PT85461B - Processo para a preparacao de proteinas recombinantes de htlv-iii e suas utilizacoes - Google Patents
Processo para a preparacao de proteinas recombinantes de htlv-iii e suas utilizacoes Download PDFInfo
- Publication number
- PT85461B PT85461B PT85461A PT8546187A PT85461B PT 85461 B PT85461 B PT 85461B PT 85461 A PT85461 A PT 85461A PT 8546187 A PT8546187 A PT 8546187A PT 85461 B PT85461 B PT 85461B
- Authority
- PT
- Portugal
- Prior art keywords
- htlv
- iii
- protein
- immunoadsorbent
- fragment
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 43
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims description 18
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 14
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 title description 7
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 title description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 111
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims description 99
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims description 97
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 97
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 93
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 38
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 34
- 101710091045 Envelope protein Proteins 0.000 claims description 22
- 101710188315 Protein X Proteins 0.000 claims description 22
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 21
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 20
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 20
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 17
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 16
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims description 16
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 15
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 15
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims description 14
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims description 13
- 238000012546 transfer Methods 0.000 claims description 13
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 11
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 11
- 239000011324 bead Substances 0.000 claims description 11
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 9
- 241000283707 Capra Species 0.000 claims description 8
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 8
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 8
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 8
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 claims description 8
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 8
- 238000002372 labelling Methods 0.000 claims description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 6
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 6
- 239000011521 glass Substances 0.000 claims description 6
- PZUUMQPMHBJJKE-AVGNSLFASA-N Met-Leu-Arg Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N PZUUMQPMHBJJKE-AVGNSLFASA-N 0.000 claims description 5
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 claims description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 5
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 4
- 241000282412 Homo Species 0.000 claims description 3
- 235000021120 animal protein Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 3
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 3
- 241000894007 species Species 0.000 claims description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 2
- OAPNERBWQWUPTI-YUMQZZPRSA-N Lys-Gln Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O OAPNERBWQWUPTI-YUMQZZPRSA-N 0.000 claims description 2
- 239000003547 immunosorbent Substances 0.000 claims description 2
- 230000009696 proliferative response Effects 0.000 claims description 2
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 claims description 2
- 102100021696 Syncytin-1 Human genes 0.000 claims 15
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 3
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 claims 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 claims 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 claims 2
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 claims 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 claims 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 claims 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 claims 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 claims 1
- 230000004044 response Effects 0.000 claims 1
- 239000010959 steel Substances 0.000 claims 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 claims 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 claims 1
- 210000002268 wool Anatomy 0.000 claims 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 25
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 23
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 23
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 17
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 15
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 15
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 14
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 13
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 12
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 12
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 11
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 11
- 102000012410 DNA Ligases Human genes 0.000 description 10
- 108010061982 DNA Ligases Proteins 0.000 description 10
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 10
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 9
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 9
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 9
- 239000006167 equilibration buffer Substances 0.000 description 9
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 9
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 9
- 239000000463 material Substances 0.000 description 8
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 8
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 8
- 102100027723 Endogenous retrovirus group K member 6 Rec protein Human genes 0.000 description 7
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 7
- 108700004025 env Genes Proteins 0.000 description 7
- 101150030339 env gene Proteins 0.000 description 7
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 6
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 6
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 6
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 6
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 6
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 6
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 6
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 6
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 6
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 5
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 5
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 5
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 5
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 5
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 150000003839 salts Chemical group 0.000 description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 5
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 4
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 4
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 4
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 4
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 4
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 4
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 4
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 4
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 4
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 4
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 4
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 4
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 4
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 4
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 4
- -1 polypropylene Polymers 0.000 description 4
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 4
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 4
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 4
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 4
- FRGKKTITADJNOE-UHFFFAOYSA-N sulfanyloxyethane Chemical compound CCOS FRGKKTITADJNOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 4
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical group CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000011537 Coomassie blue staining Methods 0.000 description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101710189136 Envelope fusion protein Proteins 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000012506 Sephacryl® Substances 0.000 description 3
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 3
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 3
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 3
- 108010030074 endodeoxyribonuclease MluI Proteins 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 238000013198 immunometric assay Methods 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 3
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 3
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- 101150019416 trpA gene Proteins 0.000 description 3
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 3
- 241000598436 Human T-cell lymphotropic virus Species 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 2
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical group O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MZVQCMJNVPIDEA-UHFFFAOYSA-N [CH2]CN(CC)CC Chemical group [CH2]CN(CC)CC MZVQCMJNVPIDEA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 2
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 2
- 238000001976 enzyme digestion Methods 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 2
- 229960000789 guanidine hydrochloride Drugs 0.000 description 2
- PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N guanidinium chloride Chemical compound [Cl-].NC(N)=[NH2+] PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 2
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 239000000700 radioactive tracer Substances 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N trimethylamine Chemical compound CN(C)C GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- GHKCSRZBNZQHKW-UHFFFAOYSA-N 1-sulfanylethanol Chemical compound CC(O)S GHKCSRZBNZQHKW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MIJDSYMOBYNHOT-UHFFFAOYSA-N 2-(ethylamino)ethanol Chemical compound CCNCCO MIJDSYMOBYNHOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-anilino-5-sulfonaphthalen-1-yl)diazenyl]-5-hydroxynaphthalene-2,7-disulfonic acid Chemical compound C=12C(O)=CC(S(O)(=O)=O)=CC2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=1N=NC(C1=CC=CC(=C11)S(O)(=O)=O)=CC=C1NC1=CC=CC=C1 QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010001513 AIDS related complex Diseases 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 1
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000714195 Aids-associated retrovirus Species 0.000 description 1
- 102000007698 Alcohol dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108010021809 Alcohol dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- RMMXTBMQSGEXHJ-UHFFFAOYSA-N Aminophenazone Chemical compound O=C1C(N(C)C)=C(C)N(C)N1C1=CC=CC=C1 RMMXTBMQSGEXHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 108010032595 Antibody Binding Sites Proteins 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- 108010077805 Bacterial Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101100008049 Caenorhabditis elegans cut-5 gene Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-M Fluoride anion Chemical compound [F-] KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 101150038242 GAL10 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 102000002265 Human Growth Hormone Human genes 0.000 description 1
- 108010000521 Human Growth Hormone Proteins 0.000 description 1
- 239000000854 Human Growth Hormone Substances 0.000 description 1
- XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N IDUR Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(I)=C1 XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 101150007280 LEU2 gene Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 1
- 208000008771 Lymphadenopathy Diseases 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 101000708578 Milk vetch dwarf virus (isolate N) Para-Rep C3 Proteins 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 241000364057 Peoria Species 0.000 description 1
- 102000012288 Phosphopyruvate Hydratase Human genes 0.000 description 1
- 108010022181 Phosphopyruvate Hydratase Proteins 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710150114 Protein rep Proteins 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 101710152114 Replication protein Proteins 0.000 description 1
- 241000220317 Rosa Species 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 108010008038 Synthetic Vaccines Proteins 0.000 description 1
- 240000004958 Talinum portulacifolium Species 0.000 description 1
- 235000001211 Talinum portulacifolium Nutrition 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 102000005924 Triose-Phosphate Isomerase Human genes 0.000 description 1
- 108700015934 Triose-phosphate isomerases Proteins 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Chemical compound CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 229960000212 aminophenazone Drugs 0.000 description 1
- 230000009830 antibody antigen interaction Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 238000009534 blood test Methods 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- WZHCOOQXZCIUNC-UHFFFAOYSA-N cyclandelate Chemical compound C1C(C)(C)CC(C)CC1OC(=O)C(O)C1=CC=CC=C1 WZHCOOQXZCIUNC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 210000003275 diaphysis Anatomy 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 238000009585 enzyme analysis Methods 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 108010014369 galactose dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003147 glycosyl group Chemical group 0.000 description 1
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- 235000011167 hydrochloric acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000004679 hydroxides Chemical class 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 150000007529 inorganic bases Chemical class 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-YPZZEJLDSA-N iodine-125 Chemical compound [125I] ZCYVEMRRCGMTRW-YPZZEJLDSA-N 0.000 description 1
- 229940044173 iodine-125 Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- JJWLVOIRVHMVIS-UHFFFAOYSA-N isopropylamine Chemical compound CC(C)N JJWLVOIRVHMVIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 239000006193 liquid solution Substances 0.000 description 1
- 239000006194 liquid suspension Substances 0.000 description 1
- 208000018555 lymphatic system disease Diseases 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L magnesium carbonate Chemical compound [Mg+2].[O-]C([O-])=O ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000001095 magnesium carbonate Substances 0.000 description 1
- 229910000021 magnesium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 201000004792 malaria Diseases 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 230000007483 microbial process Effects 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 description 1
- 239000006179 pH buffering agent Substances 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000011007 phosphoric acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000003016 phosphoric acids Chemical class 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 238000013492 plasmid preparation Methods 0.000 description 1
- 229920000058 polyacrylate Polymers 0.000 description 1
- 229920001515 polyalkylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N procaine Chemical compound CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1 MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004919 procaine Drugs 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 1
- 229940023143 protein vaccine Drugs 0.000 description 1
- CCOXWRVWKFVFDG-UHFFFAOYSA-N pyrimidine-2-carbaldehyde Chemical compound O=CC1=NC=CC=N1 CCOXWRVWKFVFDG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012857 radioactive material Substances 0.000 description 1
- 229940124551 recombinant vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 101150078341 rop gene Proteins 0.000 description 1
- CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N saccharin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)NS(=O)(=O)C2=C1 CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012723 sample buffer Substances 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 1
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16111—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV env
- C12N2740/16122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
DESCRIÇÃO
Fundamento do Invento 0 vírus linfotropico para células T humanas (HTLV-lll), o vírus associado a linfadenopatias (LAV) ou o retrovírus associado (ARV) a SIDA foi identificado como a causa da síndrome de imunodeficiência adquirida (SIDA) (Popovic, M., Sarngadharan, M.G., Read, E. e Gallo R.C., / 1984/ Science 224:497-500). 0 vírus apresenta tropismo para a subsérie 0KT4+ de linfocitos (Klatzmann, D. , Barre-Sinoussi, F., Nugeyre, M.T., Dauguet, C., Vilmer, E. , Griscelli, C., Brun-Vezinet, F., Rouzioux, C., Gluckman, J.C., Chermann, J.C, e Montagnier, L. / 1984/ Science 225:59-63). Os anticorpos contra as proteínas do HTLV-III nosoro da maior parte dos pacientes com SIDA ou com o complexo relacionado com SIDA (BRC) e em indivíduos assintomá-ticos infectados com o vírus (Sarngadharan, M. G., Popovic, M., Bruch, L., Schupbach, J. e Gallo, R.C. / 1984/ Science 224.506-508) torna possível o desenvolvimento de testes imunologicos que detectam anticorpos contra estes antigéni-os. Estes testes são usados para limitar a disseminação do HTLV-III através de transfusóes de sangue pela identificação de amostras de sangue de pessoas infectadas com o vírus. Os testes de diagnostico correntemente disponíveis comercialmente usam as proteínas de vírus inactivado como antigénios.
Além de permitir novas abordagens de diagnostico, a tecnologia de DNA recombinante oferece grandes esperanças para o desenvolvimento de vacinas contra 3
bactérias e vírus (wilson, T. / 1984/ Bio/Technology 2:29-39). Os organismos mais largamente empregues para expressar vacinas recombinantes tem sido E. coli, S. cerevisiae e células de mamífero em cultura. Por exemplo, as vacinas de sub-unidades contra a febre afetosa (Kleid, D.G., Yansura, D., Small, B., Dowbenko, D., Moore, D.M., Brubman, M. J., Mckercher, P.D., Morgan, D.O., Roberteon, B.H. e Bachrach, H.L. / 1981/ Science 214:1125-1129) e malaria (Young, J.F., Hockmeyer, W. T., Gross, M., Ripley Ballon, W., Wirtz, R. A., Trosper, J. H., Beaudoin, R. L., Holligdale, M. R., Miller, L. M., Diggs, C. L. e Rosenberg, M. / 198.5/ Science 228:958--962) foram sintetizadas em E. coli. Outros exemplos o anti-génio de superfície da hepatite B produzido em levedura (Mc Aleer, W. J., Buynak, E. B., Maigetter, R. Z., Wampler, D.E., Miller, W. J. e Hilleman, M. R. / 1984/ Nature 307:178--180) e uma vacina para herpes produzida em células de mamífero (Berman, P. W., Gregory, T., Chase, B. e Lasky, L. A. £1984/ Science 227:1490-1492).
Nesta altura existe de facto a necessidade de desenvolver uma vacina para a SIDA. Não se sabe da existência de tal vacina.
Breve Sumário do Invento 0 tema do invento diz respeito a novas proteínas recombinantes do HTLV-III e suas utilizações. Mais específicamente, o tema do invento reiaciona-se com quatro novas proteínas recombinantes do envolucro do HTLV-III as quais podem ser usadas em diagnostico, profilaxia ou terapia da SIDA. Ainda, os fragmentos de proteínas recombi- nantes do envólucro do HTLV-III do invento podem ser usados para estimular a resposta proliferativa de linfócitos em seres humanos infectados com HTLV-III. Isto iria então estimular o sistema imune para responder ao HTLV-III em tais indivíduos e portanto, os fragmentos da proteína do envolucro podem proporcionar protecção e serem de valor terapêutico. Estas novas proteínas são codificadas por plasmídeos bacte-rianos que podem ser usados para transformar hospedeiros adequados, por Exemplo, E. coli, usando processos convencionais.
Referência aos desenhos FIGURA 1 - Esta é uma protocolo da construção do plasmídeo pREV 2.2 que se usa para construir vectores codificadores das novas proteínas. FIGURA 2 - Este é um diagrama do plasmídeo pREV2.2 mostrando o sítio de clonagem múltipla. FIGURA 3 - Esta é um esquema do gene do envolucro de HTLV-III e das novas proteínas recombinantes obtidas a partir dele.
Descrição Detalhada do Invento 0 vector de expressão plasmídeo pREV2.2 foi coxStruido a partir do plasmídeo pBGl. 0 protocolo que mostra a construção deste plasmídeo está apresentado na Figura 1 dos desenhos. 0 plasmídeo pRIO contem aproximada-mente 1275 pares de bases de DNA codificador do gene env do HTLV-III essencialmente desde o sítio kpn I ate ao sítio BglII. Este plasmídeo num hospedeifco bacteriano adequado, e.g. E. coli, pode ser usado para produzir a nova proteína recombiimte de fusão com 95 KD do HTLV-III, designada RIO. A sequência de aminoácidos da proteína de fusão RIO está apresentada na Tabela B; a sequência de DNA codificadora desta proteína está apresentada na Tabela 8A, 0 plasmídeo pPBl contém aproximada-mente 540 pares de bases de DNA codificando essencialmente o gene env do HTLV-III desde o sítio P vul I até ao sítio BglII. Este plasmídeo num hospedeifco adequado, e.g., E. coli. pode ser usado para produzir a nova proteína recombinante de fusão com 26KD do HTLV-III designada PBl. A sequência de aminoácidos da proteína de fusão PBl está apresentada na Tabela 9A. 0 plasmídeo p590 contem aproximada-mente 1055 pares debases de DNA codificando essencialmente o gene env do HTLV-III desde o sítio PvuII até ao sítio HindiII. Este plasmídeo num hospedei» adequado, e.g., E.coli, pode ser usado para produzir a nova proteína recombinante de 86 KD do HTLV-III designado 590. A sequência de aminoácidos da proteína de fusão 590 está apresentada aa Tabela 10A. O plasmídeo pKHl contém aproximada-mente 1830 pares de bases de DNA codificando essencialmente o gene env do HTLV-III desde o sítio Kpn Iate ao sítio Hind III. Este plasmídeo num hospedeiro adequado, e.g., E. coli. pode ser usado para produzir a nova proteína recombinante com 70 KD do HTLV-III designada KH1. A sequência de amino-ácidos da proteína de fusão KHl está apresentada na Tabela 11; a sequência de DNA codificadora desta proteína está apresentada na Tabela 11A. 0 plasmídeo pBGl está depositado no hospedeiro E. coli M5371 no Northern Regional Research Laboratory (NRRL), U.S. Department of Agriculture, Peoria, Illinois, USA. Está na colecção permanente deste repositó-rio. E.coli MS371 (pBGl), NRRL B-15904, foi depositada em 1 de Nov. de 1984. E. coli MS371, NRRL B-15129 está agora disponível ao publico E. coli SG20251, NRRL B-15918, foi depositada em 12 de Dezembro de 1984. NRRL B-15904 e NRRL B-15918 estarão disponíveis ao publico pelo pagamento de uma patente que os divulgue. Segue-se outras culturas que foram depositadas com NRRL indicando-se as suas datas e numeros de deposito. NQ de repositorio NRRL B-18091 NRRL B-18093 NRRL B-18092 NRRL B-18094 NRRL B-18095
Cultura E. coli JM103 (pREV2.2 E. coli SG20251 (pRlO) E. coli SG20251 (pBl) E. coli SG20251 (p590) E. coli CAG629 (pKHl) data do deposito 30 de Julho de 1986 30 de Julho de 1986 30 de Julho de 1986 30 de Julho de 1986 30 de Julho de 1986
Os depositos acima serão mantidos no repositorio NRRL durante pelo menos 30 anos e estarão disponíveis ao publico quando do pagamento de uma patente que os divulgue. Os depositos também estão disponíveis conforme exigido por leis de patentes estrangeiras nos países em que tenham sido requeridas as contrapartes do presente r
pedido de patente ou seus derivados. No entanto, deve-se entender que a disponibilidade de um deposito não constitui uma licença para a prática do presente invento em derrogação dos direitos de patente concedidos por acção governamental.
As novas proteínas do HTLV-III do presente invento podem ser expressas em Saccharomvces cerevisiae usando plasmídeos contendo o promotor activável da galactose deste organismo (Broach, J.R., Li, Y., Wu, L.C e Jayaram, M. em "Experimental Manipulation of Gene Expres-sion" / 1983/ p. 83, ed. M. Inouye, Academic Press). Estes plasmídeos são designados YEp51 e YEp52 (Broach, J.R. et al. / 198.3/) e contêm origem de replicação de E. coli. o gene da (3 -lactamase, o gene LEU2 de levedura, a origem de replicação de 2 um e o locus REP3 de 2 um. A expressão de genes recombinantes é conduzido pelo promotor do gene GAL10 de levedura.
Podem ser usados promotofces de levedura tais como os de galactose e álcool desidrogenase (Bennetzen, J.L. e Hall, B.D. / 1982/ J. Biol. Chem. 257: :3018; Ammerer, G. em Methods in Enzymology / 1983/ Vol. 101, p. 192), fcsEoglicerato cinase (Derynck, R., Hitzeman, R.A., Gray, P.W., Goeddel, D.V., em "Experimental Manipulation of Gene Expression / 1983/ p. 247, ed. M. Inouye, Academic Press), triose fosfato isomerase (Alber, T. e Kawasaki? G. / 198.2/ J. Molec. and Applied Genet. 1;419) on enolase (Innes, Μ. A, et al / 198.5/ Science 226:21).
I
Os genes aqui divulgados podem ser expressos em células de símio. Quando os genes codificadores destas proteínas são clonados num dos plasmídeos como descrito em Okayama e Berg (Okayama, H e Berg, P. / 1983/ Molec. and Cell. Biol. 3:280) e referências ali citadas ou se transformam em células COS com estes plasmídeos,a síntese das proteínas de HTLV-III pode ser detectada imunologicamente.
Podem ser usados outros sistemas de expressão de genes em células de mamífero/produção de proteína. São exemplos de outros destes sistemas o sistema de expressão do vírus da vacina (Moss, B. / 1985/ Immunology Today 6:243? Chakrabarti, S., Brechling, K., Moss, B. J_ 1985/ Molec. and Cell. Biology 5:3403) e outros vectores derivados de retrovírus murino (Mulligan, R.C. em "Experimental Manipulation of Gene Expression / 1983/ p. 155, ed. M. Inouye, Academic Press).
As proteínas do HTLV-III do presente invento podem ser obtidas por síntese química pelas técnicas de síntese de peptídeos em fase solida como sejam BOC e FMOC (Merrifield, R.B. /^1963/ J. Amer. Chem. Soc. 85:2149? Chang, C. e Meienhofer, J. / 1978/ Int. J. Peptide Protein Res. 11:246).
Como é do conhecimento geral, a sequência de aminoacidos de uma proteína é determinada pela sequência de nucleotídeos do DNA. Devido a redundância do eodigo genético, i.e. podem ser usados mais do que um trip-leto de nucleotídeos codificador (codão) para a maior parte 9
dos aminoacidos usados para fazer proteínas, sequências de nucleotídeos diferentes podem codificar um aminoácido particular. Deste modo o código genético pode ser descrito como se segue:
Fenilalanina (Fen TTK Histidina (His) CAK Leucina (Leu) XTY Glutamina (Glu) CAJ Isoleucina (Ile) ATM Asparagina Asn) AAK Metionina (Met) ATG Lisina (Lis) AAJ Valina (Vai) GTL ácido aspartico (Asp) GAK Serina (Ser) QRS ácido Glutâmico (Glu) CAJ Prolina (Pro) CCL Cisteína (Cis) TGK Treonina (Tre) ACL Triptofano (Trp) TGG Alanina (Ala) GCL Arginina (Arg) WGZ Tirosina (Tir) TAK Glicina (Gli) GGL Sinal de terminação TAG Sinal de terminação TGA
Chave: Cada tripleto de desoxinucleotídeos com 3 letras corresponde a um trinucleotídeo de mRNA, tendo um extremo 5' a esquerda e um extremo 3' a direita. Todas as sequências de DNA aqui apresentadas são as de cadeia cuja sequência corresponde a sequência do mRNA, com timina substituída por uracilo. As letras significam bases puricas ou pirimidicas que formam a sequência de desoxinucleotídeos. - 10 -
A = adenina G = guanina C = citosina T = timina
X = T ou C se Y fòr A ou G X = C se Y fôr c ou T
Y = A, G, C ou T se X fôr C
Y = A ou G se X fôr T
W = C ou A se Z fôr A ou G W = C se Z fôr C ou T Z = A, G, C ou T se W fôr C Z = A ou G se W fôr A QR= TC se S fôr A, G, C ou T; como alternativa QR = AG se S fôr T ou C.
J = A ou G K = T ou C L = A, T, C ou G M = A, C OU T 0 que foi dito mostra que as novas sequências de aminoácidos das proteínas do HTLV-III do presente invento podem ser preparadas por outras sequências de nucleotídeos que não sejam as aqui descritas. Sequências de nucleotídeos funcionalmente equivalentes codificadoras das sequências de aminoácidos destas proteínas HTLV-III, ou seus fragmentos tendo actividade antigenica ou imunogenica do HTLV-III ou actividade terapêutica, contra HTLV-III podem ser preparados por processos de síntese conhecidos. Deste modo, o invento inclui tais sequências de nucleotídeos funcionalmente equivalentes.
Assim o objectivo do presente invento inclui não só as sequências de nucleotídeos específicas aqui descritas, mas também todas as sequências de nucleotídeos equivalentes de moléculas possuindo substancialmente a mesma actividade antigenica ou imunogénica de HTLV-III ou terapêutica contra o HTLV-III.
Ainda, o objectivo do presente invento pretende cobrir não só as sequências de aminoácidos específicas divulgadas mas também sequências semelhantes codificadoras de proteínas ou de fragmentos de proteínas tendo capacidade comparável para induzir a formação de anticorpos específicos contra HTLV-III e/ou ligação a anticorpos específicos contra HTLV-III. 0 termo "equivalente" está a ser usado na sua utilização vulgar em patentes significando uma sequência de nucleotídeos que actua substancialmente como a sequência de nucleotídeos aqui identificada para produzir moléculas substancialmente com o mesmo actividade antigenica ou imunogénica de HTLV-III ou terapêutica contra HTLV-III essencialmente no mesmo tipo de hospedeiro. Dentro desta definição estão os subfragmentos que possuem actividade anti-génica de HTLV-III ou actividade terapêutica contra HTLV-III.
Conforme divulgado atrás, é do conhecimento dos familiarizados com engenharia genética, o uso de sequências de nucleotídeos codificadores de actividade antigénica ou imunogénica de HTLV-III ou terapêutica contra HTLV-III do presente invento, para produzir proteínas de HTLV-III através de processos microbianos. Para a fusão de 12 τ
sequências num vector de expressão e transformação ou transfecção de hospedeiros, procariótico (células bacteria-nas) ou eucariotico (células de levedura ou de mamífero) usam-se os processos convencionais utilizados para a produção de outras proteínas bem conhecidas, e.g., insulina, interferões, hormona de crescimento humana, IL-1, IL-2, e similares. Processos similares, ou modificaçdes obvias deles, podem ser empregues para preparar proteínas de HTLV-III por meios microbianos ou tecnologia de cultura de tecidos de acordo com o presente invento.
As sequências de nucleotídeos aqui divulgadas podem ser preparadas por uma "máquina de genes" através de processos bem conhecidos. Isto é possível devido a divulgação da sequência de nucleotídeos.
As enzimas de restrição descritas podem ser adquiridas a Bethesda Research Laboratories, Gaithersburg, MD, ou New England Biolabs, Beverly, MA. As enzimas são usadas de acordo com as instruções dadas pelo fornecedor.
Os vários métodos empregues na preparação dos plasmídeos e transformação de organismos hospedeiros são bem conhecidos na especialidade. Estes processos estão todos descritos em Maniatis, T., Fritsch, E.F., e Sambrook, J. (1982) Molecular Cloning: A Laboratory Manual,^ Cold Spring Habor Labofcatory, New York. Assim é conhecido dos familiarizados com engenharia genética, como extrair DNA de células microbianas, efectuar digestões com enzimas de restrição, electroforese de fragmentos de DNA, colocar
caudas em plasmídeos, emparelhá-los e inserir DNA, ligar DNA, transformar selulas, e.g. células de E. coli, preparar DNA de plasmídeo, electroforese de proteínas e sequenciar DNA.
Os ensaios imunoquimicos que empregam as proteínas de HTLV-III do invento podem tomar uma variedade de formas. O tipo preferido e um ensaio imunométri-co em fase solida. Em ensaios deste tipo, uma proteína de HTLV-III e imobilizada numa fase solida para formar um imuno-adsorvente de antigénio. 0 imunoadsorvente é incubado com a amostra a testar. Apos um período de incubação adequado o imunoadsorvente é separado da amostra e usa-se anticorpo marcado anti-(lgG humana) para detectar o anticorpo humano anti-HTLV-IlI ligado ao imunoadsorvente. A quantidade de marcação associada ao imunoadsorvente pode ser comparada com testemunhas positivas e negativas para avaliar a presença ou ausência de anticorpos anti-HTLV-III. 0 imunoadsorvente pode ser preparado por adsorção ou acoplamento de uma proteína de HTLV-III purificada a uma fase solida. Podem ser uãadas várias fases solidas, como sejam pérolas de vidro, polistireno, polipropi-leno, dextrano ou outro material. Outras fases solidas adequadas incluem tubos ou placas formadas ou revestidas com estes materiais.
As proteínas do HTLV-III podem ser ligadas covalentemente ou não covalentemente a fase solida por técnicas tais como ligação covalente, via uma ligação - 13 ***
LΛ
amida ou éster, ou adsorção. Apos a proteína do HTLV-III estar fixada a fase solida , a fase solida pode ser ainda revestida com proteína animal, e.g. 3% de gelatina de peixe. Isto proporciona uma proteína de bloqueio que reduz a adsorção não específica da proteína a superfície do imunoadsor-vente. 0 imunoadsorvente é então incubado com a amostra a testar para anticorpos anti-HTLV-III. No despiste de sangue usa-se plasma de soro sanguíneo. 0 plasma ou soro é diluido com plasma ou soro de animal normal. 0 plasma ou soro diluente deriva da mesma espécie animal que é a fonte do anticorpo anti-(IgG humana). 0 anticorpo preferido anti-(IgG humana) é o anticorpo de cabra anti-(IgG humana). Assim, no formato preferido, o diluente será soro ou plasma de cabra.
As condiçOes de incubação, e.g., pH e temperatura, e a duração da incubação não são cruciais. Estes parâmetros podem ser optimizados por experimentação de rotina. De um modo geral, a incubação decorrerá durante 1-2 horas a cerca de 453 C num tampão de pH 7-8.
Apos incubação, o imunoadsorvente e a amostra são separadas. A separação pode ser conseguida por qualquer técnica de separação convencional como seja sedimentação ou centrifugação. 0 imunoadsorvente pode então ser lavado para se libertar da amostra de modo a eliminar quaisquer substâncias interferentes. - 14
O imunoadsorvente é incubado com o anticorpo marcado anti-(IgG humana) (traçador) para de-tectar anticorpo humano a ele ligado. Geralmente o imunoadsorvente é incubado com uma solução do anticorpo marcado anti-(IgG humana) que contem uma pequena quantidade (cerca de 1%) do soro ou plasma da espécie animal que serve como fonte do anticorpo anti-(lgG humana). 0 anticorpo anti(lgG humana) pode ser obtido a partir de qualquer fonte animal. No entanto, é preferido anticorpo de cabra anti(IgG humana). O anticorpo anti-(IgG humana) pode ser qualquer anticorpo contra o fragmento Fc de IgG humana, por exemplo, anticorpo de cabra anti-Fc de (IgG humana) . 0 anticorpo anti-(IgG humana) ou anti-Fc de (IgG humana) pode ser marcado com um material radioactivo como seja iodo 125; marcado com uma nova marca optica, como seja um material fluorescente; ou marcado com uma enzima como seja a peroxidase de rábano silvestre. 0 anticorpo anti- humano pode também ser biotinilado e usada avidina marcada para detectar a sua ligação ao imunoadsorvente.
Apos incubação com o anticorpo marcado, o imunoadsorvente foi separado da solução e avaliada a marcação associada ao imunoadsorvente. Dependendo da escolha da marca a avaliação pode ser feita de uma série de modos. A marcação pode ser detectada num contador gama se a marcação fôr um emissor gama radioactivo ou num fluorxmetro se a marca fôr um material fluorescente. No caso de uma enzima, a detecção da marcação pode ser feita colorimétri-camente empregando um substracto para a enzima. 15 -
A quantidade de marcação associada ao imunoadsorvente e comparada com testemunhas positivas e negativas para determinar a presença do anticorpo anti--HTLV-III, As testemunhas são geralmente processadas paralelamente a amostra a ser testada. Uma testemunha positiva é um soto contendo anticorpos contra HTLV-III; uma testemunha negativa é um soro de indivíduos saudáveis que não contenham anticorpos contra HTLV-III.
Por conveniência e normalização, os reagentes para efectuar o ensaio imunometrico podem ser montados em "kits" de ensaio. Um "kit" para despiste de sangue, por exemplo, pode incluir: a) um imunoadsorvente, e.g., uma pérola de polistireno revestida com proteínas de HTLV-III; b) um diluente para a amostra de soro ou plasma, e.g., soro ou plasma normal de cabra; c) um anticorpo anti-(IgG humana), e.g., anticorpo de cabra anti-(IgG humana) numa solução aquosa tamponada contendo cerca de 1% de soro ou plasma de cabra; d) Uma testemunha positiva, e.g., soro contendo anticorpos contra pelo menos uma das novas proteínas do HTLV-III; e e) uma testemunha negativa, e.g., soro de vários indivíduos saudáveis que não contenha anticorpos contra pelo menos uma das novas proteínas do HTLV-m.
Se a marca fôr uma enzima, um elemento adicional do "kit" pode ser o substracto da enzima. 16 -
I
Um outro tipo de ensaio para anticorpos anti HTLV-III e um ensaio de sanduíche com antigénio. Neste ensaio, uma proteína de HTLV-III marcada é usada em vez do anticorpo anti-(IgG humana) para detectar anticorpos anti-HTLV-III ligados ao imunoadsorvente. 0 ensaio baseia-se em princípio na bivalência das moléculas de anticorpo. Um sítio de ligação do anticorpo liga-se ao antigénio fixado a fase solida; o segundo está disponível para ligação ao antigénio marcado. O processo do ensaio é essencialmente o' mesmo descrito para o ensaio imunométrico excepto depois da incubação com a amostra o imunoadsorvente ser incubado com uma solução de proteína marcada do HTLV-III. As proteínas do HTLV-III podem ser marcadas com radioisotopo, uma enzima, etc, para este tipo de ensaio.
Num terceiro formato, a proteína bacteriana, proteína A, que se liga ao segundo Fc de uma molécula de IgG sem interferir com a interacção antigénio--anticorpo, pode ser usada como traçador marcado para detectar anticorpos anti-HTLV-III adsorvidos ao imunoadsorvente. A proteína A pode ser facilmente marcada com um radioisotopo, enzima ou outra espécie detectável.
Os ensaios imunoquímicos que empregam uma proteína de HTLV-III têm nárias vantagens sobre os que usam vírus total (ou desagregado). Os ensaios baseados numa proteína de HTLV-III aleviarâo as preocupaçOes acerca das crescentes quantidades de vírus infeccioso e a inerente variabilidade associada a cultura de células e produção de vírus. Ainda, o ensaio ajudará a diminuir o medo de contrair SIDA dos técnicos hospitalares, clínicos e de bancos de - 17
de sangue que fazem o teste.
As vacinas de proteínas do HTLV-III, aqui divulgadas, e suas variantes tendo propriedades anti-génicas podem ser preparadas por processos bem conhecidos na especialidade. Por exemplo, tais vacinas podem ser preparadas sob a forma injéctavel e.g./ soluções ou suspensâos líquidas. Também podem preparar-se formas solidas para solução ou suspensão num líquido antes da injecção. Facultativamente a preparação pode ser emulsionada. 0 ingrediente ou ingredientes activos antigénicos P°<3em ser misturados com excipientes que são farmacêuticamente aceitáveis e compatíveis com o ingrediente activo. São exemplos de tais excipientes adequados água, soro fisiológico, dextrose, glicerol, etanol ou similares e suas combinações. Em adição caso se pretenda, a vacina pode conter pequenas quantidades de substâncias auxiliares tais como agentes molhantes ou emulsio-nantes, agentes tamponantes do pH ou adjuvantes que aumentem a eficácia da vacina. Convencionalmente as vacinas são administradas parenteralmente, por injecção, por exemplo, subcutânea ou intramuscular. Outras formulações adequadas a outros modos de administração incluem supositórios e, nalguns casos, formulações orais. Para supositáorios, os agentes de ligação e evículo incluem por exemplo, polialcalenoglicóis ou tri-gliceridos. Pode-se fazer supositórios com misturas contendo o ingrediente activo na gama de cerca de 0,5% a cerca de 10%, de preferência cerca de 1 a cerca de 2%. As formulações orais podem incluir os excipientes normalmente empregues como por exemplo manitol, lactose, amido, estearato de magnésio, sacarina sódica, celulose, carbonato de magnésio e similares. Estas composições podem tomar a forma de soluções, 18 - i
suspensGes, comprimidos, pílulas, cápsulas, formulaçOes de libertação sustida ou pos e contêm entre cerca de 10% e cerca de 95% do ingrediente activo, de preferência entre cerca de 25% e cerca de 70%.
As proteínas podem ser formuladas na vacina nas formas neutra ou de sal. Sais farmacêuticamente aceitáveis incluem sais de adição ácida (formados com os grupos amino livres do peptídeo) e gue são formados com ácidos inorgânicos tais como, por exemplo, ácidos clorídrico ou fosfórico, ou sais ácidos orgânicos tais como acético, oxálico, tartárico, mandelico e similares. Os sais formados com os grupos carboxilo livres ppdem também ser derivados de bases inorgânicas tais como, por exemplo, hidróxidos de sódio, amónio, potássio, cálcio ou férrico e bases orgânicas tais como isopropilamina, trimetilamina, 2-etilaminoetanol, histidina, procaína e similares.
As vacinas são administradas de modo compatível com a formulação de dosagem, e em quantidades terapêuticamente eficaz e imunogenica. A quantidade a ser administrada depende do indivíduo a ser tratado, da capacidade do sistema imune do indivíduo para sintetizar anticorpos e do grau de protecção pretendido. As quantidades precisas do ingrediente activo necessárias para administração dependem da opinião do médico assistente e são características de cada indíviduo. No entanto, as gamas de dosagem adequada são da ordem de várias centenas de microgramas de ingrediente activo por indivíduo. Os regimes adequados de administração inicial e inoculação de memória também são variáveis, mas t tipicamente a uma administração inicial segue-se uma injecção subsequente ou outra administração com intervalos de uma a duas semanas. Ê conhecido que o HTLV-III apresenta variações na sequência de aminoácidos, particularmente no gene do envelope (Starvich, B.R. / 1986/ cell 45:637 648; Hahn, B.H. et al. / 1986/ Science 232:1548-1553). Foram analisados cerca de 100 variantes por clonagem molecular e análise com enzimas de restrição e vários destes foram ainda analisados por sequenciação de nucleotídeos. Alguns destes são os isolados de HTLV-III conhecidos como RF (Popovic, M.^ et al. /^1984/ Science 224:497-500), WMJ-1 (Hahn, B.H. et al /~1986/ Science 232:1548-1553). LAV (Wain-Hobson, S. et al / 19857 cell 40:9-17) e ARV-2 (Sanchez-Pescador, R. et al / 1985/ Science 227:484-492). Se bem que o presente invento descreva a sequência de um isolado do HTLV-III, as regiões adequadas do envolucro de qualçper isolado de HTLV-III podem ser produzidas usando os precessos aqui descritos para a preparação de RIO, PB1, 590 e KH1. As proteínas do HTLV-III de diferentes isolados virais podem ser usadas nas preparações de vacinas, conforme descrito atrás, para proteger contra infecções por diferentes isolados de . HTLV-III. Ainda, pode-se fazer uma preparação de vacina usando mais do que uma proteína recombinante antigénica de mais do que um isolado de HTLV-III para conferir imunidade e portanto dar melhor protecçâo contra a SIDA.
Seguem-se exemplos que ilustram o processo do invento, incluindo o melhor modo de executá-lo. Estes exemplos não devem ser pensados como limitantes. Todas as proporções de solventes são por volume a menos que de outro modo seja indicado. - 20
Exemplo 1 - Construção do plasmídeo pREV 2.2 0 vector de expressão plasmídeo pREV 2.2 foi construído a partir do plasmídeo pBGl. 0 plasmídeo pBGl pode ser isolado a partir do seu hospedeiro E. coli por processos conhecidos, e.g. usando processos de gradientes de densidade isopicnicos para lisados clarificados e similares. Tal como o pBGl, pREV2.2 expressa os genes inseridos a seguir ao promotor de E. coli. &s diferenças entre pBGl e pREV2.2 são as seguintes: 1. pREV2.2 não possui uma proteína de replicação do plasmídeo (rop) funcional 2. pREV2.2 tem o terminador da transacção trpA inserido no sítio AatlI. Esta sequência assegura a terminação da transcrição dos genes super-expressos. 3. pREV2.2 tem genes para conferir resistência a ampicilina e ao cloranfenicol, enquanto que pBGl proporciona apenas resistência a ampicilina. 4. pREV2.2 contem uma sequência codificadora de sítios para várias endonucleases de restrição.
Os processos que se seguem, apresentados na Figura 1 dos desenhos foram usados para fazer cada uma das quatro alterações descritas abaixo: la. 5 ng do plasmídeo pBGl foi cortado com a enzima de restrição Ndel que dá dois fragmentos de aproximadamente 2160 e 3440 pares de bases. 21
lb. 0,1 μ<3 de DNA da miáura de digestão, após inactivação da Ndel, foi tratado com DNA ligase de T4 nas condições que favorecem a ligação intramolecular (200 μΐ de volume de reacção usando as condições de reacção convencionais para a T4 ligase / New England, Beverly, MA/)- A ligação intramolecular do fragmento de 3440 pares de bases deu um pias mídeo resistente a ampicilina. A mistura de ligação foi usada para transformar a estirpe recipiente E. coli JM103 (adquirida a New England Biolabs) e seleccionaram-se clones resistentes a ampicilina por processos convencionais. lc. 0 plasmídeo produto, pBGl ΔΝ, onde o fragmen to Ndelde 2160 pares de bases foi retirado do pBGl, selecciona-se por preparação do plasmídeo a partir de clones resistentes a ampicilina e determinou-se os padrões de digestão com enzimas de restrição usando Ndel e Sall (fragmentos produto de aproxima-damente 1790 e 1650). Esta delecção inactiva o gene rop que controla a leplicação do plasmídeo. 2a. 5 pg de ρΒβΙΔΝ foi então digerido com EcoRI e Bell e isolado o fragmento maior, aproxi-madamente 2455 pares de bases 2b. Preparou-se pelo processo de Itakura et al (Itakura, K., Rossi, J.J. e Wallace, R.B. / 1984/ Ann. Rev. Biochem. 53:323-356 e referências ali inclusas) um fragmento sinté- 22 22
* tico de cadeia dupla com a estrutura apresentada na Tabela 1. Este fragmento tem extremos coesivos Bclle EcoRIe contem sequências de reconhecimento para várias endo-nucleases de restrição. 2c. 0,1 pg do fragmento EcoRI-Bcll de 2455 pares de bases e 0,01 pg do fragmento sintético foram ligados com DNA ligase de T4 e transformaram-se células competentes da estirpe JM103. As células portadoras do plasmídeo recombinante, em que o fragmento sintético foi inserido em pBGlAN entre os sítios Bell e EcoRI, foram seleccionados por digestão do plasmídeo com Hpal e EcoRI. Os tamanhos dos fragmentos para diagnostico são de aproximadamente 2355 e 200 pares de bases. Este plasmídeo foi designado pREVl. 2d. 5 pg de pREVl foram digeridos com Aatll que cliva num unico sítio.
2e. 0 fragmento de cadeia dupla apresentada na Tabela foi sintetizado. Este fragmento tem extremos coesivos Aatll e possui a sequência de terminação da transcrição trpA 2f. Ligou-se 0,1 pg do pREVl digerido com Aatll e 0,01 pg do fragmento sintético num volume de 20 pl usando DNA ligase de T4. 2g. Transformaram-se células competentes da estirpe JM103 e seleccionaram-se os clones resistentes a ampicilina. - 23
2h. Usando uma digestão dupla com as enzimas de restrição Kpnl e EcoRI do plasmídeo isolado a partir das colónias seleccionadas, isolou-se uma célula contendo a construção correcta. Os tamanhos dos fragmentos produzidos com Kpnl e EcoRIão de aproximadamente 2475 e 80 pares de bases. Este plasmídeo foi designado pREVlTT e contem o terminador da transcrição trpA. 3a. 5 pg de pREVlTT, preparado conforme descrito atras (por métodos convencionais) foi clivado com Ndele Xmnl e isolado o fragmento de aproximadamente 850 pares de bases. 3b. 5 pg do plasmídeo pBR325 (BRL, Gaithersburg, MD) que contem os genes que conferem resistência ao cloranfenicol assim como a ampi-cilina e tetraciclina, foi clivado com Bell e os extremos tornados cegos com polimerase klenow e desoxinucleotídeos. Após inactiva-çâo da enzima, a mistura foi tratada com Ndel e isolado o fragmento de aproximadamente 3185 pares de bases. Este fragmento contem os genes para a resistência ao cloranfenicol e a ampicilina e a origem de repli-caçâo. 3c. 0,1 pg do fragmento Ndel-Amnl do pREVlTT e o fragmento Ndel-Bell do pBR325 foram ligados em 20 pl com DNA ligase de T4 e a mistura usada para transformar células competentes da estirpe JM103. Seleccionaram-se as células resistentes simultâneamente a ampicilina 24 -
e ao cloranfenicol 3d. Usando uma digestão dupla com EcoRI e Ndel do plasmídeo de clones seleccionados, escolheu-se um plasmídeo que deu fragmentos com tamanhos aproximados de 2480, 1145 e 410 pares de bases. Este é designado plasmídeo pREVlTT/chl e tem genes para a resdâtência a ampicilina e ao cloranfenicol. 4a. Sintetizou-se o fragmento de cadeia dupla apresentado na Tabela 3. Este fragmento com um extremo cego e um extremo coesivo SstI , contém sequências de reconhecimento para varias enzimas de restrição. 4b. 5 pg do pREVlTT/chl foi clivado com NruI (que cliva a cerca de 20 nucleotídeos do sítio Bell) e SstI (que cliva dentro do sítio de clonagem múltipla). 0 fragmento maior de aproximadamente 3990 pares de bases, foi isolado a partir de um gel de agarose. 4c. 0,1 μg do fragmento NruI-SstI do pREVlTT/chl e 0,01 pg do fragmento sintético foram tratados com DNA ligase de T4 num volume de 20ul 4d. Usou-se esta mistura para transformar a estirpe JM103 e seleccionaram-se os clones resistentes a ampicilina. 4e. Purificou-se plasmídeos a partir de vários clones e testaram-se por digestão com MluI ou Ciai. Os clones recombinantes com o novo sítio de clonagem multçLa darão um fragmento quando digeridos com qualquer uma destas enzimas pois cada uma delas cliva o plasmí-deo num unico sítio. 4f. A sequência do sítio de clonagem múltipla foi verificada. Isto foi feito cortando o plasmídeo com as enzimas de restrição Hpal e PvuII, isolando o fragmento de 1395 pares de bases, clonando-o no sítio Smal de mpl8 e sequenciando-o por sequenciaçâo de desoxinu cleotídeos usando métodos convencionais. 4g. Este plasmídeo, designado pREV2.2 está esquematizado na Figura 2 dos desenhos.
Exemplo 2 - Construção de pRIO e sua expressão 0 plasmídeo pRIO, que contem aproxi-madamente 1275 pares de bases de DNA codificador do gene env do BTLV-III essencialmente a partir do sítio kpnl ate ao sítio BglII e a partir do qual se sintetiza uma proteína de fusão de cerca de 95KD contendo esta porção da proteína do envolucro gpl20, pode ser construido como se segue: 1. Sintetizando o DNA com a sequência mostrada na Tabela 4. Este fragmento de DNA pode ser sintetizado por métodos convencionais (Itahura, et al, supra e referências ali inclusas) e codifica uma porção de ghl20. Tem um extremo cego no extremo 5' e um extremo que se ligará a uma projecçâo BamHI no extremo 3'. 2. Cortando 5 pg do plasmídeo pBGl com a enzima de restrição Bell, preenchendo os extremos projectados com polimerase Klenow e trifos-
fatos de desoxirribonucleotídeo (dNTPs), cortando este fragmento com BamHI e isolando o fragmento grande, aproximadamente 8,9 kb, de um gel de agarose. 3. Ligando 0,1 pg do fragmento na Tabela 4 com 0,1 pg do fragmento pBGl num volume de 20 μΐ usando DNA ligase de T4, transformando células competentes da estirpe SG20251 (Gottesman, S-, Halpern, E. e Trisler, P. / 1981/ Journal of Bacteriology 148:265-273) com a mistura de ligação e seleccionando os transformantes resistentes a ampicilina. 4. Beleccionando, usando o padrão de restrição AhalIIdo plasmídeo purificado, células portadoras do plasmídeo recombinante com o fragmento sintetizado numa orientação tal que o extremo cego do fragmento esteja ligado ao extremo Bell preenchido do fragmento e os extremos BamHI projectados ligados um ao outro. A digestão com Aahl do plasmídeo correcto dá fragmentos de aproximadamente 5300, 3170, 690, 640, 330 e 20 pares de bases. 5. Quando a estirpe portadora deste plasmídeo recombinante é cultivada em meio a 2% (2% de extracto de levedura, bactotriptona, casamino-ácidos (Difco, Detroit, MI), 0,2% de potássio monobásico, 0,2% de potássio dibásico e 0,2% de sodio dibásico) contendo 50 pg/ml de ampicilina e todo o complemento de proteínas celulares sujeitas a electroforese num gel de SDS-poliacrilamida, pode-se observar uma proteína proeminente de aproximadamente 95 KD, através de coloração, com azul coomassive ou por análise de transferências Western usando como sonda soro seleccionado de indivíduos infectados com SIDA, ARC ou HTLV-III.
Exemplo 3 - Purificação da proteína recombinante contendo
sequências do envolucro do HTLV-III do plasmídeo pRlO 1. Crescimento das células:
Cultivam-se as células num volume de 10 litros num fermentador Chemap (Chemapec, Woodbury, NY) em meio a 2%. A temperatura de fermentação foi de 37° C, o pH 6,8 e introduziu-se ar a 1 vvm. A seleção dos plasmídeos foi conseguida com 50 pg/ml de ampicilina. 0 rendimento celular típico (peso molhado) e de 30 g/1. 2. Lise das células: 50 g, peso molhado de células, de E.coli contendo a proteína recombinante de fusão do envolucro de HTLV-III foram suspensas num volume final de 100 ml em 50 mM Tris-Cl pH 8,0, 5mM ácido etilenodiaminotetracético e potássio (KEDIA), 5 mM ditiotreitol (DTT), 15 mM p -mercapto-etanol, 0,5% Triton X-100 e 5 mM fluoreto de fenilmetilsul-folilo (PMSF), Adicionou-se 300 mg de lizosima e incubou-se a suspensão durante 30 min a temperatura ambiente.
Este material foi lisado usando um TM BEAD-BEATER (Biospec Products, Bertlesville, OK) contendo um volume igual de pérolas de vidro de 0,1-0,15. A lise foi feita durante 6 min a temperatura ambiente em intervalos 28
de 1 minuto. 0 líquido foi separado das pérolas e centrifu-gado durante 2,5 horas a 20.000 xg. Removeu-se o sobrena-dante e dissolveu-se o sedimento em 100 ml de 8 M ureia# 20 mM Tris-HCl pH 8,0, 5 mM DTT, 15 mM j3 -mercaptoetanol, 5 mM PMSF e 1 mM KEDTA. 0 sedimento foi solubilizado usando um homogeneizador "polytron" (Beckman, Berkeley, CA) e centrifugado a 20.000 kg durante 2 horas. 3. Cromatografia em dietilaminoetilo (DEAE):
Aplicou-se o sobrenadante numa coluna de 550 ml (5 cmx28 cm) com DEAE Fast Flow Sepharose (Pharmacia Piscataway, NJ) equilibrada com 8 M ureia# 20 mM Tris-Cl pH 8,0# 15 mM j3-mercaptoetanol e 1 mM KEDTA a temperatura ambiente. A coluna foi lavada com 1,5 litros de tampão de equilíbrio e a proteína eluida com um gradiente linear de 5#0 litros desde 0 a 0,8 M NaCl em tampão de equilíbrio. A proteína HTLV-III eluiu a 0,2 M NaCl e foi testada usando electroforese em SDSrpoliacrilamida e seguindo a proteína proeminente a aproximadamente 95 KD.
Reuniram-se as fracções contendo a proteína de HTLN-III e concentrou-se a proteína até 10 ml usando um concentrador de pressão positiva (Amicon, Danvers, MA) equipado com uma membrana de 10 000 de peso molecular de exclusão (YM-10, Amicon). 0 concentrado foi aplicado numa coluna de 500 ml (2,9 cm x 100 cm) com Sephacryl S-300 Superfine (Pharmacia) equilibrada com 8 M ureia, 20 mM Tris--Cl, pH 8,0, 15 mM p-mercaptoetanol e 1 mM KEDTA. A coluna foi eluida com tampão de equilíbrio a temperatura ambiente. Foi mantido um fluxo de 0,5 ml/min. A proteína de HTLV-III eluiu a aproximadamente 40% do volume da coluna. 29
Exemplo 4 - Construção e expressão do plasmídeo pPBl 0 plasmídeo pPBl que contem aproxi-madamente 540 pares de bases de DNA codificando essencialmente o gene env do HTLV-III desde o sítio PvuII ate ao sítio BglII e a partir do qual é sintetizada uma proteína de fusão de aproximadamente 26 KD contendo esta porção da proteína do envelope gpl20, pode ser construído como se segue: 1. Sintetizando o DNA com a sequência apresentada na Tabela 5: Este fragmento de DNA pode ser sintetizado por métodos convencionais e codifica uma porção de gpl20. Possui um extremo cego no extremo 5' e um extremo que se ligará a uma projecçâo BamHI no extremo 3'. 2. Cortando 5 pg do plasmídeo pKEV2.2. com as enzimas de restrição EcoRV e BamHI e isolando o fragmento grande, aproximadamente 4 KD, a partir de um gel de agarose. 3. Ligação de 0,1 pg do fragmento na Tabela 5 com 0,1 pg do fragmento de pREV2.2 num volume de 20 μΐ usando DNA ligase de T4, transformando células competentes da estirpe S620251 com amistura de ligação e seleccionando transformantes resistentes a ampicilina. 4. Usando o padrão de restrição Ahalfflffi plasmídeo purificado, seleccionaram-se células portadoras do plasmídeo recombinante com o fragmento sintetizado na orientaç~ao em que o extremo cego do fragmento se liga ao extremo EcoRV de REV2.2 e os extremos projectados BamHI se ligam um ao outro. A digestão com AhalII do plasmídeo correcto dá fragmentos de aproximadamente 1210, 1020, 750, 690, 500, 340 e 20 pares de bases. Quando a estirpe possuidora deste plasmídeo recombinante é - 30 -
cultivada em meio a 2% contendo 50 pg/ml de ampicilina e as proteínas celulares totais sSo sujeitas a eletroforese num gel de SDS-poliacrilamida/ pode-se observar uma proteína de aproximadamente 26 KD através de coloração com azul coomassie ou por análise de transferências Western usando como sonda soro seleccionado de indivíduos infectados com SIDA/ ARC OU HTLV-III.
Exemplo 5 - Purificação de proteína recombinante contendo sequências do envelope de HTLV-III do plasmídeo pPBl 1. Crescimento das células:
As células fcram cultivadas num volume de 10 litros num fermentador Chemap em meio a 2%. A temperatura de fermentação foi de 37°c, o pH foi de 6,8 e introduziu-se ar a 1 vvm. Pez-se a selecção de plasmídeos com 50 pg/ml de ampicilina e 20 ug/ml de cloranfenicol. A produção típica de células (peso molhado) foi de 30 g/1. 2. Lise das células: 50 g, peso molhado de células, de E.coli contendo a proteína recombinante de fusão do envelope de HTLV-III foram suspensas num volume final de 100 ml em 50 mM Tris-Cl pH 8,0, 5 mM KEDTA, 5 mM DTT, 15 mM p-mercapto-etanol, 0,5%TRiton X-100 e 5 mM PMSF. Adicionou-se 300 mg de lisozima e a suspensão foi incubada durante 30 min. a temperatura ambiente.
Este material foi ILsado usando um TM BEAD-BEATER (Biospec Products, Bartlesville, OK) contendo um volume igual de pérolas de vidro 0,1-0,15 um. A lise foi feita durante 6 min. a temperatura ambiente em intervalos de 1 min. 0 líquido foi separado das pérolas e centrifugado durante 2,5 horas a 20000 xg. 0 sobrenadante foi removido e o sedimento ressuspenso em 100 ml de 6M hidrocloreto de guanidina, 20 mM Tris-Cl pH 8/0, 5 mM DTT, 15 mM β-mer-captoetanol, 3 mM PMSP e 1 mM KEDTA. 0 sedimento foi solu-bilizado usando um homogeneizador polytron, e centrifugado a 20 000 xg durante 2 hr. 0 sobrenadante (90 ml) foi dialisado contra 4 litros de 8 M ureia, 20 mM Tris-Cl, pH 8,0, 1 mM EDTA e 15 mM (3-mercaptoetanol. A éiálise durou 8 horas ou mais de cada vez com três mudas de tampão. Usou-se tubo de diaíise Spectraphor (S/P, McGraw Park, IL) com um peso molecular de exclusão de 3,5 KD.
3. Cromatografia em CM 0 dialisado foi aplicado numa coluna de 550 ml (5 cm x 28 cm) contendo CM Past Flow Sepharose (Pharmacia) equilibrada em 8 M ureia, 10 mM fosfato de potássio pH 7,0, 15 mM (3-mercaptoetanol e 1 mM KEDTA a temperatura ambiente. A coluna foi lavada com 2 litros de tampão de equilíbrio e a proteína eluida com um gradiente linear de 5 litros desde 0 a 0,4 M NaCl. A proteína de HTLV-III (26 KD) eluiu a aproximadamente 0,2 M NaCl conforme testado por electroforese em gel de SDS poliacrilamida.
Exemplo 6 - Construção e expressão do plamídeo p590 0 plasmídeo p590, que contem aproximadamente 1055 pares de bases de DNA codificando essencialmente o gene env de HTLV-III desde o sítio PvuII até ao sítio HindiII e a partir do qual é sintetizado uma proteína \ 32 \ 32
'ν de fusão de aproximadamente 86 KD contendo esta porção da proteína do envelope gp 160, pode ser construído como se segue: 1. Sintetizando o DNA com a sequência apresentada na Tabela 6: Este fragmento de DNA pode ser sintetizado por métodos convencionais e codifica uma porção de gH 160. Ele possui um extremo cego no extremo 5' e um extremo que se ligará a uma projecção HindiII no extremo 3'. 2. Cortando 5 pg do plasmídeo pREV2.2 com EcoRV e HindiII e isolando o fragmento grande, aproximadamente 4 KD, de um gel de agarose. 3. Ligando 0,1 ug do fragmento na Tabela 6 com 0,1 pg do fragmento de pREV2.2 num volume de 20 ml usando DNA ligase de T4, transformando de células competentes da estirpe SG20251 com a mistura de ligação e selecção dos transforman-tes resistentes a ampicilina. 4. Usando o padrão de restrição AhalII do plasmídeo purificado, seleccionaou-se as células portadoras do plasmídeo recombinanfee com o fragmento sintetizado na orientação em que o extremo cego do fragmento se liga ao extremo EcoRV do pREV2.2 e os extremos projectados HindIII se ligam um ao outro. A digestão com Ahal do plasmídeo correcto dá fragmentos de aproximadamente 1740, 1020, 750, 690, 500, 340 e 20 pares de bases. 5. 5 ug do plasmídeo, purificado a partir desta estirpe, foi cortado com Ndel e Smal. Isolou-se o fragmento com aproximadamente 1425 pares de bases a partir de um gel de agarose. 0 fragmento de 1505 pares de bases foi fundido com o DNA codificador do segmento de gpl60. 33 33
% 6. 5 pg de pBGlOl foi cortado com BamHI, os extremos pro-jectados preenchidos com poliraerase Klenow e dNTPs e depois cortados com Ndel. Isolou-se o fragmento com aproximadamen-te 6,5 KD a partir de um gel de agarose. 7. Ligando 0,1 pg do fragmento Ndel-Smal com 0,1 pg do fragmento pBGl usando DNA ligase de T4, transformando células competentes da estirpe SG20251 com mistura de ligação e seleccionando transformantes resistentes a ampicilina. 8. Usando o padrão de restrição AhalII do plasmídeo purificado seleccionando células portadoras do plasmídeo recombinente com o fragmento sintetizado na orientação em que o extremo cego Smal do fragmento se liga ao extremo BamHI preenchido e os extremos projectados Ndel se ligam um ao outro. A digestão com Ahall do plasmídeo correcto dá fragmentos de aproxi-madamente 5900, 1020, 690, 430 e 20 pares de bases. 8. Quando a estirpe portadora deste plasmídeo recombinente é cultivada em meio a 2% contendo 50 pg/ml de ampicilina e as proteínas celulares totais são sujeitas a electroforese em gel de SDS-poliacrilamida, uma proteína com aproximada-mente 86 KD pode ser visualizada por coloração com azul coo-massie ou por análise de transferências Western usando como sonda soro seleccionado de indivíduos infectados com SIDA, ARC ou HPLV-III.
Exemplo 7 - Purificação de proteína recombinante contendo as sequências do envolucro de HTLV-III do plasmídeo p590 1. Crescimento das células:
Es células foram cultivadas num volume de 10 litros num fermentador Chemap em meio a 2%. 34 34
« A tempeKtura de fermentação foi de 37°C, o pH de 6/8 e introduzido ar a 1 vvm. A selecção de plasmídeos foi feita com 50 ug/ml de ampicilina. A produção típica de células (peso molhado) é de 30 g/1. 2. Lise de células: 50 g, peso molhado de células, de E.coli contendo a proteína recombinante de fusão do envo-lucro do HTLV-III, foram ressuspensos num volume final de 100 ml de 50 mM Tris-HCl pH 8,0, 0,5 mM KEDTA, 5 mM DTT, 15 mM (3-mercaptoetanol, 0,5% Triton X-100 e 5 mM PMSP. Adicionou-se 300 mg de lisozima e incubou-se a saspensão durante 30 minutos a, temperatura ambiente.
Este material foi lisado usando um TM ^
Bead-Beater contendo pérolas de vidro de 0,1-0,15 mm, A lise foi feita durante 6 min a tempeiatura ambiente em intervalos de 1 min. 0 líquido foi separado das pérolas e centri-fugado durante 2,5 horas a 20 000 kg. 0 sobreçadante foi removido e o sedimento ressuspenso em 100 ml de 6 M hidro-cloreto de guanidina, 20 mM Tris-Cl pH 8,0, 5 mM DTT, 15 mM (à -mercaptoetanol, 5 mM PMSP e 1 mM KEDTA. 0 sedimento foi solubilizado usando um homogeneizador "polytron" e centri-fugado a 20000 xg durante 2 hr. 0 sobrenadante (90 ml) foi diali-zado contra 4 litros de 8M ureia, 20 mM Tris-HCl, pH 8,0, 1 mM EDTA e 15 mM (3-mercaptoetanol. A dialise foi feita 8 horas ou mais de cada vez com três mudas de tampão. Usou--se o tubo de dialise Spectraphor com um peso molecular de exclusão de 3,5 KD. - 35
! 3. Cromatografia em dietilaminoetilo (DEAE) ! Ί 0 dialisato foi aplicado numa coluna de 550 ml (5 cm x 28 cm) contendo DEAE Fast Plow Sepha-jj rose (Pharmacia) equilibrada com 8 M ureia, 20 mM Tris-Cl |j pH 8,0, 15 mM (3-mercaptoetanol e 1 mM KEDTA a temperatura Ι ambiente. A coluna foi lavada com 1,5 litros de tampão de jj equilíbrio e a proteína eluida com um gradiente linear de 5,0 litros de 0 a 0,8 M NaCl em tampão de equilíbrio. A proteína de HTLV-III eluiu a 0,4 M NaCl e foi testada usando i electroforese em gel de SDS-poliacrilamida e seguindo a I proteína proeminente a aproximadamente 86 KD. 'i j
As fracções contendo a proteína HTLV- ( π -III foram reunidas e a proteína concentrada para 10 ml jj » :i usando um concentrador de pressão positiva (Amicon) adaptado j !Í i com uma membrana de 10000 de peso molecular de exclusão j
í I :j (YM-10, Amicon). 0 concentrado foi aplicado numa coluna de j 500 ml (2,5 cm x 100 cm) contendo Sephacryl S-300 Superfine i (Pharmacia) equilibrada com 8 M ureia, 200 MTRis-HCl, pH 8,0, 15 mM jB-mercaptoetanol e 1 mM KEDTA. A coluna foi eluida com tampão de equilíbrio a temperatura ambiente. Manteve-se um fluxo de 0,5 ml/min. A proteína de HTLV-III eluxu a aproximadamente 40% do volume da coluna.
Exemplo 8 - Construção e expressão do plasmídeo pKHl 0 plasmídeo pKHl, que contem aproximadamente 1830 pares de bases de DNA codificando essencialmente o gene env de HTLV-III desde o sítio Kpnl até ao 36 -
1
sítio Hind III e a partir do qual é sintetizado uma proteína de fusão com aproximadamente 70 KD contendo esta porção da proteína do envolucro gpl60, pode ser construído como se segue: 1. Sintetizando o DNA com a sequência apresentada na Tabela 7: Este fragmento de DNA pode ser sintetizado por métodos convencionais e codifica uma porção de gpl60. Tem um extremo cego no extremo 5' e um extremo que se ligara ao uma projecção HindiII no extremo 3'. 2. Cofctando 5 pg do plasmídeo pREV2.2 com MluI, tratando o DNA com polimerase Klenow para tornar os extremos cegos, tratando com HindiII e isolando o fragmento grande, aproximadamente 5 KD a partir de um gel de agarose. 3. Ligação de 0,1 pg do fragmento na Tabela 7 com 0,1 pg do fragmento de pREV2.2 num volume de 20 pl usando DNA ligase de T4, transformação de célmlas competentes da estirpe CAG629 com a mistura de ligação e selecção dos transformantes resistentes a ampicilina. 4. Usando o padrão de restrição AhalII do plasmídeo purificado, selecionando células portadoras do plasmídeo recombinante com o fragmento sintetizado na orientação em que o extremo cego do fragmento se liga ao extremo MluI de REV2.2 e os extremos projectados HindiII se ligam um ao outro. A digestão com AhalII do plasmídeo correcto dá fragmentos de aproximadamente 1730, 1020, 750, 690, 640, 600, 340 e 20 pares de bases. Quando a estirpe portadora deste plasmídeo recombinante é cultivada em meio a 2% contendo 50 ;ug/ ml de ampicilina e as proteínas celulares totais são sujeitas a electroforese num gel de SDS-poliacrila- 37mm»
Λ
mida, pode-se observar uma proteína com aproximada-mente 70 KD por coloração com azul Coomassie ou por análise de transferências Western usando como sonda soro seleccionado de indivíduos infectados com SIDA, ARC ou HTLV-III.
Exemplo 9 - Purificação de proteína recombinante contendo sequências do envolucro de HTLV-III do plasmí-deo pKHl 1. Crescimento das células:
Cultivaram-se as células num volume de 10 litros num fermentador Chemap em meio a 2%. A temperatura de fermentação foi de 32°C, o pH 6,8 e introduziu-se ar a 1 vvm. A selecção de plasmídeos foi conseguida com 50 ug/ml de ampicilina. A produção celular típica (peso molhado) foi de 30 g/1. 2. Lise de células: 50 g, peso molhado de células, de E. coli contendo a proteína recombinante de fusão do envolucro de HTLV-III foram ressuspensos num volume final de 100 ml em 50 mM Tris-Cl pH 8,0, 5 mM KEDTA, 5 mM ditiotrei-tol (DTT), 15 mM β -mercaptoetanol, 0,5%Triton X-100 e 5 mM PMSF. Adicionou-se 300 mg de lisozima e incubou-se a suspensão durante 30 minutos À temperatura ambiente.
Este material foi lisado usando um TM BEAD-BEATER (Biospec Products) contendo um volume igual de pérolas de vidro de 0,1-0,15 pm. A lise foi feita durante 6 min. a temperatura ambiente em intervalos de 1 min. 0 líquido foi separado das pérolas e centrifugado durante 2,5 38
horas a 20 000 xg. 0 sohrenadante foi removido e o sedimento dissolvido em 100 ml de 8 M ureia, 20 mM Tris-Cl pH 8,0, 5 mM β-mercaptoetanol, 5 mM PMSP e 1 mM KEDTA. 0 sedimento foi solubilizado usando um homogeneizador de "polytron" (Beckman, Berkeley, CA) e centrifugado a 20 000 xg durante 2 horas. 3. Cromatografia em DEAE: 0 sohrenadante foi aplicado numa coluna de 550 ml (5 cm x 28 cm) contendo DEAE Fast Flow Sepharose (Pharmacia) equilibrada em 8 M ureia, 20 mM Tris--C1 pH 8,0, 15 mM β-mercaptoetanol e 1 mM KEDTA a temperatura ambiente. A coluna foi lavada com 1,5 litros de tampão de equilíbrio e a proteína eluida com um gradiente linear de 5,0 litros de 0 a 0,8 M NaCl em tampão de equilíbrio. A proteína de HTLV-III eluiu a 0,2 M NaCl e foi testada usando electroforese em gel de SDS-poLiacrilamida e seguindo a proteína a aproximadamente 70 KD.
As fracçOes contendo a proteína de HTLV-III fofcam reunidas e a proteína concentrada para 10 ml usando um concentrador de pressão positiva (Amicon) adaptada com uma membrana de 10 000 de peso molecular de exclusão (YM-10, Amicon). 0 concentrado foi aplicado numa coluna de 500 ml (2,5 cm x 100 cm) contendo Sephacryl S-300 Superfine (Pharmacia) equilibrada com 8 M ureia, 20 mM Tris-HCl, pH 8,0 15 mM β-mercaptoetanol e 1 mM KEDTA. A coluna foi eluida com tampão de equilíbrio a temperatura ambiente. Foi mantido um fluxo de 0,5 ml/min. A proteína de HTLV-III elui a aproximadamente 40% do volume da coluna. \ 39
ι 4. Electroforese em SDS-poliacrilamida
As fracções contendo KH1 foram reunidas e a proteína concentrada usando um concentrador de pressSo positiva adaptado com uma membrana de 10 000 de peso molecular de exclusão. Misturou-se 2 mg de proteína com o tampão de amostra e fez-se electroforese num gel preparativo de SDS-poliacrilamida (40 cm x 20 cm x 4 mm) como descrito por M.W. Hurikapiller, E. Lujan, F. Ostrander e L.E. Hood/ Methods in Enzymology 91:227-236 (1983). A proteína de HPLV-III de 70 KD foi visualizada por coloração com azul Coomassie e eluida do gel como descrito. A proteína pode ser removida do SDS por precipitação com acetona (Dynan, W. J., Jendrisak, J.J. Hager, D.A. e Burgess, R.R. / 1981/ J. Biol. Chem. 256:5860-5865).
Tabela 1
5' GATCAAGCTTCTGCAGTCGACGCATGCGGATCCGGTACCCGGGAGCTCG 3' TTCGAAGACGTCAGCTGCGTACGCCTAGGCCATGGGCCCTCGAGCTTAA
Tabela 2
5' CGGTACCAGCCCGCCTAATGAGCGGGCTTTTTTTTGACGT 3' TGCAGCCATGGTCGGGCGGATTACTCGCCCGAAAAAAAAC
Tabela 3
MluI EcoRV Ciai BamHI Sall HindIII Smal
CGAACGCGTGGCCGATATCATCGATGGATCCGTCGACAAGCTTCCCGGGAGCT
GCTTGCGCACCGGCTATAGTAGCTACCTAGGCAGCTGTTCGAAGGGCCC
Tabela 4
5' AATTCCCTGTGTGGAAGGAAGCA TTAAGGGACACACCTTCCTTCGT
ACCACCACTCTATTTTGTGCATCAGATGCTAAAGCATATGATACAGAGGTACAT
TGGTGGTGAGATAAAACACGTAGTCTACGATTTCGTATACTATGTCTCCATGTA
AATGTTTGGGCCACACATGCCTGTGTACCCACAGACCCCAACCCACAAGAAGTA
TTACAAACCCGGTGTGTACGGACACATGGGTGTCTGGGGTTGGGTGTTCTTCAT
GTATTGGTAAATGTGACAGAAAATTTTAACATGTGGAAAAATGACATGGTAGAA
CATAACCATTTACACTGTCTTTTAAAATTGTACACCTTTTTACTGTACCATCTT
CAGATGCATGAGGATATAATCAGTTTATGGGATCAAAGCCTAAAGCCATGTGTA
GTCTACGTACTCCTATATTAGTCAAATACCCTAGTTTCGGATTTCGGTACACAT
AAATTAACCCCACTCTGTGTTAGTTTAAAGTGCACTGATTTGAAGAATGATACT
TTTAATTGGGGTGAGACACAATCAAATTTCACGTGACTAAACTTCTTACTATGA
AATACCAATAGTAGTAGCGGGAGAATGATAATGGAGAAAGGAGAGATAAAAAAC
TTATGGTTATCATCATCGCCCTCTTACTATTACCTCTTTCCTCTCTATTTTTTG
TGCTCTTTCAATATCAGCACAAGCATAAGAGGTAAGGTGCAGAAAGAATATGCA
ACGAGAAAGTTATAGTCGTGTTCGTATTCTCCATTCCACGTCTTTCTTATACGT
TTTTTTTATAAACTTGATATAATACCAATAGATAATGATACTACCAGCTATACG
AAAAAAATATTTGAACTATATTATGGTTATCTATTACTATGATGGTCGATATGC
TTGACAAGTTGTAACACCTCAGTCATTACACAGGCCTGTCCAAAGGTATCCTTT
AACTGTTCAACATTGTGGAGTCAGTAATGTGTCCGGACAGGTTTCCATAGGAAA
GAGCCAATTCCCATACATTATTGTGCCCCGGCTGGTTTTGCGATTCTAAAATGT
CTCGGTTAAGGGTATGTAATAACACGGGGCCGACCAAAACGCTAAGATTTTACA
AATAATAAGACGTTCAATGGAACAGGACCATGTACAAATGTCAGCACAGTACAA
TTATTATTCTGCAAGTTACCTTGTCCTGGTACATGTTTACAGTCGTGTCATGTT
TGTACACATGGAATTAGGCCAGTAGTATCAACTCAACTGCTGTTAAATGGCAGT
ACATGTGTACCTTAATCCGGTCATCATAGTTGAGTTGACGACAATTTACCGTCA
CTAGCAGAAGAAGAGGTAGTAATTAGATCTGCCAATTTCACAGACAATGCTAAA
GATCGTCTTCTTCTCCATCATTAATCTAGACGGTTAAAGTGTCTGTTACGATTT
ACCATAATAGTACAGCTGAACCAATCTGTAGAAATTAATTGTACAAGACCCAAC
TGGTATTATCATGTCGACTTGGTTAGACATCTTTAATTAACATGTTCTGGGTTG
AACAATACAAGAAAAAGTATCCGTATCCAGAGAGGACCAGGGAGAGCATTTGTT TTGTTATGTTCTTTTTCATAGGCATAGGTCTCTCCTAATCCCTCTCGTAAACAA 42 -
I
42 - I
Tabela 4 (cont)
ACAATAGGAAAAATAGGAAATATGAGACAAGCACATTGTAACATTAGTAGAGCA
TGTTATCCTTTTTATCCTTTATACTCTGTTCGTGTAACATTGTAATCATCTCGT
AAATGGAATAACACTTTAAAACAGATAGATAGCAAATTAAGAGAACAATTTGGA
TTTACCTTATTGTGAAATTTTGTCTATCTATCGTTTAATTCTCTTGTTAAACCT
AATAATAAAACAATAATCTTTAAGCAGTCCTCAGGAGGGGACCCAGAAATTGTA
TTATTATTTTGTTATTAGAAATTCGTCAGGAGTCCTCCCCTGGGTCTTTAACAT
ACGCACAGTTTTAATTGTGGAGGGGAATTTTTCTACTGTAATTCAACACAACTG
TGCGTGTCAAAATTAACACCTCCCCTTAAAAAGATGACATTAAGTTGTGTTGAC
TTTAATAGTACTTGGTTTAATAGTACTTGGAGTACTAAAGGGTCAAATAACACT
AAATTATCATGAACCAAATTATCATGAACCTCATGATTTCCCAGTTTATTGTGA
GAAGGAAGTGACACAATCACCCTCCCATGCAGAATAAAACAAATTATAAACATG
CTTCCTTCACTGTGTTAGTGGGAGGGTACGTCTTATTTTGTTTAATATTTGTAC
TGGCAGGAAGTAGGAAAAGCAATGTATGCCCCTCCCATCAGTGGACAAATTAGA
ACCGTCCTTCATCCTTTTCGTTACATACGGGGAGGGTAGTCACCTGTTTAATCT
TGTTCATCAAATATTACAGGGCTGCTATTAACAAGAGATGGTGGTAATAGCAAC
ACAAGTAGTTTATAATGTCCCGACGATAATTGTTCTCTACCACCATTATCGTTG AATGAGTCCGA 3'
TTACTCAGGCTCTAG
Tabela 5
5' CTGAACCAATCTGTAGAAATTAATTGTACAAGACCCAAC GACTTGGTTAGACATCTTTAATTAACATGTTCTGGGTTG
AACAATACAAGAAAAAGTATCCGTATCCAGAGAGGACCAGGGAGAGCATTTGTT
TTGTTATGTTCTTTTTCATAGGCATAGGTCTCTCCTGGTCCCTCTCGTAAACAA
ACAATAGGAAAAATAGGAAATATGAGACAAGCACATTGTAACATTAGTAGAGCA
TGTTATCCTTTTTATCCTTTATACTCTGTTCGTGTAACATTGTAATCATCTCGT
AAATGGAATAACACTTTAAAACAGATAGATAGCAAATTAAGAGAACAATTTGGA
TTTACCTTATTGTGAAATTTTGTCTATCTATCGTTTAATTCTCTTGTTAAACCT
AATAATAAAACAATAATCTTTAAGCAGTCCTCAGGAGGGGACCCAGAAATTGTA
TTATTATTTTGTTATTAGAAATTCGTCAGGAGTCCTCCCCTGGGTCTTTAACAT
ACGCACAGTTTTAATTGTGGAGGGGAATTTTTCTACTGTAATTCAACACAACTG
TGCGTGTCAAAATTAACACCTCCCCTTAAAAAGATGACATTAAGTTGTGTTGAC
TTTAATAGTACTTGGTTTAATAGTACTTGGAGTACTAAAGGGTCAAATAACACT
AAATTATCATGAACCAAATTATCATGAACCTCATGATTTCCCAGTTTATTGTGA
GAAGGAAGTGACACAATCACCCTCCCATGCAGAATAAAACAAATTATAAACATG
CTTCCTTCACTGTGTTAGTGGGAGGGTACGTCTTATTTTGTTTAATATTTGTAC
TGGCAGGAAGTAGGAAAAGCAATGTATGCCCCTCCCATCAGTGGACAAATTAGA
ACCGTCCTTCATCCTTTTCGTTACATACGGGGAGGGTAGTCACCTGTTTAATCT
TGTTCATCAAATATTACAGGGCTGCTATTAACAAGAGATGGTGGTAATAGCAAC
ACAAGTAGTTTATAATGTCCCGACGATAATTGTTCTCTACCACCATTATCGTTG AATGAGTCCGA 3'
TTACTCAGGCTCTAG
Tabela 6
5' CTGAACCAATCTGTAGAAATTAATTGTACAAGACCCAAC' GACTTGGTTAGACATCTTTAATTAACATGTTCTGGGTTG
AACAATACAAGAAAAAGTATCCGTATCCAGAGAGGACCAGGGAGAGCATTTGTT
TTGTTATGTTCTTTTTCATAGGCATAGGTCTCTCCTGGTCCCTCTCGTAAACAA
ACAATAGGAAAAATAGGAAATATGAGACAAGCACATTGTAACATTAGTAGAGCA
TGTTATCCTTTTTATCCTTTATACTCTGTTCGTGTAACATTGTAATCATCTCGT
AAATGGAATAACACTTTAAAACAGATAGATAGCAAATTAAGAGAACAATTTGGA
TTTACCTTATTGTGAAATTTTGTCTATCTATCGTTTAATTCTCTTGTTAAACCT
AATAATAAAACAATAATCTTTAAGCAGTCCTCAGGAGGGGACCCAGAAATTGTA
TTATTATTTTGTTATTAGAAATTCGTCAGGAGTCCTCCCCTGGGTCTTTAACAT
ACGCACAGTTTTAATTGTGGAGGGGAATTTTTCTACTGTAATTCAACACAACTG
TGCGTGTCAAAATTAACACCTCCCCTTAAAAAGATGACATTAAGTTGTGTTGAC
TTTAATAGTACTTGGTTTAATAGTACTTGGAGTACTAAAGGGTCAAATAACACT
AAATTATCATGAACCAAATTATCATGAACCTCATGATTTCCCAGTTTATTGTGA
GAAGGAAGTGACACAATCACCCTCCCATGCAGAATAAAACAAATTATAAACATG
CTTCCTTCACTGTGTTAGTGGGAGGGTACGTCTTATTTTGTTTAATATTTGTAC
TGGCAGGAAGTAGGAAAAGCAATGTATGCCCCTCCCATCAGTGGACAAATTAGA
ACCGTCCTTCATCCTTTTCGTTACATACGGGGAGGGTAGTCACCTGTTTAATCT
TGTTCATCAAATATTACAGGGCTGCTATTAACAAGAGATGGTGGTAATAGCAAC
ACAAGTAGTTTATAATGTCCCGACGATAATTGTTCTCTACCACCATTATCGTTG
AATGAGTCCGAGATCTTCAGACCTGGAGGAGGAGATATGAGGGACAATTGGAGA
TTACTCAGGCTCTAGAAGTCTGGACCTCCTCCTCTATACTCCCTGTTAACCTCT
AGTGAATTATATAAATATAAAGTAGTAAAAATTGAACCATTAGGAGTAGCACCC
TCACTTAATATATTTATATTTCATCATTTTTAACTTGGTAATCCTCATCGTGGG
ACCAAGGCAAAGAGAAGAGTGGTGCAGAGAGAAAAAAGAGCAGTGGGAATAGGA
TGGTTCCGTTTCTCTTCTCACCACGTCTCTCTTTTTTCTCGTCACCCTTATCCT
GCTTTGTTCCTTGGGTTCTTGGGAGCAGCAGGAAGCACTATGGGCGCAGCGTCA
CGAAACAAGGAACCCAAGAACCCTCGTCGTCCTTCGTGATACCCGCGTCGCAGT
ATGACGCTGACGGTACAGGCCAGACAATTATTGTCTGGTATAGTGCAGCAGCAG
TACTGCGACTGCCATGTCCGGTCTGTTAATAACAGACCATATCACGTCGTCGTC
AACAATTTGCTGAGGGCTATTGAGGCGCAACAGCATCTGTTGCAACTCACAGTC
TTGTTAAACGACTCCCGATAACTCCGCGTTGTCGTAGACAACGTTGAGTGTCAG
TGGGGCATCAAGCAGCTCCAGGCAAGAATCCTGGCTGTGGAAAGATACCTAAAG
ACCCCGTAGTTCGTCGAGGTCCGTTCTTAGGACCGACACCTTTCTATGGATTTC
Tabela 6 (cont.)
GATCAACAGCTCCTGGGGATTTGGGGTTGCTCTGGAAAACTCATTTGCACCACT
CTAGTTGTCGAGGACCCCTAAACCCCAACGAGACCTTTTGAGTAAACGTGGTGA
GCTGTGCCTTGGAATGCTAGTTGGAGTAATAAATCTCTGGAACAGATTTGGAAT
CGACACGGAACCTTACGATCAACCTCATTATTTAGAGACCTTGTCTAAACCTTA AACATGACCTGGATGGAGTGGGACAGAGAAATTAACAATTACACA 31
TTGTACTGGACCTACCTCACCCTGTCTCTTTAATTGTTAATGTGTTCGA - 46
Tabela 7
5' AATTCCCTGTGTGGAAGGAAGCA TTAAGGGACACACCTTCCTTCGT
ACCACCACTCTATTTTGTGCATCAGATGCTAAAGCATATGATACAGAGGTACAT
TGGTGGTGAGATAAAACACGTAGTCTACGATTTCGTATACTATGTCTCCATGTA
AATGTTTGGGCCACACATGCCTGTGTACCCACAGACCCCAACCCACAAGAAGTA
TTACAAACCCGGTGTGTACGGACACATGGGTGTCTGGGGTTGGGTGTTCTTCAT
GTATTGGTAAATGTGACAGAAAATTTTAACATGTGGAAAAATGACATGGTAGAA
CATAACCATTTACACTGTCTTTTAAAATTGTACACCTTTTTACTGTACCATCTT
CAGATGCATGAGGATATAATCAGTTTATGGGATCAAAGCCTAAAGCCATGTGTA
GTCTACGTACTCCTATATTAGTCAAATACCCTAGTTTCGGATTTCGGTACACAT
AAATTAACCCCACTCTGTGTTAGTTTAAAGTGCACTGATTTGAAGAATGATACT
TTTAATTGGGGTGAGACACAATCAAATTTCACGTGACTAAACTTCTTACTATGA
AATACCAATAGTAGTAGCGGGAGAATGATAATGGAGAAAGGAGAGATAAAAAAC
TTATGGTTATCATCATCGCCCTCTTACTATTACCTCTTTCCTCTCTATTTTTTG
TGCTCTTTCAATATCAGCACAAGCATAAGAGGTAAGGTGCAGAAAGAATATGCA
ACGAGAAAGTTATAGTCGTGTTCGTATTCTCCATTCCACGTCTTTCTTATACGT
TTTTTTTATAAACTTGATATAATACCAATAGATAATGATACTACCAGCTATACG
AAAAAAATATTTGAACTATATTATGGTTATCTATTACTATGATGGTCGATATGC
TTGACAAGTTGTAACACCTCAGTCATTACACAGGCCTGTCCAAAGGTATCCTTT
AACTGTTCAACATTGTGGAGTCAGTAATGTGTCCGGACAGGTTTCCATAGGAAA
GAGCCAATTCCCATACATTATTGTGCCCCGGCTGGTTTTGCGATTCTAAAATGT
CTCGGTTAAGGGTATGTAATAACACGGGGCCGACCAAAACGCTAAGATTTTACA
AATAATAAGACGTTCAATGGAACAGGACCATGTACAAATGTCAGCACAGTACAA
TTATTATTCTGCAAGTTACCTTGTCCTGGTACATGTTTACAGTCGTGTCATGTT
TGTACACATGGAATTAGGCCAGTAGTATCAACTCAACTGCTGTTAAATGGCAGT
ACATGTGTACCTTAATCCGGTCATCATAGTTGAGTTGACGACAATTTACCGTCA
CTAGCAGAAGAAGAGGTAGTAATTAGATCTGCCAATTTCACAGACAATGCTAAA
GATCGTCTTCTTCTCCATCATTAATCTAGACGGTTAAAGTGTCTGTTACGATTT
ACCATAATAGTACAGCTGAACCAATCTGTAGAAATTAATTGTACAAGACCCAAC
TGGTATTATCATGTCGACTTGGTTAGACATCTTTAATTAACATGTTCTGGGTTG
AACAATACAAGAAAAAGTATCCGTATCCAGAGAGGACCAGGGAGAGCATTTGTT
TTGTTATGTTCTTTTTCATAGGCATAGGTCTCTCCTAATCCCTCTCGTAAACAA
ACAATAGGAAAAATAGGAAATATGAGACAAGCACATTGTAAÇATTAGTAGAGCA
TGTTATCCTTTTTATCCTTTATACTCTGTTCGTGTAACATTGTAATCATCTCGT - 47
Tabela 7 (cont.)
AAATGGAATAACACTTTAAAACAGATAGATAGCAAATTAAGAGAACAATTTGGA
TTTACCTTATTGTGAAATTTTGTCTATCTATCGTTTAATTCTCTTGTTAAACCT
AATAATAAAACAATAATCTTTAAGCAGTCCTCAGGAGGGGACCCAGAAATTGTA
TTATTATTTTGTTATTAGAAATTCGTCAGGAGTCCTCCCCTGGGTCTTTAACAT
ACGCACAGTTTTAATTGTGGAGGGGAATTTTTCTACTGTAATTCAACACAACTG
TGCGTGTCAAAATTAACACCTCCCCTTAAAAAGATGACATTAAGTTGTGTTGAC
TTTAATAGTACTTGGTTTAATAGTACTTGGAGTACTAAAGGGTCAAATAACACT
AAATTATCATGAACCAAATTATCATGAACCTCATGATTTCCCAGTTTATTGTGA
GAAGGAAGTGACACAATCACCCTCCCATGCAGAATAAAACAAATTATAAACATG
CTTCCTTCACTGTGTTAGTGGGAGGGTACGTCTTATTTTGTTTAATATTTGTAC
TGGCAGGAAGTAGGAAAAGCAATGTATGCCCCTCCCATCAGTGGACAAATTAGA
ACCGTCCTTCATCCTTTTCGTTACATACGGGGAGGGTAGTCACCTGTTTAATCT
TGTTCATCAAATATTACAGGGCTGCTATTAACAAGAGATGGTGGTAATAGCAAC
ACAAGTAGTTTATAATGTCCCGACGATAATTGTTCTCTACCACCATTATCGTTG
AATGAGTCCGAGATCTTCAGACCTGGAGGAGGAGATATGAGGGACAATTGGAGA
TTACTCAGGCTCTAGAAGTCTGGACCTCCTCCTCTATACTCCCTGTTAACCTCT
AGTGAATTATATAAATATAAAGTAGTAAAAATTGAACCATTAGGAGTAGCACCC
TCACTTAATATATTTATATTTCATCATTTTTAACTTGGTAATCCTCATCGTGGG
ACCAAGGCAAAGAGAAGAGTGGTGCAGAGAGAAAAAAGAGCAGTGGGAATAGGA
TGGTTCCGTTTCTCTTCTCACCACGTCTCTCTTTTTTCTCGTCACCCTTATCCT
GCTTTGTTCCTTGGGTTCTTGGGAGCAGCAGGAAGCACTATGGGCGCAGCGTCA
CGAAACAAGGAACCCAAGAACCCTCGTCGTCCTTCGTGATACCCGCGTCGCAGT
ATGACGCTGACGGTACAGGCCAGACAATTATTGTCTGGTATAGTGCAGCAGCAG
TACTGCGACTGCCATGTCCGGTCTGTTAATAACAGACCATATCACGTCGTCGTC
AACAATTTGCTGAGGGCTATTGAGGCGCAACAGCATCTGTTGCAACTCACAGTC
TTGTTAAACGACTCCCGATAACTCCGCGTTGTCGTAGACAACGTTGAGTGTCAG
TGGGGCATCAAGCAGCTCCAGGCAAGAATCCTGGCTGTGGAAAGATACCTAAAG
ACCCCGTAGTTCGTCGAGGTCCGTTCTTAGGACCGACACCTTTCTATGGATTTC
GATCAACAGCTCCTGGGGATTTGGGGTTGCTCTGGAAAACTCATTTGCACCACT
CTAGTTGTCGAGGACCCCTAAACCCCAACGAGACCTTTTGAGTAAACGTGGTGA
GCTGTGCCTTGGAATGCTAGTTGGAGTAATAAATCTCTGGAACAGATTTGGAAT
CGACACGGAACCTTACGATCAACCTCATTATTTAGAGACCTTGTCTAAACCTTA AACATGACCTGGATGGAGTGGGACAGAGAAATTAACAATTACACA 3'
TTGTACTGGACCTACCTCACCCTGTCTCTTTAATTGTTAATGTGTTCGA
Tabela 8
Sequência de aminoácidos da proteína de fusão RIO
MetLeuArg
ProValGluThrProThrArgGluIleLysLysLeuAspGlyLeuTrpAlaPhe SerLeuAspArgGluAsnCysGlylleAspGlnPheProValTrpLysGluAla ThrThrThrLeuPheCysAlaSerAspAlaLysAlaTyrAspThrGluValKis AsnValTrpAlaThrHisAlaCysValProThrAspProAsnProGlnGluVal ValLeuValAsnValThrGluAsnPheAsnMetTrpLysAsnAspMetValGlu GlnMetHisGluAspIlelleSerLeuTrpAspGlnSerLeuLysProCysVal LysLeuThrProLeuCysValSerLeuLysCysThrAspLeuLysAsnAspThr AsnThrAsnSerSerSerGlyArgMetlleMetGluLysGlyGluIleLysAsn CysSerPheAsnlleSerThrSerlleArgGlyLysValGlnLysGluTyrAla •PhePheTyrLysLeuAspIlelleProIleAspAsnAspThrThrSerTyrThr LeuThrSerCysAsnThrSerValIleThrGlnAlaCysProLysValSerPhe GluProIleProIleHisTyrCysAlaProAlaGlyPheAlalleLeuLysCys AsnAsnLysThrPheAsnGlyThrGlyProCysThrAsnValSerThrValGln CysThrHisGlylleArgProValValSerThrGlnLeuLeuLeuAsnGlySer LeuAlaGluGluGluValValIleArgSerAlaAsnPheThrAspAsnAlaLys ThrllelleValGlnLeuAsnGlnSerValGluIleAsnCysThrArgProAsn AsnAsnThrArgLysSerlleArglleGlnArgGlyProGlyArgAlaPheVal ThrlleGlyLysIleGlyAsnMetArgGlnAlaHisCysAsnlleSerArgAla LysTrpAsnAsnThrLeuLysGlnlleAspSerLysLeuArgGluGlnPheGly AsnAsnLysThrllellePheLysGlnSerSerGlyGlyAspProGluIleVal ThrHisSerPheAsnCysGlyGlyGluPhePheTyrCysAsnSerThrGlnLeu PheAsnSerThrTrpPheAsnSerThrTrpSerThrLysGlySerAsnAsnThr GluGlySerAspThrlleThrLeuProCysArglleLysGlnllelleAsnMet TrpGlnGluValGlyLysAlaMetTyrAlaProProIleSerGlyGlnlleArg CysSerSerAsnlleThrGlyLeuLeuLeuThrArgAspGlyGlyAsnSerAsn
Tabela 8 (cont.)
AsnGluSerGluIleHisArgSerValMetLeuTyrThrThrProAsnThrTrp
ValAspAspIleThrValValThrHisValAlaGlnAspCysAsnHisAlaSer
ValAspTrpGlnValValAlaAsnGlyAspValSerValGluLeuArgAspAla
AspGlnGlnValValAlaThrGlyGlnGlyThrSerGlyThrLeuGlnValVal
AsnProHisLeuTrpGlnProGlyGluGlyTyrLeuTyrGluLeuCysValThr
AlaLysSerGlnThrGluCysAspIleTyrProLeuArgValGlylleArgSer
ValAlaValLysGlyGluGlnPheLeuIleAsnHisLysProPheTyrPheThr
GlyPheGlyArgHisGluAspAlaAspLeuArgGlyLysGlyPheAspAsnVal
LeuMetValHisAspHisAlaLeuMetAspTrpIleGlyAlaAsnSerTyrArg
ThrSerHisTyrProTyrAlaGluGluMetLeuAspTrpAlaAspGluHisGly
IleValValIleAspGluThrAlaAlaValGlyPheAsnLeuSerLeuGlylle
GlyPheGluAlaGlyAsnLysProLysGluLeuTyrSerGluGluAlaValAsn
GlyGluThrGlnGlnAlaHisLeuGlnAlalleLysGluLeuIleAlaArgAsp
LysAsnHisProSerValValMetTrpSerlleAlaAsnGluProAspThrArg
ProGlnGlyAlaArgGluTyrPheAlaProLeuAlaGluAlaThrArgLysLeu
AspProThrArgProIleThrCysValAsnValMetPheCysAspAlaHisThr
AspThrlleSerAspLeuPheAspValLeuCysLeuAsnArgTyrTyrGlyTrp
TyrValGlnSerGlyAspLeuGluThrAlaGluLysValLeuGluLysGluLeu
LeuAlaTrpGlnGluLysLeuHisGlnProIlellelleThrGluTyrGlyVal
AspThrLeuAlaGlyLeuHisSerMetTyrThrAspMetTrpSerGluGluTyr
GlnCysAlaTrpLeuAspMetTyrHisArgValPheAspArgValSerAlaVal
ValGlyGluGlnValTrpAsnPheAlaAspPheAlaThrSerGlnGlylleLeu
ArgValGlyGlyAsnLysLysGlyllePheThrArgAspArgLysProLysSer
AlaAlaPheLeuLeuGlnLysArgTrpThrGlyMetAsnPheGlyGluLysPro
GlnGlnGlyGlyLysGln
Tabela 8A
Sequência de nucleotídeos codificadora da proteína de fusão RIO
ATGTTACGT
TACAATGCA
CCTGTAGAAACCCCAACCCGTGAAATCAAAAAACTCGACGGCCTGTGGGCATTC
GGACATCTTTGGGGTTGGGCACTTTAGTTTTTTGAGCTGCCGGACACCCGTAAG
AGTCTGGATCGCGAAAACTGTGGAATTGATCAATTCCCTGTGTGGAAGGAAGCA
TCAGACCTAGCGCTTTTGACACCTTAACTAGTTAAGGGACACACCTTCCTTCGT
ACCACCACTCTATTTTGTGCATCAGATGCTAAAGCATATGATACAGAGGTACAT
TGGTGGTGAGATAAAACACGTAGTCTACGATTTCGTATACTATGTCTCCATGTA
AATGTTTGGGCCACACATGCCTGTGTACCCACAGACCCCAACCCACAAGAAGTA
TTACAAACCCGGTGTGTACGGACACATGGGTGTCTGGGGTTGGGTGTTCTTCAT
GTATTGGTAAATGTGACAGAAAATTTTAACATGTGGAAAAATGACATGGTAGAA
CATAACCATTTACACTGTCTTTTAAAATTGTACACCTTTTTACTGTACCATCTT
CAGATGCATGAGGATATAATCAGTTTATGGGATCAAAGCCTAAAGCCATGTGTA
GTCTACGTACTCCTATATTAGTCAAATACCCTAGTTTCGGATTTCGGTACACAT
AAATTAACCCCACTCTGTGTTAGTTTAAAGTGCACTGATTTGAAGAATGATACT
TTTAATTGGGGTGAGACACAATCAAATTTCACGTGACTAAACTTCTTACTATGA
AATACCAATAGTAGTAGCGGGAGAATGATAATGGAGAAAGGAGAGATAAAAAAC
TTATGGTTATCATCATCGCCCTCTTACTATTACCTCTTTCCTCTCTATTTTTTG
TGCTCTTTCAATATCAGCACAAGCATAAGAGGTAAGGTGCAGAAAGAATATGCA
ACGAGAAAGTTATAGTCGTGTTCGTATTCTCCATTCCACGTCTTTCTTATACGT
TTTTTTTATAAACTTGATATAATACCAATAGATAATGATACTACCAGCTATACG
AAAAAAATATTTGAACTATATTATGGTTATCTATTACTATGATGGTCGATATGC
TTGACAAGTTGTAACACCTCAGTCATTACACAGGCCTGTCCAAAGGTATCCTTT
AACTGTTCAACATTGTGGAGTCAGTAATGTGTCCGGACAGGTTTCCATAGGAAA
GAGCCAATTCCCATACATTATTGTGCCCCGGCTGGTTTTGCGATTCTAAAATGT
CTCGGTTAAGGGTATGTAATAACACGGGGCCGACCAAAACGCTAAGATTTTACA
AATAATAAGACGTTCAATGGAACAGGACCATGTACAAATGTCAGCACAGTACAA
TTATTATTCTGCAAGTTACCTTGTCCTGGTACATGTTTACAGTCGTGTCATGTT
TGTACACATGGAATTAGGCCAGTAGTATCAACTCAACTGCTGTTAAATGGCAGT
ACATGTGTACCTTAATCCGGTCATCATAGTTGAGTTGACGACAATTTACCGTCA
CTAGCAGAAGAAGAGGTAGTAATTAGATCTGCCAATTTCACAGACAATGCTAAA
GATCGTCTTCTTCTCCATCATTAATCTAGACGGTTAAAGTGTCTGTTACGATTT
ACCATAATAGTACAGCTGAACCAATCTGTAGAAATTAATTGTACAAGACCCAAC
TGGTATTATCATGTCGACTTGGTTAGACATCTTTAATTAACATGTTCTGGGTTG
Tabela 8Ά (cont.)
AACAATACAAGAAAAAGTATCCGTATCCAGAGAGGACCAGGGAGAGCATTTGTT
TTGTTATGTTCTTTTTCATAGGCATAGGTCTCTCCTAATCCCTCTCGTAAACAA
ACAATAGGAAAAATAGGAAATATGAGACAAGCACATTGTAACATTAGTAGAGCA
TGTTATCCTTTTTATCCTTTATACTCTGTTCGTGTAACATTGTAATCATCTCGT
AAATGGAATAACACTTTAAAACAGATAGATAGCAAATTAAGAGAACAATTTGGA
TTTACCTTATTGTGAAATTTTGTCTATCTATCGTTTAATTCTCTTGTTAAACCT
AATAATAAAACAATAATCTTTAAGCAGTCCTCAGGAGGGGACCCAGAAATTGTA
TTATTATTTTGTTATTAGAAATTCGTCAGGAGTCCTCCCCTGGGTCTTTAACAT
ACGCACAGTTTTAATTGTGGAGGGGAATTTTTCTACTGTAATTCAACACAACTG
TGCGTGTCAAAATTAACACCTCCCCTTAAAAAGATGACATTAAGTTGTGTTGAC
TTTAATAGTACTTGGTTTAATAGTACTTGGAGTACTAAAGGGTCAAATAACACT
AAATTATCATGAACCAAATTATCATGAACCTCATGATTTCCCAGTTTATTGTGA
GAAGGAAGTGACACAATCACCCTCCCATGCAGAATAAAACAAATTATAAACATG
CTTCCTTCACTGTGTTAGTGGGAGGGTACGTCTTATTTTGTTTAATATTTGTAC
TGGCAGGAAGTAGGAAAAGCAATGTATGCCCCTCCCATCAGTGGACAAATTAGA
ACCGTCCTTCATCCTTTTCGTTACATACGGGGAGGGTAGTCACCTGTTTAATCT
TGTTCATCAAATATTACAGGGCTGCTATTAACAAGAGATGGTGGTAATAGCAAC
ACAAGTAGTTTATAATGTCCCGACGATAATTGTTCTCTACCACCATTATCGTTG
AATGAGTCCGAGATCCATCGCAGCGTAATGCTCTACACCACGCCGAACACCTGG
TTACTCAGGCTCTAGGTAGCGTCGCATTACGAGATGTGGTGCGGCTTGTGGACC
GTGGACGATATCACCGTGGTGACGCATGTCGCGCAAGACTGTAACCACGCGTCT
CACCTGCTATAGTGGCACCACTGCGTACAGCGCGTTCTGACATTGGTGCGCAGA
GTTGACTGGCAGGTGGTGGCCAATGGTGATGTCAGCGTTGAACTGCGTGATGCG
CAACTGACCGTCCACCACCGGTTACCACTACAGTCGCAACTTGACGCACTACGC
GATCAACAGGTGGTTGCAACTGGACAAGGCACTAGCGGGACTTTGCAAGTGGTG
CTAGTTGTCCACCAACGTTGACCTGTTCCGTGATCGCCCTGAAACGTTCACCAC
AATCCGCACCTCTGGCAACCGGGTGAAGGTTATCTCTATGAACTGTGCGTCACA
TTAGGCGTGGAGACCGTTGGCCCACTTCCAATAGAGATACTTGACACGCAGTGT
GCCAAAAGCCAGACAGAGTGTGATATCTACCCGCTTCGCGTCGGCATCCGGTCA
CGGTTTTCGGTCTGTCTCACACTATAGATGGGCGAAGCGCAGCCGTAGGCCAGT
GTGGCAGTGAAGGGCGAACAGTTCCTGATTAACCACAAACCGTTCTACTTTACT
CACCGTCACTTCCCGCTTGTCAAGGACTAATTGGTGTTTGGCAAGATGAAATGA
GGCTTTGGTCGTCATGAAGATGCGGACTTGCGTGGCAAAGGATTCGATAACGTG
CCGAAACCAGCAGCACTTCTACGCCTGAACGCACCGTTTCCTAAGCTATTGCAC
CTGATGGTGCACGACCACGCATTAATGGACTGGATTGGGGCCAACTCCTACCGT
GACTACCACGTGCTGGTGCGTAATTACCTGACCTAACCCCGGTTGAGGATGGCA
Tabela 8A (cont.)
ACCTCGCATTACCCTTACGCTGAAGAGATGCTCGACTGGGCAGATGAACATGGC
TGGAGCGTAATGGGAATGCGACTTCTCTACGAGCTGACCCGTCTACTTGTACCG
ATCGTGGTGATTGATGAAACTGCTGCTGTCGGCTTTAACCTCTCTTTAGGCATT
TAGCACCACTAACTACTTTGACGACGACAGCCGAAATTGGAGAGAAATCCGTAA
GGTTTCGAAGCGGGCAACAAGCCGAAAGAACTGTACAGCGAAGAGGCAGTCAAC
CCAAAGCTTCGCCCGTTGTTCGGCTTTCTTGACATGTCGCTTCTCCGTCAGTTG
GGGGAAACTCAGCAAGCGCACTTACAGGCGATTAAAGAGCTGATAGCGCGTGAC
CCCCTTTGAGTCGTTCGCGTGAATGTCCGCTAATTTCTCGACTATCGCGCACTG
AAAAACCACCCAAGCGTGGTGATGTGGAGTATTGCCAACGAACCGGATACCCGT
TTTTTGGTGGGTTCGCACCACTACACCTCATAACGGTTGCTTGGCCTATGGGCA
CCGCAAGGTGCACGGGAATATTTCGCGCCACTGGCGGAAGCAACGCGTAAACTC
GGCGTTCCACGTGCCCTTATAAAGCGCGGTGACCGCCTTCGTTGCGCATTTGAG
GACCCGACGCGTCCGATCACCTGCGTCAATGTAATGTTCTGCGACGCTCACACC
CTGGGCTGCGCAGGCTAGTGGACGCAGTTACATTACAAGACGCTGCGAGTGTGG
GATACCATCAGCGATCTCTTTGATGTGCTGTGCCTGAACCGTTATTACGGATGG
CTATGGTAGTCGCTAGAGAAACTACACGACACGGACTTGGCAATAATGCCTACC
TATGTCCAAAGCGGCGATTTGGAAACGGCAGAGAAGGTACTGGAAAAAGAACTT
ATACAGGTTTCGCCGCTAAACCTTTGCCGTCTCTTCCATGACCTTTTTCTTGAA
CTGGCCTGGCAGGAGAAACTGCATCAGCCGATTATCATCACCGAATACGGCGTG
GACCGGACCGTCCTCTTTGACGTAGTCGGCTAATAGTAGTGGCTTATGCCGCAC
GATACGTTAGCCGGGCTGCACTCAATGTACACCGACATGTGGAGTGAAGAGTAT
CTATGCAATCGGCCCGACGTGAGTTACATGTGGCTGTACACCTCACTTCTCATA
CAGTGTGCATGGCTGGATATGTATCACCGCGTCTTTGATCGCGTCAGCGCCGTC
GTCACACGTACCGACCTATACATAGTGGCGCAGAAACTAGCGCAGTCGCGGCAG
GTCGGTGAACAGGTATGGAATTTCGCCGATTTTGCGACCTCGCAAGGCATATTG
CAGCCACTTGTCCATACCTTAAAGCGGCTAAAACGCTGGAGCGTTCCGTATAAC
CGCGTTGGCGGTAACAAGAAAGGGATCTTCACTCGCGACCGCAAACCGAAGTCG
GCGCAACCGCCATTGTTCTTTCCCTAGAAGTGAGCGCTGGCGTTTGGCTTCAGC
GCGGCTTTTCTGCTGCAAAAACGCTGGACTGGCATGAACTTCGGTGAAAAACCG
CGCCGAAAAGACGACGTTTTTGCGACCTGACCGTACTTGAAGCCACTTTTTGGC
CAGCAGGGAGGCAAACAA
GTCGTCCCTCCGTTTGTT 53
Tabela 9
Sequência de arainoácidos da proteína de fusão PB1
MetLeuArg
ProValGluThrProThrArgGluIleLysLysLeuAspGlyLeuTrpAlaPhe
SerLeuAspArgGluArgValAlaAspLeuAsnGlnSerValGluIleAsnCys
ThrArgProAsnAsnAsnThrArgLysSerlleArglleGlnArgGlyProGly
ArgAlaPheValThrlleGlyLysIleGlyAsnMetArgGlnAlaHisCysAsn
IleSerArgAlaLysTrpAsnAsnThrLeuLysGlnlleAspSerLysLeuArg
GluGlnPheGlyAsnAsnLysThrllellePheLysGlnSerSerGlyGlyAsp
ProGluIleValThrHisSerPheAsnCysGlyGlyGluPhePheTyrCysAsn
SerThrGlnLeuPheAsnSerThrTrpPheAsnSerThrTrpSerThrLysGly
SerAsnAsnThrGluGlySerAspThrlleThrLeuProCysArglleLysGln
IlelleAsnMetTrpGlnGluValGlyLysAlaMetTyrAlaProProIleSer
GlyGlnlleArgCysSerSerAsnlleThrGlyLeuLeuLeuThrArgAspGly
GlyAsnSerAsnAsnGluSerGluIleArgArgGlnAlaSerArgGluLeuGlu
PheLeuLysThrLysGlyProArgAspThrProIlePhelleGly
Tabela 9A
Sequência de Nucleotídeos codificadora da proteína de fusão PBl
ATGTTACGTCCTGTAGAAACCCCAACCCGTGAAATCAAAAAACTCGACGGCCTG
TACAATGCAGGACATCTTTGGGGTTGGGCACTTTAGTTTTTTGAGCTGCCGGAC
TGGGCATTCAGTCTGGATCGCGAACGCGTGGCCGATCTGAACCAATCTGTAGAA
ACCCGTAAGTCAGACCTAGCGCTTGCGCACCGGCTAGACTTGGTTAGACATCTT
ATTAATTGTACAAGACCCAACAACAATACAAGAAAAAGTATCCGTATCCAGAGA
TAATTAACATGTTCTGGGTTGTTGTTATGTTCTTTTTCATAGGCATAGGTCTCT
GGACCAGGGAGAGCATTTGTTACAATAGGAAAAATAGGAAATATGAGACAAGCA
CCTAATCCCTCTCGTAAACAATGTTATCCTTTTTATCCTTTATACTCTGTTCGT
CATTGTAACATTAGTAGAGCAAAATGGAATAACACTTTAAAACAGATAGATAGC
GTAACATTGTAATCATCTCGTTTTACCTTATTGTGAAATTTTGTCTATCTATCG
AAATTAAGAGAACAATTTGGAAATAATAAAACAATAATCTTTAAGCAGTCCTCA
TTTAATTCTCTTGTTAAACCTTTATTATTTTGTTATTAGAAATTCGTCAGGAGT
GGAGGGGACCCAGAAATTGTAACGCACAGTTTTAATTGTGGAGGGGAATTTTTC
CCTCCCCTGGGTCTTTAACATTGCGTGTCAAAATTAACACCTCCCCTTAAAAAG
TACTGTAATTCAACACAACTGTTTAATAGTACTTGGTTTAATAGTACTTGGAGT
ATGACATTAAGTTGTGTTGACAAATTATCATGAACCAAATTATCATGAACCTCA
ACTAAAGGGTCAAATAACACTGAAGGAAGTGAGACAATCACCCTCCCATGCAGA
TGATTTCCCAGTTTATTGTGACTTCCTTCACTGTGTTAGTGGGAGGGTACGTCT
ATAAAACAAATTATAAACATGTGGCAGGAAGTAGGAAAAGCAATGTATGCCCCT
TATTTTGTTTAATATTTGTACACCGTCCTTCATCCTTTTCGTTACATACGGGGA
CCCATCAGTGGACAAATTAGATGTTCATCAAATATTACAGGGCTGCTATTAACA
GGGTAGTCACCTGTTTAATCTACAAGTAGTTTATAATGTCCCGACGATAATTGT
AGAGATGGTGGTAATAGCAACAATGAGTCCGAGATCCGTCGACAAGCTTCCCGG
TCTCTACCACCATTATCGTTGTTACTCAGGCTCTAGGCAGCTGTTCGAAGGGCC
GAGCTCGAATTCTTGAAGACGAAAGGGCCTCGTGATACTCCTATTTTTATAGGT
CTCGAGCTTAAGAACTTCTGCTTTCCCGGAGCACTATGCGGATAAAAATATCCA
55
Tabela 10
Sequência de aminoácidos da proteína de fusão 590
MetLeuArgProValGluThr
ProThrArgGluIleLysLysLeuAspGlyLeuTrpAlaPheSerLeuAspArg
GluArgValAlaAspLeuAsnGlnSerValGluIleAsnCysThrArgProAsn
AsnAsnThrArgLysSerlleArglleGlnArgGlyProGlyArgAlaPheVal
ThrlleGlyLysIleGlyAsnMetArgGlnAlaHisCysAsnlleSerArgAla
LysTrpAsnAsnThrLeuLysGlnlleAspSerLysLeuArgGluGlnPheGly
AsnAsnLysThrllellePheLysGlnSerSerGlyGlyAspProGluIleVal
ThrHisSerPheAsnCysGlyGlyGluPhePheTyrCysAsnSerThrGlnLeu
PheAsnSerThrTrpPheAsnSerThrTrpSerThrLysGlySerAsnAsnThr
GluGlySerAspThrlleThrLeuProCysArglleLysGlnllelleAsnMet
TrpGlnGluValGlyLysAlaMetTyrAlaProProIleSerGlyGlnlleArg
CysSerSerAsnlleThrGlyLeuLeuLeuThrArgAspGlyGlyAsnSerAsn
AsnGluSerGluIlePheArgProGlyGlyGlyAspMetArgAspAsnTrpArg
SerGluLeuTyrLysTyrLysValValLysIleGluProLeuGlyValAlaPro
ThrLysAlaLysArgArgValValGlnArgGluLysArgAlaValGlylleGly
AlaLeuPheLeuGlyPheLeuGlyAlaAlaGlySerThrMetGlyAlaAlaSer
MetThrLeuThrValGlnAlaArgGlnLeuLeuSerGlylleValGlnGlnGln
AsnAsnLeuLeuArgAlalleGluAlaGlnGlnHisLeuLeuGlnLeuThrVal
TrpGlylleLysGlnLeuGlnAlaArglleLeuAlaValGluArgTyrLeuLys
AspGlnGlnLeuLeuGlylleTrpGlyCysSerGlyLysLeuIleCysThrThr
AlaValProTrpAsnAlaSerTrpSerAsnLysSerLeuGluGlnlleTrpAsn
AsnMetThrTrpMetGluTrpAspArgGluIleAsnAsnTyrThrSerPhePro
IleHisArgSerValMetLeuTyrThrThrProAsnThrTrpValAspAspIle
ThrValValThrHisValAlaGlnAspCysAsnHisAlaSerValAspTrpGln
ValValAlaAsnGlyAspValSerValGluLeuArgAspAlaAspGlnGlnVal 56 - ι I i %
Tabela 10 (cont.)
ValAlaThrGlyGlnGlyThrSerGlyThrLeuGlnValValAsnProHisLeu TrpGlnProGlyGluGlyTyrLeuTyrGluLeuCysValThrAlaLysSerGln ThrGluCysAspIleTyrProLeuArgValGlylleArgSerValAlaValLys GlyGluGlnPheLeuIleAsnHisLysProPheTyrPheThrGlyPheGlyArg HisGluAspAlaAspLeuArgGlyLysGlyPheAspAsnValLeuMetValHis AspHisAlaLeuMetAspTrpIleGlyAlaAsnSerTyrArgThrSerHisTyr ProTyrAlaGluGluMetLeuAspTrpAlaAspGluHisGlylleValValIle AspGluThrAlaAlaValGlyPheAsnLeuSerLeuGlylleGlyPheGluAla GlyAsnLysProLysGluLeuTyrSerGluGluAlaValAsnGlyGluThrGln GlnAlaHisLeuGlnAlalleLysGluLeuIleAlaArgAspLysAsnHisPro SerValValMetTrpSerlleAlaAsnGluProAspThrArgProGlnGlyAla ArgGluTyrPheAlaProLeuAlaGluAlaThrArgLysLeuAspProThrArg ProIleThrCysValAsnValMetPheCysAspAlaHisThrAspThrlleSer AspLeuPheAspValLeuCysLeuAsnArgTyrTyrGlyTrpTyrValGlnSer GlyAspLeuGluThrAlaGluLysValLeuGluLysGluLeuLeuAlaTrpGln GluLysLeuHisGlnProIlellelleThrGluTyrGlyValAspThrLeuAla GlyLeuHisSerMetTyrThrAspMetTrpSerGluGluTyrGlnCysAlaTrp LeuAspMetTyrHisArgValPheAspArgValSerAlaValValGlyGluGln ValTrpAsnPheAlaAspPheAlaThrSerGlnGlylleLeuArgValGlyGly AsnLysLysGlyllePheThrArgAspArgLysProLysSerAlaAlaPheLeu LeuGlnLysArgTrpThrGlyMetAsnPheGlyGluLysProGlnGlnGlyGly LysGln 57
Tabela 10A
Sequência de nucleotídeos codificadores da proteína de fusão 590
ATGTTACGTCCTGTAGAAACC
TACAATGCAGGACATCTTTGG
CCAACCCGTGAAATCAAAAAACTCGACGGCCTGTGGGCATTCAGTCTGGATCGC
GGTTGGGCACTTTAGTTTTTTGAGATGCCGGACACCCGTAAGTCAGACCTAGCG
GAACGCGTGGCCGATCTGAACCAATCTGTAGAAATTAATTGTACAAGACCCAAC
CTTGCGCACCGGCTAGACTTGGTTAGACATCTTTAATTAACATGTTCTGGGTTG
AACAATACAAGAAAAAGTATCCGTATCCAGAGAGGACCAGGGAGAGCATTTGTT
TTGTTATGTTCTTTTTCATAGGCATAGGTCTCTCCTAATCCCTCTCGTAAACAA
ACAATAGGAAAAATAGGAAATATGAGACAAGCACATTGTAACATTAGTAGAGCA
TGTTATCCTTTTTATCCTTTATACTCTGTTCGTGTAACATTGTAATCATCTCGT
AAATGGAATAACACTTTAAAACAGATAGATAGCAAATTAAGAGAACAATTTGGA
TTTACCTTATTGTGAAATTTTGTCTATCTATCGTTTAATTCTCTTGTTAAACCT
AATAATAAAACAATAATCTTTAAGCAGTCCTCAGGAGGGGACCCAGAAATTGTA
TTATTATTTTGTTATTAGAAATTCGTCAGGAGTCCTCCCCTGGGTCTTTAACAT
ACGCACAGTTTTAATTGTGGAGGGGAATTTTTCTACTGTAATTCAACACAACTG
TGCGTGTCAAAATTAACACCTCCCCTTAAAAAGATGACATTAAGTTGTGTTGAC
TTTAATAGTACTTGGTTTAATAGTACTTGGAGTACTAAAGGGTCAAATAACACT
AAATTATCATGAACCAAATTATCATGAACCTCATGATTTCCCAGTTTATTGTGA
GAAGGAAGTGACACAATCACCCTCCCATGCAGAATAAAACAAATTATAAACATG
CTTCCTTCACTGTGTTAGTGGGAGGGTACGTCTTATTTTGTTTAATATTTGTAC
TGGCAGGAAGTAGGAAAAGCAATGTATGCCCCTCCCATCAGTGGACAAATTAGA
ACCGTCCTTCATCCTTTTCGTTACATACGGGGAGGGTAGTCACCTGTTTAATCT
TGTTCATCAAATATTACAGGGCTGCTATTAACAAGAGATGGTGGTAATAGCAAC
ACAAGTAGTTTATAATGTCCCGACGATAATTGTTCTCTACCACCATTATCGTTG
AATGAGTCCGAGATCTTCAGACCTGGAGGAGGAGATATGAGGGACAATTGGAGA
TTACTCAGGCTCTAGAAGTCTGGACCTCCTCCTCTATACTCCCTGTTAACCTCT
AGTGAATTATATAAATATAAAGTAGTAAAAATTGAACCATTAGGAGTAGCACCC
TCACTTAATATATTTATATTTCATCATTTTTAACTTGGTAATCCTCATCGTGGG
ACCAAGGCAAAGAGAAGAGTGGTGCAGAGAGAAAAAAGAGCAGTGGGAATAGGA
TGGTTCCGTTTCTCTTCTCACCACGTCTCTCTTTTTTCTCGTCACCCTTATCCT
Tabela 10 A (cont.) GCTTTGTTCCTTGGGTTCTTGGGAGCAGCAGGAAGCACTATGGGCGCAGCGTCÁ
CGAAACAAGGAACCCAAGAACCCTCGTCGTCCTTCGTGATACCCGCGTCGCAGT
ATGACGCTGACGGTACAGGCCAGACAATTATTGTCTGGTATAGTGCAGCAGCAG
TACTGCGACTGCCATGTCCGGTCTGTTAATAACAGACCATATCACGTCGTCGTC
AACAATTTGCTGAGGGCTATTGAGGCGCAACAGCATCTGTTGCAACTCACAGTC
TTGTTAAACGACTCCCGATAACTCCGCGTTGTCGTAGACAACGTTGAGTGTCAG
TGGGGCATCAAGCAGCTCCAGGCAAGAATCCTGGCTGTGGAAAGATACCTAAAG
ACCCCGTAGTTCGTCGAGGTCCGTTCTTAGGACCGACACCTTTCTATGGATTTC
GATCAACAGCTCCTGGGGATTTGGGGTTGCTCTGGAAAACTCATTTGCACCACT
CTAGTTGTCGAGGACCCCTAAACCCCAACGAGACCTTTTGAGTAAACGTGGTGA
GCTGTGCCTTGGAATGCTAGTTGGAGTAATAAATCTCTGGAACAGATTTGGAAT
CGACACGGAACCTTACGATCAACCTCATTATTTAGAGACCTTGTCTAAACCTTA
AACATGACCTGGATGGAGTGGGACAGAGAAATTAACAATTACACAAGCTTCCCG
TTGTACTGGACCTACCTCACCCTGTCTCTTTAATTGTTAATGTGTTCGAAGGGC
ATCCATCGCAGCGTAATGCTCTACACCACGCCGAACACCTGGGTGGACGATATC
TAGGTAGCGTCGCATTACGAGATGTGGTGCGGCTTGTGGACCCACCTGCTATAG
ACCGTGGTGACGCATGTCGCGCAAGACTGTAACCACGCGTCTGTTGACTGGCAG
TGGCACCACTGCGTACAGCGCGTTCTGACATTGGTGCGCAGACAACTGACCGTC
GTGGTGGCCAATGGTGATGTCAGCGTTGAACTGCGTGATGCGGATCAACAGGTG
CACCACCGGTTACCACTACAGTCGCAACTTGACGCACTACGCCTAGTTGTCCAC
GTTGCAACTGGACAAGGCACTAGCGGGACTTTGCAAGTGGTGAATCCGCACCTC
CAACGTTGACCTGTTCCGTGATCGCCCTGAAACGTTCACCACTTAGGCGTGGAG
TGGCAACCGGGTGAAGGTTATCTCTATGAACTGTGCGTCACAGCCAAAAGCCAG
ACCGTTGGCCCACTTCCAATAGAGATACTTGACACGCAGTGTCGGTTTTCGGTC
ACAGAGTGTGATATCTACCCGCTTCGCGTCGGCATCCGGTCAGTGGCAGTGAAG
TGTCTCACACTATAGATGGGCGAAGCGCAGCCGTAGGCCAGTCACCGTCACTTC
GGCGAACAGTTCCTGATTAACCACAAACCGTTCTACTTTACTGGCTTTGGTCGT
CCGCTTGTCAAGGACTAATTGGTGTTTGGCAAGATGAAATGACCGAAACCAGCA
CATGAAGATGCGGACTTGCGTGGCAAAGGATTCGATAACGTGCTGATGGTGCAC
GCACTTCTACGCCTGAACGCACCGTTTCCTAAGCTATTGCACGACTACCACGTG
GACCACGCATTAATGGACTGGATTGGGGCCAACTCCTACCGTACCTCGCATTAC
CTGGTGCGTAATTACCTGACCTAACCCCGGTTGAGGATGGCATGGAGCGTAATG
Tabela 10A (cont.)
CCTTACGCTGAAGAGATGCTCGACTGGGCAGATGAACATGGCATCGTGGTGATT
GGAATGCGACTTCTCTACGAGCTGACCCGTCTACTTGTACCGTAGCACCACTAA
GATGAAACTGCTGCTGTCGGCTTTAACCTCTCTTTAGGCATTGGTTTCGAAGCG
CTACTTTGACGACGACAGCCGAAATTGGAGAGAAATCCGTAACCAAAGCTTCGC
GGCAACAAGCCGAAAGAACTGTACAGCGAAGAGGCAGTCAACGGGGAAACTCAG
CCGTTGTTCGGCTTTCTTGACATGTCGCTTCTCCGTCAGTTGCCCCTTTGAGTC
CAAGCGCACTTACAGGCGATTAAAGAGCTGATAGCGCGTGACAAAAACCACCCA
GTTCGCGTGAATGTCCGCTAATTTCTCGACTATCGCGCACTGTTTTTGGTGGGT
AGCGTGGTGATGTGGAGTATTGCCAACGAACCGGATACCCGTCCGCAAGGTGCA
TCGCACCACTACACCTCATAACGGTTGCTTGGCCTATGGGCAGGCGTTCCACGT
CGGGAATATTTCGCGCCACTGGCGGAAGCAACGCGTAAACTCGACCCGACGCGT
GCCCTTATAAAGCGCGGTGACCGCCTTCGTTGCGCATTTGAGCTGGGCTGCGCA
CCGATCACCTGCGTCAATGTAATGTTCTGCGACGCTCACACCGATACCATCAGC
GGCTAGTGGACGCAGTTACATTACAAGACGCTGCGAGTGTGGCTATGGTAGTCG
GATCTCTTTGATGTGCTGTGCCTGAACCGTTATTACGGATGGTATGTCCAAAGC
CTAGAGAAACTACACGACACGGACTTGGCAATAATGCCTACCATACAGGTTTCG
GGCGATTTGGAAACGGCAGAGAAGGTACTGGAAAAAGAACTTCTGGCCTGGCAG
CCGCTAAACCTTTGCCGTCTCTTCCATGACCTTTTTCTTGAAGACCGGACCGTC
GAGAAACTGCATCAGCCGATTATCATCACCGAATACGGCGTGGATACGTTAGCC
CTCTTTGACGTAGTCGGCTAATAGTAGTGGCTTATGCCGCACCTATGCAATCGG
GGGCTGCACTCAATGTACACCGACATGTGGAGTGAAGAGTATCAGTGTGCATGG
CCCGACGTGAGTTACATGTGGCTGTACACCTCACTTCTCATAGTCACACGTACC
CTGGATATGTATCACCGCGTCTTTGATCGCGTCAGCGCCGTCGTCGGTGAACAG
GACCTATACATAGTGGCGCAGAAACTAGCGCAGTCGCGGCAGCAGCCACTTGTC
GTATGGAATTTCGCCGATTTTGCGACCTCGCAAGGCATATTGCGCGTTGGCGGT
CATACCTTAAAGCGGCTAAAACGCTGGAGCGTTCCGTATAACGCGCAACCGCCA
AACAAGAAAGGGATCTTCACTCGCGACCGCAAACCGAAGTCGGCGGCTTTTCTG
TTGTTCTTTCCCTAGAAGTGAGCGCTGGCGTTTGGCTTCAGCCGCCGAAAAGAC
CTGCAAAAACGCTGGACTGGCATGAACTTCGGTGAAAAACCGCAGCAGGGAGGC
GACGTTTTTGCGACCTGACCGTACTTGAAGCCACTTTTTGGCGTCGTCCCTCCG
AAACAA
TTTGTT
Tabela 11
Sequência de aminoácidos da proteína de fusão KH1
MetLeuArg
ProValGluThrProThrArgGluIleLysLysLeuAspGlyLeuTrpAlaPhe
SerLeuAspArgGluArgGluPheProValTrpLysGluAlaThrThrThrLeu
PheCysAlaSerAspAlaLvsAlaTyrAspThrGluValHis-AsnValTrpAla
ThrHisAlaCysValProThrAspProAsnProGlnGluValValLeuValAsn
ValThrGluAsnPheAsnMetTrpLysAsnAspMetValGluGlnMetHisGlu
AspIlelleSerLeuTrpAspGlnSerLeuLysProCysValLysLeuThrPro
LeuCysValSerLeuLysCysThrAspLeuLysAsnAspThrAsnThrAsnSer
SerSerGlyArgMetlleMetGluLysGlyGluIleLysAsnCysSerPheAsn
IleSerThrSerlleArgGlyLysValGlnLysGluTyrAlaPhePheTyrLys
LeuAspIlelleProIleAspAsnAspThrThrSerTyrThrLeuThrSerCys
AsnThrSerValIleThrGlnAlaCysProLysValSerPheGluProIlePro
IleHisTyrCysAlaProAlaGlyPheAlalleLeuLysCysAsnAsnLysThr
PheAsnGlyThrGlyProCysThrAsnValSerThrValGlnCysThrHisGly
IleArgProValValSerThrGlnLeuLeuLeuAsnGlySerLeuAlaGluGlu
GluValValIleArgSerAlaAsnPheThrAspAsnAlaLysThrllelleVal
GlnLeuAsnGlnSerValGluIleAsnCysThrArgProAsnAsnAsnThrArg
LysSerlleArglleGlnArgGlyProGlyArgAlaPheValThrlleGlyLys
IleGlyAsnMetArgGlnAlaHisCysAsnlleSerArgAlaLysTrpAsnAsn
ThrLeuLysGlnlleAspSerLysLeuArgGluGlnPheGlyAsnAsnLysThr
IlellePheLysGlnSerSerGlyGlyAspProGluIleValThrHisSerPhe
AsnCysGlyGlyGluPhePheTyrCysAsnSerThrGlnLeuPheAsnSerThr
TrpPheAsnSerThrTrpSerThrLysGlySerAsnAsnThrGluGlySerAsp
ThrlleThrLeuProCysArglleLysGlnllelleAsnMetTrpGlnGluVal
Tabela 11 (cont.)
GlyLysAlaMetTyrAlaProProlleSerGlyGlnlleArgCysSerSerAsn IleThrGlyLeuLeuLeuThrArgAspGlyGlyAsnSerAsnAsnGluSerGlu IlePheArgProGlyGlyGlyAspMetArgAspAsnTrpArgSerGluLeuTyr LysTyrLysValValLysIleGluProLeuGlyValAlaProThrLysAlaLys ArgArgValValGlnArgGluLysArgAlaValGlylleGlyAlaLeuPheLeu GlyPheLeuGlyAlaAlaGlySerThrMetGlyAlaAlaSerMetThrLeuThr ValGlnAlaArgGlnLeuLeuSerGlylXeValGlnGlnGlnAsnAsnLeuLeu ArgAlalleGluAlaGlnGlnHisLeuLeuGlnLeuThrValTrpGlylleLys GlnLeuGlnAlaArglleLeuAlaValGluArgTyrLeuLysAspGlnGlnLeu LeuGlylleTrpGlyCysSerGlyLysLeuIleCysThrThrAlaValProTrp AsnÃlaSerTrpSerAsnLysSerLeuGluGlnlleTrpAsnAsnMetThrTrp MetGluTrpAspArgGluIleAsnAsnTyrThrSerPheProGlyAlaArglle LeuGluAspGluArgAlaSer - 62
Tabela 11A
Sequência de nucleotídeos codificadores de proteína de fusão KH1 ATGTTACGT TACAATGCA ·
CCTGTAGAAACCCCAACCCGTGAAATCAAAAAACTCGACGGCCTGTGGGCATTC
GGACATCTTTGGGGTTGGGCACTTTAGTTTTTTGAGCTGCCGGACACCCGTAAG
AGTCTGGATCGCGAACGCGAATTCCCTGTGTGGAAGGAAGCAACCACCACTCTA
TCAGACCTAGCGCTTGCGCTTAAGGGACACACCTTCCTTCGTTGGTGGTGAGAT
TTTTGTGCATCAGATGCTAAAGCATATGATACAGAGGTACATAATGTTTGGGCC
AAAACACGTAGTCTACGATTTCGTATACTATGTCTCCATGTATTACAAACCCGG
ACACATGCCTGTGTACCCACAGACCCCAACCCACAAGAAGTAGTATTGGTAAAT
TGTGTACGGACACATGGGTGTCTGGGGTTGGGTGTTCTTCATCATAACCATTTA
GTGACAGAAAATTTTAACATGTGGAAAAATGACATGGTAGAACAGATGCATGAG
CACTGTCTTTTAAAATTGTACACCTTTTTACTGTACCATCTTGTCTACGTACTC
GATATAATCAGTTTATGGGATCAAAGCCTAAAGCCATGTGTAAAATTAACCCCA . CTATATTAGTCAAATACCCTAGTTTCGGATTTCGGTACACATTTTAATTGGGGT
CTCTGTGTTAGTTTAAAGTGCACTGATTTGAAGAATGATACTAATACCAATAGT
GAGACACAATCAAATTTCACGTGACTAAACTTCTTACTATGATTATGGTTATCA
AGTAGCGGGAGAATGATAATGGAGAAAGGAGAGATAAAAAACTGCTCTTTCAAT
TCATCGCCCTCTTACTATTACCTCTTTCCTCTCTATTTTTTGACGAGAAAGTTA
ATCAGCACAAGCATAAGAGGTAAGGTGCAGAAAGAATATGCATTTTTTTATAAA
TAGTCGTGTTCGTATTCTCCATTCCACGTCTTTCTTATACGTAAAAAAATATTT
CTTGATATAATACCAATAGATAATGATACTACCAGCTATACGTTGACAAGTTGT
GAACTATATTATGGTTATCTATTACTATGATGGTCGATATGCAACTGTTCAACA
AACACCTCAGTCATTACACAGGCCTGTCCAAAGGTATCCTTTGAGCCAATTCCC
TTGTGGAGTCAGTAATGTGTCCGGACAGGTTTCCATAGGAAACTCGGTTAAGGG
ATACATTATTGTGCCCCGGCTGGTTTTGCGATTCTAAAATGTAATAATAAGACG
TATGTAATAACACGGGGCCGACCAAAACGCTAAGATTTTACATTATTATTCTGC
TTCAATGGAACAGGACCATGTACAAATGTCAGCACAGTACAATGTACACATGGA
AAGTTACCTTGTCCTGGTACATGTTTACAGTCGTGTCATGTTACATGTGTACCT
ATTAGGCCAGTAGTATCAACTCAACTGCTGTTAAATGGCAGTCTAGCAGAAGAA
TAATCCGGTCATCATAGTTGAGTTGACGACAATTTACCGTCAGATCGTCTTCTT
GAGGTAGTAATTAGATCTGCCAATTTCACAGACAATGCTAAAACCATAATAGTA
CTCCATCATTAATCTAGACGGTTAAAGTGTCTGTTACGATTTTGGTATTATCAT
Tabela 11A (cont.)
CAGCTGAACCAATCTGTAGAAATTAATTGTACAAGACCCAACAACAATACAAGA
GTCGACTTGGTTAGACATCTTTAATTAACATGTTCTGGGTTGTTGTTATGTT-CT
AAAAGTATCCGTATCCAGAGAGGACCAGGGAGAGCATTTGTTACAATAGGAAAA
TTTTCATAGGCATAGGTCTCTCCTGGTCCCTCTCGTAAACAATGTTATCCTTTT
ATAGGAAATATGAGACAAGCACATTGTAACATTAGTAGAGCAAAATGGAATAAC
TATCCTTTATACTCTGTTCGTGTAACATTGTAATCATCTCGTTTTACCTTATTG
ACTTTAAAACAGATAGATAGCAAATTAAGAGAACAATTTGGAAATAATAAAACA
TGAAATTTTGTCTATCTATCGTTTAATTCTCTTGTTAAACCTTTATTATTTTGT
ATAATCTTTAAGCAGTCCTCAGGAGGGGACCCAGAAATTGTAACGCACAGTTTT
TATTAGAAATTCGTCAGGAGTCCTCCCCTGGGTCTTTAACATTGCGTGTCAAAA
AATTGTGGAGGGGAATTTTTCTACTGTAATTCAACACAACTGTTTAATAGTACT
TTAACACCTCCCCTTAAAAAGATGACATTAAGTTGTGTTGACAAATTATCATGA
TGGTTTAATAGTACTTGGAGTACTAAAGGGTCAAATAACACTGAAGGAAGTGAC
ACCAAATTATCATGAACCTCATGATTTCCCAGTTTATTGTGACTTCCTTCACTG
ACAATCACCCTCCCATGCAGAATAAAACAAATTATAAACATGTGGCAGGAAGTA
TGTTAGTGGGAGGGTACGTCTTATTTTGTTTAATATTTGTACACCGTCCTTCAT
GGAAAAGCAATGTATGCCCCTCCCATCAGTGGACAAATTAGATGTTCATCAAAT
CCTTTTCGTTACATACGGGGAGGGTAGTCACCTGTTTAATCTACAAGTAGTTTA
ATTACAGGGCTGCTATTAACAAGAGATGGTGGTAATAGCAACAATGAGTCCGAG
TAATGTCCCGACGATAATTGTTCTCTACCACCATTATCGTTGTTACTCAGGCTC
ATCTTCAGACCTGGAGGAGGAGATATGAGGGACAATTGGAGAAGTGAATTATAT
TAGAAGTCTGGACCTCCTCCTCTATACTCCCTGTTAACCTCTTCACTTAATATA
AAATATAAAGTAGTAAAAATTGAACCATTAGGAGTAGCACCCACCAAGGCAAAG
TTTATATTTCATCATTTTTAACTTGGTAATCCTCATCGTGGGTGGTTCCGTTTC
AGAAGAGTGGTGCAGAGAGAAAAAAGAGCAGTGGGAATAGGAGCTTTGTTCCTT
TCTTCTCACCACGTCTCTCTTTTTTCTCGTCACCCTTATCCTCGAAACAAGGAA
GGGTTCTTGGGAGCAGCAGGAAGCACTATGGGCGCAGCGTCAATGACGCTGACG
CCCAAGAACCCTCGTCGTCCTTCGTGATACCCGCGTCGCAGTTACTGCGACTGC
GTACAGGCCAGACAATTATTGTCTGGTATAGTGCAGCAGCAGAACAATTTGCTG
CATGTCCGGTCTGTTAATAACAGACCATATCACGTCGTCGTCTTGTTAAACGAC
AGGGCTATTGAGGCGCAACAGCATCTGTTGCAACTCACAGTCTGGGGCATCAAG
TCCCGATAACTCCGCGTTGTCGTAGACAACGTTGAGTGTCAGACCCCGTAGTTC
CAGCTCCAGGCAAGAATCCTGGCTGTGGAAAGATACCTAAAGGATCAACAGCTC
GTCGAGGTCCGTTCTTAGGACCGACACCTTTCTATGGATTTCCTAGTTGTCGAG
Tabela 11Ά (cont.) CTGGGGATTTGGGGTTGCTCTGGAAAACTCATTTGCACCACTGCTGTGCCTTGG·
GACCCCTAAACCCCAACGAGACCTTTTGAGTAAACGTGGTGACGACACGGAACC
AATGCTAGTTGGAGTAATAAATCTCTGGAACAGATTTGGAATAACATGACCTGG
TTACGATCAACCTCATTATTTAGAGACCTTGTCTAAACCTTATTGTACTGGACC
ATGGAGTGGGACAGAGAAATTAACAATTACACAAGCTTCCCGGGAGCTCGAATT
TACCTCACCCTGTCTCTTTAATTGTTAATGTGTTCGAAGGGCCCTCGAGCTTÀA
CTTGAAGACGAAAGGGCCTCG
GAACTTCTGCTTTCCCGGAGC
Claims (7)
- 65REIVINDICAÇÕES lã. - Um vector de transferência de DNA recombinante, caracterizado por compreender DNA tendo toda ou parte da sequência de nucleotxdeos que se segue ou sequências de nucleotídeos equivalentes contendo bases cuja região traduzida codifica o fragmento da proteína do envolucro de HTLV-III designado RIO: \ 661ATGTTACGT TACAATGCA CCTGTAGAAACCCCAACCCGTGAAATCAAAAAACTCGACGGCCTGTGGGCATTC GGACATCTTTGGGGTTGGGCACTTTAGTTTTTTGAGCTGCCGGACACCCGTAAG AGTCTGGATCGCGAAAACTGTGGAATTGATCAATTCCCTGTGTGGAAGGAAGCA TCAGACCTAGCGCTTTTGACACCTTAACTAGTTAAGGGACACACCTTCCTTCGT ACCACCACTCTATTTTGTGCATCAGATGCTAAAGCATATGATACAGAGGTACAT TGGTGGTGAGATAAAACACGTAGTCTACGATTTCGTATACTATGTCTCCATGTA. AATGTTTGGGCCACACATGCCTGTGTACCCACAGACCCCAACCCACAAGAAGTA TTACAAACCCGGTGTGTACGGACACATGGGTGTCTGGGGTTGGGTGTTCTTCAT GTATTGGTAAATGTGACAGAAAATTTTAACATGTGGAAAAATGACATGGTAGAA CATAACCATTTACACTGTCTTTTAAAATTGTACACCTTTTTACTGTACCATCTT CAGATGCATGAGGATATAATCAGTTTATGGGATCAAAGCCTAAAGCCATGTGTA GTCTACGTACTCCTATATTAGTCAAATACCCTAGTTTCGGATTTCGGTACACAT AAATTAACCCCACTCTGTGTTAGTTTAAAGTGCACTGATTTGAAGAATGATACT TTTAATTGGGGTGAGACACAATCAAATTTCACGTGACTAAACTTCTTACTATGA AATACCAATAGTAGTAGCGGGAGAATGATAATGGAGAAAGGAGAGATAAAAAAC TTATGGTTATCATCATCGCCCTCTTACTATTACCTCTTTCCTCTCTATTTTTTG TGCTCTTTCAATATCAGCACAAGCATAAGAGGTAAGGTGCAGAAAGAATATGCA ACGAGAAAGTTATAGTCGTGTTCGTATTCTCCATTCCACGTCTTTCTTATACGT TTTTTTTATAAACTTGATATAATACCAATAGATAATGATACTACCAGCTATACG AAAAAAATATTTGAACTATATTATGGTTATCTATTACTATGATGGTCGATATGC TTGACAAGTTGTAACACCTCAGTCATTACACAGGCCTGTCCAAAGGTATCCTTT AACTGTTCAACATTGTGGAGTCAGTAATGTGTCCGGACAGGTTTCCATAGGAAA GAGCCAATTCCCATACATTATTGTGCCCCGGCTGGTTTTGCGATTCTAAAATGT CTCGGTTAAGGGTATGTAATAACACGGGGCCGACGAAAACGCTAAGATTTTACA AATAATAAGACGTTCAATGGAACAGGACCATGTACAAATGTCAGCACAGTACAA TTATTATTCTGCAAGTTACCTTGTCCTGGTACATGTTTACAGTCGTGTCATGTT 67 67TGTACACATGGAATTAGGCCAGTAGTATCAACTCAACTGCTGTTAAATGGCAGT ACATGTGTACCTTAATCCGGTCATCATAGTTGAGTTGACGACAATTTACCGTCA CTAGCAGAAGAAGAGGTAGTAATTAGATCTGCCAATTTCACAGACAATGCTAAA GATCGTCTTCTTCTCCATCATTAATCTAGACGGTTAAAGTGTCTGTTACGATTT ACCATAATAGTACAGCTGAACCAATCTGTAGAAATTAATTGTACAAGACCCAAC TGGTATTATCATGTCGACTTGGTTAGACATCTTTAATTAACATGTTCTGGGTTG AACAATACAAGAAAAAGTATCCGTATCCAGAGAGGACCAGGGAGAGCATTTGTT TTGTTATGTTCTTTTTCATAGGCATAGGTCTCTCCTAATCCCTCTCGTAAACAA ACAATAGGAAAAATAGGAAATATGAGACAAGCACATTGTAÂCATTAGTAGAGCA TGTTATCCTTTTTATCCTTTATACTCTGTTCGTGTAACATTGTAATCATCTCGT AAATGGAATAACACTTTAAAACAGATAGATAGCAAATTAAGAGAACAATTTGGA TTTACCTTATTGTGAAATTTTGTCTATCTATCGTTTAATTCTCTTGTTAAACCT AATAATAAAACAATAATCTTTAAGCAGTCCTCAGGAGGGGACCCAGAAATTGTA TTATTATTTTGTTATTAGAAATTCGTCAGGAGTCCTCCCCTGGGTCTTTAACAT ACGCACAGTTTTAATTGTGGAGGGGAATTTTTCTACTGTAATTCAACACAACTG TGCGTGTCAAAATTAACACCTCCCCTTAAAAAGATGACATTAAGTTGTGTTGAC TTTAATAGTACTTGGTTTAATAGTACTTGGAGTACTAAAGGGTCAAATAACACT AAATTATCATGAACCAAATTATCATGAACCTCATGATTTCCCAGTTTATTGTGA GAAGGAAGTGACACAATCACCCTCCCATGCAGAATAAAACAAATTATAAACATG CTTCCTTCACTGTGTTAGTGGGAGGGTACGTCTTATTTTGTTTAATATTTGTAC TGGCAGGAAGTAGGAAAAGCAATGTATGCCCCTCCCATCAGTGGACAAATTAGA ACCGTCCTTCATCCTTTTCGTTACATACGGGGAGGGTAGTCACCTGTTTAATCT TGTTCATCAAATATTACAGGGCTGCTATTAACAAGAGATGGTGGTAATAGCAAC ACAAGTAGTTTATAATGTCCCGACGATAATTGTTCTCTACCACCATTATCGTTG AATGAGTCCGAGATCCATCGCAGCGTAATGCTCTACACCACGCCGAACACCTGG TTACTCAGGCTCTAGGTAGCGTCGCATTACGAGATGTGGTGCGGCTTGTGGACC GTGGACGATATCACCGTGGTGACGCATGTCGCGCAAGACTGTAACCACGCGTCT CACCTGCTATAGTGGCACCACTGCGTACAGCGCGTTCTGACATTGGTGCGCAGA GTTGACTGGCAGGTGGTGGCCAATGGTGATGTCAGCGTTGAACTGCGTGATGCG CAACTGACCGTCCACCACCGGTTACCACTACAGTCGCAACTTGACGCACTACGC GATCAACAGGTGGTTGCAACTGGACAAGGCACTAGCGGGACTTTGCAAGTGGTG CTAGTTGTCCACCAACGTTGACCTGTTCCGTGATCGCCCTGAAACGTTCACCAC AATCCGCACCTCTGGCAACCGGGTGAAGGTTATCTCTATGAACTGTGCGTCACA TTAGGCGTGGAGACCGTTGGCCCACTTCCAATAGAGATACTTGACACGCAGTGT GCCAAAAGCCAGACAGAGTGTGATATCTACCCGCTTCGCGTCGGCATCCGGTCA CGGTTTTCGGTCTGTCTCACACTATAGATGGGCGAAGCGCAGCCGTAGGCCAGT « 68 -% GTGGCAGTGAAGGGCGAACAGTTCCTGATTAACCACAAACCGTTCTACTTTACT CACCGTCACTTCCCGCTTGTCAAGGACTAATTGGTGTTTGGCAAGATGAAATGA GGCTTTGGTCGTCATGAAGATGCGGACTTGCGTGGCAAAGGATTCGATAACGTG CCGAAACCAGCAGCACTTCTACGCCTGAACGCACCGTTTCCTAAGCTATTGCAC CTGATGGTGCACGACCACGCATTAATGGACTGGATTGGGGCCAACTCCTACCGT GACTACCACGTGCTGGTGCGTAATTACCTGACCTAACCCCGGTTGAGGATGGCA ACCTCGCATTACCCTTACGCTGAAGAGATGCTCGACTGGGCAGATGAACATGGC TGGAGCGTAATGGGAATGCGACTTCTCTACGAGCTGACCCGTCTACTTGTACCG ATCGTGGTGATTGATGAAACTGCTGCTGTCGGCTTTAACCTCTCTTTAGGCATT TAGCACCACTAACTACTTTGACGACGACAGCCGAAATTGGAGAGAAATCCGTAA GGTTTCGAAGCGGGCAACAAGCCGAAAGAACTGTACAGCGAAGAGGCAGTCAAC CCAAAGCTTCGCCCGTTGTTCGGCTTTCTTGACATGTCGCTTCTCCGTCAGTTG GGGGAAACTCAGCAAGCGCACTTACAGGCGATTAAAGAGCTGATAGCGCGTGAC CCCCTTTGAGTCGTTCGCGTGAATGTCCGCTAATTTCTCGACTATCGCGCACTG AAAAACCACCCAAGCGTGGTGATGTGGAGTATTGCCAACGAACCGGATACCCGT TTTTTGGTGGGTTCGCACCACTACACCTCATAACGGTTGCTTGGCCTATGGGCA CCGCAAGGTGCACGGGAATATTTCGCGCCACTGGCGGAAGCAACGCGTAAACTC GGCGTTCCACGTGCCCTTATAAAGCGCGGTGACCGCCTTCGTTGCGCATTTGAG GACCCGACGCGTCCGATCACCTGCGTCAATGTAATGTTCTGCGACGCTCACACC CTGGGCTGCGCAGGCTAGTGGACGCAGTTACATTACAAGACGCTGCGAGTGTGG GATACCATCAGCGATCTCTTTGATGTGCTGTGCCTGAACCGTTATTACGGATGG CTATGGTAGTCGCTAGAGAAACTACACGACACGGACTTGGCAATAATGCCTACC TATGTCCAAAGCGGCGATTTGGAAACGGCAGAGAAGGTACTGGAAAAAGAACTT ATACAGGTTTCGCCGCTAAACCTTTGCCGTCTCTTCCATGACCTTTTTCTTGAA CTGGCCTGGCAGGAGAAACTGCATCAGCCGATTATCATCACCGAATACGGCGTG GACCGGACCGTCCTCTTTGACGTAGTCGGCTAATAGTAGTGGCTTATGCCGCAC GATACGTTAGCCGGGCTGCACTCAATGTACACCGACATGTGGAGTGAAGAGTAT CTATGCAATCGGCCCGACGTGAGTTACATGTGGCTGTACACCTCACTTCTCATA CAGTGTGCATGGCTGGATATGTATCACCGCGTCTTTGATCGCGTCAGCGCCGTC GTCACACGTACCGACCTATACATAGTGGCGCAGAAACTAGCGCAGTCGCGGCAG GTCGGTGAACAGGTATGGAATTTCGCCGATTTTGCGACCTCGCAAGGCATATTG CAGCCACTTGTCCATACCTTAAAGCGGCTAAAACGCTGGAGCGTTCCGTATAAC CGCGTTGGCGGTAACAAGAAAGGGATCTTCACTCGCGACCGCAAACCGAAGTCG GCGCAACCGCCATTGTTCTTTCCCTAGAAGTGAGCGCTGGCGTTTGGCTTCAGC GCGGCTTTTCTGCTGCAAAAACGCTGGACTGGCATGAACTTCGGTGAAAAACCG CGCCGAAAAGACGACGTTTTTGCGACCTGACCGTACTTGAAGCCACTTTTTGGC CAGCAGGGAGGCAAACAA GTCGTCCCTCCGTTTGTT. 69 ν'2â. - Um vector de transferência de DNA recombinante caracterizado por compreender o DNA tendo toda ou parte da sequência de nucleotídeos que se segue ou sequências de nucleotídeos equivalentes contendo bases cuja região traduzida codifica o fragmento da proteína do envolucro de HTLV-III, designado PB1: atgttacgtcctgtagaaaccccaacccgtgaaatcaaaaaactcgacggcctg TACAATGCAGGACATCTTTGGGGTTGGGCACTTTAGTTTTTTGAGCTGCCGGAC TGGGCATTCAGTCTGGATCGCGAACGCGTGGCCGATCTGAACCAATCTGTAGAA ACCCGTAAGTCAGACCTAGCGCTTGCGCACCGGCTAGACTTGGTTAGACATCTT ATTAATTGTACAAGACCCAACAACAATACAAGAAAAAGTATCCGTATCCAGAGA TAATTAACATGTTCTGGGTTGTTGTTATGTTCTTTTTCATAGGCATAGGTCTCT GGACCAGGGAGAGCATTTGTTACAATAGGAAAAATAGGAAATATGAGACAAGCA CCTAATCCCTCTCGTAAACAATGTTATCCTTTTTATCCTTTATACTCTGTTCGT CATTGTAACATTAGTAGAGCAAAATGGAATAACACTTTAAAACAGATAGATAGC GTAACATTGTAATCATCTCGTTTTACCTTATTGTGAAATTTTGTCTATCTATCG AAATTAAGAGAACAATTTGGAAATAATAAAACAATAATCTTTAAGCAGTCCTCA TTTAATTCTCTTGTTAAACCTTTATTATTTTGTTATTAGAAATTCGTCAGGAGT GGAGGGGACCCAGAAATTGTAACGCACAGTTTTAATTGTGGAGGGGAATTTTTC CCTCCCCTGGGTCTTTAACATTGCGTGTCAAAATTAACACCTCCCCTTAAAAAG TACTGTAATTCAACACAACTGTTTAATAGTACTTGGTTTAATAGTACTTGGAGT AT GACATTAAGTTGTGTTGACAAATTATCATGAACCAAATTATCATG AA C CT CA ACTAAAGGGTCAAATAACACTGAAGGAAGTGACACAATCACCCTCCCATGCAGA TGATTTCCCAGTTTATTGTGACTTCCTTCACTGTGTTAGTGGGAGGGTACGTCT ATAAAACAAATTATAAACATGTGGCAGGAAGTAGGAAAAGCAATGTATGCCCCT TATTTTGTTTAATATTTGTACACCGTCCTTCATCCTTTTCGTTACATACGGGGA CCCATCAGTGGACAAATTAGATGTTCATCAAATATTACAGGGCTGCTATTAACA GGGTAGTCACCTGTTTAATCTACAAGTAGTTTATAATGTCCCGACGATAATTGT AGAGATGGTGGTAATAGCAACAATGAGTCCGAGATCCGTCGACAAGCTTCCCGG TCTCTACCACCATTATCGTTGTTACTCAGGCTCTAGGCAGCTGTTCGAAGGGCC GAGCTCGAATTCTTGAAGACGAAAGGGCCTCGTGATACTCCTATTTTTATAGGT CTCGAGCTTAAGAACTTCTGCTTTCCCGGAGCACTATGCGGATAAAAATATCCA. - 703ã. - Um vector de transferência de DNA recombinante caracterizado por compreender DNA tendo toda ou parte da sequência de nucleotídeos que se segue ou sequências de nucleotídeos equivalentes contendo bases cuja região traduzida codifica o fragmento da proteína do envolucro do HTLV-III designado 590: 71 71ATGTTACGTCCTGTAGAAACC TACAATGCAGGACATCTTTGG CCAACCCGTGAAATCAAAAAACTCGACGGCCTGTGGGCATTCAGTCTGGATCGC GGTTGGGCACTTTAGTTTTTTGAGATGCCGGACACCCGTAAGTCAGACCTAGCG GAACGCGTGGCCGATCTGAACCAATCTGTAGAAATTAATTGTACAAGACCCAAC CTTGCGCACCGGCTAGACTTGGTTAGACATCTTTAATTAACATGTTCTGGGTTG AACAATACAAGAAAAAGTATCCGTATCCAGAGAGGACCAGGGAGAGCATTTGTT TTGTTATGTTCTTTTTCATAGGCATAGGTCTCTCCTAATCCCTCTCGTAAACAA ACAATAGGAAAAATAGGAAATATGAGACAAGCACATTGTAAGATTAGTAGAGCA TGTTATCCTTTTTATCCTTTATACTCTGTTCGTGTAACATTGTAATCATCTCGT AAATGGAATAACACTTTAAAACAGATAGATAGCAAATTAAGAGAACAATTTGGA TTTACCTTATTGTGAAATTTTGTCTATCTATCGTTTAATTCTCTTGTTAAACCT AATAATAAAACAATAATCTTTAAGCAGTCCTCAGGAGGGGACCCAGAAATTGTA TTATTATTTTGTTATTAGAAATTCGTCAGGAGTCCTCCCCTGGGTCTTTAACAT ACGCACAGTTTTAATTGTGGAGGGGAATTTTTCTACTGTAATTCAACACAACTG -TGCGTGTCAAAATTAACACCTCCCCTTAAAAAGATGACATTAAGTTGTGTTGAC TTTAATAGTACTTGGTTTAATAGTACTTGGAGTACTAAAGGGTCAAATAACACT AAATTATCATGAACCAAATTATCATGAACCTCATGATTTCCCAGTTTATTGTGA GAAGGAAGTGACACAATCACCCTCCCATGCAGAATAAAACAAATTATAAACATG CTTCCTTCACTGTGTTAGTGGGAGGGTACGTCTTATTTTGTTTAATATTTGTAC TGGCAGGAAGTAGGAAAAGCAATGTATGCCCCTCCCATCAGTGGACAAATTAGA ACCGTCCTTCATCCTTTTCGTTACATACGGGGAGGGTAGTCACCTGTTTAATCT TGTTCATCAAATATTACAGGGCTGCTATTAACAAGAGATGGTGGTAATAGCAAC ACAAGTAGTTTATAATGTCCCGACGATAATTGTTCTCTACCACCATTATCGTTG AATGAGTCCGAGATCTTCAGACCTGGAGGAGGAGATATGAGGGACAATTGGAGA TTACTCAGGCTCTAGAAGTCTGGACCTCCTCCTCTATACTCCCTGTTAACCTCT AGTGAATTATATAAATATAAAGTAGTAAAAATTGAACCATTAGGAGTAGCACCC TCACTTAATATATTTATATTTCATCATTTTTAACTTGGTAATCCTCATCGTGGG ACCAAGGCAAAGAGAAGAGTGGTGCAGAGAGAAAAAAGAGCAGTGGGAATAGGA TGGTTCCGTTTCTCTTCTCACCACGTCTCTCTTTTTTCTCGTCACCCTTATCCT 72%GCTTTGTTCCTTGGGTTCTTGGGAGCAGCAGGAAGCACTATGGGCGCAGCGTCA CGAAACAAGGAACCCAAGAACCCTCGTCGTCCTTCGTGATACCCGCGTCGCAGT ATGACGCTGACGGTACAGGCCAGACAATTATTGTCTGGTATAGTGCAGCAG'CAG TACTGCGACTGCCATGTCCGGTCTGTTAATAAÇAGACCATATCACGTCGTCGTC AACAATTTGCTGAGGGCTATTGAGGCGCAACAGCATCTGTTGCAACTCACAGTC TTGTTAAACGACTCCCGATAACTCCGCGTTGTCGTAGACAACGTTGAGTGTCAG TGGGGCATCAAGCAGCTCCAGGCAAGAATCCTGGCTGTGGAAAGATACCTAAAG ACCCCGTAGTTCGTCGAGGTCCGTTCTTAGGACCGACACCTTTCTATGGATTTC GATCAACAGCTCCTGGGGATTTGGGGTTGCTCTGGAAAACTCATTTGCACCACT CTAGTTGTCGAGGACCCCTAAACCCCAACGAGACCTTTTGAGTAAACGTGGTGA GCTGTGCCTTGGAATGCTAGTTGGAGTAATAAATCTCTGGAACAGATTTGGAAT CGACACGGAACCTTACGATCAACCTCATTATTTAGAGACCTTGTCTAAACCTTA AACATGACCTGGATGGAGTGGGACAGAGAAATTAACAATTACACAAGCTTCCCG TTGTACTGGACCTACCTCACCCTGTCTCTTTAATTGTTAATGTGTTCGAAGGGC ATCCATCGCAGCGTAATGCTCTACACCACGCCGAACACCTGGGTGGACGATATC TAGGTAGCGTCGCATTACGAGATGTGGTGCGGCTTGTGGACCCACCTGCTATAG ACCGTGGTGACGCATGTCGCGCAAGACTGTAACCACGCGTCTGTTGACTGGCAG TGGCACCACTGCGTACAGCGCGTTCTGACATTGGTGCGCAGACAACTGACCGTC GTGGTGGCCAATGGTGATGTCAGCGTTGAACTGCGTGATGCGGATCAACAGGTG CACCACCGGTTACCACTACAGTCGCAACTTGACGCACTACGCCTAGTTGTCCAC GTTGCAACTGGACAAGGCACTAGCGGGACTTTGCAAGTGGTGAATCCGCACCTC CAACGTTGACCTGTTCCGTGATCGCCCTGAAACGTTCACCACTTAGGCGTGGAG TGGCAACCGGGTGAAGGTTATCTCTATGAACTGTGCGTCACAGCCAAAAGCCAG ACCGTTGGCCCACTTCCAATAGAGATACTTGACACGCAGTGTCGGTTTTCGGTC ACAGAGTGTGATATCTACCCGCTTCGCGTCGGCATCCGGTCAGTGGCAGTGAAG TGTCTCACACTATAGATGGGCGAAGCGCAGCCGTAGGCCAGTCACCGTCACTTC GGCGAACAGTTCCTGATTAACCACAAACCGTTCTACTTTACTGGCTTTGGTCGT CCGCTTGTCAAGGACTAATTGGTGTTTGGCAAGATGAAATGACCGAAACCAGCA CATGAAGATGCGGACTTGCGTGGCAAAGGATTCGATAACGTGCTGATGGTGCAC GCACTTCTACGCCTGAACGCACCGTTTCCTAAGCTATTGCACGACTACCACGTG GACCACGCATTAATGGACTGGATTGGGGCCAACTCCTACCGTACCTCGCATTAC CTGGTGCGTAATTACCTGACCTAACCCCGGTTGAGGATGGCATGGAGCGTAATG CCTTACGCTGAAGAGATGCTCGACTGGGCAGATGAACATGGCATCGTGGTGATT GGAATGCGACTTCTCTACGAGCTGACCCGTCTACTTGTACCGTAGCACCACTAA GATGAAACTGCTGCTGTCGGCTTTAACCTCTCTTTAGGCATTGGTTTCGAAGCG CTACTTTGACGACGACAGCCGAAATTGGAGAGAAATCCGTAACCAAAGCTTCGC 731GGCAACAAGCCGAAAGAACTGTACAGCGAAGAGGCAGTCAACGGGGAAACTCAG CCGTTGTTCGGCTTTCTTGACATGTCGCTTCTCCGTCAGTTGCCCCTTTGAGTC CAAGCGCACTTACAGGCGATTAAAGAGCTGATAGCGCGTGACAAAAACCACCCA GTTCGCGTGAATGTCCGCTAATTTCTCGACTATCGCGCACTGTTTTTGGTGGGT AGCGTGGTGATGTGGAGTATTGCCAACGAACCGGATACCCGTCCGCAAGGTGCA TCGCACCACTACACCTCATAACGGTTGCTTGGCCTATGGGCAGGCGTTCCACGT CGGGAATATTTCGCGCCACTGGCGGAAGCAACGCGTAAACTCGACCCGACGCGT GCCCTTATAAAGCGCGGTGACCGCCTTCGTTGCGCATTTGAGCTGGGCTGCGCA CCGATCACCTGCGTCAATGTAATGTTCTGCGACGCTCACACCGATACCATCAGC GGCTAGTGGACGCAGTTACATTACAAGACGCTGCGAGTGTGGCTATGGTAGTCG GATCTCTTTGATGTGCTGTGCCTGAACCGTTATTACGGATGGTATGTCCAAAGC CTAGAGAAACTACACGACACGGACTTGGCAATAATGCCTACCATACAGGTTTCG GGCGATTTGGAAACGGCAGAGAAGGTACTGGAAAAAGAACTTCTGGCCTGGCAG CCGCTAAACCTTTGCCGTCTCTTCCATGACCTTTTTCTTGAAGACCGGACCGTC GAGAAACTGCATCAGCCGATTATCATCACCGAATACGGCGTGGATACGTTAGCC CTCTTTGACGTAGTCGGCTAATAGTAGTGGCTTATGCCGCACCTATGCAATCGG GGGCTGCACTCAATGTACACCGACATGTGGAGTGAAGAGTATCAGTGTGCATGG CCCGACGTGAGTTACATGTGGCTGTACACCTCACTTCTCATAGTCACACGTACC CTGGATATGTATCACCGCGTCTTTGATCGCGTCAGCGCCGTCGTCGGTGAACAG GACCTATACATAGTGGCGCAGAAACTAGCGCAGTCGCGGCAGCAGCCACTTGTC GTATGGAATTTCGCCGATTTTGCGACCTCGCAAGGCATATTGCGCGTTGGCGGT CATACCTTAAAGCGGCTAAAACGCTGGAGCGTTCCGTATAACGCGCAACCGCCA AACAAGAAAGGGATCTTCACTCGCGACCGCAAACCGAAGTCGGCGGCTTTTCTG TTGTTCTTTCCCTAGAAGTGAGCGCTGGCGTTTGGCTTCAGCCGCCGAAAAGAC CTGCAAAAACGCTGGACTGGCATGAACTTCGGTGAAAAACCGCAGCAGGGAGGC GACGTTTTTGCGACCTGACCGTACTTGAAGCCACTTTTTGGCGTCGTCCCTCCG AAACAA TTTGTT. * 74 4ã. - Um vector de transferência de DNA recombinente caracterizado por compreender DNA tendo toda ou parte da sequência de nucleotídeos que se segue ou sequências de nucleotídeos equivalentes contendo bases cuja região traduzida codifica o fragmento da proteína do envolucro de HTLV-lli designado KH1: ATGTTACGT TACAATGCA CCTGTAGAAACCCCAACCCGTGAAATCAAAAAACTCGACGGCCTGTGGGCATTC GGACATCTTTGGGGTTGGGCACTTTAGTTTTTTGAGCTGCCGGACACCCGTAAG AGTCTGGATCGCGAACGCGAATTCCCTGTGTGGAAGGAAGCAACCACCACTCTA TCAGACCTAGCGCTTGCGCTTAAGGGACACACCTTCCTTCGTTGGTGGTGAGAT TTTTGTGCATCAGATGCTAAAGCATATGATACAGAGGTACATAATGTTTGGGCC AAAACACGTAGTCTACGATTTCGTATACTATGTCTCCATGTATTACAAACCCGG ACACATGCCTGTGTACCCACAGACCCCAACCCACAAGAAGTAGTATTGGTAAAT TGTGTACGGACACATGGGTGTCTGGGGTTGGGTGTTCTTCATCATAACCATTTA GTGACAGAAAATTTTAACATGTGGAAAAATGACATGGTAGAACAGATGCATGAG CACTGTCTTTTAAAATTGTACACCTTTTTACTGTACCATCTTGTCTACGTACTC GATATAATCAGTTTATGGGATCAAAGCCTAAAGCCATGTGTAAAATTAACCCCA CTATATTAGTCAAATACCCTAGTTTCGGATTTCGGTACACATTTTAATTGGGGT CTCTGTGTTAGTTTAAAGTGCACTGATTTGAAGAATGATACTAATACCAATAGT GAGACACAATCAAATTTCACGTGACTAAACTTCTTACTATGATTATGGTTATCA AGTAGCGGGAGAATGATAATGGAGAAAGGAGAGATAAAAAACTGCTCT.TTCAAT TCATCGCCCTCTTACTATTACCTCTTTCCTCTCTATTTTTTGACGAGAAAGTTA 76ATCAGCACAAGCATAAGAGGTAAGGTGCAGAAAGAATATGCATTTTTTTATAAA TAGTCGTGTTCGTATTCTCCATTCCACGTCTTTCTTATACGTAAAAAAATATTT CTTGATATAATACCAATAGATAATGATACTACCAGCTA.TACGTTGACAAGTTGT GAACTATATTATGGTTATCTATTACTATGATGGTCGATATGCAACTGTTCAACA AACACCTCAGTCATTACACAGGCCTGTCCAAAGGTATCCTTTGAGCCAATTCCC TTGTGGAGTCAGTAATGTGTCCGGACAGGTTTCCATAGGAAACTCGGTTAAGGG ATACATTATTGTGCCCCGGCTGGTTTTGCGATTCTAAAATGTAATAATAAGACG TATGTAATAACACGGGGCCGACCAAAACGCTAAGATTTTACATTATTATTCTGC ttcaatggaacaggaccatgtacaaatgtcagcacagtacaatgtacacatgga AAGTTACCTTGTCCTGGTACATGTTTACAGTCGTGTCATGTTACATGTGTACCT ATTAGGCCAGTAGTATCAACTCAACTGCTGTTAAATGGCAGTCTAGCAGAAGAA TAATCCGGTCATCATAGTTGAGTTGACGACAATTTACCGTCAGATCGTCTTCTT GAGGTAGTAATTAGATCTGCCAATTTCACAGACAATGCTAAAACCATAATAGTA CTCCATCATTAATCTAGACGGTTAAAGTGTCTGTTACGATTTTGGTATTATCAT CAGCTGAACCAATCTGTAGAAATTAATTGTACAAGACCCAACAACAATACAAGA GTCGACTTGGTTAGACATCTTTAATTAACATGTTCTGGGTTGTTGTTATGTTCT AAAAGTATCCGTATCCAGAGAGGACCAGGGAGAGCATTTGTTACAATAGGAAAA TTTTCATAGGCATAGGTCTCTCCTGGTCCCTCTCGTAAACAATGTTATCCTTTT 77ATAGGAAATATGAGACAAGCACATTGTAACATTAGTAGAGCAAAATGGAATAAC TATCCTTTATACTCTGTTCGTGTAACATTGTAATCATCTCGTTTTACCTTATTG ACTTTAAAACAGATAGATAGCAAATTAAGAGAACAATTTGGAAATAATAAAACA TGAAATTTTGTCTATCTATCGTTTAATTCTCTTGTTAAACCTTTATTATTTTGT ATAATCTTTAAGCAGTCCTCAGGAGGGGACCCAGAAATTGTAACGCACAGTTTT TATTAGAAATTCGTCAGGAGTCCTCCCCTGGGTCTTTAACATTGCGTGTCAAAA AATTGTGGAGGGGAATTTTTCTACTGTAATTCAACACAACTGTTTAATAGTACT TTAACACCTCCCCTTAAAAAGATGACATTAAGTTGTGTTGACAAATTATCATGA TGGTTTAATAGTACTTGGAGTACTAAAGGGTCAAATAACACTGAAGGAAGTGAC ACCAAATTATCATGAACCTCATGATTTCCCAGTTTATTGTGACTTCCTTCACTG ACAATCACCCTCCCATGCAGAATAAAACAAATTATAAACATGTGGCAGGAAGTA TGTTAGTGGGAGGGTACGTCTTATTTTGTTTAATATTTGTACACCGTCCTTCAT GGAAAAGCAATGTATGCCCCTCCCATCAGTGGACAAATTAGATGTTCATCAAAT CCTTTTCGTTACATACGGGGAGGGTAGTCACCTGTTTAATCTACAAGTAGTTTA ATTACAGGGCTGCTATTAACAAGAGATGGTGGTAATAGCAACAATGAGTCCGAG TAATGTCCCGACGATAATTGTTCTCTACCACCATTATCGTTGTTACTCAGGCTC ATCTTCAGACCTGGAGGAGGAGATATGAGGGAGAATTGGAGAAGTGAATTATAT TAGAAGTCTGGACCTCCTCCTCTATACTCCCTGTTAACCTCTTCACTTAATATA AAATATAAAGTAGTAAAAATTGAACCATTAGGAGXAGCACCCACCAAGGCAAAG TTTATATTTCATCATTTTTAACTTGGTAATCCTCATCGTGGGTGGTTCCGTTTC AGAAGAGTGGTGCAGAGAGAAAAAAGAGCAGTGGGAATAGGAGCTTTGTTCCTT TCTTCTCACCACGTCTCTCTTTTTTCTCGTCACCCTTATCCTCGAAACAAGGAA GGGTTCTTGGGAGCAGCAGGAAGCACTATGGGCGCAGCGTCAATGACGCTGACG CCCAAGAACCCTCGTCGTCCTTCGTGATACCCGCGTCGCAGTTACTGCGACTGC GTACAGGCCAGACAATTATTGTCTGGTATAGTGCAGCAGCAGAACAATTTGCTG CATGTCCGGTCTGTTAATAACAGACCATATCACGTCGTCGTCTTGTTAAACGAC AGGGCTATTGAGGCGCAACAGCATCTGTTGCAACTCACAGTCTGGGGCATCAAG TCCCGATAACTCCGCGTTGTCGTAGACAACGTTGAGTGTCAGACCCCGTAGTTC CAGCTCCAGGCAAGAATCCTGGCTGTGGAAAGATACCTAAAGGATCAACAGCTC gtcgaggtccgttcttaggaccgacacctttctatggatttcctagttgtcgag ctggggatttggggttgctctGgaaaactcatttgcaccactgctgtgccttgg gacccctaaaccccaacgagaccttttgagtaaacgtggtgacgacacggaacc AATGCTAGTTGGAGTAATAAATCTCTGGAACAGATTTGGAATAACATGACCTGG TTACGATCAACCTCATTATTTAGAGACCTTGTCTAAACCTTATTGTACTGGACC ATGGAGTGGGACAGAGAAATTAACAATTACACAAGCTTCCCGGGAGCTCGAATT TACCTCACCCTGTCTCTTTAATTGTTAATGTGTTCGAAGGGCCCTCGAGCTTAA CTTGAAGACGAAAGGGCCTCG GAACTTCTGCTTTCCCGGAGC. 785ã.- Ο reivindicação 1Η vector de transferfncia de DMA de acordo com a caracterizatío por ser transferido e replicado R num hospedeiro eucariético ou procar óã,“ 0 vector de transferfncia de DMA de acordo com a reivindicação 2, caracterizado por ser transferido e replicado num hospedeira eucariético ou. procariético, \ ¥ 7§0 vector de transferfncia de DMA de acordo com a reivindicação 3, caracterizado por ser transferido e replicado num hospedeiro eucariético ou procarióiico. rei' num 8ã.-~ 0 vector de transferfncia de DMA de acordo com a indicação 4, caracterizado por ser transferido e replicado hospedeiro eucariético ou procarióiico* 9I„- Um hospedeiro caracterizado por ser transformado pelo vector de transferencia de acero com a reivindicação L 10§„- Um hospedeiro caracterizado por ser transformado pelo vector de transferfncia de acordo com a reivindicação 2» llã«- Um hospedeiro caracterizado por ser transformado pelo vector de transferfncia de acordo com a reivindicação 3» 12ã»- Um hospedeiro caracterizado por ser transformado pelo vector de transferfncia de acordo com a reivindicação 4„ 13â,~ Processo para a preparaçãao de um fragmento da proteína do envélucro de HTI.V-III, designado R1 § ? caracterizadopor se incluir no referido fragmento a sequfncia de que se segue ou seus mutantess smirmâcidos >79 79« HetLeuArg ProVaXGluThrProThrArgGXuIXaLysLyeLeuAspGXyLeuTrpAXaPhe SerLeuAspArgGluAsnCysGlylleAspGlnPheProValTrpLysGluAla ThrThrThrLeuPheCysAXaSerAspAXaLysAXaTyrAspThrGXuVaXHis AsnVaXTrpAXaThrHisAXaCysVaXProThrAspProAsnProGXnGXuVaX VaXLeuVaXAsnVaXThrGXuAsnPheAsnMetTrpLysAsnAspMetVaXGXu GlnHetHisGluAspIlelleSerLeuTrpAspGlnSerLeuLysProCysVal LysLeuThrProLeuCysValSerLeuLysCysThrAspLeuLysAsnAspThr AsnThrAsnSerSerSerGlyArgMetlleMetGluLysGlyGluIleLysAsn CysSerPheAsnlleSerThrSerlleArgGlyLysValGlnLysGluTyrAla PhePheTyrLysLeuAspllelleProIleAspAsnAspThrThrSerTyrThr LeuThrSerCysAsnThrSerValIleThrGlnAlaCysProLysValSerPhe GluProIleProIleHisTyrCysAlaProAlaGlyPheAXalleLeuLysCys AsnAsnLysThrPheAsnGlyThrGlyProCysThrAsnVaXSerThrValGln CysThrHisGlylleArgProValValSerThrGlnLeuLeuLeuAsnGlySer LeuAlaGluGluGluValValIleArgSerAlaAsnPheThrAspAsnAlaLys ThrlXelXeVaXGXnLeuAsnGXnSerVaXGXuIXeAsnCysThrArgProAsn AsnAsnThrArgLysSerlleArglleGlnArgGlyProGlyArgAlaPheVal ThrileGlyLysileGlyAsnMetArgGlnAlaHisCysAsnlleSerArgAla LysTrpAsnAsnThrLeuLysGlnlleAspSerLysLeuArgGluGlnPheGly AsnAsnLysThrIXeIXePheLysGXnSerSerGXyGXyAspProGXuiXeVaX ThrHisSerPheAsnCysGXyGXyGluPhePheTyrCysAsnSerThrGlnLeu PheAsnSerThrTrpPheAsnSerThrTrpSerThrLysGlySerAsnAsnThr GluGlySerAspThrlleThrLeuProCysArglleLysGlnllelleAsnMet TrpGlnGluValGlyLysAlaMetTyrAlaProProIleSerGlyGlnlleArg CysSerSerAsnlleThrGlyLeuLeuLeuThrArgAspGlyGlyAsnSerAsn AsnGluSerGluIleHisArgSerValMetLeuTyrThrThrProAsnTArTrp ValAspAspIleThrValValThrHisValAlaGlnAspCysAsnHisAlaSer VaXAspTrpGlnValValAlaAsnGlyAspValSerValGluLeuArgAspAXa AspGXnGXnVaXVaXAXaThrGXyGXnGXyThrSerGXyThrLeuGXnVaXVaX AsnProHisLeuTrpGlnProGlyGluGXyTyrLeuTyrGXuLeuCysVaXThr AlaLysSerGlnThrGXuCysAspIleTyrProLeuArgVaXGlylltArgSer ValAlaValLysGlyGluGlnPheLeuIleAsnHisLysProPheTyrPheThr GlyPheGlyArgHisGluAspAlaAspLeuArgGlyLysGlyPheAspAsnVal LeuMetValHisAspHisAlaLeuMetAspTrpIleGlyAlaAsnSerTyrArg ThrSerHisTyrProTyrAlaGluGluMetLeuAspTrpAlaAspGluHisGly IleValValIleAspGluThrAlaAlaValGlyPheAsnLeuSerLeuGlylle GlyPheGluAlaGlyAsnLysProLysGluLeuTyrSerGluGluAlaValAsn GlyGluThrGlnGlnAlaHisLeuGlnAlalleLysGluLeuIleAlaArgAsp LysAsnHisProSerValValMetTrpSerlleAlaAsnGluProAspThrArg ProGlnGlyAlaArgGluTyrPheAlaProLeuAlaGluAlaThrArgLysLeu AspProThrArgProIleThrCysValAsnValMetPheCysAspAlaHisThr AspThrlleSerAspLeuPheAspValLeuCysLeuAsnArgTyrTyrGlyTrp TyrValGlnSerGlyAspLeuGluThrAlaGluLysValLeuGluLysGluLeu LeuAÍaTrpGlnGluLysLeuHisGlnProIlellelleThrGluTyrGlyVal AspThrLeuAlaGlyLeuHisSerMetTyrThrAspMetTrpSerGluGluTyr GlnCysAlaTrpLeuAspMetTyrHisArgValPheAspArgValSerAlaVal ValGlyGluGlnValTrpAsnPheAlaAspPheAlaThrSerGlnGlylleLeu ArgValGlyGlyAsnLysLysGlyllePheThrArgAspArgLysProLysSer AlaAlaPheLeuLeuGlnLysArgTrpThrGlyMetAsnPheGlyGluLysPro GlnGlnGlyGlyLysGln. a 14â. - Processo para a preparaçSo de um fragmento da proteína do envolucro de HPLV-III designado PB1 caracterizado por se incluir no referido fragmento sequência de aminoácidos que se segue ou seus mutantes: 81MetLeuArg ProValGluThrProThrArgGluIleLysLysLeuAspGlyLeuTrpAlaPhe SerLeuAspArgGluArgValAlaAspLeuAsnGlnSerValGluIleAsnCys ThrArgProAsnAsnAsnThrArgLysSerlleArglleGlnArgGlyProGly ArgAlaPheValThrlleGlyLysIleGlyAsnMetArgGlnAlaHisCysAsn IleSerArgAlaLysTrpAsnAsnThrLeuLysGlnlleAspSerLysLeuArg GluGlnPheGlyAsnAsnLysThrllellePheLysGlnSerSerGlyGlyAsp ProGluIleValThrHisSerPheAsnCysGlyGlyGluPhePheTyrCysAsn SerThrGlnLeuPheAsnSeLThrTrpPheAsnSerThrTrpSerThrLysGly SerAsnAsnThrGluGlySerAspThrlleThrLeuProCysArglleLysGln IlelleAsnMetTrpGlnGluValGlyLysAlaMetTyrAlaProProIleSer GlyGlnlleArgCysSerSerAsnlleThrGlyLeuLeuLeuThrArgAspGly GlyAsnSerAsnAsnGluSerGluIleArgArgGlnAlaSerArgGluLeuGlu PheLeuLysThrLysGlyProArgAspThrProIlePhelleGly. 15â. - Processo para a preparação de um fragmento da proteína do envólucro de HTLV-m designado 590, caracterizado por incluir no referido fragmento a sequência de aminoácidos que se segue ou seus mutantes: - 82MetLeuArgProVaXGXuThr ProThrArgGXuIXeLysLysLeuAspGXyLeuTrpAXaPheSerLeuAspArg GXuArgVaXAXaAspLeuAsnGXnSerVaXGXuIXeAsnCysThrArgProAsn AsnAsnThrArgLysSerlleArglleGlnArgGlyProGlyArgAlaPheVal ThrIXeGXyLysIXeGXyAsnMetArgGXnAXaHisCysAsnIXeSerArgAXa LysTrpAsnAsnThrLeuLysGlnlleAspSerLysLeuArgGluGlnPheGXy AsnAsnLysThrllellePheLysGlnSerSerGlyGlyAspProGluIleVal ThrHisSerPheAsnCysGlyGlyGluíhePheTyrCysAsnSerThrGlnLeu PheAsnSerThrTrpPheAsnSerThrTrpSerThrLysGlySerAsnAsnThr GluGlySerAspThrlleThrLeuProCysArglleLysGlnllelleAsnMet TrpGlnGluValGXyLysAlaMetTyrAlaProProIleSerGlyGlnlleArg CysSerSerAsnlXeThrGXyLeuLeuLeuThrArgAspGXyGXyAsnSerAsn AsnGXuSerGXuIXePheArgProGXyGXyGXyAspMetArgAspAsnTrpArg SerGXuLeuTyrLysTyrLysVaXVaXLysIXeGXuProLeuGXyVaXAXaPro 83ThrLysAlaLysArgArgValValGlnArgGluLysArgAlaValGlylleGly AlaLeuPheLeuGlyPheLeuGlyAlaAlaGlySerThrMetGlyAlaAlaSer MetThrLeuThrValGlnAlaArgGlnLeuLeuSerGlylleValGlnGlnGln AsnAsnLeuLeuArgAlalleGluAlaGlnGlnHisLeuLeuGlnLeuThrVal TrpGlylleLysGlnLeuGlnAlaArglleLeuAlaValGluArgTyrLeuLys AspGlnGlnLeuLeuGlylleTrpGlyCysSerGlyLysLeuIleCysThrThr AlaValProTrpAsnAlaSerTrpSerAsnLysSerLeuGluGlnlleTrpAsn AsnMetThrTrpMetGluTrpAspArgGluIleAsnAsnTyrThrSerPhePro IleHisArgSerValMetLeuTyrThrThrProAsnThrTrpValAspAspIle ThrValValThrHisValAlaGlnAspCysAsnHisAlaSerValAspTrpGln ValValAlaAsnGlyAspValSerValGluLeuArgAspAlaAspGlnGlnVal ValAlaThrGlyGlnGlyThrSerGlyThrLeuGlnValValAsnProHisLeu TrpGlnProGlyGluGlyTyrLeuTyrGluLeuCysValThrAlaLysSerGln ThrGluCysAspIleTyrProLeuArgValGlylleArgSerValAlaValLys GlyGluGlnPheLeuIl.eAsnHisLysProPheTyrPheThrGlyPheGlyArg HisGluAspAlaAspLeuArgGlyLysGlyPheAspAsnValLeuMetValHis AspHisAlaLeuMetAspTrpIleGlyAlaAsnSerTyrArgThrSerHisTyr ProTyrAlaGluGluMetLeuAspTrpAlaAspGluHisGlylleValValIle AspGluThrAlaAlaValGlyPheAsnLeuSerLeuGlylleGlyPheGluAla GlyAsnLysProLysGluLeuTyrSerGluGluAlaValAsnGlyGluThrGln GlnAlaHisLeuGlnAlalleLysGluLeuIleAlaArgAspLysAsnHisPro SerValValMetTrpSerlleAlaAsnGluProAspThrArgProGlnGlyAla ArgGluTyrPheAlaProLeuAlaGluAlaThrArgLysLeuAspProThrArg ProIleThrCysValAsnValMetPheCysAspAlaHisThrAspThrlleSer AspLeuPheAspValLeuCysLeuAsnArgTyrTyrGlyTrpTyrValGlnSer GlyAspLeuGluThrAlaGluLysValLeuGluLysGluLeuLeuAlaTrpGln GluLysLeuHisGlnProIlellelleThrGluTyrGlyValAspThrLeuAla GlyLeuHisSerMetTyrThrAspMetTrpSerGluGluTyrGlnCysAlaTrp LeuAspMetTyrHisArgValPheAspArgValSerAlaValValGlyGl-uGln ValTrpAsnPheAlaAspPheAlaThrSerGlnGlylleLeuArgValGlyGly AsnLysLysGlyllePheThrArgAspArgLysProLysSerAlaAlaPheLeu LeuGlnLysArgTrpThrGlyMetAsnPheGlyGluLysProGlnGlnGlyGly LysGln, X6ã. - Processo para a preparação de um fragmento da proteína do envóiucro de HTLV-III designado KHX, caracterizado por se incXuir no referido fragmento a sequência de aminoácidos que se segue ou seus mutantes: 85MetLeuArg ProValGluThrProThrArgGluIleLysLysLeuAspGlyLeuTrpAlaPhe SerLeuAspArgGluArgGluPheProValTrpLysGluAlaThrThrThrLeu PheCysAlaSerAspAlaLysAlaTyrAspThrGluValHisAsnValTrpAla ThrHisAlaCysValProThrAspProAsnProGlnGluValValLeuValAsn ValThrGluAsnPheAsnMetTrpLysAsnAspMetValGluGlnMetHisGlu AspIlelleSerLeuTrpAspGlnSerLeuLysProCysValLysLeuThrPro LeuCysValSerLeuLysCysThrAspLeuLysAsnAspThrAsnThrAsnSer SerSerGlyArgMetlleMetGluLysGlyGluIleLysAsnCysSerPheAsn IleSerThrSerlleArgGlyLysValGlnLysGluTyrAlaPhePheTyrLys LeuAspIlelleProIleAspAsnAspThrThrSerTyrThrLeuThrSerCys AsnThrSerValIleThrGlnAlaCysProLysValSerPheGluProIlePro IleHisTyrCysAlaProAlaGlyPheAlalleLeuLysCysAsnAsnLysThr PheAsnGlyThrGlyProCysThrAsnValSerThrValGlnCysThrHisGly IleArgProValValSerThrGlnLeuLeuLeuAsnGlySerLeuAlaGluGXu GluValValIleArgSerAlaAsnPheThrAspAsnAlaLysThrllelleVal GlnLeuAsnGlnSerValGluIleAsnCysThrArgProAsnAsnAsnThrArg LysSerlleArglleGlnArgGlyProGlyArgAlaPheValThrlleGlyLysIleGlyAsnMetArgGlnAlaHisCysAsnlleSerArgAlaLysTrpAsnAsn ThrLeuLysGlnlleAspSerLysLeuAraGluGlnPheGlyAsnAsnLysThr IlellePheLysGlnSerSerGlyGlyAspProGluIleValThrHisSerPhe AsnCvsGlyGlyGluPhePheTyrCysAsnSerThrGlnLeuPheAsnSe rThr TrpPheAsnSerThrTrpSerThrLysGlySerAsnAsnThrGluGlySerAsp ThrlleThrLeuProCysArglleLysGlnllelleAsnMetTrpGlnGluVal GlyLysAlaMetTyrAlaProProIleSerGlyGlnlleArgCysSerSe rAsn IleTnrGlyLeuLeuLeuThrArgAspGlyGlyAsnSerAsnAsnGluSerGlu IlePheArgProGlyGlyGlvAspHetArgAspAsnTrpArgSerGluLeuTyr LysTyrLysValValLysIleGluProLeuGlyValAlaProThrLysAlaLys ArgArgValValGlnArgGluLysArgAlaValGlylleGlyAlaLeuPheLeu GlyPheLeuGlyAlaAlaGlySerThrMetGlyAlaAlaSerMetThrLeuThr ValGlnAlaArgGlnLeuLeuSerGlylleValGlnGlnGlnAsnAsnLeuLeu ArgAlalleGluAlaGinGlnHisLeuLeuGlnLeuThrValTrpGlylleLys GlnLeuGlnAlaArglleLeuAlaValGluArgTyrLeuLysAspGlnGlnLeu LeuGlylleTrpGlyCysSerGlyLysLeuIleCysThrThrAlaValProTrp AsnAlaSerTrpSerAsnLysSerLeuGluGlnlleTrpAsnAsnMetThrTrp MetGluTrpAspArgGluIleAsnAsnTvrThrSerPheProGlyAlaArglle LeuGluAspGluArgAlaSer. 87 t 17ãUm plasmídeo caracterizado por ser seleccionado netre os plasmídeos pREVí7T, plasmídeo pREVXTT/chi , plasmídeo pREV2«2, plasmídeo pRl®, plasmídeo pPBi, plasmídeo ρ 59Θ e plasmídeo pKHl. Í8§„- Plasmídeo de acordo com a reivindicação 17, caracterizado por ser α plasmídeo pREV 2,2. 19§.- Plasmídeo de acordo com a reivindicação 17, caracterizado por ser o plasmídeo pRl©. 2®â.- Plasmídeo de acordo com a reivindicaçãao 17, caracterizado por ser o plasmídeo pPBl» 21§.“ Plasmídeo de acordo com a reivindicação 17, caracterizado por ser a plasmídeo p59@« 22ã.- Plasmídeo de acordo com a reivindicação 17, caracterizado por ser o plasmídeo pKHl, 23S·»- Processo para a preparação de DNA caracterizado por se incluir no referido DNA a sequencia de nucleotídeos que se segue ou sequências de nucleotídeos equivalente contendo bases cuja região traduzida codifica a fragmento da proteína do envólucro de HTLV-III designado Ri®s —-------- ATGTTACGT TACAATGCA CCTGTAGAAACCCCAACCCGTGAAATCAAAAAACTCGACGGCCTGTGGGCATTC GGACATCTTTGGGGTTGGGCACTTTAGTTTTTTGAGCTGCCGGACACCCGTAAG AGTCTGGATCGCGAAAACTGTGGAATTGATCAATTCCCTGTGTGGAAGGAAGCA TCAGACCTAGCGCTTTTGACACCTTAACTAGTTAAGGGACACACCTTCCTTCGT ACCACCACTCTATTTTGTGCATCAGATGCTAAAGCATATGATACAGAGGTACAT TGGTGGTGAGATAAAACACGTAGTCTACGATTTCGTATACTATGTCTCCATGTA AATGTTTGGGCCACACATGCCTGTGTACCCACAGACCCCAACCCACAAGAAGTA TTACAAACCCGGTGTGTACGGACACATGGGTGTCTGGGGTTGGGTGTTCTTCAT GTATTGGTAAATGTGACAGAAAATTTTAACATGTGGAAAAATGACATGGTAGAA CATAACCATTTACACTGTCTTTTAAAATTGTACACCTTTTTACTGTACCATCTT CAGATGCATGAGGATATAATCAGTTTATGGGATCAAAGCCTAAAGCCATGTGTA GTCTACGTACTCCTATATTAGTCAAATACCCTAGTTTCGGATTTCGGTACACAT AAATTAACCCCACTCTGTGTTAGTTTAAAGTGCACTGATTTGAAGAATGATACT TTTAATTGGGGTGAGACACAATCAAATTTCACGTGACTAAACTTCTTACTATGA AATACCAATAGTAGTAGCGGGAGAATGATAATGGAGAAAGGAGAGATAAAAAAC TTATGGTTATCATCATCGCCCTCTTACTATTACCTCTTTCCTCTCTATTTTTTG TGCTCTTTCAATATCAGCACAAGCATAAGAGGTAAGGTGCAGAAAGAATATGCA ACGAGAAAGTTATAGTCGTGTTCGTATTCTCCATTCCACGTCTTTCTTATACGT TTTTTTTATAAACTTGATATAATACCAATAGATAATGATACTACCAGCTATACG AAAAAAATATTTGAACTATATTATGGTTATCTATTACTATGATGGTCGATATGC TTGACAAGTTGTAACACCTCAGTCATTACACAGGCCTGTCCAAAGGTATCCTTT AACTGTTCAACATTGTGGAGTCAGTAATGTGTCCGGACAGGTTTCCATAGGAAA 89%GAGCCAATTCCCATACATTATTGTGCCCCGGCTGGTTTTGCGATTCTAAAATGT CTCGGTTAAGGGTATGTAATAACACGGGGCCGACCAAAACGCTAAGATTTTACA AATAATAAGACGTTCAATGGAACAGGACCATGTACAAATGTCAGCACAGTACAA TTATTATTCTGCAAGTTACCTTGTCCTGGTACATGTTTACAGTCGTGTCATGTT TGTACACATGGAATTAGGCCAGTAGTATCAACTCAACTGCTGTTAAATGGCAGT ACATGTGTACCTTAATCCGGTCATCATAGTTGAGTTGACGACAATTTACCGTCA CTAGCAGAAGAAGAGGTAGTAATTAGATCTGCCAATTTCACAGACAATGCTAAA GATCGTCTTCTTCTCCATCATTAATCTAGACGGTTAAAGTGTCTGTTACGATTT ACCATAATAGTACAGCTGAACCAATCTGTAGAAATTAATTGTACAAGACCCAAC TGGTATTATCATGTCGACTTGGTTAGACATCTTTAATTAACATGTTCTGGGTTG AACAATACAAGAAAAAGTATCCGTATCCAGAGAGGACCAGGGAGAGCATTTGTT TTGTTATGTTCTTTTTCATAGGCATAGGTCTCTCCTAATCCCTCTCGTAAACAA ACAATAGGAAAAATAGGAAATATGAGACAAGCACATTGTAACATTAGTAGAGCA TGTTATCCTTTTTATCCTTTATACTCTGTTCGTGTAACATTGTAATCATCTCGT AAATGGAATAACACTTTAAAACAGATAGATAGCAAATTAAGAGAACAATTTGGA TTTACCTTATTGTGAAATTTTGTCTATCTATCGTTTAATTCTCTTGTTAAACCT AATAATAAAACAATAATCTTTAAGCÁGTCCTCAGGAGGGGACCCAGAAATTGTA TTATTATTTTGTTATTAGAAATTCGTCAGGAGTCCTCCCCTGGGTCTTTAACAT ACGCACAGTTTTAATTGTGGAGGGGAATTTTTCTACTGTAATTCAACACAACTG TGCGTGTCAAAATTAACACCTCCCCTTAAAAAGATGACATTAAGTTGTGTTGAC TTTAATAGTACTTGGTTTAATAGTACTTGGAGTACTAAAGGGTCAAATAACACT AAATTATCATGAACCAAATTATCATGAACCTCATGATTTCCCAGTTTATTGTGA GAAGGAAGTGACACAATCACCCTCCCATGCAGAATAAAACAAATTATAAACATG CTTCCTTCACTGTGTTAGTGGGAGGGTACGTCTTATTTTGTTTAATATTTGTAC TGGCAGGAAGTAGGAAAAGCAATGTATGCCCCTCCCATCAGTGGACAAATTAGA ACCGTCCTTCATCCTTTTCGTTACATACGGGGAGGGTAGTCACCTGTTTAATC.T TGTTCATCAAATATTACAGGGCTGCTATTAACAAGAGATGGTGGTAATAGCAAC ACAAGTAGTTTATAATGTCCCGACGATAATTGTTCTCTACCACCATTATCGTTG AATGAGTCCGAGATCCATCGCAGCGTAATGCTCTACACCACGCCGAACACCTGG TTACTCAGGCTCTAGGTAGCGTCGCATTACGAGATGTGGTGCGGCTTGTGGACC GTGGACGATATCACCGTGGTGACGCATGTCGCGCAAGACTGTAACCACGCGTCT CACCTGCTATAGTGGCACCACTGCGTACAGCGCGTTCTGACATTGGTGCGCAGA GTTGACTGGCAGGTGGTGGCCAATGGTGATGTCAGCGTTGAACTGCGTGATGCG CAACTGACCGTCCACCACCGG.TTACCACTACAGTCGCAACTTGACGCACTACGC GATCAACAGGTGGTTGCAACTGGACAAGGCACTAGCGGGACTTTGCAAGTGGTG CTAGTTGTCCACCAACGTTGACCTGTTCCGTGATCGCCCTGAAACGTTCACCAC *AATCCGCACCTCTGGCAACCGGGTGAAGGTTATCTCTATGAACTGTGCGTCACA TTAGGCGTGGAGACCGTTGGCCCACTTCCAATAGAGATACTTGACACGCAGTGT GCCAAAAGCCAGACAGAGTGTGATATCTACCCGCTTCGCGTCGGCATCCGGTCA CGGTTTTCGGTCTGTCTCACACTATAGATGGGCGAAGCGCAGCCGTAGGCCAGT GTGGCAGTGAAGGGCGAACAGTTCCTGATTAACCACAAACCGTTCTACTTTACT CACCGTCACTTCCCGCTTGTCAAGGACTAATTGGTGTTTGGCAAGATGAAATGA GGCTTTGGTCGTCATGAAGATGCGGACTTGCGTGGCAAAGGATTCGATAACGTG CCGAAACCAGCAGCACTTCTACGCCTGAACGCACCGTTTCCTAAGCTATTGCAC CTGATGGTGCACGACCACGCATTAATGGACTGGATTGGGÓCCAACTCCTACCGT GACTACCACGTGCTGGTGCGTAATTACCTGACCTAACCCCGGTTGAGGATGGCA ACCTCGCATTACCCTTACGCTGAAGAGATGCTCGACTGGGCAGATGAACATGGC TGGAGCGTAATGGGAATGCGACTTCTCTACGAGCTGACCCGTCTACTTGTACCG ATCGTGGTGATTGATGAAACTGCTGCTGTCGGCTTTAACCTCTCTTTAGGCATT TAGCACCACTAACTACTTTGACGACGACAGCCGAAATTGGAGAGAAATCCGTAA GGTTTCGAAGCGGGCAACAAGCCGAAAGAACTGTACAGCGAAGAGGCAGTCAAC CCÀAAGCTTCGCCCGTTGTTCGGCTTTCTTGACATGTCGCTTCTCCGTCAGTTG GGGGAAACTCAGCAAGCGCACTTACAGGCGATTAAAGAGCTGATAGCGCGTGAC CCCCTTTGAGTCGTTCGCGTGAATGTCCGCTAATTTCTCGACTATCGCGCACTG AAAAACCACCCAAGCGTGGTGATGTGGAGTATTGCCAACGAACCGGATACCCGT TTTTTGGTGGGTTCGCACCACTACACCTCATAACGGTTGCTTGGCCTATGGGCA CCGCAAGGTGCACGGGAATATTTCGCGCCACTGGCGGAAGCAACGCGTAAACTC GGCGTTCCACGTGCCCTTATAAAGCGCGGTGACCGCCTTCGTTGCGCATTTGAG GACCCGACGCGTCCGATCACCTGCGTCAATGTAATGTTCTGCGACGCTCACACC CTGGGCTGCGCAGGCTAGTGGACGCAGTTACATTACAAGACGCTGCGAGTGTGG GATACCATCAGCGATCTCTTTGATGTGCTGTGCCTGAACCGTTATTACGGATGG CTATGGTAGTCGCTAGAGAAACTACACGACACGGACTTGGCAATAATGCCTACC TATGTCCAAAGCGGCGATTTGGAAACGGCAGAGAAGGTACTGGAAAAAGAACTT ATACAGGTTTCGCCGCTAAACCTTTGCCGTCTCTTCCATGACCTTTTTCTTGAA CTGGCCTGGCAGGAGAAACTGCATCAGCCGATTATCATCACCGAATACGGCGTG GACCGGACCGTCCTCTTTGACGTAGTCGGCTAATAGTAGTGGCTTATGCCGCAC GATACGTTAGCCGGGCTGCACTCAATGTACACCGACATGTGGAGTGAAGAGTAT CTATGCAATCGGCCCGACGTGAGTTACATGTGGCTGTACACCTCACTTCTCATA CAGTGTGCATGGCTGGATATGTATCACCGCGTCTTTGATCGCGTCAGCGCCGTC GTCACACGTACCGACCTATACATAGTGGCGCAGAAACTAGCGCAGTCGCGGCAG GTCGGTGAACAGGTATGGAATTTCGCCGATTTTGCGACCTCGCAAGGCATATTG CAGCCACTTGTCCATACCTTAAAGCGGCTAAAACGCTGGAGCGTTCCGTATAAC 91- \CGCGTTGGCGGTAACAAGAAAGGGATCTTCACTCGCGACCGCAAACCGAAGTCG t GCGCAACCGCCATTGTTCTTTCCCTAGAAGTGAGCGCTGGCGTTTGGCTTCAGC GCGGCTTTTCTGCTGCAAAAACGCTGGACTGGCATGAACTTCGGTGAAAAACCG CGCCGAAAAGACGACGTTTTTGCGACCTGACCGTACTTGAAGCCACTTTTTGGC CAGCAGGGAGGCAAACAA GTCGTCCCTCCGTTTGTT. ·& o 24â.~ Processo para por se incluir no referido DMA segue ou sequências de núcleo cuja região traduzida codifica cro de HTLV-III designado PB!s preparação de DMA,, caractsrizado SGqu'è'ncia de nucleotideos que se dsos equivalentes contendo bases fragniento da proteína do envélu.--· -91a-ATGTTACGTCCTGTAGAAACCCCAACCCGTGAAATCAAAAAACTCGACGGCCTG TACAATGCAGGACATCTTTGGGGTTGGGCACTTTAGTTTTTTGAGCTGCCGGAC TGGGCATTCAGTCTGGATCGCGAACGCGTGGCCGATCTGAACCAATCTGTAGAA ACCCGTAAGTCAGACCTAGCGCTTGCGCACCGGCTAGACTTGGTTAGACATCTT ATTAATTGTACAAGACCCAACÁACAATACAAGAAAAAGTATCCGTATCCAGAGA TAATTAACATGTTCTGGGTTGTTGTTATGTTCTTTTTCATAGGCATAGGTCTCT GGACCAGGGAGAGCATTTGTTACAATAGGAAAAATAGGAAATATGAGACAAGCA CCTAATCCCTCTCGTAAACAATGTTATCCTTTTTATCCTTTATACTCTGTTCGT CATTGTAACATTAGTAGAGCAAAATGGAATAACACTTTAAAACAGATAGATAGC GTAACATTGTAATCATCTCGTTTTACCTTATTGTGAAATTTTGTCTATCTATCG AAATTAAGAGAACAATTTGGAAATAATAAAACAATAATCTTTAAGCAGTCCTCA TTTAATTCTCTTGTTAAACCTTTATTATTTTGTTATTAGAAATTCGTCAGGAGT GGAGGGGACCCAGAAATTGTAACGCACAGTTTTAATTGTGGAGGGGAATTTTTC CCTCCCCTGGGTCTTTAACATTGCGTGTCAAAATTAACACCTCCCCTTAAAAAG TACTGTAATTCAACACAACTGTTTAATAGTACTTGGTTTAATAGTACTTGGAGT ATGACATTAAGTTGTGTTGACAAATTATCATGAACCAAATTATCATGAACCTCA ACTAAAGGGTCAAATAACACTGAAGGAAGTGACACAATCACCCTCCCATGCAGA TGATTTCCCAGTTTATTGTGACTTCCTTCACTGTGTTAGTGGGAGGGTACGTCT ATAAAACAAATTATAAACATGTGGCAGGAAGTAGGAAAAGCAATGTATGCCCCT TATTTTGTTTAATATTTGTACACCGTCCTTCATCCTTTTCGTTACATACGGGGA CCCATCAGTGGACAAATTAGATGTTCATCAAATATTACAGGGCTGCTATTAACA GGGTAGTCACCTGTTTAATCTACAAGTAGTTTATAATGTCCCGACGATAATTGT AGAGATGGTGGTAATAGCAACAATGAGTCCGAGATCCGTCGACAAGCTTCCCGG TCTCTACCACCATTATCGTTGTTACTCAGGCTCTAGGCAGCTGTTCGAAGGGCC GAGCTCGAATTCTTGAAGACGAAAGGGCCTCGTGATACTCCTATTTTTATAGGT CTCGAGCTTAAGAACTTCTGCTTTCCCGGAGCACTATGCGGATAAAAATATCCA. -92- 25ã«- Processo para a preparação de'DMA caracterizado por incluir na referido DMA a sequência de nucleotideos equivalentes contendo bases cuja região traduzida codifica, o fragmento da proteína do envólucro de HTLV-III designado 59Θ;\ 93 93\ ATGTTACGTCCTGTAGAAACC TACAATGCAGGACATCTTTGG CCAACCCGTGAAATCAAAAAACTCGACGGCCTGTGGGCATTCAGTCTGGATCGC GGTTGGGCACTTTAGTTTTTTGAGATGCCGGACACCCGTAAGTCAGACCTAGCG GAACGCGTGGCCGATCTGAACCAATCTGTAGAAATTAATTGTACAAGACCCAAC CTTGCGCACCGGCTAGACTTGGTTAGACATCTTTAATTAACATGTTCTGGGTTG AACAATACAAGAAAAAGTATCCGTATCCAGAGAGGACCAGGGAGAGCATTTGTT TTGTTATGTTCTTTTTCATAGGCATAGGTCTCTCCTAATCCCTCTCGTAAACAA ACAATAGGAAAAATAGGAAATATGAGACAAGCACATTGTAACATTAGTAGAGCA TGTTATCCTTTTTATCCTTTATACTCTGTTCGTGTAACATTGTAATCATCTCGT AAATGGAATAACACTTTAAAACAGATAGATAGCAAATTAAGAGAACAATTTGGA TTTACÇTTATTGTGAAATTTTGTCTATCTATCGTTTAATTCTCTTGTTAAACCT. AATAATAAAACAATAATCTTTAAGCAGTCCTCAGGAGGGGACCCAGAAATTGTA TTATTATTTTGTTATTAGAAATTCGTCAGGAGTCCTCCCCTGGGTCTTTAACAT ACGCACAGTTTTAATTGTGGAGGGGAATTTTTCTACTGTAATTCAACACAACTG TGCGTGTCAAAATTAACACCTCCCCTTAAAAAGATGACATTAAGTTGTGTTGAC TTTAATAGTACTTGGTTTAATAGTACTTGGAGTACTAAAGGGTCAAATAACACT AAATTATCATGAACCAAATTATCATGAACCTCATGATTTCCCAGTTTATTGTGA GAAGGAAGTGACACAATCACCCTCCCATGCAGAATAAAACAAATTATAAACATG CTTCCTTCACTGTGTTAGTGGGAGGGTACGTCTTATTTTGTTTAATATTTGTAC TGGCAGGAAGTAGGAAAAGCAATGTATGCCCCTCCCATCAGTGGACAAATTAGA ACCGTCCTTCATCCTTTTCGTTACATACGGGGAGGGTAGTCACCTGTTTAATCT TGTTCATCAAATATTACAGGGCTGCTATTAACAAGAGATGGTGGTAATAGCAAC ACAAGTAGTTTATAATGTCCCGACGATAATTGTTCTCTACCACCATTATCGTTG AATGAGTCCGAGATCTTCAGACCTGGAGGAGGAGATATGAGGGACAATTGGAGA TTACTCAGGCTCTAGAAGTCTGGACCTCCTCCTCTATACTCCCTGTTAACCTCT AGTGAATTATATAAATATAAAGTAGTAAAAATTGAACCATTAGGAGTAGCACCC TCACTTAATATATTTATATTTCATCATTTTTAACTTGGTAATCCTCATCGTGGG ACCAAGGCAAAGAGAAGAGTGGTGCAGAGAGAAAAAAGAGCAGTGGGAATAGGA TGGTTCCGTTTCTCTTCTCACCACGTCTCTCTTTTTTCTCGTCACCCTTATCCT 94GCTTTGTTCCTTGGGTTCTTGGGAGCAGCAGGAAGCACTATGGGCGCAGCGTCA CGAAACAAGGAACCCAAGAACCCTCGTCGTCCTTCGTGATACCCGCGTCGCAGT ATGACGCTGACGGTACAGGCCAGACAATTATTGTCTGGTATAGTGCAGCAGCAG TACTGCGACTGCCATGTCCGGTCTGTTAATÀACAGACCATATCACGTCGTCGTC AACAATTTGCTGAGGGCTATTGAGGCGCAACAGCATCTGTTGCAACTCACAGTC TTGTTAAACGACTCCCGATAACTCCGCGTTGTCGTAGACAACGTTGAGTGTCAG TGGGGCATCAAGCAGCTCCAGGCAAGAATCCTGGCTGTGGAAAGATACCTAAAG ACCCCGTAGTTCGTCGAGGTCCGTTCTTAGGACCGACACCTTTCTATGGATTTC GATCAACAGCTCCTGGGGATTTGGGGTTGCTCTGGAAAACTCATTTGCACCACT CTAGTTGTCGAGGACCCCTAAACCCCAACGAGACCTTTTGAGTAAACGTGGTGA GCTGTGCCTTGGAATGCTAGTTGGAGTAATAAATCTCTGGAACAGATTTGGAAT CGACACGGAACCTTACGATCAACCTCATTATTTAGAGACCTTGTCTAAACCTTA AACATGACCTGGATGGAGTGGGACAGAGAAATTAACAATTACACAAGCTTCCCG TTGTACTGGACCTACCTCACCCTGTCTCTTTAATTGTTAATGTGTTCGAAGGGC ATCCATCGCAGCGTAATGCTCTACACCACGCCGAACACCTGGGTGGACGATATC TAGGTAGCGTCGCATTACGAGATGTGGTGCGGCTTGTGGACCCACCTGCTATAG ACCGTGGTGACGCATGTCGCGCAAGACTGTAACCACGCGTCTGTTGACTGGCAG TGGCACCACTGCGTACAGCGCGTTCTGACATTGGTGCGCAGACAACTGACCGTC GTGGTGGCCAATGGTGATGTCAGCGTTGAACTGCGTGATGCGGATCAACAGGTG CACCACCGGTTACCACTACAGTCGCAACTTGACGCACTACGCCTAGTTGTCCAC GTTGCAACTGGACAAGGCACTAGCGGGACTTTGCAAGTGGTGAATCCGCACCTC CAACGTTGACCTGTTCCGTGATCGCCCTGAAACGTTCACCACTTAGGCGTGGAG TGGCAACCGGGTGAAGGTTATCTCTATGAACTGTGCGTCACAGCCAAAAGCCAG ACCGTTGGCCCACTTCCAATAGAGATACTTGACACGCAGTGTCGGTTTTCGGTC ACAGAGTGTGATATCTACCCGCTTCGCGTCGGCATCCGGTCAGTGGCAGTGAAG TGTCTCACACTATAGATGGGCGAAGCGCAGCCGTAGGCCAGTCACCGTCACTTC GGCGAACAGTTCCTGATTAACCACAAACCGTTCTACTTTACTGGCTTTGGTCGT CCGCTTGTCAAGGACTAATTGGTGTTTGGCAAGATGAAATGACCGAAACCAGCA CATGAAGATGCGGACTTGCGTGGCAAAGGATTCGATAACGTGCTGATGGTGCAC GCACTTCTACGCCTGAACGCACCGTTTCCTAAGCTATTGCACGACTACCACGTG GACCACGCATTAATGGACTGGATTGGGGCCAACTCCTACCGTACCTCGCATTAC CTGGTGCGTAATTACCTGACCTAACCCCGGTTGAGGATGGCATGGAGCGTAATG CCTTACGCTGAAGAGATGCTCGACTGGGCAGATGAACATGGCATCGTGGTGATT GGAATGCGACTTCTCTACGAGCTGACCCGTCTACTTGTACCGTAGCACCACTAA GATGAAACTGCTGCTGTCGGCTTTAACCTCTCTTTAGGCATTGGTTTCGAAGCG CTACTTTGACGACGACAGCCGAAATTGGAGAGAAATCCGTAACCAAAGCTTCGC - 95GGCAACAAGCCGAAAGAACTGTACAGCGAAGAGGCAGTCAACGGGGAAACTCAG CCGTTGTTCGGCTTTCTTGACAT'GTCGCTTCTCCGTCAGTTGCCCCTTTGAGTC CAAGCGCACTTACAGGCGATTAAAGAGCTGATAGCGCGTGACAAAAACCAÇCCA GTTCGCGTGAATGTCCGCTAATTTCTCGACTATCGCGCACTGTTTTTGGTGGGT AGCGTGGTGATGTGGAGTATTGCCAACGAACCGGATACCCGTCCGCAAGGTGCA TCGCACCACTACACCTCATAACGGTTGCTTGGCCTATGGGCAGGCGTTCCACGT CGGGAATATTTCGCGCCACTGGCGGAAGCAACGCGTAAACTCGACCCGACGCGT GCCCTTATAAAGCGCGGTGACCGCCTTCGTTGCGCATTTGAGCTGGGCTGCGCA CCGATCACCTGCGTCAATGTAATGTTCTGCGACGCTCACACCGATACCATCAGC GGCTAGTGGACGCAGTTACATTACAAGACGCTGCGAGTGTGGCTATGGTAGTCG GATCTCTTTGATGTGCTGTGCCTGAACCGTTATTACGGATGGTATGTCCAAAGC CTAGAGAAACTACACGACACGGACTTGGCAATAATGCCTACCATACAGGTTTCG GGCGATTTGGAAACGGCAGAGAAGGTACTGGAAAAAGAACTTCTGGCCTGGCAG CCGCTAAACCTTTGCCGTCTCTTCCATGACCTTTTTCTTGAAGACCGGACCGTC gagaaactgcatcagccgattatcatcaccgaatacggcçtggatXcgttagcc CTCTTTGACGTAGTCGGCTAATAGTAGTGGCTTATGCCGCACCTATGCAATCGG GGGCTGCACTCAATGTACACCGACATGTGGAGTGAAGAGTATCAGTGTGCATGG CCCGACGTGAGTTACATGTGGCTGTACACCTCACTTCTCATAGTCACACGTACC CTGGATATGTATCACCGCGTCTTTGATCGCGTCAGCGCCGTCGTCGGTGAACAG GACCTATACATAGTGGCGCAGAAACTAGCGCAGTCGCGGCAGCAGCCACTTGTC GTATGGAATTTCGCCGATTTTGCGACCTCGCAAGGCATATTGCGCGTTGGCGGT CATACCTTAAAGCGGCTAAAACGCTGGAGCGTTCCGTATAACGCGCAACCGCCA AACAAGAAAGGGATCTTCACTCGCGACCGCAAACCGAAGTCGGCGGCTTTTCTG TTGTTCTTTCCCTAGAAGTGAGCGCTGGCGTTTGGCTTCAGCCGCCGAAAAGAC CTGCAAAAACGCTGGACTGGCATGAACTTCGGTGAAAAACCGCAGCAGGGAGGC GACGTTTTTGCGACCTGACCGTACTTGAAGCCACTTTTTGGCGTCGTCCCTCCG AAACAA TTTGTT.por se incluir segue ou sequi cuja região tr cro do HTLV-II - Processo para a preparação de DNA caracterizado no referido DNA a sequência de nucieotídeos que se :ncias de nucieotídeos equivalentes contendo bases aduzida codifica o fragmento da proteina do envólu-I designado por KHi κ97ATGTTACGT TACAATGCA CCTGTAGAAACCCCAACCCGTGAAATCAAAAAACTCGACGGCCTGTGGGCATTC GGACATCTTTGGGGTTGGGCACTTTAGTTTTTTGAGCTGCCGGACACCCGTAAG AGTCTGGATCGCGAACGCGAATTCCCTGTGTGGAAGGAAGCAACCACCACTCTA TCAGACCTAGCGCTTGCGCTTAAGGGACACACCTTCCTTCGTTGGTGGTGAGAT TTTTGTGCATCAGATGCTAAAGCATATGATACAGAGGTACATAATGTTTGGGCC AAAACACGTAGTCTACGATTTCGTATACTATGTCTCCATGTATTACAAACCCGG ACACATGCCTGTGTACCCACAGACCCCAACCCACAAGAAGTAGTATTGGTAAAT TGTGTACGGACACATGGGTGTCTGGGGTTGGGTGTTCTTCATCATAACCATTTA GTGACAGAAAATTTTAACATGTGGAAAAATGACATGGTAGAACAGATGCATGAG CACTGTCTTTTAAAATTGTACACCTTTTTACTGTACCATCTTGTCTACGTACTC GATATAATCAGTTTATGGGATCAAAGCCTAAAGCCATGTGTAAAATTAACCCCA CTATATTAGTCAAATACCCTAGTTTCGGATTTCGGTACACATTTTAATTGGGGT CTCTGTGTTAGTTTAAAGTGCACTGATTTGAAGAATGATACTAATACCAATAGT GAGACACAATCAAATTTCACGTGACTAAACTTCTTACTATGATTATGGTTATCA AGTAGCGGGAGAATGATAATGGAGAAAGGAGAGATAAAAAACTGCTCTTTCAAT TCATCGCCCTCTTACTATTACCTCTTTCCTCTCTATTTTTTGACGAGAAAGTTA ATCAGCACAAGCATAAGAGGTAAGGTGCAGAAAGAATATGCATTTTTTTATAAA TAGTCGTGTTCGTATTCTCCATTCCACGTCTTTCTTATACGTAAAAAAATATTT CTTGATATAATACCAATAGATAATGATACTACCAGCTATACGTTGACAAGTTGT GAACTATATTATGGTTATCTATTACTATGATGGTCGATATGCAACTGTTCAACA AACACCTCAGTCATTACACAGGCCTGTCCAAAGGTATCCTTTGAGCCAATTCCC TTGTGGAGTCAGTAATGTGTCCGGACAGGTTTCCATAGGAAACTCGGTTAAGGG ATACATTATTGTGCCCCGGCTGGTTTTGCGATTCTAAAATGTAATAATAAGACG TATGTAATAACACGGGGCCGACCAAAACGCTAAGATTTTACATTATTATTCTGC TTCAATGGAACAGGACCATGTACAAATGTCAGCACAGTACAATGTACACATGGA AAGTTACCTTGTCCTGGTACATGTTTACAGTCGTGTCATGTTACATGTGTACCT ATTAGGCCAGTAGTATCAACTCAACTGCTGTTAAATGGCAGTCTAGCAGAAGAA TAATCCGGTCATCATAGTTGAGTTGACGACAATTTACCGTCAGATCGTCTTCTT GAGGTAGTAATTAGATCTGCCAATTTCACAGACAATGCTAAAACCATAATAGTA CTCCATCATTAATCTAGACGGTTAAAGTGTCTGTTACGATTTTGGTATTATCAT CAGCTGAACCAATCTGTAGAAATTAATTGTACAAGACCCAACAACAATACAAGA GTCGACTTGGTTAGACATCTTTAATTAACATGTTCTGGGTTGTTGTTATGTTCT AAAAGTATCCGTATCCAGAGAGGACCAGGGAGAGCATTTGTTACAATAGGAAAA TTTTCATAGGCATAGGTCTCTCCTGGTCCCTCTCGTAAACAATGTTATCCTTTT 98ATAGGAAATATGAGACAAGCACATTGTAACATTAGTAGAGCAAAATGGAATAAC TATCCTTTATACTCTGTTCGTGTAACATTGTAATCATCTCGTTTTACCTTATTG ACTTTAAAACAGATAGATAGCAAATTAAGAGAACAATTTGGAAATAATAAAACA TGAAATTTTGTCTATCTATCGTTTAATTCTCTTGTTAAACCTTTATTATTTTGT ATAATCTTTAAGCAGTCCTCAGGAGGGGACCCAGAAATTGTAACGCACAGTTTT TATTAGAAATTCGTCAGGAGTCCTCCCCTGGGTCTTTAACATTGCGTGTCAAAA AATTGTGGAGGGGAATTTTTCTACTGTAATTCAACACAACTGTTTAATAGTACT TTAACACCTCCCCTTAAAAAGATGACATTAAGTTGTGTTGACAAATTATCATGA TGGTTTAATAGTACTTGGAGTACTAAAGGGTCAAATAACA.CTGAAGGAAGTGAC ACCAAATTATCATGAACCTCATGATTTCCCAGTTTATTGTGACTTCCTTCACTG ACAATCACCCTCCCATGCAGAATAAAACAAATTATAAACATGTGGCAGGAAGTA TGTTAGTGGGAGGGTACGTCTTATTTTGTTTAATATTTGTACACCGTCCTTCAT GGAAAAGCAATGTATGCCCCTCCCATCAGTGGACAAATTAGATGTTCATCAAAT CCTTTTCGTTACATACGGGGAGGGTAGTCACCTGTTTAATCTACAAGTAGTTTA ATTACAGGGCTGCTATTAACAAGAGATGGIGGTAATAGCAACAATGAGTCCGAG TAATGTCCCGACGATAATTGTTCTCTACCACCATTATCGTTGTTACTCAGGCTC ATCTTCAGACÇTGGAGGAGGAGATATGAGGGACAATTGGAGAAGTGAATTATAT TAGAAGTCTGGACCTCCTCCTCTATACTCCCTGTTAACCTCTTCACTTAATATA AAATATAAAGTAGTAAAAATTGAACCATTAGGAGTAGCACCCACCAAGGCAAAG TTTATATTTCATCATTTTTAACTTGGTAATCCTCATCGTGGGTGGTTCCGTTTC AGAAGAGTGGTGCAGAGAGAAAAAAGAGCAGTGGGAATAGGAGCTTTGTTCCTT TCTTCTCACCACGTCTCTCTTTTTTCTCGTCACCCTTATCCTCGAAACAAGGAA GGGTTCTTGGGAGCAGCAGGAAGCACTATGGGCGCAGCGTCAATGACGCTGACG CCCAAGAACCCTCGTCGTCCTTCGTGATACCCGCGTCGCAGTTACTGCGACTGC GTACAGGCCAGACAATTATTGTCTGGTATAGTGCAGCAGCAGAACAATTTGCTG CATGTCCGGTCTGTTAATAACAGACCATATCACGTCGTCGTCTTGTTAAACGAC AGGGCTATTGAGGCGCAACAGCATCTGTTGCAACTCACÃGTCTGGGGCATCAAG TCCCGATAACTCCGCGTTGTCGTAGACAACGTTGAGTGTCAGACCCCGTAGTTC CAGCTCCAGGCAAGAATCCTGGCTGTGGAAAGATACCTAAAGGATCAACAGCTC GTCGAGGTCCGTTCTTAGGACCGACACCTTTCTATGGATTTCCTAGTTGTCGAG CTGGGGATTTGGGGTTGCTCTGGAAAACTCATTTGCACCACTGCTGTGCCTTGG GACCCCTAAACCCCAACGAGACCTTTTGAGTAAACGTGGTGACGACACGGAACC AATGCTAGTTGGAGTAATAAATCTCTGGAACAGATTTGGAATAACATGACCTGG TTACGATCAACCTCATTATTTAGAGACCTTGTCTAAACCTTATTGTACTGGACC ATGGAGTGGGACAGAGAAATTAACAATTACACAAGCTTCCCGGGAGCTCGAATT TACCTCACCCTGTCTCTTTAATTGTTAATGTGTTCGAAGGGCCCTCGAGCTTAA CTTGAAGACGAAAGGGCCTCG GAACTTCTGCTTTCCCGGAGC. 99
- 271. - Ensaio imunoquímico para detecção ou quantificação ãe anticorpo contra HTLV-III num líquido caracterizado por empregar uma proteína de HTLV-III seleccionada entre RIO, PBl, 590 ou KHl.
- 281. - Ensaio imunoquímico, de acordo com a reivindicação 27, caracterizado por a referida proteína de HTLV-III ser RIO.
- 291. - Ensaio imunoquímico, de acordo com a reivindicação 27 caracterizado por a referida proteína de HTLV-III ser PBl.
- 301. - Ensaio imunoquímico, de acordo com a reivindicação 27, caracterizado por a referida proteína de HTLV-III ser 590.
- 311. - Ensaio imunoquímico, de acordo com a reivindicação 27, caracterizado por a referida proteína de HTLV-III ser KHl.
- 321. - Método para a detecçâo de anticorpos contra HTLV-III num líquido biológico, caracterizado por compreender os passos de: (a) incubação de um imunoadsorvente compreendendo uma fase sólida a que.está ligada uma proteína de HTLV--III seleccionada entre RIO, PBl, 590 ou KHl, com uma amostra do fluido biológico a testar, em condiçCes que permitam a ligação do anticorpo anti-HTLV-m ao imunoadsorvente : - 100 - 4(b) separação do imunoadsornente da amostra; e (c) determinação do anticorpo ligado ao imuno-adsorvente como indicação de anti-HTLV-III na amostra. 33â. - Método de acordo com a reivindicação 32, caracterizado per o passo de determinação do anticorpo ligado ao imunoadsorvente compreender incubação do imunoadsorvente com um anticorpo marcado contra antigénio da espécie de onde deriva o líquido biológico; seguindo-se separação do imunoadsorvente do anticorpo marcado após período de incubação; e detecção da marcação associada ao imunoadsorvente. 34ã. - Método de acordo com a reivindicação 32, caracterizado por o passo de determinação do anticorpo ligado ao imunoadsorvente compreender incubação do imunoadsorvente com uma proteína de HTLV-III marcada, seleccionada entre RIO, PBl, 590 ou EH1; separação do imunoadsorvente da proteína de HTLV-III marcada; e detecção da marcação associada ao imunoadsorvente. 35â. - Método de acordo com a reivindicação 32, caracterizado por o passo de determinação do anticorpo ligado ao imunoadsorvente compreender incubação do imunoadsornente com proteína A marcada; separação do imunoadsorvente da proteína A marcada; e detecção da marcação associada ao imunoadsorvente. - 101 -36i. - Método para a detecção de anticorpos contra HTLV-III numa amostra de soro ou plasma humano, caracterizado por compreender os passos de (a/ produção de um imunoadsorvente compreendendo uma esfera revestida com proteína de HTLV-III seleccio-nada entre RIO, PBI7· 590 ou KH1? (b) incubação do imunoadsorvente com a amostra de soro ou plasma em condições que permitam a ligação do anticorpo anti-HTLV-m na amostra ao imunoadsorvente? (c) separação do imunoadsoevente e da amostra; (d) incubação do imunoadsorvente com um anticorpo marcada anti-(IgG humana) em condições que permitam a ligação do anticorpo anti-(IgG humana) ao anticorpo humano anti-HTLV-III ligado ao imunoadsorvente? (e) separação do imunoadsorvente do anticorpo anti-(IgG humana) não ligado; e (f/ avaliação da marcação associada ao imunoadsorvente como indicação da presença do anticorpo contra HTLV-III na amostra. 37ã. - Método de acordo com a reivindicação 36, caracterizado por o imunoadsorvente compreender ainda um revestimento posterior de proteína animal. 38â. - Método de acordo com a reivindicação 36, caracterizado por o anticorpo marcado anti--(IgG humana 6) ser um anticorpo de animal e a amostra de soro ou de plasma ser diluída com soro normal de um animal da mesmaespécie.39ã. - Método de acordo com a reivindicação 38/ caracterizado por o anticorpo anti-(IgG humana) ser um anticorpo de cabra e a amostra de soro ou plasma ser diluída com soro normal de cabra. 40ã. - Método de acordo com a reivindicação 36/ caracterizado por o anticorpo anti-(IgG humana) ser marcadao com isotopo radioactivO/ uma enzima ou um composto fluorescente. 41ã. - Um imunoadsorvente para usar num ensaio imunoquímico em fase solida para anticorpos contra HTLV-III, caracterizado por compreender numa fase solida a que esta fixada uma proteína de HTLV-III seleccio-nada entre RIO, PB1, 590 ou KH1. 42â. - Um imunoadsorvente de acordo com a reivindicação 41/ caracterizado por a fase solida ser uma esfera de vidro ou de plástico, um poço de uma pi aca de microtitulaçâo ou um tubo de ensaio. 43ã. - Um imunoadsorvente de acordo com a reivindicação 41, caracterizado por compreender ainda um revestimento posterior com proteína animal. 44ã. - Processo para a preparação de uma composição de vacina, caracterizada por se incluir na referida composição uma proteína de HTLV-III tendo as propriedades antigénicas de RIO, PB1, 590 ou KH1 num veículo farmacologicamente aceitável. 1 ι - 103 -45â. - Processo de acordo com a reivindicação 44, caracterizado por a referida proteína de HTLV-III ter as propriedades antigénicas de RIO. 46ã. - Processo de acordo com a reivindicação 44, caracterizado por a referida proteína de HTLV-III ter as propriedades antigénicas de PBl. 47â. - Processo de acordo com a reivindicação 44, caracterizado por a referida proteína de HTLV-III ter as propriedades antigénicas de 590. 48â. - Processo de acordo com a reivindicação 44, caracterizado por a referida proteína de HTLV-III ter as propriedades antigénicas de KH1. 49ã. - Processo para a estimulação de uma resposta proliferativa de linfocitos em humanos caracterizado pelo tratamento de humanos, necessitados da estimulação de uma resposta proliferativa de linfocitos com um fragmento recombinante da proteína do envolucro de HTLV-III seleccionado entre RIO, PBl, 590 ou KHl. 50ã. - Processo de acordo com a reivindicação 49, caracterizado por o referido fragmento recombinante da proteína do envolucro de HTLV-III ser RIO. 51ã. - Processo de acordo com a reivindicação 49, caracterizado por o referido fragmento recombinante da proteína do envolucro de HTLV-III ser PBl. ( - 104 -52ã. - Processo de acordo com a reivindicação 49, caracterizado por o referido fragmento recombinante da proteína do envólucro HTLV-III ser 590. 53â. - Processo de acordo com a reivindicação 49, caracterizado por o referido fragmento recombinante da proteína do envólucro de HTLV-III ser KH1. 54â. - Um "kit" para uso na detecção de anticorpos contra HTLV-III num fluido biológico caracterizado por compreender: (a? um imunoadsorvente compreendendo uma fase sólida a qual está ligada uma proteína de HTLV-LII selec-cionada entre RIO, PB1, 590 ou KH1, com uma amostra do fluído biológico a testar, em condições que permitam a ligação do anticorpo anti-HTLV-III na amostra ao a imunoadsorvente; (b) anticorpo marcado contra HTLV-III; e (c) um meio para detecção da marcação associada ao imunoadsorvente. - 105 55ã. - O "Kit" de acordo com a reivindicação 49, caracterizado por o anticorpo anti-HTLV--III ser marcado com anticorpo anti-(IgG humana) como marca detectável. Lisboa, 30 de Julho de 1987J. PEREIRA DA CRUZ Agente Oficial da Propriedade Industrial *UA VICTOR CCRDON, 10-A. 1.» 1200 LISBOA
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US89268086A | 1986-08-01 | 1986-08-01 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PT85461A PT85461A (en) | 1987-08-01 |
| PT85461B true PT85461B (pt) | 1990-07-31 |
Family
ID=25400352
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PT85461A PT85461B (pt) | 1986-08-01 | 1987-07-30 | Processo para a preparacao de proteinas recombinantes de htlv-iii e suas utilizacoes |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (2) | EP0525828A3 (pt) |
| JP (1) | JPS6341499A (pt) |
| KR (1) | KR960005181B1 (pt) |
| AU (1) | AU609725B2 (pt) |
| DK (1) | DK400287A (pt) |
| FI (1) | FI873315A (pt) |
| IL (1) | IL83347A0 (pt) |
| NO (1) | NO873216L (pt) |
| NZ (1) | NZ221227A (pt) |
| PT (1) | PT85461B (pt) |
| ZA (1) | ZA875633B (pt) |
Families Citing this family (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5166050A (en) * | 1986-08-20 | 1992-11-24 | Bristol-Myers Squibb Company | Monoclonal antibodies and peptides useful in treating and diagnosing HIV infections |
| NZ221440A (en) * | 1986-08-20 | 1991-11-26 | Genetic Systems Corp | Composition containing monoclonal antibodies/peptides useful in treating and diagnosing hiv infections |
| US5019387A (en) * | 1987-09-08 | 1991-05-28 | Duke University | Production of antibodies to HIV |
| EP0311228A3 (en) * | 1987-10-09 | 1990-05-02 | Repligen Corporation | Recombinant polypeptides and their uses, including assay for aids virus |
| NO881501L (no) * | 1987-10-09 | 1989-04-10 | Repligen Corp | Rekombinante htlv-111-proteiner og anvendelser av disse. |
| US5763160A (en) * | 1988-02-12 | 1998-06-09 | United Biomedical, Inc. | Synthetic peptides and process of using same for the detection of antibodies to human immunodeficiency virus (HIV) gp120 envelope protein, diagnosis of AIDS and pre-AIDS conditions and as vaccines |
| US5914109A (en) * | 1990-06-15 | 1999-06-22 | New York University | Heterohybridomas producing human monoclonal antibodies to HIV-1 |
| IL98845A0 (en) * | 1990-07-19 | 1992-07-15 | Merck & Co Inc | Coconjugate vaccines comprising immunogenic protein,hiv related peptides,and anionic moieties,their preparation and pharmaceutical compositions containing them |
| US6228608B1 (en) | 1991-02-28 | 2001-05-08 | Aquila Biopharmaceuticals, Inc. | Recombinant FIV glycoprotein 160 and P24 gag protein |
| DK0728015T3 (da) | 1992-06-18 | 2006-07-17 | Creagen Inc | Kombinatoriske polypeptidantigener |
| US5274122A (en) * | 1992-10-15 | 1993-12-28 | Merck & Co., Inc. | Acidic derivatives of homocysteine thiolactone |
| WO1994014068A1 (en) * | 1992-12-15 | 1994-06-23 | Empyrean Diagnostics Inc. | Hiv analysis method and device |
| DE4405810A1 (de) | 1994-02-23 | 1995-08-24 | Behringwerke Ag | Von einem Retrovirus aus der HIV-Gruppe abgeleitete Peptide und deren Verwendung |
Family Cites Families (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB8423659D0 (en) * | 1984-09-19 | 1984-10-24 | Pasteur Institut | Cloned dna sequences |
| IL76082A (en) * | 1984-08-22 | 1991-07-18 | Us Health | Molecular clones of the genome of htlv-iii and a process for the preparation thereof |
| US9328391B1 (en) * | 1984-08-22 | 2016-05-03 | The United States Of America As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Cloning and expression of HIV-1 DNA |
| DE3588248T2 (de) * | 1984-10-18 | 2004-07-01 | Institut Pasteur | LAV-Antigene und -Peptide |
| CA1341482C (en) * | 1984-10-31 | 2005-05-10 | Paul A. Luciw | Process for preparing fragments of aids-associated retroviruses |
| US4725669A (en) * | 1984-11-09 | 1988-02-16 | President And Fellows Of Harvard College | Assay for detecting infection by human T-cell lymphotropic virus-III |
| AU600658B2 (en) * | 1984-12-24 | 1990-08-23 | Genentech Inc. | Molecularly cloned acquired immunodeficiency syndrome polypeptides and their methods of use |
| US4774175A (en) * | 1985-03-01 | 1988-09-27 | Centocor, Inc. | Immunochemical methods for the detection of antibody against HTLV-III |
| IE64785B1 (en) * | 1985-04-08 | 1995-09-06 | Genetic Systems Corp | Expression of immunologically reactive viral proteins |
| FI861626A (fi) * | 1985-04-19 | 1986-10-20 | Hoffmann La Roche | Foervaervat immunbristsyndrom (aids) -relaterat viralt rekombinant hoeljeprotein samt ett testfoerfarande foer aids. |
| ES2000859A6 (es) * | 1985-08-12 | 1988-03-16 | Syntex Inc | Un metodo para producir un vector de expresion bacteriana para la expresion de proteinas de fusion |
| EP0227169B1 (en) * | 1985-12-17 | 1993-03-17 | Akzo N.V. | Immunochemical reagent |
| US4734362A (en) * | 1986-02-03 | 1988-03-29 | Cambridge Bioscience Corporation | Process for purifying recombinant proteins, and products thereof |
| AU617088B2 (en) * | 1986-06-12 | 1991-11-21 | Biogen, Inc. | Peptides involved in the pathogenesis of hiv infection |
| EP0276279A4 (en) * | 1986-07-21 | 1990-01-08 | Southwest Found Biomed Res | PREPARATION AND METHOD FOR IMMUNIZING AGAINST VIRAL AIDS AND ARC PATHOGENS. |
-
1987
- 1987-01-19 EP EP19920116879 patent/EP0525828A3/en not_active Withdrawn
- 1987-01-19 EP EP87300397A patent/EP0255190A3/en not_active Withdrawn
- 1987-01-27 JP JP62015346A patent/JPS6341499A/ja active Pending
- 1987-07-27 IL IL83347A patent/IL83347A0/xx unknown
- 1987-07-28 NZ NZ221227A patent/NZ221227A/xx unknown
- 1987-07-29 FI FI873315A patent/FI873315A/fi not_active Application Discontinuation
- 1987-07-30 ZA ZA875633A patent/ZA875633B/xx unknown
- 1987-07-30 PT PT85461A patent/PT85461B/pt not_active IP Right Cessation
- 1987-07-31 DK DK400287A patent/DK400287A/da not_active Application Discontinuation
- 1987-07-31 NO NO873216A patent/NO873216L/no unknown
- 1987-07-31 KR KR1019870008386A patent/KR960005181B1/ko active IP Right Grant
- 1987-07-31 AU AU76358/87A patent/AU609725B2/en not_active Ceased
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DK400287D0 (da) | 1987-07-31 |
| PT85461A (en) | 1987-08-01 |
| AU609725B2 (en) | 1991-05-09 |
| EP0525828A3 (en) | 1993-02-24 |
| KR960005181B1 (ko) | 1996-04-22 |
| NO873216D0 (no) | 1987-07-31 |
| JPS6341499A (ja) | 1988-02-22 |
| DK400287A (da) | 1988-04-27 |
| NO873216L (no) | 1988-02-02 |
| KR880003004A (ko) | 1988-05-13 |
| EP0255190A3 (en) | 1990-08-29 |
| ZA875633B (en) | 1988-10-26 |
| EP0255190A2 (en) | 1988-02-03 |
| AU7635887A (en) | 1988-02-04 |
| FI873315A0 (fi) | 1987-07-29 |
| NZ221227A (en) | 1990-07-26 |
| IL83347A0 (en) | 1987-12-31 |
| EP0525828A2 (en) | 1993-02-03 |
| FI873315A (fi) | 1988-02-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Lasky et al. | Neutralization of the AIDS retrovirus by antibodies to a recombinant envelope glycoprotein | |
| EP0199301B2 (en) | Recombinant acquired immune deficiency syndrome (AIDS) viral envelope protein fragments and method of testing for AIDS | |
| AU640619B2 (en) | Hiv proteins and peptides useful in the diagnosis, prophylaxis or therapy of aids | |
| US5470720A (en) | HIV antibody assays comprising p24-gp41 chimeric antigens | |
| PT85461B (pt) | Processo para a preparacao de proteinas recombinantes de htlv-iii e suas utilizacoes | |
| JP2679973B2 (ja) | 免疫学的に反応性のウイルス蛋白質の発現 | |
| AU615940B2 (en) | Novel hiv proteins and peptides useful in the diagnosis, prophylaxis or therapy of aids | |
| US5098704A (en) | Hepatitis surface antigen particle vaccine | |
| PT100584A (pt) | Vacina contra o virus da imunodeficiencia humana a base de uma proteina recombinante do envolucro do referido virus | |
| JP2000189164A (ja) | ＨＩＶのＮｅｆ遺伝子を多量発現するプラスミドとその作製方法 | |
| HU196625B (en) | Process for producing hepatitis b virus vaccine | |
| KR0143977B1 (ko) | 에이치 아이 브이 항원 | |
| US5142025A (en) | Recombinant HTLV-III proteins and uses thereof | |
| JPH05505616A (ja) | 天然のコンホメーションを保持している精製ｇｐ１２０組成物 | |
| AU614535B2 (en) | Recombinant htlv-iii proteins and uses thereof | |
| Charbit et al. | Immunogenicity and antigenicity of conserved peptides from the envelope of HIV-1 expressed at the surface of recombinant bacteria | |
| US5262301A (en) | Recombinant HTLV-III proteins and uses thereof | |
| WO1998014585A1 (en) | Nucleocapsid gene of seoul virus r22, recombinant plasmid, transformed e. coli and diagnostic agent and vaccine for haemorrhagic fever with renal syndrome | |
| US5693497A (en) | Process for expressing the hepatitis B virus antigen using a Saccharomyces cerevisiae transformant | |
| JPS61233700A (ja) | 分子クロ−ンされたエイズ関連ポリペプチド | |
| US5853978A (en) | Molecularly cloned acquired immunodeficiency syndrome polypeptides and methods of use | |
| EP0343132B1 (en) | Methods and systems for producing HIV antigens | |
| US6534285B1 (en) | Molecularly cloned acquired immunodeficiency syndrome polypeptides and their methods of use | |
| AU613944B2 (en) | Recombinant htlv-iii proteins and uses thereof | |
| EP0235923A1 (en) | Sor gene product from human t-cell lymphotropic virus III |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM3A | Annulment or lapse |
Free format text: LAPSE DUE TO NON-PAYMENT OF FEES Effective date: 19940731 |