PT539343E - Derivados heterociclicos substituidos uteis como inibidores da agregacao de plaquetas - Google Patents

Derivados heterociclicos substituidos uteis como inibidores da agregacao de plaquetas Download PDF

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PT539343E
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Foe Siong Tjoeng
Jeffery Alan Zablocki
Joseph Gerace Rico
Thomas Edward Rogers
Philippe Roger Bovy
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Searle & Co
Monsanto Co
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Description

^HiíJIíUIE
V *ο 333^3
DESCRIÇÃO "DERIVADOS HETEROCÍCLICOS SUBSTITUÍDOS ÚTEIS COMO INIBIDORES DA AGREGAÇÃO DE PLAQUETAS"
Fundamentos do Invento
Campo do Invento
Este invento relaciona-se com derivados heterocíclicos substituídos que inibem a agregação de plaquetas. Técnica Afim O fibrinogénio é uma glicoproteína presente como um componente normal do plasma sanguíneo. Participa na agregação de plaquetas e formação de fibrina no mecanismo de coagulação do sangue.
As plaquetas são elementos celulares que se encontram no sangue total e que também participam na coagulação do sangue. A ligação de fibrinogénio a plaquetas é importante para a função plaquetária normal no mecanismo de coagulação do sangue. Quando um vaso sanguíneo sofre uma lesão, as plaquetas ligando-se ao fibrinogénio irão iniciar agregação e formar um trombo. A interacção do fibrinogénio com plaquetas ocorre através de um complexo de glicoproteína membranar, conhecido como gpIIb/IIIa; isto constitui um aspecto importante da função plaquetária. Inibidores desta interacção são úteis na modulção ou prevenção da formação de trombos plaquetários.
-2-
É também sabido que uma outra glicoproteína grande denominada fibronectina, que é uma proteína da matriz extracelular major, interactua com fíbrinogénio e fibrina, e com outras moléculas estruturais tais como actina, colagénio e proteoglicanos. Verificou-se que vários fragmentos polipeptídicos relativamente grandes no campo da ligação celular de fibronectina possuem actividade de ligação a célula. (Ver Patentes dos E.U.A. Nos. 4.517.685, 4.589.881, e 4.661.111). Verificou-se que certos fragmentos peptídicos relativamente curtos a partir da mesma molécula promovem ligação de células a um substrato quando imobilizados sobre o substrato ou servem para inibir ligação quando numa forma solubilizada ou suspensa. (Ver Patentes dos E.U.A. Nos. 4.578.079 e 4.614.517).
Na Patente dos E.U.A. No. 4.683.291, inibição da função das plaquetas é apresentada com peptídeos sintéticos tendo como finalidade serem antagonistas com elevada afinidade de ligação de fibrinogénio a plaquetas. A Patente dos E.U.A. No. 4.857.508 apresenta tetrapeptídeos tendo utilidade como inibidroes da agregação de plaquetas.
Outros peptídeos sintéticos e sua utilização como inibidores de ligação de fibrinogénio a plaquetas são apresentados por Koczewiak et al., Biochem. 23, 1767-1774 (1984); Plow et al., Proc. Natl. Acad. Sei.. 82, 8057-8061 (1985); Ruggeri et al., Ibid. 83, 5708-5712 (1986); Ginsberg et al., J. Biol. Chem. 260 (7), 3931-3936 (1985); Haverstick et al., Blood 66 (4), 946-952 (1985); e Ruoslahti and Pierschbacher, Science 238, 491-497 (1987). Ainda outros peptídeos inibidores são apresentados em Pedidos de Patentes EP 275.748 e 298.820. A Patente dos E.U.A. No. 4.879.313 apresenta compostos úteis -3- ® li ^ss*0®® como inibidores da agregação de plaquetas da fórmula:
HN HN- (CH2)x-CO-Asp-NH-CHZ- (CH2)y_Ar h2n em que x = 6 a 10; Y = 0 a 4, Z = H, COOH, CONH2 ou Cl-6 alquilo,
Ar = fenilo, bifenilo ou naftilo, cada um deles substituído com 1 a 3 grupos metoxi, ou um grupo fenilo, bifenilo, naftilo, piridinilo ou tienilo não substituído, e
Asp = resíduo de ácido aspártico. O Pedido de Patente Europeia No. 372.486 apresenta derivados de amino ácido N-acil beta da fórmula:
R1-CONH- (CH2)0.i-í-5!j“(CH2)o.i -CONH -CHR3 -CH2-C02H R2 e seus sais. Os referidos compostos são úteis para inibição da agregação de plaquetas no tratamento de trombose, acidente vascular cerebral, enfarto do miocárdio, inflamação e arteriosclerose, e para inibição de metástases. O Pedido de Patente Europeia No. 381.033 apresenta derivados de ácido alcanoico substituído com guanidinoarilo úteis para o tratamento de trombose, apoplexia, enfarto do miocárdio, inflamação, arteriosclerose e tumores. t
O Pedido de Patente Europeia No. 445.796 apresenta derivados de r
Acido Acético úteis como um ligando para proteínas adesivas sobre plaquetas. Como tal, estes compostos são úteis para modular e/ou inibir a agregação de plaquetas.
Sumário do Invento
De acordo com o presente invento são proporcionados derivados heterocíclicos substituídos os quais modulam e/ou inibem a agregação de plaquetas. Estes inibidores ou um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitável podem ser representados pela fórmula química que se segue.
em que R1 é seleccionado de entre o grupo consistindo em hidrogénio, radicais alquilo com 1 a 10 átomos de carbono, radicais alquenilo com 2 a 10 átomos de carbono, radicais alquinilo com 2 a 10 átomos de carbono, radicais de hidrocarboneto alicíclico com 3 a 10 átomos de carbono, radicais de hidrocarboneto aromático com 4 a 16 átomos de carbono, em que todos os referidos radicais são substituídos facultativamente com hidroxilo, alcoxi tendo 1 a 10 átomos de carbono, alquilo com 1 a 10 átomos de carbono, halogénio, nitro, carboxilo, sulfonilo, trifluorometilo, amino, alcanoiloxi com 1 a 4 átomos de carbono, benzoiloxi, fenilo e naftilo que são substituídos facultativamente com halogénio, nitro, alcoxi tendo 1 a 10 átomos de carbono e alquilo com 1 a 10 átomos de carbono; >
R2 é seleccionado de entre radical piridinilo, radical pirimidinilo, radical benzodioxolilo, radical furanilo ou radical tiofenilo, que são substituídos facultativamente com hidroxi, alcoxi tendo 1 a 10 átomos de carbono, alquilo com 1 a 10 átomos de carbono, halogénio, nitro, carboxilo, sulfonilo, trifluorometilo, amino, alcanoiloxi com 1 a 4 átomos de carbono, benzoiloxi, fenilo e naftilo que são substituídos facultativamente com halogénio, nitro, alcoxi tendo 1 a 10 átomos de carbono e alquilo com 1 a 10 átomos de carbono; W é seleccionado de entre o grupo consistindo em hidrogénio, radicais alquilo com 1 a 10 átomos de carbono, radicais alquenilo com 2 a 10 átomos de carbono, radicais alquinilo com 2 a 10 átomos de carbono, radicais hidrocarboneto alicíclico com 3 a 10 átomos de carbono e radicais hidrocarboneto aromáticos com 4 a 16 átomos de carbono, em que todos os referidos radicais são substituídos facultativamente com hidroxilo, alcoxi tendo 1 a 10 átomos de carbono e alquilo com 1 a 10 átomos de carbono; Z, Z', Z" são, de um modo independente, seleccionados de entre o grupo consistindo em hidrogénio, radicais alquilo com 1 a 10 átomos de carbono, halogénio, alcoxi tendo 1 a 10 átomos de carbono, ciano, sulfonilo, carboxilo, e radicais hidroxilo; e q é um número inteiro de 0 a 6; q é de preferência 0 a 4; com maior preferência 0 a 2; com a maior preferência 0.
Constitui ainda outro objectivo do invento proporcionar uma composição farmacêutica compreendendo compostos da fórmula I úteis para a inibição ou modulação da agregação de plaquetas, etc. Particularmente para a inibição ou modulação de agregação de plaquetas por administração de uma quantidade variando entre 0,5 mg/kg e 10 mg/kg, de preferência 3 mg/kg a um animal necessitado dessa inibição ou modulação.
Constitui ainda um outro objectivo do invento proporcionar uma composição farmacêutica compreendendo pelo menos um veículo farmaceuticamente aceitável não tóxico e pelo menos um composto da fórmula da Reivindicação 1.
Muitos outros objectivos e finalidades do invento tomar-se-ão evidentes a partir da descrição detalhada que se segue do invento e exemplos.
Descrição Detalhada do Invento
Uma apresentação preferida do presente invento é um composto da fórmula, ou seu sal farmaceuticamente aceitável, ou seu éster; em que R1 é seleccionado de entre hidrogénio, radicais alquilo com 1 a 6 átomos de carbono, radicais alquenilo com 2 a 6 átomos de carbono, radicais alquinilo com 2 a 8 átomos de carbono, radicais hidrocarboneto alicíclicos com 3 a 6 átomos de carbono, radicais hidrocarbonero aromático, em que todos os referidos radicais são substituídos facultativamente com hidroxilo, alcoxi inferior, alquilo inferior, halogénio, nitro, carboxilo, sulfonilo, e trifluorometilo; W é seleccionado de entre hidrogénio, radicais alquilo com 1 a 6 átomos de carbono, radicais alquinilo com 2 a 6 átomos de carbono, radicais hidrocarboneto alicíclico com 3 a 6 átomos de carbono, e radicais hidrocarboneto aromático com 6 a 12 átomos de carbono, em que todos os referidos radicais são substituídos facultativamente com hidroxilo, alcoxi tendo 1 a 10 átomos de carbono e alquilo com 1 a 10 átomos de carbono; R1 é de preferência hidrogénio. R2 é de preferência piridinilo e pirimidinilo e com maior preferência piridinilo. W é de preferência seleccionado de entre hidrogénio e radicais alquilo com 1 a 10 átomos de carbono; com a maior preferência hidrogénio e Ζ, Ζ', Ζ" são de preferência hidrogénio.
Na Fórmula, R1 pode adicionalmente formar uma estrutura cíclica com o anel fenilo adjacente. E contemplado que os compostos que se seguem sejam exemplos exemplificativos: D,L-β- [ [4- [ [4-(aminoiminometil)fenil] amino] -1,4-dioxobutil] ami-no]-3-piridinilpropanoato de metilo; D,L-yó-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-l,4-dioxobutil]ami-no]-3-piridinilpropanoato de isopropilo; D,L-/>- [ [4- [ [4-(aminoiminometil)fenil] amino] -1,4-dioxobutil] ami-no]-3-piridinilpropanoato de ciclopropilo; D,L-/5- [ [4- [ [4-(aminoiminometil)fenil] amino] -1,4-dioxobutil] ami-no]-3-piridinilpropanoato de hexilo; ácido D,L-/6-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]N-metil-amino]-l ,4-dioxobutil]amino]-3-piridinilpropiónico; ácido D,L-y5-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]N-fenil-amino]-1,4-di-oxobutil]amino]-3-piridinilpropiónico; ácido D,L-/5-[ [4-[[3-metil-4-(aminoiminometil)fenil]amino]-1,4-di-oxobutil]amino]-3-piridinilpropiónico; ácido D,L-/5-[[4-[[2-fluoro-4-(aminoiminometil)fenil]amino]-1,4-dioxobutil]amino]-3-piridinilpropiónico; ácido D,L-/5-[[4-[[2,6-difluoro-4-(aminoiminometil)fenil]amino]-l,4-dioxobutil]amino]-2-piridinilpropiónico; ácido D,L-/3- [ [4- [ [4-(aminoiminometil)naftil] amino] -1,4-dioxobutil] amino] -3 -piridinilpropiónico; -8- Β <&&&&* ácido D,L-/5-[ [4- [ [4-(aminoiminometil)fenil] amino] -1,4-dioxo- 2,2,353-tetrafluorobutil]amino]-4-piridinilpropiónico; D,L-/5-[[4-[[4-(aminoiminornetil)fenil]N-rnetilamino]-l,4-dioxobu-til]amino]-3-piridinilpropanoato de etilo; D,L-y5-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]N-fenilamino]-1,4-dioxobu-til]amino]-2-piridinilpropanoato de etilo; D,L-y6-[[4-[[3-metil-4-(aminoiminometil)fenil]amino]-l,4-dioxobu-til]amino]-3-piridinilpropanoato de etilo; D,L-/i-[[4-[[2-fluoro-4-(aminoiminometil)fenil]amino]-l,4-dioxo-butil]amino]-3-piridinilpropanoato de etilo; D,L-β- [ [4- [ [2,6-difluoro-4-(aminoiminometil)fenil] amino] -1,4-di-oxobutil]amino]-2-piridinilpropanoato de etilo; D,L-/i- [ [4- [ [4-(aminoiminometil)naftil] amino] -1,4-dioxobutil]ami-no]-3-piridinilpropanoato de etilo; DJL-/5- [ [4- [ [4-(ami noiminometil) fenil] amino] -1,4-dioxobutil] ami- no]2-( 1,3)-pirimidinilpropanoato de metilo; D,L-β- [ [4- [ [4-(aminoiminometil)fenil] amino] -1,4-dioxobutil] ami-no]-2-(l,3)-pirimidinilpropanoato de isopropilo; D,L-/>[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-l,4-dioxobutil]ami-no]-2-(l,3)-pirimidinilpropanoato de ciclopropilo; D,L-/5-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-l,4-dioxobutil]ami-no]-2-(l,3)-pirimidinilpropanoato de hexilo; ácido D,L-/3-[[4-[[4-(ammoiminometil)fenil]N-metil-amino]-l,4-dioxobutil]amino]-2-(l,3)-pirimidinilpropiónico; ácido D,L-/5-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]N-fenil-amino]-1,4-di-oxobutil]amino]-2-(l,3)-pirimidinilpropiónico; ácido D,L-/5- [[4-[[3-metil-4-(aminoiminometil)fenil]amino]-1,4-di-oxobutil]amino]-2-piridazinilpropiónico; ácido D,L-/5-[[4-[[2-fluoro-4-(aminoiminometil)fenil]amino]-l ,4-dioxobutil]amino]-2-piridazinilpropiónico; ácido D,L-β- [ [4- [ [2,6-di fluoro-4-(aminoiminometil)fenil] amino] - l,4-dioxobutil]amino]-2-tiazolilpropiónico; ácido D ,L-/5- [ [4- [ [4-(aminoiminometil)naftil] amino] -1,4-dioxobu-til]amino]-2-tiazolilpropiónico; ácido D,L-β- [ [4- [ [4-(aminoiminometil)fenil] amino]-1,4-dioxobu-til] amino] -2-tiazolilpropiónico; D,L-/5-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]N-metilamino]-l,4-dioxobu-til]amino]-2-tiazolilpropanoato de etilo; D,L-/5- [ [4- [ [4-(aminoiminometil)fenil]N-fenilamino] -1,4-dioxobu-til]amino]-2-tiazolilpropanoato de etilo; D,L-/5- [ [4- [ [3 -metil-4-(aminoiminometil)fenil] amino] -1,4-dioxobu-til]amino]-2-tiazolilpropanoato de etilo; D,L-/i- [ [4- [ [2-fluoro-4-(aminoiminometil)fenil] amino] -1,4-dioxo-butil]amino]-2-tiazolilpropanoato de etilo; D ,L-β- [ [4- [ [2,6-di fluoro-4-(aminoiminometil)fenil] amino] -1,4-di-oxobutil] amino]-2-(1,3 )-pirimidinilpropanoato de etilo; D,L-/i-[ [4- [ [4-(aminoiminometil)naftil] amino] -1,4-dioxobutil] ami-no]-2-(1,3 )-pirimidinilpropanoato de etilo; D,L-//3-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-l,4-dioxobutil]ami-no]-3-imidazolilpropanoato de metilo; D,L-y6-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-l,4-dioxobutil]ami-no]-3-imidazolilpropanoato de isopropilo; D,L-/5- [ [4- [ [4-(aminoiminometil)fenil] amino] -1,4-dioxobutil] ami-no]-3-imidazolilpropanoato de ciclopropilo; D,L-/5-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-l,4-dioxobutil]ami-no]-3-imidazolilpropanoato de hexilo; ácido D,L-/5- [ [4- [ [4-(aminoiminometil) fenil] -N-metil-amino]-1,4-dioxobutil] amino] -3 -imidazolilpropiónico; ácido D,L-/5-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]-N-fenil-amino]-l,4-dioxobutil] amino] -3 -imidazolilpropiónico; ácido D[ [4- [ [3 -metil-4-(aminoiminometil)fenil] amino] -1,4-di-oxobutil]amino]-3-pirazolilpropiónico; ácido D,L-/>- [ [4- [ [2-fluoro-4-(aminoiminometil) fenil] amino]-1,4- dioxobutil]amino]-2-imidazolilpropiónico; ácido D,L-/j- [ [4-[ [2,6-difluoro-4-(aminoiminometil)fenil] amino] - l,4-dioxobutil]amino]-3-pirazolilpropiónico; ácido D,L-/5-[[4-[[4-(aminoiminometil)naftil]amino]-1,4-dioxobu-til]amino]-2-imidazolilpropiónico; D,L-/5- [ [4- [ [4-(aminoiminometil)fenil] amino] -1,4-dioxobutil] ami-no]-2-imidazolilpropanoato de etilo; D,L-/5-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]N-fenilamino]-l,4-dioxobu-til]amino]-2-imidazolilpropanoato de etilo; D,L-y6- [ [4- [ [3 -metil-4-(aminoiminometil) fenil] amino] -1,4-dioxobu-til]amino]-3-triazolilpropanoato de etilo; D,L-y6-[[4-[[2-fluoro-4-(aminoiminometil)fenil]amino]-1,4-dioxo-butil]amino]-2-imidazolilpropanoato de etilo; D,L-/5- [ [4- [ [2 >6-difluoro-4-(aminoiminometil) fenil] amino] -1,4-di-oxobutil]amino]-3-triazolilpropanoato de etilo; D,L-y5- [ [4- [ [4-(aminoiminometil)naftil]amino] -1,4-dioxobutil]ami-no]-2-imidazolilpropanoato de etilo; D,L-y6-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]N-metilamino]-1,4-dioxobu-til]amino]-2-furanilpropanoato de etilo; D,L-/5-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-l,4-dioxobutil]ami-no]-2-oxazolilpropanoato de etilo;
D,L-/i-[[4-[[3-metil-4-(aminoiminometil)fenil]amino]-1,4-dioxo-butil]amino]-3-triazolilpropanoato de etilo;
Tal como é aqui utilizado, o termo "alquilo" isoladamente ou em combinação, significa um radical alquilo acíclico contendo de 1 a 10, de preferência de 1 a 8 átomos de carbono e com maior preferência de 1 a 6 átomos de carbono. Exemplos desses radicais incluem metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo, tert-butilo, pentilo, iso-amilo, hexilo e octilo, etc. O termo "alquenilo" refere-se a um radical hidrocarboneto acíclico insaturado na medida em que contenha pelo menos uma dupla ligação. Esses radicais contêm de 2 a 10 átomos de carbono, de preferência de 2 a 8 átomos de carbono e com maior preferência 2 a 6 átomos de carbono. Exemplos de radicais alquenilo apropriados incluem propilenilo, buten-l-ilo, isobutenilo, penten-l-ilo, 2-2-metilbuten-l-ilo, 3-metilbuten-l-ilo, hexen-l-ilo, hepten-l-ilo, e octen-l-ilo. O termo "alquinilo" refere-se a radicais hidrocarboneto acíclicos insaturados na medida em que contenham uma ou mais triplas ligações, contendo esses radicais 2 a 10 átomos de carbono, de preferência tendo 2 a 8 átomos de carbono e com a maior preferência tendo de 2 á 8 átomos de carbono e com maior preferência tendo 2 a 6 átomos de carbono. Exemplos de radicais alquinilo apropriados incluem radicais etinilo, propinilo, butin-l-ilo, butin-2-ilo, pentin-1-ilo, pentin-2-ilo, 3-metilbutin-l-ilo, hexin-l-ilo, hexin-2-ilo, hexin-3-ilo e 3,3-dimetilbutin-l-ilo. A expressão "hidrocarboneto alicíclico" significa um radical alifático num anel com 3 a 10 átomos de carbono, e de preferência com 3 a cerca de 6 átomos de carbono. Exemplos de radicais alicíclicos apropriados incluem ciclopropilo, ciclopropenilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, 2-ciclohexen-1 -ilenilo e ciclohexenilo. A expressão "radical hidrocarboneto aromático" significa 4 a 16 átomos de carbono, de preferência 6 a 12 átomos de carbono, com maior preferência 6 a 10 átomos de carbono. Exemplos de radicais hidrocarbonetos aromáticos apropriados incluem fenilo e naftilo. O termo "aciloxi" sifnifica alcanoiloxi de 1 a 4 átomos de carbono. A expressão "alcoxi inferior", isoladamente ou em combinação, significa um radical éter alquilico em que o termo alquilo é tal como foi acima definido e com a maior preferência contendo 1 a 4 átomos de carbono. Exemplos de radicais éter alquílicos incluem metoxi, etoxi, n-propoxi, isopropoxi, n-butoxi, iso-butoxi, sec-butoxi e tert-butoxi. O termo halogénio significa fluor, cloro, bromo ou iodo. A expressão "sal farmaceuticamente aceitável" refere-se a um sal preparado fazendo contactar um composto da fórmula (I), (II) ou (III) com um ácido cujo anião é geralmente considerado apropriado para consumo humano. Exemplos de sais farmacologicamente aceitáveis incluem os sais hidrocloreto, hidrobrometo, hidroiodeto, sulfato, fosfato, acetato, propionato, lactato, maleato, oxalato, malato, succinato, tartrato e citrato. Todos estes sais podem ser preparados por meios convencionais fazendo reagir, por exemplo, o ácido apropriado com o correspondente composto da fórmula I.
Sais de adição de base farmaceuticamente aceitáveis de compostos da Fórmula I incluem sais metálicos formados por alumínio, cálcio, lítio, - 13- magnésio, potássio, sódio e zinco ou sais orgânicos formados a partir de N,N'-dibenziletilenodiamina, cloroprocaina, colina, dietanolamina, etilenodiamina, meglumina (N-metilglucamina) e procaina. A dose diária total administrada a um hospedeiro em doses únicas ou divididas pode apresentar-se em quantidades, variando, por exemplo, entre 0,001 e 100 mg/kg em peso corporal e mais usualmente entre 0,01 e 10 mg. Composições de unidades de dosagem podem conter quantidades submultiplas desses valores para formar a dose diária. A quantidade de ingrediente activo que pode ser combinada com os materiais veículo para produzir uma forma de dosagem única irá variar dependendo do hospedeiro a ser tratado e do modo particular de administração.
Será compreendido que o nível de dosagem específica para qualquer doente em particular irá depender de uma série de factores incluindo a actividade do composto específico utilizado, a idade, o peso corporal, o estado geral de saúde, o sexo, dietas, tempo de administração, via de administração, taxa de excreção, combinação de drogas, e a gravidade da doença particular a ser submetida a terapêutica.
Os compostos do presente invento podem ser administrados por via oral, parentérica, por pulverização para inalação, por via rectal, ou topicamente em formulações de unidade de dosagem contendo veículos, adjuvantes e veículos farmaceuticamente aceitáveis não tóxicos como seja desejado.
Preparações injectáveis, por exemplo, suspensões aquosas ou oleaginosas injectáveis, estéreis, podem ser formuladas de acordo com a técnica conhecida usando agentes de dispersão ou de humidificação e agentes de suspensão apropriados. A preparação injectável estéril pode também ser uma solução ou suspensão injectável estéril num diluente ou solvente parentético não tóxico, por exemplo, sob a forma de uma solução em 1,3-butanodiol. De entre os veículos e solventes aceitáveis que podem ser utilizados encontram-se água, solução de Ringer, e solução isotónica de cloreto de sódio. Além disso, óleos fixados, estéreis, são utilizados de um modo convencional como um meio solvente ou de suspensão. Para esta finalidade qualquer óleo fixado poderá ser utilizado incluindo mono- ou di-glicerideos sintéticos. Além disso, ácidos gordos tais como ácido oleico podem ser utilizados na preparação de produto injectável.
Supositórios para administração por via rectal da droga podem ser preparados misturando a droga com um excipiente não irritativo apropriado tal como manteiga de cacau e polietileno glicois que são sólidos a uma temperatura ordinária mas líquidos à temperatura rectal e que irão fundir-se no recto para desse modo libertar a droga.
Formas de dosagem sólidas para administração por via oral podem incluir cápsulas, comprimidos, pílulas, pós, e grânulos. Nessas formas de dosagem sólidas, o composto activo pode ser misturado com pelo menos um diluente inerte tal como sucrose, lactose ou amido. Essas formas de dosagem podem também compreender, tal como na prática normal, substancias adicionais diferentes de diluentes inertes, por exemplo, agentes de lubrificação tais como estearato de magnésio. No caso de cápsulas, comprimidos, e pílulas, as formas de dosagem também compreendem agentes tampão. Comprimidos e pílulas podem adicionalmente ser preparados com revestimentos entéricos.
Formas de dosagem líquidas para administração oral incluem emulsões, soluções, suspensões, xaropes, e elixires farmaceuticamente aceitáveis contendo diluentes inertes habitualmente usados nesta técnica, tais como água.
Essas composições podem também compreender adjuvantes, tais como agentes de humidificação, agentes de emulsificação e de suspensão, e agentes edulcorantes, de aromatização e perfumes.
Embora os compostos do invento possam ser administrados como o único agente farmacêutico activo, eles poderão ser usados em combinação com um ou mais agentes farmacêuticos activos. Quando administrados como uma combinação, os agentes terapêuticos podem ser formulados sob a forma de composições separadas que são administradas ao mesmo tempo ou em tempos diferentes, ou então os agentes terapêuticos poderão ser administrados sob a forma de uma composição simples.
Nas estruturas e fórmulas aqui indicadas, a ligação feita passar através de uma ligação de um anel aromático pode ser feita para qualquer átomo disponível no anel aromático.
Os compostos da fórmula I podem existir em várias formas isoméricas e pretende-se que todas essas formas isoméricas sejam incluídas. Formas tautoméricas são também incluídas no invento. Pretende-se também que sais farmaceuticamente aceitáveis desses isómeros e tautómeros sejam incluídos. E também contemplado que Beta amino ácidos (H2N-CHR-CH2-C02H) usados neste invento possam ser substituídos por Homo Beta amino ácidos (H2N-CH2-CHR-C02H).
Os compostos acima indicados podem ser preparados por métodos sintéticos padrão combinados com métodos análogos a síntese de peptídeo em fase de solução [ver: The peptides: Analysis, Synthesis, Biology (E. Gross and J. Meienhofer, eds.), (Vol. 1-5, Academic Press, New York)], cuja apresentação é aqui incorporada como referência.
Três sequências sintéticas gerais são indicadas nos Esquemas 1-3.
No Esquema I. A aminobenzamidina 1 (isto é, Z é hidrogénio) é acoplada a um diácido alcanoico, alquenoico (ambos substituídos ou não) ou alquinoico. Uma forma activada do diácido é, preferencialmente, usada. Estas formas activadas incluem anidridos, anidrido interno, cloreto ácido ou uma das várias formas activadas tal como é descrito em Principies of Peptide Svnthesis. Bodansky, 1984, Springer-Verlag, cuja apresentação é aqui incorporada como referência. Um processo altamente preferido envolve condensação de um anidrido (por exemplo, anidrido succínico 2) com um sal de produto aromático substituído I. A reacção é conduzida da melhor forma num solvente polar tal como cloreto de metileno, acetonitrilo, dioxano, dimetilformamida, dimetilsulfóxido ou uma mistura desses solventes na presença de um agente de ligação a ácido tal como carbonato de sódio, potássio ou césio, trietilamina, piridina, hidreto de sódio, dimetilaminopiridina, diazabicicloundeceno, ou uma mistura desses agentes, a temperaturas variando entre 0o C e 120° C. Os compostos finais são obtidos acoplando o derivado amidina 3 com um β-aminoácido protegido apropriadamente. As ligações amida são formadas usando reagentes de acoplamento padrão, por exemplo, diciclohexilcarbodiimida (DCC), carbonildiimidazole (CDI), carbonato de disuccinimidilo (DSC), hexafluorofosfato de benzotriazole-l-il-oxi-tris-(dimetilamino)-fosfónio (BOP) ou cloroformato de isobutilo (método de anidrido misto). Quando o /5-amino ácido usado no acoplamento é protegido sob a forma de um éster da função ácido carboxílico (4, W = alquilo, arilo,...), os ácidos livres 5 são obtidos por um método de desprotecção apropriado tal como é descrito por T. H. Greene em "Protective Group in Organic Svnthesis". Wiley-Interscience, 1980, cuja apresentação é aqui incorpoarada como referência. - 17-
ESQUEMA I - 17-
a.
5
a. Anidrido succínico (2), piridina, DMAP.b. i-ButOCOCI, c‘ Crivado P
Alanina d. NaOH ou LiOH.
Em que WeR2 têm os valores descritos na fórmula I
De um modo alternativo, um aminobenzonitrilo 6 pode ser usado para condensação com o diácido ou o derivado diácido desejado. Neste caso, o nitrilo pode ser convertido na amidina inicialmente ou num estádio mais tardio. Quando o aminobenzonitrilo é usado na reacção de condensação (Esquema II), o grupo ciano do produto intermediário 7 resultante é convertido na amidina 8 por - 18- meio do tioimidato com um rendimento quase quantitativo. O tioimidato é formado tratando primeiro o composto ciano com sulfeto de hidrogénio (H2S) seguindo-se alquilação com iodeto de metilo. Em seguida, tratamento do tioimidadto com acetato de amónio proporcionou a amidina sob a forma do sal (Hl). De um modo alternativo, o nitrilo 7 pode ser convertido na amidina 8 pela utilização de bis(trimetilsilil)amida de lítio num solvente inerte tal como éter dietílico (R. T. Boere et al, J. Organomet. Chem.. 331, 161-67, 1987), cuja apresentação é aqui incorporada como referência. Os compostos desejados são obtidos acoplando o derivado amidina 8 com um /5-aminoácido funcionalizado. As ligações amida são formadas usando reagentes de acoplamento padrão tal como foi acima descrito para o Esquema I.
ESQUEMA II
2
H O c a
9 d
-19-
a. Diácido activado. b. H2S, piridina; Mel, acetona; NH Hexametildissilazano em éter dietílico. c. Anidrido d. Base ou ácido.
WeR2 têm os valores descritos na fórmula geral A representa -CH2CH2- O Esquema III ilustra a obtenção de derivados usando os amino nitrilos como reagentes. O grupo ciano é mantido intacto como um precursor para a função amidina através dois passos de formação de ligações amida. O primeiro intermediário 10 é directamente utilizado numa reacção com o /5-amino ácido desejado. O produto intermediário Π) é então convertido na benzamidina. Um método de escolha para a produção de amidina é realizado por meio do processo tioimidato tal como é descrito no Esquema II. É desejável, no Esquema III, preparar o produto intermediário ϋ sob a forma de um éster. O éster mais desejável é o éster t-butílico o qual pode ser desprotegido dando origem ao ácido por contacto com um meio acídico forte sob a forma de HBr/AcOH ou ácido trifluoroacético/diclorometano.
-20- NC a. a. fi
ESOUEMAIII
11
a. Anidrido succínico, piridina, DM AP. b. Anidrido misto, NMM. c. Derivados b-alanina d. H2S, piridina; Mel, acetona; NH4OAc ou Hexametildissilazano em éter dietílico.
Os substituintes Z, (onde Z é hidrogénio ou halogénio, ou um radical alquilo ou radical alcoxi) podem ser introduzidos no estádio aminobenzonitrilo. O grupo fenilo pode ser halogenado usando bromo, iodo ou cloro. O grupo alquilo pode ser introduzido por permuta de lítio halogénio a baixa temperatura seguida por arrefecimento brusco com o aldeído apropriado [ver: W. E. Parham, C. K. Bradsher Acct. Chem. Res. 300 (1982)], cuja apresentação é aqui incorporada como referência. O álcool resultante pode ser convertido em Z é alquilo, por hidrogenólise [Reductions in Organic Chemistry (M. Hudicky, ed.), John Wiley & Sons, New York, 1984]., cuja apresentação é aqui incorporada como referência. Quando Z é hidroxi ou alcoxi, esses substituintes podem ser introduzidos por uma permuta lítio halogénio a baixa temperatura seguida por arrefecimento rápido com peróxido de bis(trimetilsilil) electrofílico [(TMSO)2] M. Taddei and A. Ricci Synthesis 633-635 (1986)], cuja apresentação é aqui incorporada como referência, que proporciona o éter silílico. O éter silílico pode ser convertido no derivado hidroxi por tratamento com ácido clorídrico [M. Taddei and A. Ricci ibid]. O hidroxi na presença de uma base fraca (K2C03) e um haleto de alquilo apropriado [R8-Hal, Allen C.F. and Gates J. W., Org. Synth. Coll. Vol. 2 3 140 (1955), cuja apresentação é aqui incorporada como referência.] que irá também formar o éster. O éster pode ser clivado selectivamente na presença do éter com um equivalente de hidróxido de sódio.
Para derivados em que R1 é diferente de hidrogénio, esses derivados poderão ser obtidos usando uma aminobenzamidina substituída apropriadamente. Por exemplo, a 4-metilaminobenzamidina pode ser feita reagir com anidrido succínico de um modo semelhante ao produto heterocíclico substituído. A purificação dos compostos finais é feita por cromatografia líquida de elevada pressão de fase reversa ÍHigh Performance Liquid Chromatographv Protein and Peptide Chemistry. F. Lottspeich, A. Henscher, K.P. Hupe, eds.) Walter DeGruyter, New York, 1981, cuja apresentação é aqui incorporada como referência) ou cristalização.
As reacções químicas acima descritas são geralmente apresentadas em termos da sua mais ampla aplicação para a preparação dos compostos deste invento. Ocasionalmente, as reacções podem não ser aplicáveis tal como foi descrito para cada composto incluido no âmbito apresentado. Os compostos em que tal ocorra serão rapidamente reconhecidos pelos especialistas nesta técnica. Em todos esses casos, ou as reacções poderão ser realizadas com sucesso por meio de modificações convencionais conhecidas dos especialistas nesta técnica, por exemplo, por protecção apropriada de grupos interferentes, mudando para reagentes convencionais alternativos, por modificação de rotina de condições da reacção, etc., ou outras reacções aqui apresentadas ou de qualquer outro modo convencionais, serão aplicáveis para a preparação dos compostos correspondentes deste invento. Em todos os métodos preparativos, todos os materiais de partida são conhecidos ou podem ser preparados rapidamente a partir de materiais de partida conhecidos.
As apresentações específicas preferidas que se seguem deverão ser elaboradas meramente como ilustrativas.
Os exemplos que se seguem são proporcionados para ilustrar o presente invento. Os especialistas nesta técnica irão compreender rapidamente que variações conhecidas das condições e processos dos métodos preparativos que se seguem poderão ser usados para a preparação desses compostos. Todas as temperaturas expressas são em graus centígrados. Na descrição sintética anterior e exemplos que se seguem, as abreviaturas têm os significados que se seguem: -23 - CHC13 = clorofórmio DMF - dimetilformamida DMSO - dimetilsulfóxido g - grama MeOH metanol min minuto h = hora mol = mole mmol = milimole PM = peso molecular TLC = cromatografia de placa delgada NMM = N-metilmorfolina RPHPLC = Cromatografia Líquida Pressão Elevada de Fase Reversa
Exemplo 1 β- [ [4- [ [4-( Aminoiminometil)fenil] amino] -1,4-dioxobutil] amino] -3 -piridinopro-panoato de etilo
Passo 1 Preparação de ácido 4-[[4-(aminoiminometil)fenil]-amino]-4-oxobuta-nóico
Aminobenzamidina di-HCl (25 g, 120 mmol), que se encontra comercialmente disponível particularmente a partir de Aldrich, foi adicionada a DMF seco (100 ml). A esta solução foram adicionados piridina seca (100 ml) e anidrido succínico (12 g, 120 mmol) seguindo-se dimetilaminopiridina (DMAP, 1,5 g, 12,2 mmol). O produto precipitou após aquecimento durante 1/2 h a 100° C. O produto foi filtrado, lavado com água, acetonitrilo, e éter. O sólido branco foi suspenso em dioxano, HC1 4N em dioxano (100 ml) foi adicionado e a suspensão foi agitada durante 1 hora, filtrada e seca num secador para dar origem a 28 g, 88% de ácido 4-[84-(aminoiminometil)fenil]amino]-4-oxobutanóico sob a forma de um sólido branco amarelado que se decompõe entre 270 e 290° C.
Passo 2 Preparação de y6-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-1,4-dioxobutil]-amino]-3-piridinopropanoato de etilo
Uma porção alíquota de hidrocloreto de ácido 4-[[4-(aminoimino-metil)fenil]-amino]-4-oxobutanóico preparado no Exemplo 1, Passo 1 (2,35 g) foi adicionada a DMF seca (100 ml), seguindo-se N-metilmorfolina (1,1 ml) e cloroformato de isobutilo (1,30 ml) a 0o C sob atmosfera de azoto. A mistura foi agitada durante 5 minutos e 3,56 g de dihidrocloreto de éster etílico de ácido β-amino-3-piridinopropiónico (75% de pureza) foram adicionados seguindo-se 2,1 ml de N-metilmorfolina. Após 1 h, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o produto foi purificado por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para dar origem a 4,4 g de sólido branco: Ή RMN (d6-DMSO) ò 1,12 (t, 3H, J = 7 Hz), 2,45 (m, 2H), 2,6 (m, 2H), 2,85 (m, 2H), 4,05 (q, 2H, J = 7 Hz), 5,28 (m, 1H), 7,55 (m, 1H), 7,8 (s, 4H), 8,0 (m, 1H), 8,6 (m, 3H), 8,85 (bs, 2H), 9,18 (bs, 2H), 10,4 (s, 1H); MS(ES) m/e 412.1 (MH+), 277, 235,218.
Análise Elementar Requerida para C21H25N5O4.2F3C2O2H.H2O: C 45,67 H 4,45 N 10,65
Encontrados: C 45,83 H4,31 N 10,63
Exemplo 2 Ácido D,L-yõ-[[4-[[4-aminoiminometil)fenil]amino]-1,4-dioxobutil]amino]-3-pi-ridinopropanóico
Uma porção de [[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-l,4-dioxo-butil]amino]-3-piridinopropanoato (550 mg de sal trifluoroacetato) preparado tal como no Exemplo 1 foi dissolvida em 50 ml de água e 300 ul de hidróxido de sódio a 50%. A mistura da reacção foi deixada a agitar a 25° C durante 2 h, foi concentrada in vacuo, e foi purificada por RPHPLC (acetonitrilo/água 0,05% ácido trifluoroacético) para dar origem a 500 mg de um pó branco: 'H RMN (d6-DMSO) ò 2,45 (m, 2H), 2,6 (m, 2H), 2,8 (m, 2H), 5,24 (m, 1H), 7,65 (m, 1H), 7,77 (m, 4H), 8,13 (m, 1H), 8,25 (m, 2H), 8,72 (bs, 1H), 9,18 (bs, 2H), 10,4 (s, 1H): MS (ES) mie 384,1 (MH+).
Análise Elementar Requerida para C19H2jN5O4.2F3C2O2H.5H2O: C 44,52 H 3,90 NI 1,28
Encontrados: C 44,59 H 3,79 N 11,24
Exemplo 3 /3S-[ [4- [ [4-(aminoiminometi 1) fenil ] amino]-1,4-dioxobutil]amino]-3 -piridino-propanoato de etilo -26-
Passo 1 Preparação de trans-3-(3-piridil)acrilato de etilo Ácido trans-3-(3-piridil)acrílico (Aldrich, P6, 620-3) foi esterifi-cado com HC1 seco em etanol. Após remoção do solvente in vacuo, o resíduo foi dividido entre carbonato de potássio e cloreto de metileno. A fase orgânica foi seca e concentrada a fim de proporcionar o éster sob a forma de um óleo amarelado transparente (rendimento >95%) e usada sem posterior purificação. 'H RMN (d6-DMSO) ò 1,34 (t, 3H, J = 7,2 Hz), 4,27 (q, 2H, J = 7,2 Hz), 6,5 (d, 1H, J = 15 Hz), 7,32 (m, 1H), 7,67 (d, 1H, 16 Hz), 7,83 (m, 1H), 8,6 (m, 1H), 8,74 (bs, 1H).
Passo 2 Preparação de N-[R]-l-feniletil]-(S)-3-amino-3-piridilpropanoato de etilo.
Cloreto de trimetilsililo (33,5 g, 0,33 mol) foi adicionado a (R)-(+)-a-metilbenzilamina (34 g, 0,28 mol) e trietilamina (40 g, 0,4 mol) em 100 ml de tetrahidrofurano. Esta mistura foi deixada a agitar durante lha 25° C. O hidrocloreto de trietilamina foi filtrado através de um funil de vidro aglomerado médio sob um manto de azoto. A sililamina transparente resultante em solução de tetrahidrofurano foi arrefecida até -78° C e foi adicionado n-BuLi (84 ml, 0,21 mol). O anião foi agitado durante 15 minutos seguindo-se a adição de trans-3-(3-piridil) acrilato de etilo (25 g, 0,14 mol) em 50 ml de tetrahidrofurano e a mistura foi agitada durante 15 min a -78° C antes de arrefecimento brusco com cloreto de amónio saturado (100 ml). A mistura foi deixada aquecer e foi extraída com éter dietílico. Esta solução foi concentrada até 60 ml, sendo em seguida adicionado HC1 IN e foi extraída de novo com éter. Os extractos de éter foram eliminados. A solução acídica foi tomada básica com K2CO3 sólido, foi extraída com cloreto de metileno, e a camada orgânica foi seca sobre Na2S04. O solvente foi removido sob pressão reduzida a fim de proporcionar um óleo vermelho. O produto foi purificado sobre gel de sílica (30% de acetato de etilo em hexano) para dar origem a 24 g de amina enriquecida enantiomericamente sob a forma de um óleo de cor âmbar. *H RMN (d6-DMSO) ò 1,17 (t, 3H, J = 7,2 Hz), 1,35 (d, 3H, J = 6,6 Hz), 2,69 (qd, 2H, J = 6,22, 15 Hz), 3,66 (q, 1H, J = 6,6, 15 Hz), 4,07 (q, 2H, J = 7,2 Hz), 4,19 (t, 1H, J = 7,31 Hz), 7,2 (m, 6H), 7,59 (dt, 1H, J = 2 Hz, J = 7,9 Hz), 8,45 (dd, 1H, J = 2, J = 4,7 Hz), 8,48 (d, 1H, J = 2 Hz). MS (FAB) m/e 299,1. [a]D: +7,5° (cl,0, CHCI3).
Passo 3 Preparação de (S)-3-amino-3-piridilpropanoato de etilo.
Processo A O aminoéster enriquecido enantiomericamente do Passo 2 (6 g) foi adicionado a etanol (150 ml), seguindo-se a adição de formato de amónio (6 g) e de paládio sobre carbono a 10% (6 g). Formato de amónio adicional e/ou paládio/C podem ter que ser adicionados se a redução se tomar mais lenta. A mistura foi submetida a refluxo durante 4 h. A progressão da reacção foi monitorizada por tlc (clorofórmio/metanol - 10:1; Rf de produto ~ 0,1). Depois da reacção ficar completa a mistura foi filtrada através de uma camada de celite e o etanol foi removido sob pressão reduzida. O produto foi purificado por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para dar origem a 1,5 g de sal TFA amino éster. 'H RMN (d6-DMSO) ô 1,09 (t, 3H, J = 7,1 Hz), 3,12 (m, 2H, J = 8,48, 16,49, -28- -28-
QsUSnse: 19,31 Hz), 4,04 (m, 2H), 4,75 (t, 1H, J = 6,9 Hz), 7,60 (dd, 1H, J = 5,0, 8,0 Hz), 8,09 (dt, 1H, J = 7,9, 8,0 Hz), 8,65 (dd, 1H, J = 1,4, 4,9 Hz), 8,76 (d, 1H, J = 1,9 Hz). [a]D + 3,3° (c = 1,0, DMF).
Processo B Uma solução do aminoéster enriquecido enantiomericamente (8,2 g) em 25 ml de 1,4-ciclohexadieno e 100 ml de ácido acético glacial foi tratada com 8 g de Ps sobre carbono a 5%. A mistura foi aquecida durante 4 h a 70-75° C sob azoto. A reacção foi monitorizada por HPLC. Após arrefecimento, a mistura da reacção foi filtrada através de uma camada de celite e foi concentrada in vacuo. O óleo transparente resultante foi triturado com 3 x 50 ml de éter dietílico o qual foi então decantado. O óleo foi dissolvido em 250 ml de água e 4 ml de ácido trifluoroacético e a solução foi purificada tal como foi acima referido. As fracções apropriadas foram combinadas para dar origem a 8,1 g (68%) do sal di-TFA. A razão entre os enantiómeros foi determinado como sendo de 5,3 : 94,7 / R : S usando uma coluna CrownPak CR (+).
Passo 2 Preparação de /5S-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-l,4-dioxo-butil]amino]-3-piridinopropanoato de etilo.
Num frasco sob azoto, 4-succinilamido benzamidino-HCl preparado no Exemplo 1, Passo 1 (5 g) foi adicionado a DMF seca (200 ml) seguindo-se N-metilmorfolina (2,52 ml) e cloroformato de isobutilo (2,85 ml) a 25° C. A mistura foi agitada durante 5 min. Ditrifluoroacetato de éster etílico de ácido (S)-yõ-amino-3-piridinopropiónico (7,73 g) em solução numa mistura de 100 ml de DMF, 4 ml de N-metilmorfolina e 100 mg de DM AP foi adicionado durante um período de 5 min. Após 1 h à temperatura ambiente, foi adicionada água e a reacção foi concentrada in vacuo. O resíduo foi triturado com éter (3 x 25 ml), sendo em seguida dissolvido em água e o pH foi ajustado para 6,7. Foi separado por filtração um precipitado. O pH do produto filtrado foi ajustado para 1 com -29- TFA e o produto foi purificado por cromatografía de fase reversa (água/acetonitrilo) para dar origem a 7,3 g de sólido branco (rendimento de 52%). Uma porção do sólido (3,5 g) foi dissolvida em água e o ião trifluoroacetato foi permutado por acetato usando 10 equivalentes de resina AGIX-8 (forma acetato, Biorad). A solução aquosa resultante da permuta foi liofilizada até se obter um pó incolor (2,5 g): 'H RMN (DMSO) ò 1,1 (t, 3H, J = 7 Hz), 1,7 (s, 3H), 2,4 (m, 2H), 2,5 (m, 4H), 2,8 (d, 1H, J = 7 Hz), 3,95 (q, 2H, J = 7 Hz), 5,2 (m, 1H), 7,3 (m, 1H), 7,7 (m, 4H), 8,4 (dd, 1H, J = 8 Hz e J = 2,5 Hz), 8,5 (d, 1H, J - 2,5 Hz), 8,55 (d, H, J = 8 Hz). [a]D -1,32° (c = 0,5, H20).
Análise Elementar
Requerida para C23H29N5O6.H2O: C 56,46 H 6,34 N 14,30
Encontrados: C 56,69 H 6,06 N 14,32
Exemplo 4 Ácido /5S-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-1,4-dioxobutil]amino]-3-piridi-nopropanóico.
Uma porção (100 mg) do éster isolado no Exemplo 4 foi dissolvida em água e LiOH aquoso 2N foi adicionado para pH 12. Após agitação durante uma hora a 25° C, a mistura resultante foi purificada por cromatografía de elevada pressão de fase reversa (Rt = 8 min em gradiente linear 5-70% ACN em água durante 30 min). Após liofílização, 90 mg de sólido branco foram isolados: -30- *H RMN (DMSO) δ 2,5 (m, 2H), 2,55 (m, 2H), 2,8 (m, 2H), 5,25 (m, 1H), 7,40 (m, 2H), 7,5 (bs, 1H), 7,75 (s, 4H), 7,95 (bs, 1H), 8,15 (m, 2H), 8,6 (m, 2H), 8,95 (bs, 2H), 9,15 (bs, 2H), 10,45 (s, 1H); MS (FAB) m/e 384 (MH+). [a]D: -1,15° (c 1,0, DMSO).
Análise Elementar
Requerida para C2oH23N504.1,52F3C02H.l/2H20: C 47,24 H 4,45 N 12,89 Encontrados: C 46,9 H 4,2 N 12,43
Exemplo 5 Ácido fiR-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-1,4-dioxobutil]amino]-3-piridi-nopropanóico.
o
Passo 1 Preparação de N-[(S)-l-feniletil]-(R)-3-amino-3-piridilpropanoato de etilo
Cloreto de trimetilsililo (33,5 g, 0,33 mol) foi adicionado a (S)-(-)-a-metilbenzilamina (34 g, 0,28 mol) e trietilamina (40 g, 0,4 mol) em 100 ml de tetrahidrofurano. Esta mistura foi deixada a agitar durante lha 25° C. O hidrocloreto de trietilamina foi filtrado através de um funil de vidro aglomerado médio sob um manto de azoto. A sililamina transparente resultante em solução de tetrahidrofurano foi arrefecida até -78° C e foi adicionado n-BuLi (84 ml, 0,21 mol). O anião foi agitado durante 15 min. seguindo-se a adição de trans-3-(3- -31 - piridil)acrilato de etilo (25 g, 0,14 mol) em 50 ml de tetrahidrofurano e a mistura foi agitada durante 15 min a -78° C antes de arrefecimento brusco com cloreto de amónio saturado (100 ml). A mistura foi deixada aquecer e foi extraída com éter dietílico. Esta solução foi concentrada até 60 ml, em seguida HC1 IN foi adicionado e extraído de novo com éter. Os extractos de éter foram eliminados e a solução acídica foi tomada básica com K2CO3 sólido, extraída com cloreto de metileno, e a camada orgânica foi seca sobre Na2S04. O solvente foi removido sob pressão reduzida até se obter um óleo vermelho. O produto foi purificado sobre gel de sílica (30% de acetato de etilo em hexano) para dar origem a 24 g de amina enriquecida enantiomericamente sob a forma de um óleo de cor âmbar. !H RMN (d6-DMSO) ô 1,17 (t, 3H, J = 7,2 Hz), 1,35 (d, 3H, J = 6,6 Hz), 2,69 (qd, 2H, J = 6,22, 15 Hz), 3,66 (q, 1H, J = 6,6, 15 Hz), 4,07 (q, 2H, J = 7,2 Hz), 4,19 (t, 1H, J = 7,31 Hz), 7,2 (m, 6H), 7,59 (dt, 1H, J = 2 Hz, J = 7,86 Hz), 8,45 (dd, 1H, J = 2, J = 4,74 Hz), 8,48 (d, 1H, J = 2 Hz). MS (FAB) m/e 299,1. [a]D: -7,5° (cl,0, CHCI3).
Passo 2 Preparação de (R)-3-amino-3-piridilpropanoato de etilo O aminoéster enriquecido enantiomericamente a partir do Passo 1 (9 g) foi adicionado a etanol (150 ml) seguindo-se a adição de formato de amónio (10 g) e de paládio sobre carbono a 10% (10 g). Se a redução se tomar mais lenta ter-se-á que acrescentar adicionalmente formato de amónio e/ou paládio/C. A mistura foi agitada a 60° C durante 6 horas. A progressão da reacção foi monitorizada por tlc (clorofórmio/metanol - 10:1; Rf de produto - 0,1). Depois da reacção ficar completa a mistura foi filtrada através de uma camada de celite e o etanol foi removido sob pressão reduzida. O produto foi purificado por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para dar origem a 1,5 g de sal TFA amino éster. A razão entre os enantiómeros foi determinada como sendo de 6 : 94 / S : R usando uma coluna CrownPak CR (+). 'H RMN (d6-DMSO) & 1,09 (t, 3H, J - 7,10 Hz), 3,12 (m, 2H1, 4,04 (m, 2H), -32- 4,75 (t, 1H, J = 6,87 Hz), 7,60 (dd, 1H, J = 5,0, 8,0 Hz), 8,09 (dt, 1H, J = 7,8, 8,0 Hz), 8,65 (dd, 1H, J = 1,4, 4,9 Hz), 8,76 (d, 1H, J = 1,9 Hz). [a]D: +3,3° (cl,0, DMF).
Num frasco sob azoto, Y-succinilamido-benzamidina-HCL preparado no Exemplo 1, Passo 1 (465 mg, 1,6 mmol) foi adicionado a DMF seca (50 ml) seguindo-se N-metilmorfolina (0,18 ml) e cloroformato de isobutilo (0,22 ml) a 25° C. A mistura foi agitada durante 5 min. Ditrifluoroacetato de éster etílico de ácido y6(R)-amino-3-piridinopropoato de etilo (650 mg) em solução numa mistura de 50 ml de DMF, 0,6 ml de N-metilmorfolina foi adicionado imediatamente. Após 1 h à temperatura ambiente, foi adicionada água e a reacção foi concentrada in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia de fase reversa (água/ace-tonitrilo 0,05% de ácido trifluoroacético) para dar origem a 350 mg de sólido branco: ’H RMN (DMSO) δ 1,1 (t, 3H, J = 7 Hz), 1,7 (s, 3H), 2,4 (m, 2H), 2,5 (m, 4H), 2,8 (d, 1H, J = 7 Hz), 3,95 (q, 2H, J = 7 Hz), 5,2 (m, 1H), 7,3 (m, 1H), 7,7 (m, 4H), 8,4 (dd, 1H, J = 8 Hz e J = 2,5 Hz), 8,5 (d, 1H, J = 2,5 Hz), 8,55 (d, 1H, J = 8 Hz). [a]D: +1,4° (c 0,5 H20).
Exemplo 6 Ácido yóR- [ [4- [ [4-(aminoiminometil)fenil] amino] -1,4-dioxobutil]-amino] -3 -piridinopropanóico.
-33 -
Uma porção (100 mg) do éster isolado no Exemplo 6 foi dissolvida em água e LiOH aquoso 2N foi adicionado até pH 12. Após agitação durante uma hora a 25° C, a mistura resultante foi purificada por cromatografia de elevada pressão de fase reversa (Rt = 8 min em gradiente linear 5-70% ACN em água durante 30 min). Após liofilização, 90 mg de sólido branco foram isolados: 1 H RMN (DMSO) ò 2,5 (m, 2H), 2,55 (m, 2H), 2,8 (m, 2H), 5,25 (m, 1H), 7,40 (m, 2H), 7,5 (bs, 1H), 7,75 (s, 4H), 7,95 (bs, 1H), 8,15 (m, 2H), 8,6 (m, 2H), 8,95 (bs, 2H), 9,15 (bs, 2H), 10,45 (s, 1H); MS (FAB) m/e 384 (M+H+). [a]D : +1,12° (c 1,0, DMSO).
Análise Elementar
Requerida para C20H23N5O4.IF3C2O2H.H2O: C 43,88 H 4,00 N 11,12 Encontrados: C 43,84 H, 3,51 N 10,79
Exemplo 7
Acido /H[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]-amino]-1,4-dioxobutil]-2-piridinopropanóico.
Passo 1 Preparação de 2-piridilmalonato de etilo.
Malonato de dietilo (15 g, 93,5 mmol), 2-piridilcarboxaldeído (10 g, 93,5 mmol), piperidina (1 g). ácido benzoico (1 g) foram todos adicionados a -34- benzeno (200 ml) aquecidos num frasco equipado com um sifão de Dean-Stark a fim de remover água. Após 24-48 h, a reacção ficou completa e o benzeno foi removido in vacuo. O óleo resultante foi destilado a 270° C @ 1 mm Hg para dar origem a 18 g de diéster insaturado. *H RMN (300 MHz) (dó-DMSO) ó 1,35 (m, 6H), 4,35 (q, 2H, J = 7,8 Hz), 4,4 (q, 2H, J = 4,4 Hz), 7,21 (m, 1H), 7,4 (m, 1H), 7,6 (s, 1H), 7,7 (m, 1H), 8,6 (m, 1H); MS (FAB) m/e (MH+) 250,3.
Passo 2 Preparação de etoxicarbonil-3-amino-3-(2-piridil)propanoato de etilo.
Metanol saturado com amoníaco (75 ml) foi adicionado ao diéster insaturado (5 g) acima referido em dioxano (25 ml) e deixado repousar durante 1 h. Depois da reacção ficar completa o excesso de amoníaco em metanol foi removido sob pressão reduzida. FAB (MH+) 267,2
Passo 3 Preparação de ácido /6- [ [4- [ [4-aminoiminometil)fenil] amino]-1,4-dioxo-butil]2-piridinopropanóico.
Hidrocloreto de ácido 4-[[4-(aminoiminometil)fenil]-amino]-4-oxobutanóico preparado no Exemplo 1, Passo 1 (5,0 g, 18,5 mmol) foi adicionado a DMF seca (250 ml) seguindo-se N-metilmorfolina (1,9 g, 18,5 mmol) e cloroformato de isobutilo (2,5 g, 18,5 mmol) a 25° C. A mistura foi agitada durante 5 minutos. Éster 3-amino dietílico do passo 2 (5,0 g, 17 mmol) foi adicionado seguindo-se dimetilaminopiridina. Após 1 h, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o produto foi purificado por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para dar origem a 6,0 g de um sólido branco. Este material foi hidrolisado com LiOH (1 g) em água/acetonitrilo. Após completa conversão no diácido, HC1 6N foi adicionado seguindo-se aquecimento até 80° C durante 1 hora. O monoácido foi purificado por cromatografia de fase reversa -35- (água/acetonitrilo) para dar origem a 3,0 g de um sólido branco lH RMN (d6-DMSO) <5 2,4 (m, 2H), 2,67 (m, 2H), 2,75 (ddd, 2H, J = 6,6, 7,6, 16.1 Hz), 4,72 (m, 1H), 7,3 (m, 1H), 7,4 (m, 1H), 7,79 (s, 4H), 7,99 (d, 1H, J = 8.1 Hz), 8,99 (m, 2H), 9,1 (bs, 2H), 9,19 (bs, 2H), 10,42 (s, 1H); MS (FAB) m/e 384,2 (MH+).
Análise Elementar Requerida para C19H21N5O4 . F6C404H2. H20: C 43,88 H 3,97 N 11,13 Encontrados: C 43,65 H 3,54 N 10,87
Exemplo 8 β~ [ [4- [[4-(aminoiminometil)fenil]amino] -1,4-dioxobutil]-2-piridinopropanoato de etilo.
Ácido /H[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-l,4-dioxobutil]-2-piridino propanóico (1,2 g) a partir do passo 3 do Exemplo 8 foi adicionado a etanol (70 ml) seguindo-se HC1 4N/dioxano (10 ml). A evolução da reacção foi monitorizada por RPHPLC. Após reacção completa (2 h), o produto foi purificado por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para dar origem a 930 mg de um sólido branco: ’H RMN (d6-DMSO) δ 1,13 (t, 3H, J = 7,8 Hz), 2,4 (m, 2H), 2,67 (m, 2H), 2,75 -36- (ddd, 2H, J = 6,6, 7,6, 16,12 Hz), 4,1 (q, 2H, J = 7,8 Hz), 5,32 (m, 1H), 7,3 (m, 1H), 7,4 (m, 1H), 7,79 (s, 4H), 7,99 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 8,99 (m, 2H), 9,1 (bs, 2H), 9,19 (bs, 2H), 10,42 (s, 1H); MS (FAB) m/e 412,1 (MH+).
Análise Elementar Requerida para C21H25N5O4 . 1,5F3C202H . H20 C 46,61 H 4,53 N 11,32 Encontrados: C 46,49 H 4,37 N 10,43
Exemplo 9 Ácido /5- [ [4- [ [4-(aminoiminometil)fenil] amino] -1,4-dioxobutil] -4-piridinopropanóico.
Passo 1 Preparação de (4-piridil)malonato de etilo
Malonato de dietilo (15 g, 93,5 mmol), 4-piridilcarboxaldeído (10 g, 93,5 mmol), piperidina (1 g), ácido benzoico (1 g) foram todos adicionados a benzeno (200 ml) e aquecidos num frasco equipado com um sifão de Dean-Stark a fim de remover água. Após 24-48 h, a reacção ficou completa e o benzeno foi removido in vacuo. O óleo resultante foi destilado a 250° C @ 1 mm Hg para dar origem a 23 g de diéster insaturado. 'H RMN (300 MHz) (d6-DMSO) ó 1,25 (t, 3H, J = 7,6 Hz), 1,32 (t, 3H, J = 7,6
Hz), 4,3 (m, 4H), 7,31 (m, 2H), 7,64 (s, 1H), 8,65 (m, 2H); MS (FAB) m/e (MH+): 250,1.
Passo 2 Preparação de etoxicarbonil-3-amino-4-piridil propanoato de etilo. Metanol saturado com amoníaco (75 ml) foi adicionado ao diéster insaturado (5 g) acima referido em dioxano (25 ml) e deixado repousar durante 1 h. Após reacção completa o amoníaco em excesso em metanol foi removido sob pressão reduzida. FAB (MH+): 267,2
Passo 3: Preparação de ácido /5- [ [4- [ [4-(aminoiminometil)fenil] amino] -1,4-dioxobutil]-4-piridinopropanóico.
Hidrocloreto de ácido [4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-4-oxo-butanóico preparado no Exemplo 1, Passo 1 (5,0 g, 18,5 mmol) foi adicionado a DMF seca (250 ml) seguindo-se N-metilmorfolina (1,9 g, 18,5 mmol) e cloroformato de isobutilo (2,5 g, 18,5 mmol) a 25° C. A mistura foi agitada durante 5 min. Éster 3-amino dietílico do passo 2 (5,0 g, 17 mmol) foi adicionado seguindo-se dimetilaminopiridina. Após 1 h, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o produto foi purificado por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para dar origem a 6,0 g de um sólido branco. Este material foi hidrolisado com LiOH (1 g) em água/acetonitrilo. Após conversão completa no diácido, HC1 6N foi adicionado seguindo-se aquecimento até 80° C durante 1 h. O monoácido foi purificado por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para dar origem a 3,0 g de um sólido branco *H RMN (d6-DMSO) ó 2,5 (m, 2H), 2,6 (m, 2H), 2,85 (m, 2H), 5,26 (m, 1H), 7,63 (m, 2H), 7,79 (s, 4H), 8,6 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 8,67 (m, 2H), 8,99 (bs, 2H), 9,19 (bs, 2H), 10,42 (s, 1H); MS (FAB) m/e 384,2 (MH+).
Análise Elementar Requerida para -38- Λ C19H21N504 . F6C404H2 . H20: C 43,88 H 3,97 N 11,13 Encontrados: C 43,65 H 3,54 N 10,87
Exemplo 10 β~ [ [4- [ [4-(aminoiminometil)fenil] amino] -1,4-dioxobutil]-4-piridi-nopropanoato de etilo.
Propanoato de 3-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-l,4-dioxo-butil]-3-(4-piridilo) (1,2 g) a partir do exemplo anterior - passo 3 foi adicionado a etanol (70 ml) seguindo-se HC1 4N/dioxano (10 ml). A evolução da reacção foi monitorizada por RPHPLC. Depois da reacção ficar completa (2 h), o produto foi purificado por RPHPLC (água/acetonitrilo 0,05% ácido trifluoroacético) para dar origem a 930 mg de um sólido branco: !H RMN (d6-DMSO) δ 1,13 (t, 3H, J = 7,6 Hz), 2,4 (m, 2H), 2,67 (m, 2H), 2,75 (m, 2H), 4,1 (m, 2H), 5,32 (m, 1H), 7,3 (m, 1H), 7,4 (m, 1H), 7,79 (s, 4H), 7,99 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 8,99 (m, 2H), 9,1 (bs, 2H), 9,19 (bs, 2H), 10,42 (s, 1H); MS (FAB) m/e 412,3 (MH+).
Análise Elementar Requerida para C21H25N504.1,5F3C202H . H20: C 46,61 H 4,53 N 11,32 Encontrados: C 46,49 H4,37 N 10,43 -39-
Exemplo 11 β- [ [4- [ [4-(aminoiminometil)fenil] amino] -1,4-dioxobutil] amino-]-2-furanpropanoato de etilo.
o
Passo 1 Preparação de propanoato de etil-3-amino-3-furanilo:
Hidrogenomalonato de etilo (13,7 g, 104 mmol) foi adicionado a 2-furanal (10 g, 104 mmol) e acetato de amónio (20 g, 260 mmol) em etanol seco. A solução foi aquecida até refluxo durante 6 h. O solvente foi removido in vacuo para dar origem a um óleo. A este óleo, HC1 a 10% (250 ml) foi adicionado juntamente com éter (100 ml). As camadas foram separadas, extraídas duas vezes com cloreto de metileno, secas sobre Na2S04, e o solvente foi removido in vacuo para dar origem a 6 g do composto do título.
Passo 2 Preparação de /5-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-l,4-dioxobutil]-amino-]2-furanpropanoato de etilo.
Hidrocloreto de ácido 4-[84-(aminoiminometil)fenil]-amino]-4-oxobutanóico preparado no Exemplo 1, Passo 1 (4,6 g, 17 mmol) foi adicionado a DMF seca (225 ml) seguindo-se N-metilmorfolina (1,2 g, 17 mmol) e cloroformato de isobutilo (2,3 g, 17 mmol) a 25° C. A mistura foi agitada durante 5 min. Propanoato de etil-3-amino-3-(2-furanilo) (3,1 g, 17 mmol) foi adicionado -40- seguindo-se dimetilaminopiridina. Após 1 h, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o produto foi purificado por RPHPLC (água.05% TFA/acetonitrilo) para proporcionar 3,0 g de um sólido branco: ’H RMN (d6-DMSO) ô 1,13 (t, 2H, J = 7,5 Hz), 2,49 (m, 2H), 2,6 (m, 2H), 2,75 (m, 2H), 4,03 (q, 2H, J = 7,5 Hz), 5,3 (m, 1H), 6,22 (m, 1H), 6,37 (m, 1H), 7,55 (m, 1H), 7,78 (s, 4H), 8,4 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 9,0 (bs, 2H), 9,17 (bs, 2H), 10,42 (s, 1H); MS (FAB) m/e 401,2 (MH+).
Análise Elementar Requerida para C20H24N4O5. F3C2O2H . H20: C 51,36 H 6,86 N 10,89
Encontrados: C 51,04 H 5,58 N 10,70
Exemplo 12 Ácido y6-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-l,4-dioxobutil]-amino]-2-furanpropanóico.
0
y6-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-l,4-dioxobutil]amino-]-2-furan propanoato de etilo preparado no Exemplo 17 (700 mg) foi adicionado a água/acetonitrilo (20 ml) seguindo-se hidróxido de lítio (100 mg) a 25° C. A mistura foi agitada durante 30 min. A evolução da reacção foi monitorizada por RPHPLC. Depois de se ter formado ácido satisfatório a reacção foi neutralizada -41 - com TFA e purificada por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para dar origem a 620 mg de um sólido branco: !H RMN (d6-DMSO) ò 2,49 (m, 2H), 2,6 (m, 2H), 2,75 (m, 2H), 5,27 (m, 1H), 6,22 (m, 1H), 6,37 (m, 1H), 7,55 (m, 1H), 7,78 (s, 4H), 8,35 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 9,0 (bs, 2H), 9,17 (bs, 2H), 10,42 (s, 1H); MS (FAB) m/e 373,5 (MH+).
Análise Elementar Requerida para C18H2oN405 . F3C202H . H20: C 47,62 H 4,56 N 11,11
Encontrados: C 47,24 H 4,98 N 11,67
Exemplo 13 /i-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-l,4-dioxobutil]amino-]-2-tiofenopropanoato de etilo.
Passo 1 Preparação de 3-amino-3-(2-tiofenil)propanoato de etilo.
Hidrogenomalonato de etilo (13,7 g, 104 mmol) foi adicionado a 2-tiofencarboxaldeído (11,6 g, 104 mmol) e acetato de amónio (20 g, 260 mmol) em etanol seco. A solução foi aquecida até refluxo durante 6 h. Depois deste período de tempo o solvente foi removido sob pressão reduzida para dar origem a um óleo. A este óleo foi adicionado HC1 a 10% (250 ml) juntamente com éter (100 ml). As camadas foram separadas e a camada aquosa foi tomada básica com -42- K2CO3 sendo em seguida extraídas duas vezes com cloreto de metileno, secas sobre Na2SC>4 e o solvente foi removido in vacuo para dar origem a 8 g de um óleo amarelo: 'H RMN (300 MHz) (d6-DMSO) ô 1,25 (t, 3H, J = 7,7 Hz), 1,85 (bs, 2H), 2,7 (ddd, 2H, J = 4,2, 9,1, 14,4 Hz), 4,18 (q, 2H, J = 7,7 Hz), 4,68 (m, 1H), 7,14 (m, 1H), 7,3 (m, 1H), 7,6 (m, 1H); MS (FAB) m/e (MH+): 200,4.
Passo 2 Preparação de yõ-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]-amino]-1,4-dioxobu-til]amino-]-2-tiofenopropanoato de etilo.
Hidrocloreto de ácido 4-[[4-(aminoiminometil)fenil]-amino]-4-oxobutanóico preparado no Exemplo 1, Passo 1 (4,6 g, 17 mmol) foi adicionado a DMF seca (225 ml) seguindo-se N-metilmorfolina (1,2 g, 17 mmol) e cloroformato de isobutilo (2,3 g, 17 mmol) a 25° C. A mistura foi agitada durante 5 min. 3-Amino-3-(2-tiofenil)propanoato de etilo (3,4 g, 17 mmol) foi adicionado seguindo-se dimetilaminopiridina. Após 1 h, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o produto foi purificado por RPHPLE (água/acetonitrilo) para dar origem a 3,3 g de um sólido branco: Ή RMN (d6-DMSO) <5 1,12 (t, 2H, J = 7,7 Hz), 2,49 (m, 2H), 2,6 (m, 2H), 2,75 (m, 2H), 4,03 (m, 2H), 5,48 (m, 1H), 6,95 (m, 2H), 7,48 (m, 1H), 7,78 (s, 4H), 8,55 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 9,0 (bs, 2H), 9,17 (bs, 2H), 10,42 (s, 1H): MS (FAB) m/e 417,1 (MH+).
Análise Elementar Requerida para C2oH24N404S. F3C202H . H20: C 49,81 H 4,72 N 10,57
Encontrados: C 49,71 H4,67 N 10,53 -43-
Exemplo 14 Ácido β- [ [4- [ [4-(aminoiminometil) fenil ] amino] -1,4-dioxobutil]- amino]-2-tíofenopropanóico.
3-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-l,4-dioxobutil]amino-]-3-(2-tiofenil)propanoato de etilo preparado no Exemplo 17, Passo 2 (700 mg) foi adicionado a água/acetonitrilo (20 ml) seguindo-se hidróxido de lítio (100 mg) a 25° C. A mistura foi agitada durante 30 min. A evolução da reacção foi monitorizada por RPHPLC. Após formação satisfatória de ácido a reacção foi neutralizada com TFA e purificada por cromatografia de fase reversa (água/acetonitrilo) para dar origem a 620 mg de um sólido branco: *H RMN (d6-DMSO) ò 2,49 (m, 2H), 2,6 (m, 2H), 2,75 (m, 2H), 5,40 (m, 1H), 6,95 (m, 2H), 7,48 (m, 1H), 7,78 (s, 4H), 8,55 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 9,0 (bs, 2H), 9,17 (bs, 2H), 10,42 (s, 1H); MS (FAB) m/e 389,1 (MH+).
Análise Elementar Requerida para C18H20N4O4S. F3C202H . H20: C 46,15 H 4,42 N 10,77
Encontrados: C 46,44 H4,ll N 10,77
Exemplo 15 /5- [ [4- [ [4-(aminoiminometil)fenil] amino]-1,4-dioxobutil] amino]-l,3-benzodioxole-5-propanoato de etilo. -44-
Passo 1 Preparação de /5-amino-1,3-benzodioxole-5-propanoato de etilo.HCl. 3,4 metilenodioxibenzaldeído (6,0 g; 40 mmole), ácido malónico (5,2 g; 50 mmoles) e acetato de amónio (4 g; 52 mmoles) foram submetidos a refluxo suave em etanol (350 ml) durante a noite. A mistura da reacção foi deixada arrefecer até à temperatura ambiente e o precipitado sólido foi recolhido por filtração e lavado com etanol/água (1:1; 2 x 100 ml). O ácido livre seco pelo ar (3 g) [FAB-MS: MH+ = 210] foi suspenso no etanol absoluto (200 ml). A solução foi arrefecida num banho de gelo sendo nela feito borbulhar gás HC1 seco durante 1 h. A mistura da reacção foi agitada à temperatura ambiente durante a noite seguindo-se remoção do solvente in vacuo. O resíduo foi seco em secador de vácuo para dar origem a 3,2 g de éster [FAB-MS : MH+ = 238]. Este material foi usado sem qualquer purificação posterior.
Passo 2 Preparação de β- [ [4-[ [4-(aminoiminometil)fenil] amino] -1,4-dioxobu-til]amino]-l,3-benzodioxole-5-propanoato de etilo. 4-Succinilamidobenzamidina.HCl (2,75 g; 10 mmol; do Exemplo 1, Passo 1) foi dissolvido em DMF (50 ml). Cloroformato de isobutilo (1,5 g; 11 mmol) foi adicionado gota a gota com agitação seguindo-se N-metilmorfolina (1 g; 10 mmole). Num frasco separado, β-amino-1,3-benzoxazole-5-propanoato de -45- etilo.HCl (3 g, 12,5 mmoles) e N,N-di-isopropil-N-etilamina (1,3 g; 10 mmol) foram dissolvidos em DMF (20 ml). Ambas as soluções foram combinadas e agitadas à temperatura ambiente durante 2 h. Solução saturada de bicarbonato de sódio (30 ml) foi adicionada com agitação e a mistura foi filtrada.. O filtrado foi levado até à secura em rotavapor. O restante resíduo foi purificado por RPHPLC usando um gradiente linear de 10-40% de acetonitrilo/H2O/0,05% TFA em 30 min; MS FAB 454 (MH+). 'H RMN (DMSO-d6) ô 1,11 (t, 3H, C02CH2CH3), 2,45 e 2,57 (t, 4H, COCH2CH2CO), 2,69 (d, 2H, CH2C02CH2CH3), 4,0 (q, 2H, C02CH2CH3), 5,13 (q, 1H, NHCH), 5,97 (s, 2H, OCH20), 6,8 e 6,9 (b, 3H, Ar), 7,77 (s, 4H, Ar), 8,48 (d, 1H, CONH), 8,87 e 9,15 (s, 4H, H2NCNH2).
Análise Elementar: C23H23N406.CF3C00H Calculados: C 52,81 H 4,79 N 9,85
Encontrados: C 52,10 H 4,75 N 9,75
Exemplo 16 Ácido β- [ [4- [ [4-(aminoiminometil)fenil] amino]-1,4-dioxobutil]- amino]-1,3-benzodioxole-5-propanóico.
/H [4- [ [4-(aminoiminometil )fenil] amino] -1,4-dioxobutil] amino]-1,3-benzodioxole-5-propanoato de etilo (100 mg) foi agitado em LiOH 2N (5 ml) -46- e metanol (5 ml) à temperatura ambiente durante 20 min. A mistura foi neutralizada com HC1 4N e diluida com água. Este material foi então purificado por RPHPLC usando um gradiente de 10-40% de acetonitrilo/H20/0,05% de TFA em 30 min; MD (FAB) 426 (MH+). !H RMN (DMSO-d6) ò 2,45 e 2,57 (t, 4H, COCH2CH2CO), 2,60 (d, 2H, CH2C02H), 5,08 (q, 1H, NHCH), 5,97 (s, 2H, OCH20), 6,8 e 6,9 (b, 3H, Ar), 7,77 (s, 4H, Ar), 8,44 (d, 1H, CONH), 8,93 e 9,12 (s, 4H, H2NCNH2).
Análise Elementar: C2iH22N406 . CF3COOH Calculados: C 51,11 H 4,29 N 10,37
Encontrados: C 50,30 H4,16 N 10,19
Exemplo 17 /5- [ [4- [ [4-(aminoiminometil)fenil] amino] -1,4-dioxobutil] amino]-2 -nitro-l,3-benzodioxole-5-propanoato de etilo.
O éster foi preparado e purificado de acordo com o processo descrito no Exemplo 20, Passo 2, usando /5-amino-2-nitro-l,3-benzoxazole-5-propanoato de etilo; MS (FAB) 499,5 (MH+). 'H RMN (DMSO-d6) ó 1,16 (t, 3H, C02CH2CH3), 2,43 e 2,54 (t, 4H, COCH2CH2CO), 2,73 (d, 2H, CH2C02CH2CH3), 4,06 (m, 2H, C02CH2CH3), 5,63 (m, 1H, NHCH), 6,20 (d, 2H, OCH20), 7,2 e 7,5 (s, 2H, Ar), 7,74 (s, 4H, -47-
Ar), 8,62 (d, 1H, CONH), 8,74 e 9,12 (s, 4H, H2NCNH2).
Análise Eelementar: C23H25N508. CF3COOH Calculados: C 48,94 H 4,27 N 11,42
Encontrados: C 48,17 H4,22 N 10,88
Exemplo 18 Ácido /5-[[4-[ [4-(aminoimi nometil)fenil] amino] -1,4-dioxobutil]- 5 -pirimidinopropanóico.
Passo 1 Preparação de (5-pirimidinil)acrilato de t-butilo.
Uma mistura de 30 g de 5-bromopirimidina, 1,2 g de acetato de paládio, 25 ml de trietilamina e 250 ml de acrilato de t-butilo foi aquecida a 80° C durante 5 dias. A mistura resultante foi concentrada até se obter um sólido ceroso in vacuo. O resíduo foi misturado com acetato de etilo e filtrado. O filtrado foi mantido no frio (-20° C, sendo adicionado hexano), e depositaram-se 10,5 g de agulhas escuras: ’H RMN (300 MHz) (d6-DMSO) ó 1,45 (s, 9H), 6,1 (d, 1H, J = 12,3 Hz), 6,8 (d, H, J = 12,3 Hz), 8,85 (s, 1H), 9,15 (s, 1H): MS (FAB) m/e (MH+): 206,2 Análise Elementar: CnHi4N202
Calculados: C 64,06 H 6,84 N 13,58
Encontrados: C 63,83 H 6,95 N 13,20
Passo 2 Preparação de 3-amino-3-(5-pirimidinil)propanoato de t-butilo, trifluoroacetato.
Metanol saturado com amoníaco (100 ml) foi adicionado a (4-pirimidinil)acrilato de t-butilo (4 g) e foi deixado a agitar a 80° C durante 5 dias. O amoníaco em excesso em metanol foi removido sob pressão reduzida e o amino éster desejado foi separado por HPLC. As fracções apropriadas (Rt = 13 min num gradiente de 10-40% de acetonitrilo/H20/0,05% TFA em 30 min; Rf Si02 MeOH:CHCi3 1:9 0,36) foram liofilizadas para dar origem a 1 g de pó branco: lH RMN (300 MHz) (d6-DMSO) ò 1,25 (s, 9H), 2,95 (m, 1H), 2,15 (m, 1H), 8,85 (s, 1H), 9,15 (s, 1H); MS (FAB) m/e 223,2 (MH+).
Passo 3 Preparação de ácido /5-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]-amino]-l,4-dioxobutil]-5-pirimidinopropanóico.
Hidrocloreto de ácido 4-[[4-(aminoiminometil)fenil]-amino]-4-oxo-butanóico preparado no Exemplo 1, Passo 1 (270 mg, 1 mmol) foi adicionado a DMF seca (50 ml) seguindo-se N-metilmorfolina (110 ul, 1 mmol) e clorofor-mato de isobutilo (140 ul; 1,1 mmol) a 25° C. A mistura foi agitada durante 5 min, e em seguida foi adicionada uma mistura de trifluoroacetato propanoato de t-butil-3-amino-3-(5-pirimidinilo) (300 mg, 0,9 mmol) em 10 ml de DMF e 140 ul NMM. Após 1 h, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o produto foi purificado por RPHPLC (água/acetonitrilo) para dar origem a 6,0 g de um sólido branco. Este material foi agitado em 50 ml de uma mistura 1:1 de diclorometano e ácido trifluoroacético durante 16 h à temperatura ambiente. O ácido foi purificado por RPHPLC (água/acetonitrilo) para dar origem a 200 mg de um sólido branco: p.f. 187-92; -49- *H RMN (d6-DMS0) ó 2,45 (m, 2H), 2,6 (m, 2H), 2,75 (d, 2H, J = 7,6 Hz), 5,15 (dd, J e J = 7,5 Hz, 1H), 7,75 (s, 4H), 8,6 (d, 1H, J = 7,5 Hz), 8,75 (s, 2H), 8,9 (bs, 2H), 9,05 (s, 1H), 9,19 (bs, 2H), 10,42 (s, 1H); MS (FAB) m/e 385,2 (MH+). Análise Elementar: C18H20N6O4. 1,5TFA Calculados: C 45,06 H4,18 N 15,01
Encontrados: C 45,00 H 3,86 N 15,02
Exemplo 19
Preparação de 3-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-1,4-dioxobutil]-5-pirimi-dinopropanoato de etilo.
COjEr
Passo 1 3-Amino-3-(5-pirimidinil)propanoato, hidrocloreto de etilo. O sal trifluoroacetato de 3-amino-3-(5-pirimidinil)propanoato de t-butilo (1 g), preparado tal como no exemplo 22, Passo 2 foi dissolvido em 100 ml de etanol seco e 10 ml de HC1 4N em dioxano e agitado à temperatura ambiente até a transesterificação ficar completa. Os solventes foram removidos in vacuo e 0 resíduo foi misturado com acetato de etilo e éter dietílico. O precipitado resultante foi filtrado, lavado com éter e seco (0,8 g) 'H RMN (300 MHz) (d6-DMSO) d 1,05 (t, J = 7 Hz, 3H), 3,25 (m, 2H), 4,05 (q, J = 7 Hz, 2H), 4,7 (m, 1H), 9,05 (s, 1H), 9,25 (s, 1H). -50-
Passo 2 Preparação de 3-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]-amino]-l,4-dioxo-butil]-5-pirimidinopropanoato de etilo.
3-Amino-3-(5-pirimidinil)propanoato de etilo preparado no Exemplo 23, Passo 1 (975 mg, 3,6 mmol) foi adicionado a DMF seca (60 ml) seguindo-se N-metilmorfolina (400 ul, 3,5 mmol) e cloroformato de isobutilo (500 ul, 3,8 mmol) a 25° C. A mistura foi agitada durante 5 min, e em seguida foi adicionada uma mistura de 3-amino-3-(5-pirimidinil)propanoato, hidrocloreto de etilo (850 mg, 3,5 mmol) em 10 ml de DMF e 500 ul NMM. Após 16 h, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o produto foi purificado por RPHPLC (água/acetonitrilo) para dar origem a 0,9 g de um sólido branco p.f. 168-9°C !H RMN (d6-DMSO) b 1,1 (t. J = 7 Hz, 3H), 2,46 (m, 2H), 2,6 (m, 2H), 2,9 (m, 2H), 4,05 (q, J = 7 Hz, 2H), 5,2 (m, 1H), 7,75 (s, 4H), 8,6 (d, 1H, J = 8 Hz), 8,75 (s, 2H), 8,9 (bs, 2H), 9,05 (s, 1H), 9,14 (bs, 2H), 10,37 (s, 1H); MS (FAB) m/e 413,4 (MH+).
Análise Elementar C2oH24N604.TFA. 1H20
Calculados: C 48,60 H 4,99 N 15,46
Encontrados: C 48,59 H 4,77 N 15,36
Exemplo 20 [ [4- [ [4-(aminoiminometil)fenil] amino] -1,4-dioxobutil]amino]-3-piridinopropanoato de metilo.
'2 -51 -
Passo 1 Hidrocloreto de ácido 4-[[4-(aminoiminometil)fenil]-amino]-4-oxo-butanóico preparado no Exemplo 1, Passo 1 (5,0 g, 18,5 mmol) foi adicionado a DMF seca (250 ml) seguindo-se N-metilmorfolina (1,7 g, 18,5 mmol) e cloroformato de isobutilo (2,8 g, 17 mmol) a 25° C. A mistura foi agitada durante 5 min. 3-Amino-3-piridinopropanoato de metilo (3,0 g, 18,5 mmol) foi adicionado seguindo-se dimetilaminopiridina. Após 1 h, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o produto foi purificado por RPHPLC (água/acetonitrilo) para dar origem a 2,0 g de um sólido branco: 'H RMN (d6-DMSO) ò 2,57 (t, 2H, J = 7,31 Hz), 2,07 (t, 2H, J = 7,1 Hz), 3,47 (t, 2H, J = 7,0 Hz), 3,5 (s, 6H), 3,51 (m, 1H), 7,79 (s, 4H), 8,1 (t, 1H, J = 7,1 Hz), 8,7 (bs, 2H), 9,09 (bs, 2H), 10,32 (s, 1H); MS (FAB) m/e 379,0 (MH+).
Análise Elementar Requerida para C,7H22N406 . F3C2O2H.H2O C 45,50 H 4,72 N 11,18
Encontrados: C 45,20 H 4,66 N 11,17
Exemplo 21 /5- [ [4- [ [4-(aminoiminometil)fenil] amino] -1,4-dioxobutil]amino]-l,3-benzodioxole-5-propanoato de etilo (isómero 1).
CO^Er
Passo 1 Preparação de ácido/5-amino- [1,3 -benzodioxole-5 ]propanóico 3,4-Metilenodioxibenzaldeído (12,0 g; 80 mmol), ácido malónico (10,5 g; 50 mmol) e acetato de amónio (8 g; 104 mmol) foram submetidos a refluxo suave em etanol (600 ml) durante a noite. A mistura da reacção foi filtrada a quente e o sólido foi lavado com etanol/água (1:1:3 x 100 ml). O produto foi seco ao ar para dar origem a 8 g de material branco; MS (FAB) m/e 210 (MH+).
Passo 2 Preparação de ácido y5-[[N-t-butoxicarbonilamido]-l,3-benzodioxole-5]-propanóico Ácido /5-amino-[l,3-benzodioxole-5-]propanóico (2,1 g; 10 mmol) foi dissolvido em NaOH 2,5 N (5 ml) e dioxano/água (2:1; 30 ml). A esta mistura, dicarbonato de Di-t-butilo (2,62 g; 12 mmol) foi adicionado com agitação vigorosa. A mistura da reacção foi deixada a agitar à temperatura ambiente durante a noite e e levada até à secura num rotavapor. O resíduo foi dissolvido de novo em água (100 ml), e a solução foi acidificada com uma solução diluida de KHS04. O precipitado branco foi então recolhido por filtração, e seco in vacuo para dar origem a 1,35 g de sólido branco; MS (FAB) m/e 332 (M+Na).
Passo 3 Preparação de 2-[[/5-N-t-butiloxicarbonilamido-l,3-benzodioxole-5]-propanoilamido]-2-feniletanol Ácido y6-[[N-t-butiloxicarbonilamido]-l ,3-benzodioxole-5-]propa-nóico (1,34 g; 4,34 mmol), carbonato de disuccinimidilo (1,5 g; 6 mmol) e 4- -53-
dimetilaminopiridina (300 mg) foram agitados em DMF/piridina (2:1; 50 ml) à temperatura ambiente durante a noite. A esta solução, (R)-2-amino-2-feniletanol (1,15 g; 8 mmol) foi adicionado e a agitação foi deixada continuar durante mais um dia. A mistura foi levada até à secura em rotavapor e o resíduo foi triturado com água. O sólido foi filtrado e aplicado a RPHPLC. A mistura diastereomérica foi separada usando uma condição isocrática de 35% acetonitrilo/água. Picos tanto precoce como tardio foram recolhidos e liofílizados. Ambos os compostos apresentavam o mesmo ião massa de M+Li = 435.
Passo 4 Preparação de /j-amino-[l,3-benzodioxole-5]propanoato de etilo (pico tardio) 2-[[/5-N-t-butiloxicarbonilamido-1,3-benzodioxole-5-]propanoil-amido]-2-feniletanol (0,42 g; 1 mmole) foi suspenso em H2S04 conc. (2 ml) e dioxano/H20 (1:1; 20 ml). A mistura foi submetida a refluxo durante 16 h e levada até à secura em rotavapor. O resíduo foi dissolvido de novo em H20 (50 ml) e a mistura foi titulada até pH 10 com NaOH 2,5 N e extraída com clorofórmio (3 x 75 ml). A fase aquosa foi neutralizada com HC1 3N e levada até à secura em rotavapor. O sólido foi tratado com éter e filtrado para dar origem a 170 mg de sólido [FAB-MS: MH+ = 210]. Este material foi suspenso em etanol absoluto (100 ml) e a suspensão foi arrefecida num banho de gelo sendo nela feito borbulhar gás HC1 durante 2 horas. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante a noite e foi filtrada. O produto filtrado foi levado até à secura em rotavapor e o resíduo [165 mg; FAB-MS: MH+ = 238] foi usado sem qualquer purificação posterior.
Passo 5 Preparação de /5-amino-[l,3-benzodioxole-5]propanoato de etilo (pico precoce) 2-[[/5-N-t-butiloxicarbonilamido-1,3-benzodioxole-5-]propanoil-amido]-2-feniletanol (o,62 g; 1,5 mmole) foi suspenso em H2SO4 conc. (2 ml) e dioxano/H20 (1:1; 20 ml). A mistura foi submetida a refluxo durante 16 horas e foi manipulada tal como foi acima descrito. O ácido [230 mg; FAB-MS: MH+ = 210] foi convertido no seu éster etílico [240 mg; FAB-MS: MH+ = 238].
Passo 6 Preparação de /5-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-l,4-dioxobu-til]amino]-l,3-benzodioxole-5-propanoato de etilo 4-Succinilamidobenzamidina.HCl (540 mg; 2 mmoles) foi dissolvido em DMF (10 ml). Cloroformato de isobutilo (275 mg; 2 mmol) foi adicionado gota a gota com agitação seguindo-se N-metilmorfolina (200 mg; 2 mmol). Num frasco separado, /i-amino-1,3-benzodioxole-5-propanoato.HCl de etilo (165 mg, 1 mmol, pico precoce) e N,N-diisopropil-N-etilamina (130 mg; 1 mmol) foram dissolvidos em DMF (10 ml). Ambas as soluções foram combinadas e agitadas à temperatura ambiente durante duas horas. Solução saturada de bicarbonato de sódio (5 ml) foi adicionada com agitação e a mistura foi filtrada. O produto filtrado foi levado até à secura em rotavapor. O resíduo restante foi purificado por RPHPLC usando um gradiente linear de 10-40% de acetonitrilo/H20/0,05% TFA em 30 min; MS (FAB) 455 (MH+). 'H RMN (DMSO-dé) ó 1,11 (t, 3H, C02CH2CH3), 2,45 e 2,57 (t, 4H, COCKhO^CO), 2,69 (d, 2H, CH2C02CH2CH3), 4,0 g (q, 2H, C02CH2CH3), 5,13 (q, 1H, NHCH), 5,97 (s, 2H, OCH20), 6,8 e 6,9 (2s, 3H, Ar), 7,79 (s, 4H, Ar), 8,42 (d, 1H, CONH), 9,0 e 9,24 (2s, 4H, H2NCNH2). -55- ©ΠΣ3®
Análise Elementar: C23H26N406.HC1.H20
Calculados: Encontrados: C 54,49 H 5,76 N 11,05 C 54,39 H 5,49 N 11,01
Exemplo 22 Ácido /6- [ [4- [ [4-(aminoiminometi 1) feni 1] ami no] -1,4-dioxobutil]amino]-1,3-ben-zodioxole-5-propanóico, isómero 2.
β-[[Α- [ [4-(aminoiminometil)fenil] amino] -1,4-dioxobutil]amino]-l,3-benzodioxole-5-propanoato de etilo (100 mg) foi agitado em LiOH 2N (5 ml) e metanol (5 ml) à temperatura ambiente durante 20 min. A mistura foi neutralizada com HC1 4N e diluida com água (20 ml). Este material foi então purificado por RPHPLC usando um gradiente de 10-40% de acetonitri-lo/H20/0,05% TFA em 30 min; MS (FAB) 427 (MH+). 'H RMN (DMSO-dé) ó 2,45 e 2,57 (t, 4H, COCH2CH2CO), 2,60 (d, 2H, CH2C02H), 5,08 (q, 1H, NHCH), 5,97 (s, 2H, OCH20), 6,8 e 6,9 (b, 3H, Ar), 7,77 (s, 4H, Ar), 8,4 (d, 1H, CONH), 8,97 e 9,15 (2s, 4H, H2NCNH2). C2iH22N406.HC1.H20 C 52,45 H 5,24 N 11,65 C 51,62 H 4,89 NI 1,35
Análise Elementar:
Calculados:
Encontrados:
Exemplo 23 Ácido /5-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-1,4-dioxobutil]amino]-1,3-ben-zodioxol e- 5 -propanóico
C02h O éster foi preparado e purificado de acordo com o processo descrito no Exemplo 31 Passo 6 a partir do intermediário isolado no Exemplo 31, Passo 4 [FAB-MS: MH+ = 455; Exemplo 32). Este éster (50 mg) foi tratado com LiOH 2N (5 ml) e metanol (5 ml) à temperatura ambiente durante 20 minutos. A mistura foi neutralizada com HC1 4N e diluída com água (20 ml). Este material foi então purificado por RPHPLC usando um gradiente de 10-40% de acetonitrilo/H20/0,05% TFA em 30 min; MS (FAB) m/e (MH+) 427; 'H RMN (DMSO-dé) ô 2,45 e 2,57 (t, 4H, COCH2CH2CO), 2,62 (d, 2H, CHiCOzH), 5,08 (q, 1H, NHCH), 5,97 (s, 2H, OCH20), 6,78 e 6,9 (2s, 3H, Ar), 7,77 (s, 4H, Ar), 8,38 (d, 1H, CONH), 8,88 e 9,42 (2s, 4H, H2NCNH2). -57-
Exemplo 24 Ácido /5- [ [4- [ [4- (aminoiminometil) fenil ] amino] -1,4-dioxobutil]amino]-2-nitro- 1,3-benzoxazole-5-propanóico.
O ácido foi preparado e purificado de acordo com o processo descrito no Exemplo 20 usando o éster preparado no Exemplo 21. MS (FAB) 472,4 (MH+). *H RMN (DMSO-d6) ô 2,45 e 2,54 (t, 4H, COCH2CH2CO), 2,65 (d, 2H, CH2COCH2CH3), 5,57 (m, 1H, NHCH), 6,20 (d, 2H, 0CH20), 7,17 e 7,51 (2s, 2H, Ar), 7,74 (s, 4H, Ar), 8,60 (d, 1H, CONH), 8,83 e 9,14 (2s, 4H, H2NCNH2). Análise Elementar: C2iH2iN508.CF3C00H.H20 Calculados: C 45,77 H 4,01 N 11,60
Encontrados: C 45,96 H3,69 N 11,36
Agregação de Plaquetas In Vitro em PRP Cães machos ou fêmeas saudáveis foram submetidos a jejum durante 8 horas antes da colheita de sangue; em seguida 30 ml de sangue total foram colhidos usando uma agulha de borboleta e uma seringa de plástico de 30 cc com 3 ml de citrato de sódio tamponado 0,129 M (3,8%). A seringa foi feita rodar cuidadosamente à medida que o sangue era levado a misturar-se com o citrato. Plasma rico em plaquetas (PRP) foi preparado por centrifugação a 975 x g durante 3,17 minutos à temperatura ambiente permitindo que a centrífuga descesse até uma paragem sem travagem. O PRP foi removido a partir do sangue com uma pipeta de plástico e colocado num tubo de centrífuga estéril cónica Corning de 50 ml, revestido com plástico o qual foi mantido à temperatura ambiente. Plasma pobre em plaquetas (PPP) foi preparado por centrifugação do restante sangue a 2.000 x g durante 15 minutos à temperatura ambiente permitindo que a centrífuga descesse até uma paragem sem travagem. O PRP foi n ajustado com PPP até uma contagem de 2-3 x 10 plaquetas por ml. 400 ul da preparação PRP e 50 ul da solução dos compostos a serem testados ou solução salina foram préincubados durante 1 minuto a 37° C num BioData, Horsham, PA). 50 ul de adenosina 5’ difosfato (ADP) (concentração final 50 um) foram adicionados às cuvetas e a agregação foi monitorizada durante 1 minuto. Todos os compostos são testados em duplicado. Os resultados são calculados como se segue: Percentagem de controlo = [(OD máximo menos OD inicial de composto) dividido por (OD máximo menos OD inicial de solução salina de controlo] x 100. A % de inibição = 100 - (percentagem de controlo).
Os compostos testados e as suas concentrações inibidoras médias (CI50) são registados no Quadro I. CI5o's (dosagem à qual 50% de agregação de plaquetas é inibida) foram calculadas por regressão linear da curva de resposta à dose. Os resultados do ensaio para os compostos dos Exemplos 1 a 22 são indicados no Quadro I mais abaixo.
Quadro I
Exemplo CIjoPRP Cão Efeito Ex Vivo após Admins. IG 1 NT + 2 9,3 x IO'8 NT 3 NT + 4 4,7 x IO'8 NT 5 NT NT 6 4,8 x IO'6 NT 7 2,9 x IO'7 NT 8 NT NT 9 1,6 x IO'7 NT 10 NT NT 11 NT + 12 NT + 13 NT + 14 1,2 x IO'7 NT 15 >10 + 16 6,8 x 10'8 NT 17 >10 -(5mpk) 18 5,9 x IO’8 NT 19 NT + 20 NT + 21 7,3 x IO'6 + 22 4 x 10'8 NT 23 6,8 x 10'6 NT 24 1,2 x IO'6 NT NT - não testado -60- INIBICÀQ DE AGREGAÇÃO INDUZIDA POR COLAGÉNIO EX VIVO POR COMPOSTOS DO INVENTO Finalidade A finalidade deste ensaio consiste em determinar os efeitos de compostos anti-plaquetas sobre agregação de plaquetas induzida por colagénio ex vivo quando administrados quer intravenosamente quer por via oral a cães.
As amostras de sangue de pré-tratamento (controlo) são colhidas a partir de cães conscientes ou anestesiados (Bigles) e são centrifugadas para preparar plasma rico em plaquetas (PRP). A resposta agregatoria a colagénio é medida num agregómetro e usado como Controlo. Os compostos são administrados, quer por via intragástrica (quer por cápsula quer por tubo até ao estomago quer por via intravenosa). Amostras de sangue são colhidas com intervalos predeterminados após administração de composto, sendo preparado PRP e sendo determinada a agregação por colagénio. A inibição de agregação por composto é determinada comparando a resposta de agregação após administração de composto com a resposta com prétratamento. O estudo é continuado durante um máximo de 24 horas ou até a agregação das plaquetas regressar a níveis de controlo. (Se a agregação ainda estiver inibida após 7 horas, será retirada uma amostra de sangue na manhã seguinte a qual será testada). A duração da actividade é determinada pelo tempo durante o qual a agregação das plaquetas é inibida após administração de composto.
Compostos representativos deste invento, compostos dos Exemplos 1, 3 e 12 foram testados e inibiram até 100% da agregação plaquetária após 24 horas quando administrados por via oral a cães numa dose de 20 mg/kg. -61 - A partir da descrição precedente, qualquer especialista nesta técnica poderá facilmente avaliar as caracteristicas essenciais deste invento, e sem se afastar do seu espirito e âmbito, poderá introduzir várias alterações e modificações do invento para o adaptar a várias utilizações e condições.
Lisboa, 11 de Outubro de 2000
JORGE CRUZ
Agente Oficial da Propriedade Industrial RUA VICTOR CORDON, 14 1200 LISBOA

Claims (26)

  1. REIVINDICAÇÕES 1. Um composto ou um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitável da fórmula:
    Z" f r-ç-cojW N-CO- CH.-CHj-CO-MH—C-ÍCM^-R* H em que R1 é seleccionado de entre o grupo consistindo em hidrogénio, radicais alquilo com 1 a 10 átomos de carbono, radicais alquenilo com 2 a 10 átomos de carbono, radicais alquinilo com 2 a 10 átomos de carbono, radicais de hidrocarboneto alieiclico com 3 a 10 átomos de carbono, radicais de hidrocarboneto aromático com 4 a 16 átomos de carbono, em que todos os referidos radicais são substituídos facultativamente com hidroxilo, alcoxi tendo 1 a 10 átomos de carbono, alquilo com 1 a 10 átomos de carbono, halogénio, nitro, carboxilo, sulfonilo, trifluorometilo, amino, alcanoiloxi com 1 a 4 átomos de carbono, benzoiloxi, fenilo e naftilo que são substituídos facultativamente com halogénio, nitro, alcoxi tendo 1 a 10 átomos de carbono e alquilo com 1 a 10 átomos de carbono; R2 é seleccionado de entre radical piridinilo, radical pirimidinilo, radical benzodioxolilo, radical furando ou radical tiofenilo, que são substituídos facultativamente com hidroxi, alcoxi tendo 1 a 10 átomos de carbono, alquilo com 1 a 10 átomos de carbono, halogénio, nitro, carboxilo, sulfonilo, trifluoro-metilo, amino, alcanoiloxi com 1 a 4 átomos de carbono, benzoiloxi, fenilo e naftilo que são substituídos facultativamente com halogénio, nitro, alcoxi tendo 1 -2- a 10 átomos de carbono e alquilo com 1 a 10 átomos de carbono; W é seleccionado de entre o grupo consistindo em hidrogénio, radicais alquilo com 1 a 10 átomos de carbono, radicais alquenilo com 2 a 10 átomos de carbono, radicais alquinilo com 2 a 10 átomos de carbono, radicais hidrocarboneto alicíclico com 3 a 10 átomos de carbono e radicais hidrocarboneto aromáticos com 4 a 16 átomos de carbono, em que todos os referidos radicais são substituídos facultativamente com hidroxilo, alcoxi tendo 1 a 10 átomos de carbono e alquilo com 1 a 10 átomos de carbono; Z, Z', Z" são, de um modo independente, seleccionados de entre o grupo consistindo em hidrogénio, radicais alquilo com 1 a 10 átomos de carbono, halogénio, alcoxi tendo 1 a 10 átomos de carbono, ciano, sulfonilo, carboxilo, e radicais hidroxilo; e q é um número inteiro de 0 a 6
  2. 2. Um composto tal como é apresentado na Reivindicação 1, em que R2 é seleccionado de entre radical piridinilo, radical pirimidinilo, radical benzodioxolilo, radical furanilo e ou radical tiofenilo os quais são substituídos facultativamente com hidroxilo, o referido alcoxi, o referido alquilo, halogénio, nitro, carboxilo, sulfonilo, trifluorometilo e amino.
  3. 3. Um composto tal como é apresentado na reivindicação 1, em que R1 é seleccionado de entre hidrogénio, radicais alquilo com 1 a 6 átomos de carbono, radicais alquenilo com 2 a 6 átomos de carbono, radicais hidrocarboneto alicíclico com 3 a 6 átomos de carbono, e os referidos radicais hidrocarbonetos aromáticos; R2 é seleccionado de entre radical piridinilo, radical pirimidinilo, radical benzodioxolilo, radical furanilo e ou radical tiofenilo os quais são substituídos facultativamente com hidroxilo, o referido alcoxi, o referido alquilo, halogénio, nitro, carboxilo, sulfonilo, trifluorometilo, e amino; e -3- W é seleccionado de entre hidrogénio, radicais alquilo com 1 a 6 átomos de carbono, radicais alquenilo com 2 a 6 átomos de carbono, radicais alquenilo com 2 a 6 átomos de carbono, radicais hidrocarbonetos alicíclicos com 3 a 6 átomos de carbono, e radicais hidrocarbonetos aromáticos com 6 a 12 átomos de carbono.
  4. 4. Um composto tal como é apresentado na reivindicação 1, em que R1 é seleccionado de entre hidrogénio, os referidos radicais alquilo, radicais fenilo, radical benzilo, radicais fenilo substituídos em que cada substituinte é seleccionado de entre o grupo consistindo em halogénio, o referido alquilo, os referidos radicais alcoxi e carboxilo; R2 é seleccionado de entre radical piridinilo, radical pirimidinilo, radical benzodioxolilo, radical furanilo ou radical tiofenilo substituído com hidroxilo, o referido alcoxi, o referido alquilo, halogénio, nitro, carboxilo, sulfo-nilo, trifluorometilo e amino; W é seleccionado de entre o grupo consistindo em hidrogénio e os referidos radicais alquilo; e Z, Z', Z" são seleccionados de um modo independente de entre o grupo consistindo em halogénio e hidrogénio, e o referido alcoxi, e os referidos radicais alquilo.
  5. 5. Um composto tal como é apresentado na Reivindicação 1, em que R1 é seleccionado de entre o grupo consistindo em hidrogénio, os referidos radicais alquilo, e radicais benzilo; R é piridinilo, pirimidinilo, furanilo, tiofenilo ou benzodioxolilo que são substituídos facultativamente com hidroxilo, o referido alcoxi, o referido alquilo, halogénio, nitro, carboxilo, sulfonilo, trifluorometilo e amino; W é seleccionado de entre o grupo consistindo em hidrogénio e os referidos radicais alquilo; -4- -4- a 4. Ζ, Ζ', Ζ" são hidrogénio; e q é um número inteiro de 0
  6. 6. Um composto tal como é apresentado na Reivindicação 1 que é P-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-l,4-dioxobutil]amino]-3-piridino-propanoato de etilo.
  7. 7. Um composto tal como é apresentado na Reivindicação 1 que é βS-[[4-[[4-(aminoiminometil)feniljamino]-1,4-dioxobutil]amino]-3-piridi-nopropanoato de etilo.
  8. 8. Um composto tal como é apresentado na Reivindicação 1 que é etilo é etil ácido P-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-l,4-dioxobutil]-amino]-3-piridinopropanóico.
  9. 9. Um composto tal como é apresentado na Reivindicação 1 que é ácido pS-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-l,4-dioxobutil]amino]-3-piridinopropanóico.
  10. 10. Um composto tal como é apresentado na Reivindicação 1 que é βS-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-1,4-dioxobutil] amino]-1,3 -ben-zodioxole-5-propanoato de etilo.
  11. 11. Um composto tal como é apresentado na Reivindicação 1 que é βS-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-1,4-dioxobutil]amino]-1,3 -ben-zodioxole-5-propanoato de etilo.
  12. 12. Um composto tal como é apresentado na Reivindicação 1 que é ácido β-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-l,4-dioxobutil]amino]-l,3-benzodioxole- 5 -propanóico. I I
    -5-
  13. 13. Um composto tal como é apresentado na Reivindicação 1 que é ácido pS-[[4-[[4-(aminoiminometil)fenil]amino]-l,4-dioxobutil]amino]-1,3-benzodioxole-5-propanóico.
  14. 14. Uma composição farmacêutica compreendendo pelo menos um veículo farmaceuticamente aceitável não tóxico e pelo menos um composto de acordo com a Reivindicação 1 juntamente com o referido veículo.
  15. 15. Uma composição farmacêutica tal como é apresentada na Reivindicação 14 compreendendo pelo menos um veículo farmaceuticamente aceitável não tóxico e pelo menos um composto de acordo com a Reivindicação 2 juntamente com o referido veículo.
  16. 16. Uma composição farmacêutica tal como é apresentada na Reivindicação 14 compreendendo pelo menos um veículo farmaceuticamente aceitável não tóxico e pelo menos um composto de acordo com a Reivindicação 3 juntamente com o referido veículo.
  17. 17. Uma composição farmacêutica tal como é apresentada na Reivindicação 14 compreendendo pelo menos um veículo farmaceuticamente aceitável não tóxico e pelo menos um composto de acordo com a Reivindicação 4 juntamente com o referido veículo.
  18. 18. Uma composição farmacêutica tal como é apresentada na Reivindicação 14 compreendendo pelo menos um veículo farmaceuticamente aceitável não tóxico e pelo menos um composto de acordo com a Reivindicação 5 juntamente com o referido veículo. r
    -6-
  19. 19. Uma composição farmacêutica tal como é apresentada na Reivindicação 14 compreendendo pelo menos um veículo farmaceuticamente aceitável não tóxico e pelo menos um composto de acordo com a Reivindicação 6 juntamente com o referido veículo.
  20. 20. Uma composição farmacêutica tal como é apresentada na Reivindicação 14 compreendendo pelo menos um veículo farmaceuticamente aceitável não tóxico e pelo menos um composto de acordo com a Reivindicação 7 juntamente com o referido veículo.
  21. 21. Uma composição farmacêutica tal como é apresentada na Reivindicação 14 compreendendo pelo menos um veículo farmaceuticamente aceitável não tóxico e pelo menos veículo farmaceuticamente aceitável não tóxico e pelo menos um composto de acordo com a Reivindicação 8 juntamente com o referido veículo.
  22. 22. Uma composição farmacêutica tal como é apresentada na Reivindicação 14 compreendendo pelo menos um veículo farmaceuticamente aceitável não tóxico e pelo menos um composto de acordo com a Reivindicação 9 juntamente com o referido veículo.
  23. 23. Uma composição farmacêutica tal como é apresentada na Reivindicação 14 compreendendo pelo menos um veículo farmaceuticamente aceitável não tóxico e pelo menos um composto de acordo com a Reivindicação 10 juntamente com o referido veículo.
  24. 24. Uma composição farmacêutica tal como é apresentada na Reivindicação 14 compreendendo pelo menos um veículo farmaceuticamente aceitável não tóxico e pelo menos um composto de acordo com a Reivindicação 11 juntamente com o referido veículo. -7-
  25. 25. Uma composição farmacêutica tal como é apresentada na Reivindicação 14 compreendendo pelo menos um veículo farmaceuticamente aceitável não tóxico e pelo menos um composto de acordo com a Reivindicação 12 juntamente com o referido veículo.
  26. 26. Uma composição farmacêutica tal como é apresentada na Reivindicação 14 compreendendo pelo menos um veículo farmaceuticamente aceitável não tóxico e pelo menos um composto de acordo com a Reivindicação 13 juntamente com o referido veículo. Lisboa, 11 de Outubro de 2000
    JORGE CRUZ Agente Oficial da Propriedade Industrial RUA VICTOR CORDON, 14 1200 USBOA
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