PT85537B - Processo para a preparacao de um sistema de administracao farmaceutica contendo peptidos apresentando quimiotaxia - Google Patents
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Description
THE BOARD OF REGENTS UNIVERSITY OF TEXAS SYSTEM
PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE UM SISTEMA DE ADMINISTRAÇÃO FARMACÊUTICA CONTENDO PEPTIDOS APRESENTANDO QUIMIOTAXIA todos de dispersão convencionais. Os sistemas de adminis traçao farmacêutica quando aplicados sob a forma de lipo somas estimulam a actividade dos macrófagos o que é espe cialmente útil na terapêutica do cancro para combater ce lulas tumorais metastáticas e para o tratamento de infec çoes crónicas.
presente invento relaciona-se com sistemas de administraçao farmacêutica consistindo em peptidos apresentando quimiotaxia e fosfolípidos, com um processo para a preparação destes sistemas de administraçao e com o seu método de utilização.
Lista de Abreviaturas
FMLP ; N-formil-L-metionil-L-leucil-L-fenilalanina
ULV | : Liposomas unilamelares (vesículas) |
MLV | : Liposomas multilamelares |
PC | : Fosfatidilcolina |
PS | : Fosfatidilserina |
S.D. : Desvio padrao
CMEM | Meio essencial mínimo completo |
/-125l7ldUrd | 12 5 -7 / I/iododesoxiuridina |
HBSS | Solução salina equilibrada de Hank |
cpm | contagens por minuto |
dpm | desintegrações por minuto |
NEN | New England Nuclear |
FCS | Soro de Vitelo Fetal |
Recentemente, oligopeptidos semelhantes aos produzidos pelas células procariontes (isto é bactérias, vírus e micobacterias) revelaram ser estimulantes potentes da função dos macrófagos e dos neutrófilos (Rossman et al., Am. Rev. Respir. Dis. 126 (1982) 136). Estudos in vji tro revelaram que peptidos formilo, em particular FMLP, esti^ mulam a agregaçao das células, a quimiotaxia, a secreção de enzima lisosómlco, e libertação extracelular de radicais oxjL génio destes tipos de células. Além disso, sao estimuladas outras funções celulares relacionadas com a motilidade (por exemplo aderência e expansao) quando as células sao incubadas com estes peptidos N-formilo.
Foram descritos liposomas na bibliografia em numerosas publicações. A sua estrutura e utilização constituíram o tema de trabalhos de investigação inten sivos. Dependendo da sua estrutura de revestimento (da estru. tura da sua membrana), é feita uma distinção entre liposomas ou vesículas unilamelares (ULV) e liposomas ou vesículas multji lamelares (MLV). Nalgumas publicações, a expressão vesícula aplica-se estritamente a liposomas unilamelares. ULV têm uma membrana esférica consistindo numa dupla camada de lípidos, especialmente fosfolípidos, enquanto que MLV possuem uma mem brana esférica consistindo em várias camadas duplas organizadas numa forma semelhante à da casca de cebola.
A membrana esférica pode consistir em fosfolípidos tais como fosfatidilcolina, fosfatidiletanol^ amina ou ácido fosfatídico e facultativamente lípidos neutros tais como o colesterol. Esta membrana encapsula um volume interno contendo a fase aquosa e o(s) composto(s) farmacológicamente activo(s).
Dependendo do seu grau de lipofilidade e de outros parâmetros, tais como temperatura ou concentração, os compostos encapsulados estão presentes na fase aquosa incluída e/ou na(s) camada(s) dupla(s).
Existe um grande interesse na utilização terapêutica ou diagnóstica de liposomas como veículos de ingredientes activos de muitos tipos difeientes (varia dos). Consequentemente, os liposomas foram propostos como V£ ículos para proteínas, poe exemplo anticorpos, ou enzimas, hormonas, imunomoduladores, vitaminas, ou, para fins analíticos, como veículos para compostos marcados com isótopos ra dioactivos. Por exemplo, na Apresentação da Patente dos E.U.A. No. 3.993.754, è apresentado um processo quimioterapêutico qie é útil para o tratamento de células tumorais usando liposomas como veículos.
No estudo geral publicado por G. Gregoriadis, Liposome Technology, Vol.II, Incorporation of Drugs, Proteins and Genetic Material, CRC Press 1984, foram descritos sistemas de administraçao farmacêuticos tendo como base liposomas. Esses sistemas têm a vantagem de material bi£ logicamente activo poder ser introduzido em tecidos por fag£ citose, especilmente em tecidos do sistema reticulo-endotelial. Por exemplo, é conhecido um mecanismo de transporte por meio do qual sao introduzidos antibióticos em tecidos infecta_ dos por fagocitose causando desse modo uma remoção ou destrui^ çao acelerada do microorganismo infeccioso. A endocitose cons titui também um mecanismo útil no combate a centros de infla^ mação. Produtos farmacêuticos antireumatismais encapsulados em lisosomas sao de preferência introduzidos em tecidos infec: tados. Além disso, podem ser introduzidos agentes citostáticos em orgãos específicos do sistema reticulo-endotelial (fí_ gado, baço ou medula). Adicionalmente, devido a filtraçao pa_ ra os capilares do pulmão e subsequente transporte por monocji tos, migratórios, materiais biologicamente activos, por exem pio compostos possuindo propriedades imunomodulatórias, podem ser concentrados nos macrofagos alveolares. Isto resulta numa acçao melhorada sobre os tumores metastáticos do pulmão e nu ma redução simultânea da toxicidade.
A destruição de tumores mediada por macrofagos pode ser aumentada por localizaçao destes células eficazes no local do tumor. 0 aumento da infiltração de tumores por macrofagos pode ser alcançada se se concentrar um factor que apresente quimiotaxia na vizinhança do tumor. Isto pode ser conseguido quer por administraçao de congugados ligados covalentemente do factor que apresenta quimiotaxia e anticorpos reactivos com os antigénios superficiais 'do tumor (Obrist, R. and Sandberg, R., Cell. Immunol. 81 (1983) 169) ou fornecendo os factores que apresentam quimiotaxia a células eficazes (efectoras), as quais após localizaçao no local do tumor possam libertar o factor para o meio.
Constituem o objectivo do presente invento sistemas de administraçao terapêutica cujos componen tes, quando aplicados sob a froma de liposomas, sao enriquecidos ou concentrados no pulmão e/ou fígado seguindo-se endçj citose dos macrófagos e, consequentemente, activam os monoci tos do sangue e por esse meio macrófagos, por exemplo macrofagos alveolares ou peritoneais. Verificou-se que os liposomas contendo dispersões aquosas consistindo em fosfolípidos e peptidos apresentando quimiotaxia aumentam a activaçao de macrófagos em comparaçao com soluçoes aquosas contendo pepti_ dos apresentando quimiotaxia nao encapsulados.
presente invento relaciona-se com sistemas de administraçao farmacêuticos consistindo em
a) um fosfolípido com a fórmula
sn | 1 |
2 3 |
(I), em que n é um, dois ou três, R^ e R2 independentemente um do outro representam alquilo, alquenilo ou acilo tendo cada um deles 10-20 átomos de carbono, e Ϊ® é o catiao de uma base farmacêuticamente aceitável,
b) um fosfolípido com a fórmula
sn | 1 |
2 | |
3 |
CH2-O-R1
R2-0-CH
CH2-O-p-o-(c H„ n 2n
(II), em que n á dois, três ou quatro, Rj e R2 sao definidos como atrás e Rg, R^ e Rg representam hidrogénio ou Ci-C^-alquilo, .
c) um peptido apresentando quimiotaxia combinado com produtos farmacêuticos seleccionados a partir do grupo consistindo em agentes antiflogísticos, antibióticos, anti-leishmaníases, anti-micóticos, anti-neoplásicos e imunomoduladores e, facujL tativamente, uma solução veículo farmacêuticamente aceitável tamponada para pH 7,0 - 7,8 e/ou, facultativamente, aditivos farmacêuticamente aceitáveis.
No contexto da descrição do preseri te invento, as expressões gerais utilizadas aqui atrás e aqui a seguir têm de preferência os significados que se seguem:
A expressão inferior usada em li. gaçao com radicais orgânicos, por exemplo alquilo inferior, alquileno inferior, alcoxi inferior, alcanoilo inferior, etc, significa que esses radicais orgânicos, a nao ser que seja expressamente definido diferentemente, contêm até 7, de preferência até 4, átomos de carbono.
A nomenclatura dos fosfolípidos com as fórmulas I e II está de acordo com as recomendações da IUPAC e IUB Commission on Biochemical Nomenclature (CBN) de acordo com o Eur. J. of Biochem. 79, 11-21 (1979) Nomenclatura de Lipidos (nomenclatura-sn, contagem estereoespecífica).
Num fosfolípido com a fórmula I (componente a)) o grupo ~(CnH2n)- é alquileno com cadeia linear ou ramificada, por exemplo 1,1 oú 1,2-etileno, 1,1-, 1,2ou 1,3-propileno ou, de preferência, metileno (n=l).
Alquilo Rj e R2 θ de preferência de cadeia linear com um número par entre 10 e 20 átomos de <ar bono, por exemplo n-decilo, n-dodecilo, n-tetradecilo, n-hexa. decilo, n-octadecilo ou n-icosilo.
Alquenilo e R2 θ de preferência de cadeia linear com um número par entre 12 e 20 átomos de carbono e uma dupla ligaçao, por exemplo 9-cis-dodecenilo, 9-cis-tetradecenilo, 9-cis-hexadecenilo, 6-cis, 6-trans-, 9-cis- ou 9-transoctadecenilo ou 9-cis-icosenilo.
Acilo Rj e R2 é de preferência de cadeia linear com um número par entre 10 e 20 átomos de carbono, por exemplo C3g-C2Q-alcanoilo ou CjQ-C2Q-alquenoilo ten do uma dupla ligaçao.
Alcanoilo R^ e Rg é de preferência n-decanoilo, n-dodecanoilo, n-tetradecanoilo, n-hexadecanoilo n-octadecanoilo e n-icosanoilo.
Alquenoilo R^ e Rg é de preferência 9-cis-dodecenoilo, 9-cis-tetradecenoilo, 9-cis-hexadecenoilo, 6-cis-, 6-trans-, 9-cis-, ou 9-trans-octadecenoilo, 11-cis-octadecenoilo e 9-cis-icosenoilo.
catiao y© de uma base farmacêuticamerte aceitável ê, por exemplo, um iao de metal alcalino, por exemplo o iao lítio, sódio ou potássio, o iao amónio, um iao mono-, di-, ou tri-Ci-C^-alquilamónio, por exemplo o iao trimetil-, etil-, dietil-, ou trietilamonio, um iao 2-hidroxietiltri-Gy-C^-alquilamónio, por exemplo o iao colinilo ou o 2-hidroxietLlamónio, ou o catiao de um amino ácido básico, por exemplo lisina ou argiginina.
Preferidos sao fosfolipidos com a fórmula I isolados a partir de fontes naturais em que R^ e Rg sao grupos CjQ-CgQalquanoilo ou CjQ-Cgg-alquenoilo diferentes ou iguais, por exemplo n-dodecanoilo, n-tetradecanoilo, n-hexadecanoilo, ou n-octadecanoilo, ou 9-cis-dodecenoilo, 9-cis-tetradecenoilo, 9-cis-hexadecenoilo, 6-cis-, 6-trans-9-cis-, 9-trans- ou 11-cis-octadecenoilo ou 9-cis-icosenoilo, por exemplo fosfatidilserina a partir de cérebro bovino e fosfolii pidos sintéticos com a fórmula I em que R^ e Rg sao grupos Cio-CgQ-alquendlo idênticos, por exemplo 9-cis-hexadecenoilç, 6-cis-, 6-trans-, 9-cis-, 9-trans- ou 11-cis-octadecenoilo, por exemplo 1,2-di-(9-cis-octadecenoil)-3-sn-fosfatidil-(S)-serina de sódio.
Num fosfolípido com a fórmula II (componente b)) o grupo ”(θηΗ2η)- θ alquileno de cadeia linear ou ramificada, por exemplo 1,1-, 1,2- ou 1,3-propileno
ou 1,2-, 1,3- ou 1,4-butileno ou, de preferência, 1,2-etileno (n=2).
Num fosfolípido com a fórmula II os grupos R| e R2 tem as mesmas definições que R^ e R2 no fojs folípido com a fórmula I. Os grupos R^, R^ e R^ são de pref£ rência hidrogénio (cefalinas) ou metilo (lecitinas).
Preferidos sao fosfolípidos com a fórmula II, em que R^, R^ e R^ sao hidrogénio ou metilo, is£ lados a partir de fontes naturais a partir de plantas ou de animais, e em que R^ e R2 sao grupos CjQ-C2Q-alcanoilo ou C10-C20-alquenoilo diferentes ou idênticos, por exemplo n-d<q decanoilo, n-tetradecanoilo- n-hexadecanoilo, ou n-octadecanoilo, ou 9-cis-dodecenoilo, 9-cis-tetradecenoilo, 9-cis-hexadecenoilo, 6-cis-, 6-trans-, 9-cis-,9-trans- ou 11-cis-octa. decenoilo, ou 9-cis-icosenoilo, por exemplo lecitina ou cefalina a partir de ovos de galinha ou lecitina de soja, fosfolípidos sintéticos (II) em que R^ e R2 sao grupos -alcanoilo idênticos tal como foi mencionado atrás, e fosfolípidos sintéticos (II), em que R^ é C^Q-C2Q-alcanoilo, por exemplo n-dodecanoilo, n-tetradecanoilo, n-hexadecanoilo, ou n-octadecanoilo, e R2 é C^g-C2Q-alquenoilo, por exemplo 9-ci£ -hexadecenoilo, 6-cis-, 6-trans-, 9-cis-, 9-trans- ou 11-ciis -octadecenoilo, especialmente l-n-haxadecanoil-2-(9-cis-octa. decenoil)-3-sn-fosfatidilcolina.
Os fosfopípidos compreendidos no sistema de administraçao farmacêutica do presente invento sao dispersos em fase aquosa sob a forma de liposomas.
Peptidos apresentando quimiotaxia são, por exemplo, tri- ou decapeptidos em que o grupo amino ter minai foi substituído com um grupo terc-butoxi-carbonil (BOC) tal como BOC-Met-Leu-Fe-OH, BOC-Nleu-Fe-OH, ou BOC-Fe-Leu-Fe
-Leu-Fe-OH ou sao di- a decapeptidos em que o grupo terminal-N foi substituido com um grupo formilo tal como CHO-Ala-Gli-Ser-Glu-OH, CHO-Met-Ala-OH, CHO-Met-Leu-Tir-OH, CHO-Met-Met-Met-OH, CHO-Met-Fe-OH, CHO-Met-Fe-Met-OH, CHO-Met-Fe-Met-OH, GHO-Met-Tir-OH, CHO-Met-Val-OH, CHO-Nleu-Leu-Fe-OH(Nleu = nor leucina), CHO-Nleu-leu-Nleu-Tir-Lis-OH, CHO-Nleu-leu-Fe-Tir-0H, CHO-Nleu-leu-Fe-(iodo)Tir-OH, CHO-Ala-Leu-Fe-OH, CHO-Val -Leu-Fe-OH ou CHO-Cil-Leu-Fe-OH(Cil s cicloleucina), CHO-Val-Leu-Fe-OH, CHO-Nleu-Leu-Fe-Nleu-Tir-LisOH, ou CHO-Met-Fe-OH (FMP).
Preferidos sao tri- a decapeptidos apresentando quimiotaxia em que o grupo amino terminal foi substituido com um grupo formilo e em que a sequência primária é Met-Leu-Fe tal como ester CHO-Met-Leu-Fe-metilico, CH() Met-Leu-Fe-benzamida, éster CHO-Met-Leu-Fe-benzilico, CHO-Met_ -Leu-Fe-Fe-OH, ou CHO-Met-Leu-Fe-Lis-OH.
mais preferido é CHO-Met-Leu-Fe-0H (FMLP).
Os peptidos apresentando quimiota xia sao administrados sob a forma de liposomas. Os liposomas encapsulam estes peptidos ou encapsulam os peptidos apresentando quimiotaxia em combinação com produtos farmacêuticos seleccionados entre o grupo consistindo em antiflogísticos, antibióticos, anti-leishmaniases, anti-micoticos, anti-neoplasicos e imunomoduladores.
Os produtos farmacêuticos do grupo compreendendo antiflogísticos sao, por exemplo, glucocorticoides, por exemplo cortisona, hidrocortisona, prednisona, prednisolona, fluorcortolona, triamcinolona, metilprednisolona, prednilideno, parametasona, dexametasona, betametasona, beclometasona, fluprednilideno, desoximetasona, fluocinolona, flumetasona, diflucortolone, clocortolone, clobetasol ou éster fluocortin butílico, inibidores da inflamaçao nao-esteroi des (NSAID) a partir do grupo compreendendo sais de ácido fenilacético substituido ou sais de ácido 2-fenilpropiónico, por exemplo alclofenac, ibufenac, ibuprofen, clindanac, fenclorac, cetoprofen, fenoprofen, indoprofen, fenclofenac, diclofenac, flurbiprofen, pirprofen, naproxen, benoxaprofen, carprofen ou cicloprofen, derivados do ácido antranilico, por exemplo com a fórmula . A zC00H
I íí
(III) em
que Rp R2 uns dos outros, hidrogénio, metilo tilo, por exemplo, ácido mefenâmico, do tolfenâmico ou ácido meclofenâmico, cotínico substituídos em anilino, clonixin ou flunixin, ácidos heteroarilacéticos arilo é um grupo 2-indol-3-ilo ou pirrol-2-ilo, indometacina, oxmetacina,intrazol, acemetazina, zomepirac, tolmetin, colpirac ou ácido tiaprofénico, indenilacético do tipo sulindac e ácidos heteroariloxiacétite e Rg representam cada um deles, independentemen , cloro, ou trifluoromeácido flufenâmico, áciderivados do ácido njí por exemplo ácido miflumico, em que heterja por exemplo cinmetacina, um ácido cos, por exemplo benzadac.
Os produtos farmacêuticos entre o grupo compreendendo antibióticos sao, por exemplo, antibióti_ cos tetraciclina com a fórmula Rs\R\ /42 /<ch3)2 ZOH ! η i í ii / \ / /:\
OÍ 8 of C0SHR‘ (V) em que representa hidrogénio ou pirrolidin-l-il-metilo, R2 representa hidrogénio ou hidroxi, R^ representa hidrogénio, hidroxi ou metilo, R^ representa hidrogénio ou metilo e R^ representa hidrogénio, cloro ou dimetilamino, por exemplo clortetraciclina, oxitetraciclina, tetraciclina, demetilclortetraciclina, metaciclina, doxiciclina,minociclina ou rolitetraciclina, aminoglicosidos, por exemplo canamicina, amicaci^ na, gentamicina C^a, C2, ou Cp sisomicina, netilmicina, espectinomocina, estreptomicina, tobramicina, neomicina B, di_ becacina ou canendomicina, macrólidos, por exemplo maridomicina ou eritromicina, lincomicinas, por exemplo clindamicina ou lincomicina, ácido penicilânico (6-APA)- e derivados -(7-ACA) do ácido cefalosporânico tendo grupos 6β - ou 7/3-acilamino, respectivamente, que estão presente em derivados do ácido 6 β-acilaminopenicilanico ou do ácido 7β -acilaminocefalosporânico que se podem obter fermentativamente, semi
-sinteticamente ou totalmente sinteticamente e/ou derivados do ácido 7 -acilaminocefalosporânico que sao modificados na posiçao-3, por exemplo derivados do ácido penicilânico que se tornaram conhecidos sob os nomes de penicilina G ou V, tal oomo feneticilina, propicilina, nafcilina, oxicilina, cloxacilina, diclocilina, flucloxacilina, ciclacilina, epicilina, mecilinam, meticilina, azlocilina, sulbenicilina, ticarcilina, mezlocilina, piperacilina, carindacilina, azidocilina, ou cicLacji lina, ou derivados da cefalosporina que se tornaram conhecidos sob os nomes cefaclor, cefuroxime, cefazlur, cefacetrilo, cefazolin, cefalexina, cefadroxil, cefaloglicina, cefoxitina, cefaloridina, cefsulodina, cefotiam, ceftazidina, cefonicid, cefotaxima, cefmenoxima, ceftizoxima, cefíLotina, cefradine, cefamandol, cefanona, cefapirina, cefroxadin, cefatrizina, ce fazedona, ceftrixon ou ceforanid, e outros antibióticos β-lac_ tâmicos do tipo ciavam, penem ou carbapenem, por exemplo moxa lactam, ácido clavulânico, nocardicina A, sulbactam, aztreonam ou tienamicina, e antibióticos do tipo bicozamicina, novobiocina, cloramfenicol ou tiamfenicol, rifampicina, fosfomicina, colistina ou vancomicina.
Os produtos farmacêuticos entre o grupo compreendendo agentes antileishmaníases sao, por exemplo, compostos de antimónio, por exemplo tártaro emético (tái? trato de antimonil potássio), estibofen, estibocaptãto de só_ dio e estibogluconato de sódio.
Os produtos farmacêuticos entre o grupo compreendendo antimicóticos sao por exemplo, derivados do ácido tiocarbónico, por exemplo dibenztiona, tolnaftato, ou tolciclato, derivados do imidazole, por exemplo clotrimazole, miconazole, econazole, isoconazole ou cetoconazole ou antibióticos polieno, por exemplo nistatina, natamicina ou anfotericina B.
| cn |cn
Os produtos farmacêuticos entre o grupo compreendendo antineoplásicos sao, por exemplo, agentes de alquilaçao tendo o grupo bis-(2-cloroetil)-amina, por exem pio clorraetina, clorambucil, melfalan, uramustina, manomustA na, fosfato de estramustina, óxido de mecloretamina, ciclofo famida, ifosfamida ou trifosfamida, agentes de alquilaçao po suindo a estrutura aziridina, por exemplo tretamina, tio-tepa, triaziquona ou mitomicina, ésteres de ácido metanossulfónico de alquilaçao, por exemplo bussulfano, derivados de N-alquil-N-nitrosoureia de alquilaçao, por exemplo carmustina, lomustina, semustina ou estreptozotocina e agentes de alquilaçao do mitobronitol, do tipo decarbazina ou procarbazina, antimetabolitos do tipo do ácido fõlico, por exemplo metotrexato, derivados da purina, por exemplo mercaptopurina, tioguanina, azatioprina, tiamiprina, vidarabina ou puromicina, derivados da pirimidina, por exemplo fluorouracilo, lfoxuridina, tegafur, citarabina, idoxuridina, flucitosina, antibióticos que sao usados na quimioterapia do cancro, por exemplo dactinonri cina, daunorubicina, doxorubicina, mitramicina, bleomicina A2 ou B2 ou etoposido, e alcaloides vinca, por exemplo vincristji na, facultativamente em combinação com clormetamina, prednisolona ou prednisona e procarbazina.
Os imunomoduladores sao, por exemplo, peptidos muramilo, por exemplo dipeptidos muramilo ou tripeptidos muramilo, especialmente com a fórmula
Ra
h,oh (VI) em que X representa os grupos -C(-O)- ou -0(=0)-0-, R^ representa o grupo L-Ala-D-isoGln-L-Ala-2-(1,2-dipalmitolil-sn-glicero-3-hidroxifosforiloxi)-etilamida, o grupo L-Ala-DGlu(Cy-L-Ala-2-( 1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3-hidroxif osf oril_o xi)-etilamida, o grupo L-Ala-D-isoGlnOH, o grupo ester L-Ala-D-GlnNH2“ <x-n-butílico, o grupo L-Ala-D-isoGln-L-(estearoil)Lis, o grupo éster L-Val-D-Gln-NI^-<x-n-metílico, o grupo e£ ter L-Ala-D-isoGln-L-Ala-1,2-dipalmitoil-sn-glicerínico ou o grupo éster L-Ala-D-isoGln-L-Ala-colesterolico, R2 representa hidrogénio, metilo ou n-propilo, R^ representa hidrogénio, n-estearoilo, 10-(2,3-dimetoxi-l,4-dioxo-5-metil)-2,5-ciclohexadienoilo, 2-behenoiloxi-2-metilpropanoilo ou n-octanoilo, R^ representa hidrogénio ou n-octanoilo, R^ representa C|-C^-alquilo e Rg representa hidrogénio ou C|-C4-alquilo e os seus correspondentes derivados 2-palmitoiltio, lipopeptidos possuindo propriedades imunomoduladoras do tipo n-lauroil-L-Ala-D-isoGln-(m-DAP-Gli)-NH^ , n-lauroil-L-Ala-D-isoGln-(L-DAPGli)-NH2» n-lauroil-L-Ala-D-isoGln-(L-Lis-D-Ala)-NH2, n-octa noil-L-Ala-D-isoGln-(L-Lis-D-Ala)-NH2 ou palmitoil-Cis-((2R)-2,3-dilauroiloxi-propil)-Ala-D-Glu-(gli-taurino-Na)-NH2, ou saollinfoquinas que sao segregadas por linfócitos, monocitos ou macrófagos quando estes sao estimulados por antigénios ou por mitogénios, etc.
grupo compreendendo linfoquinas inclui, por exemplo, tipos conhecidos interferon, especialmente interferon-gama humano natural ou recombinante, por exemplo interferon-gama humano que pode ser obtido de acordo com os Requerimentos das Patentes Europeias 63.482, 77.670, 83.777, 88.540, 89.676, 95.350, 99.084, 110.044 e 112.967 e Requerimentos Internacionais (PCT) W0 83/04.053 e W0 84/02.129.
Ê preferido 0 interferon-gama humano recombinante ds acordo com o Requerimento da Patente Europeia 121.157 tendo a seguinte sequência de amino ácidos:
H2N-C i s - Tir-C i s - Gln-A s p - Pr o-T i r - Val-G 1 n - Glu-A 1 a - Glu-A s n - Leu-L i s -LisTir-Fe-Asn-Ala-Gli-His-Ser-Asp-Val-Ala-Asp-Asn-Gli-Tre-Leu-Fe-LeuGli-11 e - Leu-L is - Asn-T rp-Lis-Glu-Glu - Ser-A s p - Ar g-L is- Ile-M et- Gln-S er Gln-Ile-Val-Ser-Fe-Tir-Fe-Lis-Leu-Fe-Lis-Asn-Fe-Lis-Asp-Asp-GlnSer-11 e - Gln-L is- Ser-V a 1 - Glu-T r e - Ile-Li s - Glu-A s p -Met-A s n - Val-Lis-F e Fe-Asn-Ser-Asn-Lis-Lis-Lis-Arg-Asp-Asp-Fe-Glu-Lis-Leu-Tre-Asn-TirSer-Val-Tre-Asp - Leu-A sn-Val-Gln - Ar g-L is-Ala-Ile-Hi s-G 1 u - Leu-11 e -GlnVal-Me t - Ala-G 1 u - Leu-S e r -Pro-A 1 a - Ala-L i s -Tre-G 1 ti - Lis-Ar g-Iis-A r g - S e r Gln-M et- Leu-F e - Gln-G li-Arg-Arg - Ala-S e r - Gin- 0 H, e interferon-gama humano recombinante de acordo com o Requeri^ mento da Patente Britânica 2.107.718 tendo a seguinte sequência de amino ácidos:
H2N-Cis-Tir-Cis-Gln-Asp-Pro-Tir-Val-Lis-Glu-AlaGlu-Asn-Leu-Lis-Lis-Tir-Fe-Asn-Ala-Gli-His-SerAsp-Val-Ala-Asp-Asn-Gli-Tre-Leu-Fe-Leu-Gli-IleLeu-Lis-Asn-Trp-Lis-Glu-Glu-Ser-Asp-Arg-Lis-IleMet-Gln-Ser-Gln-Ile-Val-Ser-Fe-Tir-Fe-Lis-LeuFe-Lis-Asn-Fe-Lis-Asp-Asp-Gln-Ser-Ile-Gln-LisSer-Val-Glu-Tre-Ile-Lis-Glu-Asp-Met-Asn-Val-LisFe-Fe-Asn-Ser-Asn-Lis-Lis-Lis-Arg-Asp-Asp-FeGlu-Lis-Leu-Tre-Asn-Tir-Ser-Val-Tre-Asp-Leu-AsnVal-Gln-Arg-Lis-Ala-Ile-His-Glu-Leu-Ile-Gln-ValMet-Ala-Glu-Leu-Ser-Pro-Ala-Ala-Lis-Tre-Gli-LisArg-Lis-Arg-Ser-Gln-Met-Leu-Fe-Arg-Gli-Arg-ArgAla-Ser-Gln-OH.
grupo compreendendo linfoquinas também inclui a interleuquina 2 humana sob a forma purificada, por exemplo interleuquina 2 que pode ser obtida no filtra.
do da cultura após activaçao das células humanas neoplásicas de leucemia ou de linfoma por mitogénios da célula-T e o qual é purificado por CLEP de fase reversa, filtrados de cultura que podem ser obtidos a partir de culturas tendo linfocitos-T humanos a partir do baço ou do sangue periférico após estimulação por antigénios ou mitogénios, por exemplo vírus de linfoma-leucemia-célula-T humanos (HTLV-I), fotohemaglutinina ou concanavalina A, e que contêm misturas que possuem componentes que se tornaram conhecidos pelas expressões factor de inibição da migraçao de macrófago (MIF), factor de inibição de migraçao de leucocito, factor de amplificaçao de migraçao de leucocito, factor activador de macrófago (MAF), factor ejs timulante de colónia, interleuquina 1 e 2 e interferon-gama, especialmente os filtrados ou isolados de cultura possuindo um conteúdo elevado de factor activador de macrófago (MAF).
Os sitemas de administraçao farmacêutica de acordo com o presente invento, quando aplicados sob a forma de liposomas, sao caracterizados pela sua excelente actividade estimuladora de macrófagos e em geral pelo seu excelente perfil farmacocinético.
Assim, verifica-se uma muito rápida endocitose, especaaLmente através de células do sistema monocítico. Os liposomas que encapsulam os peptidos apresentando quimiotaxia atrás referidos como compostos de inclusão podem ser enriquecidos particularmente bem no pulmão e no fji gado e sao submetidos a endocitose rapida pelos macrófagos. Em particular, os macrófagos alveolares sao estimulados e os materiais fisiologicamente anormais por exemplo vírus ou células tumorais em proliferação, sao eliminadas. As composições farmacêuticas de acordo com o invento, sempre que administradas sob a forma de liposomas sao assim especialmente apropriadas na quimioterapia contra o cancro para combater as metástases tumorais.
Os liposomas contendo peptidos apre sentando quimiotaxia em combinação com drogas anti-inflamatórias, antibióticos, agentes anti-leishmaníases, anti-micóticos ou anti-neoplásicos também fornecem estas drogas especificamente ao local da inflamaçao, infecçao ou das células tumorais e, aumentam assim a eficacia terapêutica destas drogas em com paraçao com drogas nao-encapsuladas.
Dispersões aquosas de liposomas em que os fosfolípidos com as formulas I e II sao o material encapsulante e os peptidos apresentando quimiotaxia especialmen. te em combinação com outros produtos farmacêuticos, sao encaj) sulados, facultativamente após concentração ou isolamento dos liposomas, por exemplo por ultracentrifugaçao, sao apropriadas para fins terapêuticos para administraçao oral (p.o.) ou especialmente parentérica (bocal, lingual, sublingual, i.v., i.e., epicutânea, s.c., i.m. ou nasal).
Para administraçao oral, a dispersão aquosa contendo liposomas pode ser misturada com diluentes ou veículos farmacêuticamente aceitáveis ou com aditivos habituais, por exemplo agentes de coloraçao ou de aromatizaçao, ou pode sa? usada sob a forma de um xarope ou sob a forma de cápsulas.
Para administraçao parentérica (epicutânea) a dispersão aquosa contendo liposomas é misturada com agentes de espessamento habituais, por exemplo celulose hidr£ xipropílica, preservativos apropriados, antioxidantes e perfumes facultativos, e pode ser também usada sob a forma de uma loção ou de gel para aplicaçao à pele ou a membranas mucosas.
Para administração parentérica (i.v,, s.c.), a dispersão aquosa dos liposomas enriquecidos é suspensa num veículo liquido apropriado, por exemplo solução isotónica de cloreto de sódio ou de glucose, sem cálcio, estéril, tamponada facultativamente para pH 7,2-7,4.
Tendo como base os presentes resultados experimentais calcula-se a dose mais elevada a ser aplicada a um ser humano com cerca de 70 kg de peso é de cerca de uma grama de liposomas contendo 2.000 microgramas do peptji do apresentando quimiotaxia, sendo a dose minima de cerca de 100 mg de liposomas contendo 100 microgramas do peptido apre^ sentando quimiotaxia. A dose mais elevada e mais baixa do m_a terial encapsulado, a concentração dos fosfolipidos na fase aquosa assim como as proporçoes dos componentes lipídos (I) e (II) podem variar de acordo com resultados a serem estabelecidos experimentalmente em ensaios clinicos.
sistema de administraçao farmacêutico de acordo com o presente invento pode também consistir num estojo com equipamento de partes compreendendo frascos ou garrafas contendo os componentes farmacêuticos a serem en capsulados e os fosfolípidos (I) e (II).
presente invento relaciona-se de preferência com sistemas de administraçao farmacêutica consi£ tindo em
a) um fosfopípido com a fórmula I em que n, , R2 e sao definidos como atrás,
b) um fosfolípido com a fórmula II em que n e R^ a R^ sao definidos como atrás,
c) N-£ormil-L-metionil-L-leucil-L-fenilalanina (FMLP) ou N-formil-L-metionil-L-fenilalanina (FMP), facultativamente em combinação com agentes anti-inflamatórios, antibióticos, agen. tes anti-leishmaníases, anti-micóticos ou anti-neoplásicos e, facultativamente, uma solução veículo farmacêuticamente acei tável tamponada com pH de 7,2 a 7,4.
presente invento relaciona-se com sistemas de administração farmacêutica consistindo em
a) um fosfolípido com a fórmula I em que n é um, R^ e IL· sao acilo tendo cada um deles 10 a 20 átomos de carbono e é o iao sódio,
b) um fosfolípido com a fórmula II em que n é dois, R^ e R£ sao acilo tendo cada um deles 10 a 20 átomos de carbono e R^ a R5 representam hidrogénio ou metilo,
c) FMLP ou FMP, facultativamente em combinação com N-acetilmuramil-L-alanil-D-isoglutaminil-L-alanina-2-(1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3-hidroxifosforiloxi)-etilamida, o sal de sódio de N-acetil-desmetilmuramil-L-alanil-D-isoglutamina ou o sal de sódio de N-acetil-D-muramil-L-alanil-D-isoglutamina e, fa. cultativamente, uma solução veículo farmacêuticamente aceitei vel tamponada com pH entre 7,2 e 7,4.
presente invento relaciona-se 2 mais específicamente com sistemas de administraçao farmacêutica consistindo em
a) 1,2-di-(9-cis-octadecenoil)-3-sn-fosfatidil-(S)-serina de sódio (I) essencialmente pura, sintética,
b) 1-n-h exa d e cano i 1-2-( 9-cis-octadecenoil)-3-sn-f osf atidilcc> lina (II) essencialmente pura, sintética,
c) FMLP ou FMP, facultativamente em combinação com N-acetilmuramil-L-alanil-D-iscgLutaminil-L-alanina-2-(1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3-hidroxifosforiloxi)-etilamida, o sal de sódio de N-acetil-desmetilmuramil-L-alanil-D-isoglutamina ou o sal de sódio de N-acetil-D-muramil-L-alanil-D-isoglutamina e, fa cultativamente, uma solução veículo farmacêuticamente aceitjí vel tamponada com pH entre 7,2 e 7,4.
Os sistemas de administraçao farmacêutica apropriados para aplicaçao sob a forma de liposomas sao produzidos por métodos padrao, por exemplo preparando uma mistura homogénia dos fosfolípidos com as fórmulas I e II e componente c) e dispersando a mistura homogénea obtida numa fase aquosa e, se necessário, tamponando a dispersão aquosa para pH entre 7,0 e 7,8 e, facultativamente, concentrando e/ou separando os liposomas obtidos.
A mistura homogénia é preparada por formação de uma película ou de um liofilizado dos fosfolípidos e componente c). A película é preparada dissolvendo os fosfolípidos (I) e (II) e componente c) num solvente orgânico e eliminando o solvente.
Solventes orgânicos apropriados são, por exemplo, hidrocarbonetos alifáticos ou cicloalifáti^ cos, por exemplo halogenados, nao substituídos ou substituídos, por exemplo n-hexano, ciclohexano, cloreto de metileno, ou álcoois, por exemplo metanol ou etanol, ésteres ou amidas de ácido alcano inferior carboxilico, por exemplo éster etílico de ácido acético ou dimetilformamida, ou éteres, por exemplo éter dietílico, tetrahidrofurano ou dioxano, ou misturas des^ tes solventes.
solvente orgânico é subsequent£ mente eliminado por aplicação de pressão reduzida, ou fazendo um gás inerte, por exemplo azoto seco. 0 liofilizado é forma, do liofilizando de um modo convencional uma solução de fosfq lípidos (I) e (II) e componente c) num solvente orgânico de acordo com o método tal como foi desarito na Apresentação da Patente dos E.U.A. No. 4.311.712. Os solventes apropriados pa ra a preparaçao de liofilizados estão no estado sólido junta^ mente com os fosfolípidos (I) e (II) à temperatura do processo de liofilizaçao e têm um ponto de fusão de mais de 0eC., por exemplo ácido acético glacial, benzeno ou dioxano, especialmen. te terc-butanol.
Pode também ser preparada uma nistji ra homogénea por secagem por pulverização de uma solução de fosfolípidos (I) e (II) num solvente orgânico tendo um ponto baixo de ebulição tal como o clorofórmio. Por este método ob. tem-se um pó.
Na mistura homogénea, a relaçao entre o componente fosfolípido (I) e o componente fosfolípido (II) é de aproximadamente 10 v. 90 até 50 v. 50 mole por cento. Ê preferida a relação 30 v. 70 mole por cento. A relaçao apr£ ximada das quantidades molares do material encapsulado dividi, do pela quantidade total dos fosfolípidos (I) e (II) é de cer ca de 0,0001 a 0,1 v. 1,0, de preferência 0,005 a 0,01 v. 0,1.
míétòdo dê'dispersão é realizado adicionando a mistura homogénea dos fosfolípidos (I) e (II) e componente c) ã fase aquosa e agitando a fase aquosa (agitaçao vigorosa - misturador de Vortex ou agitaçao a velocida. de elevada). Forma-se expontâneamente com um nível elevado sem fornecimento de energia externa uma mistura de liposomas unilamelares ou multilamelares, pequenos, grandes. Pode ser dispersa na fase aquosa aproximadamente 0,1 a 40 por cento em peso, de preferência 2 a 20 por cento em peso, da mistura homogénea em relaçao ao peso total da dispersão aquosa. De pr£ f *
ferência, essas dispersões sao posteriormente diluidas para cerca de 1 micromole de lipido por ml. As dispersões de lipq soma com essa concentração retiveram aproximadamente 2,5 micrq litros da fase aquosa por micromole do lipido.
A preparaçao das composiçoes farma, cêuticas de acordo com o presente invento sob a forma de lip£ somas pode ser também realizada por outros métodos conhecidos na técnica para preparar liposomas, por exemplo por sonicaçao com ondas ultrassónicas, por métodos de infusão ou por evapq raçao de fase reversa.
passo de dispersão é realizado a temperaturas abaixo de 60sC., de preferência à temperatura ambiente. Tendo em vista a sensibilidade térmica potencial do material encapsulado, a dispersão pode ser realizada sob arr£ fecimento e, facultativamente, sob atmosfera de gás inerte, por exemplo atmosfera de azoto ou de argao.
Os liposomas obtidos podem ser to£ nados estáveis quando armazenados na fase aquosa até várias semanas ou meses após adiçao de estabilizadores, por exemplo manite ou lactose.
Os fosfolipidos com as fórmulas I e II sao conhecidos. Alguns deles encontram-se disponíveis cq mercialmente (Avanti, Sigma, Fluka, Serva).A preparaçao de 1,2-di-(9-cis-octadecenoil)-3-sn-fosfatidil-(S)-serina e de lípidos análogos foi descrita por Browning J. and Seelig J. in Chem. and Phys. of Lipids 24 (1979) 103-118.
Os peptidos apresentando quimiotaxia atrás referidos sao também conhecidos e a maior parte deles estão disponíveis comercialmente, ver por exemplo o Sigma Catalogue.
Os exemplos que se seguem sao ilustrativos do invento sem limitarem o seu âmbito. As temperaturas sao indicadas em graus Celsius (centígrados).
Exemplo 1
0,1 mg de N-Formil-L-metionil-L-leucil-L-fenilalanina, 75 mg de 1,2-di-(9-cis-octadecenoil)-3-sn-fosfatidil-(S)-serina de sódio (pelo menos 95% pura) (produzida de acordo com Browning J. and Seelig J., Ghem. and Physics of Lipids 24 (1979) 103-118) e 175 mg de 1-n-hexadecenoil-2-(9-cis-octadecenoil)3-sn-fosfatidilcolina (pelo menos 95% pura) (Avanti, Polar Lipids) sao dissolvidos em 786 mg de terc-Butanol estéril num frasco de fundo redondo. A soluçao é filtrada-esterilizada sobre filtro Acrodisc1-7 (2,0 x 10“ m) introduzida num recipiente estéril e congelada a -45a. 0 reci^ piente é seco in vacuo até se alcançar uma temperatura de 25a, e selado sob uma atmosfera de argao.
Antes da utilização, sao adiciona^ dos 2,5 ml de solução salina (Dulbecco) tamponada com fosfato (pH 7,2-7,4), sem cálcio, estéril, a esta preparaçao seca (lio. filizado) à temperatura ambiente, usando uma seringa estéril, e o recepiente é agitado durante um minuto num aparelho agitador de laboratório estandardizado (Vortex na marcaçao 6). A dispersão de liposomas resultante é armazenável a 4a e apropriada para administraçao parentérica (i.v.).
Exemplo 2
Dispersões aquosas contendo liposomas consistindo em 75 mg (0,091 mmol) de 1,2-di-(9-cis-octa
decenoil)-3-sn-fosfatidil-(S)-serina de sódio, 175 mg (0,231 mmol) de l-n-hexadecanoil-2-(9-çis-octadecenoil)-3-sn-fosfati dil colina e de mais de 0,1 mg até 10 mg de N-formil-L-metionil-L-leucil-L-fenilalanina podem ser produzidas de um modo análogo ao descrito no Exemplo 1.
Exemplo 3
Dispersões aquosas contendo liposomas consistindo em 75 mg (0,091 mmol) de 1,2-di-(9-cis-octadecenoil)-3-sn-fosfatidil-(S)-serina de sódio, 175 mg (0,231 mmol) de l-n-hexadecanoil-2-(9-£Ís-octadecenoil)-3-sn-fosfatidil colina, 0,1 mg de N-formil-L-metionil-L-leucil-L-fenilíi lanina e 0,1 mg de N-acetilmuramil-L-alanil-D-isoglutaminil-L-alanin-2-(1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3-hidroxifosforiloxi)-etilamida (preparada de acordo com a Patente Europeia No. 25 495) podem ser produzidas de um modo análogo ao descrito no Exemplo 1.
Exemplo 4
0,1 mg de N-formil-L-metionil-L-leu cil-L-fenilalanina, 75 mg de 1,2-di-(9-cis-octadecenoil)-3-sn-fosfatidil-(S)-serina de sódio (pelo menos 95% pura) (pr£ duzida de acordo com Browning J. and Seelig J. , Chem. and Ph_y_ sics of Lipids 24 (1979) 103-118) e 175 mg de 1-n-hexadecanoil-2~(9-cis-octadecenoil)-3-sn-fosfatidilcolina (pelo menos 95% pura) (Avanti, Polar Lipids) sao dissolvidos em 786 mg de terc-butanol estéril num frasco de fundo redondo. A solução é filtrada-esterilizada sobre filtro ACRODISC (2,0 x 10 ? M), é introduzida num recipiente estéril, e congelada a -45a. 0 recipiente é seco in vacuo até se alcançar a temperatura de 25a e é selado sob uma atmosfera de argao.
Antes da utilização, 2,5 ml de uma solução de interferon gama humano recombinante acabada de diluir para 2 x 10 U/ml em solução salina tamponada com fosfato (pH 7,2-7,4) (Dulbecco) sem cálcio estéril é adicionada a esta preparaçao seca (liofilizado) à temperatura ambiente usando uma seringa estéril, e o recepiente é agitado durante um minuto num aparelho agitador de laboratório estandardizado (Vortex na marcação 7). A dispersão de liposomas resultante é apropriada para administraçao parentérica (i.v.).
Exemplo 5
Relatório do Teste
I. Materiais e Métodos
A. Preparaçao de solução de matéria prima FMLP nao combinado»
Comprou-se FMLP a Sigma Chemical Co. A solução da matéria prima (10 mM) foi feita em metanol e armazenada a -70° antes da utilização. Para utilização sob foj? ma nao combinada, a solução de matéria prima foi diluida para concentrações entre 10”^ M e 10-^ M com CMEM contendo 5% de FBS.
B· Preparaçao de líposomas-FMLP.
Para encapsular FMLP nos liposomas
FMLP da solução de matéria prima em metanol foi misturada em
clorofórmio com fosfolípidos PC/PS do Exemplo 1, relaçao molar 7:3).0 solvente e o solvente residual foi evaporado sob azoto durante pelo menos 1 hora. Foram preparadas vesículas multila melares (MLV) adicionando CMEM ã pelicula seca seguindo-se mistura em vortex até se conseguir uma suspensão homogenea de liposomas. 0 FMLP nao encapsulado nao combinado foi removido formando bolinhas de MLV a 12.000 g durante 15 min.
FMLP 10 3M = relação
FMLP 10-^M = relaçao
FMLP 105M =s relaçao
FMLP lo-^M = relaçao
FMLP 10-^M = relaçao
Fosfolipído:FMLP | 1:1 |
Fosfolipído:FMLP | 10:1 |
Fosfolípido:FMLP | 100:1 |
Fosfolipído:FMLP | 1000:1 |
Fosfolipído:FMLP | 10000:1 |
II. Ensaio In-Vitro da Citotoxicidade Mediada pelos Macrófagos
A citotoxicidade mediada pelos ma_ crófagos foi avaliada por meio de um ensaio de disseminação radioactiva tal como foi descrito em Sone S. and Fidler I.J., Cell Immunology 57, 42 (1981). As células alvo em fase de cr£ scimento exponencial foram incubadas durante 24 horas num meio suplementado com /” l7ldUrd (0,2 p Ci/ml; actividade espec£ fica, 200 mCi/mmol; New England Nuclear, Boston, MA). As células foram então lavadas 3 vezes com HBSS quente para remover o marcador radioactivo nao ligado, recolhidas por uma cuj? ta tripsinização (0,25% de tripsina Difco e 0,02% de EDTA durante 1 min. a 37°), e suspensas de novo em CMEM contendo 5% de FBS. As células viáveis foram revestir os recipientes contendo macrófagos para se conseguir uma densidade de populaçao de 2.500 macrófagos e 250 células tumorais por mm quadrado (ou uma relaçao inicial macrófago:célula alvo de 10/1). Com esta densidade de populaçao, os macrófagos normais (nao trata_ dos) nao sao citotóxicos em relaçao às células neoplásicas.
Nao foram encontradas diferenças significativas na eficácia do revestimento (ligaçao) de células alvo marcadas com / 17-IdUrd para controlo ou populações de macrófagos tratados com liposomas. Foram também revestidas como um grupo de controlo adicional células alvo marcadas radioactivamente. As cuA turas de macrófagos-células alvo foram referenciadas com meio 24 horas após a adição de células alvo para remover todas as células não revestidas sendo então incubadas durante até 3 dias a 37°. Nesta altura, as culturas foram lavadas duas vezes com HBSS para remover as células aderentes, e as restantes c£ lulas aderentes, viáveis, foram submitidas a lise com 0,1 ml de NaOH 0,1 N. 0 lisado foi absorvido em porçoes de algodao e colocado directamente em tubos com 10 x 75 mm; a radioactividade foi medida num contador gama. A citotóxicidade máxima in vitro mediada pelos macrófagos neste ensaio foi obtida após 3 dias de incubaçao com células alvo, e os macrófagos nao re-incorporaram /” Jl7ldUrd libertado a partir das células alvo mortas. A actividade citotóxica dos macrófagos foi calcula, da como se segue:
(cpm em células alvo em cultura com macrófagos normais)
-(cpm em células áLvo em cultura com macrófagos do ensaio)
7o Citotóxicidade = _______________________________________ cpm em células alvo em cultura com macrófagos normais
Os resultados foram analisados quanto ao seu significado estatístico pelo Student’s 2-tailed t test.
Como é indicado no Quadro, PC/PS- —8 —A
-FMLP MLV em todas as concentrações de FMLP (10 a 10 M) activaram eficazmente macrófagos de ratinho para produzir lise de células tumorais alvo durante 72 horas de co-cultura.
Em contraste, FMLP sob a forma nao combinada em todas as concentrações foi ineficaz para tornar os macrófagos tumoricidas, Colectivamente, estes resultados revelam que FMLP encapsulado em liposomas actua como um agente activador dos macrófagos.
Quadro;
Efeito de FMLP incorporado em PC/PS-FMLP sobre a actividade citotóxica dos macrófagos peritoneais do ratinho
Tratamento Macrófagos | cpm+/- S.D. | ||
(citotóxicidade Exp. I | específica II | , %) | |
Tumor isolado | 2326+145 | 2300+ 73 | |
Tumor + Mac | 2483+ 83 | 2117+187 | |
PC/PS-MLV | 2238+ 3 | 1988+341 | |
PC/PS-FMLP (10“8 M) | 1784+249 (28) | 1103+135 | (48) |
PC/PS-FMLP (10~7 M) | 1922+168 (23) | 1217+148 | (43) |
PC/PS-FMLP (IO-6 M) | 1804+ 57 (28) | 1597+258 | (25) |
PC/PS-FMLP (10“5 M) | 1804+ 97 (28) | 1198+184 | (38) |
PC/PS-FMLP (10“4 M) | 1829+145 (27) | 1300+297 | (39) |
Nao combinado(10 8 M) | 2567+ 70 | 2441+ 32 | |
FMLP | |||
Nao combinado(10 M) | 2559+109 | 2298+178 | |
FMLP | |||
N ão combinado ( 10 “ M ) | 2633+ 61 | 2408+ 32 | |
FMLP | |||
Nao combinado(10 < M) | 2619+ 82 | 2455+106 | |
FMLP | |||
Nao combinado!10 M) FMLP | 2478+ 74 | 2263+361 | |
LPS (10 jig/ml) | 1973+293 (21) |
Claims (4)
- Ia. - Processo para a prepara, ção de um sistema de administração farmacêutica que é cons tituido por:a) um fosfolípido com a fórmula
sn 1 2 3 (I), em que n é um, dois ou três, R^ e R2 independentemente um do outro representam alquilo, alquenilo ou acilo tendo cada um * -* **10-20 atmos de carbono, e Y e o catiao de uma base farma. ceuticamente aceitável,b) um fosfolípido com a fórmulasn 1 2 3 (II), em que n é dois, três ou quatro, R^ e ^2 sa0 definidos tal como atrás e R^, R^ e R^ representam hidrogénio ou C|-C^-alquilo,c) um peptido apresentando quimiotaxia ou um peptido apresentando quimiotaxia combinado com produtos farmacêuticos seleccionados entre o grupo consistindo em antiflogísticos, antibióticos, agentes antileishmaníases, anti-micoticos, anti-neoíásticos e imunomoduladores e, facultativamente, uma solução veículo farmaceuticamente aceitável tamponada para pH 7,0-7,8 e/ou facultativamente aditivos farmacêutica mente aceitáveis, caracterizado por compreender a preparaçao de uma mistura homogénea dos fosfolípidos com as fórmulas I e II e do componente c) através da formaçao de películas ou liofilizados isentos de solvente e a dispersão da mistura homogénea obtida através da adiçao a uma fase aquosa e por agitaçao da fase aquosa e, se necessário, o tamponamento da dispersão aquosa até pH 7,0 a 7,8 e facultativamente, a concentração e/ou a separaçao dos liposomas obtidos . - 2a. - Processo para a preparaçao de um sistema de administraçao farmacêutica de acordo com a reivindicação 1, que e constituído por :> +a) um fosfolipido com a formula I em que n, R^, R2, e Y sao definidos como anteriormente,b) um fosfolipido com a fórmula II em que n e R^ a R^ sao definidos como anteriormente,c) N-formil-L-metionil-L-leucil-L-fenilalanina (FMLP) ou N-formil-L-metionil-L-fenilalanina (FMP), facultativamente em combinação com agentes anti-inflamatórios, antibióticos, agentes anti-leishmaníases, anti-micóticos ou anti-neoplási cos e, facultativamente, uma solução veiculo farmaceuticamente aceitável tamponada com pH entre 7,2 e 7,4, caracterizado pór compreender a preparaçao de uma mistura homogénea dos fosfolipidos com as fórmulas I e II e do componente c) através da formaçao de películas ou liofilizados iseii tos de solvente e a dispersão da mistura homogenea obtida através da adiçao a uma fase aquosa e por agitaçao da fase aquosa e, se necessário, o tamponamento da dispersão aquosa até pH 7,2 a 7,4 e facultativamente, a concentração e/ou a separaçao dos liposomas obtidos.
- 3a. - Processo para a preparaçao de um sistema de administraçao farmacêutica de acordo com a reivindicação 1, que e constituído por:a) um fosfolipido com a fórmula I em que n é um, e R2 sao acilo tendo cada um deles 10 a 20 átomos de carbono e Y+ é o iao sódio,b) um fosfolipido com a fórmula II, em que n é dois, R^ e Rz sao acilo tendo 10 a 20 átomos de carbono a R^ a R^ representam hidrogénio ou metilo,c) FMLP ou FMP, facultativamente em combinação com N-acetilmuramil-L-alanil-D-isoglutaminil-L-alanina-2-(1,2-dipal^ mitoil-sn-glicero-3-hidroxifosforiloxi)-etilamida, o sal de sódio de N-acetil-desmetilmuramil-L-alanil-D-isoglutaini na ou o sal de sódio de N-acetil-D-muramil-L-alanil-D-isoglutamina e, facultativamente uma solução veiculo farmaceuticamente aceitável tamponada com pH entre 7,2 e 7,4, caracterizado por compreender a preparaçao de uma mistura homogénea dos fosfolipidos com as fórmulas I e II e do componente c) atrvés da formaçao de películas ou liofilizados isentos de solvente e a dispersão da mistura homogenea obtida através da adiçao a uma fase aquosa e por agitaçao da τ ·α fase aquosa e, se necessário, o tamponamento da dispersão aquosa até pH 7,2 a 7,4 e facultativamente, a concentração e/ou a separaçao dos liposomas obtidos.
- 4a. - Processo para a preparaçao de um sistema de administraçao farmacêutica de acordo com a reivindicação 1, que é substituído por:a) l,2-di-(9-cis-octadecenoil)-3-sn-fosfatidil-(S)-serina de sódio (I) essencialmente pura, sintética.b) l-n-hexadecanoil-2-(9-cis-octadecenoil)-3-sn-fosfatidilcolina (II) essencialmente pura, sintética,c) FMLP ou FMP, facultativamente em combinação com N-acetijL muramil-L-alanil-D-isoglutaminil-L-alanina-2-(1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3-hidroxifosforiloxi)-etilamida, o sal de sódio de N-acetildesmetilmuramil-L-alanil-D-isoglutaniina ou o sal sódio de N-acetil-D-muramil-L-alanil-D-isoglutamina, e, facultativamente, uma solução veiculo farmaceuticamente aceitável tamponada com pH entre 7,2 e 7,4, caracterizado por compreender a preparaçao de uma mistura homogénea dos fosfolípidos com as fórmulas I e II e do componente c) através da formaçao de películas ou liofilizados isen. tos de solvente e a dispersão da mistura homogénea obtida através da adiçao a uma fase aquosa e por agitaçao da fase aquosa e, se necessário, o tamponamento da dispersão aquosa até pH 7,2 a 7,4, e facultativamente, a concentração e/ou a separaçao dos liposomas obtidos.
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