PT86232B

PT86232B - Processo para a preparacao de uma composicao farmaceutica contendo uma guanina 9-substituida

Info

Publication number: PT86232B
Application number: PT86232A
Authority: PT
Inventors: Martin Cole; Malcolm Richard Boyd; David Sutton
Original assignee: Beecham Group Plc
Priority date: 1986-12-02
Filing date: 1987-11-27
Publication date: 1990-11-07
Also published as: KR880007080A; ATE74011T1; AU606629B2; DK627987D0; ZA878983B; EP0271270B1; JP2724711B2; PT86232A; CA1318850C; GR3004487T3; JPS63145279A; DK627987A; DE3777769D1; EP0271270A2; NZ222741A; US4957733A; IE59943B1; KR960000432B1; DK166715B1; EP0271270A3

Description

presente invento relaciona-se que têm actividade anti-viral.

A EP-A-141927 descreve o composto de formula (A):

ho-ch₂-ch-ch₂-oh (a) e seus sais, ésteres fosfato e seus derivados acilo, como agentes anti-virais:

As pró-drogas do composto de formula (A) são compostos de formula (B);

(B) e seus sais e seus derivados, como definidos sob a formula (A); em que X é alcoxi θ, NB^ ou hidrogénio,. Os com

postos de formula (B), em que X é alcoxi θ ou NH₂ são descritos em EP-A-141927 e os compostos de formula (B), em que X é hidrogénio são descritos em EP-A-182024. Um exem pio particularmente preferido de um composto de formula (B) é aquele em que X é hidrogénio e em que os dois grupos OH estão na forma de derivados acilo, que é descrito no Exemplo 2 de EP-A-182024.

Os interferões são proteínas produzidas por vários tipos de células de mamíferos ou por método de engenharia genética. As suas propriedades, a natureza química e os métodos de preparação e de recuperação têm vindo a ser extensamente estudados e documentados em anos recentes, devido às suas propriedades terapêuticas potencialmente preciosas (Ref. E. Knight Jr, Purification and characterisation of Interferons em Interferon 2, 1980 ed. I., Gressor Academic Press, London; e Antiviral Research 6 (1986) 1-17.

Descobriu-se agora, que a combina ção de um interferão e um composto de formula (A) ou uma pró-droga ou um sal e/ou derivado como atrás definidos, farmaceuticamente aceitáveis, de ambos compostos têm uma boa actividade antiviral. A eficiência de combinação é mai_ or do que pode ser predizível a partir de uma consideração das actividades anti-virais dos componentes individuais e parece que um efeito sinérgico está a ser produzido.

De acordo, com o presente invento fornece um produto farmacêutico que compreende um interferão e um composto de formula (A):

ou uma pró-droga, ou um sal, éster fosfato e/ou derivado acilo farmaceuticamente aceitável, de ambos os compostos numa preparação combinada para uma utilização em simultâneo, separada ou sequencial, numa terapia anti-viral.

Num aspecto preferido, os componentes activos do produto são administrados simultâneamente.

presente invento ainda fornece uma composição farmacêutica, que compreende um interferão e um composto de formula (A) ou uma pró-droga, um seu sal e/ou um seu derivado, em combinação com um suporte farmaceuticamente aceitável.

invento fornece ainda o uso de interferão e um composto de formula (A) ou uma pró-droga ou um seu sal e/ou seu derivado como atrás definido na manufactura de uma preparação combinada para uma utilização em si multâneo, em separado ou sequencial numa terapia anti-viral.

termo derivado acilo é aqui usado para incluir qualquer derivado dos compostos de fórmu-6la (A) no qual um ou mais grupos acilo esteja presente. Estes

derivados estão incluídos como pró-drogas dos compostos de fórmula (A) em adição àqueles derivados que são biologicamente activos per se.

Exemplos de pró-drogas, de sLs e derivados farmaceuticamente aceitáveis, são, como descrito nas referencias das patentes europeias acima mencionadas, o assunto da matéria pela qual estão aqui incaporados em referencia. 0 composto de formula (A) pode também ser uma das fórmulas descritas em EP-216459.

interferão é conhecido em vários tipos e J). Qualquer tipo de interferão pode ser útil no produto e composição do presente invento. As concentrações de interferão são vulgarmente expressas em unidades padrão, que são internacionalmente aceites e documentados, e relacionam-se com a potência de uma dada quantidade de interferão para inibir a replicação de um vírus sob condições padrão.

interferão é preferencialmente sinteticamente preparado, por exemplo por métodos de engenharia genética, e está numa forma farmaceuticamente aceitável. 0 termo forma farmaceuticamente aceitável significa que, inter alia, de um nível farmaceuticamente aceitavel de pureza excluindo os aditivos farmacêuticos normais, como diluentes e suportes, e incluindo nenhum material considerado toxico a níveis de dosagem normais. Um nivel fermaceuticamente aceitavel de pureza geralmente é pelo menos 80% excluindo os aditivos farmacêuticos normais, preferencialmente 75%, mais preferencialmente 90% e ainda mais preferenci almente 95%.

Os produtos e composições acima descritos têm actividade anti-viral, e são potencialmente úteis no tratamento de infecções causadas pelo vírus do herpes, como o herpes simplex do tipo 1, o herpes simples do tipo 2, vírus da varicela zoster, o vírus Epstein-Barr e o cito-megalovírus.

Os compostos de formula (A) , as pró-drogas os sais e derivados podem ser preparados como descrito nas referencias das Patentes Europeias acima men cionadas.

produto do invento pode ser administrado por via.oral a humanos e pode ser composto na forma de um xarope, comprimido ou cápsula para tanto a administração em separado, sequencial ou em simultâneo. Quando o produto ou também o seu componente activo está na forma de um comprimido, qualquer suporte farmacêutico adequado para formulação dessas composições solidas pode ser usado, por exemplo estearato de magnésio, amido, lactose, glucose, arroz, farinha e giz.

Tanto o produto como o seu componente activo podem também estar na forma de uma cápsula ingestível, por exemplo de gelatina, para conter o(s) composto (s) ou na forma de um xarope, de uma solução ou de uma suspensão. Os suportes farmacêuticos líguidos adequados incluem alcoól etilico, glicerina, água normal ou salina aos quais, agentes de gosto ou cor podem ser adicionados para formar as xaropes.

Para a administração parenteral, as formas de dosagem unitárias fluidas são preparadas com contendo um produto do presente invento ou um seu componente activo e um veículo estéril. 0 produto ou componente, dependendo no veiculo e de concentração, pode estar tanto em suspensão como dissolvido. As soluções parenterais são normalmente preparadas por dissolução do produto ou do ceu componente num veiculo e esterilizados por filtração antes de irem encher um frasco adequado ou âmpola e serem seladas.

Vantajosamente, adjuvantes como um local anestético., agentes de conservação e de tampão são também dissolvidos num veiculo. Para aumentar, a estabilidade, a composição (componentes separados, ou misturados) podem ser congelados depois do enchimento nos frascos e a água ser removida sob vacuo.

As suspensões parenterais são preparadas substancialmente da mesma maneira, excepto que o produto ou seu componente é suspenso num veiculo em vez de ser dissolvido e esterilizado por exposição ao oxido de etileno, antes de ser suspenso num veículo estéril.

Vantajosamente, um surfactante ou um agente de humidade é incluido na composição para facilitar a distribuição uniforme do composto do invento.

As formulações parenterais preferj das incluem formulações aquosas usando água esterilizada normal ou salina, a um pH à cerca de 7,4.

-9É composições sejam usualmente escritas ou impressas para a co a que dizem respeito.

de prática corrente, que as acompanhadas por intruções utilização; na tratamento médi

A composição pode ser também formulada para aplicação tópica há pele ou nos olhos. Para a aplicação tópica na pele, a composição pode estar na forma de creme, loção, ou unguento.

Estas formulações podem ser formulações convencionais bem conhecidas neste ramo, por exemplo como decsrito en livros padrão farmacêuticos e cosméticos, como Harry's Cosmeticology publicado por Leonard Hill Books e pela British Pharmacopaeia. Uma formulação particularmente vantajosa para aplicação tópica na pele, inclui um detergente, o lauril-sulfato de sodio como um ingrediente adicional. A composição para aplicação nos olhos pode ser uma composição com gotas para os olhos convencional, bem conhecida neste ramo, ou uma composição de unguento adicional .

Uma quantidade de interferão, co mo acima referido, é vulgarmente expressa em unidades padrão. Geralmente as composições contendo desde cerca de 50 -50.000 unidades de interferão por miligrama de composto de formula (A) ou de uma pró-droga, ou de um seu sal, de ester fosfato, de derivado acilo ou de uma pró-droga são eficazes. As composições preferidas são aquelas contendo desde cerca de 1.000 - 200.000 unidades de interferão por miligrama de composto de fórmula (A) ou de uma pró-droga, ou de um seu sal, éster fosfato, derivado do acilo.

Preferencialmente, o produto deste invento está na forma de dosagem unitaria ou em qualquer outra forma, pode ser administrado em doses simples.

Uma unidade de dosagem adequada pode conter desde 50 mg a 1 g de ingredientes activos totais, por exemplo 100 a 500 mg. Estas doses podem ser administra das 1 a 4 vezes por dia oú mais vulgarmente 2 ou 3 vezes por dia. A dose eficaz do composto estará geralmente na gama desde 0,2 a 40 mg de drogas totais por kilograma de peso corporal por dia ou mais usualmente 10 a 20 mg/kg por dia.

É preferido tratar a infecção com doses relativamente largas de produto de combinação no início, de modo a limitar as mudanças de desenvolvimento de especies virais resistentes, na infecção.

Para adminsitração tópica, unguen tos ou cremes em bases inertes convencionais (por exemplo, vaselina, etc) podem ser formulados, numa maneira conhecida. Uma quantidade desde cerca de 0,10-10 por cento em peso das drogas totais, fornece uma concentração adeguada num unguento ou creme, para administração tópica 1-4 vezes por dia. Estas formulações topicamente aplicadas são um reservatório eficaz de drogas activas contra o local infec tado, de modo que as concentrações das drogas nas formulações não é critica, desde que um nível de dosagem perigoso não seja usado a rodear áreas de pele.

É ainda de apreciarque cada componente do produto do invento pode ser administrado por uma via diferente.

Por exemplo, o composto de formu la (A) ou uma pró-droga, por via oral e o interferão por uma via intra-muscular.

invento também fornece um método de tratamento de infecções virais num ser humano ou não-humano, que compreende a administração ao animal duma quantidade eficaz, não-toxica de uma combinação de um inter ferão e de um composto de formula (A) ou de uma sua pró-droga, ou de um seu sal, ester fosfato, derivado acilo, farmaceuticamente aceitáveis, de ambos os compostos menciona dos.

presente invento fornece ainda um método de tratamento de infecções virais em seres humanos e não-humanos, que compreende a administração ao animal de uma quantidade anti-viral eficaz, não tóxico de uma composição farmacêutica, que compreende um interferão e um composto de formula (A) ou de uma sua pró-droga, ou de um sal, ester fosfato, derivado acilo farmaceuticamente aceitáveis de ambos os compostos mencionados, em combinação com um suporte farmaceuticamente aceitável.

A eficiência de combinação do invento é ilustrada pelos dados do teste biológico seguinte

-12DADOS DO TESTE BIOLOGICO

Teste para sinergia entre o composto de fórmula (A) e inter ferão humano contra o vírus simplex do herpes tipos 1 e 2 em ensaios de redução em placa em células MRC-5

As células MRC-5 cresceram até à confluência de 24 multi-pratos fundos diâmetro do fundo -1,5 cm). As mono-camadas de células regadas foram cada uma infectadas com aproximadamente 50-100 partículas infecciosas do virus simples do herpes 1 ou 2 (HSV-1, estirpe SC16; HSV, estirpe MS), em 100 pl de tampão fosfato salino. O virus foi adsorvido durante 1 hora à temperatura ambiente. Depois da absorção, o inóculum residual foi removido a partir de cada fundo do prato colocado com 0,5 ml de Eagle's MEM que contém 5% de soro de bezerro recém-nascido e 0,9% de agarose (A 37). Quando a agarose assentou, diluições dos compostos teste, que foram preparados no Eagle's MEM (que contem 5% de soro .de bezerro recém-nascido) , foram adi_ cionados, cada fundo do prato recebendo 0,25 ml de cada componente isto é, um total de 0,5 ml. O composto de formu la (A) foi diluido para dar as seguintes series de concentra ções: 12;4; 1,2; 0,4; 0,12; e 0,04 ug/ml, as concentrações i finais no ensaio abrangeram, por conseguinte, entre 3 jig/ ml a 0,01 ^ig/ml. O interferão humano foi diluído para dar as seguintes series de concentrações: 4000, 1200, 400, 120 e 40 IU/ml., as concentrações finais no ensaio abrangerem, por isso, entre 1000 e lOlU/ml. As culturas infectadas foram incubadas a 37°C numa atmosfera humidificada de 5% de CC>2 em ar, até que as placas estejam claramente visi^ veis (2-3 dias para o HSV-1, usualmente 1 dia para o HSV-2). As culturas foram fixadas em formal salino, as camadas de agarose foram cuidadosamente lavadas, e depois as mono-

-camadas de células foram tingidas com carbol-fucsina. Um microscópio típico foi usado para contar as placas. Por referencia ao número de placas em mono-camadas de controle de vírus (culturas não-tratadas), a percentagem de redução por contagem das placas para cada combinação foi calculada .

SINERGIA ENTRE 0 COMPOSTO A E 0 INTERFERÃO HUMANO CONTRA HSV-1 e HSV-2 EM CÉLULAS MRC-5

a. Actividade contra HSV-1 (ug/ml) de A na presença de

IC *

0	10	30	lOOlU/ml	de interferão humano (IFN)
0,34	0,04	0,02	0,01	(para IFNoó, ; Wellferon**
0,45	0,34	0,19	0,14	( IFNJ3 ; Fiblaferon 5***)
0,40	0,22	0,19	0,19	( IFN γ- , Amgen

Biologicals***)

b. Actividade contra o HSV-2

^IC5o* ^*	de A na presença de
0	10	30	lOOIU/ml de interferão humano (IFN)
0,62	0,29	0,21	0,09 (para IFN; Wellferon***)
0,64	0,62	0,39	0,41 (para IFNp; Fiblaferon 5***)
0,44	0,34	0,29	0,27 (para IFNy ; Amgen

Biologicals***) *

é a concentração requerida para reduzir a contagem da placa de controle (não-tratado) de 50%.

* *

O IFNç/ testado a lOOIU/ml na ausência do composto A contra HSV-1 reduz a contagem de placa relativamente à de controle de/em 18%., ***

O IFN testado a 100 IU/ML, na ausência do composto

A produz nenhum efeito na contagem da placa.

Claims

ia.- Processo para a preparação de uma composição farmacêutica, que compreende um interferão e um composto de formula (A):

HO-CH -CH-CH -OH
2 2 nh₂ (A) ou uma pró-droga, ou um sal, ester fosfato e/ou um derivado acilo farmaceuticamente aceitáveis de ambos os compostos anteriores,e um suporte farmaceuticamente aceitável, caracterizado por se misturar os ingredientes activos e o suporte em condições de pressão e temperatura não extremas, preferencialmente, à temperatura ambiente e à pressão atmojs férica.

2®.- Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por se preparar uma composição, que compreende um interferão e um composto de formula (A), como definido na reivindicação 1, ou os seus sais de sodio.
3â.- Processo de acordo com a rei. vindicação 1, caracterizado por se preparar uma composição que compreende um interferão e uma pró-droga do composto de formula (A), com a fórmula (B):

ho-ch₂-ch-ch₂-oh (B) em que

X é hidrogénio, ou um seu sal, éster fosfato ou um derivado acilo farmaceuticamente aceitáveis.
4^.- Processo de acordo com a reivindicação 3, caracterizado por se preparar uma composição, em que no composto de formula (B), X é hidrogénio e em que os dois grupos OH estão na forma de derivados acetjL lo.
5â.- Processo de acordo com quajL quer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado por se preparar uma composição, em que o interferão é preparado sinteticamente.

-176ê.~ Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por se preparar uma composição que é formulada para aplicação tópica à pele, e que incorpora lauril-sulfato de sodio como um ingrediente adicional.
7i.- Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por se preparar uma composição que contem 1000 - 200.000 unidades de interferão por miligrama do composto de formula (A) ou de uma sua pró-dr£ ga ou de um seu sal e/ou derivado farmaceuticamente aceitáveis, como foi definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 4.
8â.- Método para o tratamento de infecções virais num ser humano ou não-humano, caracteriza do por compreender a administração ao animal, duma quantidade eficaz não-toxica, de uma combinação, de interferão e de um composto de formula (A) ou de uma sua pró-droga, ou de um seu derivado como definido na reivindicação 1, sendo a gama de dosagem de 0,2 a 40 mg de drogas totais por quilograma de peso corporal por dia ou, mais usualmente, de 10 a 20 mg por quilograma por dia.