno, acetato de etilo, ou etanol.

Será entendido pelos especialistas na matéria que pode ser desejável utilizar derivados protegidos de intermediários usados na preparação de compostos de fórmula (I). Assim, os processos descritos acima podem requerer desprotecção como um passo intermediário ou final para dar o composto desejado. Assim, de acordo com outro processo (D), um composto de fórmula (I) pode ser preparado submetendo um derivado protegido de um composto de fórmula (I) a uma reacção para remover o grupo ou grupos protectores presentes, constituindo um aspecto adicional da presente invenção. A protecção e desprotecção de grupos funcionais pode ser realizada utilizando meios convencionais. Assim os grupos hidroxilo podem ser protegidos utilizando qualquer grupo protector de hidroxilo convencional, por exemplo, tal como descrito em Protective Groups in Organic Chemistry, Ed. J. F. W. McOmie (Plenum Press, 1973) ou em Protective Groups in Organic Synthesis por Theodora W. Green, 1991.

Exemplos de grupos protectores de hidroxilo adequados incluem grupos seleccionados de alquilo (e.g. t-butilo ou metoximetilo), aralquilo (e.g. benzilo, difenilmetilo ou trifenilmetilo), grupos heterociclicos tais como tetrahidropiranilo, acilo (e.g. acetilo ou benzoilo) e grupos 16

Lc, ^ sililo tais como trialquilsililo (e.g. t-butildimetilsililo). Os grupos protectores de hidroxilo podem ser removidos por técnicas convencionais. Assim, por exemplo grupos alquilo, sililo, acilo e heterociclicos podem ser removidos por solvólise, e.g. por hidrólise em condições ácidas ou básicas. Os grupos aralquilo tais como trifenilmetilo podem analogamente ser removidos por solvólise, e.g. por hidrólise em condições ácidas. Os grupos aralquilo tais como benzilo podem ser clivados por hidrogenólise na presença de um catalisador de um metal nobre tal como paládio sobre carvão.

Os compostos de fórmulas (II), (III), (IV), (V) e (VI) ou são genericamente compostos conhecidos ou podem ser preparados por métodos análogos aos descritos na arte para a preparação de compostos conhecidos de fórmulas (II), (III), (IV), (V) e (VI). Quando compostos específicos que se enquadram dentro das fórmulas gerais acima referidas não são conhecidos, podem ser preparados pelos métodos aqui descritos ou por métodos análogos. Os compostos novos de fórmulas (II), (III), (IV) e (V) constituem mais um aspecto adicional da presente invenção.

Assim, um composto de fórmula (II) pode ser preparado por tratamento de um composto de fórmula (VII)

(em que Ri, R2, R3, R4 e ---- são como aqui definidos anteriormente) com um halogeneto de sulfonilo tal como um cloreto de sulfonilo e.g. cloreto de metanossulfonilo ou cloreto 17 í~ U, ^^ de tosilo ou com um anidrido sulfónico e.g. anidrido trifluorometanossulfónico convenientemente sob uma atmosfera inerte tal como azoto ou com o reagente de Vilsmeier de acordo com o método de Wuts et al., Synthetic Communications, 1993, 23, 2199-2211.

Os compostos de fórmula (VII) ou estão disponíveis comercialmente, por exemplo o acetonido de fluocinolona, budesonido e acetonido de triamcinolona estão disponíveis de Sigma-Aldrich, ou podem ser preparados a partir de compostos de fórmula (VII) disponíveis comercialmente, por exemplo, pelos métodos de transacetalização descritos na EP 0 262 108 e por redução parcial dos compostos com ligação dupla 1,2 pelos métodos aqui descritos. Alternativamente, os compostos de fórmula (VII) podem ser preparados a partir de derivados 17a- hidroxilados de compostos de fórmula (VII) disponíveis comercialmente, por exemplo, betametasona, flumetasona, prednisolona, beclometasona e dexametasona disponíveis de Sigma-Aldrich, por esterificação do grupo 17a-hidroxilo de acordo com o método descrito por Gardi et al., Tetrahedron Letters, 1961, 448. ser preparado por

Um composto de fórmula (IV) pode tratamento de um composto de fórmula (VIII)

em que Ri, R2, R3, R4 e ---- são como aqui definidos anteriormente e Q é um grupo acilo tal como acetilo, com um 18 U K- t r i \ nucleófilo tal como hidrazina, amoníaco ou outros semelhantes num solvente adequado tal como um solvente éter, e.g. tetrahidrofurano.

Um composto de fórmula (VIII) pode ser preparado por tratamento de um composto de fórmula (VII) como aqui definido anteriormente com um ácido tiolcarboxílico tal como ácido tiolacético em condições de Mitsunobu utilizando trifenilfosfina e um azodicarboxilato de dialquilo.

Alternativamente, um composto de fórmula (VIII) pode ser preparado por tratamento de um composto de fórmula (II) como aqui definido anteriormente com sal de sódio do ácido tiolacético utilizando os métodos descritos por Mitsukuchi et al., Chem. Pharm. Buli., 1989, 37, 3286-3293.

Os compostos novos de fórmulas (VII) e (VIII) constituem ainda um aspecto adicional da presente invenção.

Os compostos de fórmulas (III), (V) e (VI) estão disponíveis comercialmente de Sigma-Aldrich ou podem ser prontamente preparados por aplicação ou adaptação de métodos conhecidos. Por exemplo, a a-mercapto-Y-butirolactona pode ser preparada pelos métodos descritos por G. Fuchs, Ark. Kemi, 1966, 2 6, 111; a p-mercapto-y-butirolactona pelos métodos descritos por G. Fuchs, Ark. kemi, 1968, 29, 379; a γ-σΙοΓΟ-γ- butirolactona pelos métodos descritos por P. Four et al., J. Org. Chem., 1981, 46, 4439; e os compostos α-OH quirais de fórmula (V) pelos métodos descritos por Kenne et al., J. Chem. Soc. Perkin Trans. I, 1988, 1183.

Os isómeros individuais de fórmula (I) no ponto de ligação da unidade de lactona podem ser preparados ou a partir de materiais de partida possuindo a estereoquímica desejada ou por epimerização, resolução ou cromatografia (e.g. separação por 19 f HPLC) num passo apropriado da sintese dos compostos de fórmula (I) pretendidos utilizando meios convencionais.

Assim, por exemplo, entender-se-á que a síntese utilizando uma mistura racémica de compostos de fórmula (III) ou (V) produzirá compostos de fórmula (I) como uma mistura de diastereoisómeros, que podem ser então separados por meios convencionais, tais como cromatografia ou recristalização fraccionada. Alternativamente, os diastereoisómeros individuais podem ser preparados utilizando compostos de fórmula (Hl) ou (V) na forma enantiomericamente pura.

Analogamente, os compostos de fórmula I em que Ri e R2 conjuntamente representam

—\ a A -O R6 em que R5 e R6 são diferentes, podem existir nas formas diastereoisoméricas R e S. A síntese desses compostos pode ser estereoespecífica para produzir diastereoisómeros individuais. Assim, por exemplo, o diastereoisómero R de um composto de fórmula (I) em que R5 representa H e R6 representa n-propilo pode ser convenientemente preparado por transacetalização do correspondente derivado 16a, 17a-isopropilenodioxi com butiraldeído na presença de um catalisador ácido, tal como ácido perclórico, tal como descrito na EP 0 262 108. A reacção de transacetalização pode ser realizada num estádio intermediário ou após a introdução do grupo lactona.

Os solvatos (e.g. hidratos) de um composto de fórmula (I) podem ser formados durante o procedimento de tratamento de um dos passos do processo anteriormente referido. Assim, os compostos de fórmula (I) podem ser isolados em associação com 20 t Γ moléculas de solvente por cristalização de ou evaporação de um solvente apropriado para dar os solvatos correspondentes.

Os Exemplos seguintes ilustram a invenção mas não limitam a invenção por qualquer forma.

EXEMPLOS

Geral

Os exemplos seguintes ilustram a preparação de compostos de acordo com a presente invenção. Os pontos de fusão foram determinados num bloco Kofler e não estão corrigidos. Os espectros de lH-rmn foram registados a 250 ou 400 MHz e os desvios químicos são expressos em ppm em relação a tetrametilsilano. São utilizadas as seguintes abreviaturas para descrever as multiplicidades dos sinais: s (singuleto), d (dupleto), t (tripleto), q (quarteto), m (multipleto), dd (dupleto de dupletos), td (dupleto de tripletos) e 1 (largo). MS (TSP+ve) e MS (ES+ve) referem-se a espectros de massa realizados em modo positivo utilizando técnicas de "termospray" ou de "electrospray" respectivamente. HRMS (ES+ve) refere-se a espectrometria com "electrospray" de alta resolução realizada no modo positivo. A TLC (cromatografia em camada fina) foi realizada em placas Merck Kieselgel 60 F254 e a cromatografia em coluna foi realizada em sílica 60 Merck (Art. 7734 ou 9385). A PLC (cromatografia em camada preparativa) foi realizada em placas de sílica Whatman. A HPLC (cromatografia líquida de alta pressão) preparativa foi realizada num sistema Gilson utilizando a fase estacionária indicada no exemplo. DMF é utilizado como abreviatura para Ν,Ν-dimetilformamida anidra.

Quando são preparadas misturas de isómeros resultando do centro assimétrico no grupo lactona estes isómeros podem ser separados por cromatografia convencional em sílica e são-lhes 21

V U, atribuídas as designações de isómeros A e B respectivamente na ordem de eluição da coluna.

Intermediário 1 6a.9a-Difluoro-llB-hidroxi-21-metanossulfoniloxi-16a-metil-17q-propioniloxi-preqna-1.4-dieno-3.20-diona A uma solução com agitação de 6q,9q-difluoro-lip,21-dihidroxi-16q-metil-17q-propioniloxi-pregna-l, 4-dieno-3,20-diona (2 g, 4,29 mmol) em piridina anidra (20 mL) sob atmosfera de azoto adicionou-se cloreto de metanossulfonilo (1,66 mL, 21 mmol), gota a gota, ao longo de 2 minutos. A mistura reaccional foi agitada durante 2 h e depois foi vertida em ácido clorídrico 2 M gelado (40 mL). 0 precipitado resultante foi recolhido por filtração, lavado com água (30 mL x 3) e seco a pressão reduzida sobre pentóxido de fósforo para dar o composto em epígrafe (2,658 g, rendimento quantitativo): p.f. 185-187°C; MS (TSP+ve) m/z 545 (M+H)+; IV Umax (KBr) 3544, 1731, 1667, 1633 cm-1; RMN ô (DMS0-d6) inclui 7,25 (1H, d, J 10 Hz), 6,30 (1H, d, J 10 Hz), 6,11 (1H, S), 5,73 e 5,53 (1H, 2m), 5,54 (1H, Sl), 5,07 (1H, d, 3 16 Hz), 4,83 (1H, d, J 16 Hz), 4,18 (1H, m), 3,26 (3H, s), 3,23 (1H, m), 2,40 (2H, q, J 7,5 Hz), 1,48 (3H, s), 1,00 (3H, t, 3 7,5 Hz), 0,96 (3H, s), 0,85 (3H, d, J 7 Hz). (Encontrada: C, 56,99; H, 6,27; S, 5,43. C26H34F2O8S.0,3H2O requer C, 56,78; H, 6,34; S, 5,83%).

Intermediário 2 21-Acetilsulfanil-6q,9q-difluoro-llB-hidroxi-16q-metil-17q-propioniloxi-oregna-l,4-dieno-3,20-diona A uma solução com agitação de trifenilfosfina (380 mg, 1,45 mmol) em tetrahidrofurano anidro (3,5 mL) a 0°C sob atmosfera de azoto adicionou-se azodicarboxilato de diisopropilo (285 μϊι, 1,45 mmol). A suspensão branca resultante foi agitada a 0-5°C durante 1 h período após o qual se adicionou uma solução de 6q, 9q -dif luoro-11 β, 21 -dihidroxi-16q-metil-17q-propioniloxi- 22 t pregna-1,4-dieno-3,20-diona (450 mg, 0,97 mmol) e ácido tiolacético (103 pL, 1,45 mmol) em tetrahidrofurano anidro (3,5 mL), gota a gota, ao longo de 10 minutos. A mistura reaccional foi agitada durante mais lha 0-5°C e durante 4 h a 21°C. 0 solvente foi removido a pressão reduzida e o resíduo foi partilhado entre acetato de etilo (50 mL) e ácido clorídrico 0,5 M (50 mL). A camada orgânica foi lavada com água (50 mL), solução saturada de bicarbonato de sódio (50 mL), água (50 mL) e solução saturada de cloreto de sódio (50 mL). A solução foi então seca sobre sulfato de magnésio anidro e o solvente foi removido a pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna eluindo com acetato de etilo-éter de petróleo 40-60 (2:3). Remoção do solvente das fracções apropriadas a pressão reduzida deu o composto em epígrafe (292 mg, 57%): p.f. 205-210°C; MS (ES+ve) m/z 525 (M+H) + ; IV Umax (KBr) 1727, 1694, 1667, 1629 cm"1; RMN ô (CDCI3) inclui 7,11 (1H, d, J 10 Hz), 6,44 (1H, s), 6,38 (1H, d, J 10 Hz), 5,49 e 5,29 (1H, 2m), 4,40 (1H, m), 4,24 (1H, d, J 17 Hz), 3,54-3,30 (1H, m), 3,47 (1H, d, J 17 Hz), 2,40 (3H, s), 2,39 (2H, q, J 7,5 Hz), 1,53 (3H, s), 1,14 (3H, t, J 7,5 Hz), 1,05 (3H, s), 0,95 (3H, d, J 7,5 Hz). (Encontrada: C, 62,06; H, 6,52. C27H34F2O6S requer C, 61,82; H, 6,53%).

Intermediário 3 6a.9a-Difluoro-llB-hidroxi-21-mercapto-16a-metil-17a-propionil-oxi-preqna-1,4-dieno-3,20-diona A uma solução com agitação de 21-acetilsulfanil-6a,9a-difluoro-lip-hidroxi-16a-metil-17a-propioniloxi-pregna-l,4-dieno-3,20-diona (Intermediário 2, 250 mg, 0,48 mmol) em tetrahidrofurano anidro (3 mL) a -15°C adicionou-se hidrato de hidrazina (30 pL, 0,52 mmol). A mistura reaccional resultante foi agitada a -15 a -10°C durante 1 h. O solvente foi removido a pressão reduzida dando um resíduo que foi partilhado entre acetato de etilo (50 mL) e ácido clorídrico 0,5 M (50 mL). A camada orgânica foi então lavada com água (50 mL), solução 23 (Ρ ^ ^^ saturada de bicarbonato de sódio (50 mL), água (50 mL) e solução saturada de cloreto de sódio (50 mL). A solução foi então seca sobre sulfato de magnésio anidro e o solvente foi removido a pressão reduzida para dar um sólido amarelo pálido. Este material foi purificado por HPLC preparativa de fase reversa (Dynamax 60Ã C18, 25 cm x 41 mm d.i.) eluindo com 50-95% de acetonitrilo/água com detecção a 230 nm. Remoção do solvente das fracções apropriadas a pressão reduzida deu o composto em epígrafe como um sólido amarelo pálido (96 mg, 42%): p.f. 223-227°C; MS (ES+ve) m/z 483 (M+H) + ; RMN ô (CDCI3) inclui 7,10 (1H, d, J 10 Hz), 6,44 (1H, s), 6,38 (1H, d, J 10 Hz), 5,48 e 5,28 (1H, 2m), 4,41 (1H, m), 3,46-3,20 (3H, m), 2,40 (2H, q, J 7,5 Hz), 1,52 (3H, s), 1,18 (3H, t, J 7,5 Hz), 1,07 (3H, s), 0,93 (3H, d, J 7,5 Hz). (Encontradas C, 62,23; H, 6,78; S, 6,36. C25H32F2O5S requer C, 62,22; H, 6,68; S, 6,64%).

Intermediário 4 6 a,9a-Difluoro-116,21-dihidroxi-16a-metil-17 a-propioniloxi-preqn-4-eno-3,20-diona

Uma solução com agitação de 6a, 9a-difluoro-lip,21-dihidroxi-16a-metil-17a-propioniloxi-pregna-l, 4-dieno-3,20-diona (3 g, 6,43 mmol) e cloreto de tris(trifenilfosfina) ródio(I) (0,6 g, 0,64 mmol) em etanol (100 mL) foi hidrogenada a 1 atmosfera durante 60 h. O solvente foi então removido a pressão reduzida dando um resíduo que foi purificado por cromatografia em coluna eluindo com acetato de etilo-ciclohexano (3:1). Remoção do solvente das fracções apropriadas a pressão reduzida deu o composto em epígrafe como um sólido amarelo pálido (2,57 g, 85%): p.f. 175-179°C; MS (TSP+ve) m/z 469 (M+H) + ; IV vmax (KBr) 3428, 1730, 1717, 1669 cm"1; RMN δ (DMSO-d6) inclui 5,82 (1H, s), 5,60 e 5,42 (1H, 2m), 5,20 (1H, sl), 5,07 (1H, t, J 6 Hz), 4,25-3,95 (3H, m), 3,24 (1H, m), 2,39 (2H, q, J 7,5 Hz), 1,48 (3H, s), 1,03 (3H, t, J 7,5 Hz), 0,90 (3H, s), 0,84 (3H, d, J 7 Hz). HRMS (ES+ve) encontrada 469,240056 (M+H)+. C25H35F2O6 requer 469,24171. 24 •ν

Intermediário 5 6a.9a-Difluoro-llB-hidroxi-21-metanossulfoniloxi-16a-metil-17a-propioniloxi-preqn-4-eno-3,20-diona A uma solução com agitação de 6a,9a-difluoro-lip,21-dihidroxi-16a-metil-17a-propioniloxi-pregn-4-eno-3,20-diona (Intermediário 4, 2 g, 4,27 mmol) em piridina anidra (20 mL) sob atmosfera de azoto adicionou-se cloreto de metanossulfonilo (1,66 mL, 21 mmol), gota a gota, ao longo de 2 minutos. A mistura reaccional foi agitada durante 2 h e foi então vertida em ácido clorídrico 0,5 M gelado (40 mL). 0 precipitado resultante foi recolhido por filtração, lavado com água (30 mL x 3) e seco a pressão reduzida sobre pentóxido de fósforo para dar o composto em epígrafe (2,390 g, rendimento quantitativo): p.f. 157-159°C (decomp.); MS (TSP+ve) m/z 547 (M+H) + ; IV Umax (KBr) 3532, 1731, 1668 cm"1; RMN ô (DMS0-d6) inclui 5,81 (1H, s), 5,60 e 5,41 (1H, 2m), 5,24 (1H, sl), 5,05 (1H, d, J 16 Hz), 4,82 (1H, d, J 16 Hz), 4,16 (1H, m), 3,26 (3H, s), 2,43 (2H, q, J 7,5 Hz), 1,48 (3H, s), 1,02 (3H, t, J7,5 Hz), 0,94 (3H, s), 0,85 (3H, d, J 7 Hz). (Encontrada: C, 56,12; H, 6,54; S, 5,67. C26H36F2°8S.0,5H2O requer C, 56,39; H, 6,70; S, 5,79%).

Intermediário 6 Éster 2-oxo-tetrahidro-furan-3R-ílico do ácido metanossulfónico A uma solução com agitação de (R)-3-hidroxi-2-oxo-tetrahidrofurano (400 mg, 3,92 mmol) e trietilamina (601 pL, 4,31 mmol) em diclorometano anidro (15 mL) a 0°C sob atmosfera de azoto adicionou-se cloreto de metanossulfonilo (0,49 mL, 6,37 mmol). A mistura resultante foi agitada a 0°C durante 0,25 h e a 21°C durante 2,5 h. Adicionou-se quantidades adicionais de trietilamina (109 pL, 0,78 mmol) e cloreto de metanossulfonilo (61 pL, 0,78 mmol) e a mistura foi agitada durante 1,5 h. A mistura reaccional foi vertida em água (20 mL) e a camada aquosa separada foi extraída com diclorometano (20 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução saturada de 25 ff

U t bicarbonato de sódio (20 mL) e solução saturada de cloreto de sódio (20 mL) depois foram secas sobre sulfato de magnésio anidro. O solvente foi removido a pressão reduzida dando um residuo amarelo que foi purificado por cromatografia em coluna "flash" sobre silica gel utilizando acetato de etilo:ciclohexano (3:2) como eluente. Remoção do solvente das fracções apropriadas a pressão reduzida deu o composto em epígrafe como um sólido cristalino branco (214 mg, 30%): p.f. 69-72°C; MS (TSP+ve) m/z 198 (M+NH4) + ; IV umax (KBr) 1774, 1363 cm-1; RMN Ô (CDCI3) inclui 5,33 (1H, t, J 9 Hz), 4,53 (1H, dt, J 9 e 3,5 Hz), 4,43-4,28 (1H, m), 3,30 (3H, s), 2,88-2,72 ( 1H, m), 2,66-2,47 ( 1H, m). (Encontradas C, 33,53; H, 4,16; S, 17,35. C5H8O5S.0,05H2O requer C, 33,17; H, 4,51; S, 17,71%).

Intermediário 7 Éster 2-oxo-tetrahidro-furan-3S-llico do ácido metanossulfónico A uma solução com agitação de (S)-3-hidroxi-2-oxo-tetrahidrofurano (500 mg, 3,90 mmol) e trietilamina (0,88 mL, 6,37 mmol) em diclorometano anidro (20 mL) a 0°C sob atmosfera de azoto adicionou-se cloreto de metanossulfonilo (334 pL, 4,31 mmol). A mistura resultante foi agitada a 0eC durante 0,5 h e a 21°C durante mais 5 h. O solvente foi removido da mistura reaccional a pressão reduzida dando um residuo que foi purificado por cromatografia em coluna "flash" sobre silica gel utilizando acetato de etilosciclohexano (3:2) como eluente. Remoção do solvente das fracções apropriadas a pressão reduzida deu o composto em epiarafe como um sólido cristalino branco (341 mg, 39%): p.f. 74-76°C; MS (TSP+ve) m/z 198 (M+NH4) + ; IV vmax (KBr) 1787, 1363 cnr1; RMN ô (CDCI3) inclui 5,34 (1H, t, J 9 Hz), 4,53 (1H, dt, J 9 e 3 Hz), 4,41-4,28 (1H, m), 3,29 (3H, s), 2,86-2,71 (1H, m), 2,66-2,47 (1H, m). (Encontrada: C, 33,47; H, 4,86; S, 17,80. C5H8O5S requer C, 33,33; H, 4,48; S, 17,80%). 26

V

Intermediário 8 6a,9a-Di£luoro-llg-liidroxi-16«, 17«-isopropilidenodioxi-21-metanossulfoniloxi-preqn-4-eno-3,20-diona A uma solução com agitação de 6a,9a-difluoro-lip,21-dihidroxi-16a,17a-isopropilidenodioxi-pregn-4-eno-3,20-diona (1 g, 2,2 mmol) em piridina anidra (10 mL) a 0°C sob atmosfera de azoto adicionou-se cloreto de metanossulfonilo (0,85 mL, 11 mmol). A mistura reaccional foi agitada durante 2 h e foi então vertida em ácido clorídrico 1 M gelado (40 mL). A suspensão resultante foi extraida com acetato de etilo (20 mL x 4) e os extractos orgânicos combinados foram lavados com solução saturada de cloreto de sódio (20 mL) e secos sobre sulfato de magnésio anidro. Remoção do solvente a pressão reduzida deu um resíduo amarelo pálido que foi purificado por HPLC preparativa de fase reversa (Dynamax 60À C18, 25 cm x 41 mm d.i.) eluindo com 55% de acetonitrilo/água a 45 mL/min com detecção a 230 nm. As fracções apropriadas foram combinadas e o solvente foi removido a pressão reduzida para dar uma espuma incolor, o composto em epígrafe (843 mg, 72%): MS (ES+ve) m/z 533 (M+H)+; IV Umax (KBr) 3453, 1732, 1669 cm-1; RMN ô (DMSO-d6) inclui 5,80 (1H, s), 5,61 e 5,42 (1H, 2m), 5,35 (1H, d, J 18 Hz), 5,30 (1H, sl), 4,93 (1H, sl), 4,90 (1H, d, J 18 Hz), 4,19 (1H, m), 3,32

(3H, s), 1,48 (3H, s), 1,38 (3H, s), 1,15 (3H, s), 0,80 (3H, s). (Encontrada: C, 55,66; H, 6,29; S, 5,87. C25H34F2O8S.0,4H2O requer C, 55,63; H, 6,50; S, 5,94%).

Intermediário 9 16«, 17 a- (R-Butilidenodioxi) -6«, 9a-dif luoro-HB-hidroxi-21-metanossulfoniloxi-preqna-1,4-dieno-3,20-diona A uma solução com agitação de 16a, 17a-(R-butilidenodioxi)-6a,9a-difluoro-ΙΙβ,21-dihidroxi-pregna-l,4-dieno-3,20-diona (500 mg, 1,07 mmol) em piridina anidra (6 mL) sob atmosfera de azoto adicionou-se cloreto de metanossulfonilo (0,41 mL, 5,35 mmol). A mistura reaccional foi agitada durante 2 h e foi então vertida 27 em ácido clorídrico 1 M gelado (30 mL). 0 precipitado resultante foi recolhido por filtração e seco a pressão reduzida sobre pentóxido de fósforo para dar um sólido amarelo pálido, o composto em epígrafe (566 mg, 97%): MS (TSP+ve) m/z 545 (M+H)+; RMN δ (DMS0-d6) inclui 7,27 (1H, d, J 10 Hz), 6,30 (1H, d, J 10 Hz), 6,10 (1H, s), 5,73 e 5,53 (1H, 2m) , 5,61 (1H, sl), 5,27 (1H, d, J 18 Hz), 4,99 (1H, d, J 18 Hz), 4,75 (2H, m), 4,20 (1H, Sl), 3,29 (3H, s), 1,48 (3H, S), 0,87 (3H, t, J 7,5 Hz), 0,84 (3H, s). (Encontradas C, 56,39 ; H, 6,22; S, 6,03. C26H34F2O8S.0,4H2O requer C, 56,59; H, 6,36; S, 5,81%).

Intermediário 10 16a,17a-(R-Butilidenodioxi)-6a,9a-difluoro-1lB-hidroxi-21-metanossulfoniloxi-preqn-4-eno-3,20-diona A uma solução com agitação de 16a,17a-(R-butilidenodioxi)-6a,9a-difluoro-lip, 21-dihidroxi-pregn-4-eno-3,20-diona (1 g, 2,13 mmol) em piridina anidra (12 mL) a 0°C sob atmosfera de azoto adicionou-se cloreto de metanossulfonilo (0,82 mL, 10,65 mmol). A mistura reaccional foi agitada durante 0,5 h a 0°C e 2,5 a 21°C e depois foi vertida em ácido clorídrico 1 M gelado (60 mL). 0 precipitado resultante foi recolhido por filtração e seco a pressão reduzida sobre pentóxido de fósforo para dar um sólido amarelo pálido que foi purificado por HPLC preparativa de fase reversa (Dynamax 60Â C18, 25 cm x 41 mm d.i.) eluindo com 55% de acetonitrilo/água a 45 mL/min com detecção a 230 nm. As fracções apropriadas foram combinadas e o solvente foi evaporado a pressão reduzida para dar o composto em epígrafe (730 mg, 63%) : MS (TSP+ve) m/z 547 (M+H) + ; RMN ô (CDCI3) inclui 6,15 (1H, s), 5,37 e 5,18 (1H, 2m), 5,04 (2H, s), 4,98 (1H, d, J 5 Hz), 4,65 (1H, t, J 4,5 Hz), 4,41 (1H, m), 3,26 (3H, s), 1,52 (3H, s), 0,95 (3H, t, J 7,5 Hz), 0,94 (3H, s). (Encontrada: C, 56,58; H, 6,40; S, 5,76. C26H36F2O8S.0,3H20 requer C, 56,57; H, 6,68; S, 5,81%). 28 y u

Intermediário 11 6a,9a-Difluoro-llB-hidroxi-16a,17aisopropilidenodioxi-21-trifluorometanossulfoniloxi-preqna-1,4-dieno-3,20-diona A uma solução com agitação de 6a,9a-difluoro-lip,21-dihidroxi-16a, 17a-isopropilidenodioxi-pregna-l, 4-dieno-3,20-diona (5 g, 11,1 mmol) e piridina (1,8 mL, 22,2 mmol) em diclorometano (50 raL) a -20°C sob atmosfera de azoto adicionou-se anidrido trifluorometanossulfónico (2,23 mL, 13,3 mmol). A mistura reaccional foi agitada durante 0,5 h período durante o qual aqueceu até 20°C e foi então vertida em ácido clorídrico 2 M (100 mL) e extraída com acetato de etilo (200 mL). A fase orgânica foi lavada com água (100 mL), solução saturada de cloreto de sódio (100 mL) e seca sobre sulfato de magnésio anidro. Remoção do solvente a pressão reduzida e trituração em éter dietílico (30 mL) deu o composto em epígrafe (6,2g, 96%): RMN ô (DMSO-d6) inclui 7,29 (1H, d, J 10 Hz), 6,31 (1H, d, J 10 Hz), 6,11 (1H, s), 5,80 (1H, d, J 18 Hz), 5,74 e 5,54 (1H, 2m), 5.61 (1H, d, J 5 Hz), 5,45 (1H, d, J 18 Hz), 4,93 (1H, d, J 3 Hz), 4,21 (1H, m), 1,48 (3H, s), 1,37 (3H, s), 1,15 (3H, s), 0,83 (3H, s).

Intermediário 12 21-Acetilsulfanil-16a,17«-(R-butilidenodioxi)-6a,9a-difluoro-11 β-hidroxi-preqn-4-eno-3,2 0-diona A uma solução com agitação de trifenilfosfina (1,21 g, 4.62 mmol) em tetrahidrofurano anidro (20 mL) a 0°C sob atmosfera de azoto adicionou-se azodicarboxilato de diisopropilo (0,91 mL, 4,62 mmol). A suspensão amarela resultante foi agitada a 0-5°C durante 0,5 h período após o qual se adicionou uma solução de 16a,17a-(R-butilidenodioxi)-6a,9a-difluoro-lip,21-

dihidroxi-pregn-4-eno-3,20-diona (1,40 g, 3,08 mmol) e ácido tiolacético (0,26 mL, 3,70 mmol) em tetrahidrofurano anidro (10 mL) gota a gota ao longo de 15 minutos. A mistura reaccional foi agitada durante mais 0,5 h a 0-5°C e durante 18 h a 20°C. A 29

V U mistura reaccional foi vertida em ácido clorídrico 2 M (100 mL) e extraída com acetato de etilo (100 mL). A fase orgânica foi lavada com solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (100 mL), água (100 mL) e solução saturada de cloreto de sódio (100 mL) e seca sobre sulfato de magnésio anidro. Remoção do solvente a pressão reduzida deu um sólido amarelo. O produto em bruto foi purificado por cromatografia em coluna em sílica gel utilizando acetato de etilo-ciclohexano (2:3) como eluente. Remoção do solvente das fracções pretendidas deu o composto em epígrafe (1,63 g, 100%): MS (TSP+ve) m/z 527 (M+H)+? RMN ô (CDCI3) inclui 6,16 (1H, s), 5,37 e 5,18 (1H, 2m), 4,90 (1H, d, J 15 Hz), 4,68 (1H, t, J 4Hz), 4,42 (1H, m), 3,94 (2H, S), 2,40 (3H, s), 1,52 (3H, s), 0,95 (3H, t, J6 Hz), 0,90 (3H, s).

Intermediário 13 16a,17a-lR-Butilidenodioxi)-6a,9a-difluoro-llB-hidroxi-21-mercapto-preqn-4-eno-3,20-diona A uma solução com agitação de 21-acetilsulfanil-16a,17a-(R-butilidenodioxi)-6a,9a-difluoro-1ip-hidroxi-pregn-4-eno-3,20-diona (Intermediário 12, 1,62 g, 3,08 mmol) em tetrahidrofurano anidro (25 mL) a -15°C sob atmosfera de azoto adicionou-se hidrato de hidrazina (0,18 mL, 3,08 mmol). A mistura reaccional resultante foi agitada a -15 a -10°C durante 0,5 h e depois a 20°C durante 5 h. A mistura reaccional foi vertida em ácido clorídrico 2 M (74 mL) e extraída com acetato de etilo (75 mL). A fase orgânica foi lavada com água (75 mL), e solução saturada de cloreto de sódio (75 mL) e seca sobre sulfato de magnésio anidro. Remoção do solvente a pressão reduzida deu o composto em epígrafe (1,35 g, 91%) : MS (TSP+ve) m/z 485 (M+H) + ; RMN δ (CDCI3) inclui 6,15 (1H, s), 5,37 e 5,18 (1H, 2m), 4,94 (1H, d, J 5 Hz), 4,65 (1H, t, J 4 Hz), 4,40 (1H, m), 3 ,68 (1H, dd, J 16 e 7 Hz), 3,42 (1H, dd, «7 16 e 7 Hz), 1,52 (3H, s), 0,94 (3H, t, J 6 Hz), 0,89 <3H, S). 30 r'· ú

t

Exemplo 1 6a,9«-Difluoro-llB-hidroxi-16a-metil-21-(2-oxo-tetrahidro-furan-3-il-sulfanil)-17a-propioniloxi-preqna-l,4-dieno-3,20-diona Método 1 A uma suspensão com agitação de hidreto de sódio (74 mg de uma dispersão a 60% p/p em óleo mineral, 1,84 mmol) em tetrahidrofurano anidro (2 mL) a 0°C sob atmosfera de azoto adicionou-se gota a gota uma solução de a-mercapto-γ- butirolactona (220 mg, 1,84 mmol) em tetrahidrofurano anidro (10 mL). A solução resultante foi agitada a 0°C durante 30 minutos altura em que a efervescência tinha cessado. Adicionou-se uma solução de 6a,9a-difluoro-lip-hidroxi-21-metanossulfoniloxi-16a-metil-17a-propioniloxi-pregna-l,4-dieno-3,20-diona (Intermediário 1, 1 g, 1,84 mmol) em tetrahidrofurano anidro (20 mL) e a mistura reaccional foi agitada durante 16 h a 0-21°C. Adicionou-se quantidades adicionais de hidreto de sódio (37 mg de uma dispersão a 60% p/p em óleo mineral, 0,92 mmol) e de a-mercapto-γ-butirolactona (110 mg, 0,92 mmol) e a mistura foi agitada durante mais 6 h. A mistura reaccional foi vertida em água (30 mL) e extraída com acetato de etilo (30 mL x 4). Os extractos orgânicos combinados foram então lavados com solução saturada de cloreto de sódio (20 mL) e secos sobre sulfato de magnésio anidro. Remoção do solvente a pressão reduzida deu um resíduo amarelo pálido que foi purificado por HPLC preparativa de fase reversa (Dynamax 60Â C18, 25 cm x 41 mm d.i.) eluindo com 50% de acetonitrilo/água a 45 mL/min com detecção a 230 nm. As fracções apropriadas foram combinadas e evaporadas a pressão reduzida para dar o composto em epígrafe (177 mg, 17%): p.f. 197-206°C; MS (ES+ve) m/z 567 (M+H)+; IV umax (KBr) 3484, 2949, 1761, 1731, 1669, 1629 cm-1; RMN ô (CDCI3) inclui 7,14 (1H, d, J 10 Hz), 6,44 (1H, s), 6,38 (1H, d, J 10 Hz), 5,49 e 5,30 (1H, 2m), 4,53-4,28 (3H, m), 4,00-3,75 (3H, m), 3,60-3,30 (2H, m), 2,43 (1H, q, J 7,5 Hz), 2,40 (1H, q, J 7,5 Hz), 1,53 (3H, s), 1,14 (3H, t, J 7,5 Hz), 1,06 (3H, s), 0,94 (3H, d, J 7,5 Hz). (Encontrada: C, 31 j·-' L-Cj 61,60; H, 6,30; S, 5,75. C29H36F2O7S requer C, 61,47; H, 6,40; S, 5,66%). Método 2 A uma suspensão com agitação de 6a,9a-difluoro-lip-hidroxi-21-mercapto-16a-metil-17a-propionil-oxi-pregna-l,4-dieno-3,20-diona (Intermediário 3, 85 mg, 0,18 mmol) em diclorometano (3 mL) sob atmofera de azoto adicionou-se trietilamina (74 μΐι, 0,53 mmol). A suspensão foi então arrefecida a 0°C e adicionou-se a-bromo-y-butirolactona (45 pL, 0,53 mmol). A mistura reaccional resultante foi então agitada a 0-21°C durante 4 h. 0 solvente foi removido da mistura a pressão reduzida e o residuo foi partilhado entre acetato de etilo (50 mL) e ácido clorídrico 0,5 M (50 mL). A camada orgânica foi lavada com água (50 mL x 2) e solução saturada de cloreto de sódio (50 mL) e foi então seca sobre sulfato de magnésio anidro. Remoção do solvente a pressão reduzida deu um resíduo amarelo pálido que foi purificado por HPLC preparativa de fase reversa (Dynamax 60Â C18, 25 cm x 41 mm d.i.) eluindo com 50-95% de acetonitrilo/água a 45 mL/min com detecção a 230 nm. As fracções apropriadas foram combinadas e evaporadas a pressão reduzida para dar o composto em epígrafe (30 mg, 30%): p.f. 198-205°C; MS (TSP+ve) m/z 567 (M+H) + ; IV Umax (KBr) 1759, 1730, 1712, 1631 cm-1; RMN ô (CDCI3) inclui 7,11 (1H, d, J 10 Hz), 6,44 (1H, s), 6,38 (1H, d, J 10 Hz), 5,48 e 5,28 (1H, 2m), 4,52-4,28 (3H, m), 4,00-3,74 (2H, m), 3,63-3,30 (2H, m), 1,52 (3H, s), 1,15 (3H, t, J 7,5 Hz), 1,05 (3H, s), 0,94 (3H, d, J 7 Hz). (Encontrada: C, 61,67; H, 6,79; S, 5,27. C29H36F2O7S requer C, 61,47; H, 6,40; S, 5,66%). 32 t Γ

Exemplo 2 6a.9a-Difluoro-llB-hidroxi-16a-metil-21-l2-oxo-tetrahidro-furan-3-il-sulfanil)-17a-propioniloxi-preqn-4-eno-3,20-diona A uma suspensão com agitação de hidreto de sódio (74 mg de uma dispersão a 60% p/p em óleo mineral, 1,84 mmol) em tetrahidrofurano anidro (2 mL) a 0°C sob atmosfera de azoto adicionou-se, gota a gota, uma solução de a-mercapto-γ- butirolactona (220 mg, 1,84 mmol) em tetrahidrofurano anidro (10 mL). A solução resultante foi agitada a 0°C durante 30 minutos altura em que a efervescência tinha cessado. Adicionou-se uma solução de 6a,9a-difluoro-ll-phidroxi-21-metanossulfoniloxi-16a-metil-17a-propioniloxi-pregn-4-eno-3,20-diona (Intermediário 5, 1 g, 1,84 mmol) em tetrahidrofurano anidro (20 mL) e a mistura reaccional foi agitada durante 16 ha 0-21°C. Adicionou-se quantidades adicionais de hidreto de sódio (37 mg de uma dispersão a 60% p/p em óleo mineral, 0,92 mmol) e de a-mercapto-γ-butirolactona (110 mg, 0,92 mmol) e a mistura foi agitada durante mais 6 h. A mistura reaccional foi vertida em água (30 mL) e extraída com acetato de etilo (30 mL x 4). Os extractos orgânicos combinados foram então lavados com solução saturada de cloreto de sódio (20 mL) e secos sobre sulfato de magnésio anidro. Remoção do solvente a pressão reduzida deu um resíduo amarelo que foi purificado por HPLC preparativa de fase reversa (Dynamax 60Â C18, 25 cm x 41 mm d.i.) eluindo com 55% de acetonitrilo/água a 45 mL/min com detecção a 230 nm. As fracções apropriadas foram combinadas e evaporadas a pressão reduzida para dar o composto em epígrafe (455 mg, 43%): p.f. 171-175°C; MS (ES+ve) m/z 569 (M+H)+; IV vmax (KBr) 3505, 1757, 1669 cm"1; RMN δ (CDCI3) inclui 6,14 (1H, s), 5,37 e 5,18 (1H, 2m), 4,52-4,26 (3H, m), 4,03-3,74 (2H, m), 3,59-3,32 (2H, m), 1,52 (3H, s), 1,17 (3H, t, J 7,5 Hz), 1,03 e 1,02 (3H, 2s), 0,94 (3H, d, J 7 Hz). (Encontrada: C, 61,24; H, 7,08; S, 5,54. C29H38F2O7S requer C, 61,25; H, 6,74; S, 5,64%). 33 \ r

Exemplo 3 6α,9a-Difluoro-1lB-hidroxi-16a,17a-isopropilidenodioxi-21-(2-oxo-tetrahidro-furan-3-il-sulfanil)-preqna-1,4-dieno-3.20-diona Método 1 A uma suspensão com agitação de hidreto de sódio (27 mg de uma dispersão a 60% p/p em óleo mineral, 0,68 mmol) em tetrahidrofurano anidro (1 mL) a 0°C sob atmosfera de azoto adicionou-se, gota a gota, uma solução de a-mercapto-γ- butirolactona (80 mg, 0,68 mmol) em tetrahidrofurano anidro (2 mL). A solução resultante foi agitada a 0°C durante 30 minutos altura em que a efervescência tinha cessado. Adicionou-se uma solução de 6a,9a-difluoro-lip-hidroxi-16a, 17a-isopropilideno- dioxi-21-metanossulfoniloxi-pregna-l,4-dieno-3,20-diona (300 mg, 0,57 mmol) em tetrahidrofurano anidro (10 mL) e a mistura reaccional foi agitada durante mais lha 0-21°C. A mistura reaccional foi vertida em água (30 mL) e extraída com acetato de etilo (10 mL x 3). Os extractos orgânicos combinados foram lavados com solução saturada de cloreto de sódio (20 mL) e secos sobre sulfato de magnésio anidro. Remoção do solvente a pressão reduzida deu um sólido branco que foi purificado por HPLC preparativa de fase reversa (Dynamax 60Â C18, 25 cm x 41 mm d.i.) eluindo com 50% de acetonitrilo/água a 45 mL/min com detecção a 230 nm. As fracções apropriadas foram combinadas e evaporadas a pressão reduzida para dar o composto em epígrafe isómero A (86,7 mg, 28%): p.f. 226-229°C; MS (TSP+ve) m/z 553 (M+H)+; IV umax (KBr) 1766, 1716, 1668 cm-1; RMN δ (DMS0-d6) inclui 7,30 (1H, d, J 10 Hz), 6,30 (1H, d, J 10 Hz), 6,11 (1H, s), 5,74 e 5,54 (1H, 2m), 5,60 (1H, d, J 4,5 Hz), 4,91 (1H, sl), 4,39-4,15 (3H, m), 4,22 (1H, d, J 17,5 Hz), 3,93 (1H, dd, J 8 e 6 Hz), 3,83 (1H, d, J 17,5 Hz), 1,48 (3H, s), 1,35 (3H, S), 1,08 (3H, s), 0,82 (3H, s). (Encontrada: C, 60,02; H, 6,14; S, 5,64. C28H34F2O7S.0,5H20 requer C, 59,88; H, 6,28; S, 5,71%) e o composto em epígrafe, isómero B (72 mg, 23%): p.f. 204-205°C; MS (TSP+ve) m/z 553 (M+H)+; IV Umax (KBr) 3474, 1759, 1719, 1668, 34 Γ ^ ^—?· 1633 cm-1; RMN ô (DMS0-d6) inclui 7,30 (1H, d, J 10 Hz), 6,30 (1H, d, J 10 Hz), 6,11 (1H, s), 5,74 e 5,54 (1H, 2m), 5,58 (1H, sl), 4,91 (1H, sl), 4,39-4,15 (4H, m), 3,91 (1H, dd, J 8 e 6,5 Hz), 3,82 (1H, d, J 17,5 Hz), 1,48 (3H, s), 1,36 (3H, s), 1,12 (3H, s), 0,79 (3H, s). (Encontrada: C, 58,82; H, 6,99; S, 5,67. C28H34F2O7S.H2O.C2H3N requer C, 58,91; H, 6,43; S, 5,24%) Método 2 A uma suspensão com agitaçao de 6a,9a-difluoro-lip-hidroxi-21-mercapto-l 6a, 17a-isopropilidenodioxi-pregna-l ,4-dieno-3,20-diona (50 mg, 0,11 mmol) em diclorometano (1 mL) sob atmofera de azoto adicionou-se trietilamina (45 pL, 0,32 mmol). A suspensão foi então arrefecida a 0°C e adicionou-se a-bromo-γ- butirolactona (27 μΐ», 0,32 mmol). A mistura reaccional resultante foi então agitada a 0-21°C durante 4 h. 0 solvente foi removido da mistura a pressão reduzida e o residuo foi partilhado entre acetato de etilo (25 mL) e ácido clorídrico 0,5 M (25 mL). A camada orgânica foi lavada com água (25 mL x 2) e solução saturada de cloreto de sódio (25 mL) e foi então seca sobre sulfato de magnésio anidro. Remoção do solvente a pressão reduzida deu um. resíduo incolor que foi purificado por HPLC preparativa de fase reversa (Dynamax 60Â Cl8, 25 cm x 41 mm d.i.) eluindo com 50-95% de acetonitrilo/água a 45 mL/min com detecção a 230 nm. As fracções apropriadas foram combinadas e evaporadas a pressão reduzida para dar o composto em epígrafe, isómero A (27 mg, 46%): p.f. 224-228°C; MS (TSP+ve) m/z 553 (M+H)+; IV Umax (KBr) 3391, 1763, 1716, 1667, 1609 cm-1; RMN δ (CDC13) inclui 7,12 (1H, d, J 10 Hz), 6,44 (1H, s), 6,37 (1H, d, J 10 Hz), 5,48 e 5,29 (1H, 2m), 5,06 (1H, d, J 4,5 Hz), 4,55-4,33 (3H, m), 4,04 (1H, d, J 19 Hz), 3,88 (1H, d, J 19 Hz), 3,83 (1H, dd, J 8,5 e 3,5 Hz), 1,53 (3H, s), 1,43 (3H, s), 1,16 (3H, s), 0,94 (3H, s) e o composto em epígrafe, isómero B (29 mg, 49%): p.f. 203-206°C; MS (TSP+ve) m/z 533 (M+H)+; IV umax (KBr) 3437, 1762, 1715, 1669, 1628 cm"1; RMN δ (CDCI3) inclui 7,12 (1H, d, J 10 Hz), 6,44 (1H, s), 6,38 (1H, d, J 10 Hz), 5,48 e 35

V L-Cj 5,29 (1H, 2m), 5,05 (1H, d, J 4,5 Hz), 4,55-4,30 (3H, m), 4,27 (1H, d, J 17,5 Hz), 3,93 (1H, d, J 17,5 Hz), 3,68 (1H, dd, J 8 e 4,5 Hz), 1,53 (3H, s), 1,43 (3H, S), 1,19 (3H, s), 0,90 (3H, s).

Exemplo 4 6a,9a-Difluoro-HB-hidroxi-16a.17«-isopropilidenodioxi-21-(2-oxo-tetrahidro-furan-3S-il-sulfanil)-preqna-1,4-dieno-3,20-diona A uma suspensão com agitação de hidreto de sódio (9 mg de uma dispersão a 60% p/p em óleo mineral, 0,21 mmol) em DMF anidra (1 mL) a 0°C sob atmosfera de azoto adicionou-se uma solução de 6a,9a-difluoro-lip-hidroxi-21-mercapto-16a,17a- isopropilidenodioxi-pregna-1,4-dieno-3,20-diona (100 mg, 0,21 mmol) em DMF anidra (2 mL). A mistura resultante foi agitada a 0°C durante 0,5 h altura em que se adicionou uma solução de éster 2-oxo-tetrahidro-furan-3R-ilico do ácido metanossulfónico (Intermediário 6, 38 mg, 0,21 mmol) em DMF anidra (3 mL). A mistura reaccional foi agitada a 0°C durante 0,5 h e a 21 °C durante mais 1 h. A mistura foi partilhada entre água (20 mL) e acetato de etilo (20 mL). A camada aquosa foi extraída com acetato de etilo (20 mL) e os extractos orgânicos combinados foram lavados com solução saturada de cloreto de sódio (20 mL), secos sobre sulfato de magnésio anidro e evaporados a pressão reduzida para dar um resíduo oleoso amarelo. Este material foi purificado por cromatografia em coluna "flash" sobre sílica gel utilizando acetato de etilo como eluente. Remoção do solvente das fracções apropriadas a pressão reduzida deu o composto em epígrafe como um sólido branco (38 mg, 32%); os dados espectroscópicos eram idênticos aos obtidos para o isómero A no Exemplo 3. 36

Exemplo 5 6α.9a-Difluoro-11β-hidroxi-16α,17 a-isopropilidenodioxi-21-(2-oxo-tetrahidro-furan-3R-il-sulfanil)-preqna-1,4-dieno-3,20-diona A uma solução com agitação de 6a,9a-difluoro-lip-hidroxi-21-mercapto-16a/ 17a-isopropilidenodioxi-pregna-l, 4-dieno-3,20-diona (100 mg, 0,21 mmol) e éster 2-oxo-tetrahidro-furan-3S-ílico do ácido metanossulfónico (Intermediário 7, 28 mg, 0,21 mmol) em DMF anidra (2 mL) adicionou-se, numa só porção, carbonato de potássio (15 mg, 0,11 mmol). A mistura reaccional resultante foi agitada sob atmosfera de azoto durante 1,5 h altura em que se adicionou outra porção de carbonato de potássio 815 mg, 0,11 mmol). A mistura foi agitada durante mais 2,5 h. Adicionou-se acetato de etilo (10 mL) e ácido clorídrico 2 M (10 mL) e a fase orgânica foi separada e lavada com água (10 mL) e com solução saturada de cloreto de sódio (10 mL) depois foi seca sobre sulfato de magnésio anidro. Remoção do solvente a pressão reduzida deu um resíduo amarelo que foi purificado por cromatografia em coluna "flash" sobre sílica gel utilizando éter dietílico como eluente. Remoção do solvente das fracções apropriadas a pressão reduzida deu o composto em epígrafe como um sólido branco (91 mg, 77%); os dados espectroscópicos eram idênticos aos obtidos para o isómero B no Exemplo 3.

Exemplo 6 6a.9a-Difluoro-llB-hidroxi-16a.17a-isopropilidenodioxi-21-(2-oxo-tetrahidro-furan-3-il-sulfanil)-preqn-4-eno-3,20-diona A uma suspensão com agitação de hidreto de sódio (72 mg de uma dispersão a 60% p/p em óleo mineral, 1,80 mmol) em tetrahidrofurano anidro (1 mL) a 0°C sob atmosfera de azoto adicionou-se, gota a gota, uma solução de a-mercapto-γ- butirolactona (213 mg, 1,80 mmol) em tetrahidrofurano anidro (2 mL). A solução resultante foi agitada a 0°C durante 30 minutos altura em que a efervescência tinha cessado. Adicionou-se uma solução de 6a,9a-difluoro-lip-hidroxi-16a, 17a-isopropilideno- 37

u K dioxi-21-metanossulfoniloxi-pregn-4-eno-3,20-diona (Intermediário 8, 800 mg, 1,50 mmol) em tetrahidrofurano anidro (10 mL) e a mistura reaccional foi agitada durante mais lha 0°c. A mistura reaccional foi vertida em água (20 mL) e extraida com acetato de etilo (20 mL x 4). Os extractos orgânicos combinados foram então lavados com solução saturada de cloreto de sódio (20 mL) e secos sobre sulfato de magnésio anidro. Remoção do solvente a pressão reduzida deu um residuo que foi purificado por HPLC preparativa de fase reversa (Dynamax 60Â C18, 25 cm x 41 mm d.i.) eluindo com 55% de acetonitrilo/água a 45 mL/min com detecção a 230 nm. As fracções apropriadas foram combinadas e evaporadas a pressão reduzida para dar o composto em epígrafe, isómero A (282 mg, 34%) Í p.f. 124-128°C; MS (TSP+ve) m/z 555 (M+H)+; IV vmax (KBr) 3468, 1760, 1716, 1669 cm"1; RMN ô (DMSO-d6) inclui 5,80 (1H, s), 5,60 e 5,41 (1H, 2m), 5,30 (1H, sl), 4,90 (1H, sl), 4,40-4,10 (3H, m), 4,08-3,73 (3H, m), 1,47 (3H, m), 1,37 (3H, s), 1,08 (3H, s), 0,79 (3H, s). (Encontrada: C, 59,67; H, 6,39; S, 5,57. C28H36F2O7S.0,5H2O requer C, 59,67; H, 6,62; S, 5,69%) e o composto em epígrafe, isómero B (235 mg, 28%): p.f. 224-228°C; MS (TSP+ve) m/z 555 (M+H)+; IV Umax (KBr) 3482, 1762, 1714, 1669 cm-1; RMN ô (DMS0-Ó6) inclui 5,81 (1H, s), 5,60 e 5,41 (1H, 2m), 5,28 (1H, sl), 4,91 (1H, sl), 4,40-4,10 (4H, m), 3,95-3,73 (2H, m), 1,47 (3H, m), 1,38 (3H, s), 1,11 (3H, s), 0,77 (3H, s).

(Encontrada: C, 59,78; H, 6,57; S, 5,62. C28H36F2°7S.0,5H2O requer C, 59,67; H, 6,62; S, 5,69%)

Exemplo 7 16a,17a-(R-Butilidenodioxi)-6a,9a-difluoro-lip-hidroxi-21-f2-oxo-tetrahidro-furan-3-il-sulfanil)-preqna-1,4-dieno-3,20-diona A nma suspensão com agitação de hidreto de sódio (49 mg de uma dispersão a 60% p/p em óleo mineral, 1,22 mmol) em tetrahidrofurano anidro (2 mL) a 0°C sob atmosfera de azoto adicionou-se, gota a gota, uma solução de a-mercapto-γ- butirolactona (144 mg, 1,22 mmol) em tetrahidrofurano anidro (4 mL). A solução resultante foi agitada a 0°C durante 30 minutos 38

altura em que a efervescência tinha cessado. Adicionou-se uma solução de 16a, ncx-ÍR-butilidenodioxiJ-ea^a-difluoro-llp- hidroxi^l-metanossulfoniloxi-pregna-l ,4-dieno-3,20-diona (Intermediário 9, 557 mg, 1,02 mmol) em tetrahidrofurano anidro (15 mL) e a mistura reaccional foi agitada durante 18 h a 0-21°C. Adicionou-se quantidades adicionais de hidreto de sódio (24 mg de uma dispersão a 60% p/p em óleo mineral, 0,61 mmol) e de a-mercapto-y-butirolactona (72 mg, 0,61 mmol) e a mistura foi agitada durante mais 1 h. A mistura reaccional foi vertida em água (30 mL) e extraída com acetato de etilo (30 mL x 2). Os extractos orgânicos combinados foram então lavados com solução saturada de cloreto de sódio (30 mL) e secos sobre sulfato de magnésio anidro. Remoção do solvente a pressão reduzida deu um resíduo amarelo que foi purificado por HPLC preparativa de fase reversa (Dynamax 60Â C18, 25 cm x 41 mm d.i.) eluindo com 60% de acetonitrilo/água a 45 mL/min com detecção a 230 nm. As fracções apropriadas foram combinadas e evaporadas a pressão reduzida para dar o composto em epígrafe/ isómero A (152 mg, 34%): p.f. 221-223°C; MS (TSP+ve) m/z 567 (M+H) + ; IV umax (KBr) 3356, 1766, 1715, 1665, 1607 cm"1; RMN δ (CDCI3) inclui 7,12 (1H, d, J 10 Hz), 6,44 (1H, s), 6,38 (1H, d, J 10 Hz), 5,48 e 5,28 (1H, 2m), 4,93 (1H, d, J 5,5 Hz), 4,62 (1H, t, J 4,5 Hz), 4,55-4,32 (3H, m), 4,05 (1H, d, J 19 Hz), 3,71 (1H, d, J 19 Hz), 3,78 (1H, m), 1,52 (3H, s), 0,95 (3H, s), 0,92 (3H, t, »77,5 Hz). (Encontrada: C, 61,02; H, 6,57; S, 5,28. C29H36F2O7S.0,2H2O requer C, 61,08; H, 6,43; S, 5,62%) e o composto em epígrafe, isómero B (92 mg, 16%): p.f. 219-221°C; MS (TSP+ve) m/z 567 (M+H)+; IV Umax (KBr) 3356, 1768, 1721, 1665, 1625, 1609 cm"1; RMN δ (CDCI3) inclui 7,12 (1H, d, J10 Hz), 6,44 (1H, s), 6,40 (1H, d, J 10 Hz), 5,48 e 5,29 (1H, 2m), 4,92 (1H, d, J5 Hz), 4,67 (1H, t, J 4,5 Hz), 4,55-4,30 (3H, m), 4,19 (1H, d, J 18 Hz), 3,81 (1H, d, J 18 Hz), 3,68 (1H, m), 1,53 (3H, s), 0,92 (3H, t, J 7,5 Hz). (Encontrada: C, 61,35; H, 6,39; S, 5,57. C29H36F2O7S requer C, 61,47; H, 6,40; S, 5,66%)

Exemplo 8 39

V

16α,17α-(R-Butilidenodioxi)-6α,9g-difluoro-1lB-hidroxi-21-(2-oxo-tetrahidro-furan-3-il-sulfanil)-preqn-4-eno-3.20-diona A uma suspensão com agitação de hidreto de sódio (63 mg de uma dispersão a 60% p/p em óleo mineral, 1,5 8 mmol) em tetrahidrofurano anidro (1 mL) a 0°C sob atmosfera de azoto adicionou-se, gota a gota, uma solução de a-mercapto-γ- butirolactona (187 mg, 1,58 mmol) em tetrahidrofurano anidro (2 mL). A solução resultante foi agitada a 0°C durante 45 minutos altura em que a efervescência tinha cessado. Adicionou-se uma solução de 16a,17a-(R-butilidenodioxi)-6a,9a-difluoro-lip- hidroxi-21-metanossulfoniloxi-pregn-4-eno-3,20-diona (Intermediário 10, 722 mg, 1,32 mmol) em tetrahidrofurano anidro (10 mL) e a mistura reaccional foi agitada durante mais 1,5 h a 0-21°C. A mistura reaccional foi vertida em água (30 mL) e extraída com acetato de etilo (30 mL x 2). Os extractos orgânicos combinados foram então lavados com solução saturada de cloreto de sódio (30 mL) e secos sobre sulfato de magnésio anidro. Remoção do solvente a pressão reduzida deu um resíduo amarelo que foi purificado por HPLC preparativa de fase reversa (Dynamax 60Â C18, 25 cm x 41 mm d.i.) eluindo com 60% de acetonitrilo/água a 45 mL/min com detecção a 230 nm. As fracções apropriadas foram combinadas e evaporadas a pressão reduzida para dar o composto em epígrafe, isómero A (335 mg, 45%): p.f. 159-161°C; MS (TSP+ve) m/z 569 (M+H)+; IV Umax (KBr) 1761, 1714, 1668 cm-1; RMN ô (CDCI3) inclui 6,14 (3H, S), 5,37 e 5,17 (1H, 2m), 4,95 (1H, d, J 5 Hz), 4,63 (1H, t, J4,5 Hz), 4,55-4,29 (3H, m), 4,08 (1H, d, J 18 Hz), 3,72 (1H, d, J 18 Hz), 3,77 (1H, m), 1,52 (3H, s), 0,95 (3H, t, J 4,5 Hz), 0,92 (3H, s). (Encontrada: C, 60,31; H, 6,86; S, 5,52. C29H38F2O7S.0,4H20 requer C, 60,48; H, 6,79; S, 5,57%) e o composto em epígrafe, isómero B (137 mg, 18%): p.f. 99-102°C; MS (TSP+ve) m/z 569 (M+H) + ; IV Umax (KBr) 1760, 1714, 1668 cm-1; RMN δ (CDCI3) inclui 6,14 (1H, s), 5,37 e 5,18 (1H, 2m), 4,92 (1H, d, J 5 Hz), 4,69 (1H, t, J 4,5 Hz), 4,54-4,30 (3H, m), 4,22 (1H, d, J 18 Hz), 3,80 (1H, d, J 18 Hz), 3,70 (1H, rn), 1,52 (3H, S), 0,95 (3H, t, J 7,5 Hz), 0,90 (3H, S). 40 (1~

(Encontrada: C, 59,47; H, 6,64; S, 5,41. C29H38F2C>7S.0,8H2O requer C, 59,74; H, 6,85; S, 5,50%).

Exemplo 9 16a,17a-(R-Butilidenodioxi)-llB-hidroxi-21-(2-oxo-tetrahidro-furan-3-il-sulfanilΪ-preqna-1,4-dieno-3,20-diona A uma solução com agitação de 16a,17a-butilidenodioxi-lip-hidroxi-21-mercapto-pregna-l,4-dieno-3,20-diona (135 mg, 0,30 mmol) em diclorometano (3 mL) sob atmofera de azoto adicionou-se trietilamina (126 ^L, 0,91 mmol). A mistura reaccional foi então arrefecida a 0°C e adicionou-se a-bromo-y-butirolactona (75 /jL, 0,91 mmol). A mistura reaccional resultante foi então agitada a 0-21°C durante 4 h. O solvente foi removido da mistura a pressão reduzida e o resíduo foi partilhado entre acetato de etilo (50 mL) e ácido clorídrico 0,5 M (50 mL). A camada orgânica foi lavada com água (50 mL x 2) e solução saturada de cloreto de sódio (50 mL x 2) e foi então seca sobre sulfato de magnésio anidro. Remoção do solvente a pressão reduzida deu um resíduo incolor que foi purificado por HPLC preparativa de fase reversa (Dynamax 60Â C18, 25 cm x 41 mm d.i.) eluindo com 50-95% de acetonitrilo/água a 45 mL/min com detecção a 230 nm. As fracções apropriadas foram combinadas e evaporadas a pressão reduzida para dar o composto em epígrafe, mistura diastereoisomérica A (69 mg, 43%): MS (TSP+ve) m/z 531 (M+H)+; IV umax (KBr) 1761, 1714, 1659, 1619, 1602 cm"1; RMN δ (CDCI3) inclui 7,26 (1H, d, J 10 Hz), 6,28 (1H, d, J 10 Hz), 6,03 (1H, s), 5,20 e 4,92 (1H, 2d, J 4 Hz), 5,18 e 4,60 (1H, 2t, J4,5 Hz), 4,55-4,30 (3H, m), 4,09-3,65 (3H, m), 1,46 (3H, s), 0,99 e 0,95 (3H, 2s), 0,92 e 0,91 (3H, 2t, J 7,5 Hz). (Encontrada: C, 64,97; H, 7,64; S, 5,62. C29H38O7S.O,3H20.0,4C4HioO requer C, 64,97; H, 7,59; S, 5,67%) e o composto em epígrafe, mistura diastereoisomérica B (73 mg, 46%) : p.f. 150-154°C; MS (TSP+ve) m/z 531 (M+H) + ; IV Umax (KBr) 1764, 1714, 1659, 16180ΠΓ1; RMN δ (CDCI3) inclui 7,25 (1H, d, J 10 Hz), 6,28 (1H, d, J 10 Hz), 6,03 (1H, s), 5,18 e 4,91 (1H, 2d, J 5 Hz), 5,19 e 4,64 (1H, 2t, J 4,5 Hz), 4,55-4,13 41 L-Ι r ι (4H, m), 3,83-3,66 (2H, m), 1,46 (3H, s), 0,98 e 0,93 (3H, 2s), 0,93 (3H, m). (Encontrada: C, 65,42; H, 7,49; S, 5,75. C29H38O7S requer C, 65,64; H, 7,22; S, 6,04%)

Exemplo 10 6a,9«-Difluoro-116-hidroxi-16a,17a-isopropilidenodioxi-21-(2-oxo-tetrahidro-furan-4-il-sulfanil)-preqna-1,4-dieno-3, 20-diona Método 1

Uma suspensão de 6a,9a-difluoro-lip-hidroxi-21-mercapto-16a,17a-isopropilidenodioxi-l,4-dieno-3,20-pregna-diona (100 mg, 0,23 mmol) e carbonato de potássio anidro (32 mg, 0,23 mmol) em DMF anidra (2 mL) foi tratada com 2(5H)-furanona (0,035 mL, 0,5 mmol) e a mistura foi agitada a 20eC sob atmosfera de azoto durante 4 h. A mistura reaccional foi vertida em ácido clorídrico 0,5 M (20 mL) e extraída com acetato de etilo (40 mL). A fase orgânica foi lavada com água (10 mL), solução aquosa de bicarbonato de sódio (20 mL), água, solução saturada de cloreto de sódio (20 mL de cada) e seca sobre sulfato de magnésio anidro. Remoção do solvente a pressão reduzida e trituração em éter dietílico (3 x 2 mL) deu o composto em epígrafe (100 mg, 79%): MS (ES+ve) m/z 553 (M+H) + ; IV Umax (KBr) 1780, 1715, 1668 cm-1; RMN ô (DMSO-d6) inclui 7,30 (1H, d, J 9 Hz), 6,31 (1H, d, J 9 Hz), 6,13 (1H, s), 5,70 e 5,58 (1H, 2m), 5,51 (1H, d, J4 Hz), 4,93 (1H, d, J4 Hz), 4,58 (1H, dd, J 9 e 8 Hz), 4,23 (2H, m), 4,03 e 4,01 (1H, 2d, J 17 Hz), 3,68 e 3,66 (1H, 2d, J 17 Hz), 3,90 (1H, m), 3,83 (1H, d, J 17,5 Hz), 3,02 (1H, dd, J 8 e 2 Hz), 1,51 (3H, s) 1,37 (3H, s), 1,11 (3H, s), 0,83 (3H, s); RMN δ (DMSO-d6) inclui 206,2, 184,2, 175,4 (3 C=0). (Encontrada: C, 59,31; H, 6,37; N, 0,60; S, 5,01. C28H34F2O7S.0,25C3H7NO.0,6H2O requer C, 59,36; H, 6,40; N, 0,60; S, 5,51%). 42

U Método 2

Uma solução de 6a,9a-difluoro-llp-hidroxi-16a,17a- isopropilenodioxi-21-trifluorometanossulfoniloxi-pregna-1,4-dieno-3,20-diona (Intermediário 11, 100 mg, 0,17 mmol) e β- mercapto-y-butirolactona (20 mg, 0,17 mmol) em tetrahidrofurano anidro (5 mL) foi tratada com trietilamina (0,024 mL, 0,17 mmol) e a mistura foi agitada a 20°C sob atmosfera de azoto durante 24 h e depois a 75°C durante 24 h. Remoção do solvente a pressão reduzida deu uma espuma amarela. 0 produto em bruto foi purificado por cromatografia em coluna sobre silica gel utilizando acetato de etilo-ciclohexano (2:3) como eluente. Remoção do solvente das fracções pretendidas deu o composto em epígrafe (20 mg, 21%): RMN ô (CDCI3) inclui 7,13 (1H, d, J 10 Hz), 6,44 (1H, s), 6,38 (1H, d, J 10 Hz), 5,50 e 5,30 (1H, 2m), 5,03 (1H, d, J 5 Hz), 4,64 (1H, m), 4,24 (1H, m), 3,87 (1H, m), 3,71 e 3,68 (1H, 2d, J 17 Hz), 3,57 e 3,53 (1H, 2d, J 16 Hz), 2,96 (1H, m), 1,53 (3H, s), 1,43 (3H, s), 1,15 (3H, s), 0,93 (3H, s).

Exemplo 11 16a,17a-íR-Butilidenodioxi>-6a, 9a-difluoro-llB-hidroxi-21-(2-oxo-tetrahidro-furan-4-il-sulfanil)-preqn-4-eno-3,20-diona

Uma solução com agitação de 16a,17a-(R-butilidenodioxi)-6a,9a-difluoro-lip-hidroxi-21-mercapto-pregn-4-eno-3,20-diona (Intermediário 13, 500 mg, 1,03 mmol) e 2(5tf)-furanona (0,073 mL, 1,03 mmol) em tetrahidrofurano anidro (10 mL) foi tratada com trietilamina (0,14 mL, 1,03 mmol) e a mistura foi agitada a 20°C sob atmosfera de azoto durante 48 h. Remoção do solvente a pressão reduzida deu uma espuma creme. O produto em bruto foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica gel utilizando acetato de etilo-ciclohexano (3:2) como eluente, isolando-se o composto em epígrafe (413 mg, 71%); MS (TSP+ve) m/z 569 (M+H)+? IV Umax (KBr) 1779, 1712, 1668 cm-1; RMN ô (CDCI3) inclui 6,16 (3H, s), 5,37 e 5,18 (1H, 2m), 4,91 (1H, d, 43

V

J 5 Hz), 4,70 (1H, t, J 4 Hz), 4,62 (1H, dd, J 9 e 7 Hz), 4,40 (1H, m), 4,22 (1H, m), 3,82 (1H, m), 3,63 e 3,60 (1H, 2d, J 14 Hz), 3,43 e 3,39 (1H, 2d, J 16 Hz), 2,95 (1H, dd, J 18 e 8 Hz), 1,52 (3H, s), 0,94 (3H, t, J 7 Hz), 0,91 (3H, s). (Encontradas C, 62,39; H, 7,41; S, 5,04. C29H38F2O7S.0,3C6H12 requer C, 62,29; H, 7,06; S, 5,40%).

Exemplo 12 6a, 9a-Pif luoro-16a, 17a-isopropilidenodioxi-21-( 2-oxo-tetrahidro-furan-5-il-sulfanil)-preqng-1,4-dieno-3,20-diona

Uma solução com agitação de 6a,9a-difluoro-lip-hidroxi-21-mercapto-16a, 17a-isopropilidenodioxi-pregna-l, 4-dieno-3,20-diona (400 mg, 0,85 mmol) e y-cloro-y-butirolactona (103 mg, 0,85 mmol) em tetrahidrofurano anidro (10 mL) foi tratada com trietilamina (0,12 mL, 0,85 mmol) e a mistura foi agitada a 20°C sob atmosfera de azoto durante 24 h. Remoção do solvente a pressão reduzida deu uma espuma castanha. O produto em bruto foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica gel utilizando diclorometano-acetato de etilo (3:1) como eluente. Remoção do solvente das fracções apropriadas a pressão reduzida deu o composto em epígrafe, isómero A (124 mg, 26%) s p.f. 238-239°C; MS (TSP+ve) m/z 553 (M+H)+; IV Umax (KBr) 1781, 1719, 1669 cm"1; RMN ô (CDCI3) inclui 7,19 (1H, d, J 10 Hz), 6,43 (1H, s), 6,37 (1H, d, J 10 Hz), 5,87 (1H, s), 5,49 e 5,29 (1H, 2m), 5,02 (1H, d, J 4 Hz), 4,42 (1H, m), 3,92 (1H, d, J 17 Hz), 3,78 (1H, d, J 17 Hz), 1,53 (3H, s),.l,42 (3H, s), 1,17 (3H, s), 0,89 (3H, s). (Encontrada: C, 59,55; H, 6,16; S, 5,58. C28H34F2O7S.0,2CH2CI2 requer C, 59,46; H, 6,09; S, 5,63%) e o eomposto em epígrafe, isómero B (62 mg, 13%); p.f. 244-246°C; MS (TSP+ve) m/z 553 (M+H) + ; IV nwiav (KBr) 1784, 1715, 1688 cm"1; RMN ô (CDCI3) inclui 7,14 (1H, d, J 10 Hz), 6,43 (1H, s), 6,38 (1H, d, J 10 Hz), 5,92 (1H, m), 5,49 e 5,29 (1H, 2m), 5,06 (1H, d, J4 Hz), 4,42 (1H, m), 3,91 (1H, d, J 18 Hz), 3,72 (1H, d, J 18 Hz), 1,52 (3H, s), 1,42 (3H, s), 1,17 (3H, s), 0,89 (3H, s). 44

V t (Encontrada: C, 60,98; H, 6,18; S, 5,63. C28H34F2O7S requer C, 60,86; H, 6,20; S, 5,80%)

Exemplo 13 9a-Fluoro-116-hidroxi-Í6a.l7a-isopropilidenodioxi-21-(2-oxo-tetrahidro-furan-3-il-sulfanil)-preqna-1,4-dieno-3, 20-diona

Adicionou-se uma solução de a-mercapto-y-butirolactona (254 mg, 2,15 mmol) em tetrahidrofurano anidro (4 mL), gota a gota, a uma suspensão com agitação de hidreto de sódio (87 mg de uma dispersão a 60% p/p em óleo mineral, 2,15 mmol) em tetrahidrofurano anidro (4 mL) a 0°C sob atmosfera de azoto. A solução resultante foi agitada a 0°C durante 30 minutos e adicionou-se então uma solução de 9a-fluoro-lip-hidroxi-16a,17a- isopropilenodioxi-21-metanossulfoniloxi-pregna-l,4-dieno-3,20-diona (1,0 g, 1,95 mmol) em DMF (2 mL) e tetrahidrofurano anidros (8 mL). Após 6 h foram adicionadas quantidades adicionais de a-mercapto-y-butirolactona (23 mg, 0,19 mmol) em tetrahidrofurano anidro (1 mL) e de hidreto de sódio (8 mg de uma dispersão a 60% p/p em óleo mineral, 0,19 mmol) e a mistura reaccional foi agitada durante mais 16 h a 21°C. A mistura reaccional foi vertida em água (40 mL) e extraida com acetato de etilo (40 mL x 2). Os extractos orgânicos combinados foram lavados com solução saturada de cloreto de sódio (20 mL) e secos sobre sulfato de magnésio anidro. Remoção do solvente a pressão reduzida deu um sólido castanho claro que foi triturado em acetato de etilo (20 mL) durante 20 min e depois filtrado. O sólido obtido foi purificado por HPLC preparativa de fase reversa (Dynamax 60Â C18, 25 cm x 41 mm d.i.) eluindo com 50% de acetonitrilo/água a 45 mL/min com detecção a 230 nm. As fracções apropriadas foram combinadas e evaporadas a pressão reduzida para dar o composto em epígrafe, isómero A (87,6 mg, 28%): p.f. 230-233°C; MS (TSP+ve) m/z 535 (M+H)+; IV Umax (KBr) 1760, 1719, 1663 cm-1; RMN ô (CDCI3) inclui 7,21 (1H, d, J 10 Hz), 6,35 (1H, d, J 10 Hz), 6,13 (1H, s), 6,06 (1H, d, J 4,5 Hz), 4,53-4,33 (3H, m), 4,04 (1H, d, J 18,5 Hz), 3,89 (1H, d, J 18,5 Hz), 3,81 45 Γ L-Cj t (1H, dd, J 8,5 e 3,5 Hz), 1,54 (3H, s), 1,42 (3H, s), 1,16 (3H, s), 0,94 (3H, s). O filtrado da trituração foi evaporado a pressão reduzida para dar um sólido castanho claro que foi submetido a HPLC preparativa de fase reversa (Dynamax 60Â C18, 25 cm x 41 mm d.i.) eluindo com 50% de acetonitrilo/água a 45 mL/min com detecção a 230 nm. As fracções apropriadas foram combinadas e evaporadas a pressão reduzida para dar um sólido branco que foi purificado por cromatografia em coluna sobre silica gel utilizando diclorometano-acetato de etilo (2:1) como eluente. Remoção do solvente das fracções apropriadas deu o composto em epígrafe, isómero B (72 mg, 23%): p.f. 241-243°C; MS (ES+ve) m/z 535 (M+H)+; IV Umax (KBr) 1766, 1712, 1663 cm-1; RMN δ (CDC13) inclui 7,20 (1H, d, J 10 Hz), 6,35 (1H, d, J 10 Hz), 6,13 (1H, s), 5,04 (1H, d, J 5 Hz), 4,53-4,32 (3H, m), 4,28 (1H, d, J 17,5 Hz), 3,88 (1H, d, J 18 Hz), 3,70 (1H, dd, J 8,5 e 4,5 Hz), 1,54 (3H, s), 1,42 (3H, S), 1,18 (3H, S), 0,91 (3H, S).

Exemplo 14 9a-Fluoro-llB-hidroxi-16B-metil-21-(2-oxo-tetrahidro-furan-3-il-sulfanil)-17a-propioniloxi-preqna-l.4-dieno-3,20-diona A uma solução com agitação de 9a-fluoro-lip-hidroxi-21-metanos sulfoniloxi-ΐόβ-metil-17 α-propioniloxi-pregna-1,4-dieno-3,20-diona (500 mg, 0,95 mmol) e a-mercapto-y-butirolactona (168 mg, 1,42 mmol) em DMF anidra (5 mL) sob atmosfera de azoto foi adicionada trietilamina (198 pL, 1,42 mmol). A mistura reaccional resultante foi então vertida em água (100 mL) e o sólido precipitado foi recolhido por filtração. 0 sólido foi lavado com água (3 x 25 mL) e depois dissolvido em acetato de etilo (75 mL). A solução resultante foi lavada com ácido clorídrico 1 N (25 mL), água (25 mL), solução saturada de bicarbonato de sódio (25 mL), água (25 mL) e finalmente solução saturada de cloreto de sódio (2 x 25 mL) . Foi então seca sobre sulfato de magnésio anidro e o solvente foi removido a pressão 46 \

L-Cj reduzida para dar uma espuma amarela pálida. Este material foi purificado por cromatografia em coluna eluindo com acetato de etilo-éter de petróleo 40-60 (3:2). As fracções apropriadas foram combinadas e evaporadas a pressão reduzida para dar o composto em epígrafe (381 mg, 73%): MS (ES+ve) m/z 549 (M+H) + ; RMN ô (CDCI3) inclui 7,21 (1H, dd, J 10 e 4 Hz), 6,35 (1H, dd, J 10 e 2 Hz), 6,14 (1H, sl), 4,52-4,26 (3H, m), 3,92 (0,5H, d, J 17 Hz), 3,87 (0,5H, dd, J 9 e 4 Hz), 3,78 (0,5H, d, J 18Hz), 3,64 (0,5, dd, J 9 e 5,5 Hz), 3,45 (0,5H, d, J 17 Hz), 3,32 (0,5H, d, J 18 Hz), 2,37 (2H, q, J 7,5 Hz), 1,56 (3H, s), 1,40 (3H, d, J 7 Hz), 1,14 (3H, t, J 7,5 Hz), 1,00 (1,5H, s), 0,97 (1,5 H, s).

Actividade Farmacológica

In Vitro A actividade farmacológica foi estudada num ensaio funcional in vitro para demonstrar a actividade glucocorticóide que é geralmente indicadora de actividade anti-inflamatória e anti-alérgica in vivo. O ensaio funcional utilizado era uma modificação do método descrito por T. S. Berger et al., J. of Steroid Biochem. Molec. Biol., 1992, 41(3-8), 733-738, "Interaction of Glucocorticoid Analogues with the Human Glucocorticoid Receptor".

Assim, células Hela foram transfectadas de modo estável com um gene relator detectável (alcalino fosfatase segregada por placenta, sPAP) sob o controlo de um promotor da resposta a glucocorticóides (o LTR do virus de tumor mamário de murganho, MMTV). Várias concentrações de padrão (dexametasona) ou compostos da invenção foram incubadas com células Hela transfectadas durante 72 horas. No final da incubação, adicionou-se substrato 47

(acetato de p-nitrofenol) para sPAP e o produto foi medido por um método espectrofotométrico. Uma absorvância acrescida reflectiu uma transcrição acrescida de sPAP e foram traçadas linhas de concentração-resposta tais que podiam ser calculados os valores de EC50·

Neste ensaio, os isómeros dos Exemplos 3, 6, 7 e 8, isómero A do Exemplo 9 e os compostos dos Exemplos 1, 2, 10 e 11 tinham valores de EC50 de menos do que 600 nM.

Hidrólise no Sangue

Todos os isómeros dos Exemplos eram instáveis em plasma humano (semi-vidas de menos do que 60 min), indicando que se prevê possuírem um perfil vantajoso de efeitos secundários in vivo o

In Vivo (i) Actividade Anti-inflamatória - Inibição de eosinofilia pulmonar em ratos Brown Norway

Ratos machos Brown Norway (150-180 g) são sensibilizados intraperitonealmente (ip) com 1 mL contendo 10 mg de AI (OH )3 + 1 mg de Ovalbumina (OVA) ao dia 1. Ao dia 7 cada rato recebeu 1 mL ip contendo 10 mg de AI (OH )3 + 100 μg de OVA. Ao dia 14, cada rato recebeu uma dose intratraqueal (IT) de composto ou veículo (0,2 mL) sob anestesia com isoflurano. Os compostos são suspensos em 0,9% de soro fisiológico/0,2% de Tween 80. 4 h após a administração dos compostos, cada animal recebe 400 μg de OVA em soro fisiológico IT (0,2 mL). Ao dia 16, os animais são mortos e os pulmões são lavados com 5 mL de fluido de lavagem (10 mM de EDTA, soro fisiológico tamponado com fosfato (pH 7,4), 5 unidades de heparina/mL, 0,1% de BSA). As amostras são centrifugadas a 1000 rpm durante 10 minutos. O sobrenadante é removido e as células são ressuspensas em 0,5 mL de fluido de 48

Γ lavagem. As células totais são contadas com um contador Sysmex. Prepara-se placas de citospin utilizando 75 pL da suspensão de células e as células são coradas com corante May-Grunwald. As contagens de células diferenciais são realizadas utilizando um microscópio. Os números de eosinófilos são calculados por pL de fluido de lavagem por rato percentual da eosinofilia. permitindo o cálculo da redução Composto Dose % de Redução de Eosinofilia Budenosido 250 pg 82 Isómero A do Exemplo 3 250 pg 74 Isómero A do Exemplo 3 750 pg 97 (II) Efeitos sistémicos adrenalectomizados supressão de ACTH em ratos

Ratos machos CD (90-120 g) foram adrenalectomizados sob anestesia com Isoflurano e a água de beber foi suplementada com 0,9% de soro fisiológico. Quatro dias mais tarde os animais recebem uma dose intravenosa única de composto dissolvido em DMA/PEG-200/água destilada (1:6:3) (0,2 mL) às 10 da manhã. Às 2 h e 4 h depois os animais são sacrificados por administração de Eutetal e são recolhidas amostras de sangue por punção intra-cardiaca e recolhidas em tubos heparinizados. As amostras são centrifugadas (20 minutos a 1000 rpm a 4°C), o plasma é recolhido e doseado por radioimunoensaio (RIA) quanto a hormona Adrenocorticotrófica (ACTH) utilizando um "kit" RIA de anticorpo duplo DPC. Em cada experiência foram incluídos grupos intactos e de controlo do veículo para cada ponto de tempo avaliado de forma a entrar em consideração com a variação diurna de ACTH e efeitos do veículo. Os resultados são calculados em relação à curva-padrão de RIA e expressos como pg de ACTH/mL de soro, permitindo o cálculo da redução percentual de ACTH. 49

Composto

Dose

% de Redução de ACTH às 2 h às 4 h

Budenosido Isómero a do Exemplo 3 6/25 pg 500 pg 61 16 32 15

Este resultado ilustra a actividade sistémica minima associada a estes derivados instáveis no plasma.

Formulações farmacêuticas

Os seguintes são exemplos de formulações adequadas de compostos da invenção. O termo "principio activo" é aqui utilizado para representar um composto da invenção e pode ser, por exemplo, os isómeros (ou uma sua mistura) dos Exemplos 1, 4, 6, 8, 10 ou 11. 1. Cartuchos para Inalação

Principio activo micronizado 1,6% p/p

Lactose BP 98,4% p/p 0 principio activo é micronizado de forma convencional até uma gama de tamanho de partículas fino de forma a permitir a inalação de substancialmente todo o medicamento para os pulmões por administração, antes da mistura com lactose de qualidade corrente para comprimidos vulgares num misturador de alta energia. A mistura em pó é cheia em cápsulas de gelatina numa máquina de encapsular adequada. Os conteúdos dos cartuchos são administrados utilizando um inalador de pós tal como o inalador ROTAHALER”. Alternativamente, a mistura de pós pode ser cheia em "blisters" de uma embalagem ou tira "blister". Os conteúdos da embalagem ou tira "blister" são administrados utilizando um inalador de pós tais como o inalador DISKHALER” ou DISKUS”. [ROTAHALER, DISKHALER e DISKUS são marcas registadas do grupo de empresas Glaxo Wellcome]. 50

V

2. Formulação em Aerossol

por lata 40 mg 11,96 g

Principio activo micronizado 0,25 1,1,1,2-tetrafluoroetano 74,75 0 princípio activo é pesado directamente numa lata de alumínio aberta e é então cravada uma válvula doseadora. 0 1,1,1,2-tetrafluoroetano é então adicionado à lata sob pressão através da válvula e a lata é agitada para dispersar o fármaco. 0 inalador resultante contém 0,33% p/p de princípio activo. (ii) Solução

Princípio activo micronizado Etanol (anidro) 1,1,1,2-Tetrafluoroetano mq/descarqa 0,25 7,5 67,25 por lata 40 mg 1,2 g 10,76 g O princípio activo é dissolvido no etanol. A solução etanólica resultante de princípio activo é medida para uma lata de alumínio aberta e é então cravada uma válvula doseadora. 0 1,1,1,2-tetrafluoroetano é então adicionado à lata sob pressão através da válvula. 0 inalador resultante contém 0,33% p/p de princípio activo e 10% p/p de etanol. 1. Creme

Princípio activo micronizado 0,2

Parafina Líquida 40 Álcool cetoestearílico 5

Cetomacrogol 1000 1

Miristato de isopropilo 5

Propileno glicol 10 Ácido benzóico 0,2

Fosfato de sódio 0,05 51 Ácido citrico/monohidrato Água purificada 0,05 para 100 O principio activo micronizado é disperso numa porção da água contendo uma porção do cetomacrogol 1000. A parafina liquida, o álcool cetoestearilico e o miristato de isopropilo são fundidos conjuntamente, arrefecidos a 50 a 60°C e adicionados à água restante contendo o propileno glicol, o ácido benzóico (conservante), e o fosfato de sódio e o ácido citrico (agentes tamponantes). A fase oleosa resultante é adicionada à suspensão do principio activo com agitação até arrefecer.

Lisboa, 6 de Setembro de 2000 0 AGENTE OFICIAL DA PROPRIEDADE INDUSTRIAL

52

Claims (33)

1. REIVINDICAÇÕES Composto de fórmula (I)

   e seus solvatos, em gue R]_ individualmente representa -0C(=0)Ci_6 alquilo; R2 individualmente representa hidrogénio, metilo, que pode ter a configuração α ou β, ou metileno; ou Ri e R2 conjuntamente representam —0 Re em que R5 e R6 são iguais ou diferentes e cada um representa hidrogénio ou Ci_6 alquilo; R3 e R4 são iguais ou diferentes e cada um representa hidrogénio ou halogéneo; e ---- representa uma ligação simples ou dupla.
2. Composto de acordo com a reivindicação 1 em que Ri individualmente representa 0C(=0)Ci_6 alquilo. r L-Cj t
3. 3. Composto de acordo com a reivindicação 1 ou com a reivindicação 2 em que Ri individualmente representa 0C(=0)Ci-3 alquilo.
4. 4. Composto de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 3 em que Ri representa 0C(=0)etilo.
5. 5. Composto de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 4 em que R2 é metilo.
6. 6. Composto de acordo com a reivindicação 1 em que Ri e R2 conjuntamente representam —<v A -0 Rí em que R5 e Rg são iguais ou diferentes e cada um representa hidrogénio ou Ci_6 alquilo.
7. 7. Composto de acordo com a reivindicação 6 em que R5 e Rg são iguais ou diferentes e cada um representa hidrogénio ou Ci_3 alquilo.
8. 8. Composto de acordo com a reivindicação 6 ou com a reivindicação 7 em que R5 e R6 são iguais ou diferentes e cada um representa hidrogénio, metilo ou n-propilo.
9. 9. Composto de acordo com qualquer das reivindicações 6 a 8 em que R5 e Rg são ambos metilo.
10. 10. Composto de acordo com qualquer das reivindicações 6 a 8 em que R5 e Rg são diferentes e cada um representa hidrogénio ou n-propilo. 2

    u ^
11. 11. Composto de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 10 em que R3 e R4 são iguais ou diferentes e cada um representa hidrogénio, flúor ou cloro.
12. 12. Composto de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 11 em que R3 e R4 são iguais ou diferentes e cada um representa hidrogénio ou flúor.
13. 13. Composto de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 12 em que R3 e R4 são ambos flúor.
14. 14. Composto de acordo com a reivindicação 1 em que Ri individualmente representa 0C(=0)Ci_6 alquilo; R2 é metilo; R3 e R4 são iguais ou diferentes e cada um representa hidrogénio ou flúor, e ---- representa uma ligação simples ou dupla.
15. 15. Composto de acordo com a reivindicação 14 em que Ri individualmente representa 0C(=0)etilo e R3 e R4 são ambos flúor.
16. 16. Composto de acordo com a reivindicação 1 em que Ri e R2 conjuntamente representam —\ A A -O Re em que R5 e R6 são iguais ou diferentes e cada um representa hidrogénio ou Ci_6 alquilo; R3 e R4 são iguais ou diferentes e cada um representa hidrogénio ou flúor; e ---- representa uma ligação simples ou dupla.
17. 17. Composto de acordo com a reivindicação 16 em que R5 e R6 são iguais ou diferentes e cada um representa hidrogénio, metilo ou n-propilo e R3 e R4 são ambos flúor. 3
18. 18. Composto de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 17 em que S está ligado ao átomo de carbono alfa da unidade de lactona.
19. 19. Composto de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 17 em que S está ligado ao átomo de carbono beta da unidade de lactona.
20. 20. Composto de acordo com a reivindicação 1, seleccionado de 6a,9a-Difluoro-11β-hidroxi-l6a-metil-21-(2-oxo-tetrahidro-furan-3-il-sulfanil)-17a-propioniloxi-pregn-4-eno-3,20-diona; 16 α, 17 α - (R-Butil idenodioxi) - 6 α, 9 α -dif luoro-11 β -hidr oxi- 21 -(2-oxo-tetrahidro-furan-3-il-sulfanil)-pregna-1,4-dieno- 3.20- diona; 16a,17a-Butilidenodioxi-lip-hidroxi-21-(2-oxo-tetrahidro- furan-3-il-sulfanil)-pregna-1,4-dieno-3,20-diona? 6a,9a-Difluoro-lip-hidroxi-16a,17a-isopropilenodioxi-21- (2-oxo-tetrahidro-furan-5-il-sulfanil)-pregna-1,4-dieno- 3.20- diona; 9a-Fluoro-11β-hidroxi-16α,17a-isopropilenodioxi-21-(2-oxo-tetrahidro-furan-3-il-sulfanil)-pregna-1,4-dieno-3,20-diona; 9α-ΕΐυοΓθ-11β-1ιΐάΓθχΐ-16β-ιι^ϊ1-21-(2-οχο^β^ηΐΊϊάΓθ- furan-3-il-sulfanil)-17a-propioniloxi-pregna-l,4-dieno- 3.20- diona; e os seus solvatos.
21. 21. Composto de acordo com a reivindicação 1, seleccionado de 6a,9a-Difluoro-l^-hidroxi-16a-metil-21-(2-oxo-tetrahidro-furan-3-il-sulfanil)-17a-propioniloxi-pregna-l,4-dieno- 3.20- diona; e seus solvatos. 4
22. 22. Composto de acordo com a reivindicação 1, seleccionado de 6a,9a-Difluoro-11β-hidroxi-16a,17a-isopropilenodioxi-21- (2-oxo-tetrahidro-furan-3-il-sulfanil)-pregna-1,4-dieno- 3.20- diona; e seus solvatos.
23. 23. Composto de acordo com a reivindicação 1, seleccionado de 6a,9a-Difluoro-1Ιβ-hidroxi-16a,17 a-isopropilenodioxi-21- (2-oxo-tetrahidro-furan-3-il-sulfanil)-pregn-4-eno-3,20-diona; e seus solvatos.
24. 24. Composto de acordo com a reivindicação 1, seleccionado de 6a,9a-Difluoro-l^-hidroxi-16a,17a-isopropilenodioxi-21- (2-oxo-tetrahidro-furan-4-il-sulfanil)-pregna-1,4-dieno- 3.20- diona; e seus solvatos.
25. 25. Composto de acordo com a reivindicação 1, seleccionado de 16 α, 17 α- (R-Butil idenodioxi) - 6 α, 9 α -dif luoro-11 β - hidrox i- 21 - (2-oxo-tetrahidro-furan-4-il-sulfanil)-pregn-4-eno-3,20-diona; e seus solvatos.
26. 26. Composto de acordo com a reivindicação 1, seleccionado de 16a, 17a-(R-Butilidenodioxi)-6a,9a-difluoro-l^-hidroxi-21- (2-oxo-tetrahidro-furan-3-il-sulfanil)-pregn-4-eno-3,20-diona; e seus solvatos.
27. 27. Composto de fórmula (I) de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 26 ou um seu solvato fisiologicamente aceitável para utilização em medicina veterinária ou humana. 5 V V

    t
28. 28. Utilização de um composto de fórmula (I) de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 26 ou de um seu solvato fisiologicamente aceitável para o fabrico de um medicamento para o tratamento de patologias inflamatórias e/ou alérgicas.
29. 29. Composição farmacêutica compreendendo um composto de fórmula (I) de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 26 ou um seu solvato fisiologicamente aceitável, em mistura, se desejado, com um ou mais diluentes ou veículos farmaceuticamente aceitáveis.
30. 30. Composição farmacêutica em aerossol compreendendo um composto de fórmula (I) de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 26 ou um seu solvato fisiologicamente aceitável e um fluorocarboneto ou clorofluorocarboneto contendo hidrogénio como propulsor, opcionalmente em combinação com um tensoactivo e/ou um co-solvente.
31. 31. Combinação compreendendo um composto de fórmula (I) de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 26 ou um seu solvato fisiologicamente aceitável e outro agente terapeut icamente activo.
32. 32. Combinação de acordo com a reivindicação 31 em que o referido outro agente terapeuticamente activo é um agonista de adrenorreceptores β2·
33. 33. Processo para a preparação de um composto de fórmula (I) compreendendo A. Tratamento de um composto de fórmula (II) 6

    em que Ri, R2, R3, R4 e----são como aqui definidos anteriormente, com um composto de fórmula (V) ou de fórmula (VI)

    (VI) em que Z representa um grupo de salda adequado ou OH; C. Conversão de um composto de fórmula (I) num composto de fórmula (I) diferente por transacetalização, epimerização, esterificação ou redução parcial da ligação dupla 1,2; ou D. Desprotecção de um derivado protegido de um cbmposto de fórmula (I); sendo cada um dos processos A, B, C e D acima referidos seguido se necessário por (i) formulação do solvato, ou (ii) isolamento de um isómero individual de um composto de fórmula (I). Lisboa, 6 de Setembro de 2000 O AGENTE OFICIAL DA PROPRIEDADE INDUSTRIAI,