PT2576768T - Células estaminais da geleia nativa de wharton e a sua purificação - Google Patents

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R Taghizadeh Rouzbeh
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Auxocell Laboratories Inc
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Description

rtidbdrláo:
CÉLULAS ESTAMXMAIS DA GELEIA NATIVA DE WHARTON' E A SUA
PURIFICAÇÃO
REFERÊNCIA CRUZADA PARA APLICAÇÕES RELACIONADAS ANTECEDENTES DA INVENÇÃO :£S tePldO: dp Ρρ:Ρ01;Ω: UmbliiPâl ·:$· OTT '§:miA bípA #1 ddipItiS -"cr οηο,.ο . O SuOml co v.xdao iiTn'ic-’. η<Ί.-,- itut ia fsr.ai^nais, incluind.* células estectinais hem at ?po iêr.icn.i^ que podem ser: usadas para t«. o "'v =¾. ' a·' vjuo -1 ' interna ;±mudv3:ɧ-âpò de; uma pessoa „ Λ pelei,a de Wnarton.;, uma:, substância gelatinosa dentro do cordão umbilical, contém uma ...........ppptil aplo,, adlc Ipoal d p. o sImI ts. est amlnale:>. d I s 11::11¾¾ das:................ encontradas no sangue do cordão umbilical. Tal ubms aqui utlliradOf "geleia do Wharton" pode incluir aluot®: a caffiáda. a/Mv -10. ’ . u un: umL_li..M. ' ' c d: dulpiira Ps pplpla dp ΝΤΑΡίΟί :peomltoío o leolaasntò' de; d-iiulp.p: :s:sldmi:nal,p msi::f:ridaima£.s :¾¾¾ ppdpm ss* asadas: pupa· regenerar, uma variedade de tecidos (ver, por exemplo, Patente úi pdc ipiifTiti] 4-
SUMAR.ro DA INVENÇÃO
Os presentes inventores descobriram que o processo de cultivo de: dÉluips d' parpl.jr d©: geleia â.á Wliaotofi:. aliara ; as; oa/WçT-érls-iÃõaa i$pd ril-blabs. Sm comparação com uma população de células cultivadas in vitro, ps: çiinlaé· pb ifilbia d UKa~:r naç cdtu soís ^>d_ ;Édle:çul:a.rmdhi:e: piisreppa:,. :es®&amp; pdlle pel ri slop por breitpicp: ............MM:........peppIX..... moieould: 1.. icrenie nao suar........·:ρρρρ:ΡΐΡρ;1ρρ............... cfélulallaà. lais lnamtanro cs ii"C!lojt-s ^-u-,oNbri ram que as cétuias de geleia de Wnarton minimamente manipuladas sâo suds?: ace raiment 6 reais potente in vivo do que as células da te'iiii d#f ! CiililVSPãJ , &amp; in sect ms dec anvo ive ratít ura me todo pais pur: iir.tr células Bfteqlteaip tea. qplqia. tie feãm seat si meoeehidaiie dç dm padad < ul _ i> V. ± iv . λ u í .vi s τ i, d reebobo
inclui a separação de células sstamiriais da geleia de Wharton -di-m alo v.'iJ Sd as, -ά ;r τ <r-r uk sijci t k ego. ivclu_ a geleis de Wharton, urr. passo prévio de digerir o tecido, c s 1 vceu.vnii s - ο '"'’,η ^ id“s e dio» \i tem"L .gdd; iPciiii a: qeidlq. de Charted·,: -d· tePidd e dxMõiadg ;pafi c.enw aru sr tas c ''-n^s, i» uras ri m\ teta pods bei.«r braqmehÈds bb teéçidd aãte u'" ' n mtO % „r 1 1 C ^ v-π, r’ " ,V 1 V VJWj - te i ge_ a f . o o ''s ii ' a t _vC i.v Ur s i k. ^ v ' Wo\ de e^d * sete' ace te', j. -a „ m ^_s, "'-'"te ^ 1 - C O , Γ ’“e ’ '''I''- ' 1 ' 1 „ r 1 s trud'1 tet "igestcc; 1? celiua? est^n ; ·. - -te idva >' Wharton não unitiva das podem ser separadas de filtrado, como por .sedimentação ou filtração. 0 tecido digerido, que pode ser viscoso, é lavado ou diluído antes de um passo de s“P'dtôi ao, embora outros passos tais como a centrifugação vigorosa possam ser eficaz mesmo na ausência de ura passo de Ibvagem .ou. biddrplân
Os inventores também desenvolveram métodos de recuperação de sitbus as tutelas estamrms te 11 ίό ias a im ΙτμΊ- d' golria 'Λκ Witerton, C metcvu „nclux a parte it a são te Λ^νι]3ί te -v_....:. c da gteeii ao Whorin' n.ra culttetedas ie ecoroo c-.r" rfutenter 1te T/-To.hs cio.' n nu c a 'tetu_a de OtltehS estaminais mesenquimis a partir do tecido não digerido.
IteSte tCMtia, 1S vn; V' CS' UI !u v rW N \lt lvl!C O ϊ> " S teã superior ssc S-Vtidc s r-iti ^n taci <. up' ' iv> -* a- 'tentei; ri: ic -i s s- a iVr 3 hi => g^rte s ά v ' e'uu rute S t 1 s ^ Γ T Ϊ ' _ ^ J " - ΐ } ’ '5 ,r rcj'> on ' ”u v ’ -¾ k i m G1...C. ..η <: U Í t - ._ t S ' U;1 a t ^ u ^ , i ‘ 3 - estaminais não cuitivadas na qelefa de Wharf or. e a so a t , la- .o. ., q 3 t i t ~ =s " , ’b -a *' mi-nva c1 - as células estaminais da geleia de Wharton foram isoladas e
-f-pa “ ϊ- i-' n t .j,' t ϊ iit , - * v s -wcl iu^e ''t V
Wharton, mas não indicam que as células estaminais foram fi -t pus it c-d->s i- m t > us ctiu a- ίο·=> .também pedem ©éter: pemoemba© ©μ pel.©,! a .$© .PiAtben.:.. .¾ ©Ιρηρο® formas de realização, o caule de geleia de Wharton purific&amp;do ®: hiã:p' .c^sltd'padO' as aalulaa, s#©; s^laptanPiadmgafea:' iieeiifas. .bp > - . .ui <<- laul .-· s r- o^j-r; · me', ir i ie id> n mid 1 1 un -b i . t ' > :r' p ' llpdads viscoso, por exemplo; , ou as células podem escar totalirente 3 s;. . u- g&amp;ieio ..: _' : > => . p iv.m'. í "r, zn . ... t ' o:u, usa _,r i ociuçO tsnoii-, '.;a -Ά >ί>Ά' de s = J ;q,rlibrada, ΊΓ ., ;. .. uu.' dJddvi'* '' ;, e rl -T s, / ' ;.. Ό > a ·. í^dc rea í e,uo, u czluloc u at at x ' ?u a da j-bemi _v Wma-tnu. purificadas são mantidas a uma temperatura abaixo de 0 °C, u. a i xo de - >c h , ab o m -tu "J c , abai ; de l-v. 51, ρ© exemplo num frasco, saco cu outro recipiente adequado a tal ; temperatura:·,. As dilddaé ©stamrna.bp :dé peieia.. d© «terton puni'f.rcada®' -dl© ; ©u;l.M.:«aa.e cia invenção podem diferir ............sb&amp;afanpdedMdpPd c-dae ceiadaçc estaminais raesenqu ima is 'U_tim ící ca © W..art n, i";l. ume bi ter^nç ^ rirei 'dp: .pxppépppp; $$. .qapsefâér© ©eliilar .dé am ida ã®tó Ou., três ou quatro ou mais) de CD4 98, GDI05, CD133, HL A.-ABC, Aflrl·, :G;dl:4:,i GPl-tl alou G®5fu ':Im alquma®. rarmas ,dê: realizacAto, por exemplo, a população de células estaminais de geleia de Wharton não cultivadas reduziu os níveis de --p -©-©uo d·1 .-uosrfrilv ir νηιι,,δ: f1 ' o e '"Άη' *ί\ . inaupu com as células estaminais mesenqu ima í 3 cultivadas a. partir cie geleia de Whar-v.cn* Tanto CD73 como CD105 leram relatados sqMíj raairoadoares ; puma, ceddi é-e aea:e:agd.i:sii:i.s. Í:ond®dd:e:odsmdHd.e:;f:.; m uivei rc > m i d. 1 „> ' o ^- eupêeiiçiês paiiiiames de células esc unduei.e de geleia de
Wharton nào cultivadas é consistente cam a identificação '"e" 4" is η ί,'-' ' an a Lre *- J 1 -t - 've^ Jr! ni~s v e 1 ia s 1 -=> -mn pi t a- s cd, ascn, Células estaminais não cultivadas da geleia de Wharton são mult ip o tentes e podern ser a dm in i st radas a ura in divida o como parte de um método terapêutico, por exemplo, para curar um uni; t , ,, ia- ia -rJ sdc d k. r ^ formam de realização, as. Oidudaú e íanvu^i du ui u ;i d~
Wharton são vantejosamente autòloqas cu alógicas para o .............se:jsit.@'4.............................................................................................................................................................................................................. lembéti aqui divulgado uni solução homogénea incluindo geleia " rt 01 . - j ·* 4 p m - α ' co -vo ' % * e~ s ' 1 < ja de Wta rufara t:rnar um liduidp dlsçpdid s- par cicalas de j ι,ιη) a ” 1 -, r :nc tecido ou células não digeridas, do resumo para obter uma solução nomegènea. d .sieiúÇio çpcd.d:hml:mé:ht:e. ser ddieitla,: ;tM: cgmd ροο mia, vUt\ md rui 1 ibruaã _( u\n mdlhçlm emtérdlfàa meduéd.r a. 'miseodidade, M, Bpluçi® podé; ser· mégpòada. déSí medulas., quer: removéndu aqbsdwpçêálmsppe: dotted ste Osindas. du reduzindo o número de células na solução* A solução pode ser Òêdgaiadã !:pdr: edêmpdp,, ê uma., ΐρορρβίορη. déi -id·· '% du ai:u. * > o l\x c ου;χ<:ιη1η,Λ.ι ^ > t il „a1i ora un orou mo ae cultura de células.:. χ.αιτ, s s t * ~·η, ,1 í ιτ’νη p^ uva 1 >. v. métodos para manter urra célula misturando a célula em uma soluças homoginês, :lnpi.;d:in.d.d. ç gêdêiis dê; iWhârpçh., pod êmimplp, a. _ :,o :?i i 1 -1 1 1 i n - . uçu ; p~r - d. ç ··. to ·>: ;...u···' ·'· m - steãgênslo ssmgiêênbêníis ç. dlluXãt teu tepddcdnds a seliça© d Uilá; çopêdiioiê âtÇhâi d caduls .ademim, d· cidade .gsds .did' li ! v ' η \ v. V. J u , a v - t eeiéeMiml mrm.tiporente, comm :usa O-Insulcí ast&amp;minal oreaenqjímal da geleia de Wharton.
BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS 'a·"'-.-; ''j: aox-í . _ueS a \ .uttctucr s 3: "lese'"'*' a, a:isà ', h'-at deito &amp; invenção em d.L,. podem ser male completament e compreendidas a partir o.a seguinte descrição das várias formas de realização, quan.de lido em ccnlunco con os desenhos mmnos quaisu FIG, i reotesenea graficamente a eficácia ia vj ro de células ná v Kt.ua.. .V vU dl t t 1’ ^ ^ tf' ^ r, 5 .- m it .to. v. 2 >- ~'r . 1m , (Expanded WJ MSCs) em um ensaio de co~ttanoplante com. células .....:· -- eiu- qm - i i id :. v '· ^... se ..·:: - ;; ... í> u; · ao 1 d ) mc '·όγ< 'Cí cí<~ um- ^e dedadas da medula óssea que expressam CD15 humano na sua éwpéi®sS% que sorai eamo am, aa ρ;α:ΐή:ΐ;.1:ΐ:ρ1:ό:ί:ρ; parã .............pi pinh ar €e...........d® Γ eldaias...........humanas fcranspl exit ada s "" par a............... eamumòexsgos ;
FlSu i .Ltzm'da riat.timrie, peas eras ur< j ^ m cid s.1 d<u ^uiui U 'xo xlnlsr \.Cmúr, 'd»uh, ΐΓο 1, 104¾ ερίΐΐ, aiA-AS%· èw%· ÍDÍ4.IF 4¾¾ :1111:-.¾ S® é Του' , a,r Item- a-venam" o i-- a un\s -atnrin-.~£ da .galeia ®aítiah ala ορΐ.ρχ®:®ρ :mei.i:.di:s pimp hqr· arm hiael 1.® nv’mõi' jrarhi uiur do marc3 on na cuj,^--fj ^ue mldu; e xdffe d é uma descrição gráfica comparável do número de .............mifúraé.....emiãminãèf.....r aiu gnree-c mn').,. 1 *- e,t e^ j ^o geieía de Wharton com ura nível de expressão particular do mummies na ouperflcja ^.rluln ,
DESCRIÇÃO DETALHADA 0 presente pedido proporciona métodos para a purificação de 1 ] - <x b i f ' 4 <r 1 - ^ W t ϊ i , í - a >- . - , i 1 art pasço de ádlapás., :: , " s i ► e , -a'ar add pci ! 4 , d . í ;rp-u’ip r- a_, tc i pi_1 n. n sapefi o:r mirando campargdae a® pêdaras eadamicaia .o»p.a:aâÍ:daa cm cai tarai: da;· qaicia da %art#:íix. d apcidatcoo. dpcdim fçfaecc
V Ç Ud' )C s < J Jp 21 V1 v' } Ϊ ,. ^ 1 I ' ^ cr L asada, por ezempio, en uri processo de manutenção de células,, como m cultura,
Para proporcionar uma compreensão gerai da invençào, serão j ) -x a tu a ’^ι.-í
r< u i __ 'J Ôr 1- - 1 1 c c O - e 4 i s 1 ΐ— 't- 1 ^ e ^ p ' V
CtirtC Cacas A purific.ação de células estanrnai s da geleia de Wharton : < a _ ra ^ „ ' ' ,c» i => u “'-V i. + ^ * 1} χ ^ p^s t j n ir tecido digerico que inclui geleia cie Svharton. 0 tecido do pcddçp; dabi.tidal ipida aer diaaadadp para rédodéá aa ãddeild# a dei.aa a deptás paçdecsadc' 'para «aímiçar a Spp&amp;alrcia. ..............didpdiPdeil:..... Ιο1·- p^rclu-.t ο»! χ jHo» qudtauar darmía.· de: .aamèíòt&amp;r' mefâaMidáaíêd-te: a. área xsúparriaiaX da. peaidpq: Mar ρΒ.£®ίΜΡηΜρ ea.deide:: corte. Címo pç piçidç -áii<3^i]a'^:íi:rfc::^! ..Pd: 'tedadp" em ceouanca fios cu pedes :pid:r:d:édÍ;pi:ca.S;,- cdMo ·||ιρ®# do ÉidsddaoÉo da pigddpi « ACtss das' delates' aereii deparadas: d: partir d.® teei.ao: digerido, quaisquer fragmentos remanescentes de tecido nâo d. Jell vC Sã. Cc r luiia 1Ρ-ΙΓΙ e Ituiu !< . la <i lli.cx^ â subsequente purificação da®. çâtufao,, iSapan:dadÍs do: "dia tamadíãp^ a tcotio çáo dc^rfedo padO:.· aer- .remoa ida 'puf si '.rapid' X "· V. r ” Ç a ·... ':. .. ·.. -·. Ç ,. 1 ··! O, ·! U'; : r , sedimentação íopcionalmente acelerada por cent tifugaçâo: ou "· l i Ό v°t , px ' ' -e u> >, a cevai 3 ,, .,-, ; u 1 a j. > Ρ*ν·;;!; "pr. 1 1 t conseguida por sedimentação das células .a partir o.e uma
Tmc^uix λ s 1-m Οχ·.-' -.mm x “t- íxx% g 1 xv'*\ si 1 ' a pé'<|ime:PPdp:ãP pop giálibadé pospa pop çpiligpÉm, o, :(proco;;sp:o: de sedimentação pode -ser acelerado, ptr e uoi-, χ 1 '-m centrífuga para aumentar o movimento descendente das células através <e, em certo sentido, for das), Um desses processos é descrito no Exemplo 1. Após a separação, as PÉlupÉi est amimais da geleia de (Μηορίρηdspãp substanciaimeote Id'PreiS: .dia geleia d# (IballPct., Ima- νβ·ή :pp© o· tepldd Élgeçdxífe - 00 _U ) t ' 1 - v. 1 , e x X -- x. £ Cx C C =Ί _ V ' ' * '1 1 J v com urea soluça o estéril apropriada (tal como urra solução salina tamponade) em qualquer fase do processo. De taco, após as células teres: sido separadas da mistura, podam ser .dilxta V'* isVxS-'-'-c i V x xl x<a C 1 n,u: dds ! r.í xl = células conforme desejado., - ii^Ux- pvmv rei a m <}**'--1 a p U d teed x,· n -As· pêlulas ':s:si.am.ipai::S: de psieiá:· .ád iMllon 'pnlllioadàs psdsm ser úpsdòç. lmedi:al.:arséel.a. nai. paPléfrtM/ s® .tow®;' .«a ' Mídlilç mod r m , lipom-mie, r si nu o, .= x dxldS aio cr ropreserradas em nitrogénio líquido ate serem necessárias, tipicamente com ura criprotetor, como DMSO ou ddppriipp;, e muitas veres era uma solução tal como plasma cUdlm n r d' Λ X, jm oa d- s ' n tnemt <\”e cclií.t f^st: s m t' t o^^nt^- rei --^λγπ ο. ·> m r-.m t'ml i n u _n_x.iT x. if v l3T -et ^ j. - ' i x.r t aí regesésal Qualquer diia variedade de tecidos comc osso, párfllapém,, gorclura ou músculo. Essas "<· u '-.ρ^ιγ facilitar o enxerto hematopoiét ico e tern o potencial de em v ti mm tmr imunes ,10 Po qm ' ->. ρΗ ·γ.· : -> 1-«™,:, ,: :·> ™ :·φ:>· >"« c ,:--. | p :*.*> 0 j ' ~\tdss r c1 ‘ : 5 :ox - ©s ' ' m- a·» * ^ ce X »' - n *=> ii-iffeeKfee* -#0 ©ΐ.^Ο-Ι:: ΟίΟΟΟΟΟί.®©., 0 ®ί® uma população da células a partir de geleia de Wharton quo 1 orara expandidas era cultura ere vivo. Por exemplo, embora ah’ " >q b " t ' u t - 1-. m ^ - - - ©! Ή , oPa q dH , o t 0*. c;»iFλ j, CD21 e CD90, as pPpUiiâçõPi'. difpqdit s' s-js ;q;r do -xj-re s-c (on a maioria, se nao todos esses raarcadores, das##,;· M:tl;|:· bn outros marcadores podam ser usados, , 1’ v u λ a.. .. =r combinação {como dois, três, quatro, cinco, dai#:, abtb ou todos: ©ο. git©bédaéâ::#a;r:ds:dqr##l,f: para ibantirfirar o
On r®‘ a' o-, un] ¥ac o v, „ a^ir _ _ s , eaomo,, 'post -exemplo·., .aguai©*;. ; bqriaabaa: do: tabid©· dr* pordlp· umbiilaab eisU' para caracterirar a potência biológica das células. Γ t abt-t ad^- 0 processo de purificação também proporciona cipicamente prqdntbS; nibig:: adiíÇidddi#,, Por exemplo, quando as células sào separadas do tecido digerido, o restante tecido digerido :é:|#Ot:a:d:0 b UtM ddlnÇlO· abb®, ό qdbéril :que> p©db: Sbr 'Udadã para maMar oêbabgs· iam aplruta,. pop atemqib} >:. :.Ê ap:oeo:Íaá©: qbb. algumas sbiabas· podam: ©star presssbss, aribora. «st nurnsros "icsren laluenf- r^ u i ks, ^ e-r.t d~s -· sM d ' 'a é astéril:,. esq©#©#®:! :¾ qèiulas derroada do· iasid©·. digeri içn. dltdrn:at;i.©amdd:ta,:' ; a soiogid: ·ρρο»· adi' eompdstamanaa basprsgiba ds çbiglas::.,· Sota solução homogénea pode ser ............ebngslgba;,.. tpor axempJo, ......a.......~id d. cu abaixo) ..pdra......:ddb................. posterior.. dUiiaduer: £ÈdfdidriPdd....dd···· tecido não digerido remanescente, «pis: :Um pr©dessei pe:· :itgestie: Si©. tembem part:Icei.ardent:®
UtsiS·, '"Uma ««« q;Q:« «StéS: ·ρόΡ©ίΒ: S««: :Ú::S:ádO:à. d©®©; USã .|:«η:1«: P© ............««taras asSadi'dars: mesadqui mitbaas. dal aisrádbSí abi 1 iaabdb................. bicados: pad mo: mm a .e u .-· u n de células estasiinaii ' uca' ' <1 . -) m' "1 ^ ~ í"' t i Λ ^ . > fato, a sedução de geleia cie Wharton homogénea que é, em algum sentido, um subproduto do processo ue purificação pode ' - - a N l i o ra wt’ ^ i ~c, j _ < um sl partir dos fragmentos de tecido não digerido- Desta forma* c ccussí ' t. cdisi, ""ic rtj alien *<uqd:;' >' a preparação de células sscamínais geleia ide íiliamm ftis i 11 i 1 -se ®·-<η mi w f c Mi - _ t ' -5 1 ' -=5 , dêdump estaMpils m?·' taucuo qu·^ Μ.> s-xpar u 5as *"n -..c, r ! ' u. i:.γ\~ u v d .. n s ao α m' ic a χ d e 3~, ..d;, da solução ds geleia de Wearton, .................................................................................................................... m-in, a '3 ir \k i r, u\i -a m.; r N it t,u a s;a »it -ri . o dei θ' ~ rãx> d~ cultura . *puf ?ι αν ilvJa^ :&amp;t.MxítMãi&amp; mqsçípqpíqiiiç:: bscibadsg geleis de BmeSea..: A primeira fonte é o tecido do cordão umbilical não digerido*
Jl ^ ' uni ” - arame' e Μ·'·' ' e\ m nme t tecido, o tecido não digerido restante pode ser utilizado Pdmb 'fdntd: do sepadddsa daria. a qgpaasSò seis oèlmsb esbamimii Itiadpqudffiâds* Uma segunda fonte para a derivação de células :mam um íi mzruirm - --3 a^r -mulm ordi "tu da da 'Wbâdtbn derivadas:. do· decide· di:geridp..,:. 'if dsgesipq. eozimá tica corta as ligações, cruzadas de colagénio dentro da geleia de Wharton e libera as células incorporadas. Conforme descrím aru. u.u:inCc, os rotulas , boredm mr a íerma de Snsgshpiep #e célula única podem ser processadas «: çC\iop£:éÇ:d:rÇ:âda.s ; pars odo; tesspisblbb mdbgpieti A. 1 m' !jλi i\ a °nf^, ussas ceiulâv' p<'3um ..·,· ι ικογι.· -n mo o:ta fonte de semeadora parei a expansão de células estaminais médeqauiçíãii^d:, bless diasa,.: q gelei» âa. bmrter, e®. poa- uije^ta qtm code ter ulií_„.k^ bemio.....sdpidmabfco''Ipará:.....d:.................. dobimpSe de; biildlsd; dmSmibsáe ,&amp;οοοοραίρρΐ®:. de· amPo;®' o® bebidos digeri dos d ®ão digeridos * ieu uso como sopieríeqtp- não έ necessário parra a derivação da culoura, ~c...... ;·\ίλ redor, ir o tempo necessário para derivação e expansão.. % ubdpid· -I : SnltXira dd aderirei ã :fe'ÍíOfâ.ÒsaB::sP:ep::a:Í.. rcoined r am ente. ddldrradã Para: φ expansão de células éPdaig!Pairs;- ;ataa:sag;uáaa ia, feaapxáatdraa: pode: osr ddíxddadq para eparac as células :eòPa:rxda.Íf icaspappimaaa Pai ti.iJ._a αι; ί.α1ΐα,.’κ emp ·.. m....... ir plarxaaaciras- c o arm ar a , tuja;a. au ve a-o- ^ iulci m mΛ ..c caracíeristicas de pertusão in vivo do cordão umbilical. As células es Laminais mesenquiraais poderá ser derivadas mi siolme'd^ 1 - i_tui :s crD:.:- ousa ; c a.c n. tiVirainrsHU' 3 othm m ifx m it 3 cmpofadm m mmrm x_x.*dm mism-tis para, v*.o 3s. ' rj _i d. PP: b-.^r^v3tvics podeis Par suplementados coar esferas misroportadoras pare permitir a _ X O x ^ S _ U" t~ ' > 1 x f - Γχ) ^ ' ΐΗχχϊ-χ^ d e n t. r o d o s b i o rrea t o r e s .
Ei&amp;EMPBOS xd tmorça'' é am is ilustmoa rda ex-rpim mq mms, m ~ std lo i 'cnv, me''a. para í t 'u- _ 1 u ats et rvo3, o mo a'reir. ser interpretados como 1 imitando· c âmbito ou conteúdo da invenção de qualquer maneira. exemplo '1 Purificação de células estarrdnais da gele-ia nativa ide ddarpop e pplpplp -¾¾¾¾¾ .de- gdlppq :ρρ·-,.'1ρρχρρη:,.
Cbiddpst uddiJicai'i fdrad .pebo-lbiddst dm iiddipidiPt::©®: épbdréip ddpdiciffiic:: ddPtPp: dp IS· Serar dpdP: o .mpiddddd da dPtreiay dip um gabinete de biossegurança,. forarn adicionados ao cordão niafedl isal ôm. uma rç#te:ria; dei ropera dp: çerdaç· ambdidear dpi; ill dd "tampid: 1. ig-endafôxddiná.: Sd .qqdmli:,, IP'S -oxiidadidsdidP do facial e j Ί j x. t Ir.damsbxdtpífeíOábtó ................. tUmpOTraba. p® ..ΙρΡίοΙρ- ®1®0ΡΡ ©Scércl:! < 1¾¾¾ ιΐ} "iv, ) . , K l s ' ;,)/ '+ - v ' . 1- t' , u τΙ de estreptomicina e/ou ID ug/mL de ciprofloxacins, também padern ee:' ad l ci o-nados .30 nano 5c t ua substzlaides p-01 ,p 3 30-=’ ít ic,v>‘ ’ un = '5 b V,ii tã *. c raia is mirto dc t'cr n-v-r"v'i ,>? „ -'l *·, '’v^,u* ia; c j a temperatara ambiente por menos de 72 noras. O conteúdo foi rodado novamente por eproxímadamente 10-13 segundos para limpar o tecido do cordão umbilical. 0 sangue coagulado, se Bgldbnde s:a ®:íjpe:rirc:i'® d;©* cerdSc oraMlioal,· foi ' ac, o$a e! lt mun i = toM1 > »e j-r-== 1 a·- o ' i;^e\u <t tor iav tluli'V t n ^1 i 10 '-m ι a ia gl. viC fc.tr 1 at. ,\t ο , *,-*= . . ' s „ , k, ' g' d = ’ n , ui [-=1.,3 =a c α3Λ red n~ 1 " -rtun. Cádi; segmento foi ontfo t.d.vici.al rr.tt- dissecado da o í ud ι . ί,Τυ, atta.l [=11.,3.113, [O S*=gr£=t - ot = c - => n 1 ' d', _ - ot -. 1 nm=> pl 3 I' . <-b ^ 1'Ό nu. is d ,as acterm :® uma ceia :dP i ooòdle umbilical foram localizadas ao mlsçallmar a saplç: tramsver&amp;al ti© ..sagmaintpi .d© lébidob* lUPàradb tesouras de dissecação, uma incisão for feita entre as duas ar diriam, Ιο» doll pencils úé feeied© ou ©amoil:,:. o: ..boril:© fai pimãdf .pb longo do* ηρκρ.ρ1Ι©ρ1© *d© %.©cldb, rasgando cuídridoaamente c tecido das artérias e da veia. Uma vez que r-t j r~1 ;pU' _Jf . ^ jf ^ lo .1 .a ,.· :.- e”3i£tda usandt uma pinça estéril de ponto fino em cada mão. As duas artérias f o rara pcsterí entente localizadas e excise das, e o tecido i: rc=-- :: for 1·.„" * ' ta 1ρα -.mia., oucch, ·'·,-* =1=5*0 de dissecação de 150 mm, ................................................................................................................................................ &amp; 'tecldb i:oi:/ .depot ®:, bElturabo em pédâçoe ............ηηρρρροηΐ f lismérf d:d.....opá' ;I ©sio drab:.....dii.....blmsoodçis eâo ã:,; pèii©·............... minos-:, :S ::131.00:1.00,3 04 ate mu© «, Pedido: pic-ado- odmelobedté. f' i cbt . d. A '.um <. nc,'. r n _ul e n 0' -ma r r 5r, imiio ti em diferentes corçces cts placa de dissecação pare minimi oar ( 1 "" t -Í i ^ S " ' J „ t , v 1 .--0^--11-- O último tecido moído parecia tecido oo solo e nao tinha nem , ] . ί v - ' ' , ' ί % 'm '.v ni , - 0-'\ ,r .¾ tecido trituradas tinham troa secção transversal de cerca de P mm*-·- "Ú P#-e-l:do- mbido: pbi.: çohpembP) mum bn-fe-o P-iu-içe :ec'tec;ii.;i;z:cd© e ropnilAidtp
Uma vez que todos os seamen tos de reciclo do cordão umbilical foram dissecados, picada e adieiorado ao tubo C-OP :.%.:SÒÇ: OS: .1. fl t _ o um - >- tl'' i"' d'd )1,ς :L .!e rdno·1 i^' 'too t’c -c :ép % if φϊ dp plp pot p i de ; dq-idip dm p-pi ípip paiiipddiddii: ppim pbbpd tb de Dulbecco; foram igualmente Adicionado. 0 conteúdo do tubo tdi: ímiscudado posr inversão/agi ta çao várias vezes até se obter í t ait " o_r riu, " i_ 1“ c - > - =t t pimpa do- PaPo -para- -mvi'tar viâ:asmb-inPo.s. e- -is:psraiti;n:a-di:© eriuoads::. ' rxoi s . d? : ro fP _ pcrveriPado- :-còm éP-andi a viSA a: 'a i.> ni m tilo r " , f. isrmahr a:.....dprmrimaoambbtid................ ilb-p: AdM P-eabr® i da lufia .iao-ppadoira a al 'J:£ bu-ranpe- aer . . ria 1anv 'tt os uo. - -n 1 cl, c c . 3 r... o n it
Plparaaaraanáp-: Para st * j ioi'c o tecido. Após ao v o. faiejne'tc -as i^ns, ^ ad. for χ DOMcve v com 701 de etanol e retornou ao gabinete de segurança de Pipa sppti r appgo: _ io . i > u_ pr_j. Γη ; -ms uiltratx t; ml; uoa -.ulav de flit"-' IP; fiei pli ' u ue) paira, remover padlppiar PèpiíSp uao Pçprido trd u 1o ro._ ;o > n_Jj, SdíiO; -a-: géisi-ia- do b’hartjo dice rd- f^rr .ma < '"sisfenru a. um. ..mui o ^ am WÀ* lái tomado cuidado para evitar a contaminação ao λγ ' _ i tmu - ^ r, ao„p;lsr a 0Λ1εη i tube tea rr'ccad m poe s ./a - v-r tical, é a on t rmc a tãi cu_
Pamu remover a geleia conectando o -“ubo e a tampa de rorma tão completa e esterilizada quanto possível, o tubo e a. tampa f orara afastados até qua se saguísaear pequeno s fios do gela ia. o v 1 f ^ r 1 > - -"O e > í α ' qeiaia da tampa. Foi tornado cuidado para não contaminar o usaq do tua v.m a a;’ iv < - N ^ -. N t removida, adicicnaranv-ce fã mL do solução calina tamponaba . v . dud u . t t_ v o o .. ill1 a ;o loi-t q t· r p,< t,, substituída e apertada, e o tubo foi invertido c/u agitado i?âpi;®f ψ&amp;0Β0· ·ψ&amp;&amp; btafludel, ::1 fíãíripá: fb± limsvldi iouf dàdòàameptl d à bnliádv d© iff " ii áo t' no f ' apaialdsald' ,na gaff:© ©νρρνίον ds. ~ *v tr '-d·’ 1 mdntáq-em· iol ©nfad - virada papa. qt?©: o.fpbQ. ορρίαΐ© 1©·. Sd mf fosse cie cabeça para baixo,.......................................................................................................................................
Uma fonte de vácuo regulado foi ligada ao orifício de vácuo ^ . ,, V,. .mJ.J. vo j ? .rm .-...v <_ il , tea t, ai p. " ) , v-'v’c, ‘,Π',αί b' Γ ' t.tv-·, . oe r. v.c-τη, , b ' l ' t '1 í ' U-> 1 “·' _ _f s ç O ^ v- 1 -w c tecido preso no filtro. Uma vet que todo o liquido foi il„ti3 o - / > taco i''_ i©sl„ rade u c timo vu © ) d foi ..r. tl for -n ad;<~ ' => P e i i1 " o© ;s ^ - => i ~ - +· sa j ^ - = ta gpm ivsfdtg dd? ιβρΙβρορΙ a© Pd®©- ©dnlç®· de SS- d®- gara tada© da olialas -rdafand©.®:: iqqa: gdlem. feel aderido as:# ladd©' da a© lundo do feb&amp;d·,:·; 1. -tampa· d©: tdfeo Hi sunst n j, u ^ aj t d_-d-t a :®. fado. Ιοί irdvárf fd©: bp: agltad© -vária# ©©ré# para lavar- o fundo © os lades de tuba. A tampa fei nevamende removida © o tubo r.cvamente lígano á unidade ao filtra, 0 vacua for v-ç ···· '.·©··-·· ©ff qua + vd' .> liquid) "vv ;ss? puts .do p 1<~ fill'-”, f rued ©n cue c 00)0 110 rm ^.'^οοη^ο. t ..do do véou,,, 0 -volditá -fatal dd: of Ilf fada lai dd. ©ρίρνίΐΕΐΙΙοΐϊΙ:©' if), ί®.:,: lia :η.@©©-0#:#:©·|:©'.,. d dól.Upâ:©: ©ail©:# tampOndda. #:Ρ®:;' 'fosfato^ .d© c> 1 <" * v> f ^ 1 v ^ i > U r > i j j o r -u u v.i- i iiu, ia? SiQ- dt". Ά· f:â:íB|>a, l©! d©:loicada' fa feiubo:·· die.· jiltradd d ifl'Ememalnf:© :s:©gur-a, ft -s?5ít:.e;l:idr da 'tubo ífoi· :pviv©:rl:Eaidb. ppm alpob-i a 10k 0 selado com pearl cura para- evitar fuqas a ooutanvi nscào orlada. 0 tubo fox invertido/agifado várias vetes até que a geleia e a solução salina taraponada com fosfato cie Dulbecco s„-o’ 'o m,u .. ^ . w 5 η.ο . 1' L>r i.i ,-,κ! ’ o:la\.de ^ociocr . . 1" ^ -m M 'u n , - r a, t *’ ' di ' ^ ^ n .. π s n ^ para homogeneizar ainda ruais a geleia, com inversão/agitação psdipioSai :o t r-4 'Ur-^-L ί jo r- rn uniforme. O tubo foi novamente pulverizado com 70% cie etanoi :© voltou pana: .&amp;. gabanbb® du bioPoaguironipâ*.
.&amp; gçipíia:. vdb·· Ifexhon bigurida: Bo'ctPiddcadaid fbt dstao Alvadida .r u\ ; ,rr rfreoc Jo ti/>.O da b rtuo, ascendance B ce.-v rrr i " < '< th ur;J i> ..x. da o um ;xal n/u - «fv'- r ir - .. - ··· m ...... · si ->' peto inicial náo excedesse 30 gramas, foram. nti li ta dos dois
)VU 1' "5 , V ^ 1 Λ 3 " -- ..-4 V ., X S <_k u u„i = _ as -'rst a:, nrod v 4r -3, .„γ-, rr \ro
Cada tubo recebeu um volume aproximadamente igual da geleia; tí o/iidadb dpi ho&amp;atu .pata, idle qtaliaAlpgr o hastbhd' bad túbúa.·.· s. '"oiiua de ri. tr'c tci dopeis ieva-c a 50 :cL com ablucib· salina taicponada com fosfato do Dulbecco, e os conteúdos de cada tubo foram novamente homogeneizada. Posteriormence, rubo mo bui "^ooado* FA . „ ao cue tinned mi; 3 e 1 a d o c om f í 1 me; Inverti d o / aba 1 a ci o v á r 1 a s vezes; E c o 1 o c a d o tm, IA dfidiiddb1 ia : idiõ :S1M:) eat uítd, idddoddord a. 3.3 blbahfb cinco minutos para homogeneizar ainda ma is a geleia, com inversào/agitação i Acoimai, confo me notes' a r 10, at;i: de ............ddt dm:. .uma... .pAibuts.:. uni. £ hrmb.........................................................................................................................................
Uma vez homogeneizada, os tubos foram centrifugados durante ............lAAiAÁbm a ?7 cC, depois de girar, um sedimento celular estava normalmente presente no fundo de cada tubo de 50 mf. Na eusèroia de um grânulo, os tubos foram .submetidos λ 1 Ά '· g hui ente 15 r ru-os a , A fum. Ά a pulverrcacfos com 70% oe etanol e retornaram ao gabinete da _ N „ i t a ί η Λ “ s r 1 i I ‘ ^ -1 ad ' \> s, ' > , 1 ^ t e -Ί- ' I i l'l„ t ,,. c , .η l ~' . 1 .. - , 1 cun 1 ~, \ a·'', o uno decantado, usm *%-àt. ί > ί v i ^ j^i3i t ^ v w , „τ , - o' a - , *- ^ _ ii ii.- j.o, a"> ,><i L c c ·" SCí ”p:. -c"' ' "~a · :r-a re- ι o e.^arud- ^0^1 pana dalpiaad célula::s 'eutumlílaiP, °U>a míj relera fo telul'm, íl rem aui.u J a Jt n , de sclucàr calina tame uu aa o..,n Laçara ο- Γ Jbac. a. Os tubos for&amp;m coberto." de forma seguia o lorarn submetidos a vórtice,· invertidos e/ou pipetados várias veres para misturar bera até -- e _ 1 n- -< f\ rplt. u tt, ue sui’cr; ^ te ui <_ t ,. ^- t,s tubos de amostra foi então oombínaao usando uma pipeta em f O ^ S -<Ot - -i ^ ' c-v. s^_l _ : ΓΠν,-ΐ'η i "c i b$r s ί o 1 p., o^ ,.o =0 ?( Ίν, rest notes, cue '^imo^n oren nd.o’ ' s tua c ifjco.c, u p· uol.nmd Pel. .léuadu paca; 5®. mi aluado u:Q:la.uIp: :0:011¾¾ ’"ίο 'ίο " ' ..um: ue γ ι o^ cu u >1 trtu foi tap- e n t ’’cnxu^Orvé-Ll vooc ^ezes pura riSOta;. C .uc foi eentríf ugado durante 15 minutos a 500 x g a 35 °C. Um sei'^entr ne c?it„tc 3Sta\3 cx lacntt = toes-"..» r J paste iitlu^u a ta?', Iz a> còkJ(i i-= uT a p.^u 1, o t'l c f u •'b.;n. r" : ui ·. ' "“'O \ d·..,!, it» 10 r ^•"os <- 77 1 .-cou rad^r * e roi cuidadosamente decantado num· baião de residues tie modo a não perturbar o sedimento celular. ...............:. .Ifi.....ml......iú.... ublUpâu.....'balida......Pamppuafís......com................. iou fiaPo da: iulbucuu IPoam. adluidUâbus. as sPpiúéni® de: células:* depois PP o: 'k' fu_ --u^- pv _ J _ r r j. > ί c ..........'vêmÍM&amp; veaasi' 'paid' Pol tur a·" udupauâsi ρ ρ ρρίαΐρρ,,:.....ad'' uéi EiP#................ foram passadas através de uro filtro de tubo superior 70 micron. C filtro foi colocado em cima cie um tubo cênico p >:: : ; -·;.,··· -Μ: {?> { , ; ρ^Γ'®© ν | ,: ρ:ρ ρ::·~, ρ ρ"« :φθΐΒ.. d fídia' padlid de: W® .pip® da ::ead§afl .cfg: df .ml.T. direfcamente acima do centro do filtro, mas nào tocando ©
1 l 1 J - . a C ' S» ~ 1 ” ~ a v d _ a t, +'' > ; l5 ’ Γ. , l ' „ ,’wv \ i O d® 50 ml.. Adicionaram-se mais 20 rnL cie solução salina tamponade corn fosfato de Dulloecco pare lavam: o tubo anterior pa Λ-vt '5' í 'fi np^-ra, - > oe ’ "-ο \o- ^ 1-¾ 'apo do iUo\ liddd ..li :mf faddem jasaildst patl, a, g:ifd idfiiai .¾ ίχΐραα,. :¾ ®α1;ήρ.ΐα laid® dimpadadi a| iddfitd #&amp; δαίΐαααα .idiaionai £ Vaor udv. -.. c ^ : air re.o dr ixltrv pa., a l«sut o ^ olur® lidai. :è: 5:1 .0: fildradd idl .ddaddiiltdadb danando. 1.® ddnalds a· Ifil » ::g d 37 3C. vm sedimento d® oeinles estava π o rim alimente presente 3 ~ i -i ^ v o . i , -K >_ f, la Vb- v<. i <- ,® _ - ‘ ·> s, a' ' V' ' < - g daaaaài 1# didddda = „ t 3, -'\t rr dlt r ι gu_ ^L_na '<t ovi , -i ec ^ o n v." i ddjn te., onde· o abdadnadaafd fax dlnanbadb e - pfli :am dalad. dl r ·» ,nus_of se coac ι η-o ^ortu .. a* d sedimento celular.. 0 v__une i r 1: d^. . _wado nr -,3 mi l víico ri' sa^. )j tamponada com fosfate de Dulbecco e os teores rio tuoc foram Sidddlaadbd pdd pipatàgard, dildâiã:©. sida ddbddsd. dpM: adi; pipata "de. ISif) ad, d· .auBaenaad aelnind ddí misfanada m ama aildsndé: -ία· ί,Ι dl ãò;i 'dedodida. :1¾¾¾¾ atóii.ae: dó .adndndlo Sé dna lidâdep 3 : d® ml io adá .a.so^f.sãa ^elulsr pun 1 " _-a>-s ' - ν'"®" otr* it ]·=»ϋ de 5? · - n=>.> siripi-vads·©..·
Exemplo 2. Rrmazenamento d® células estamlnais da geleia de listro^ ná? mtivaJ^, .Á. s:dsp:e:nd:âd .de. i ddia:!:®© paralisada da Edemtp:.!.©: 1 fçl e-rioprenedaada: sd dpi. ádcd :dd. άα.ηΐ:&amp;.ίάρ1ά:' d© çd dl... ddi:li:a:.s.n!id ............aara : α®άί1::ρρ:3''"' Sm''' :iS nrl'''' edm draâ1 'iap'alda"" lid,; M:"' ::mb"" dé: piàçds................. Γ,„ . -I--..· -j- c . Γ. Γ,Ί1 ,., ,, — ----- " ----------ί ---- - -·[-'...... destes foram adicionados à suspensão de células estaminais js,- , i„ sn , v ϊ o 'j v c Uma almofada d® álcool foi utiIscada para limpar a parte- superior de um frasco de SVl de DMSO/ii Dextrano. Ert seguida, removeu-so 5 jrL da mi stars DM.iO/Dextrano utilizando uma seringa de 60 xn.L eorr. uma agulha 1BG e adieionou~ae ientamenf e a suspense o dardlir:,: ò. tgBo'; dst SHS.pd;n:sãid .-c.ed.s.I&amp;ir .féd. 'ρρρρρρρίρρρ. firmemente e gentilments invertido para misturar, tomando cuidado para riâo facer espotua cu bolhas. Usando a mesma sering® .pd fll 'Bi.,, iS sai -dex .suspendi®' pmXrila®' forram 11 r.-mr1 irs para ' saco z e-.rg~laciu< 1 s>,i\ d-1 rt) cl ίρ;; rol, .-arpagen'ad© iMitia int®, d®. ..m©:t.a.r ®sx 'prá' a:ugori.s- .de Isopor' a --1:0 ''&amp;d: ddr-àntm Ido®: ;M- floras:,, 4 Mv. 'aim "’a s-gurd- p, " t vd j ί -wCj um tv i ' "uh1 ^e "I't c " , t _ ic^ 1 ' <= a s Μ 1 => lo 1 e,_ --0,1 r·- . m 1H l — j > imtu^tr^,. .1..1--5 ^ _ u Ϊ o = nitrogénio liquido |B| art- ~ ,-?xt d ' permanente, - d ' u”’ oer^, , s-cs *.v. j-^rmdu ” x: -,, 1 -> p^, ό ser ίν'Γ®"-?'Ίίό: permattnt „iienm, r.a tas® o··5 ''ar,® :.i-,- -.its..gèni-u liquc-do-, lEdPtapip· "3 ,; ,;â .i;;fld4dl-a ,#X SOVO. K "u,.·.-· 11-' Apèo^is^ le califa, m... vi i ·.. · r - qO-ta -- opirimddap' #e: Wh-arfoa dpi. Jt-nn r 1 ' , j, .li e-sat'' t r ausolar t e err η-fu las -^o aarnaíc- 'sprrgvfa .tas d"' saniue -d® 'cordi® 'gpBpl.rcal "pads rspprsM dm, 'disiMpa ftamatdpP:i:®-td.dp-ià&amp;\ mamiBerosn ................................................................................................................................................................................... .ίο® sÉíala'.® ráfeáxaróií.s' ihemafdpdratàoaa: Pd apagas: d®; rgrpa®; ..........dafei los al g Blism: der: pámrprsf .dada®· O «m paPpispg. ' par&amp;................ réaopsdldxxirí ti· dás tema hematopoietic® danificado, dor exemplo, por radiação. O co transplante te célula® estaminais ...........Ba"" gerpiS'''' d®·'''' Ρ'ΜροόοΒ''' BplBSrg " o;' 'Βχβ®βββο:;''' -de'''' Teeahdtiidniçep.................. r^'T “rrt c r* -v " vs c " rr 1 τη ~s ) '"vr ---(- -+ - ,---^ 11 ^ > , <u, f.- - + i j + + r c -. .. racriar om 55i3r.-r.ma ken atopoié vico am seu novo hospedeircu
i>.i >T.i at s. -. + -+ + -1 + u 5 'i'll ^ DO . 1 U cult!v-adas de Wharton, quo foram coadministradoe com células . J oTun, i - t i '-r^ a·*· I - ¾ { -Cui n>. i do (-+1 + pads : :íbSbp-~iási:Q::i' rakes; tâbfeam isido á ν+η:ε1ο;:Λ 'uvdok a- .-+ an'-ο/^+ί van i ir 'C-+ it- ,-? a ~ R- Unuum -^51 , i r.d d . ie-, η V i'i IsLov^e «amqbé -dd cerbi# ύΜρΐ;11+ρ®1: M:smp!3:ddi:êq:rd:s; : ^·ί^Τΐ;ϊ.:Π::ί. aos camundongos através da ceia da cauda,isoladamente ou com K\d f', : i , "'JC Cj 110.00λ Celulan ns)- s;cr 51 - Ji jíl + i j m
Pi-. 'T -η Ί.-+ lu- ;no, -.-u c-m i 00 0al vrlo’ m r+' +’."151' mesenquimaís cult içadas a partir de geleia de Wharton. Eécdedda blab d^r a v-i.i·. Ve^a foi cbtida dos camundongos para meoir o número de células que expressam ^ r um . c i _ua + nf-CVv rmmi^=r m . - hem a t o po 1 á t i ca s humanas 6¾ ura marcador da substituição para enxertia de células estaminais hematopoièticas humanas. dcmp- mcdferddd ua rFEib. 1, c rutirucr i-r-miadcs cu-+ r j > receberam células nâo possuíam cclulas que expressam! Cu45 hm?"5 ---+ sua hidaia .sst; o1 dh Fnco-a o- r, mnidMps >u.q r --neon cu" atcji t-, _quii ... ..- .u + +·«- k co-dr-o í^pi l r.'U'.onuc lacras apr':es-:eu.t;a-g®-dm y&amp;r s-ameta; isdddtddddídi -di bp-IaXaá' la nV.u_a Usui f + pr<--s+!^ am CC-^r nuau, ---a am-. + r-j° -j' -i ]-+ t pi...: +u Em ca-norac'1 3s c qc- ,o: ·- -do - -o dda.- s -·ν aais no ροο rui rum c cu Irjvud?? a partir ue x .; oe dnat'cr. ou c 3lol^.c uao cul' ícadis qe g^lria +*+ dhurter. Saioio-mac'tv.u;^--·, 1¾* .ΟίχΟ eMuXats: ..eçXbteXaaX® part ..........bdX% i ddSa SC "di: :|bXei£ 0+ + dá:'' "'iiíartdu:: pÈ.QpbrbXqnadrí:" Úffi:" b+ah® :f Ibi®................. iqual a ou maior do que o beneficio de 1.000.000 de células esbámibaXç. mébPiuqirimadbsiac expandidas e® buXbura: .a pabdibr ·#ρ geleia cie Wharton, suqer Lodo quo as células estamirais de geleia não caitivadas de Wharton podem ser mais do que dez vezes reais potente in volvo do que e stamina is mesenquima tosas i η ' vud^ > L_ l -.1 it. líl div diddídd >- c < f nar-. d"' V L t Í ί '1 ai„ Í qi 'o t®o eiedJ:va.s: como 1,000,0 00 :de ‘dvU ^ "'-t or α.η^ mesa aqui mor is cultivadas. Enquanto o mecanismo preciso para ^fioc", i -du , 't d· pl ,l3S cd m,i -x,- ;fm' ^ ' j, io 's -r mmltmrs é:. dxsmd:f ; .ffllniiaiiBidtp· rSrI:di.Íd:is,d:dg :s®&amp;: cultuda: de d i " est n -í » ir tlvi ve 1 u! r _ ir ^ teiapppfc i'd:S®:: i.jipddi;ad:i:ãs:'.>, 1:¾ di ¥®: * ;Ede:mp:Í:d: 1r -c % - - a „ h ° t χ e it-i^ ^ cr de superfície :qa:l:ula.t ^ " 1 ~_<* '“Ί " 1 1 1 ' ' t t ' ^ . sâo visivelmente diferentes ao nível molecular a partir de células estaminsis mesenquimatssss cultivadas a partir de
Cl'^.u CC >1! :
Os níveis de troce marcadores da superfície celular numa pçpulaplo: de· módulas mstómlrsais de moleie did emlóimaddS: :dl edarte^ s' Ό-νο - :,· scud” a pro anticorpo pvi:,u,/f imuetiid ue ι1~,-νΛ ^ os resuxtuics c,-u.’ 'epre-t-r tados na FIO. 1.., Fl®.. :i ,Ιόρηόόρ:::;· pars. cadd mares dor Fóstódíã* umi suprerantacào bxdxner sj cod pciràc pio mestra u percentagem de remolds cue denoimt'. vr um nve_ cg expressão parto rui ^ ^ do marcador, conforme ieteccada pelo ensaio de anti tv.rpos. 0; i “-suit 3 rs uas coluxas -ptamxun.. s ο*- oeioi- de Wharton não cultivadas são representados com uma linha escura, e os tòs;u:lx:dddp: -de. utí óebPPOJe. alp rdprededdados. odat uma, linha: nu r cl-ic. uor. j, ' ό iq -·*, '«l ,ixo cd.u’tn .·· 1« n-me„c do Wimrt_c , < ias íov-smtvm” ' ι'τ-1" ipo piedades de :0111:¾ LOFlÕ#, 101¾ dS;4,|:::, mm-%:;,· doll l > cr ' oa a v a ^ ^''tsitltte' m nnt^nnv A * cddnh'· ee cominara si® geleia de bhartor nbo euitiradas n.ãe· dXgdàdigSCí: snbstancrai d® CC31 e CD45, ’ 3 ' V. ' '-v.U ’j ' L _ i1·' 1( t-si. 1 H , 'm mm., mmm, m mmm 7b e^prpsplo 'mm mesEtas marçadçrçíS içá tardada .dm dliniad eadaMbaia mds@m;ddl;madd::sdd oalidaadas: d: dartir úm peiaia. de' 'liAadtpn;, Ss resultados estão representados ria FIG. |* Conforme demonstrado,, em comparação com o controle do 3:π:όο.ροοο> dedplaq- d, a J ’ T^mnpi i 1 r ctc'1·1®' dsíiçitãtdddaíi' plddli maim diidibba dp. Cdifi, ddi.fec iLd-itSo,: dddd:, CD2 9, CD73 e CD90,- t?ma gama mais ampla de nineis de dapdai alb 'do ddámic .B a faltá da ClílC,. ddild, BEdS 'd mfi-pI,,
Comparando a FIG, 2 e a FIG. 3, n ..... r m. t r r " ; o. -.,-3 ,1 1 .........OOO........OdO:......Lodooiodoo.........tondó'..... rf -d 3- ---3-. ro m e s e n q i.i 1 m a t o s a s a u .11 i v a da a q a a n r. o ea i c é .1 u 1 a s s s t a m i n a i s d e ( iaO- " ---. - r tiuí-u-, , c - -- -1 -- ·-< O r -e«, -,3·- .............pedem dom- ddif d dlddden tPd>:.....·Ά vpa® us rideis· ]&amp;é· Sdpdspdls................ adsdreaded das: aaldbaa esiamldals' d® qiedéta do WbãdretF bde „dtl ,» :;r s- sditiXa - .;c,· ta .< _ t t λ">ϊλ ?. - Mi: ; - ;., antígeno, enquanto que as células estarainais mesenquimais .nlf i\mi3J e. uvc '»d3 cr nr^rs de « p used, rrntt^ tai-Ur-s com pouca sobreposição com o controle do antígeno. Assim, as reiulas que to'·®1-"' p1’ ' rcafÍ3C. ia Gelara Wr b r ton sem çpipudd nãp pad médamapub psfdlpbldf^^ ppbfddép i.f, dipp;,. íédps também são marcademente dife rentes das células u „ r. ri-'"· q rnr t. dl i - 5 \ at <.u ' » ...e - i de
Pnai i 'n, r N e ctr , j p-u ui p- , >-» - n» _ ^ ide * _ 1< ............supers sua e.. .celr la r........................................................................................................................................................................

Claims (1)

  1. .res'^3:no:i:í3açõesí Is it > " 4 } f« - SC- ' -»1 ' - Ί - O UC .. · it--' ί J“ Οί-ηΡ ', ,:· " 'da ·'/ *srs Cd : demddSl .¾¾ iadOlrOad -e velas da a® acidic; umlàllaal SnUPc. tJc . 0_C 11 )>- >' St! dígaclaa 4c dsrdiá ciOOl i sai, ®3íi masialsai acacdãO. uádilOsai,;: lásia^eni: sa diÇiOçlg: §®. ccádiç amiálisal Olcarida ácOea 4a cca: aspsiafM do· cardlc iOteillcal ι|| OlgeiMi,; ~ 'p v da íc s rddu ’unt „ 1 31. 11 ^ _tf'Jo t- au, <;κρ , a-ç sedimentação; â:c ' 5caà ' jr t _ _on jto- * l ' pá® ©sitCro fmgaçàsi ; ...................... tilt.ragerr. do cordão umbilical digerido;....................................................................... ''“Oifim „ a -<-l ç(l; .stt *u. se s _.ts * „ Curt',., nu nultivadialg da- lidtilda; a -v.' plπ: ^ as células estairiinais da geleia do não Odiliiada# #c ddaaacd,,, 1 ur not :;..., J- c> s i,. o ' - ·;·· ,: :;.. ua..; · c s nn j. ·n.. a as jple^u de Oiarbca sclliagOás a aio culMTadsa,:: o pÉiatto acipiadOÍ:Cò purificação de células estamineis não cultivadas da geleia do 1'haxt ^ 1' f,. Ut.r c )n o ne’ é m : sa sço' w e .. n ..t ;·' · de oolu_sS nn iro - .· : .· raesu” juinar osaç a partir do aoidioi dislõi ilcdi sãs, dlddd:i.|iíi^ ...........éh............0 if life 41 lelllail Ciila Iç. é® 4¾¾ -14:- áélMiai #ç;camligÇs: mçãPBdgúdãlC;. -mm OÇlliviáai em: cindia ©ciiillaal liallidC:* li Clj^. (y _ t Ut i 1 - 1=1-" _ ] p o p; 55 [f I -n i- 1 a ç Ui dudl:ta:ds:im'irienite:· llnraa de palaia aêil-pilida, la SlaiCna pai®? isa isi tarâp1% e» ,gue ap eflila# dim·. #i?l a :0:1001¾ iedçlldaa Ssííí sampsra-Çil:©·· :0:Q:m PP Kl:a#ÍS: d® ®él ΡΑβ1ΐ1®1®;|' eeaenqaiaat osa s cultivadas a partir de geleia cia Wharton. S,: hs oàIrias estaninais de geleia de Phare-·®; nào o j Ltivadas vr.t ’"i ® Ιίο cu -t ^- rtt d ' v "i a aj. ue: ;ap> \., cf iu„ a®, oédu®®® sadaimismàs·: de: ned®!®' de Wdamh©:® são mándadds: duma í;L®c ecr-i-i.: ; %i: As células estaminais purificadas de geleia de Wharton não cultivadas purificadas ρ®®® rfãd ds: acspdd cr?gt a reivindicação 4 ou 5, em que as células estaminaís geleia de dhsrtc car act icgas ®i ii;;eancs ., .·; · -> u i _ a ~.
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