PT86450B - Processo para a preparacao de inibidores de renina-iv e de composicoes farmaceuticas que os contem - Google Patents

Processo para a preparacao de inibidores de renina-iv e de composicoes farmaceuticas que os contem Download PDF

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William Howard Roark
Joseph Thomas Repine
James Stanley Kaltenbroun
James Perry Hudspeth
Francis John Tinney
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    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C07K5/0227—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the (partial) peptide sequence -Phe-His-NH-(X)2-C(=0)-, e.g. Renin-inhibitors with n = 2 - 6; for n > 6 see C07K5/06 - C07K5/10
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
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    • C07K—PEPTIDES
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    • C07K5/0205—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -NH-(X)3-C(=0)-, e.g. statine or derivatives thereof

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Description

A renina é um enzima que é libertado no sangue pelo rim. Ela cinde o seu substracto natural angiotensinogénio, libertando o decapéptido, angiotensina I. Esta é por sua vez cindica por conversão de enzima no pulmão, rim e outros tecidos num cetapéptido, angiotensina II. A angiotensina II eleva a pressão arterial quer directamente causando constrição arterial e indirectamente estimulando a libertação da hormona retensora de sódio aldosterona das cápsulas supra renais causando um aumento no volume de fluido extracelular. Tem-se procuN.
rado inibidores de renina como agentes para controle de hiper tensão e hiperaldosteronismo.
A presente invenção refere-se a novos péptidos que inibem a renina. Também se refere a composições farma cêuticas contendo estes novos péptidos, métodos de tratamento de hipertensão associada à renina, ataque cardíaco congestivo e hiperaldosteronismo, bem como ao uso dos péptidos como instrumentos de diagnóstico e aos métodos para preparação dos pé ptidos.
A patente 4,479»941 dos Estados Unidos certos péptidos inibidores de renina de fórmula cobre
registo
Europeu N? 85/308759 cobre certos dipéptidos inibidores de renina de fórmula
Registo Europeu N® 184,855 cobre péptidos inibidores de renina de fórmula
R^> Rjj e Ry são alna qual A é um grupo protector de N; Rr quilo inferior ou cadeias laterais de aminoácido lipofílicas ou aromáticas e podem ser iguais ou diferentes; R^» R^ e R^ são hidrogénio ou alquilo inferior e podem ser iguais ou dife rentes, X e hidrogénio, alquilo inferior ou -CH^-ORg, na qual Rg é hidrogénio, alquilo inferior ou alquilarilo; e R^ é alquilo inferior, hidroxilo, hidroxialquilo, alcoóxi, alilo, al quilariloxi ou tioalquilo e sais farmaceuticamente aceitáveis dela derivados.
RESUMO DA INVENÇÃO
A presente invenção refere-se a novos péptidos de fórmula
ACYL -X-Y-W-U-V (i) e a sais de adição de ácido dela derivados farmaceuticamente aceitáveis, na qual ACYL, X, Y, W, U e V são como se define abaixo,
A invenção também inclui composições farmacêu ticas contendo uma quantidade efectiva do péptido acima de for mula I em mistura com um veículo de excipiente farmaceuticament e aceitável e um método para tratamento de hipertensão as sociada à renina num paciente sofrendo disto compreendendo a administração ao dito paciente da composição farmacêutica aci ma na forma de dose unitária.
Além disso a invenção inclui uma composição farmacêutica contendo uma quantidade efectiva de um péptido da fórmula I acima em mistura com um veículo ou excipiente farmaceuticamente aceitável e um método para tratar hiperaldo; teronismo num paciente sofrendo disto compreendendo a adminis
tração ao dito paciente da composição farmacêutica acima na forma de dose unitária.
A invenção também incluiu uma composição farmacêutica contendo uma quantidade efectiva de um péptido da formula I acima em mistura com um veículo ou excipiente farma ceuticamente aceitável e um método para tratamento de ataque cardíaco congestivo num paciente sofrendo disso compreendendo a administração ao dito paciente da composição farmacêutica acima na forma de dose unitária.
A presente invenção também incluiu o uso de péptidos da fórmula I acima como instrumentos de diagnóstico para a identificação de casos de hipertensão devido a excesso d e renina.
A invenção inclui ainda métodos para a preparação depéptidos de fórmula I acima.
DESCRIÇÃO PORMENORIZADA
A tabela seguinte fornece um dicionário dos termos usados na descrição da invenção.
Designação
Abreviada
LEU
D-LEU
STA
PH ST A
CYSTA
ILE
D-ILE
TABELA I
Amino Ácido
L-Leucina
D-Leucina
Ácido 4(s)-amino~3(_s)-hidroxi-6-metilheptanóico
Ácido 4(s)-amino-3(s)-hidroxi-5-f enilpentanóico
Ácido 4(S)-atnino-3(_S)-hidroxi-5~ -ciclohexanopentanóico
L-isoceulina
D-isoc eulina «h.' ·
TABELA I (continuação) Amino Ácido (cont.)
N-MeLEU N-metilleucina
N-MelLE N-metilisoleucina
PHE L-fenilalanina
HOMOPHE Homof enilalanina
NLE Norleucina
VAL L-valina
ORN L-ornitina
arg(no2) LYS L-nitroarginina L-lisina
NAPHTHYLALA Naftilalanina
CYCLOHEXYLALA Ciclohexilalanina
TYR L-tirosina
TRP L-triptofano Grupo Acilo
TOS p-toluenosulfonilo
PHT Ftaloílo
z Benziloxicarbonilo
BOC Ter-butiloxicarbonilo
DNMA Di-(1-naftilmetil)-acetilo
IVA Isovalerilo
NVA n-valerilo
Amidas com
Benzilamina
Ciclohexilmetilamina m-xileno-diamina (Z ou BOC) m- xilenodiamina
-NHCHgCH (CH3 )CH2CH3
TABELA I (continuação)
Amidas com (cont.)
Amónia
4-amino-N-benzilpiperidina
4-aminopiperidina
2-anri.nometilpiridina
2-metilbutilamina l-hidroximetil-2-metilbutilamina
4-(2-amino etil)-morfolina
Grupos Protectores z
BOC
IVA
NVA
-OCH3
-°°2Η5 O-t-Bu
O-i-Pr
DMF
Benziloxicarbonilo
Ter-butiloxicarbonllo
Isovalerilo n-valerilo ésteres com
Metanol
Etanol t-butanol
Isopropanol
Solventes e Reagentes
Ν,Ν-dimetilformamida
TABELA I (continuação)
Solventes e Reagentes (cont.)
DMSO Sulfóxido de dimetilo
HOBT Hi d roxib enzot riazo1e
DCC N»N’-diciclohexilcarbodiimida
HOAc Ácido acético
Et3N Trietilamina
THF Tetrahidrofurano
Et OH Etanol
NaOEt Etóxido de sódio
Os péptidos da presente invenção representam-se pela fórmula
ACYL -X-Y-W-U-V (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável dela derivado na qual ACYL é BOC, IVA, NVA, DNMA (di-(1-naftilmetil)-acetilo), Z,ou na qual D é
-nch2co2ch3,
CH3
-och3>
-N(CH3)2;
X 4 inexistente, PHE, HOMOPHE, NAPHTHYLALA, CYCOHEXYLALA, TYR ou TRP, com a condição de que quando ACYL é DNMA ou
D
na qual D é como acima, X é inexistente;
II -N-CHC- , / I , H3 <®2>n
NHC-NR, R.
|l 1 2 s
II
-N-CHC- , / ι *3 (^n
NHC-NR. R„
Il 1 2
ο
II
-N-CNC- , R3 <ÇH2)n NHC-NHR ll
NCN
O
II -N-CHC- , / ' Ί R3 (CH2)n
NH
II
NHC-NHNO2
II
-N-CHC- , R3 <|H2>n
NHC-ORi.
II 4 o o
II •NHCHC- ,
CHgCN
II
ο
ο
II
-NHCHC- , (ρΛ nhpo(or)2
nas quais n é um inteiro de 2 a 8, R é hidrogénio ou um grupo alquilo de 1 a 3 átomos de pendentemente, hidrogénio, de carbono, arilalquilo ou e é alquilo inferior ou e
é é
carbono, e Rg são cada um, inde alquilo inferior de 1 a 4 átomos arilo, R^ é hidrogénio ou metilo, b enzilo;
STA, PHSTA ou CYSTA;
inesxistente, LEU,_ILE, VAL, N-MeLEU, Ν-MeILE; e
-NHCH„Ph, -NHCH
-NHCH
-NHCHgCH (CH^ ) CHgCH t
-NHCHCH(CH3)CH2CH3, ou -NHCHgCHgN 0 .
CHgOH
V
Os compostos da presente invenção que se preferem são representados pela formula I na qual ACYL é BOC, IVA, DNMA, ou
Outros compostos la I na qual V é
CHgNHg, que se preferem estão em acordo com a formu-NHCHg -O· -NHCHg f \ -NHCH CH(CH )CH CH , -NHCHCH(CH )CH CHq, ou -NHCH_CHON O.
4 J J | J ά J A Á \___/
CHgOH
Compostos particularmente valiosos que caem dentro do âmbito da invenção incluem os seguintes
B OC-PHE-ORN(PHT)-STA-LEU-NHCHgPh, iva-phe-nhchc-sta-nhchoch(chq)chochq,
I a 5' 2 3 ch2cn
B OC-PHE-ARG(N0 2)-STA-LEU-NHCHgPh,
DNMA-ORN(C-NHCH-)-STA-NHCH-CH(CH )CH CH , | 3 2 J 2 J
DNMA-ORN (jj-NHCH3) - STA-NHCH2CH(CH3 ) CHgC^, O ff < I
DN MA-NHCHC-STA-NHCHgCH(CH3)CH2CH3,
DNMA.-NHCHC- STA-NHCHgCHÍCH^ JCHgCH^, CH2(jH-CH20H
OH
DNMA-LYS (Çj-NHCH^ ) - STA-NHCHgCH (CH^ ) CHgCH^,
S
DNMA-LYS (C - NHCH- ) - STA-NHCH„CH (CH„ ) CH CH ,
DNMA-LYS(C-NH2)-STA-NHCHgCH(CH^JCHgCH^,
O
O
DNMA-NHCHc!1-STA-NHCHOCH (CHQ ) CHOCH„ ,
Í2 3 2 j °2CH3
S
DNMA-LYS(C-NH(CH2))-STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3,
DNMA-LYS(C-NHPh)-STA-NHCHgCH(CH^)CHgCH^,
S
DNMA-LYS (c!-NHC (CH^ ) 2CH2CH3 ) - STA-NHCHgCH (CH^ ) CHgCH^,
DNMA-LYS(C-NHCH^)-CYSTA-NHCHgCH(CH^JCHgCH^,
NH
DNMA-LYS(C-NHNOg)-CYSTA-NHCIígCH (CH^JCHgCH^,
O
DNMA-LYS(P-(OPh)2)-STA-NHCHgCH(CH^)CH2CH3, '1
NCN
DNMA-LYS(ϋ-SCH^)-STA-NHCHgCH(CH^)CHgCH^,
NCN
DNMA-LYS(C-NH2)-STA-NHCH2VH(CH^)CHgCH^,
NCN
DNMA-LYS(C-NHCH3)-STA-NHCHgCH(CH3)CH2CH3, dnma-nhchco-sta-nhch2ch(ch3)ch2ch3,
DNMA-NHCHCO- STA-NHCHgCH (CH^ ) CHgCH^, (GH2)3’O
DNMA-LYS(Z)-STA-LEU-NHCH2Ph,
NH
DNMA“LYS(í!-NHNO2) -STA-LEU-NHCHgPh ,
S DNMA-LYS(é-NHCH3)-STA-LEU-NHCH2Ph,
O 11 DNMA-LYS(C-NHCH3)-STA-LEU-NHCH2Ph, DNMA-NHÇHCO-STA-NHCHgCH(CH„)CH2CH_, (ch2)5-nhz
DNMA-NHÇHCO- STA- NHCHgCH (CH3 ) CHgCH^, (CH„)c-NHC-NHCH„ 2 -5 II 3
S
DNMA-NHCHCO-STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3, (CH_)c-NHC-NHN0o
2'5 l| 2
NH
DNMA-NHCHCO-STA-LEU-NHCHoPh,
I d (CHO)e-NHC-NHCH„ ' 2'5 H 3 s
DNMA-NHÇHCO-STA-LEU-NHCHgPh, (ch2)5-nhc-nhno2
ΝΗ
DNMA-NHCHC O-STA-NHCH-CH(CH„)CHOCH„, | 2 J' 4 J (CH )6-NHZ
DNMA-NHCHCO- STA-NHCHgCHÍCH^ JCH^CH^, (ch2)6-nhc|-nhch3 s
DNMA-NHCHCO-STA-NHCHgCH(CH^ JCHgCH , (ch2)6-nhc-nh2
NCN
DNMA-NHCHCO-STA-LEU-NHCHgPh, (ch2)6-nhz
DNMA-NHCHCO-STA-NHCHgCH(CH^)CH2CH3, ch2csc-ch2nhz
BOC-ΡΗΕ-ΝΗ^ΗΟ0-STA-NHCH2CH(CH3)CHgCH^, co2ch3
DNMA-NHCHC0-STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3,
C0NH(CH2)2·^ x N/
H
DNMA-NHCHCO-STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3,
Íonh2 DNMA-NH(j:HCO-STA-NHCH2CH(CH3) CH2CH3, conhch3
DNMA-NHCHCO-STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3, con(ch3)2
DNMA-LYS(TOS)-STA-NHCHgCH(CH3)CHgCH , DNMA-LYS(CO_CH_)-STA-NHCHOCH(CH_)CH_CHO, Z J Z J z J
BOC-PHE-NHCHCO-STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3, co2c(ch3)3
DNMA-NHCHCO-STA-NHCHgCH(CH3)CH2CH3,
Jo2c2 h 5
CHC O-NHCHC 0-STA-NHCH9CH (CH )CH CH , ' | * J J
COgCHg
DNMA.-NHCHC 0-STA-NHCH2CH (CH^ )CH2CH3, (CH2)5-CONHCHg
DNMA-NHCH/(CHg)3CH=CH2_7CO-STA-LEU-NHCHgPh
DNMA-NHCH/-(CH2)3CH=CH2_7C0-STA-LEU-NHCHgPh
DNMA-NHCH/'(CH2) CH-CH2_7C0-STA-LEU-NHCH2Ph /°\ _
DNMA-NHCH/ (CH2) ^CH-CH^/CO- STA-LEU-NHCH^h (isómero A)» (isómero B), (isómero A), (isómero B),
DNMA-NHCHCO-STA-NHCHgCH(CH^)CHgCHg, co2ch(ch3)2
Outros compostos valiosos no âmbito da invenção são :
DNMA-ORN(PHT)-STA-LEU-NHCHgPh,
DNMA-ORN(PHT)-STA-NHCHgCH(CH^)CH2CH , 0
I
DNMA-NHÇHC-STA-LEU-NHCHgPh, ch2cn dnma-nhçhc-sta-nhch2ch(ch3)ch2ch3 ch2cn
B OC-PHE-CH-C-STA-NHCH2
O 11 /
CH(CH )CH CH , ch2cn 3 3
DNMA-ARG(N02)-STA-LEU-NHCHgPh, DNMA-ARG (NOg ) - STA-NHCHgC H (CH^ ) CHgC^, DNMA-ORN(C-NHCH^)-STA-LEU-NHCH2Ph,
S
DNMA-ORN
NHCH^)-sta-leu-nhch2
DNMA-ORN ((jj-NHCH^) - STA-LEU-NHCHgPh, 0
O
DNMA-ARG (NOg) -CYSTA-LEU-NHCHg-^x’
BOC-PHE-NHCH
B OC- PHE-ORN(c-NHCH )-STA-LEU-NHCH Ph,
-2 s
BOC-PHE-ORN (^-NHCH3 ) - STA-NHCHgCH (CH^) CHgCH^,
CH-CH-CH.
2ι i 2
OH OH
O 11 , λ
B OC- PHE-NHCHC- STA-NHCHgCH (CH^ ) CHgCH^, (JhoCH-CH- 2 | | 2
OH OH
DNMA-LYS(C-NHCH )-STA-LEU-NHCHl| J s
BOC-PHE-LYS(C-NHCH^)-STA-LEU-NHCHgPh,
S
BOC-PHE-LYS( jj-NHCH^) - STA-LEU-NHCHgPh, O
DNMA-LYS(C-NH2)-STA-LEU-NHCH2Ph,
BOC-PHE-LYS(C-NH9)-STA-LEU-NHCH Ph, í
DNMA-LYS(C-N(CH-) )-STA-LEU-NHCH-Ph, s 3
DNMA-LYS (|-N(CH3 ) 2) - STA-NHCH2CH (CH^)CH^H^,
O
II
DNMA-NHyHC- STA-LEU-NHCHgPh,
NHC-NHCHII 3
S
BOC-PHE-NHCH-C-STA-LEU-NHCHoPh, i 2
(ch3)ch2ch3,
DNMA-LYS(PO(OCH3)2)-STA-NHCHgCH(CH3)CH2CH3, O dnma-nhchA-sta-nhch2ch (ch3 ) cií 2ch3 ,
I s
NhAI-NHCH3
DNMA-NHCHC-STA-LEU-NHCH2Ph, s
I II
NHC-NHCH3
DNMA-LYS(C-NHNO2)-STA-NHCHgCH(GH3)CH2CH3,
Uh
B0C-PHE-LYS(C-NHN02)-STA-LEU-NHCH2Ph,
NH
II
B0C-PHE-NHCHC-STA-LEU-NHCH2Ph ,
NHC-NHNOII 2
NH
ο dnma-nhchÍ'- sta-nhch.
<^H2>6
NH^-NHNO2 NH 2CH(CH3)CH2CH3>
DNMA-NHCHC - STA- NHCH^H (CH3 )CH2CH3
II
BOC-PHE-NHCHC-STA-LEU-NHCH2Ph (CH
BOC-PHE-NHCHC-STA-NHCHgCH (CH3) CH2CH3,
O
II
DNMA-NHCHC-STA-LEU-NHCH2Ph ,
dnma-nhchcL STA-NHCHOCH (CH„) CH_CH„ , j 2 3 2 3
T) xsx
HO
DNMA-LYS(TOS)-STA-LEU-NHCH2Ph,
DNMA-NHÇHC-STA-LEU-NHCHgPh, (çh2)5
C-NHCH3 s
DNMA-NHÇHC-STA-NHCH <
(|h 2)5
C-NHCH» y 3 ,ch(ch3)ch2ch3,
O
BOC-PHE-NHCH(!!-STA-LEU-NHCHgPh, (ch2)5
Ç-NHCH^
II s
II
DNMA-NHCHC-STA xC-NHCH3 y
-nhch2ch (CHjí) ch2ch3 , ff
DNMA-NHCHC-STA-LEU-NHCH2Ph,
C-NHCHo ll 3
S
B OC-PHE-NHCHC-STA-LEU-NHCH2 (CH2)5-NH(jJ-NHCH3 S
O
II
BOC-PHE-NHCHC-STA-LEU-NHCHgPh, (CHO)À-NHC-NHCH„ '2'6 μ 3
S
j)
DNMA-NHCHC-STA-LEU-NHCH2Ph,
DNMA-LYS(PO(OCH3)2)-STA-LEU-NHCHgPh, ϋ
DNMA-NHCHC-CYSTA-LEU-NHCH
Ί s nhÍS-nhch^
DNMA-LY S(C-NHN0o)-STA-LEU-NHCHOPh, II 2 2
NH
DNMA-LYS(C-NHN0 )-STA-LEU-NHCH ll *
NH
DNMA- LYS ( jj -NHN02 ) - STA- LEU- NHCH NH í?
DNMA-NHCHC-STA-LEU-NHCH9Ph, I (0Π2)6
NH
NHC-NHNO2
ch2nh2, dnma-nhchÍ-STA-LEU-NHCH2
Ph
DNMA-NHCHC-STA-NHCH CH(CH )CH CH
DNMA-LYS(TOS)-STA-ILE-NHCHgPh, S
DNMA-NHCHC- STA-LEU-NHCH,,—Jl (CHO)_C-NHCH„ 2 5I| 3
S
O
II
DNMA-NHCHC-CYSTA-LEU-NHGH2Ph (CH_)KC-NHCH„ s
DNMA-NHCHC-STA-LBU-MHCHgPh , (ch2)6c-nhch 3 s
DNMA-NHCHC-CYSTA-LEU-NHCHgPh, (ch2)6c|-nHch3 s
ΐ Z '
DNMà-NHÇHC-STA-NHCH2CH(CH^)CH^CH^, (CHO).C-NHCH_ 2 s
DNMA-NHCH<y-CYSTA-LEU-NHCH_ $
\
C-NHCH11' 3
S
» a
DNMA-NHÇH-C-STA-LEU-NHCHgPh,
C-NHCHq
II 3 s
g
DNMA-NHÇHC-STA-LEU-NHCHLPh, ch3nh-/ s
II
DNMA-NHCHC-STA-(N-MeLEU)-NHCH^Ph,
DNMA-LYS(C-NHN0 )-STA-(N-MeLEU)-NHCH9Ph, ll
NH
ο
DNMA-NHCHC-STA-(N-MeLEU)-NHCH Ph, <
<
O-NHCH^
DNMA-NHCHC-STA- (N-MeLEU)-NHCB^Ph, // p-NHCH^ S
DNMâ-LYS (C-NHNO2) - óTA- (N-MeLEU) -NHCHgPh,
NH
DNMA-NHCHcí- STA-LEU-NHCHgPh,
DNMA-NHCHC-STA-LEU-NHCH2Ph,
11 / \
DNMA-NH^HC- STA-NHCH CH(CH ) CH CH ,
dnma-nhchA-sta-nhch2ch(ch^)ch2ch3, (ÍhJ..
DN MA-NHCHC - STA-LEU-NHCHgPh, ] NH
I H
NHC-NHNO2
II
DNMA-NHCHC-STA-NHCH CH(CH„)CH9CH , / 4 J J
I ífH
NHC-NHN02
ο
II
DNMA-NHCHC- STA-LEU-NHCHgPh co2ch3
O
DNMA-NHCHC-STA-LEU-NHCHoPh,
I 2 (jj-NHCH3 O
DNMA-ARG(NOg)-STA-(D-LEU)-NHCHgPh,
DNMA-ARG(NO2)-STA-(D-ILE)-NHCHgPh,
DNMA-ARG (ΝΟ£ ) -STA-LEU-NHCHCH(CH ) CHgC^,
CHgOH
DNMA-LYS(CNHCH_)-STA-LEU-NHÇHCH(CH CH ,
II J I 4 j
S CH20H
>
=0
s
O-LYS^-NHCHp - STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3, =ο
NCN
CHCO-LYS (C-NHCH3) -STA-NHCHgCH(CH^JCHgC^,
-CHC O-LYS (C -NH2) - STA-NHCH2CH (CH3) C, <5=0
NCN ( ίί - SC H3) - STA -NHCH2CH ( C H3 ) CH2C H3,
(A1
NHCH3) - STA-NHCH2CH (CH3) CH2CH3,
S
CHCO-LYS(C-NHCH )-STA-LEU-NHCHgPh, <
011^0-0 = 0
CHC O-NHCHC0-STA-NHCH CH(CH )CH CH , | — J & J
CO2CH3
<
N-C=0
CHC O-NHCHC O- STA-NHCHgCH (CH^ ) C^CH^, co2ch3 °2CH3
CHC O-NHCHC0-STA-LEU-NHCH2
CHC O-NHCHCO-STA-NHCH_CH(CH„ )CHoCH_ , ' I /> Z j j
N-C=O (CHg)^-N
CHCO-NHCHC0-STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3, \ (ch2)3-nh<j-nhch3 s
O N-C=O \_/
HCO-NHCHCO-STA-NHCHLCH(CH_)CH9CH9, | & j £ J (CHO)À-NHC-NHCH_ 2'6 || 3
NCN
DNMA-NHÇHCO-STA-NHCH2CH(ch^)CH2CH3,
CHoCrC-CH„NHC-NHCH„
2 || 3
S
DNMA-NHCHC O-STA-NHCHOC H(CH„)CH_C H„, | 2 3 2 3
C HnC=C- CH„NHC-NHNO
2 || 2
NH
DNMA-NHCHCO-STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3, ch9csc-ch9nhc-sch
Z «í || 3
NCN
DNMA-NHCHC O- STA-NHCHgCH (CH3 ) CH2CH3, CH9C 5C-CH9NHC-NHCHO 2 || 3
NCN
DNMA-NH^HCO-STA-NHCHgCH(CH3)CH2CH3, CHOC=C-CHNHC-OCH„ 2 2 II 3
DNMA-NHCHCO-CYSTA-NHCHgCH (CH3) CH2CH3,
NHÇj-NHCH^
S dnma-nhchco-cysta-nhch2ch(ch3)ch2ch3, <
NHC-NHNOL 2
DNMA-NHCHC O- STA-NHCHgCH (CH3 ) CH2CH3, <
NHC-NHCHO
II 3 NCN
DNMA-NHCHCO- STA-NHCH^CH (CH^ JCHgCH^,
NHC-SCHIn
DNMA-NHCHCO-STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3,
NHC-OCHj d
BOC-PHE-NHCHC O-STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3,
CH2CaC-CH2NH^-NHCH3
s
DN MA-NHCHC O-STA-LEU-NHCHgPh,
CH_CSC-CH NHC-NHNO Z z || Z
NH
BOC-PHE-NHCHCO-STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3, <
NH^-NHCH3
NCN
NHC-NHCHi| 3
S
DNMA-NHCHCO-STA-LEU-NHCH_Ph, <.
NHC-SCHWcN 3
DNMA-NHCHC 0-STA-LEU-NHCH
»
Γ\
DNMA-NHCHCO-STA-NHCH_CH_N.
I 22 \__/ co2ch3
DNMA-LYS (ÍJ-NHCH3) -STA-NHCH2CH2N\__^0,
s .11
HCO-LYS(C-NHCH^)-CYSTA-NHCH^CHpN ,O \
Λ“\ :9n o, 2\_/
NH tv /11 x
DNMA-LYS(C-NHNO)-STA-NHCHCHN 0, ou r\
DNMA- NHCHC 0- STA-NHCH2CH2^ Q
CH2C =C-CH2-NHC-NHCH3
Os compostos incluem solvatos e hidratos e sais de adição de ácido, farmaceuticamente aceitáveis,dos com postos básicos de fórmula I acima.
Pelo termo sal de adição de ácido farmaceuticamente aceitável quer-se dizer um sal de adição de ácido re lativamente não tóxico, quer de ácido inorgânico ou orgânico, tal como, por exemplo, clorídrico, bromídrico, iodídrico, sul furico, fosfórico, acético, cítrico, oxálico, malónico, salicílico, málico, benzóico, glucónico, fumárico, succínico, ascórbico, maleico, tartárico, metanosulfónico e semelhantes. Os sais preparam-se pondo em contacto a forma base livre com uma quantidade suficiente do ácido desejado para se produzir um sal pela maneira convencional. Podem regenerar-se as formas base livre tratando-se a forma sal com uma base.
Os péptidos modificados da presente invenção possuem um ou mais centros e cada centro pode existir na configuração r(d) ou S(l). A presente invenção inclui todas as formas enantioméricas e epiméricas bem como todas as misturas apropriadas delas derivadas.
Alguns dos novos péptidos acima podem preparar-se de acordo com processos bem conhecidos para preparação de péptidos a partir dos aminoácidos seus constituintes. Outros dos novos péptidos acima preparam-se por um processo pas so a passo ou por um processo de acoplamento de fragmentos de pendendo do produto final particular desejado.
esquema seguinte ilustra novos métodos de preparação de certos péptidos da presente invenção.
ESQUEMA I
BOC - STA > BOC - STA-NHCH,, CH (CH^ ) CHgC (1) (2)
---> STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3 (3)
--------> BOC-LYS(z)-STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3 (M > LYS(z)-STA-NHCH2CH(CH )CH2CH
DNMA.-LYS- STA-NHCH2CH (CH^ )CH2CIÍ3 (7)
CH3N=C=S -------5* DNMA-LYS(C-NHCH-)-STA-NHCH-CH(CH„)CHOCHQ || J 2 J d. J y (8)
De acordo com o Esquema I acima faz-se reagir a estatina protegida com BOC (1) com uma amina primária, por exemplo, 2-metilbutilamina, para formar o composto protegido com BOC correspondente (2). A reacção processa-se num solvente inerte como cloreto de metileno, tetrahidrofurano, clorofórmio, dioxano ou acetato de etilo. 0 solvente que se prefere e cloreto de metileno. 0 tempo de reacção varia de 1 a 24 horas. De preferência leva de 2 a 6 horas. A temperatura da reacção também pode variar de cerca de 15° C até 30°C. De preferência é aproximadamente 25°C.
Faz-se reagir o composto (2) acima com um áci do forte tal como HC1 para se remover o grupo protector BOC formando-se o composto correspondente (3) com uma terminação amino livre.
grupo protector remove-se com um ácido forte tal como trifluoroacético, HC1 ou HBr. De preferência usa-se HC1.
termo grupo protector refere-se àqueles gru pos que se tenciona que protejam a terminação N de reacções indesejáveis durante processos de síntese ou que aumentem a solubilidade dos compostos finais desejados e incluem sem lhe estarem limitados Z e BOC.
Faz-se então reagir o composto (3) com LYS(z) protegido com BOC para se formar o composto correspondente (4) .
- 4θ Esta reacção efectua-se num solvente inerte, por exemplo DMF, com hidroxibenzotriazole, diclorohexilcarbodiimida e trietilamina a temperaturas de 0°C a 25° C. A reacção pode durar tanto quanto 72 horas.
Faz-se reagir este composto (4) com um ácido forte, como o ácido trifluoroacético, para formar o composto correspondente com uma terminação amino livre (5)· A reacção efectua-se num solvente inerte, de preferência diclorometano, a cerca de 25°C, levando de 0,5 a 2 horas.
Faz-se reagir este composto(s) com ácido di-(1-naftilmetil)-acético num solvente inerte tal como DMF, aproximadamente à temperatura ambiente de 4 a 16 horas para se formar um péptido terminado por DNMA (6). Remove-se então o grupo Z por hidrogenação catalítica num solvente polar iner te, tal como o metanol, formando-se o péptido (7)· O catalisa dor é de preferência carvão de paládio.
Faz-se reagir este péptido (7) com isocianato de metilo ou isotiocianato de metilo a cerca da temperatura ambiente durante 2 a 16 horas num solvente inerte tal como cloreto de metileno para se formar um composto da presente in venção (8).
Para compostos dos tipos ilustrados nos Exemplos 1 e 4 a estatina protegida com BOC reage com LEU-NHCH^Ph*HCl para formar o composto protegido com BOC correspondente, por exemplo BOC-STA-LEU-NHCHgPh. Faz-se reagir este composto com HC1 para se formar o composto correspondente com uma terminação amino livre. Faz-se reagir este com BOC-PHE-ARG(NO2 ) para se formar um composto da presente invenção.
Prepara-se o B0C-PHE-ARG(N02) por reacção de ARG(NOg)-OCHj*HCl com BOC-PHE para se formar o correspondente éster metílico de ácido carboxilico, BOC-PHE-ARG(NOg)-OCH^.
’ Converte-se este éster no ácido carboxilico livre por reacção • com uma base forte tal como hidróxido de sódio.
Em alternativa faz-se reagir a diamina (STA-LEU-NHCH^Ph) com uma terminação amino livre com Z-ORN(PHT) para formar o composto correspondente Z-ORN(PHT)-STA-LEU-NHCH^Ph. Hidrogena-se este composto removendo-se assim o gru po Z para se formar 0RN(PHT)-STA-LEU-NHCH2Ph. Faz-se reagir este péptido com BOC-PHE para se formar um composto desejado da presente invenção.
A estratégia de reunião e selecção de cadeia de péptidos e de remoção de grupos protectores é discutida no Capítulo 1, The Peptide Bond, em The Peptides. Analysis, Synthesis, Biology, E. Gross e J. Meienhofer, Eds., Academic Press, New York, NY, 1979, Vol. 1, p. 42-44.
método de acoplamento DCC/HOBT é bem conhecido dos peritos na arte e discute-se no Capítulo 5, The Car bodiimide Method por D. H. Rich e J. Singh em The Peptides. Analysis, Synthesis, Biology, E. Gros e J. Meienhofer, Eds., Academic Press, New York, NY, 1979, Vol 1, p. 241-261.
acoplamento peptídico depende da activação do grupo carboxilo do aminoácido protegido antes da sua condensação com outro péptido contendo uma terminação amino livre. Em adição ao método de acoplamento DCC descrito acima ou tros métodos de activação de um grupo carboxilo de um aminoácido protegido incluem!
1) 0 método de azida - descrito no Capítulo 4 da referência acima.
2) 0 método de anidrido misto - descrito no Capítulo 6 da re ferência acima.
3) 0 método do éster activo - descrito no Capítulo 3 da refe rência acima.
Podem preparar-se os grupos acilo derivados das amidas do ácido succínico substituído como se segue. Faz-se reagir 1-naftaldeido com succinato dietílico numa conden
- 42 sação de Stobbe, e converte-se o diácido correspondente em anidrido com anidrido acético. Tratamento com a amina apropriada da o ácido 2-(1-naftilmetileno)-3-(aminocarbonil substituído )-propiónico. Hidrogenação catalítica dá o ácido 2-(l-naftilmetil)-3~(aminocarbonil substituído)-propiónico deseja do. Pode-se condensar este ácido com aminoácidos adequadamente protegidos usando-se os métodos de acoplamento conhecidos na químida dos péptidos, por exemplo, o método da carbodiimida. Discute-se este em European Application Publication N* 206,807 e European Application Publication N® 200,4o6.
Os compostos da presente invenção são úteis para tratar hipertensão associada a renlna, ataque cardíaco congestivo e hiperaldosteronismo. Também são úteis como instrumentos para determinar a presença de hipertensão associada a renina ou de hiperaldosteronismo.
termo alquilo inferior refere-se a grupos alquilo de cadeia linear ou ramificada contendo de 1 a 6 átomos de carbono incluindo, mas não lhes estando limitado, meti lo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, iso-butilo, sec-butilo, 2-metilhexilo, n-pentilo, 1-metilbutilo, 2,2-dimetil butilo, 2-metilpentilo, 2,2-dimetilpropilo, n-hexilo e semelhantes .
Arilo significa fenilo ou outros grupos aromá ticos, incluindo mono- ou bicíclicos, que podem ser substitui dos, em especial monosubstituídos, por P, Cl, Br, I, CF^, OH, OR ou R.
Arilalquilo é como acima se descreve para alquilo e arilo.
Composições farmacêuticas que contêm uma quan tidade efectiva do composto em combinação com um veículo farmaceuticamente aceitável são parte da presente invenção. Um . aspecto importante da presente invenção é um método de tratamento de hipertensão associada à renina num mamífero caracte- 43 -
rizado por se administrar uma composição farmacêutica contendo uma quantidade efectiva de um composto da invenção em combinação, com um veículo farmaceuticamente aceitável, ao mamífe ro .
Outro aspecto igualmente importante da presen te invenção é um método de tratamento de hiperaldosteronismo num mamífero caracterizado por se administrar uma composição farmacêutica contendo uma quantidade efectiva de um composto da invenção, em combinação com um veículo farmaceuticamente aceitável, ao mamífero.
Um outro aspecto importante da invenção é um método de tratamento de ataque cardíaco congestivo num mamífe ro caracterizado por se administrar ao mamífero uma composição farmacêutica contendo uma quantidade efectiva de um composto da invenção em combinação com um veículo farmaceuticament e aceitável.
A efectividade dos compostos acima mencionados determina-se nor um teste para actividade inibitória de renina in vitro. Determina-se esta actividade por um ensaio radioimune padrão para angiotensina I. Neste ensaio a enzima, renina, incubado durante duas horas a 37° na presença de um substracto, angiotensinogéneo, gera o produto, angiotensina I.
Adicionam-se compostos teste â mistura de incubação. A activi dade relativa refere-se à ΙΟ^θ, a qual é a concentração molar do composto teste causando uma inibição de 50$> da actividade renina ou â percentagem de inibição à concentração 10 molar.
TABELA I
Composto
BOC-PHE-ORN(PHT)-STA-LEU-NHCHgPh
BOC-PHE-ARG(N02)-STA-LEU-NHCH^Ph
DNMA-LYS(C-NHCH3)-STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3
9.1X1O7
6.3xio~8
9.6x10“^
dnma-lys(c-nhch_ )-sta-nhchch(cho)cii„ch„
Ι| 3 a J 'a J s
DNMA-LYS (C-NH(CH2) ) - STA-NHCHgCHÍCH^ ) CHgCH^
S
DNMA-LYS(C-NHPh)-STA-NHCHgCH(CH^)GHgCH^
S
DNMA-LYS(i-NHC (CH^) gCHgC^ ) - STA-NHCHgCH (CH^ )CHgC^
S
DNMA-LYS (C-NHCH^) -CYSTA-NHCHgCH (CH^) CHgC^
NH
DNMA-LYS(C-NHNO2)-CYSTA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3 í!
DNMA-LYS(P-( OPh )2) - STA-NHCHgCHÍCH^) CHgCH^
SjCN
DNMA-LYS(C- SC) -STA-NHCHgCH(CH^)CHgCH^
NCN
DNMA-LYS (cl-NHg ) - STA-NHCHgCH(CH^ ) CHgCH^
F
DNMA-LYS(C-NHCH3)-STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3
DNMà-NHCHC0-STA-NHCHgCH(CH3)CH2CH3 (CH^-lQ)
DNMA-NHCHCO- STA-NHCHgCH (CH3 ) CHgC^ (°h2)3-nQ]
2.9x10
4.6x10 8
5.8x1O-8
4.5x1O-7
7.5x10 y
1.5x1o’8
7.4x10“6 ι,9χΐο8
1.8χ1θ“8
i.5xio“8
8.7xlO“8
5.4x10“7
DNMA-LYS(Z)-STA-LEU-NHCHgPh 2.9x10“ 6
NH Jl X DNMA-LYS(C-NHNOg)-STA-LEU-NHCHgPh 1.5xio“8
DNMA-LYS (C-NHCH3) -STA-LEU-NHCHgPh 6.Oxl08
0 |
DNMA-LYS(C-NHCH3)-STA-LEU-NHCHgPh 8.4x10“8
DNMA-NHCHCO-STA-NHCHgCHÍCH^JCHgCH^ (ch2)5-nhz DNMA-NH^HC0-STA-NHCHgCH(CH^)CHgC^ (CHj -NHC-NHCH„ * 5 || J s 2.9x10“ 7 4.OX1O-8
DNMA-NHCHCO-STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3 (CH2) g-NHjj-NHNOg NH 2.ÓX1O-8 s
DNMA-NHCHCO-STA-LEU-NHCHgPh (CHO)e-NHC-NHCHQ 2'5 II 3 C io-0
s DNMA-NHCHC0-STA-LEU-NHCHgPh (ch2)5-nhc-nhno2 NH l.lxlO-7
DNMA-NHCHCO- STA-NHCH2CH(CH3 ) CH2CH3 (ch2)6-nhz 28$ (° IO-6
DNMA-NHCHCO-STA-NHCHgCH (CH3)CH2CH3 (CH2) 6-NHJ5-NHCH3 4.5x1o-8
O DNMA-NHCHCO-STA-NHCHgCH(CH3)CH2CH3 (Íh2)6-nhc-nh2 NCN 4.5x1O-8
DNMA-NHÇHC 0-STA-LEU-NHCHgPh (ch2)6-nhz 5.9xio-8
DNMA-NHCHCO-STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3 CHgCSC -CHg-NHZ 1.5X1O-7
S DN MA- ORN ( C -NHCH3 ) - STA- NHCÍIgC H ( C H3 ) C HgC H3 0 DNMA-ORN(C-NHCH3)-STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3 0 DNMA-LYS (C-NH2 ) - STA-NHCH2CH(CH3) CHgC^ 2.8xlO-7
8.9xio-7
5.Oxlo-8
HNMA-NHCHCO-STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3 Íh2ch(oh)ch2oh 6.6x10-7
DN MA-NHCHC 0- STA-NHCH2CH ( CH3 ) CHgC^
Ao2ch3
B0C-PHE-NHCHC0-STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3 °°2CH3
DNMA-NHCHCO-STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3
C0NH(CH2)2
H
DNMA-NH^HC0-STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3 CONH2
DNMA-NHCHC0-STA-NHCH2CH(CH3 )CH2CH3 (Jonhch3
DNMA-NHÇHCO-STA-NHCH„CH(CH„)CH9CH
Jon(ch3)2
DNMA-NHCHCO-STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3
DNMA-LYS(TOS)-STA-NHCH^CHfCH^)CH^CH^ DNMA-LYS(C OgCH^)-STA-NHCHgCH(CH^)CH2CH3 iva-phe-nh<jhco-sta-nhch2ch(ch3)ch2ch3 ch2cn
BOC-PHE-NHÇHCO-STA-NHCH CH(CH«,)CH„CHq óo2c(ch3)3
DNMA-NHCHCO-STA-NHCH CH(CHO)CÍLCH„ | 2 ' 3' 2 3 é°2C2H5
2.3x10
4.íxio-8
3.lxlo-6
24% IO-6
26% P io-6
-7 2.0x10 ' z
2.8x10
3.OxlO-6
ó.OxlO-8 5.7x1O-7
9.5x1O”7
2.3xlO-8
9.8xlO-8
A) 5.7x108 (CH2)5-CONHCH3
DNMA-NHCH/(CH2)3CH=CH2_7CO-STA-LEU-NHCH2Ph fcsómero A) Ç.lxlo8 DNMA-NHCH/{CH2)3CH=CH2_7C0-STA-LEU-NHCH2Ph (isómero B) 3.5x1O6
DNMA-NHCH/{CH2 ) 3CH-CH2_7CO- STA-LEU-NHCHgPh (isómero 0^
DN MA-NHCH/(CH2 ) 3<ΪΗ-Cíi 2 _ ~/C 0- STA- LEU- NHCHg Ph (i sómero
DNMA-NHCHCO-STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3 co2ch(ch3)2
Como se pode ver pela tabela acima os compostos da presente invenção têm um efeito significativo na actividade renina e assim são úteis no tratamento de hipertensão, ataque cardíaco congestivo e hiperaldosteronismo.
Para se prepararem composições farmacêuticas dos compostos descritos nesta invenção os veículos farmaceuti camente aceitáveis, inertes, podem ser sólidos ou líquidos. Preparações na forma sólida incluem pós, comprimidos, grânulos dispersíveis, cápsulas, hóstias e supositórios. Um veículo sólido pode ser uma ou mais substâncias que também podem agir como diluentes, agentes de sabor, solubilizantes, lubrificantes, agentes de suspensão, ligantes ou agentes de desintegração de comprimidos; também podem ser materiais encapsulantes. Nos pós, o veículo é um sólido finamente dividido que está em mistura com o composto activo finamente dividido. Nos comprimidos o composto activo está misturado com um veículo tendo as necessárias qualidades de ligação em proporções adequadas e compactado na forma e tamanho desejado. Os pós e com primidos contêm de preferência de 5 a 10 até cerca de 70 por cento do componente activo. Veículos sólidos adequados são carbonato de magnésio, estearato de magnésio, talco, açúcar, lactose, pectina, dextrina, amido, gelatina, goma alcantira, metilcelulose, uma cera de ponto de fusão baixo, manteiga de cacau e semelhantes. Com o termo preparação” pretende-se in- 48
cluir a formulação do composto activo com material encapsulan te como veículo dando uma cápsula na qual o componente activo (com ou sem outros veículos) está rodeado por veículo, que es tá assim em associação com ele. Similarmente as hóstias estão incluídas. Podem usar-se comprimidos, pós, hóstias e cápsulas como formas sólidas de dose apropriadas para administração oral.
Podem administrar-se os compostos da presente invenção oralmente, bucalmente, parentèricamente, por spray de inalação, rectalmente ou topicamente em formulações de dose unitária contendo veículos suportes e adjuvantes não tóxicos, farmaceuticamente aceitáveis convencionais, como se dese jar. 0 termo parentérica como aqui se usa, inclui injecções subcutâneas, intravenosas, intramusculares, intrastemas ou técnicas de infusão.
Para se prepararem supositórios, funde-se pri meiro uma cera de baixo ponto de fusão tal como uma mistura de gliceridos de ácidos gordos ou manteiga de cacau, e disper sa-se aí o ingrediente activo, homogeneamente, por agitação. Verte-se então a mistura homogénea fundida em moldes de tamanho adequado, deixa-se arrefecer, e por este modo solidificar.
As preparações na forma líquida incluem soluções, suspensões e emulsões. Como exemplo pode mencionar-se água ou soluções água/propilenoglicol para injecções parentéricas. Também de podem formular preparações líquidas em solução numa solução aquosa de polietilenoglicol. Podem fazer-se suspensões aquosas adequadas para uso oral dispersando-se o componente activo finamente dividido em água com material vis coso, isto é, gomas naturais ou sintéticas, resinas, metilcelulose, carboximetilcelulose de sódio e outros agentes de sus pensão bem conhecidos.
Também estão incluídas as formas sólidas que ’ se pretendem converter, pouco tempo antes de se usarem, em • preparações na forma líquida quer para administração oral ou
parentérica. Estas formas líquidas incluem soluções, suspensões e emulsões. Estas preparações na forma sólida particulares fomecem-se mais convenientemente na forma de dose unitária e usam-se assim para darem uma dose líquida unitária simples. Em alternativa pode fornecer-se sólido suficiente de mo do que após conversão à forma líquida se podem obter múltiplas doses líquidas individuais medindo-se volumes pré-determinados da preparação na forma líquida como com uma seringa, uma colher de chá ou outro recipiente volumétrico. Quando se preparam assim doses líquidas múltiplas é preferível manter-se a porção não utilizada das ditas doses líquidas a baixa tempera tura (isto é, sob refrigeração) de modo a retardar uma possível decomposição. As preparações na forma sólida que se pretende converter na forma líquida podem conter, em adição ao material activo, sabores, corantes, estabilizantes, tampões , adoçantes artificiais e naturais, dispersantes, espessantes , agentes solubilizantes, e afins. 0 líquido utilizado para pre paração da preparação em forma líquida pode ser água, água isotónica, etanol, glicerina, propilenoglicol, e semelhantes, bem como misturas destes. Naturalmente o líquido utilizado se rá escolhido tendo em vista a via de administração, por exemplo, preparações líquidas contendo grandes quantidades de eta nol não são adequadas para uso parentérico.
De preferência, a preparação farmacêutica está na forma de dose unitária. Nesta forma a preparação é subdividida em doses unitárias contendo quantidades adequadas do componente activo. A forma de dose unitária pode ser uma preparação empacotada contendo a embalagem quantidades discretas de preparação, por exemplo, comprimidos embalados, cápsulas , e pós em frascos ou ampolas. A dose unitária também pode ser ela própria uma cápsula, hóstia ou comprimido, ou pode ser o número apropriado de qualquer destes na forma embalada.
A quantidade de composto activo numa dose uni tária de preparação pode variar ou ajustar-se de 1 mg a 500mg, . de preferência 5 a 100 mg de acordo com a aplicação particular e a potência do ingrediente activo. As composições podem, se se desejar, conter também outros agentes terapêuticos compatí veis.
No uso terapêutico como inibidores de renina a gama de dosagem para mamíferos para um indivíduo de 7θ kg é de 1 a 1500 mg de peso corporal por dia ou de preferência 25 a 750 mg d® peso corporal por dia opcionalmente dividida em porções. As dosagens, contudo, podem variar dependendo das ne cessidades do paciente, a severidade das condições a serem tratadas e do composto a ser usado. A determinação da dosagem apropriada para uma situação particular está dentro da perícia da arte. Em geral o tratamento inicia-se com doses menores que são menos do que a dose óptima do composto. Em seguida aumenta-se a dosagem por pequenos aumentos até se atingir o efeito óptimo sob as circunstâncias. Por conveniência a dose diária total pode ser dividida e administrada em porções ao longo do dia se se desejar.
Dão-se os seguintes exemplos para permitir a alguéia perito na arte a prática da presente invenção. Estes exemplos não pretendem limitar de qualquer modo o âmbito da invenção mas sim ilustrarem-na.
EXEMPLO 1
BOC-PHE-ARG(B02)-STA-LEU-NHCH2Ph
Arrefeceu-se uma solução de 1,06 g de STA-LEU· -NHCHgPh*HC1, 1,2 g de BOC-PHE-ARG(N02), e 0,37 g de HOBT em 80 ml de uma solução 5/3 de CH2C12/DMF, em gelo e tratou-se com 0,7 ml de Et^N. Adicionou-se então DCC (0,59 g) e manteve -se a solução a 0° durante uma hora, e depois à temperatura ambiente durante a noite. Removeu-se o solvente sob pressão reduzida e tomou-se o resíduo em EtOAc. Filtraram-se os inso lúveis e lavou-se o filtrado com solução de NagCO^, solução de ácido cítrico e salmoura. Após secagem sobre MgSO^ e remo ção do solvente sob pressão reduzida, cromatografou-se sobre
sílica gel, eluiu-se com um gradiente de CHgCl^/MeOH (97/3) a CHgClg/MeOH (92/8). Combinação das fracções apropriadas deu 1,74 S (82%) do produto na forma de uma espuma branca.
Calculado para
C,
C1 , Η/_Νλ0~
63 99
59,62; H, (PM 826,01):
7,69; N, 15,26
Encontrado C, 59,49; H, 7,48; N, 14,59.
EXEMPLO 2
DNMA-LYS(CNHCH^)-STA-NHCH^CH(CH^)CH^CH^
Dissolveu-se DNMA-LYS-STA-NHCHgCHfCH^CHgCH^ (0,5 g) em diclorometano (15 ml) e arrefeceu-se a 0°. Adicionou-se isotiocianato de metilo (0,053 g) e deixou-se a mistura aquecer a 25° e agitou-se durante seis horas. Evaporou-se o solvente e purificou-se o produto bruto por cromatografia em sílica gel, eluindo-se com um gradiente de EtOAc/hexano (l-.l) a EtOAc puro. Reuniram-se as fracçSes adequadas para dar 0,3 g de produto
Calculado para C^N O^S’0,25 0^0^0,5 HgO:
C, 69,13; H, 8,07; N, 8,76 Encontrado C, 69,135 H, 8,19; N, 8,84.
EXEMPLO 3
DNMA-LYS(CNHCH ) -STA-NHCH2CH(CH^)CHgCI^
Dissolveu-se DNMA-LYS-STA-NHCHgCH/CH^JCHgCH^ (0,5 g) em di clorometano (15 ml) e arrefeceu-se a 0°, Adicionou-se isocianato de metilo (θ,θ42 ml) e deixou-se arrefecer a mistura a 25°C e agitou-se durante 4 horas. Adicionou-se EtOAc à suspensão branca e filtrou-se e secou-se o sólido para dar 0,3 g de produto.
Calculado para C^H^N^·0, 33 0^ΗθΟ2·0,5 Η£0ί
c, 70,41; H, 8,25; N, 8,86
Encontrado C, 70,26; H, 8,355 N, 8,82.
- 52 EXEMPLO 4
B OC - PHE-ORN(PHT)-STA-LEU-NHCHgPh
Dissolveu-se BOG-PHE (0,587 g, 2,21 tnmole) e HOBT^HgO (0,314 g, 2,32 mmole) em 2 ml de DMF, diluiu-se com 20 ml de CHgClg e arrefeceu-se a -5°. Adicionou-se DCC (0,48 g, 2,32 mmole) como solução em 5 ml de CHgCl^, seguindo-se uma solução arrefecida de ORN(pHT)-STA-LEU-NHCH Ph (1,35 g. 2,17 mmole) em 10 ml de CH^Clg. Após se agitar a 25° durante a noite, filtrou-se a mistura, pulverizou-se e suspendeu-se em EtOAc. Filtrou-se a suspensão e lavou-se o precipitado com ácido cítrico IN, obtendo-se um precipitado. Lavou-se a suspensão com salmoura, solução satirada de NaHCO^ e salmoura. Dissolveram-se os sólidos por adição de CH^Cl^ e aquecimento. Separou-se a fase aquosa residual e secou-se a fase orgânica sobre MgSO^, filtrou-se e raspou-se obtendo-se um óleo. Dissolveu-se o óleo em CHCl^ e obteve-se um precipitado por adição de Et^O, Filtrou-se o sólido,
1,64 g de produto. Análises por IV, NMR
-se dando lavou-se com EtgO e
e secouespectro metria de massa confirmaram a estrutura.
Calculado para 869,08):
C, 66,34; H, 7,42; N, 9,67 Encontrado C, 66,34; H, 7,57; N, 9,86.
EXEMPLO 5
S
DNMA-LYS(C-NH(CH2)3CH3)-STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3
Utilizou-se o processo do Exemplo 2 mas substitui-se o isotiocianato de metilo por isocianato de n-butilo e obteve-se o composto do título. Purificou-se por cromatogra fia em sílica gel, eluindo-se com EtOAc/hexano (3/1)· Confirmou-se a estrutura por NMR e espectroscopia de massa. Calculado para C^gH^^N^O^S (PM 810,06):
C, 71,175 H, 8,34; N, 8,65
Encontrado C, 70,92; H, 8,33; N, 8,55.
EXEMPLO 6 s
DNMA-LYS (C-NHPh ) - STA-NHCH^CH (CH^ ) CH^CIl^
Usou-se o processo do Exemplo 2 mas substituiu -se o isotiocianato de fenilo por isotiocianato de metilo e obteve-se o composto do título. Purificou-se por cromatografia em sílica gel, eluindo-se com EtOAc/hexano (3/1). Transfe
EXEMPLO 7
S
DNMA-LYS (H-NHC (CH^ ) 2CH2CH3) - STA-NHCHgCII(CH^)CH^H^
Usou-se o processo do Exemplo 2 mas substituiu -se o isotiocianato de metilo por isotiocianato de 2,2-dimetilpropil e obteve-se o composto do título. Purificou-se por cromatográfia sobre sílica gel eluindo-se com EtOAc/hexano (1/1) e depois com EtOAc. Confirmou-se a estrutura por NMR e espectroscopia de massa.
Calculado para C^^Hg^N^O^S (PM 824,08):
C, 71»41; H, 8,44; N, 8,50 Encontrado C, 71.50; H, 8,50; N, 8,43.
EXEMPLO 8
S
DNMA-LYS (C-NHCHQ)-CYSTA-NHCH„CH(CHO ) CH.,CH_
Arrefeceu-se em gelo uma solução de 500 mg (0,68 mmole) de DNMA-LYS-CYSTA-CHCHgCHÍCH^JgCH^H^ em 10 ml de CHgClg e adicionou-se 50 mg (0,68 mmole) de isotiocianato de metilo. Agitou-se a solução durante quatro dias à tempera54 -
tura ambiente, removeu-se o solvente sob pressão reduzida e cromatografou-se o resíduo sobre sílica gel eluindo-se com EtOAc/hexano (1/1) e depois com EtOAc .Obtiveram-se 0,4 g de produto. Confirmou-se a estrutura por NMR e espectroscopia de massa.
Calculado para C^gH^N^O^SO,44C^HgO2 (PM 846,80):
C, 70,57; H, 8,16; N, 8,27 Encontrado C, 70,92; H, 8,24; N, 8,41.
EXEMPLO 9
I NH dnma-lys(c-nhno2)-cysta-nhch2ch(ch3)ch2ch3
Tratou-se uma solução de 400 mg (0,54 mmole) de DNMA-LYS-CYSTA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3 em 10 ml de Et OH com 74 mg (0,54 mmole) de 2-metil-l-nitro-2-tiopseudoureia (j. Am. Chem. Soc, 76, 1877 (1954)) e agitou-se à temperatura ambiente durante quatro dias. Removeu-se o solvente sob pressão reduzida e cromatografou-se o resíduo sobre sílica gel eluindo-se com EtOAc/hexano (1/1) e depois com EtOAc. Obtiveram-se 0,35 g de produto. Confirmou-se a estrutura por NMR e espectroscopia de massa.
Calculado para C^H^N 06.0,4^Η802 (PM 857,27):
) C, 68,09; H, 7,78; N, 11,44
Encontrado C, 67,58; H, 7,78; N, 11,58.
EXEMPLO 10
DNMA-LYS(P- ( OPh) 2) - STA-NHCHgCH(CH^) CHgC^
Arrefeceu-se em gelo uma solução de 500 mg (0,72 mmole) de DNMA-LYS-STA-NHCHgCH(CH^)CH2CH^ em 15 ml de CH2C12/THF (4/1) e adicionou-se 0,1 ml (θ,72 mmole) de Et^N seguido por 0,15 ml (0,72 mmole) de clorofosfato de difenilo. Agitou-se a solução a 0° durante três horas e removeu-se então o solvente sob pressão reduzida. Tomou-se o resíduo em
EtOAc e lavou-se com NaCO
e NaCl saturado.
Por secagem e re55 moção do solvente sob pressão reduzida obteve-se o produto bruto que se purificou por cromatografia em sílica gel, eluin do-se com EtOAc/hexano (1/1) a EtOAc/hexano (5/1). Obteve-se 0,46 g de produto. Confirmou-se a estrutura por NMR e espectro scopia de massa.
Calculado para C^^H^^N^O^P^HgO (PM 94-5,10):
C, 69,89} H, 7,36} N, 5,93 Encontrado C, 69,64; H, 7»17; N, 6,06.
EXEMPLO 11
NCN
DNMA-LYS(ϋ-SCH^)-STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3
Tratou-se uma solução de 0,31 g (0,44 mmole) de DNMA-LYS-STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3 em 10 ml de CHCl^ com 7Omg (O,57 mmole) de ditiocarbonato de dimetilcianimida (Synthesis 332 (1975)) e agitou-se à temperatura ambiente de um dia para o outro. Removeu-se o solvente sob pressão reduzida e cromato grafou-se o resíduo sobre sílica gel eluindo-se com EtOAc/hexano (1/1) e depois com EtOAc. Obteve-se 0,3 g de produto.Con firmou-se a estrutura por NMR e espectroscopia de massa. Calculado para Ο^Η^θΝ^β’Η 0 (PM 811, OO):
C, 68,12; H, 7.71} N, 10,36 Encontrado C, 68,23; H, 7»36; N, 10,25.
EXEMPLO 12
NCN
DNMA-LY S(C-NH2)-STA-NHCHgCH(CH^)CH2CH3
Tratou-se uma solução de 0,3 g (0,43 mmole) de DNMA-LYS-STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3 em 10 ml de CHCl^ com 0,11 g (o,5 mmole) de cianocarboimidato de difenilo e deixou-se sob agitação à temperatura ambiente de um dia para o outro. Removeu-se o solvente sob pressão reduzida e tomou-se o resíduo em 10 ml de MeOH e borbulhou-se amónia através da solução até à saturação. Deixou-se a solução sob agitação à temperatu ra ambiente durante vinte e quatro horas e depois a 30° duran
- 56 te cinco horas. Removeu-se o solvente sob pressão reduzida e cromatografou-se o resíduo sobre sílica gel eluindo-se com EtOAc e em seguida com EtOAc/MeOH (9/1)· Obteve-se 0,25 S de produto. Confirmou-se a estrutura por NMR e espectroscopia de massa·
Calculado para 0^^^0^.1,2^0 (PM 783,6θ):
C, 68,97; Η, 7.90; N, 12,51
Encontrado C, 68,715 Η, 7.57; N, 12,20.
EXEMPLO 13
NCN
DNMA-LY S ( í-NHCH3 ) - STA-NHCHgC H ( CH3 ) CH2CH3
Tratou-se uma solução de 0,3 g (0,Á3 mmole ) de DNMA-LYS-STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3 em 10 ml de CHC13 com 0,11 g (O,5 mmole) de cianocarboimidato de difenilo e agitou-se à temperatura ambiente durante uma hora. Removeu-se o solvente sob pressão reduzida e tomou-se o resíduo em 10 ml de MeOH e borbulhou-se metilamina gasosa através da solução até à saturação. Após se agitar durante uma hora removeu-se o solvente sob pressão reduzida e cromatografou-se o resíduo sobre sílica gel eluindo-se com EtOAc e em seguida com EtOAc/MeOH (9/1). Obteve-se 0,26 g de produto. Confirmou-se a estrutura por NMR e espectroscopia de massa.
Calculado para (PM 794,02):
C, 69,585 H, 8,00; N, 12,35 Encontrado C, 69,135 H, 7*915 N, 12,31«
EXEMPLO 14
DNMA-NHCHC 0- STA-NHCH2CH(CH3 )
Arrefeceu-se em gelo uma solução de 0,5 g (1,2 mmole) de H^CHCO-STA-NHCHgCHÍCH^JCHgCH^, 0,4 g (1,2 m-
mole) de ácido di-(1-naftilmetil)-acético e 0,16 g (1,2 mmole) de HOBT em 15 ml de DMF e adicionou-se 0,25 g (1,2 mmole) de DCC. Deixou-se a solução aquecer até à temperatura ambiente e agitou-se durante a noite. Filtrou-se a mistura e diluiu-se o filtrado com EtOAc e lavou-se com HgO, NaHCO^ saturado e em seguida com NaCl. Por secagem e remoção do solvente sob pressão reduzida obteve-se o produto bruto que se cromatografou sobre sílica gel, eluindo-se com EtOAc/hexano (1/1) e em seguida com EtOAc/hexano (3/1). Obteve-se 0,3 g de produto. Con firmou-se a estrutura por NMR e espectroscopia de massa. Calculado para C^H^N^ (PM 744,98) 4
C,75,775 H, 8,12} N, 7.52
Encontrado C, 75,82; H, 8,15; N, 7,41.
EXEMPLO 15
DNMA-NHCHC0-STA-NHCH2CH(CH^)CHgCH^
J >
(ch2)3-n
Arrefeceu-se em gelo uma solução de 0,51 g (1,5 mmole) de ácido di(l-naftilmetil)-acético, 0,61 g (1,5 mmole) de H2NCHC0-STA-NHCH9CH(CHq)CH9CHq e 0,2 g 2^xxe 0,2 g (1,5 mmole)
de HOBT em 15 ml de DMF e adicionou-se 0,31 g (1,5 mmole) de DCC. Deixou-se a solução sob agitação à temperatura ambiente de um dia para o outro. Filtrou-se a mistura e diluiu-se o filtrado com EtOAc. Lavou-se este com ^O, NaHCO^ saturado e NaCl saturado. Por secagem e remoção do solvente sob pressão reduzida obteve-se o produto bruto que se cromatografou sobre
sílica gel eluindo-se com EtOAc/hexano (1/1). Obteve-se 0,4 g de produto. Confirmou-se a estrutura por NMR e espectroscopia de massa.
Calculado para C^H^N^· 0,5^0 (PM 739,96):
C, 74,66; H, 8,04; N, 7,57
Encontrado C, 74,73; H, 8,02; N, 7,66.
EXEMPLO 16
DNMA-LY S(Z)-STA-LEU-NHCH ? Ph
Arrefeceu-se em gelo uma solução de 5, 6 g (8,7 mmole) de LYS(z)-STA-LEU-NHCH2Ph 3,0 g (8,8 mole) de ácido di-(1-naftilmetil)-acético e 1,18 g (8,7 mmole) de HOBT em 50 ml.de DMF e adicionou-se 1,8 g (8,7 mmole) de DCC. Deixou-se a solução aquecer até à temperatura ambiente e deixou-se sob agitação de um dia para o outro. Filtrou-se a mistura e diluiu
-se o e NaCl saturado sob presfiltrado com EtOAc e lavou-se com HgO, NaHCO^ saturado. Por secagem e remoção do solvente são reduzida obteve-se o produto bruto que se cromatografou sobre sílica gel eluindo-se com EtOAc/CHCl^ (1/1), e em segui da EtOAc/CHCl^ (4/1). Obteve-se 5,5 g de produto. Confirmou-se a estrutura por NMR e espectroscopia de massa.
Calculado para C^H^N^O? (PM 962,20):
C, 73,64; H, 7,44; N, 7,28
Encontrado C, 73,81; H, 7,46; N, 7,4o.
EXEMPLO 17
NH
DNMA-LYS(c-NHN02)-STA-LEU-NHCH2Ph
Tratou-se uma solução de 1,0 g (1,2 mmole) de DNMA-LYS-STA-LEU-NHCHgPh em 50 ml de EtOH com 0,18 g (1,3 mmo le) de 2-metil-l-nitro-2-tiopseudoureia e agitou-se durante três dias â temperatura ambiente com aquecimento periódico pa ra dissolver o sólido branco formado. Removeu-se então o sol vente sob pressão reduzida e cromatografou-se sobre sílica gel eluindo-se com EtOAc/CHCl^ (1/1) e em seguida com EtOAc/
i
/CHCl^ (3/1). Obteve-se 0,5 g de produto. Confirmou-se a estrutura por NMR e espectroscopia de massa.
Calculado para Ο^Η^ΝθΟ?*O.JCHCl^ (PM 962,87):
C, 65,36; H, 6,955 N, 11,64 Encontrado C, 65,43;H,7,09 N, 11,49.
EXEMPLO 18
S DNMA-LYS^-NHCH^ - STA-LEU-NHCB^Ph
Tratou-se uma suspensão de 1,5 g (1,8 mmole) de DNMA-LYS-STA-LEU-NHCHgPh em 20 ml de CHC13 com uma pequena quantidade de DMF para se realizar a solução e tratou-se então com 90 mg (1,23 mmole) de isotiocianato de metilo e 0,25 ml (1,8 mmole) de Et3N e agitou-se à temperatura ambiente de um dia para o outro. Removeu-se o solvente sob pressão reduzi da e cromatografou-se sobre sílica gel eluindo-se com CHC13 . Obteve-se 1,2 g de produto. Confirmou-se a estrutura por NMR e espectroscopia de massa.
Calculado para C^H^gN^SO, 4CHC13 (PM 948,88):
C, 67,59; H, 7,27? N, 8,86 Encontrado C, 67.37; H, 7.39; N, 8,94.
EXEMPLO 19
DNMA-LYS( A'-NHCH3 ) - STA-LEU-NHCHgPh
Tratou-se uma solução de 1,0 g (1,2 mmole) de DNMA-LYS-STA-LEU-NHCHgPh em 20 ml de DMF com 0,08 ml (1,4 mmo le) de isocianato de metilo e 0,2 ml (1,4 mmole) de Et3N e agitou-se à temperatura ambiente durante dois dias. Removeu-se o solvente sob alto vácuo e cromatografou-se o resíduo so bre sílica gel eluindo-se com CHCl3/EtOAc (9/1). Visto o produto estar contaminado com um pouco de DMF, tomou-se em EtOAc e lavou-se com H20. P°r secaSem e remoção do solvente sob pres são reduzida obteve-se 0,9 g de produto. Confirmou-se a estru tura por NMR e espectroscopia de massa.
Calculado para C^H^gN^‘1,3Η£0 (PM 908,5½):
C, 70,06; H, 7*835 N, 9,25
Encontrado C, 70,08; H, 7,70; N, 9,37.
EXEMPLO 20
DNMA-NHCHC0-STA-NHCH CH(CH„)CH„CH_ | 2 J 2 J (ch2)5-nhz
Tratou-se uma solução de 2,1 g (3,½ mmole) de B0C-NHCHC0-STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3 em 20 ml de CH^lg com 3 (ch2)5-nhz ml de TFA e agitou-se durante três horas à temperatura ambien te. Removeu-se o solvente sob pressão reduzida e misturou-se o resíduo com solução de carbonato de sódio e extraiu-se com EtOAc. Lavou-se o EtOAc com NaCl saturado, secou-se e removeu -se o solvente sob pressão reduzida deixando o intermediário h_nchco-8ta-nhchch(ch)chch.
| 2 3*3 (ch2)5-nhz
Tomou-se este em 15 ml de DMF e tratou-se com 1,15 S (3 ,½ mmole) de ácido di-(1-naftilmetil)-acético e 0,46 g (3,½ mmole) de Η0ΒΤ. Arrefeceu-se a solução em gelo e adícionou-se 0,7 g (3,½ mmole) de DCC e deixou-se a solução sob agitação à temperatura ambiente de um dia para o outro. Filtrou-se a mistura e diluiu-se o filtrado com EtOAc e lavou-se com HgO,
NaHCl„ saturado e NaCl saturado.
Secagem e remoção do solvente sob pressão reduzida deu o produto bruto que se cromatografou sobre sílica gel eluindo-se com hexano/EtOAc (3/1) e em seguida com hexano/EtOAc (1/1). Obteve-se 1,6 g de produto. Confirmou-se a estrutura por NMR e espectroscopia de massa.
Calculado para C^H^N^ ·0, 5^0 (PM 852,09)·. C, 73,29; H, 7,93; N, 6,58
Encontrado C, 72,92; II, 7,65; N, 6,40.
EXEMPLO 21
DNMA-NHCHC 0- STA-NHCH^H (CH^ ) CHgC^ (CHjK-NHC-NHCH„ 25 y 3
Tratou-se uma solução de 0,3 g (0,4 mmole) de DNMA-NHCHCO-STA-NHCH CH(CH_)CH_CHO em 10 ml de CHC1„ com 34 | 2 3 2 J J (ch2)5-nhz mg (0,46 mmole) de isotiocianato de metilo e agitou-se à temperatura ambiente de um dia para o outro. Removeu-se o solven te sob pressão reduzida e cromatografou-se o produto bruto so bre sílica gel eluindo-se com EtOAc. Obteve-se 0,3 g de produ to. Transferiu-se o produto para um frasco com a ajuda de
CHgClg. Confirmou-se a estrutura por NMR e massa.
espectroscopia de
Calculado para N O^SO^CHgClg (PM 807,49)í
C, 68,86; H, 7,94; N, 8,67
Encontrado C, 68,735 H, 8,03; N, 8,46.
EXEMPLO 22
DNMA-NHCHCO- STA-NHCHgCH (CH^ /CHgCH^ (ch2)5-nhc-nhno2
NH l?ratou-se uma solução de 0,42 g (0,6 mmole)de DNMA-NHCHC0-STA-NHCHoCH(CHQ)CHoCHo em 15 ml de EtOH com 0,1 g
I 2 J' 2 J ° (Óh2)5-nh2 (O,7 mmole) de 2-metil-l-nitro-2-tiopseudoureia e agitou-se à temperatura ambiente de um dia para o outro. Removeu-se então o solvente por pressão reduzida e cromatografou-se o resíduo sobre sílica gel eluindo-se com hexano/EtOAc (1/1). Transferiu-se o material para um frasco com a ajuda de CH Cl obtendo-se 0,4 g de produto. Confirmou-se a estrutura para NMR e espectroscopia de massa.
Calculado para CyyyOj CH2C12 (PM 821,48)}
C, 66,23; H,. 7,56; N, 11,94 Encontrado C, 66,075 H, 7,73; N, 11,86.
EXEMPLO 23
DNMA-NHC HC 0-STA-LEU-NHCH„Ph
I (CH ) -NHC-NHCHq | 3
Arrefeceu-se a 0o uma solução de 0,5 g (θ,6 mmole) de DNMA-NHCHCO-STA-LEU-NHCH Ph em 15 ml de CH Cl /TH?
| £ cí (í!h2)5-nhz (3/1) e adicionou-se 44 mg (θ,6 mmole) de isotiocianato de me tilo juntamente com algumas gotas de Et^N. Deixou-se aquecer a solução até à temperatura ambiente e agitou-se de um dia pa ra o outro. Removeu-se o solvente sob pressão reduzida e cromatograf ou- se o resíduo sobre sílica gel eluindo-se com EtOAc. Transferiu-se o material para um frasco com a ajuda de CH^Clg. Obteve-se 0,5 g de produto. Confirmou-se a estrutura por NMR e espectroscopia de massa.
Calculado para C ^H^NgO^S’0,33C4Hg02·0,ICHgClg (PM 952,72): C, 69,86; H, 7,71» N, 8,82
Encontrado C, 69,59; H, 7,54; N, 9,03.
EXEMPLO 24
DNMA-NI HCHgPh
NH
mmole) de 2-metil-l-nitro-2-tiopseudoureia e agitou-se à temperatura ambiente de um dia para o outro. Removeu-se o solven te sob pressão reduzida e cromatografou-se o resíduo sobre sí lica gel eluindo-se com EtOAc/hexano (1/1) e em seguida com EtOAc. Transferiu-se o material para um frasco com a ajuda de CH2C12 obtendo-se 0,4 g de produto. Confirmou-se a estrutura por NMR e espectroscopia de massa.
Calculado para C H6gNg0 ^ 0,330^0^ 0,330^,01,, (PM 986,12);
c, 66,55; H, 7,29; N, 11,36
- 63 Encontrado C, 66,26; Η, 7,22; N, 11,58.
EXEMPLO 25
DNMA-NHÇHCO-STA-NHCH CH(CH )CH CH„ (ch2)6-nhz
Tratou-se uma solução de 1,3 g (2,0 mmole) de B0C-NH(|!HC0-STA-NHCH2CH(CH3)CH.1CH3 em 20 ml de com 3 ml (ch2)6-nhz de TFA e deixou-se sob agitação durante três horas. Removeu-se o solvente sob pressão reduzida, misturou-se com solução de carbonato de sódio e extraiu-se com EtOAc. Lavou-se o EtOAc com NaCl saturado, secou-se e removeu-se o solvente sob pressão reduzida para dar H2NCHCO-STA-NHCH2CIl(CH3)CH2CIi3.
(Íh2)6-nhz
Dissolveu-se este em 15 ml de DMF e adicionou -se 0,7 g (2,1 mmole) de ácido di-(1-naftilmetil)-acético e 0,28 g (2,1 mmole) de HOBT. Agitou-se a solução à temperatura ambiente de um dia para o outro. Piltrou-se a mistura e diluiu -se o filtrado com EtOAc. Lavou-se o EtOAc com HgO, NaNCO^ sa turado e NaCl saturado. Por secagem e remoção do solvente sob pressão reduzida obteve-se o produto bruto que se cromatografou sobre seguida com hexano/EtOAc (1/1). Obteve-se 1,4 Confirmou-se a sílica gel eluindo-se com hexano/EtOAc (3/1) e em g de produto, estrutura por NMR e espectroscopia de massa. C53H68N4O6*O,14C4HgO2 (PM 869,44); 73,99;
73,29;
Calculado para
C,
Encontrado C,
H, 8,01;
H, 8,08;
4n8u2
N, 6,44
N, 6,42.
EXEMPLO 26
DNMA-NHÇHC 0- STA-NHCHgCH (CH^ ) CH^H^ (ch2)ó-nhc|-nhch3
Arrefeceu-se em gelo uma solução de 0,42 g (θ,6 mmole) de DNMA-NHCHC0-STA-NHCHoCH(CHq)CHoCHq em 10 ml de CIÍCI. I . 2 ' 3 2 3 3 (ch2)6-nhz
e tratou-se com 48 mg (0,66 mmole) de isotiocianato de metilo e agitou-se a solução à temperatura ambiente de um dia para o outro. Removeu-se o solvente sob pressão reduzida e cromatograf ou-se o resíduo sobre sílica gel eluindo-se com EtOAc. Obteve-se 0,34 g de produto. Confirmou-se o estrutura por NMR e espectroscopia de massa.
Calculado para C^H^ N O^S·0,330/HgOg (PM 825,10):
C, 70,33; H, 8,26; N, 8,49 Encontrado C, 69,94; H, 8,24; N, 8,56.
EXEMPLO 27 dnma-nhchco-sta-nhch2ch(ch3)ch2ch3
NCN
Tratou-se uma solução de 0,67 g (0,9 mmole)de DNMA-NHCHCO-STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3 em 10 ml de CHC13 com 0,2 (ch2)6-nh2 g (0,8 mmole) de cianocarboimidato de difenilo e deixou-se sob agitação a temperatura ambiente de um dia para o outro. Evaporou-se o solvente sob pressão reduzida e tomou-se o resí duo em 20 ml de MeOH e borbulhou-se amónia através da solução até à saturação. Deixou-se a solução sob agitação à temperatu ra ambiente de um dia para o outro, removeu-se o solvente sob pressão reduzida e cromatografou-se o resíduo sobre sílica gel eluindo-se com EtOAc/MeOH (9/1). Obteve-se 0,6 g de produto. Confirmou-se a estrutura por NMR e espectroscopia de massa. Calculado para C^ N 0^ · 0,75CH OH (PM 814,06):
C, 70,45; H, 8,17; N, 12,05 Encontrado C, 70,34; H, 8,31; N, 12,10.
EXEMPLO 28
DNMA-NH^HCO-STA-LEU-NHCHgPh (ch2)6-nhz
Tratou-se uma solução de 1,0 g (1,3 mmole) de
horas. Removeu-se o solvente sob pressão reduzida e tomou-se o resíduo em EtOAc e lavou-se com NaHCO^ saturado e NaCl satu rado. Secagem e remoção do solvente sob pressão reduzida deu
HgNjJHCO- STA-LEU-NHCH^Ph.
(ch2)6-nhz
Tomou-se este em 15 ml de DMF e adicionou-se θ»44 g (mmole) de ácido di-(l-naftilmetil)-acético e 0,18 g (1,3 mmole) de HOBT. Arrefeceu-se a solução em gelo e adicionou-se 0,27 g (1,3 mmole) de DCC e deixou-se a solução sob agitação à temperatura ambiente durante três dias. Filtrou-se a mistura e diluiu-se o filtrado com NaHCO^ saturado e NaCl saturado. Por vente sob pressão reduzida obteve-se
EtOAc e lavou-se com H20 secagem e remoção do sol o produto bruto que se cromatografou sobre sílica gel eluindo-se com EtOAc/hexano (1/1). Obteve-se 1,0 g de produto. Confirmou-se a estrutura por NMR e espectroscopia de massa, Calculado para C^H^N^O? (PM 990,25):
C, 73,98; H, 7,63; N, 7,07
Encontrado C, 73,67; H, 7,87, N, 7,24.
EXEMPLO 29
DNMA-NHCHC 0- STA-NHCHgCH (CH^ ) CH^H^ ch2c=c-ch2nhz Tratou-se uma solução de 1,3 g (2,4 mmole) de BOC-NHÇHCO-STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3 em 30 ml de CHgCLg com 4 ml ch2c=c-ch2nhz de TFA e deixou-se sob agitação à temperatura ambiente durante duas horas. Removeu-se o solvente sob pressão reduzida e misturou-se o resíduo com solução de carbonato de sódio e extraiu-se com EtOAc. Lavou-se o EtOAc com H20 e NaCl saturado. Secagem e remoção do solvente sob pressão reduzida deu
h_nchco-sta-nhch9ch(ch_)ch9ch„ ^«Ο-ΟΗ,,ΝΗΖ 3 3
Tomou-se este em 15 ml de DM? e adicionou-se 0,81 g (2,4 mmole) de ácido di-(1-naftilmetil)-acético e 0,32 g (2,4 mmole) de HOBT. Arrefeceu-se a solução em gelo e adicionou-se 0,49 g (2,4 mmole) de DCC e agitou-se a solução à temperatura ambiente de um dia para o outro. Filtrou-se a mis tura e diluiu-se o filtrado com o EtOAc e lavou-se com H^O, NaHCO^ saturado e NaCl saturado. Por secagem e remoção do sol vente sob pressão reduzida obteve-se o produto bruto que se cromatografou sobre sílica gel eluindo-se com EtOAc/hexano (1/1). Obteve-se 0,2 g de produto. Confirmou-se a estrutura por NMR e espectroscopia de massa.
^alculado para C^H^N^Og·0,330^0,, (PM 854,10): c, 73,57; h, 7.39; N, 6,56
Encontrado C, 73»θ4; H, 7,36; N, 6,71.
EXEMPLO 30 .,,.-=,,(1.,=,,,,-^.,.,,,=,,,=,,,,=..=,,
Arrefeceu-se a 0°C uma solução de 0,47 g (θ»7 mmol) de DNM-ORN-STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3 em 30 ml de CHgClg e adicionou-se 51 mg (0,7 mmol) de isotiocianato de metilo e deixou-se a solução sob agitação à temperatura ambiente de um dia para o outro. Removeu-se o solvente sob pressão reduzida e cromatografou-se o resíduo sobre sílica gel eluindo-se coe EtOAc. Transferiu-se o material para outro recipiente com a ajuda de CH2C12· Obteve-se 0,3 g de produto. Confirmou-se a estrutura por NMR e espectroscopia de massa.
Calculado para C^H^N^O^S· i, 33Cj|HgO2 · 0,25CH2C12 (PM 804,26): c, 68,05; H, 7,79; n, 8,71
Encontrado C, 67,71? Η, 7,8θ; N, 8,74.
EXEMPLO 31
Ο II
DNMA- O RN (C -NHCH^ ) - STA-NHCH^CH (CH^) C^CH^
Arrefeceu-se em gelo uma solução de 0,47 g (0,7 mmole) de DNMA-0RN-STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3 em 30 ml de CHgClg e adicionou-se 0,041 ml (0,7 mmole) de isocianato de metilo e deixou-se a solução sob agitação à temperatura ambiente de um dia para o outro. Removeu-se o solvente sob pres são reduzida e cromatografou-se o resíduo sobre sílica gel eluindo-se com EtOAc/MeOI-I (p/l). Obteve-se 0,3 g de produto. Confirmou-se a estrutura por NMR e espectroscopia de massa. Calculado para C^H^N^«C^OH (PM 769,99):
c, 70,19; H, 8,25; n, 9,10 Encontrado C, 69,79; H, 8,06; N, 9,44.
EXEMPLO 32
DNMA-LYS(C-NH2)-STA-NHCH2CH(CH )CH?CH3
Tratou-se uma solução de 0,3 g (0,4 mmole) de
DNMA-LYS-STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3 em 15 ml de dioxano com 0,03 ml de HOAc seguido por 30 mg (0,46 mmole) de NaOCN em 1 ml de
HgO. Aqueceu-se a solução a 45° ceu-se e fraccionou-se com EtOAc durante quatro horas, arrefee NaHC03 saturado.
Lavou-se o EtOAc com NaCl saturado, secou-se e removeu-se o solvente sob pressão reduzida obtendo-se o produto bruto que se cromatografou sobre sílica gel eluindo-se com EtOAc e em seguida com EtOAc/MeOH (9/1). Obteve-se 0,2 g de produto, ponto de fu são 134-137°· Confirmou-se a estrutura por NMR e espectroscopia de massa.
Calculado para C^H^N^ · CH^OH (PM 769,99):
C, 70,19; H, 8,25; N, 9,10
Encontrado C, 70,27; H, 8,23; N, 9,15·
EXEMPLO 33
DNMA-NHCHCO-STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3 ch2ch(oh)ch2oh
8,1 ml (0,63 mmole) de uma solução de tetróxido de ósmio a 2% em dioxano. Deixou-se a solução sob agitação à temperatura am biente durante três dias e tratou-se então com sulfureto de hidrogénio gasoso. Filtrou-se a mistura e removeu-se o solven te sob pressão reduzida. Cromatografou-se o resíduo sobre sílica gel eluindo-se com CHCl^/MeOH (97/3)· Tomou-se o material em CHCl^ e precipitou-se com hexano. Obteve-se 131 mg de produto na forma de um sólido branco. Confirmou-se a estrutura por NMR e espectroscopia de massa.
EXEMPLO 34
DNMA-NHCHCO- STA-NHCHOCH (CH„ )CH. CH,.
I 2 ' J' λ 3 co2ch3
Agitou-se durante seis horas a 25° uma solução de 1,80 g (mmole) de ácido di-(l-naftilmetil)-acético, CO2CH3 (5,55 mmole) de HOBT e 1,14 g (5,55 mmole) de DCC em 50 ml de
DMF. Filtrou-se então a mistura e removeu-se o solvente sob alto vácuo. Tomou-se o resíduo em EtOAc e lavou-se com ácido cítrico IN, NaCl saturado, NaHCO saturado e NaCl saturado
Após secagem evaporou-se o solvente sob pressão reduzida obtendo-se um vidro, 3,9θ g· Cromatografou-se o produto sobre sílica gel eluindo-se com EtOAc. Por combinação das fracções adequadas obteve-se um sólido, 2,18 g. Confirmou-se a estrutu ra por NMR, IV e espectroscopia de massa.
Calculado para
C,
Encontrado C, C41H51N3°6’O’33H2° ^PM 687.88):
71,595 H, 7,57! N, 6,11}H2O, 0,87
71,955 H, 7,61; N, 6,19; h2o, 1,00.
EXEMPLO 35
BOC-PHE-NHCHCO-STA-NHCI^CH(CH^)CH^CH
Ío2ch3
Arrefeceu-se a 0o uma solução de 4,37 g (16,5 mmole) de BOC-PHE, 5,92 g (16,5 mmole) de H-NCHC0-STA-NHCH | £ CO2CH3
CH(CH3)CH2CH3 e 2,29 g (17.0 mmole) de HOBT em 150 ml de DMF. Adicionou-se 3,50 g (17 mmole) de BICC e agitou-se a mistura a 4o de um dia para o outro. Filtrou-se -se o solvente sob alto vácuo. Tomou-se a mistura e removeuo resíduo em EtOAc, lavou-se com ácido cítrico IN, NaCl saturado, NaHC03 saturado e NaCl saturado. Após secagem evaporou-se a solução sob pressão reduzida obtendo-se um óleo que se cromatografou sobre sí lica gel eluindo-se com EtOAc. Combinação das fracções adequadas deu um sólido branco, 4,88 g. Confirmou-se a estrutura
por NMR e espectroscopia de massa.
Calculado para C^H^N^Og (PM 606,77):
C, 61,36; H, 8,315 N, 9,23
Encontrado C, 60,95; H, 8,23; N, 9,16.
EXEMPLO 36
DNMA-NHCHCO-STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3 conh(ch2)2
H
Arrefeceu-se a 0o uma solução de 0,96 g (1,44 mmole) de DNMA-NHCHCO-STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3, 0,2 g (1,48 mmo
Ó02h le) de HOBT e 0,30 G (1,48 mmole) de DCC em 20 ml de DMF. Adi cionou-se uma solução de 0,27 g (1,48 mmole) de histamina*2HC1 e 0,32 g (2,97 mmole) de em 10 ml de de um dia para o outro a 4o, filtrou-se a -se o solvente sob alto vácuo. Tomou-se o
DMF. Apos agitação mistura e removeuresíduo em EtOAc, filtrou-se, lavou-se com ácido cítrico IN, NaCl saturado, NaHCO^ saturado e NaCl saturado. Após secagem removeu-se o sol vente sob pressão reduzida e cromatografou-se o resíduo sobre sílica gel eluindo-se com um gradiente de 2 a 10% de MeOH em
CHCl^.
Combinação das fracções adequadas deu o produto sob forma de uma espuma, 0,89 g. Confirmou-se a estrutura por NMR e espectroscopia de massa.
Calculado para C^H^N^O, 25CHC13 (PM 790,83):
C, 68,72; H, 7,17; N, 10,62; 01, 3,36
Encontrado C, 68,39; H, 7,19; Ν, 10,60; Cl, 3,13.
EXEMPLO 37
DNMA-NHCHCO-STA-NHCHgCH(CH3)CH2CH3 CONH
Arrefeceu-se a -30° de 0,6 g ml de (Q88
MeOH até uma solução mmole) de DNMA-NHCHCO-STA-NHCH. CH(CH )CHOCH em | J
CO2CH3 e saturou-se com NH3 gasoso. Deixou-se aquecer a mistura à temperatura ambiente ao longo de três horas e removeu-se o
Λ solvente sob pressão reduzida. Suspendeu-se o resíduo em Et20. Filtrou-se e evaporou-se o solvente. Cromatografou-se o resíduo em sílica gel eluindo-se com CIICl3/MeOH (98/2). Combinaram-se as fracções adequadas para se obter um sólido, 0,35 g.
Confirmou-se a estrutura por NMR e espectroscopia de massa.
Calculado para Ο^θΗ^θΝ^Ο^*0,1250Η013 (PM 681,79):
C, 70,69; H, 7,41; N, 8,22; Cl, 1,95
Encontrado C, 70,75? H, 7,66; N, 8,27? Cl, 1,92.
EXEMPLO 38
DNMA-NHCHCO- STA-NHCHgCH (CH3 )CH2CH3 conhch3
Arrefeceu-se a -30° uma solução de 0, 6 g (0,88 mmole) de DNMA-NHCHCO-STA-NHCHgCH(CH^JCH^CH^ em 5 ml de MeOH
solvente em vácuo e cromatografou-se o resíduo sobre sílica
çoes apropriadas para se obter uma espuma branca, 0,50 g. Con firmou-se a estrutura por NMR e espectroscopia de massa.
Calculado para C^H^N^· 0,O8CHC13 (PM 6?O,44)í
C, 71,46; Η, 7»6θ; N, 8,11; Cl, 1,23
Encontrado C, 71,09; Η, 7,7-»; N, 8,15; Cl, 1,10.
EXEMPLO 39
DNMA-NHCHC 0- STA-NHCHgCH (CH3 ) CHgC^
Íon(ch3)2
Saturou-se com dimetilamina líquida uma solução de 0,92 g (1,35 mmole) de DNMA-NHCHCO-STA-NHCH2CH(CH3CH2-
veu-se o solvente sob pressão reduzida. Cromatografou-se o re síduo sobre sílica gel eluindo-se com EtOAc. Combinaram-se as fracçoes apropriadas obtendo-se um sólido, 0,41 g. Confirmou-se a estrutura por NMR e espectroscopia de massa.
Calculado para O^H^N^O,óHgO (PM 705,73):
C, 71,48; H, 7,88; N, 7,94; Η,,ο, 1,53 Encontrado C, 71,17; H, 7,78; N, 7,73; HgO, 1,18.
EXEMPLO 40 dnma-nhchco-nhch2ch(ch3)ch2ch3
NH
Tratou-se uma solução de 0,55 g (1,62 mmole) de ácido di-(1-naftilmetil)-acético, 0,69 g (1,62 mmole) de
H2NCHCO-STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3 e 0,23 g (1,7 mmole) de HOBT
H em 20 ml de DMF com 0,35 g (1,7 mmole) de DCC e agitou-se à temperatura ambiente de um dia para o outro. Filtrou-se a mis tura e removeu-se o DMF sob alto vácuo. Tomou-se o resíduo em EtOAc e lavou-se com ácido cítrico IN, NaCl saturado, NaHCO^ saturado e NaCl saturado. Secagem e remoção do solvente sob pressão reduzida deu o produto bruto que se cromatografou sobre sílica gel eluindo-se com EtOAc. Por combinação das fracções adequadas obteve-se um material que se tomou em CHgClg e se precipitou por adição de Et20. ^ec°lheu-se o sólido para dar 0,28 g de produto. Confirmou-se a estrutura por NMR e espectroscopia de massa.
Calculado para C^^^O^ (PM 753,95):
C, 74,87; H, 7,35; N, 9,29 Encontrado C, 74,47; H, 7,35; N, 9,01.
EXEMPLO 41
DNMA-LYS(TOS)-STA-NHCH2CH(CH^)CH2CH
Tratou-se uma solução de 0,44 g (1,3 mmole)de ácido di-(1-naftilmetil)-acético, 0,63 g (1,22 mmole) de LYS(TOS)-STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3 e 0,185 g (1,37 mmole) de HOBT em 35 ml de DMF com 0,28 g (1,37 mmole) de DCC e agitou-se a solução á temperatura ambiente de um dia para o outro. Filtrou-se a mistura e removeu-se o solvente sob alto vácuo. Removeu-se o resíduo em EtOAc e lavou-se com ácido cítrico IN ,
NaCl saturado, NaHCO^ evaporou-se a solução saturado e NaCl saturado. Após secagem, sob pressão reduzida e cromatografou-se sobre sílica gel eluindo-se com um gradiente de 0 a 5% de MeOH em CHCly
Combinação das fracções adequadas deu o produto na forma de uma espuma branca, 0,99 g· Confirmou-se a estrutura por NMR e espectroscopia de massa.
Calculado para C^H^N^O, O7CHC13 (PM 857,51):
c, 70,13; H, 7,53; N, 6,53; Cl, 0,87
Encontrado C, 69,78; H, 7,49; N, 6,4o; Cl, 0,90.
EXEMPLO 42 dnma-lys(co2ch3)-sta-nhch2ch(ch3)ch2ch3
Agitou-se à temperatura ambiente de um dia para o outro uma solução de 0,124 g (0,7 mmole) de N-metiloxi carbonilsuccinimida e 0,50 g (0,72 mmole) de DNMA-LYS-STA-NHCH CH(CH )CH CH em 2 ml de DMF: Removeu-se o solvente sob alto vácuo e tomou-se o resíduo em EtOAc. Lavou-se a solução com ácido cítrico IN, NaCl saturado, NaHC0o saturado e NaCl saturado. Após secagem removeu-se o solvente sob pressão redu zida e triturou-se o resíduo com EtgO ο1ϊΐθηί3ο δθ ° produto bruto na forma de um sólido. Cromatografou-se sobre sílica eluindo-se com um gradiente de 0 a 1% de MeOH em CHC13. Tomou um excesso de
-se o produto bruto em CHC13 e adicionou-se a
EtgO obtendo-se um sólido que se recolheu e secou. Obteve-se 0,24 g de produto na forma de um sólido branco. Confirmou-se a estrutura por NMR e espectroscopia de massa.
Calculado para C^H^N^ (PM 753,00):
c, 71,77; H, 8,03; n, 7,44 Encontrado C, 71,57; H, 8,07; N, 7,44.
EXEMPLO 43
IVA-PHE-NHCHCO-STA-NHCH2CH(CH3)CHgCB^
CH2CN
Arrefeceu-se a -5° uma solução de 0,92 g (3,7 mmole) de IVA-PHE e 0,53 g (3,89 mmole) de HOBT em 4 ml de DMF e 3θ ml de CH2C12 e adicionou-se 0,8 g (3,89 mmole) deDCC seguido por 1,26 g (3,7 mmole) de H2N-CHC0-STA-NHCH2CH(CH3)ÒH2CN
CH2CH3» Agitou-se a solução à temperatura ambiente de um dia para o outro, filtrou-se e removeu-se o solvente sob pressão reduzida. Tomou-se o resíduo em EtOAc e lavou-se com ácido cí tricô IN, NaCl saturado, NaHC03 saturado e NaCl saturado. Se- 74 -
cou-se a solução, reduziu-se o volume sob pressão reduzida e diluiu-se a solução com Et^O. Formou-se um precipitado que se recolheu dando o produto bruto. Cromatografou-se este sobre sílica gel eluindo-se com CHCl^/MeOH (98/2). Tomou-se o produ to em CHCl^ e precipitou-se por adição de EtgO. Obteve-se 1,04 g de produto. Confirmou-se a estrutura por NMR e espectroscopia de massa.
Calculado para (PM 571,7^):
C, 65,12; H, 8,64; N, 12,25
Encontrado C, 65,00; Η, 8,4θ; N, 12,21.
EXEMPLO 44
BOC-PHE-NHCHCO- STA-NHCHgCH (CH^ ) CHgCH^ COg-t-Bu
A uma solução de 2,11 g (5 mmole) de BOC-PHE-NHCHC02H e 1,12 g (5,0 mmole) de STA-NHCHgCHÍCH^CHgCH^ em COg-t-Bu
155 ml de CH2C12 le) de HOBT em 8 cionou-se 1,05 g durante a noite, adicionou-se uma solução de 0,69 g (5»1 mmoml de DMF. Arrefeceu-se a mistura a 0° e adi (5,1 mmole) de DCC. Após aquecimento a 25° filtrou-se a mistura e removeu-se o solvente sob pressão reduzida. Tomou-se o resíduo em EtOAc e lavou-se com ácido cítrico IN, NaCl saturado, NaHCO^ saturado e NaCl saturado. Secagem e remoção do solvente sob pressão reduzida deu o produto bruto que se cromatografou sobre sílica gel elu indo-se com CHCl^/EtOAc (50/50). Combinação das fracções adequadas deu 3,34 do produto na forma de uma espuma branca. Con firmou-se a estrutura por NMR e espectroscopia de massa.
Calculado para C^H^N^Og·0, óHgO (PM 659,65):
C, 61,91; H, 8,74; N, 8,49; H20, 1,64 Encontrado C, 61,74; H, 8,56; N, 8,54; H20, 1,82.
EXEMPLO 45
DNMA-NHCHCO-STA-NHCHgCH (CH^JCH^H ^°2Et
A uma solução de 2,29 g (4,88 mmole) de DNMAe STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3 em solução de 0,68 g (5,02 mmoarrefecimento a 0° adicionou agitou-se a mistura à tempe-NHCHCO H e 1,09 g (k,88 mmole) d
C02Et ml de CE^Clg adicionou-se uma le) de HOBT em 3 ml de DMF. Após -se 1,04 g (5,02 mmole) de DCC e ratura ambiente de um dia para o outro. Filtrou-se a mistura e removeu-se o solvente sob pressão reduzida. Tomou-se o resí duo em EtgO e lavou-se com ácido cítrico IN, NaCl saturado, NaHC03 saturado e NaCl saturado. Após secagem removeu-se o solvente sob pressão reduzida e cromatografou-se o resíduo so bre sílica gel eluindo-se com EtOAc/hexano (50/50). Combina ção das fracções adequadas deu um sólido, 2,33 g· Confirmou-se a estrutura por NMR e
Calculado para
C, 71,75; H,
Encontrado C, 71,65; H, espectroscopia de massa.
0,4H20 (M 703,11):
7,71; N, 5,98; Η,,ο, 1,02
7,63; N, 5,64; H2o, 0,93.
mmo 1 e) de
H2NCHCO-STACO2CH3
-NHCH2CH(CH3)CH2CH3 em 6$ ml de CH2CL2 adicionou-se uma solução de 0,46 g (3,4 mmole) de HOBT em 8 ml de DMF. Arrefeceu-se a mistura a 0° e adicionou-se 0,7 g (3,4 mmole) de DCC. Após agitação de um dia para o outro à temperatura ambiente filtrou-se a mistura e removeu-se o solvente sob pressão redu zida. Tomou-se o resíduo em EtOAc e lavou-se com ácido cítrico IN, NaCl saturado secagem removeu-se o
NaHCO^ saturado e NaCl saturado.
Apo s solvente sob pressão reduzida e cromatografou-se o resíduo sobre sílica gel eluindo-se com EtOAc/ CHCl^/MeOH (45/45/10). Por combinação das fracções adequadas obteve-se uma espuma branca, 1,18 g. Confirmou-se a estrutura por NMR e espectroscopia de massa.
Calculado para C^H^N^Og·1,0^0· 0, O625CHC13 (PM 695,28):
C, 62,30; H, 7,85; N, 8,07; Cl, 0,96; h2o,2,59 Encontrado C, 62,64; H, 7,86; N, 8,16; Cl, 1,03; HgO, 2,76
EXEMPLO 47
DNMA-NHCHC 0- STA-NHCH_CH (CHa ) CH _CH_ | 2 J 2 J (ch2)5-conhch3
Arrefeceu-se em gelo uma solução de 0,4 g (1,0 mmole) de H2NÇHCO-STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3 e 0,32 g (1,0 (ch2)5-conhch3 mmole) de ácido di-(l-naftilmetil)-acético em 20 ml de CHgCl^ e adicionou-se 203 mg (2,0 mmole) de Et3N seguida por 280 mg (1,1 mmole) de cloreto bis(2-0χο-3-οxazolidinil)-fosfénico.
Após se agitar à temperatura ambiente de um dia para outro, lavou-se a mistura com HC1 IN, NaHC0o saturado e NaCl saturaJ do. Por secagem e remoção do solvente sob pressão reduzida obteve-se o produto bruto que se cromatografou sobre sílica gel eluindo-se com EtOAc e em seguida com EtOAc/EtOH (1/1). Obteve-se 0,46 g de produto, ponto de fusão 127-131°·
EXEMPLO 48
DNMA-NHCH(CH2CH2CH2CH=CH2)CO-STA-LEU-NHCH2Ph (ISÓMERO a)
A uma solução de 4,9 g (10,4 mmole) de H2NCH(CH2CH2CH2CH=CH2)CO-STA-LEU-NHCH2Ph e 3,54 g (10,4 mmole) de ácido di-(1-naftilmetil)-acético em 100 ml de DMF adicionou-se 1,47 g (10,9 mmole) de HOBT seguido por 2,25 g (10,9 mmole) de DCC. Agitou-se a mistura durante quinze horas à tem
peratura ambiente e separou-se a ureia por filtração. Removeu -se o DMF sob pressão reduzida e tomou-se o resíduo em EtOAc.
Lavou-se a solução orgânica com NaHCO^ saturado, secou-se e concentrou-se sob pressão reduzida para se obter o produto bruto por cromatografia sobre sílica gel eluindo-se com um gradiente 0-2% de MeOH em CHCl^ obteve-se 1,8 g do produto < sejado. Confirmou-se a estrutura por NMR e espectroscopia <
d e de massa.
Calculado para C^H^N^*0,25CHC13 (PM 854,91): C, 73,40; H, 7,58; N, 6,55
Encontrado C, 73,09; H, 7,72; N, 6,79.
EXEMPLO 49
DNMA-NHCH(CH CH9CH CH=CH9)CO-STA-LEU-NHCH Ph (ISÔMERO B)
Continuando-se a eluição da cromatografia em coluna descrita no Exemplo 48 obteve-se 2,2 g de Isómero B, epimérico no carbono alfa do 5-pentenil-aminoácido. Confirmou
-se a estrutura por espectroscopia de NMR.
Calculado para C^H^N^O^
C, 75,69; H,
Encontrado C, 75,52; H, (PM 825,06);
7,82; N, 6,79
8,04; N, 6,75
EXEMPLO 50 ( /Q\ \
DNMA-NHCH (CH^H^C^CH-C^ ) C0- STA-LEU-NHCH^Ph (ISÔMERO A)
A uma solução de 1,55 g (1,88 mmole) de DNMA-NHCH(CH2CH2CH2CH=CH2)CO-STA-LEU-NHCH2Ph (lso'mero A) em 20 ml de CH2C12 adicionou-se 0,486 g (2,82 mmole) de ácido m-clorobenzóico. Agitou-se a solução durante doze horas, diluiu-se com EtOAc, lavou-se com NaNC03 saturado, secou-se e concentrou -se sob pressão reduzida e obteve-se matografia sobre sílica gel eluiu-se o produto bruto. Por crocom um gradiente de 0-2% de MeOH em CHC13 obteve-se trutura por espectroscopia o produto de NMR.
puro. Confirmou-se a es78 Calculado para
C,
Encontrado C, C52H64N4°6
74,25; H,
74,07; H,
(PM 841,oó)í
7,67; N, 6,66
7,78; N, 6,45EXEMPLO 51
DNMA-NHCH(CH2CH2CH2CH-CH2)CO-STA-LEU-NHCH2Ph (iSÓMERO B)
De maneira análoga à do Exemplo 5θ, 2,2 g (2,67 mmole) de DNMA-NHCH(CH2CH£CH2CH=CH2)C0-STA-LEU-NHCH2Ph (isomero B) deu 1,5 g de produto. Confirmou-se a estrutura por
espectro scopia de NMR
Calculado para C52H64N 4°6 (PM 841,06):
c, 74,25; H. 7,67; N, 6,66
Encontrado C, 74,21; H, 7,57; N, 6,62.
EXEMPLO 52
S |l
CHCO-LYS(C-NHCH„)-STA-NHCH_CH(CH_)CH_CH„ / J 2 J 4 J
O ^N-C=O \_y
Seguindo-se o procedimento do Exemplo 2, mas usando-se
ÇHC O-LYS-STA-NHCH2CH(CH^)CHgCH^
Obteve-se o composto do título
EXEMPLO 53
NH
CHCO-LYS(C-NHN02)-STA-NHCHgCH(CH^)CHgCH^ «ο
Seguindo-se o procedimento do Exemplo 9, mas
\_/ obteve-se o composto do título.
EXEMPLO 54
NCN
CHC O-LYS (í-NHCH„ ) - STA-NHCH-CH (CH_ ) CH_CH _ / J Λ J 4 J
O N-C=O
Seguindo-se o procedimento do Exemplo 13, mas
\___f obteve-se o composto do título.
• EXEMPLO 55
DNMA-NHCHCO- STA-NHCHCH (CH„) CH _CH„
2 J 2 3 àO2CH(CH3)2
Seguindo-se o procedimento do Exemplo 45» mas substituindo-se DNMA-NHCHCOgH por DNMA-NHCHCOgH obteveCO2Et C02CH(CH )2
-se o composto do título na forma de uma espuma sólida. Confirmou-se a estrutura por NMR e espectroscopia de massa. Calculado para C43H55N306‘0,25H20.0,03CHC13 (PM 718,02):
C, 71,98; H, 7,80; N, 5,85; HgO, 3,63; Cl, 0,44 Encontrado C, 72,10; H, 7,66; N, 5,66; HgO, 0,69; Cl, 0,57·
INTERMEDIÁRIOS PARA 0 EXEMPLO 1
BOC - PHE-ARGr (NO2 ) - 0CH3
Arrefeceu-se em gelo uma solução de 3,7 g de ARGr(NO2)-OCH3*HCl em 50 ml de DMF e tratou-se com 1,85 ml de Et3N. A esta adicionou-se sucessivamente 1,85 g de HOBT, 3,64 g de BOC-PHE e em seguida 2,83 g de DCC. Manteve-se a solução a 0° durante uma hora e depois à temperatura ambiente durante cinco dias. Removeu-se o solvente sob pressão reduzida e tomou-se o resíduo em EtOAc. Separaram-se os insolúveis por fil 3» solução secagem sotração e lavou-se o filtrado com solução de Na2C0 de ácido cítrico e em seguida com salmoura. Após bre MgSO^ e remoção do solvente sob pressão reduzida cromatografou-se o resíduo sobre sílica gel eluindo-se com CH2C12/ MeOH (97s3). Combinaram-se as fracções apropriadas e obteve-se 4,79 g (72,7%) 80 produto na forma de uma espuma branca.
boc-phe-arg(no2)
Tratou-se uma solução de 3,92 g de BOC-PHE-ARG(NO2)-OCH3 em 50 ml de MeOH com 9 ml de solução de NaOH IN e agitou-se à temperatura ambiente durante uma hora. Removeu-se o solvente sob pressão reduzida e tomou-se o resíduo em HgO e lavou-se com EtOAc. Acidificou-se a fase aquosa com ácido cítrico e extraiu-se com EtOAc. Lavou-se o EtOAc com salmoura e secou-se sobre MgSO^. Após filtração e remoção do solvente sob pressão reduzida obteve-se 3,66 g (96$) de produ to na forma de uma espuma branca.
INTERMEDIÁRIOS PARA OS EXEMPLOS 2, 3 e 5-13
B OC -LYS ( Z ) - STA-NHCHgCH (CH^ ) C^C
Misturaram-se em dimetilformamida (15 ml) BOC-LYS(z) (1,98 g), STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3«HC1 (1,5 g), hidroxi benzotriazole (0,72 g) e trietilamina (0,74 ml) e arrefeceu-se a 0°. Adicionou-se diciclohexilcarbodiimida (1,1 g) e dei xou-se a mistura aquecer lentamente a 25° e em seguida agitou -se durante 72 horas. Filtrou-se a mistura e extraiu-se o fil trado com EtOAc e água. Lavou-se a fase orgânica com água, so lução de bicarbonato de sódio e salmoura. Secou-se a fase orgânica sobre sulfato de sódio, filtrou-se e evaporou-se.EIuiu -se o resíduo de sílica gel com EtOAc/hexano 1/1 obtendo-se 2,7 g de produto.
LYS ( Z ) - STA- NHCH2C H (CH3 ) CH2CH3
Dissolveu-se BOC-LYS(Z)-STA-NHCH2CH(CH^CHgC^ (2,7 g) em diclorometano (30 ml) e adicionou-se ácido trifluo roacético (4 ml). Agitou-se a mistura durante duas horas a 25°· Evaporou-se o solvente e extraiu-se o resíduo com EtOAc e solução de carbonato de sódio. Lavou-se a fase orgânica com salmoura, secou-se sobre sulfato de sódio, filtrou-se e evapo rou-se para se obter 2,1 g de produto.
DNMA-LYS(z)-STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3
Di s so1v eu-s e LYS(Ζ)-STA-NHCHgCH(CH3)CH^C^ (2,1 g), ácido di-(1-naftilmetil)-acético (1,51 g) e hidro^j.benzotriazole (0,6 g) em dimetilformamida (20 ml) e arrefeceu -se a 0°. Adicionou-se diciclohexilcarbodiimida (0,92 g) e • deixou-se a mistura aquecer lentamente até 25° e agitou-se du
rante 24 horas. Filtrou-se a mistura e extraiu-se o filtrado com acetato de etilo e água. Lavou-se a fase orgânica com água, bicarbonato de sódio e salmoura. Secou-se a fase orgâni ca sobre sulfato de sódio, secou-se e evaporou-se. Recristali zou-se o produto bruto de clorofórmio obtendo-se 1,95 g de produto. Purificou-se o resíduo das águas mães por cromatogra fia sobre sílica gel eluindo-se com CHCl^/EtOAc (3íl). Combinação das fracções adequadas originou um adicional de 0,5 g de produto.
DNMA-LYS-STA-NHCI^CH (CH^ ) CH2CH3
Di s so1v eu-s e DNMA-LYS(Z)-STA-NHCHgCH(CH^)CH£CH^ (1,95 g) em metanol (30 ml) e adicionou-se carvão de palá dio a 20% (0,2 g). Passou-se uma corrente de hidrogénio através do frasco e agitou-se durante seis horas. Fez-se passar uma corrente de azoto através do frasco e filtrou-se a mistura. Evaporou-se o solvente e obteve-se 1,6 g de produto.
INTERMEDIÁRIOS PARA O EXEMPLO 4
Z-0RN(PHT-STA-LEU-NHCH2Ph
Dissolveu-se Z-ORN(PHT) (Pat. Francesa 1,430, 14o) (1,6o g, 4,03 mmole) e ΗΟΒΤ·Η20 (0,544 g, 4,23 mmole) em 10 ml de DMF, diluiu-se a 90 ml com CH^Clg e arrefeceu-se a -5°. Introduziu-se DCC (0,87 g, 4,23 mmole) como solução em arrefeagita20 ml de CH Cl_ arrefecido, seguida por uma suspensão cida de STA-LEU-NHCHgPh^HCl (1,67 g, 4,03 mmole) numa mistura de 40 ml de CH2C12 e Et^N (0,56 ml, 4,23 mmole). Após ção durante 16 horas a 25°, filtrou-se a mistura, removeram
-se os sólidos e resuspendeu-se em EtOAc. Lavou-se a suspensão com ácido cítrico IN, salmoura e salmoura. Removeu-se a suspensão , solução saturada de NaHCO^ obtendo-se uma pasta, triturou-se com H20, filtrou-se e dissolveu-se em THF. Secou-se a solução de THF sobre MgSO^, filtrou-se e removeu-se um sóli do, 3,14 g. Recristalização de THF/EtgO deu 2,8 g de produto
- 83 na forma de um sólido. Confirmou-se a estrutura por análise de IV, NMR e espectroscopia de massa.
ORN(PHT)-STA-LEU-NHCH2Ph
Dissolveu-se Z-ORN(pHT)-STA-LEU-NHCH2Ph (2,5 g, 3,4-3 mmole) em 60 ml de HOAc. Adicionou-se catalizador de carvão de paládio a vinte por cento (0,10g)e gaseificou-se a mis tura com hidrogénio gasoso de um dia para o outro. Filtrou-se a mistura, retiraram-se os sólidos e dissolveu-se o resíduo em EtOAc. Lavou-se a solução com NaOH a 5% θ em seguida com salmoura. Secou-se a solução sobre MgSO^, filtrou-se e remove ram-se os sólidos obtendo-se uma espuma, 2,03 g. Cromatografou-se a espuma sobre sílica gel eluindo-se com um gradiente de 0 a 5% de MeOH em CHCl^, obtendo-se uma espuma branca, 1,52 g. Confirmou-se a estrutura por análise de NMR, IV e espectroscopia de massa.
INTERMEDIÁRIOS PARA 0 EXEMPLO 8 boc-cysta-nhch2ch(ch^)ch2ch3
Arrefeceu-se em gelo uma solução de 6,78 g (21,5 mmole) de BOC-CYSTA e 2,9 g (21,5 mmole) de HOBT em 100 ml de DMF e adicionou-se 4,48 g (21,5 mmole) de DCC em 10 ml de DMF, seguido por 1,88 g (21,5 mmole) de S-(-)-l-amino-2-me tilbutano. Manteve-se a 0o durante meia hora e depois agitou-se à temperatura ambiente de um dia para o outro. Filtrou-se a mistura e removeu-se o solvente sob alto vácuo. Tomou-se o resíduo em EtOAc e lavou-se com HC1 1Ν, NaHCO^ saturado e NaCl saturado. Secagem e remoção do solvente sob nressão redu zida deu o produto bruto. Cromatografia sobre sílica gel eluin do-se com CHCl^/MeOH (99/1) deu 8,2 g do produto sob a forma de um óleo. Confirmou-se a estrutura por espectroscopia de massa.
CYSTA-NHCH CH(CHO)CH CH *HC1
J 2 J ^aturou-se uma solução de 8,2 g (21,3 mmole) de BOC-CYSTA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3, em 85 ml de 0Η 2θ12» com HC1 gasoso, agitou-se durante uma hora, em seguida ressaturou-se com HC1 gasoso e deixou-se sob agitação durante mais três horas. Diluiu-se a solução com EtgO e recolheu-se e secou-se o precipitado sólido. Obteve-se 5,47 g de produto na forma de um sólido branco. Confirmou-se a estrutura por espectroscopia de massa.
BOC -LYS ( Z ) -CYSTA-NHCH2CH (CH^ ) Cl^CH^
Arrefeceu-se em gelo uma solução de 1,7 g(4,ó mmole) de BOC-LYS(z), 1,5 g (4,7 mmole) de CYSTA-NHCH^HÍCH^) -
mmole) de DCC. Deixou-se a mistura sob agitação à temperatura ambiente durante dois dias. Filtrou-se a mistura e diluiu-se
saturado e NaCl saturado. Secagem e remoção do solvente sob pressão reduzida deu o produto bruto que se purificou por cro matografia sobre sílica gel eluindo-se com EtOAc/hexano (1/1) e em seguida com EtOAc/hexano (3/1). Obteve-se 2,6 g de produ to com pureza suficiente para ser usado na reacção seguinte.
DNMA-LYS ( Z ) -C YSTA-NHCH2CH (CH^ ) CI^CH^
Tratou-se uma solução de 2,6 g (3,3 mmole) de BOC-LYS(z)-CYSTA-NHCH.>CH(CH3)CH2CH3 em 20 ml de CH2C12 com 5 ml de TF A e agitou-se a temperatura ambiente durante cindo ho ras. Removeu-se o solvente sob pressão reduzida e tomou-se o resíduo em EtOAc e lavou-se com NaHCO^ saturado e depois com NaCl saturado. Por secagem e remoção do solvente sob pressão reduzida deu LYS(z)-CYSTA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3 bruto.
Tomou-se este em 20 ml de DMF e adicionou-se
1,12 g (3,3 mmole) de ácido di-(1-naftilmetil)-acético e 0,45 . g (3,3 mmole) de HOBT. Arrefeceu-se a solução em gelo e adi85 -
cionou-se 0,68 g (3,3 mmole) de DCC e deixou-se a solução aque cer até à temperatura ambiente durante a noite. Filtrou-se a mistura e diluiu-se o filtrado com EtOAc. Lavou-se a solução com H„0, NaHCO_ saturado e NaCl saturado. Por secagem e remoΛ ·✓ ção do solvente sob pressão reduzida obteve-se o material bru to que se poderia purificar por recristalização de EtOAc. Obteve-se 2,8 g de produto. Confirmou-se a estrutura por espectro sco pia de NMR, dnma-lys-cysta-nhch2ch(ch3)ch2ch3
Tratou-se uma solução de 2,8 g de DMA-LYS(z)-CYSTA-NHCH2CH(CH3)CH2CH em 30 ml de MeOH com 0,2 g de Pd/C a 20% e agitou-se sob uma atmosfera de hidrogénio durante seis horas.
Filtrou-se a mistura, evaporou-se o solvente sob pressão reduzida, obtendo-se 0,2 g de produto. Confirmou-se a estrutura por NMR e espectrometria de massa.
INTERMEDIÁRIOS PARA 0 EXEMPLO 14
Tratou-se uma solução de 1,7 g (6,5 mmole) de ^-BOC-LYS-OCH^ em 30 ml de HOAc com 0,86 g (6,5 mmole) de 2,5-dimetoxifurano e aqueceu-se a refluxo enquanto se deixava destilar 15 ml de HOAc. 0 que remanesceu de HOAc removeu-se sob pressão reduzida. Tomou-se o resíduo em EtOAc e lavou-se com NaHCO^ remoção do saturado e em seguida NaCl saturado. Por secagem e solvente sob pressão reduzida obteve-se o produto bruto que se purificou por cromatografia sobre sílica gel eluin do-se com hexano/EtOAc (4/1). Obteve-se 0,9 g de produto. Con firmou-se a estrutura por espectroscopia de NMR.
Amfeceu-se a -15° uma solução de 0, 9 g (2,9
BOC-NHCHCOgH
mmole) de BOC-NHCHCOgCH^ em 15 ml de dioxano e adicionou-se (θΗ2)4-Ν
0,12 g (3,0 mmole) de NaOH em 10 ml de HgO e deixou-se a solu ção sob agitação à temperatura ambiente durante duas horas.
Acidificou-se a solução com ácido cítrico e extraiu-se com
EtOAc. Lavou-se o EtOAc com HgO e em seguida com NaCl saturado. Por secagem e remoção do solvente sob pressão reduzida ob teve-se 0,75 g de produto com pureza suficiente para uso no passo seguinte. Confirmou-se a estrutura por especrto scopia de NMR.
BOC-NHCHCO-STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3 (CH2)k-N 2 \>
arrefeceu-se em gelo uma solução de 0,75 g (2,5 mmole) de BOC-NHCHCOgH, 0,34 g (2,5 mmole) de HOBT e 0,71
I .
(ch2)4-n^ g (2,5 mmole) de STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3 *HC1 em 15 ml de DMF e adicionou-se 0,35 ml (2,5 mmole) de Et3N, seguida por 0,52 g (2,5 mmole) de DCC. Removeu-se o arrefecimento e deixou-se a solução sob agitação de um dia para o outro. Filtrou-se a mistura e diluiu-se o filtrado com EtOAc e lavou-se com HgO, NaHC03 saturado e NaCl saturado. Secagem e remoção do solvente sob pressão reduzida deu o produto bruto que se cromatogra fou sobre sílica gel eluindo-se com EtOAc/hexano (1/1). Obteve-se 0,8 g de produto. Confirmou-se a estrutura por espectros
copla de NMR
HgNCHCO-STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3
Tratou-se uma solução de BOC-NHCHCO-STA-NHCHgI (0¾)^
CH(CH3)CH2CH3 em 25 ml car turva. Agitou-se a oito horas. Removeu-se turou-se o resíduo com de MeOH com HC1 a 10% até a solução fi mistura à temperatura ambiente durante o solvente sob pressão reduzida e missolução de carbonato de sódio e extraiu
-se com EtOAc. Lavou-se a solução com NaCl saturado, secou-se e removeu-se o solvente sob pressão reduzida obtendo-se 0,5 g de produto de pureza suficiente para uso no passo seguinte. Confirmou-se a estrutura por espectroscopia de NMR.
INTERMEDIÁRIOS PARA 0 EXEMPLO 15
BOC-NHCHCO H
tratou-se uma solução de 1,2 g (-5,2 mmole) de OÍ-BOC-ORN em 30 ml de HOAc com 0,8 g (6,1 mmole) de 2,5-dimetoxifurano e aqueceu-se a refluxo removendo-se 15 ml de HOAc por destilição. Removeu-se o HOAc remanescente sob pressão re duzida. Tomou-se o resíduo em NaOH dlluido, acidificou-se com ácido cítrico IN e extraiu-se com CHCl^. Secou-se o CHCl^ e removeu-se o solvente sob pressão reduzida obtendo-se o produ to bruto que se purificou tomando-se em EtOAc e filtrando-se através de uma camada de sílica gel. Por remoção do solvente sob pressão reduzida obteve-se 0,7 g de produto na forma de um óleo amarelo. Confirmou-se a estrutura por espectroscopia
de NMR
B OC -NHCHC O- STA-NHCH2CH (CH^ ) CHgCH
Arrefeceu-se em gelo uma solução (1,9 mmole) de B0C-NHCHC09H, 0,54 g (1,5 mmole) I />
(ch2)3-n de de
0,15 g STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3 e 0,25 g (1,9 mmole) de HOBT em 15 ml de DMF e adicionou-se 0,27 ml (1,9 mmole) de Ei^N seguida por 0,4 g (1,9 mmole) de DCC. Deixou-se aquecer a solução à temperatura ambiente e agitou-se de um dia para o outro. Filtrou-se a mis tura e diluiu-se o filtrado com EtOAc e lavou-se com HgO,
NaHC03 saturado e NaCl saturado. Secagem e remoção do solven te sob pressão reduzida deu o produto bruto que se cromatogra fou sobre sílica gel eluindo-se com EtOAc/hexano (1/1), Obteve-se 0,7ó g de produto. Ponto de fusão 136-139°. Confirmou-se a estrutura por espectroscopia de NMR.
Tratou-se uma solução de 0,76 g (1,5 mmole) de
BOC-NHÇHCO-STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3 em 20 ml de MeOH com 15 ml
de HC1 a 10% e agitou-se à temperatura ambiente durante três horas. Removeu-se o solvente sob pressão reduzida e misturou-se o resíduo com NaHCO3 saturado e extraiu-se com EtOAc. Secagem e remoção do solvente sob pressão reduzida deu 0,61 g de produto com pureza suficiente para uso na reacção seguinte. Confirmou-se a estrutura por espectroscopia de NMR.
INTERMEDIÁRIOS PARA 0 EXEMPLO 16
BOC-LYS(Z)-STA-LEU-NHCHgPh
Arrefeceu-se em gelo uma solução de 4,0 g (10,5 mmole) de BOC-LYS(z), 4,35 g (10,5 mmole) de STA-LEU-NHCHgPh*HC1, e 1,42 g (10,5 mmole) de HOBT em 30 ml de DMF e adicionou-se 1,46 ml (10,5 mmole) de Et^N seguida por 2,2 g (10,7 mmole) de DCC. Agitou-se a solução à temperatura ambien te durante três dias. Filtrou-se a mistura e diluiu-se o filtrado com EtOAc e lavou-se com H_0, NaHC0o saturado e NaCl sa Z J
I turado. Secagem e remoção do solvente sob pressão reduzida deu o produto bruto que se purificou por cromatografia sobre sílica gel eluindo com EtOAc/hexano (1/1) e depois com EtOAc. Obteve-se 6,6 g de produto. Confirmou-se a estrutura por espe ctroscopia de NMR.
LY S ( Z ) - STA- LEU-NHCHg Ph
Tratou-se uma solução de 6,6 g (8,9 mmole) de BOC-LYS(z)-STA-LEU-NHCH2Ph em 100 ml de-CH Cl9 com 15 ml de TFA e agitou-se à temperatura ambiente durante duas horas. Re moveu-se o solvente sob pressão reduzida e misturou-se o resí duo com solução de carbonato de sódio e extraiu-se com EtOAc. | Lavou-se o EtOAc com NaCl saturado, secou-se e removeu-se o solvente sob pressão reduzida obtendo-se 5,6 g de produto de pureza suficiente para se usar na reacção seguinte
INTERMEDIÁRIO PARA OS EXEMPLOS 17-22
DNMA-LYS-STA-LEU-NHCH2Ph
Tratou-se uma solução de 2,0 g (2,1 mmole) de DNMA-LYS(Z)-STA-LEU-NHCH Ph em 30 ml de MeOH com 0,2 g de car d vão de paládio a 20$ e agitou-se sob atmosfera de hidrogénio durante cinco horas. Filtrou-se a mistura e removeu-se o solvente sob pressão reduzida obtendo-se 1,8 g de produto sufi, cientemente puro para uso nas reacções seguintes.
INTERMEDIÁRIOS PARA O EXEMPLO 20 ch3so3(ch2)5-nhz
Arrefeceu-se a -20° uma solução de 4,0 g (L6,9 mmole) de HO-(CHg) ^-NHZ em 70 ml de CHC13 e adicionou-se 2,35 ml (16,9 mmole) de Et3N e em seguida adicionou-se gota a gota 1,3 ml (16,9 mmole) de cloreto de metanosulfenilo. Agitou-se a solução a -20° durante duas horas, em seguida lavou-se com
NaHC03 solvent saturado e NaCl saturado. Após secagem e remoção do e sob pressão reduzida obteve-se 5,6 g de produto bruto, suficientemente puro para uso na reacção seguinte.
BOC-NHC(CO Et) f W (CH2)5-NHZ
Removeu-se o óleo a 0,85 g (17,7 mmole) de NaH (a 50% em óleo mineral) e suspendeu-se em 20 ml de DMSO. A isto adicionou-se 4,8 g (17,4 mmole) de BOC-NHCH(CO2Et)g a pouco e pouco e agitou-se a suspensão até cessar a libertação de hidrogénio. Tratou-se então com 5,6 g (17,8 mmole) de CH_SO„-(CH ) -NHZ e 2,0 g de Kl e agitou-se à temperatura ambiente durante 4 dias. Diluiu-se a mistura com EtOAc e lavou-
-se com ácido
NaCl saturado cítrico LN, &2θ* NaHC03 saturado e em seguida
Por secagem e remoção do solvente sob pressão reduzida obteve-se 9,7 g de produto bruto, suficientemente pu ro para uso no passo seguinte.
BOC-NHCHC02H ((!h2)5-NHZ
Tratou-se uma solução de 9,7 S (19,6 mmole) de
BOC-NHC(C02Et)2 em 20 ml de dioxano com 1,6 g (4o mmole) (ch2)5-nhz
NaOH em 10 ml de H20 e agitou-se a solução à temperatura biente durante três horas. Diluiu-se a solução com HgO e traiu-se com EtgO. Levou-se a fase aquosa a pH 1 e extraiu-se com EtOAc. Lavou-se este com H20 e NaCl saturado. Por secagem e remoção do solvente sob pressão reduzida obteve-se o ácido amex91 malónico.
Dissolveu-se este em lOOml de tolueno e aqueceu-se a refluxo durante quatro horas. RemoVeu-se o tolueno sob pressão reduzida e cromatografou-se o resíduo sobre sílica gel eluindo-se com hexano/EtOAc (5/1)· Obteve-se 1,9 g de produto. Confirmou-se a estrutura por espectroscopia de NMR.
BOC-NHCHC0-STA-NHCH-CH(CH„)CH„CHq | a J (CH2)5-NHZ
Arrefeceu-se em gelo uma solução de 1,9 g (4,8 mmole) de BOC-NHCHCOgH , 1,1 g (4,5 mmole) de STA-NHCHgCH(<Íh2)5-nhz (CH^ÍCHgCH^ e 0,65 g (4,8 mmole) de HOBT em 20 ml de DMF e adicionou-se 0,94 g (4,6 mmole) de DCC.e agitou-se a solução de um dia para o outro à temperatura ambiente. Filtrou-se a mistura e diluiu-se o filtrado com EtOAc e lavou-se com HgO, NaHCO^ saturado e depois com NaCl saturado. Secagem e remoção do solvente sob pressão reduzida deixaram o produto bruto que se cromatografou em sílica gel eluindo-se com hexano/EtOAc (1/1). Obteve-se 2,1 g de produto suficientemente puro para uso no passo seguinte.
INTERMEDIÁRIO PARA OS EXEMPLOS 21 E 22
DNMA-NHCHCO-STA-NHCHgCH(CH^)CHgCH^ (ch2)5-nh2
Tratou-se uma solução de 0,4 g (θ,5 mmole) de DNMA-NHCHCO-STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3 em 20 ml de MeOH com 0,1 g (ch2)5-nhz de carvão de paládio a 20% e agitou-se sob atmosfera de hidro génio durante três horas. Filtrou-se então a mistura e removeu-se o solvente sob pressão reduzida para se obter 0,3 g de produto, suficientemente puro para uso nas reacções seguintes.
INTERMEDIÁRIOS PARA 0 EXEMPLO 25
CH3SO3(CH2)6-NHZ
Arrefeceu-se a -20° uma solução de 4,0 g(15,9 mmole) de HO-(CHgJ^-NHZ em 70 ml de CHC13 e adicionou-se 2,35 ml (16,9 mmole) de Et3N seguida por adição gota a gota de 1,3 ml (16,9 mmole) de cloreto de metanosulfonilo. Agitou-se a so lução a -20° durante duas horas e lavou-se então com NaHCO3 saturado e NaCl saturado. Por secagem e remoção do solvente sob pressão reduzida obteve-se 5,8 g de produto bruto, suficientemente puro para uso na reacção seguinte.
B0C-NH<j5 (COgEt) g (ch2)6-nhz
Separou-se do óleo 0,85 g (17,7 mmole) de NaH (a 50% em óleo mineral) e suspendeu-se em 20 ml de DMSO. A is to adicionou-se 4,8 g (17,4 mmole) de B0C-NHCH(C02Et)2 a Pou co e pouco e agitou-se a suspensão até cessar a libertação de hidrogénio. Tratou-se então com 5,8 g (17,6 mmole) de CH3SO3~ -(CH2)6-NHZ e 2,0 g de Kl e agitou-se à temperatura ambiente durante dois dias. Diluiu-se a mistura com EtOAc e lavou-se com ácido cítrico IN, H^O, NaHC03 saturado e NaCl saturado. Por secagem e remoção do solvente sob pressão reduzida obteve -se 9,0 g de produto bruto suficientemente puro para uso na reacção seguinte.
BOC-NHCHCO H
I (CH )6-NHZ
Tratou-se uma solução de 9,0 g (17,t mmole) de BOC-NHC(COgEt)2 em 3θ ml de dioxano com 1,5 g (37,5 mmole) (ch2)6-nhz de NaOH em 10 ml de HgO e agitou-se a solução à temperatura ambiente durante três horas. Diluiu-se a solução com HgO e ex traiu-se com EtgO. Levou-se o pH a 1 e extraiu-se a mistura com EtOAc e lavou-se o EtOAc com H.O e NaCl saturado. Por secagem e remoção do solvente obteve-se o óxido malónico. Tomou -se este em 100 ml de tolueno e aqueceu-se a refluxo durante
quatro horas. Removeu-se o solvente sob pressão reduzida e cromatografou-se sobre sílica gel eluindo-se com hexano/EtOAc (5/1), para dar 1,1 g de produto.
boc-nhchco-sta-nhch_ch(chJch0ch_ | í J í J (ch2)6-nhz
Arrefeceu-se em gelo uma solução de 1,1 g(2,9 mmole) de BOC-NHCHCO2H, 0,71 g (2,9 mmole) de BOC-NHCHCO2H , (ch2)6-nhz 0,71 g (2,9 mmole) de STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3 e 0,39 g (2,9 mmole) de HOBT em 20 ml de DMF e adicionou-se 0,6 g (2,9 mmole) de DCC e deixou-se a solução sob agitação à temperatura ambiente de um dia para o outro. Filtrou-se então a mistura e diluiu-se o filtrado com EtOAc.
NaHC03 saturado e NaCl saturado
Lavou-se o EtOAc com HgO,
Por secagem e remoção do sol vente sob pressão reduzida obteve-se o produto bruto que se cromatografou sobre sílica gel eluindo-se com lit OAc/hexano (1/1). Obteve-se 1,3 g de produto.
INTERMEDIÁRIO PARA OS EXEMPLOS 26 E 27
DNMA-NHCHCO- STA-NHCH^H (CH3 )CH2CH3 (ch 2)6-nh2
Tratou-se uma solução de 0,5 g (0,6 mmole) de DNMA-NHCHCO-STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3 em 20 ml de MeOH com 0,1 g (ch2)6-nhz de carvão de paládio a 20% e agitou-se sob atmosfera de hidro génio durante 4 horas. Filtrou-se a mistura e removeu-se o sol vente sob pressão reduzida obtendo-se 0,42 g de produto bruto, suficientemente puro para se usar nos passos seguintes.
INTERMEDIÁRIO PARA 0 EXEMPLO 28
BOC-NHCHC0-STA-LEU-NHCH_Ph
I (ch2)6-nhz
Arrefeceu-se em gelo uma solução de 0,86 (2,3 mmole) de B0C-NHCHC02H, 0,86 g (2,1 mmole) de STA-LEU-NHCHgPh· (ch2)6-nhz •HC1 e 0,3 g (2,2 mmole) de HOBT em 15 ml de DMF e tratou-se com 0,4 ml (2,9 mmole) de Et^N seguindo-se 0,5 g (2,4 mmole) de DCC. Deixou-se a solução sob agitação à temperatura ambien te de um dia para o outro. Filtrou-se a mistura e diluiu-se o filtrado com EtOAc e lavou-se com HgO, NaHCO^ saturado e NaCl saturado. Por secagem e remoção do solvente sob pressão reduzida obteve-se o produto bruto que se cromatografou sobre sílica gel eluindo-se com EtOAc/hexano (1/1). Obteve-se 1,0 g de produto. Confirmou-se a estrutura por espectroscopia de NMR
INTERMEDIÁRIOS PARA 0 EXEMPLO 29 cich2c=c-ch2nhz
Arrefeceu-se em gelo uma solução de 1,0 g (7,1 mmole) de ClCHgCãC-CHgNH^HCl (Ann Chem. 12, 656 (1958)) em 20 ml de THF/H20 (1/1) e tratou-se com 0,3 g (7,5 mmole) de NaOH em 5 ml de ^0, tratou-se então gota a gota com 1,0 ml (7,1 mmole) de cloroformato de benzilo enquanto se adicionava simultaneamente gota a gota uma solução de 0,3 g (7,5 mmole) de NaOH em 5 ml de HgO. Deixou-se a solução sob agitação a 0° durante duas horas e extraiu-se então com EtOAc. Lavou-se o
EtOAc com NaHCO^ ção do solvente saturado e NaCl saturado. Por secagem e remo sob pressão reduzida obteve-se 1,8 g de produ to sob a forma de um óleo que solidificou por repouso. Confir mou-se a estrutura por espectroscopia de NMR.
BOC-NHC (C02Et) (ch2csc-ch2nhz
Retirou-se o óleo a 0,33 g (6,9 mmole) de NaH (a 50% em óleo mineral) e suspendeu-se em 15 ml de DMSO, A is to adicionou-se 1,9 g (6,8 mmole) de BOC-NHCH(CO2Et) e agi- * tou-se a suspensão até cessar a libertação de hidrogénio. Tra • tou-se então com 1,8 g (6,6 mmole) de C1CH2C=C-CH2CHZ e 2,0
g de Kl e agitou-se à temperatura ambiente de um dia para o outro. Diluiu-se a solução com EtOAc e lavou-se com H^O, NaHCO^ saturado e NaCl saturado. Por secagem e remoção do sol vente sob pressão reduzida obteve-se o produto bruto que se cromatográfou sobre sílica gel, eluindo-se com hexano/EtOAc (9/1). Obteve-se 2,5 g d® produto. Confirmou-se a estrutura por espectroscopia de NMR.
B0C-NHCHC0oH
I 2
CH2C=C-CH2NHZ
Tratou-se uma solução de 2,5 g (5.4 mmole) de BOC-NHC(CO9Et)_ em 20 ml de THF com 1,0 g (25,0 mmole) de
I
CHgCzC-CHgNHZ
NaOH em 20 ml de HgO e agitou-se a solução à temperatura ambiente durante seis horas. Acidificou-se a solução com ácido cítrico LN e extraiu-se com EtOAc. Lavou-se o EtOAc com HgO e NaCl saturado. Por secagem e remoção do solvente sob pressão reduzida obteve-se o ácido malónico.
Tomou-se este em 25 ml de tolueno e aqueceu-se a refluxo durante duas horas. Removeu-se o solvente sob pressão reduzida para se obter o produto bruto que se cromato grafou sobre sílica gel eluindo-se com hexano/EtOAc (3/1). Ob teve-se 1,6 g de produto suficientemente puro para uso na rea c ção s eguint e.
BOC-NHCHCO-STA-NHCH CH(CH_)CH„CHO | 2 J 2 J
CH2C=C-CH2NHZ
Arrefeceu-se em gelo uma solução de 1,6 g(4,3 mmole) de BOC-NHCHCOgH, 1,0 g (4,1 mmole) de STA-NHCHgCHÍCH^)ch2c=c-ch2nhz
CHgCH^ e 0,57 g (4,2 mmole) de HOBT em 15 ml de DMF e tratou-se com 0,88 g (4,3 mmole) de DCC e deixou-se a solução sob . agitação à temperatura ambiente durante quatro dias. Filtrou-se a mistura e diluiu-se o filtrado com EtOAc e lavou-se com
- 96 saturado e NaCl saturado. Por secagem e remoção sob pressão reduzida obteve-se o produto bruto
HgO, NaHCO^ do solvente que se cromatografou sobre sílica gel eluindo-se com EtOAc/he xano (1/1). Obteve-se 2,5 S de produto.
INTERMEDIÁRIOS PARA OS EXEMPLOS 30 E 31
B OC - ORN ( Ζ) - STA-NHCH2CH (CH^) CHgCH^
Arrefeceu-se em gelo uma solução de 1,3 g (3,5 mmole) de BOC-ORN(z), 1,0 g (3,6 mmole) de 3ΤΑ-ΝΗ0Ηο0Η(0Η_)CH CH «HC1 e 0,48 g (3,6 mmole) de HOBT em 2J ml de DMF e adi cionou-se 0,5 ml (3,6 mmole) de Et^N e em seguida 0,74 g (3,6 mmole) de DCC. Deixou-se a solução sob agitação à temperatura ambiente de um dia para o outro. Filtrou-se a mistura e diluiu-se o filtrado com EtOAc e lavou-se com H^O, NaHCO^ saturado e depois com NaCl saturado. Por secagem e remoção do sol vente sob pressão reduzida obteve-se o produto bruto que se cromatografou sobre sílica gel eluindo-se com EtOAc/hexano (1/1). Obteve-se 1,5 g de produto. Confirmou-se a estrutura por espectroscopia de NMR e de massa.
ORN ( Ζ ) - STA- NHCHgCH ( CH^ ) CH^H^
Tratou-se uma solução de 1,25 g (2,1 mmole) de BOC-ORN(Z)-STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3 em 50 ml de CHgClg com 6 ml de TFA e agitou-se à temperatura ambiente durante duas horas. Removeu-se o solvente sob pressão reduzida e tomou-se o resíduo em EtOAc e lavou-se com NaHCO saturado e NaCl saturado.
Por secagem e remoção do solvente sob pressão reduzida obteve-se 1,0 g de produto. Confirmou-se a estrutura por espectros copia de NMR.
DNMA-ORN(Z)-STA-NHCHgCH(CH3)CH2CH3
Arrefeceu-se em gelo uma solução de 0,72 g (2,1 mmole) de ácido di-(1-naftilmetil)-acético, 1,0 g (2,0 mmole) de ORN(z)-STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3 e 0,29 g (2,1 mmole) de HOBT em 20 ml de DMF e tratou-se com 0,44 g (2,1 mmole) de
DCC e agitou-se à temperatura ambiente durante três dias. Fil trou-se a mistura e diluiu-se o filtrado com EtOAc e lavou-se com HgO, NaHCO^ saturado e NaCl saturado. Por secagem e remoção do solvente sob pressão reduzida obteve-se o produto bruto que se cromatografou sobre sílica gel eluindo-se com EtOAc/ hexano (1/1) e em seguida com EtOAc. Obteve-se 1,27 g de produto. Confirmou-se a estrutura por NMR e espectroscopia de mas sa.
DNMA-ORN-STA-NHCH2CH (CH3 ) CHgCH^
Tratou-se uma solução de 1,1 g de DNMA-ORN(z)-STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3 em 20 ml de MeOH com 0,1 g de carvão de paládio a 20% e agitou-se sob atmosfera de hidrogénio durante cinco horas. Filtrou-se a mistura e removeu-se o solven te sob pressão reduzida para se obter 1,0 g de produto, suficientemente puro para uso nas reacções seguintes.
INTERMEDIÁRIOS PARA 0 EXEMPLO 33
ChJJ-NH-C (CO„Et) o | ' 2 '2 ch2ch=ch2
A 150 ml de EtOH absoluto adicionou-se 4,6 g (0,2 átomo grama) de sódio. Depois de acabada a reacção tratou-se a solução com 43,5 g (0,2 mole) de acetilaminomalonato de dietilo. Aqueceu-se a solução a 50° durante uma hora, em seguida arrefeceu-se e tratou-se gota a gota com uma solução de 17Λ ml (0,2 mmole) de brometo de alilo em 10*^ ml de EtOH absoluto. Manteve-se a mistura a 50° durante vinte e quatro horas e separou-se então um sólido oleoso, lomou-se o material em EtgO, lavou-se duas vezes com HgO e em seguida com NaCl sa turado. Por secagem e remoção do solvente sob pressão reduzida obteve-se 42,4 g de produto bruto. Confirmou-se a estrutura por espectroscopia de NMR.
• h,NCHCOH . 2 | 2 . CH CH=CH
Aqueceu-se sob refluxo durante 7 horas uma so luçao de 42,4 g de cH^-C-NHtj; (CO^t )2 em 200 ml de HC1 conch2ch=ch2 centrado, agitando-se depois sob pressão reduzida até se obter um óleo viscoso. Tomou-se este em 14o ml de EtOH absoluto e adicionou-se NH^OH concentrado até reacção básica ao papel indicador. Arrefeceu-se a solução e recolheu-se o produto pre cipitado por filtração. Obtiveram-se 16,3 g de produto.
Confirmou-se a estrutura por espectroscopia de NMR.
BOC-NHCHCO-H
I 2 ch2ch=ch2
Tratou-se uma suspensão de 16,1 g (0,14 mole) de H NCHCO_H em 150 ml de dioxano com 70 ml (0,14 mole) de ι 2
CH2CH=CH2
NaOH 2N provocando-se a dissolução. Adicionou-se di-t-butildi carbonato (34,0 g, 0,15 mole) e agitou-se a solução à tempera tura ambiente durante duas horas. Ajustou-se o pH a 8,5 e diluiu-se a solução com H20 e lavou-se duas vezes com EtgO. Levou-se então o pH a 2,0 e lavou-se duas vezes com EtgO. Lavou -se o Et_O com NaCl saturado, secou-se e removeu-se o solvente sob pressão reduzida obtendo-se 19,7 S de produto na forma de um óleo claro. Confirmou-se a estrutura por NMR e espectros copia de massa.
BOC-NHÇHCO- STA-NHCH2CH (CH^CHgCH^ ch2ch=ch2
Arrefeceu-se em gelo uma solução de 2,16 g (10,0 mmole) de BOC-NHCHCOgH, 1,35 g (10,0 mmole) de HOBT e ch2ch=ch2
2,81 g (10,0 mmole) de STA-NHCHgCH(CH^CHgCH^’HC1 em 30 ml de DMF e adicionou-se 1,4 ml (10,0 mmole) de Et^N seguindo-se 2,1 g (10,0 mmole) de DCC e deixou-se a solução sob agitação à
temperatura ambiente de um dia para o outro. Filtrou-se a mis tura e removeu-se o solvente sob alto vácuo. TomOu-se o resíduo em EtOAc e lavou-se com HC1 IN, NaHCO^ saturado e NaCl saturado. Por secagem e remoção do solvente sob pressão reduzida obteve-se o produto bruto que se cromatografou sobre sílica gel eluindo-se com CHCl^/MeOH (98/2). Obteve-se l,94g de de produto na forma de uma espuma branca. Confirmou-se a estrutura por NMR e espectroscopia de massa.
HoNCHC0-STA-NHCHoCH(CH„)CHoCH„*HC1 * I Z J Z J
CH2CH=CH2
Tratou-se uma solução de 1,94 g (4,4 mmole) de BOC-NHCHCO-STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3 em 20 ml de CH2C12 com ch2ch=ch2 ml de TFA e agitou-se durante uma hora. Removeu-se o solvente sob pressão reduzida e tomou-se o resíduo em CHgClg e removeu-se novamente o solvente. Tomou-se então o resíduo em CHgClg e tratou-se com HC1 gasoso. Removeu-se o solvente sob pressão reduzida para se obter 1,66 g de produto de pureza su fiei ente para se usar no passo seguinte.
DNMA-NHCHCO- STA-NHCH^H (CH^ )CH2CH3 ch2chsch2
Arrefeceu-se em gelo uma solução de 1,5 g (kA mmole) de ácido di-(1-naftilmetil)-acético e 0,6 g (4,4 mmole) de HOBT em 20 ml de DM? e adicionou-se 0,92 g (4,4 mmole) de DCC e agitou-se a solução a 0° durante quinze minutos.
A isto
1,66 g (4,4 mmole) de adicionou-se uma solução arrefecida h_nchco-sta-nhch_ch(ci-i0)ch,.ch -HC1 ί *323 ch2ch=Oh2
Et^N em 20 ml de DMF. Deixou-se a
0,62 ml (4,4 mmole) de ção sob agitação à temperatura ambiente de um dia para o de solu outro. Verteu-se a mistura em HgO e extraiu-se três vezes com EtOAc. Lavou-se o EtOAc com H20, HC1 IN, NaHCO^ saturado e NaCl saturado. Por secagem e remoção do solvente sob pressão
100 reduzida obteve-se o produto bruto que se cromatografou sobre sílica gel eluindo-se dom CHCl^/MeOH (98/2). Obteve-se 2,4 g de produto contaminado com algum ácido di-(1-naftilmetil)-acé tico inicial. Tomou-se o resíduo em Et^O e lavou_se duas vezes com NaOH IN, H^O e em seguida com NaCl saturado. Por seca gem e remoção do solvente sob pressão reduzida obteve-se 2,12 g de produto na forma de uma espuma branca. Confirmou-se a es trutura por espectroscopia de massa e NMR.
INTERMEDIÁRIOS PARA OS EXEMPLOS 34 E 35
ÉSTER METÍLICO BENZÍLICO DO ÁCIDO AMINOMALÓNICO
Preparou-se isonitrosomalonato de metilo e ben zilo a partir de 97 g malonato de metilo e benzilo pelo processo descrito em Org. Syn. Coll. Vol. 5, p. 373» Reduziram-se os 100 g de produto bruto obtido ao derivado amino pelo processo de scrito em J. Am. Chem. Soc., 21» 1970 (1953). Usaram-se os 94 g do produto bruto obtido no passo seguinte sem posterior purificação.
ÉSTER METÍLICO BENZÍLICO DO ÁCIDO BOC-AMINOMALÓNICO
Arrefeceu-se a 5° uma solução de 94 g de éster metílico benzílico do ácido aminomalónico em 75 ml de EtgO e tratou-se com 91,66 g de di-t-butildicarbonato. Após repousar a 4° de um dia para o outro removeu-se o solvente sob pres são reduzida obtendo-se um óleo. Por cromatografia sobre síli ca gel eluindo-se com hexano/EtOAc (85/15) obteve-se 66,97 g (49% de rendimento) do produto na forma de um óleo que solidi ficou por repouso. Confirmou-se a estrutura por NMR e espectroscopia de massa.
ÉSTER METÍLICO DO ÁCIDO BOC-AMINOMALÓNIDO
A uma solução de 16,17 g (13,5 mmole) de éster metílico benzílico do ácido BOC-aminomalónico em 250 ml de MeOH adicionou-se 0,66 g de carvão de paládio a 20$. Fez101
-se passar uma corrente de hidrogénio através da suspensão du rante uma hora e meia, após o que se filtrou a suspensão e se removeu o solvente sob pressão reduzida a 30°, obtendo-se um xarope, 12,5 g· Manteve-se o produto a 4o até se usar na reac ção seguinte.
B OC-NHCHC0-STA-NHCHCH( CH_ )CHCH„ | 2 3' 2 3 co2ch3
Combinou-se uma solução de 2,50 g (10,7 mmole) de éster metílico do ácido BOC-aminomalónico e 1,52 g (11 mmole) de HOBT em 50 ml de DMF com uma solução de 3,01 g (10,7 mmole) de STA-NHCHgCHÍCH^CHgCHyHCl e 1,57 ml (11,0 mmole)de Et^N em 25 ml de DMF. Â mistura adicionou-se 2,32 g (11,0 mmole) de DCC.e agitou-se a mistura durante cinco horas à temperatura ambiente e depois manteve-se a 4° de um dia para o outro. Filtrou-se a mistura e evaporou-se o filtrado sob alto vácuo obtendo-se um vidro, 4,2 g. Cromatografou-se o produto bruto sobre sílica gel eluindo-se com EtOAc. Por combinação das fracções adequadas obteve-se uma espuma branca, 3,09 g de pureza suficiente para uso na reacção seguinte. Confirmou-se a estrutura por NMR e espectroscopia de massa.
HgNCHCO-STA-NHCH2CH(CH^)CE^CH
Ao2ch3
A uma solução de 2,86 g (6,22 mmole) de BOCNHCHCO-STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3 em 75 ml de CH2C12 adicionou-se co2ch3 ml de TFA. Após 2 horas à temperatura ambiente removeu-se o solvente sob pressão reduzida e extraiu-se o resíduo com Et20 e NaCl saturado que se tinha ajustado a pH 9,5 com carbo nato de sódio sólido. Lavou-se a fase orgânica com NaCl saturado, secou-se e evaporou-se obtendo-se uma espuma, 1,62 g. 0 material era suficientemente puro para uso na reacção seguinte.
INTERMEDIÁRIO PARA 0 EXEMPLO 36
102
DNMA-NHCHCO-STA-NHCH^CH(CH^)CHgCH^ c°2 h
A uma solução de 1,79 g (2,63 mmole) de DNMA-NHÇHCO-STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3 em co2ch3
5,0 ml de NaOH IN. Após se agitar temperatura ambiente adicionou-se ml de MeOH adicionou-se durante uma hora e meia à
4,9 ml de HC1 IN. Removeu-se o solvente sob pressão reduzida e tomou-se o resíduo em
EtOAc. Filtrou-se a mistura e lavou-se o filtrado com HC1 IN, NaCl saturado e secou-se. Por remoção do solvente sob pressão reduzida obteve-se uma espuma, 1,7θ g· Confirmou-se a estrutu ra por NMR e espectroscopia de massa.
Calculado para ·0,250^ΗθΟ2 (PM 689,84):
C, 71,38; Η, 7,45; Ν, 6,09
Encontrado C, 71,03; Η, 7,46; Ν, 6,16.
INTERMEDIÁRIOS PARA 0 EXEMPLO 4θ
B0C-NHCH-C02H
Tratou-se uma solução de 5,45 g (19,6 mmole) de 2-(2-benzimidazole)-alanina»2HCl (Y. Chem. Soc., 1600 (1951)) em 100 ml de CHgClg com 4,49 g (20,6 mmole) de di-t-butildicarbonato e 8,6 ml (61,7 mmole) de e agitou-se à temperatura ambiente de um dia para o outro. Removeu-se o sol vente sob pressão reduzida e tomou-se o resíduo em NaOH IN. Por ajustamento do pH a 3,0 obteve-se um sólido branco que se recolheu e lavou com HgO. Obteve-se 4,92 g de produto suficien temente puro para se usar na reacção seguinte. Confirmou-se a estrutura por NMR e espectroscopia de massa.
BOC-NHCHCO-STA-NHCH CH(CH„)CH CH„ / J 4 J yλΝ^H
- 103
Tratou-se uma suspensão de 1,0 g (3,5ó mmole) de BOC-2-(2-benzimidazole)-alanina, 0,5 g (3,74 mmole) de
HOBT e 1,0 g (3,56 mmole) de STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3‘HC1 em 15 ml de DMF gota a gota com Et3N até ocorrer a dissolução. Tratou-se então a solução com 0,77 g (3,74 mmole) de DCC e agitou-se à temperatura ambiente de um dia para o outro. Filtrou -se a mistura e removeu-se a DMF sob alto vácuo. Tomou-se o resíduo em EtOAc e lavou-se com ácido cítrico IN, NaHC03 satu rado e NaCl saturado. Por secagem e remoção do solvente sob pressão reduzida obteve-se o produto bruto que se cromatografou sobre sílica gel eluindo-se com CHCl^MeOH (98/2). Obteve-se 1,6 g de produto de pureza suficiente para uso no passo seguinte. Confirmou-se a estrutura por espectroscopia de mas-
Tratou-se uma solução de 1,6 g de
B0C-NHCHC0-NHCH2CH(CH3)CH2CH3 em 20 ml de C^Clg com 20 ml de
Re
TFA e agitou-se à temperatura ambiente durante duas horas, moveu-se o solvente sob pressão reduzida e redissolveu-se resíduo em CHgClg e removeu-se novamente o solvente. Tomou-se o resíduo em EtOAc e lavou-se com NaOH IN e em seguida com NaCl saturado. Por secagem e remoção do solvente sob pressão o produto bruto que se cromatografou sobre reduzida obteve-se sílica gel eluindo-se com CHCl^/MeOH (95/5)· Obteve-se 0,77 g de produto de pureza suficiente para se uasr no passo seguinte. Confirmou-se a estrutura por espectroscopia de massa.
INTERMEDIÁRIOS PARA O EXEMPLO 41 boc-lys(tos)-sta-nhch2ch(ch3)ch2ch3
104 -
A uma solução de 0,72 g (1,83 mmole) de BOC-LYS(TOS) e 0,3 g (2,1 mmole) de HOBT em 15 ml de DMF a -5° adicionou-se uma solução de 0,56 g (2,θ mmole) de STA-NHCH^CH(CH3)CH2CH3*HC1 e 0,29 ml (2,1 mmole) de Et^N em 20 ml de DMF e trataram-se as soluções combinadas com ),43 g (2,lmmole) de DCC. Após se agitar à temperatura ambiente de um dia para o outro, filtrou-se a mistura, removeu-se o solvente sob alto vacuo e tomou-se o resíduo em EtOAc. Lavou-se a solução com ácido cítrico IN, NaGlsaturado, NaHCO^ saturado e NaCl satura do. Após secagem removeu-se o solvente sob pressão reduzida e cromatografou-se o resíduo sobre sílica gel eluindo-se com um gradiente de 0 a 5% de MeOH em CHCl^. .Recuperou-se o produto por combinação das fracções adequadas obtendo-se uma espuma branca, 0,80 g, de pureza adequada para uso na reacção seguin te. Confirmou-se a estrutura por espectroscopia de massa.
lys(tos)-sta-nhch2ch(ch^)ch2ch3
A uma solução de 0,80 g (1, 3 mmole) de BOC-LYS(T0S)-STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3 em 30 ml de C^Clg adicionou -se 15 ml de TFA. Após se agitar a 25° durante uma horae meia evaporou-se a mistura e obteve-se um óleo que se tomou em EtOAc e se lavou com NaOH 5N e NaCl saturado. Após secagem evaporou-se a solução sob pressão reduzida e obteve-se uma es puma, 0,67 g, de pureza suficiente para se usar na reacção se guinte. Confirmou-se a estrutura por espectroscopia de massa. INTERMEDIÁRIO PARA 0 EXEMPLO 42
N-(METILOXICARBONIL)-SUCCINIMIDA
A uma solução de 19,8 g (200 mmole) de succinimida e 22 ml (200 mmole) de N-metilmorfolina em 350 ml de THF a -5° adicionou-se 15,5 ml (200 mmole) de cloroformato de metilo ao longo de 20 minutos. Apos se agitar durante duas ho ras a 25° Pemoveu-se o solvente sob pressão reduzida e tomou-se o resíduo em EtOAc. Filtrou-se a suspensão e lavou-se com NaCl saturado, NaHCO^ saturado e NaCl saturado. Após secagem
105 -
concentrou-se a solução sob pressão reduzida e adicionou-se EtgO, obtendo-se o produto na forma de um sólido cristalino, 10,0 g. Confirmou-se a estrutura por NMR e espectroscopia de massa.
INTERMEDIÁRIOS PARA 0 EXEMPLO 43 z-nhchco-sta-nhch2ch(ch3)ch2ch3
Arrefeceu-se em gelo uma solução de 1,54 g (6,2 mmole) de (R, S)-Z-/^-cianoalanina (j. Org. cKem. 26, 3356 (1961)) e 0,88 g (6,51 mmole) de HOBT em 5 ml de DMF e 45 ml de CHgClg e adicionou-se 1,34 g (6,51 mmole) de DCC e em seguida 1,85 g (6,2 mmole) de STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3*HC1 e 1,36 ml (9,7 mmole) de Et3N. Agitou-se a solução à temperatura ambiente de um dia para o outro. Filtrou-se a mistura e removeu -se o solvente sob pressão reduzida. Tomou-se o resíduo em
EtOAc e lavou-se com ácido cítrico IN, saturado e NaCl saturado. Por secagem
NaCl saturado, NaHCO e remoção do solvente sob pressão reduzida obteve-se o produto bruto que se poderia cristalizar de EtOAc/EtgO. Obteve-se 2,31 g de produto na for ma de um sólido branco. Confirmou-se a estrutura por NMR e espectroscopia de massa.
H2NCHCO-STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3
CHgCN
Tratou-se uma solução de 2,11 g de Z-NH^HCOch2cn -STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3 em 80 ml de MeOH com 0,2 g de carvão de paládio a 20% e agitou-se sob atmosfera de hidrogénio durante uma hora e meia. Filtrou-se a mistura e removeu-se o sol vente sob pressão reduzida obtendo-se 1,47 g de produto. Confirmou-se a estrutura por NMR e espectroscopia de massa.
INTERMEDIÁRIOS PARA 0 EXEMPLO 44
ÉSTER METÍLICO t-BUTÍLICO DO ÁCIDO Z-AMINOMALÓNICO
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Preparou-se o isonitrosomaionato de metilo e t-butilo a partir de 50 g de malonato de metilo e t-butilo pe lo processo descrito em Org. Syn. Coli. Vol. 5, P· 373· Reduziram-se as 54 g de produto bruto assim obtido a éster metíli co t-butílico do ácido aminomalónico pelo processo descrito em J. Am. Chem. Soc., 75, 1970 (1953)· Ao filtrado desta mistura reaccional adicionou-se 64,4 g (258 mmole) de N-(benzilo xicarboniloxi)-succinimida. Agitou-se a mistura a 25° de um dia para o outro, filtrou-se e removeu-se o solvente sob pres são reduzida. Tomou-se o resíduo em EtOAc e lavou-se com ácido cítrico IN, NaCl saturado, NaHCO^ saturado e NaCl saturado. Apos secagem removeu-se o solvente sob pressão reduzida e cro matografou-se o resíduo sobre sílica gel eluindo-se com hexano/EtOAc (75/25). Combinaram-se as fracções adequadas obtendo -se um oleo, 30»l g» de pureza suficiente para uso na reacção seguinte. Confirmou-se a estrutura por NMR e espectroscopia de massa.
ÉSTER METÍLICO t-BUTÍLICO DO ÁCIDO AMINOMALÓNIC0
A uma solução de 3,23 g (10 mmole) de éster metílico t-butílico do ácido Z-aminomalónico em 25 ml de THE adicionou-se 0,1 g de catalisador de carvão de paládio a 20%. Fez-se passar uma corrente de hidrogénio gasoso através da mis tura durante cinco horas, filtrou-se e removeu-se o solvente em vácuo obtendo-se um áleo, 1,79 g, de pureza suficiente para uso na reacção seguinte.
BOC-PHE-NHÇHCO CHL
C02-t-Bu
Arrefeceu-se em gelo uma solução de 2,65g (10 mmole) de BOC-PHE, 1,39 g (10,3 mmole) de HOBT e 1,89 g (10 mmole) de éster metílico t-butílico do ácido aminomalónico, em 80 ml de DMF e adicionou-se 2,12 g (10,3 mmole) de DCC. Agitou-se a solução a 0° durante três horas e depois à temperatu ra ambiente de um dia para o outro. Filtrou-se a misturae eva porou-se o solvente sob alto vácuo. Tomou-se o resíduo em
- 107 -
EtOAc e lavou-se com ácido cítrico IN, NaCl saturado, NaHCO^ saturado e NaCl saturado. Evaporou-se o solvente sob pressão reduzida e cromatografou-se sobre sílica gel eluindo-se com hexano/EtOAc (75/25). Combinaram-se as fracções adequadas e obteve-se uma espuma branca, 3,69 g. 0 material era suficientemente puro para uso na reacção seguinte. Confirmou-se a estrutura por NMR e espectroscopia de massa.
B0C-PHE-NHCHC0oH
I 2 CO^-t-Bu
A uma solução de 3,44 g (7,88 mmole) de BOC-PHE-NHCHC0_CHo em 20 ml de dioxano adicionou-se 8,0 ml de
I 2 3
COg-t-Bu
NaOH IN. Uma hora depois adicionou-se 1 ml de HC1 IN e removeu-se o solvente sob pressão reduzida a 25°. Tomou-se o resí duo em EtOAc e lavou-se com ácido cítrico IN e NaCl saturado. Após secagem removeu-se o solvente sob pressão reduzida e obteve-se uma espuma, 2,92 g, suficientemente pura para uso na reacção seguinte. Confirmou-se a estrutura por NMR e espectros copia de massa.
INTERMEDIÁRIOS PARA 0 EXEMPLO k5
ÉSTER ETÍLICO BENZÍLICO DO ÁCIDO MALÔNICO
A uma solução de 17,22 g (114 mmole) de clore to de etilmalonilo em 150 ml de THF a 10° adicionou-se uma so lução de 12,19 ml (118 mmole) de álcool benzilico e 16,4 ml (118 mmole) de Et^N em 25 ml de THF ao longo de trinta minutos. Agitou-se a mistura de um dia para o outro, filtrou-se e lavaram-se os sólidos com THF. Evaporou-se o filtrado sob pres são reduzida obtendo-se um óleo, tomou-se este em EtOAc e la vou-se com ácido cítrico IN, NaCl saturado. Após secagem,
NaCl saturado,
NaHC03 removeu-se o solvente saturado e sob pressão reduzida e destilou-se o resíduo. Recolheu-se a fracção com ponto de ebulição de 118° a 122° a 0,4 mmHg e obteve-se o produto na forma de um óleo, 19,5 g, de pureza suficiente pa108
ra uso na reacção seguinte. Confirmou-se a estrutura por NMR e espectroscopia de massa.
ÉSTER METÍLICO BENZÍLICO DO ÁCIDO BOC-AMINOMALÓNICO
Preparou-se isonitrosomalonato de etilo e ben zilo a partir de 19 g de malonato de etilo e benzilo pelo pro cesso descrito em Org. Syn. Coll. Vol. 5, P» 373· Reduziram-se os 2^,5 g de produto bruto assim obtido a éster etílico benzílico do ácido aminomalónico pelo processo descrito em J. Am. Chem. Soc.» 25» 1970 (1953) e converteu-se imediatamente a éster metilico benzílico do ácido BOC-aminomalónico por adi ção de 19,2 g (88 mmole) de di-t-butildicarbonato à mistura de redução. Cromatografou-se o produto bruto sobre sílica gel eluindo-se com hexano/EtOAc (75/25) e obteve-se um óleo, 15,54 g. 0 produto era de pureza suficiente para uso na reacção seguinte. Confirmou-se a estrutura por NMR e espectroscopia de massa·
ÉSTER ETÍLICO BENZÍLICO DO ÁCIDO AMINOMALÓNICO‘HCl
Fez-se passar uma corrente de HC1 gasoso atra vés de uma solução de 8,29 g (26,4 mmole) de éster etílico benzílico do ácido BOC-aminomalónico ocasionalmente ao longo de cinco horas. Removeu-se o solvente sob pressão reduzida e triturou-se o resíduo com EtgO. Após se decantar o Et^O separou-se o resíduo dos voláteis sob alto vácuo obtendo-se um só lido cristalino, 6,5 g, de pureza suficiente para uso na reac ção seguinte. Confirmou-se a estrutura por NMR e espectroscopia de massa.
CLORETO DE DI-(1-NAFTILMETIL)-ACETILO
Agitou-se a 22° de um dia para o outro uma so lução de 14,4 g (42 mmole) de ácido di-(l-naftilmetilj-acético em 100 ml de cloreto de tionilo e removeu-se o solvente sob pressão reduzida. Recristalizou-se o sólido resultante de • EtgO e hexano, obtendo-se o produto na forma de um sólido bei
- 109 -
ge, 13,5 g, de pureza suficiente para uso na reacção seguinte.
DNMA-NH^HCOgCH^Ph
COgEt
Arrefeceu-se a 5° uma solução de 3,93 g ( 11 mmole) de cloreto de di-(1-naftilmetilo)-acetilo e 3,0 g (11 mmole) de hidrocloreto do éster etílico benzílico do ácido aminomalánico em 125 ml de THF e adicionou-se 3,3 ml (22,6 ma 22° fil mole) de Et^N. Apás se agitar de um dia para o outro trou-se a mistura e removeu-se o solvente sob pressão reduzida. Tomou-se o resíduo em EtOAc e lavou-se com ácido cítrico IN, NaCl saturado, NaHCO^ saturado e NaCl saturado. Após seca gem removeu-se o solvente sob pressão reduzida e cromatografou-se o resíduo sobre sílica gel eluindo-se com hexano/EtOAc (6θ/4θ). Por combinação das fracções adequadas obteve-se o pro duto na forma de um solido vítreo, 5,49 g. Confirmou-se a estrutura por NMR e espectroscopia de massa.
DNMA-NHCHCOgH
COgEt
A uma solução de 5,3 g (9,47 mmole) de DNMA-NHÇHCOgCHgPh em 100 ml de etanol absoluto adicionou-se 0,5 CO2Et g de catalizador de carvão de paládio a 20%. Fez-se passar uma corrente de hidrogénio através da suspensão durante quatro horas, filtrou-se e removeu-se o solvente sob pressão reduzida obtendo-se uma espuma branca, 4,58 g, de pureza suficiente para uso na reacção seguinte.
INTERMEDIÁRIOS PARA 0 EXEMPLO 47
Ac-NH-C(CO2Et)2 (dH2)5-CO2Et
Aqueceu-se sódio ¢2,67 gí 0,116 atomograma) • em 115 ml de EtOH até se dissolver e tratou-se a solução re- • sultante gota a gota com 26,7 g (0,123 mmole) de acetoamidoma
110
lonato de dietilo. Levou-se a solução a refluxo durante meia hora e tratou-se em seguida gota a gota com 25*8 g (0,116 mole) de 6-bromohexanoato de etilo e aqueceu-se a solução resul tahte a refluxo durante dezoito horas. Filtrou-se então a solução e concentrou-se sob pressão reduzida. Tomou-se o resíduo em EtgO e lavou-se com HgO e NaCl saturado. Por secagem e remoção do solvente sob pressão reduzida obteve-se 40,4 g de produto sob a forma de um óleo, suficientemente puro para uso na reacção seguinte.
HgNtjÍHCOgH (ch2)5-co2h
Aqueceu-se a refluxo durante quatro dias uma solução de 39,8
HC1 6N. Após se g (0,11 mole) de AC-NHC(COgEt) em 200 ml de (CH2)5-CO2Et arrefecer a solução levou-se a pH3 com NH^OH concentrado e recolheu-se o sólido resultante e recristalizou
-se de HgO em ebulição obtendo-se 11,5 g de produto na forma de um sólido branco, ponto de fusão 246-248°.
Z-NHCHCOgH (éii2)5-co2H
Arrefeceu-se em gelo uma solução de 40,2 g (O,21 mole) de HgNCHCOgH em 470 ml de NaOH 1,8 M e tratou-se (ch2)5-co2h gota a gota ao longo de vinte minutos com 46,8 ml (θ,32 mmole/ de cloroformato de benzilo. Após quatro horas a 0° deixou-se a solução sob agitação à temperatura ambiente de um dia para o outro. Lavou-se a solução com EtgO e em seguida levou-se a pH2. Extraiu-se esta solução com Et20 e secou-se o EtgO e con centrou-se sob pressão reduzida. Obteve-se 14,48 g de produto na forma de um sólido branco, ponto de fusão 112-115°.
Z-NHÇHCOgCHgPh (ch2)5-co2h
111
Tratou-se uma solução de 16,4-5 g (0,051 mole) de H2NCHC02H em 10 ml de DMF com 5,14 g (θ,51 mole) de Et^N (ch2)5-co2h seguindo-se 10,04 g (0,061 mole) de brometo de benzilo. Agitou-se a solução à temperatura ambiente de um dia para o outro, diluiu-se então com H^O e extraiu-se com EtOAc o EtOAc com NaHCO-, acidificou-se o NaIIC0„
J com EtOAc. Secou-se o EtOAc e removeu-se o a pH2 e solvent e . Lavou-se extraiu-se sob pressão reduzida para se obter 8,53 g de produto, ponto de fusão 75-75°.
Z-NHCHCO_Ph
I 2 (CH2)5-CONHCH3
Arrefeceu-se em gelo uma solução de 2,5g (6,0 mmole) de Z-NHCHCOgPh , 0,41 g (6,0 mmole) de cloridrato de (ch2)5-co2h metilamina e 0,82 g (6,0 mmole) de HOBT em 3θ ml de DMF e adi cionou-se 0,61 g (6,0 mmole) de EtgN seguindo-se 1,24 g (6,0 mmole) de DCC em 10 ml de DMF e agitou-se à temperatura ambiente de um dia para o outro. Filtrou-se a mistura e removeu -se o solvente sob alto vácuo. Tomou-se o resíduo em EtOAc, filtrou-se e lavou-se com HC1 IN, NaHCO^ saturado e NaCl satu rado. Por secagem e remoção do solvente sob pressão reduzida obteve-se o produto bruto que se cromatografou sobre sílica gel eluindo-se com CHCl^/MeOH (97/3)· Obteve-se 2,04g de produto na forma de uma espuma branca.
Z-NHCHCO-H
I 2 (ch2)5-conhch3
Tratou-se uma solução de 1,54 g (3,6 mmole) de Z-NHCHCOgCHgPh em 30 ml de MeOH com 2Ô8mg (7,2 mmole) de NaOH (ch2(5-conhch3 em 5 ml de HgO e agitou-se a solução à temperatura ambiente durante um dia e meio. Removeu-se o solvente sob pressão redu zida e tomou-se o resíduo em CH2C12 e lavou-se com HC1 IN e em seguida NaCl saturado. Secagem e remoção do solvente sob
112
pressão reduzida originou o produto bruto que se cromatografou sobre sílica gel eluindo-se com EtOAc e em seguida com MeOH. Obteve-se 0,89 g do produto na forma de um óleo que ciis talizou por repouso.
Z-NHCjHCO-STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3 (ch2)5-conhch3
Ârrefeceu-se em gelo uma solução de 0,71 g (2,2 mmole) de Z-NHCHCO^, 0,57 g (2,2 mmole) de STA-NHCHgCH(ch2)5-conhch3 (CH )CH CH e 0,3 g (2,2 mmole) de HOBT em 30 ml de DMF e adi cionou-se 0,45 g (2,2 mmole) de DCC e deixou-se a solução sob agitação à temperatura ambiente de um dia para o outro. Filtrou-se a mistura e removeu-se o solvente sob alto vácuo. Tomou-se o resíduo em EtOAc e lavou-se com HC1 IN, NaHCO^ saturado e NaCl saturado. Secou-se e removeu-se o solvente sob pressão reduzida e obteve-se 0,69 g do produto na forma de uma espuma branca.
HoNCHC0-STA-NHCH CH(CHOCH_ j 4 4 J (CH2)^-C0NHCH3
Tratou-se uma solução de 0,54 g de
Z-NHÇHC0-STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3 em 250 (ch2)5-conhch3 de carvão de paládio a 20% e agitou-se ml de MeOH com 0,5 g sob atmosfera de hidro génio durante duas horas. Filtrou-se a mistura e removeu-se o solvente sob pressão reduzida obtendo-se 0,43 g do produto na forma de uma goma incolor, suficientemente pura para uso na reacção seguinte.
INTERMEDIÁRIOS PARA OS EXEMPLOS 48 E 49
BOC-NHC (CH2CH2CH2CH=CH2 ) (COgEt )2
A uma solução de 14,5 g (0,053 mole) de éster dietílico do ácido <X,-B0C-aminomalónico em 100 ml de MeOH adi cionou-se 25,6 g (0,079 mole) de uma solução a 21% de NaOEt
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em EtOH e em seguida 9,37 ml (0,7 g mole) de 5-bromo-l-penteno. Levou-se a solução a refluxo sob atmosfera de azoto duran te vinte horas e concentrou-se em seguida sob pressão reduzida. Diluiu-se o resíduo com EtgO, lavou-se com HgO e NaHCO^ saturado, secou-se e concentrou-se sob pressão reduzida para se obter 14,7 g do produto na forma de um óleo cor de laranja. Confirmou-se a estrutura por espectroscopia de NMR.
boc-nhch(ch2ch2ch2ch=ch2)co2h
A uma solução de 12.8 g (0,037 mole) de BOC-NHC(CH2CH2CH2CH=CH2)(CO2Et)2 em 100 mi de THF adicionou-se 112 ml (0,112 mole) de NaOH IN e 30 ml de EtOH. Levou-se a so lução a refluxo durante quinze horas, arrefeceu-se e concentrou-se sob pressão reduzida. Diluiu-se o resíduo com EtOAc, lavou-se com HgO, secou-se e concentrou-se sob pressão reduzi da obtendo-se um óleo. Dissolveu-se este em 200 ml de xileno e aqueceu-se a refluxo durante duas horas. Lavou-se a solução orgânica com NaHCO^ saturado, acidificou-se cítrico sólido e extraiu-se com EtOAc. Após a pH3 com ácido secagem e remoção do solvente sob pressão reduzida obteve-se 6,85 g de produto na forma de um sólido branco. Confirmou-se a estrutura por es pectroscopia de NMR.
BOC-NHCH(CH2CH2CH2CH=CH2)C0-STA-LEU-NHCH2Ph
A uma solução de 2,46 g (10,1 mmole) de BOC-NHCH(CH2CH2CH2CH=CH2)CO2H e 3.82 g (10,1 mmole) de STA-LEU-NHCHgPh em 50 ml de CHgCN adicionou-se 1,43 g (10,6 mmole)de HOBT e em seguida 2,19 g (10,6 mmole) de DCC. Agitou-se a mis tura durante dois dias à temperatura ambiente e filtrou-se.
Cone entrou-se o filtrado e diluiu-se com EtOAc. Lavou-se a fa se orgânica com NaHCO^ saturado, HgO e solução de ácido cítri co a 10%. Por secagem e remoção do solvente sob pressão reduzida obteve-se 5»7 g do produto. Confirmou-se a estrutura por espectroscopia de NMR.
H NCH(CH CH CH CH=CH )C0-STA-LEU-NHCH Ph h h d
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A uma solução de 5,5 g (9,61 mmole) de BOC-NHCH(CH2CH2CH2CH=CH2)C0-STA-LEU-NHCH2Ph em 200 ml de CH2C12 adicionou-se 200 ml de TFA e agitou-se a solução à temperatura ambiente. Removeu-se o solvente sob pressão reduzida e tomou-se o resíduo em RtOAc e lavou-se com NaHCO^ saturado.Após secagem e remoção do solvente sob pressão reduzida obteve-se 4,9 g de produto. Confirmou-se a estrutura por espectroscopia de NMR.
INTERMEDIÁRIOS PARA OS EXEMPLOS 52-54
C=O
CHC 0-LY S(Z)-NHCHgCH (CH^ ) CHgCH^
Usando-se o processo descrito para preparar os intermediários do Exemplo 2 mas substituindo-se por
\_y
UHCO-LYS-NHCH CH(CH_)CH9CH_ /~Λ \ 0 N-C=O \—/ por tratamento de
HC O-LYS(Z)-NHCHgC H(CH^)CH2C H =0 com hidrogénio na
115 presença de carvão de paládio em MeOH obteve-se o composto do título.
INTERMEDIÁRIOS PARA 0 EXEMPLO 55
ÉSTER ISOPROPÍLICO DO ÁCIDO BOC-AMINOMALÓNICO
Seguindo-se o procedimento indicado para os intermediários do Exemplo 45 mas substituindo-se malonato de etilo e benzilo por malonato de isopropilo e benzilo e obteve -se 12,2 g do composto do título na forma de um áleo. Confirmou-se a estrutura por NMR e espectroscopia de massa.
ÉSTER ISOPROPÍLICO BENZÍLICO DO ÁCIDO AMINOMALÓNICO*HC1
Por tratamento do ÉSTER ISOPROPÍLICO BENZÍLICO DO ÁCIDO BOC-AMINOMALÓNICO com HC1 gasoso em CH^lgde acor do com o processo descrito para os intermediários do Exemplo 45 obteve-se 9,37 g do composto do título na forma de um sóli do branco. Confirmou-se a estrutura por espectroscopia de NMR e de massa.
DNMA-NHCHC 0oC H„Ph | 2 2 óo2ch(ch3)2
Seguindo-se o processo descrito para o intermediário do Exemplo 45 mas substituindo-se o ÉSTER ETÍLICO BENZÍLICO DO ÁCIDO AMINOMALÓNICO*HC1 por ÉSTER ISOPROPÍLICO BENZÍLICO DO ÁCIDO AMINOMALÓNICO’HC1 obteve-se 5,83 g do composto do título. Confirmou-se a estrutura por espectroscopia de massa.
DNMA-NHCHC02H
Ao2CH (ch3) 2
Por tratamento de DNMA-NHCHCOgCHgPh com hico2ch(ch3)2 drogénio na presença de carvão de paládio a 20% de acordo com o processo descrito para os intermediários do Exemplo 45 obte
116 ve-se 4,69 g de composto do título na forma de uma espuma branca. Confirmou-se a estrutura por NMR e espectroscopia de massa.
INTERMEDIÁRIOS COMUNS
BOC-STA-LEU-NHCH^Ph
Dissolveram-se 1,80 g de LEU-NHCH,,Ph»HCl /Japão 83/59952?, 2,27 g de BOC-STA(US Pat. 4,397,786) e 1,04 g de hidrato de 1-hidroxibenzotriazole em 125 ml de diclorometa no e arrefeceu-se a 0°. Adicionou-se então 1,07 ml de Et^N. Adicionou-se uma solução arrefecida de 1,59 g de diciclohexil carbodiimida em 20 ml de diclorometano seguida pela adição de 50 ml de dimetilformamida arrefecida. Agitou-se a mistura a 0o durante duas horas e em seguida a 12° de um dia para o outro. Filtrou-se então a mistura, removeram-se os sólidos obtendo-se uma pasta e ressuspendeu-se em acetato de etilo. Fil trou-se a suspensão, lavou-se o filtrado com ácido cítrico IN, solução saturada de cloreto de sódio, solução saturada bicarbonato de sódio, solução saturada de cloreto de sódio e secou -se sobre sulfato de magnésio anidro. Filtrou-se a suspensão e removeram-se os sólidos obtendo-se uma espuma branca, 3,77 g, que se recristalizou de éter etílico e hexano obtendo-se um sólido branco, 3,41 g (92$ de rendimento), ponto de fusão 89-92°. Confirmou-se a estrutura por análise espectral e elementar. /“^7q3= -34,2° (C, 1,06, MeOH).
STA-LEU-NHCHgPh’HC1
Dissolveu-se 2,77 g de B 0C-STA-LEU-NHCH,, Ph em 100 ml de diclorometano que se saturou em seguida com ácido clorídrico anidro gasoso. Após se agitar a 25° durante uma ho ra removeu-se o solvente em vácuo e ressuspendeu-se o resíduo em diclorometano, obtendo-se um sólido cristalino. Diluiu-se a suspensão com éter etílico, filtrou-se e secou-se o sólido em vácuo, 2,24 g, 93$ de rendimento. Confirmou-se a estrutura por análise espectral e elementar. /^<7ρ =-19,1 (Q l,O6,MeOH).
117 -
BOC - STA-NHCHgCH (CH3 ) CHgCH^
Dissolveu-se BOC-STA (27,53 g, 0,1 mole, Patente US 4,397,736) e HOBT^HgO (14,2 g, 0,105 mole) em 4θ ml de DMF. Adicionou-se 300 ml de CHOC1O e arrefeceu-se a mistura a 0°. Adicionou-se uma solução de DCC (21,66 g, 0,105 mole) em 5θ ml de CH2C12 e em seguida S-2-metilbutilamina (12 ml, 0,1 mole). Após se agitar a 0° durante duas horas deixou-se a misturaaquecer a 25° ao longo de 1,5 horas. Filtrou-se a mistura e removeu-se o solvente em vácuo. Dissolveu-se o resíduo em EtOAc, que se lavou com ácido cítrico IN, salmoura, solução saturada de NaHCO^ e salmoura. Secou-se a fase orgânica sobre MgSO^, filtrou-se e removeu-se o sólido obtendo-se uma goma, 36,90 g. Dissolveu-se a goma em EtgO e tratou-se com carvão para se removeram as impurezas com cor. Filtrou-se a suspensão e removeu-se o sólido obtendo-se uma goma, 35,2 g, que era adequada para uso no processo seguinte sem purificação posterior.
STA - NHCHgC H ( CH^ ) CHgC · HC1
Dissolveu-se BOC-STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3 (34,4 g, 0,1 mole) em 250 ml de CH_C1 e fez-se passar ocasionalmen te uma corrente de HC1 gasoso anidro através da solução ao lon go de três horas. Precipitou um sólido da solução que se filtrou, se lavou com CHgClg e se secou a 40 em vacuo obtendoum sólido higroscópico, 21 g. Triturou-se o sólido com mistura de CH2Cl2/Et20, filtrou-se e secou-se a 4o° em vá obtendo-se um sólido branco, 19,34 g. Confirmou-se a es-se uma cuo trutura por análise espectral.
sta-nhch2ch(ch3)ch2ch3
Tratou-se uma solução de 3θ,0 g (0,11 mole)de BOC-STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3 em 250 ml de CH2C12 com HC1 gasoso de meia em meia hora ao longo de um período de três horas. Re moveu-se o solvente sob pressão reduzida e tomou-se o resíduo em 30 ml de HgO e 110 ml de HC1 IN. Lavou-se duas vezes a solução com EtgO, levou-se o pH a 13 com NaOH 2N e extraiu-se
118
duas vezes a solução com EtgO. rado, secou-se e removeu-se o
Lavou-se ο EtgO com NaCl satusolvente sob pressão reduzida obtendo-se 22,3 g de produto sob a forma de um óleo que soli dificou por repouso, 0 material era suficientemente puro para uso em reacçoes subsequentes.

Claims (1)

  1. REIVINDICAÇÕES
    - 1* Processo de preparação de um péptido de fórmu la
    ACYL -X-Y-W-U-V (I) ou um sal de adição de ácido, farmaceuticamente aceitável, de la derivado na qual til)-acetilo), na qual D é
    119 -
    -nch2co2ch3, ch3
    -och3 ,
    -N\ , ou
    -N(CH3)2;
    X é inexistente, PHE, HOMOPHE, NAPHTHYLALA, CYCLOHEXILALA, TYR ou TRP, com a condição de que quando ACYL é DNMA ou na qual D é como acima, X está ausente; Y e
    II
    4 <ϊΗ2)η
    NHjj-NRj^Rg
    S
    -N-ch- , R3 Wn
    NHC-NR, R,.
    í 1 2
    120 - ο ιι -N-CNC- ,
    I F
    NHC-NHNO2
    0 l|
    NHC-ORi II O
    Ϊ
    -NHCHC- , ch2cn í?
    -N-ÇHG- , Rn (ch_)
    3 '| 2'n
    121 ο
    II -N-CHC- , / (?η 24 NHC-SCH
    II
    NCN ί -N-CHC(<k)3
    CH=CH2 |3 II
    NCHC-
    - 122 - |3 ||
    -NCHC- , (fH 2)n
    C-NR. R„
    13 ϊί -NCHCψ2>:
    C-NR II ο
    124
    126
    -NCHC- /
    Μ
    -NCHC- , <
    A
    NHC-NRj^Rg
    -NCHC- ,
    NHC-NHR
    NHC-SCH^
    M
    -NCHC- , ÍO2E1 nas quais n é um inteiro de 2 a 8, Re hidrogénio ou um grupo alquilo de 1 a 3 átomos de carbono,
    R^ e R2 sâocada um independentemente hidrogénio, alquilo inferior de 1 a 4 átomos de carbono, aralquilo, ou arilo, R„ é
    128 hidrogénio ou metilo e é alquilo inferior ou benzilo; W é STA, PHASTA ou CYSTA;
    U é inexistente, LEU, ILE, VAL, N-MeLAU, Ν-MeILE; e
    -nhch2ch(ch3)ch2ch3, -och^, -oc2h3,
    -NHCHCH(CH_)CHOCH„, ou -NHCHOCHO | 3 2 3 2 2W GH20H caracterizado por:
    (a) se fazer reagir uma estatina protegida com BOC com uma amina primária para se formar o composto correspondente protegido com BOC,
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