PT2484345E - Composição herbal para gestão do peso - Google Patents

Description

ΕΡ2484345Β1

DESCRIÇÃO COMPOSIÇÃO HERBAL PARA GESTÃO DO PESO Antecedente da invenção A obesidade e o sobrepeso são factores de risco para diabetes tipo 2, hipertensão e doença cardíaca coronária que causam morbidade, mortalidade e altos gastos com assistência médica. A obesidade é o problema nutricional número um nos Estados Unidos. Estima-se que um terço dos americanos estão sobrepeso, com um 25 por cento adicional a ser classificado como obeso. Estar com sobrepeso significativamente aumenta o risco de uma pessoa desenvolver diabetes, doença cardíaca, acidente vascular cerebral e outras doenças. 0 agrupamento de hiperinsulinemia, dislipidemia, diabetes mellitus tipo 2 e hipertensão é chamado sindrome de resistência à insulina ou sindrome metabólica, e sindrome X. Consequentemente, a avaliação da obesidade para a prevenção de sindrome X tem que ser conduzida usando não somente o peso corporal ou índice de massa corporal (IMC), mas também Acúmulo de gordura visceral (VFA) [Hayamizu et al. 2003] . A diabetes tipo 2 é uma doença crónica associada a altas taxas de morbidade e mortalidade prematura [Nathan et al. 1993]. Um aumento alarmante na prevalência de diabetes tipo 2 é esperado [Wild et al. 2004] e a necessidade de acção preventiva é amplamente reconhecida. Embora um aumento de actividade física e restrição de ingestão de energia possam substancialmente reduzir a incidência de diabetes tipo 2 [Tuomilehto et al. 2001; Knowler et al. 2002] a percepção do papel de outros factores de estilo de 1 ΕΡ2484345Β1 vida pode contribuir para as estratégias de prevenção adicional para diabetes tipo 2. 0 objectivo da presente invenção é fornecer uma forma de multi-abordagem simultânea para controla ganho de peso ao fornecer uma composição de extractos herbais que pode aumentar metabolismo, termogénese, e controlo diabetes mellitus. Além disso, estabeleceu-se que um extracto herbal de espectro completo tem mais actividade biológica que os extractos herbais purificados que é desprovido de outros importantes micronutrientes essenciais para efeito sinérgico. Como um resultado a presente invenção aspira dar cada componente da composição de extractos herbais como um extracto de espectro completo que contém todos os compostos biologicamente activos presentes na erva.

Sumário da invenção A presente invenção fornece um significa para gestão do peso na forma de uma composição herbal que compreende extracto de Garcinia cambogia, extracto de chá verde, extracto de café verde e extracto de Banaba. Esta composição pode ser feito facilmente for consumo humano para dar perda de peso desejada. A redução em peso pode ser conseguida através de níveis de açúcar no sangue normalizados, diminuiu síntese de gordura, metabolismo melhorado, diminuição do risco de diabetes mellitus tipo 2 e anti-hipertensivo.

Breve Descrição de Desenhos A Figura 1. é uma representação gráfica da mudança em massa de gordura média entre a avaliação inicial e o final do estudo para todos os três grupos. 2 ΕΡ2484345Β1 A Figura 2. é uma representação gráfica da mudança em peso corporal médio entre a avaliação inicial e o final do estudo para todos os três grupos. A Figura 3. é uma representação gráfica da mudança em peso desde a avaliação inicial até o final do estudo a cada intervalo de duas semanas para todos os três grupos. A Figura 4. é uma representação gráfica da mudança em perímetro desde a avaliação inicial até o final do estudo a cada intervalo de duas semanas para todos os três grupos. A Figura 5. é uma representação gráfica da mudança em IMC desde a avaliação inicial até o final do estudo a cada intervalo de duas semanas para todos os três grupos.

Descrição Detalhada Várias formas de realização da presente invenção serão descritas em detalhe com referência aos quadros e figuras, em que números de referência semelhantes representam partes semelhantes através das diversas vistas. A referência a várias formas de realização não limita o âmbito da invenção, que é limitado somente pelo âmbito das reivindicações anexas aqui. Adicionalmente, quaisquer exemplos indicados neste relatório descritivo não são destinadas a ser limitantes e meramente representam alguma das muitas formas de realização possíveis para a invenção reivindicada. A invenção refere-se a composição de extractos herbais para gestão do peso e tratar diabetes em seres humanos. A invenção refere-se ainda a um método para produzir e padronizar a composição de extractos herbais útil para a 3 ΕΡ2484345Β1 saúde humana. A composição herbal da presente invenção compreende extracto de Garcinia, extracto de chá verde, extracto de café verde e extracto de Banaba. Os quatro extractos são conhecidos por seu controlo de peso e ou outros benefícios à saúde por diferentes mecanismos, mas individualmente nenhum proporciona todo o controlo de peso e benefícios à saúde desejados. De facto, surge a necessidade de fornecer uma composição melhorada para o controlo de peso e outros benefícios à saúde preferidos. 0 propósito da presente invenção é obter todos os benefícios desejados usando um composição herbal única que compreende extracto de Garcinia cambogia, extracto de chá verde, extracto de café verde e extracto de Banaba. 1. Garcinia Cambogia

Garcinia Cambogia é uma fruta exótica que cresce no sul da índia e tem sido utilizada durante séculos para dar o sabor ácido distintivo à culinária indiana. 0 ingrediente activo extraído da Garcinia Cambogia (Indica) é ácido (-) hidroxicítrico que idade como um supressor apetite e um agente de diminuição de lipídeos, bem como um agente de queima de gordura. Uma maneira pela qual o hidroxicitrato (HCA) presente na casca da fruta das espécies de Garcinia reduz o ganho de peso é por meio da inibição competitiva da ATP- citrato liase, a enzima responsável por catalisar a clivagem extramitocondrial de citrato a oxaloacetato e acetil- CoA, um bloco de construção da síntese ácido gordo [Patente US 3.7 64.692]. 0 modo de acção de HCA parece centrar sua capacidade de diminuir a velocidade de regeneração de acetil CoA- a enzima de clivagem de citrato fora da mitocôndria em células hepáticas. 0 efeito é reduzir a principal fonte de átomos de carbono disponíveis 4 ΕΡ2484345Β1 para a síntese de triglicéridos, colesterol e armazenamento de gordura sem redução em produção de energia. Os átomos de carbono são em vez disso direccionado a glicogénio nos músculos e fígado, o que resulta em mais estamina e resistência aumentada, mas não peso corporal aumentado. Portanto, considera-se que HCA é uma medicina herbal eficaz para o controlo de obesidade e colesterol pela inibição de lipogénese no corpo. 0 HCA tem também demonstrado que causa perda de peso em roedores por uma redução em ingestão de alimentos em vez de através de um efeito directo na síntese de ácido gordo. HCA melhora a síntese de glicogénio. Níveis de glicogénio aumentados no fígado e músculos resultam em apetite e ingestão de alimentos reduzidos. Num estudo com animais conclui-se que o tratamento com o extracto da fruta Garcinia cambogia resultou na redução de lipido tanto no soro como no fígado até perto da normalidade. Esta propriedade hipolipidémica de Garcinia cambogia por sua vez reduz o dano peroxidativo, melhorada por etanol [Mahendran et al 2001]. Num ensaio clínico de dupla ocultação, Randomizado, Controlado por placebo foi observado que o extracto de Garcinia cambogia teve áreas de gordura visceral, subcutânea e total significativamente reduzida em comparação com grupo de placebo [Hayamizu et al 2003]. Portanto, o extracto de Garcinia cambogia é também considerado um agente de queima de gordura. O sal de sódio de ácido hidroxicítrico foi estudado pela empresa Roche nos anos 70 e foi mostrado que reduz a ingestão de alimentos e causa perda de peso em roedores. [Sullivan C, 1977] Subsequentemente, Heymsfield et al. avaliaram o sal de cálcio de ácido hidroxicítrico num ensaio clínico em seres humanos e descobriu que é ineficaz para a perda de peso, mas falhou em medir níveis 5 ΕΡ2484345Β1 sanguíneos. [Heymsfield, SB et al. 1998] O sal de cálcio de ácido hidroxicítrico utilizado por Heymsfield pode dissociar fracamente e pode não ser absorvido e se assim for, a má absorção explicaria a ausência de eficácia no estudo de Heymsfield. Preuss et al. publicaram um resumo em que uma mistura de hidroxicitrato de cálcio e potássio foi utilizada num ensaio clínico de perda de peso em seres humanos e foi mostrado que é eficaz. [Preuss H.G., et al. 2002] Os níveis sanguíneos confirmaram absorção deste composto de hidroxicitrato. [Loe YC et al. 2001, Loe YC et al. 2001]

Em várias formas de realização, o extracto de Garcinia utilizado na composição de perda de peso descrita no presente documento inclui tri-, tetra-, ou penta- metal complexo sais de ácido hidroxicítrico. Numa forma de realização, a presente invenção fornece uma composição que compreende um sal de metal complexo de ácido (-) hidroxicítrico sozinho ou em combinação com a lactona de HCA e ácido cítrico, em que o sal compreende suplementos minerais tal como sódio, potássio, cálcio, magnésio e zinco. O sal de HCA de metal complexo é vantajosamente altamente solúvel em água, não higroscópico e estável em solução. Deste modo evitando problemas com fraca dissociação e absorção. Em formas de realização alternativas, sais de HCA complexo individuais, tal como (Ca, K, Mg, Zn) HCA são incluídos na composição em alternativa a ou além do sais complexos tri-, tetra-, ou penta- metal de ácido hidroxicítrico.

Em outra forma de realização, o sal de metal complexo de HCA pode ser fabricado mantendo o pH do produto final abaixo de 4, em cujo caso o produto conterá uma combinação de HCA e a lactona de HCA. Esta forma de realização em pH baixo pode ser formulada em bebidas carbonatadas em que o 6 ΕΡ2484345Β1 pH é mantido abaixo de 4 para estabilidade e é adequado para utilização em produtos alimentícios sem afectar seu aroma ou sabor. 0 sal de metal complexo de ácido (-) hidroxicítrico é preparado a partir de extracto aquoso de Garcinia e uma mistura de bases seleccionadas a partir de óxidos, bicarbonatos, carbonatos, hidróxidos de sódio, potássio, cálcio, magnésio e zinco. 0 ácido hidroxicítrico é um ácido tricarboxílico e, portanto, cada molécula de HCA pode ter somente até três catiões diferentes. No entanto, alguns catiões (tais como o catiões divalentes Ca++ e Mg++) pode ligar com duas moléculas de ácido hidroxicítrico diferentes. Portanto, tetra ou penta sais complexos podem ser criados usando vários catiões e ácido hidroxicítrico. Em algumas formas de realização, o sal de metal complexo de ácido hidroxicítrico consiste em duas classes de catiões, pelo menos um ião bivalente seleccionado a partir de Cálcio (Ca) , Magnésio (Mg) e Zinco (Zn) e pelo menos um ião univalente seleccionado a partir de Potássio (K) e Sódio (Na) .

Formas de realização do sal de metal complexo de HCA podem ser preparadas de forma conveniente como sal altamente solúvel, parcialmente solúvel, ou insolúvel em água.

Uma estrutura geral representativa de complexo sal de HCA é 7 ΕΡ2484345Β1 Η Η

I I

OH-C-COO- (Χ,Χ) - OOC-C-OH

I- I

OH-C-COO- (Χ,Χ) - OOC-C-OH

H-C-COO- (Χ,Χ) - OOC-C-H

I I Η Η onde (Χ,Χ) é seleccionado a partir de (Ca), (Mg), (Zn), (K, K) , (Na, Na) , (K, Na) .

Um exemplo representativo particular de sal quatro de Ácido hidroxicítrico é

H

H

OH-C-COO- K Na-OOC-C-OH

I I

OH-C-COO- Mg -OOC-C-OH

I I

H-C-COO- Ca-OOC-C-H

I I

Η H

Um exemplo representativo particular de sal três de Ácido hidroxicítrico é 8 ΕΡ2484345Β1 ΕΡ2484345Β1 Η Η

OH-C-COO- Κ Κ - OOC-C-OH

OH-C-COO— Mg- OOC-C-OH

H-C-COO— Ca - OOC-C-H Η Η 0 sal cinco de ácido de Garcinia ocorre quando os grupos ácidos terminais são ligados com um ião univalente e um ião bivalente deste modo ocasionando a ligando da terceira molécula HCA ao ião bivalente vacante.

Uma forma de realização de sal de metal complexo de HCA que é essencialmente não higroscópica e estável em soluções inclui (em percentagem em peso) 40- 75% de ácido (-) hidroxicítrico (HCA) e/ou 0,1- 30% de lactona de ácido (-) hidroxicítrico, 1-5% de ácido cítrico, 1- 10% de sódio (ou alternativamente menos de 1%) , 1- 35% de Potássio, 1-2-% de Cálcio, 1- 15% de Magnésio, e 0,1- 10% de Zinco.

Formas de realização do sal de metal complexo de ácido (-) hidroxicítrico e/ou sua lactona podem ser fabricadas por meio de um processo economicamente viável. Em uma forma de realização, a casca de Garcinia é extraída com água desmineralizada a temperatura ambiente. Em contraste, a ebulição ou extracção a quente utilizada na técnica dá um extracto líquido é que enriquecido com componentes solúveis em água indesejados. Numa forma de realização, a matéria solúvel indesejável é minimizada pela extracção da casca a temperatura ambiente. O extracto líquido é tratado com uma base de cálcio a pH neutro para obter hidroxicitrato de cálcio insolúvel. O conteúdo de HCA deste material 9 ΕΡ2484345Β1 insolúvel é cerca de 70%. Se a neutralização for feita a pH mais de 7, o conteúdo de HCA no sal insolúvel resultante será 50- 60%. O sal insolúvel de cálcio de HCA é mistura com água e 10% de ácido sulfuroso. Esta etapa removeu o cálcio como sulfito de cálcio insolúvel. O pH é mantido a de 3,0 a 3,5 durante esta operação. O estado da técnica emprega ácido fosfórico em cujo caso o cálcio não pode ser removido como sal insolúvel porque tanto o HCA como os ácidos fosfóricos são ácidos fracos e uma reacção de troca não ocorrerá. O liquido filtrado, castanho claro em cor, é tratado com a mistura preferida de bases de metal a pH neutro, tratado com carvão activo, filtrado e liofilizado para obter um sal branco a branco pérola de metal complexo de HCA com ou sem a lactona de HCA. O produto resultante é altamente solúvel em água (mais de 20%), não higroscópico e estável em solução. Descrição adicional para preparação de sal de metal complexo HCA de Garcina é apresentada na Publicação de Pedido de Patente U.S. n°. US 2004-0259937 AI.

Numa forma de realização, o extracto de Garcinia é um sal multimineral de ácido hidroxi cítrico (4-sal HCA), que é obtido de extracto aquoso de fruta de Garcinia Cambogia. Em uma forma de realização, o extracto de Garcinia (4-sal HCA) contém de 60 a 65% de HCA ligado a fracções de Ca, K, Mg e Zn. O 4-sal de HCA é um pó não tóxico, insípido, e inodoro. 2. Banaba (5% de ácido corosólico)

Banaba cujo nome botânico é Lagerstroemia speciosa é um planta que é que encontrada na índia, o Filipinas, e partes do sudeste asiático. A planta tem sido tradicionalmente utilizada nas Filipinas para tratar 10 ΕΡ2484345Β1 diabetes e obesidade. Encontrou-se que os extractos de Banaba ajudam na perda de peso. Num estudo com animais conduzido por Suzuki, et al. foi mostrado que os extractos de Banaba induziram a perda de peso e peso de tecido de adiposo reduzido. [Suzuki Y et al. 1999] Adicionalmente, uma queda significativa de até 65% em lípidos hepáticos foi observada. Extractos de folhas de Banaba que contêm um composto de triterpeno chamado Ácido corosólico (2-hidroxiursolic ácido) têm demonstrado a capacidade de aumentar a captação de glucose e diminuir os níveis de açúcar no sangue. Murakami et al. mostraram que o Ácido corosólico extraído das folhas de Banaba estimula actividade de transporte de glucose significativa In vitro em estudo de célula de tumor de ascites Ehrlich. [Murakami C et al. 1993] Tommasi et al. relataram a acção hipoglicémica de Ácido corosólico. [Tommasi ND et al. 1991] Num estudo clínico em seres humanos de 8 semanas conduzida em Japão com 26 sujeitos, foi confirmado por Ikeda et al. que o Ácido corosólico melhorou a tolerância à glucose e melhorou os níveis de açúcar no sangue. [Ikeda Y et al. 1999] 0 mesmo estudo também descobriu que a ingestão de extracto de Banaba foi não prejudicial a qualquer dos sujeitos. 3. Extracto de Café verde (Café Robusta 25% de Ácido Clorogénico)

Café verde que contém compostos fenólicos chamados Ácidos clorogénicos pode ter a capacidade de ajudar na perda de peso bloqueando a captação de hidratos de carbonos. Num ensaio clínico em seres humanos Johnston KL et al. avaliaram os Ácidos clorogénicos e descobriram que têm um efeito antagonista na absorção glucose no intestino. [Johnston KL et al. 2003] Os ácidos clorogénicos podem também induzir a perda de peso inibindo a criação de 11 ΕΡ2484345Β1 glucose do metabolismo de hidratos de carbonos, assim induzindo maiores taxas de metabolismo no corpo. Em suporte a esta hipótese, Arion WJ et al. e Hemmerle H et al. mostraram que os Ácidos clorogénicos inibem glucose-6-fosfato deste modo reduzindo a formação de glucose que é formda da gluconogénese e glicogeniólise. [Arion WJ, et al. 1997, Hemmerle H, et al. 1997] 0 chá e café são as bebidas mais amplamente consumidas no mundo próximo à água [Schaefer et al 2004] . A cafeína presente no chá e no café tem mostrado que aumenta o gasto de energia em seres humanos e perda de peso tem factores de risco reduzidos para diabetes em ensaio clínicos [Dulloo et al 1999; Bracco et al 1995] . A ingestão de cafeína pode reduzir de forma aguda o armazenamento de glucose, mas efeitos benéficos da cafeína na oxidação de lípido e desacoplamento da expressão proteína-3 também têm sido sugeridos. 0 café contém substâncias numerosas; entre elas, cafeína, ácidos clorogénicos, quinidas, e magnésio tem mostrado que afecta o metabolismo da glucose em estudos com animais ou metabólicos. Num estudo alemão, mostrou-se que um maior consumo de café foi associado a um risco substancialmente menor de diabetes tipo 2. 0 café é a principal fonte dos ácidos clorogénicos. A ingestão de ácidos clorogénicos tem mostrado que reduz as concentrações de glucose em ratos, e a ingestão de de quinidas, produtos de degradação de ácidos clorogénicos, aumentou sensibilidade de insulina em ratos. Os ácidos clorogénicos contribuem para os efeitos antioxidantes do café, podem reduzir a produção de glucose hepática através de inibição de glucose- 6-fosfatase, e podem melhorar a distribuição de minerais no tecido através de sua acção como um quelante de metal. Além disso, os ácidos clorogénicos agem como um 12 ΕΡ2484345Β1 inibidor competitivo da absorção de glicose no intestino.

Recentemente, o consumo de café e a diabetes tipo 2 foram revistos por R.M. van Dam et al [RM Van Dam et al 2005] . Os autores revisaram sistematicamente todas as evidências epidemiológicas disponíveis na relação entre o consumo habitual de café e o risco de diabetes tipo 2. Os autores concluíram que sua revisão sistemática suporta a hipótese de que o consumo habitual de café está associado a um risco substancialmente menor de diabetes tipo 2. 4. Extracto de Chá verde (20% de L-Teanina, 35% de Polifenóis, 15% de EGCG)

As folhas de chá verde contêm 1-2% em peso de um estereoisómero L-enantiômero de um aminoácido. Este aminoácido é chamado Teanina e o estereoisómero L-enantiômero é referido como L-Teanina. Extractos de Chá verde (Camellia sinensis) que contêm concentrações mais altas de L-Teanina podem ter a capacidade de ajudar na perda de peso pela redução do estresse. As capacidades da L-Teanina reduzir o estresse são bem documentadas. Em ensaio clínico em seres humanos, Mason R et al. Descobriram que a L Teanina estimula a produção de ondas cerebrais alfa deste modo criando um sentido de alerta e relaxamento. [Mason R. 2001] Também descobriu-se que L-Teanina está envolvida na formação de ácido gama amino butírico (GABA). Isto leva a um efeito de relaxamento já que o GABA influencia os níveis dos neurotransmissores, dopamina e serotonina. Em outro ensaio clínico Juneja LR et al. Confirmou que L-Teanina aumenta a actividade de ondas cerebrais alfa. [Juneja LR 1999] A administração oral de extracto de chá verde rico em catequina polifenol e cafeína estimula a termogénese e 13 ΕΡ2484345Β1 oxidação de gordura e assim tem o potencial de influenciar o peso corporal e composição corporal via mudanças tanto no gasto de energia como na utilização de substrato. Em particular, tem sido sugerido que o polifenol do chá desempenha um papel em diminuir a oxidação de colesterol de baixa densidade (LDL), com um consequente risco diminuído de doença cardíaca [Weisburger, 1999]. Num estudo intercultural de correlação de dezasseis coortes, conhecidos como o Estudo dos Sete Países (Seven Countries Study), o consumo médio de flavanol foi inversamente correlacionado com taxas de mortalidade de doença cardíaca coronária após 25 anos de seguimento. [Hertog et al., 1995; Hollman et al., 1999] 5. Segurança de 4-Sal de HCA de Extracto de Garcinia e os outros Extractos A Garcinia tem sido utilizada em alimentos como um tempero durante muitos anos. Existem diversos ensaios clínicos que mostram que é segura em administração aguda em doses tao altas como 6-30 vezes a dose utilizada em suplementos dietéticos e em doses estendidas em sujeitos obesos e com sobrepeso. [Preuss, H. G. et al. 2004, van Loon, L. et al. 2000, e Heymsfield, S. 1998] Cantox Health Sciences International, Missisauga, ON Canada, foi autorizado por Indfrag Limited para fazer uma avaliação da segurança de HCA. Após revisar toda a literatura científica pertinente Cantox não descobriu questões relevantes de segurança em doses no intervalo de 1 a 5 gramas por dia. O HCA tem sido utilizado durante muitos anos em suplementos sem efeitos adversos significativos. A segurança do extracto de Banaba é reforçada pelo fato de que tem sido tradicionalmente utilizado nas Filipinas durante muitos anos. Shirai et al. confirmou 14 ΕΡ2484345Β1 segurança de Banaba num modelo de ratinho in vivo. [Shirai M. et al. 1994] 0 extracto de café verde tem um histórico de uso seguro como ingrediente alimentício. A L-Teanina tem um histórico de uso seguro como um suplemento dietético. 6. Composição herbal

Uma forma de realização da composição herbal da presente invenção é apresentada no Quadro 1. A composição herbal pode adicionalmente compreender excipientes farmaceuticamente aceitáveis.

Quadro 1. Uma forma de realização da composição herbal da presente invenção expressa como intervalo de proporção de extractos

Nome do extracto botânico Dose diária para adulto % em peso aprox. na composição extracto de Garcinia De 1950 mg a 4875 mg De 55% a 88% extracto de chá verde De 225 mg a 600 mg De 4% a 19% extracto de café verde De 345 mg a 865 mg De 6% a 28% extracto de Banaba De 75 mg a 190 mg De 1% a 7 %

Uma forma de realização da composição herbal inclui uma dose diária de cerca de 3900 mg de sal 4 de HCA de Garcinia, 450 mg de extracto de café verde (25% de ácidos clorogénicos) , 600 mg de extracto de chá verde (25% de L-

Teanina e 35% de Polifenóis: 15% de EGCG) , 150 mg de extracto de Banaba (5% de ácido corosólico). A composição da presente invenção, para além dos ingredientes activos notado no Quadro 1 acima, pode também conter excipientes farmacêuticos que são normalmente empregues para preparar qualquer forma farmacêutica oral tal como pó, comprimidos, cápsulas, xaropes, e líquidos etc. 15 ΕΡ2484345Β1

Os excipientes, tais como amido, amido pré-gelatinizado, fosfato de dicálcio, polivinilo povidina, estearato de magnésio, talco, etanol, isopropanol, ou outros álcoois, carboximetil celulose, hidroxirnetilcelulose, etil celulose ou outros materiais de celulose ou uma mistura dos mesmos pode ser utilizada. Uma quantidade adequada de excipiente é empregue para a formação da forma de administração oral seleccionada. A composição pode também conter conservantes, que podem ser seleccionados a partir de parabenos, including parabeno sais tal como propilparabeno de sódio e metil parabeno de sódio, ou 2- bromo- 2- nitropropano- 1, 3-diol (BRONOPOL) ou uma mistura dos mesmos. A dose diária para adulto apresentada no Quadro 1 pode ser dividida em múltiplas doses administradas em intervalos de tempo ao longo de um intervalo de 24 horas. Em várias formas de realização, a dose diária é dividida para administração como um, dois, três, quatro, cinco, ou seis doses por dia. Numa forma de realização adicional, a dose diária é administrada por via oral em duas doses divididas de 2 pastilhas por dose. Numa forma de realização, a composição herbal é administrada 30-60 minutos antes de uma refeição. O Quadro 2 dá a proporção dos extractos em uma forma de realização de um comprimido ou cápsula feitos pela mistura dos extractos herbais. Dois a cinco comprimidos ou cápsulas ilustrada no Quadro 2 forneceriam uma dose diária para adulto. Os comprimidos ou cápsulas são administrados em uma ou mais doses divididas. Em uma forma de realização, as doses divididas são administradas de entre 2 horas a 30 minutos antes de um ou mais refeições em um dia. 16 ΕΡ2484345Β1

Quadro 2. Uma forma de realização da composição herbal da presente invenção expressa como proporção especifica de extractos

Nome do extracto botânico mg por comprimido ou cápsula % em peso aprox. de ingredientes activos extracto de Garcinia 975 mg 76, 5% extracto de chá verde 150 mg 11,8% extracto de café verde 112 mg 8,8% extracto de Banaba 37 mg 2, 9% Excipientes q. s . —

As composições fornecidas acima são dependentes do conteúdo dos extractos individuais, como descrito a seguir. Como é entendido, a quantidade de um extracto incluída na presente composição herbal é ajustada com base na potência do extracto individual. Alternativamente, um extracto é padronizado de acordo com os conteúdos descritos a seguir para utilização na presente composição herbal. 0 extracto de Garcinia contém mais de 60% de ácido (-) hidroxicitrico, menos de 5% de lactona de ácido (-) hidroxicitrico, menos de 5% de ácido cítrico, 4- 6% de Cálcio, 4- 6% de Potássio, 8- 10% de Magnésio, 0,4- 0,6% de Zinco e menos de 1% de sódio. Uma composição única de ácido (-) hidroxicitrico é descrita e reivindicada no pedido de patente US publicado US 2004/0259937. A composição de ácido (-) hidroxicitrico contém 40- 75% de ácido (-) hidroxicitrico, 0,1- 30% de lactona de ácido (-) hidroxicitrico, 1- 5% de ácido cítrico, 1- 10% de sódio, 1-35% de Potássio, 1- 20% de Cálcio, 1- 15% de Magnésio e 0,1- 10% de Zinco.

Em uma forma de realização da invenção, o conteúdo de 17 ΕΡ2484345Β1 cálcio em o extracto de Garcinia é 20-80 mg por grama de sal de metal complexo de HCA. Em outra forma de realização, o conteúdo de magnésio é 60-100 mg por grama de sal de metal complexo de HCA. Em ainda outra forma de realização, o conteúdo de potássio é 20-100 mg por grama de sal de metal complexo de HCA. Em ainda outra forma de realização, o conteúdo de zinco é 2-6 mg por grama de sal de metal complexo de HCA.

Os ingredientes activos em o extracto de espectro completo de chá verde são catequina polifenóis, cafeina, L-teanina e outros aminoácidos. As composições fornecidas no presente documento utilizam um extracto único de espectro completo de chá verde que contém mais de 35% de Polifenóis em que mais de 15% é EGCG, bem como que contém cerca de 11-13% de Cafeina, 21-23% de L-teanina.

Os ingredientes activos no extracto de espectro completo de café verde são ácidos clorogénicos, cafeina e polifenóis. O presente relatório descritivo utiliza um extracto de café de espectro completo único que contém um mínimo de 25% de ácidos clorogénicos, 1-2% de Cafeina e mais de 40% de Polifenóis. O extracto de Banaba contém 5% de ácido corosólico juntamente com outros constituintes biologicamente activos.

Todos os extractos são produzidos usando água ou metanol aquoso como solvente. O extracto é misturado na dita proporção acima juntamente com excipientes apropriados para a forma de administração seleccionada, num misturador de alta velocidade para obter uniformidade em termos de cor e ingrediente activo. A mistura resultante é então comprimida, encapsulada ou fornecida em forma de pó ou líquido/xarope. 18 ΕΡ2484345Β1

Numa forma de realização consistente com aquela apresentada no Quadro 2 anterior, o conteúdo de ingrediente activo por comprimido é resumido no Quadro 3.

Quadro 3. Ingredientes activos por comprimido

Nome do ingrediente activo mg de ingrediente activo por comprimido, ácido (-)hidroxicítrico 600-660 mg Polifenol 90-100 mg EGCG 23-30 mg Cafeína 18-22 mg L-teanina 35-40 mg Ácidos clorogénicos 25-35 mg Ácido colosólico 2-3 mg Cálcio 55-65 mg HCA, EGCG, Cafeína, L- teanina, Ácidos clorogénicos e Ácido colosólico presentes na composição são estimados utilizando Cromatografia líquida de alta pressão (HPLC). Polifenóis são estimados por meio de método UV. A presente invenção é descrita em mais detalhe nas seguintes experiências clinicas, que são meramente a titulo de exemplo e não são destinadas a limitar o âmbito da invenção. 7. Exemplo: Estudo de Eficácia e Segurança de HCA activo e HCA activo 7.1 Sumário

Um Estudo de Eficácia e Segurança de três grupos, paralelo, de dupla ocultação, randomizado, prospectivo, controlado por placebo, foi completado para testar os efeitos de redução de peso de extracto de sal 4 de HCA de 19 ΕΡ2484345Β1

Garcinia (HCA activo), e uma combinação de sal 4 de HCA de extracto de Garcinia, extracto de Banaba, Extracto de café verde, e Extracto de chá verde (composição herbal) em adultos obesos e com sobrepeso saudáveis ao longo de um período de 12 semanas. Os produtos avaliados durante este estudo são mostrados no Quadro 4. A população de pacientes por protocolo consistia em 91 sujeitos de etnicidade Asiática com valores de IMC entre 28 e 40 kg/m2. Dois terços da população de pacientes eram homens. Um terço da população de pacientes eram mulheres. As idades da população de pacientes variaram desde 19 até 58 anos de idade com uma idade média na faixa dos 30. O nível de actividade do paciente no trabalho variou desde sedentário até pesado.

Os pacientes foram randomizados entre três ramos de tratamento (razão de 1:1:1) e receberam Composição herbal, HCA activo ou Placebo durante 12 semanas. Os critérios de avaliação do estudo foram avaliados nas semanas 0, 2, 4, 6, 8, 10, e 12.

Os seguintes produtos foram avaliados. A composição foi desenvolvida por Indfrag Ltd. com assistência técnica do Dr. Fred Pescatore, MD, MPH, CCN. Os suplementos utilizados no ensaio clínico foram produzidos e certificados para conter os ingredientes activos, na dose especificada, pelo fabricante e patrocinador do ensaio clínico, Indfrag Limited, 1320, 12 Cross, Indiranagar II Stage, Bangalore 560-038, índia. Cada lote que foi individualmente ensaiado e a qualidade dos extractos foi garantida por Certificados de Análise fornecidos por Indfrag Ltd 20 ΕΡ2484345Β1

Quad Lro 4. Os produtos avaliados durante o estudo Produto Fórmula activa HCA activo Placebo Conteúdos sal 4 de HCA de extracto de Garcinia Extracto de Banaba Extracto de café verde Extracto de chá verde sal 4 de HCA de extracto de Garcinia Celulose Maltodextrina 0 critério de avaliação de eficácia primário do estudo foi massa de gordura reduzida no rastreio de absorciometria de raios x de energia dual (DEXA) entre a avaliação inicial e visita da 12 a semana e perda de 5% ou mais de peso corporal em 12 semanas.

Os critérios de avaliação de eficácia secundários do estudo foram: composição corporal melhorada, aumento de massa magra e densidade óssea melhorada medida por meio de absorciometria de raios x de energia dual (DEXA) scan; perímetro abdominal reduzido; perfis lipídicos melhorados; resistência à insulina reduzida calculada pelo método de HOMA-IR, capacidade de manter uma dieta de perda de peso e/ou diminuição do apetite; e qualidade de vida melhorada com base num questionário de qualidade de vida (QLQ).

Os critérios de avaliação de segurança primários foram exame físico (HR, SBP, DBP) e valores de segurança de laboratório (Contagem completa do sangue (CBC), BUN, electrólitos, glucose, creatinina, cálcio, AST, ALT, Fosfatase alcalina, bilirrubina total, ácido úrico, análise de urina, colesterol, triglicéridos, TSH, HbAlc, teste de gravidez (mulheres), amilase). 0 critério de avaliação de segurança secundário foi eventos adversos. 21 ΕΡ2484345Β1

Encontrou-se que a redução significativa em gordura corporal e perda de peso corporal significativa de 6,18% peloo grupo de fórmula activa cumpriu os objectivos de eficácia primários do estudo.

Ao analisar os dados de eficácia para o HCA activo encontrou-se que a gordura corporal reduziu significativamente assim cumprindo um objectivo de eficácia primário. Embora o peso corporal reduzisse significativamente, a redução de somente 2,91% não foi suficiente para cumprir o objectivo de eficácia primário de um 5% de redução de peso corporal.

Além disso, o grupo de fórmula activa e os grupos de HCA activo também mostraram uma redução significativa em perímetro abdominal que foi listado como um objectivo de eficácia secundário.

Além disso, ambos os grupos activos também mostraram uma diminuição em pressão sanguínea diastólica e AST amplamente indicando uma melhoria no perfil metabólico. Não foram notados eventos adversos graves neste estudo. 7.2 Análise de eficácia 7.2.1 Mudanças em variáveis de eficácia desde a avaliação inicial até o final do estudo (análise por protocolo)

Os Quadros 5-13 e as Figuras 1 e 2 (gráficos plotados para Variáveis de eficácia primária de massa de gordura e peso corporal somente) resumem a mudança em variáveis de eficácia desde a avaliação inicial até o final do estudo (semana 12) para cada grupo de produto. A avaliação inicial 22 ΕΡ2484345Β1 é definida como a média de valores disponíveis desde o rastreio e/ou visita de randomização (antes de dispensação do produto de estudo).

As variáveis são resumidas no formato: Média ± Desvio padrão

Com referência aos Quadros 5-13, os valores de p na linha intitulada ' significância (Avaliação inicial-12a semana)' de cada quadro indica se esse grupo de produto teve um mudança média significativa desde a avaliação inicial - isto foi calculado usando o teste t de student pareado com correcção de Bonferroni. Os valores de p na última coluna do quadro com o cabeçalho 'Comparações de significância' indicam se a quantidade de mudança foi significativamente diferente entre os grupos activo e de placebo calculada por ANCOVA (Pré valores são as covariáveis e a significância é calculada sobre a diferença de pós valores). Valores nominalmente significativos de p (p<0,05) são destacados com texto em negrito. Os dados de significância entre os grupos activos e o grupo de placebo são indicados na linha intitulada 'Significância de Grupo activo em comparação com Placebo'. Para o quadro de perfil lipídico sobrescritos não idênticos são significativos a p<0,05, sobrescritos idênticos não são significativos usando o Teste t de student com correcção de Bonferroni. A estimativa de tamanho de efeito foi calculada usando o método quadrado de Eta parcial para todos os grupos para todas as variáveis de eficácia primária e variáveis de eficácia secundárias seleccionadas. 0 tamanho de efeito para cada grupo é indicado na linha intitulada 'Estimativa do Efeito' para cada quadro respectivo. 23 ΕΡ2484345Β1

Os gráficos representam a mudança em média em todos os três grupos desde a avaliação inicial até o final do estudo. Os desvios padrão foram calculados para todas as médias mostradas aqui, e as barras de desvio padrão são mostradas nos gráficos.

Este sumário baseia-se na população por protocolo, que consiste em todos os sujeitos que foram a todas as visitas programadas e que tomaram bem pelo menos 75% do produto ao longo do curso de 12 semanas do estudo. Uma análise por protocolo trata da questão científica de se o produto funciona nessas pessoas que utilizaram como foi indicado. Sujeitos que não tomaram o produto como foi indicado, ou que abandonaram o protocolo, não deram realmente ao produto um "chance real" de funcionar. A avaliação de se o produto é eficaz, uma análise por protocolo portanto somente levam em consideração somente os dados daqueles sujeitos que foram obedientes com o protocolo. 24 ΕΡ2484345Β1

Mudanças em Variáveis de eficácia (População por protocolo)

Variáveis de eficácia primária

Quadro 5. Massa de gordura (veja-se a Figura 1 relacionada.)

Periodo de estudo Massa de gord Lura em g Fórmula activa (n = 30) HCA activo (n = 32) Placebo (n = 29) Avaliação inicial 32810,37 ± 7024,79 30942,46 ± 5916,88 33399,41 ± 8457,21 Final da 12a semana 31107,42 ± 7068,24 30245,18 ± 6188,14 33697,18 ± 8437,30 Diferença em Perda de massa de gordura (gramas) 1702,95 697,28 -297,77 Significância (Avaliação inicial-12a semana) p<0,001 p<0,01 p=0,293 Significância de Grupo activo em comparação com Placebo por ANCOVA p<0,001 P=0,011 Estimativa de Efeito 67,7% 19, 6% 3, 9%

Quadro 6. Peso corporal (veja—se a Figura 2.relacionada)

Periodo de estudo Peso corporal em kg Fórmula activa (n=30) HCA activo (n=32) Placebo (n=29) Avaliação inicial 84,20 ± 11, 64 83, 07 ± 10, 92 87,63 ± 12, 14 Final da 12a semana 78,99 ± 11, 95 80,65 ± 10,80 87,98 ± 12,26 Diferença em perda de peso (kg) 5,21 2,42 -0, 35 Significância (Avaliação inicial-12a semana) P<0,001 P<0,001 p=0,222 Significância do Grupo activo em comparação com Placebo P<0,001 p<0,001 Estimativa de Efeito 76,1% 53,2% 4,5% 25 ΕΡ2484345Β1

Variáveis de eficácia secundária

Quadro 7. Massa magra

Período de estudo Massa magra em g Fórmula activa (n=30) HCA activo (n=32) Placebo (n=29) Avaliação inicial 46388,46 ± 9334,98 47389,06 ± 10755,03 49707,05 ± 8748,72 Final da 12a semana 45668,29 ± 9255,95 46769,06 ± 10049,42 49077,05 ± 8446,49 Diferença em perda de massa magra (gramas) 720,17 620 630,00 Significância (Avaliação inicial-12a semana) p=0,075 p=0,044 p=0,087 Significância de Grupo activo em comparação com Placebo p=0,651 p=0,729

Quadro 8. Densidade óssea

Período de estudo Densidade óssea em g Fórmula activa (n=30) HCA activo (n=32) Placebo (n=29) Avaliação inicial 1,144 ± 0,102 1,154 ± 0,119 1,205 ± 0, 143 Final da 12a semana 1,154 ± 0,087 1,151 ± 0,111 1,203 ± 0, 131 Diferença em Densidade óssea (g) i—1 O o 1 0,003 0, 002 Significância (Avaliação inicial-12a semana) p=0,549 p=0,487 p=0,747 Significância de Grupo activo em comparação com Placebo p=0,692 p=0,377 26 ΕΡ2484345Β1

Quadro 9. Perímetro abdominal

Período de estudo Perímetro abdominal em cm Fórmula activa (n=30) HCA activo (n=32) Placebo (n=29) Avaliação inicial 98, 90 ± 13,40 99,28 ± 12,17 100,50 ± 13, 39 Em 12 semanas 94,50 ± 13, 07 95,73 ± 11, 61 99,78 ± 13, 67 Diferença em Mudança em perímetro (cm) em 12 semanas 4,40 3,55 0,72 Significância (Avaliação inicial-12a semana) p<0,001 p<0,001 p=0,529 Significância de Grupo activo em comparação com Placebo p<0,001 p=0,002 Estimativa de Efeito 42,7% 38,4% 3%

Quadro 10. Perfil lipídico

Parâmetros lípidos de Fórmula activa (n=30) HCA activo (n=32) Placebo (n=29) Colesterol total Avaliação inicial 181,97 ± 25,64a 172,00 ± 29, 52a 183,93 ± 30,68a Em 12 semanas 185,43 ± 25, 69a 182,35 ± 27,32b 192,79 ± 31,81a Triglicéri dos Avaliação inicial 155,30 ± 40,42a 155,25 ± 45, 19a 164,41 ± 62,39a Em 12 semanas 157,90 ± 52,02a 150,87 ± 51,21a 164,21 ± 83,83a LDL Avaliação inicial 112,33 ± 18,87a 103,94 ± 25,71a 113,07 ± 26,77a Em 12 semanas 114,17 ± 20, 95a 115,39 ± 25, 95b 122,14 ± 27,62a VLDL Avaliação inicial 30,78 ± 8, 03a 30,95 ± 9, 05a 32,71 ± 12,47a Em 12 semanas 38,30 ± 10,40a 30,33 ± 10, 16a 32,52 ± 15,89a HDL Avaliação inicial 38,30 + 7, 06a 35,93 ± 8, 14a 37,83 ± 6, 16a Em 12 semanas 38,37 ± 7,34a 36,45 ± 7,25a 36,59 ± 6, 14a 27 ΕΡ2484345Β1

Quadro 11. HOMA-IR

Período de estudo HOMA -IR Fórmula activa (n=30) HCA activo (n=32) Placebo (n=29) Avaliação inicial 4,22 ± 2,33 4,15 ± 2,37 4,26 ± 3, 03 Final da 12a semana 4,71 ± 2,79 4,18 ± 2,59 5,85 ± 3, 60 Diferença em HOMA-IR 1, 68 0,16 1,59 Significância (Avaliação inicial-12a semana) p=0,238 p=0,951 P=0,009 Significância de Grupo activo em comparação com Placebo p=0,107 p=0,030

Quadro 12. Teste de apetite

Período de estudo Teste de apetite (VAS) Fórmula activa (n=30) HCA activo (n=32) Placebo (n=29) Avaliação inicial 7,47 ± 3,57 8,58 ± 3, 83 8, 94 ± 3, 98 Final da 12a semana 5, 87 ± 2,37 6, 69 ± 3, 63 7, 90 ± 4,19 Diferença em Teste de apetite (VAS) 1, 6 1,51 1,04 Significância (Avaliação inicial-12a semana) P<0,001 P<0,001 p=0,077 Significância de Grupo activo em comparação com Placebo P=0,080 p=0,301 28 ΕΡ2484345Β1

Quadro 13. Qualidade de vida (Pontuação total)

Período de estudo Qualidade de vida (pontuação total) Fórmula activa (n=30) HCA activo (n=32) Placebo (n=29) Inicial 34,50 ± 16, 94 35,22 ± 25, 55 32,41 ± 22, 86 Ao final da 12a semana 28,43 ± 12,88 29, 88 ± 27, 01 28,33 ± 21, 65 Diferença em Qualidade de vida (Pontuação total) 6, 07 5, 34 4, 08 Significância (Avaliação inicial-12a semana) p=0,043 p=0,051 p=0,116 Significância de Grupo activo em comparação com Placebo p=0,684 p=0,808

Quando se examina os dados da avaliação inicial encontrou-se que os grupos quando em comparação entre si não mostram qualquer diferenças significativas como calculado por ANOVA. Ao final do estudo os quadros foram analisados novamente usando ANCOVA para ver se existiam qualquer diferenças desde a avaliação inicial para todos os três grupos. Os dados desta análise são mostrados a seguir: a. Massa de gordura - F=15,309 e p<0,001 b. Peso corporal - F=118,03 e p<0,001

Assim, pode concluir-se que existiam mudanças significativas nas variáveis de eficácia primária entre todos os três grupos desde a avaliação inicial até o final do estudo.

Ao analisar as variáveis em cada grupo encontrou-se que quatro das variáveis de eficácia primária passaram por mudanças estatisticamente significativas desde a avaliação inicial até o final do estudo: 29 ΕΡ2484345Β1 a. 1702,95 g de diminuição em massa de gordura no Grupo de fórmula activa b. 697,28 g de diminuição em massa de gordura no Grupo de HCA activo c. 5,21 kg ou 6,18% de diminuição em peso corporal no

Grupo de fórmula activa d. 2,42 kg ou 2,91% de diminuição em peso corporal no

Grupo de HCA activo 0 grupo de fórmula activa bem como o grupo de HCA activo mostraram uma redução significativa em massa de gordura e peso corporal quando em comparação com o grupo de placebo. 0 grupo de placebo mostrou um ligeiro, mas estatisticamente insignificante aumento em massa de gordura e peso corporal.

Olhando para a estimativa de análise de efeito para massa de gordura encontrou-se que a fórmula activa teve o melhor factor de fiabilidade (67,7%) seguido pelo HCA activo (19,6%) e placebo (3,9%). Assim pode concluir-se que a fórmula activa tem uma maior chance de induzir a perda de massa de gordura que o HCA activo e placebo. Pode concluir-se também que o HCA activo tem uma maior chance de induzir a perda de massa de gordura que o placebo.

De maneira similar, olhando para a estimativa de análise de efeito para peso corporal encontrou-se que a fórmula activa teve o melhor factor de fiabilidade (76,1%) seguido pelo HCA activo (53,2%) e placebo (4,5%). Assim pode concluir—se que a fórmula activa tem uma maior chance de induzir a perda de peso que o HCA activo e placebo. Pode concluir-se também que o HCA activo tem uma maior chance de induzir a perda de peso que o placebo. 30 ΕΡ2484345Β1

Análise adicional foi levada a cabo na variável de peso corporal já que os dados foram colhidos em intervalo de 2 semanas e não somente na avaliação inicial e o final do estudo. Isto foi também tabulado e reapresentado no Quadro 13 a seguir. Encontrou-se que a mudança em peso corporal foi linear para os grupos de fórmula activa e HCA activo embora não tenha sido linear para o grupo de placebo como calculada por Medições repetidas ANOVA.

Quando se examina os dados da avaliação inicial encontrou-se que os grupos quando em comparação entre si não mostram qualquer diferenças significativas como calculada por ANOVA. Ao final do estudo os quadros foram analisados novamente usando ANCOVA para ver se existiam qualquer diferenças desde a avaliação inicial para todos os três grupos (como as variáveis de perfil lipídico não mostraram mudanças de significância clinica a análise ANCOVA não foi feita para essas variáveis). Os dados desta análise são mostrados a seguir: a. Massa magra - F=0,176 e p=0,839 b. Densidade corporal - F=0,632 e p=0,534 c. Perímetro abdominal - F=8,574 e p<0,001 d. HOMA-IR - F=3,23 e p=0,049 e. Teste de apetite - F=l,089 e p=0,19 f. Questionário de qualidade de vida - F=0,097 e p=0,908

Assim, pode concluir-se que houve uma mudança significativa no perímetro abdominal e as variáveis HOMA-IR entre todos os três grupos desde a avaliação inicial até o final do estudo. Nenhuma das outras variáveis de eficácia secundária mostrou qualquer significância entre todos os três grupos desde a avaliação inicial até o final do estudo. 31 ΕΡ2484345Β1

Ao analisar as variáveis em cada grupo encontrou-se que nove das variáveis de eficácia secundária passaram por mudanças estatisticamente significativas desde a avaliação inicial até o final do estudo: a. 620 g de diminuição em Massa magra no Grupo de HCA activo b. 4,40 cm de diminuição em perímetro abdominal no Grupo de fórmula activa c. 3,55 cm de diminuição em perímetro abdominal no Grupo de HCA activo d. 10,35 mg/dL de aumento em colesterol total no Grupo de HCA activo e. 11,45 mg/dL de aumento em LDL no Grupo de HCA activo f. 1,59 de aumento em HOMA-IR no Grupo de placebo g. 1,6 unidade de diminuição no teste de apetite (VAS) no grupo de fórmula activa h. 1,89 unidade de diminuição no teste de apetite (VAS) no grupo de HCA activo i. 6,07 unidade de diminuição em the Questionário de qualidade de vida no Grupo de fórmula activa 0 grupo de fórmula activa mostrou uma redução significativa em perímetro abdominal quando em comparação com o grupo de placebo. Não obstante ter havido uma diminuição significativa na Pontuação de Qualidade de vida (indicativo de uma melhor qualidade de vida) e a pontuação no teste de apetite (indicativo de um apetite reduzido) para o grupo de fórmula activa, quando em comparação com grupo de placebo esta mudança não foi significativa. O grupo de HCA activo mostrou uma diminuição significativa em massa magra e pontuação no teste de 32 ΕΡ2484345Β1 apetite (Indicativo de um apetite reduzido) , no entanto quando em comparação com o grupo de placebo as mudanças foram não foram significativas. 0 grupo de HCA activo também mostrou uma redução significativa em perímetro abdominal quando em comparação com o grupo de placebo.

Finalmente, o grupo de HCA activo também mostrou um aumento em Colesterol total e LDL. Estas mudanças observadas foram não clinicamente significativas já que os valores médios para o Colesterol total e LDL estão dentro das directrizes NCEP ΑΤΡ III [National Cholesterol

Education Program Expert Panei on Detection, Evaluation, and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult Treatment Panei III), Publicação NIH No. 02- 5215, Setembro de 2002] para todos os três grupos ao final do estudo e além disso, a comparação entre estas variáveis e as correspondentes variáveis de placebo não foram estatisticamente significativas. Não obstante o grupo de HCA activo não mostrou uma mudança significativa em HOMA-IR quando em comparação com placebo houve uma mudança significativa. O HCA activo tem mostrado um aumento relativamente menor em HOMA-IR (Aumento de 0,03) que o placebo (Aumento de 1,59), assim pode concluir-se que existe uma possibilidade de que o HCA activo possa deter o aumento em HOMA-IR.

Olhando para a estimativa de análise de efeito para perímetro abdominal encontrou-se que a fórmula activa teve o melhor factor de fiabilidade (42,7%) seguido pelo HCA activo (38,4%) e placebo (3%). Assim pode concluir-se que a fórmula activa tem uma maior chance de induzir uma diminuição em perímetro abdominal que o HCA activo e 33 ΕΡ2484345Β1 placebo. Pode concluir-se também que o HCA activo tem uma maior chance de induzir uma diminuição em perímetro abdominal que o placebo.

Análise adicional foi levada a cabo na variável de perímetro abdominal já que dados foram colhidos em intervalo de 2 semanas e não somente na avaliação inicial e o final do estudo. Isto foi também tabulado e reapresentado no Quadro 15 a seguir. Encontrou-se que a mudança em perímetro abdominal foi linear para os grupos de fórmula activa e HCA activo, enquanto foi não linear para o grupo de placebo como calculado por Medições repetidas de ANOVA. 7.2.2 Curso de tempo de Variáveis seleccionadas de eficácia e Variáveis derivadas de eficácia (População por protocolo)

Quadros 14-16 e as Figuras 3-5 relacionadas mostram os valores visita por visita dessa variáveis de eficácia que foram colhida na avaliação inicial (rastreio e/ou randomização), intervalos de duas semanas e final do estudo. A mudança em índice de massa corporal (IMC) foi derivado do peso corporal e dados de altura e os resultados são mostrados no Quadro 16 com inferência e gráfico mostrado na Figura 5.

Tais quadros e gráficos são significativos somente para sujeitos que tiveram valores em todos esses pontos de tempo, e foram portanto baseados na população por protocolo. 34 ΕΡ2484345Β1

Quadro 14. Mudança em Peso desde a avaliação inicial até o final do estudo a cada Intervalo de duas semanas para todos os três grupos (veja-se a Figura 3 relacionada.)

Período de estudo Peso em kg Fórmula activa (n=30) HCA activo (n=32) Placebo (n=29) Avaliação inicial 84,20 ± 11,64 83,07 ± 10,92 87, 63 ± 12,14 Em 2 semanas 82,86 ± 11,86 82,44 ± 10,78 87, 64 ± 12,59 Em 4 semanas 82,19 ± 11,94 81,88 ± 10,67 87,82 ± 12,56 Em 6 semanas 81,64 ± 11,79 81,61 ± 11,07 87,41 ± 12,32 Em 8 semanas 80,89 ± 12,03 81,28 ± 11,19 87,26 ± 12,47 Em 10 semanas 80,08 ± 12,09 81,32 ± 11,16 87,26 ± 12,75 Em 12 semanas 78,99 ± 11,95 80,65 ± 10,80 87,98 ± 12,26 Diferença em perda de peso (kg) em 12 semanas 5,21 2,42 -0,35

Quadro 15. Mudança em perímetro desde a avaliação inicial até o final do estudo a cada Intervalo de duas semanas para todos os três grupos (veja-se a Figura 4 relacionada.)

Período de estudo Perímetro abdominal em cm Fórmula activa (n=30) HCA activo (n=32) Placebo (n=29) Avaliação inicial 98,90 ± 13,40 99,28 ± 12,17 100,50 ± 13,39 Em 2 semanas 97,81 ± 12,79 98,44 ± 12,15 98,29 ± 13,65 Em 4 semanas 97,07 ± 13,38 97,52 ± 11,87 99,19 ± 12,69 Em 6 semanas 96,55 ± 13,38 96, 82 ± 11,55 98,65 ± 13,45 Em 8 semanas 96,10 ± 13,37 96,34 ± 11,48 99,16 ± 13,75 Em 10 semanas 95,45 ± 13,41 96,26 ± 111,46 98,88 ± 14,07 Em 12 semanas 94,50 ± 13,07 95, 73 ± 11,61 99,78 ± 13,67 Diferença em Mudança em perímetro (cm) em 12 semanas 4,40 3, 55 0,72 35 ΕΡ2484345Β1

Quadro 16. Mudança em IMC desde a avaliação inicial até o final do estudo a cada 2 Semana Intervalo para todos os três grupos (veja-se a Figura 5 relacionada.)

Período de estudo IMC em kg/m2 Fórmula activa (n=30) HCA activo (n=32) Placebo (n=29) Avaliação inicial 32,99 ± 2,68 32,77 ± 2,83 33,36 ± 3,72 Em 2 semanas 32,44 ± 2,67 32,55 ± 2,87 33,24 ± 3,77 Em 4 semanas 32,19 ± 2,78 32,33 ± 2,84 33,30 ± 3,74 Em 6 semanas 31,98 ± 2,78 32,22 ± 2,89 33, 14 ± 3,64 Em 8 semanas 31,78 ± 2,73 32,09 ± 2,98 33,17 ± 3,79 Em 10 semanas 31,47 ± 2,83 32,11 ± 2,92 33,09 ± 3,79 Em 12 semanas 30,96 ± 2,79 31,89 ± 2,92 33,49 ± 3,72 Diferença em mudança de IMC (kg) em 12 semanas 2,06 0,88 -0, 13 Significância (Avaliação inicial-12a semana) p<0,001 P<0,001 p=0,216 Estimativa de Efeito 65,3% 48,5% 4,8%

Interpretação para IMC A fórmula activa mostrou uma queda significativa em IMC de 2,06 kg/m2. 0 HCA activo mostrou uma queda significativa em IMC de 0,88 kglm2 e o placebo mostrou um ligeiro, mas insignificante aumento em IMC. A fórmula activa e HCA activo mostraram uma mudança significativa desde a avaliação inicial quando em comparação com placebo como calculada por ANCOVA.

Olhando para a estimativa de análise de efeito para IMC encontrou-se que a fórmula activa teve o melhor factor de fiabilidade (65,3%) seguido pelo HCA activo (48,5%) e placebo (4,8%). Assim pode concluir-se que a fórmula activa tem uma maior chance de induzir uma diminuição em IMC que o HCA activo e placebo. Pode concluir-se também que o HCA 36 ΕΡ2484345Β1 activo tem uma maior chance de induzir uma diminuição em IMC que o placebo.

Análise adicional foi levada a cabo na variável de IMC já que os dados foram colhidos em intervalo de 2 semanas e não somente na avaliação inicial e o final do estudo. Encontrou-se que a mudança em IMC foi linear para os grupos de fórmula activa e HCA activo enquanto foi não linear para o grupo de placebo como calculado por Medições repetidas ANOVA. 7.2.3 Conclusões de Eficácia

Encontrou-se que a redução significativa em gordura corporal e perda de peso corporal significativa de 6,18% pelo grupo de fórmula activa cumpriu os objectivos de eficácia primários do estudo.

Ao analisar os dados de eficácia for o HCA activo encontrou-se que gordura corporal reduzida significativamente assim cumprindo um objectivo de eficácia primário. Embora peso corporal reduziu significativamente, a redução de somente 2,91% foi não suficiente para cumprir o objectivo de eficácia primário de um 5% de redução de peso corporal.

Além disso, o grupo de fórmula activa e grupo de HCA activos também mostraram uma redução significativa em perímetro abdominal que foi listado como um objectivo de eficácia secundário.

Além disso, ambos os grupos activos também mostraram uma diminuição em pressão sanguínea diastólica e AST amplamente indicando uma melhoria no perfil metabólico.*** 37 ΕΡ2484345Β1 7.3 Estudo da População e Avaliação inicial 7.3.1 Disposição de Sujeitos e Populações analíticas

Dos 165 sujeitos que foram rastreados, 49 apresentaram falhas no rastreio e 116 foram randomizados no estudo.

Estes 116 sujeitos foram randomizados me três grupos, usando um programa de randomização fornecido pelo patrocinador. A disposição destes sujeitos é mostrada no Quadro 17.

Quadro 17. Disposição dos Sujeitos recrutados

Status de sujeitos Fórmula activa HCA activo Placebo Total Perda do seguimento 1 (2,56%) — 3 (7,89%) 4 (3,45%) Terminação antecipada, devido a Evento (s) adverso (s) Terminação antecipada, por outras razões 8 (20,51%) 7 (17,95%) 6 (15,78%) 21 (18,1%) Estudo Completado 30 (76,92%) 32 (82,05%) 29 (76,32%) 91 (78,4%) Total 39 (100,0%) 39 (100,0%) 38 (100,0%) 116 (100,0%) Valor de p χ2=3,216, p=0,522

Embora o grupo de HCA activo tivesse menos pessoas que não completaram o estudo que o grupo de placebo (7 versus 9, respectivamente), estas diferenças não são estatisticamente significativas. A fórmula activa teve o mesmo número de pessoas que não completaram o estudo como o grupo de placebo (9 versus 9). A população por protocolo consiste em 91 sujeitos (78,4%) que foram randomizados em três ramos (30-Fórmula activa versus 32- HCA activo versus 29-Placebo) 38 ΕΡ2484345Β1 7.3.2 Avaliação inicial e caracteristicas Demográficas dos Sujeitos

Como uma verificação da randomização uniforme dos sujeitos, as variáveis demográficas, de segurança e eficácia foram comparadas entre os grupos de fórmula activa, HCA activo e placebo. 0 Quadro 18 resume as caracteristicas dos sujeitos na avaliação inicial (definida como a média dos valores nas visitas de rastreio e randomização).

As variáveis numéricas são resumidas no formato: Média ± Desvio padrão

Mediana (Mínimo - Máximo)

Variáveis categóricas são mostradas como contas e percentagens de total dentro do grupo de produto. Valores de p na última coluna do quadro indicaram se existe uma diferença significativa entre os grupos activo e de placebo como calculada por ANOVA. Valores nominalmente significativos de p (p<0,05) são destacados com texto em negrito.

Quadro 18. Avaliação Inicial e Caracteristicas Demográficas de Sujeitos (Sujeitos que completaram o estudo)

Variável Fórmula activa (n=30) HCA activo (n=32) Placebo (n=29) p- valor Variáveis demográficas Idade em anos 36,73 ± 8,34 37 (19-55) 37,59 ± 7,92 (38 (20-50) 34,66 ± 8,41 33 (20-58) 0,321 género feminino masculino 8 (26,6%) 22 (73,3%) 10 (31,3%) 22 (68,7%) 13 (44,8%) 16 (55,2%) 0,310 Etnicidade Branco Negro Asiático Americano 30 (100,0%) 32 (100,0%) 29 (100,0%) — 39 ΕΡ2484345Β1

Indiano Outros - - - Exercícios Sedentário Leve Moderado Pesado 7 (23,3%) 18 (60,0%) 5 (16,7%) 6 (18,8%) 14 (43,8% 10 (31,3%) 2 (6,3%) 10 (34,5%) 10 (34,5%) 9 (31,0%) 0,272 Exame físico e Sinais vitais Altura (m) 1,59 ± 0,09 1,58 (1,46-1,80) 1,59 ± 0,08 1,60 (1,45- 1,75) 1,62 ± 0,08 1,63 (1,48-1,78) 0,303 IMC (Kg/m2 ) 32,88 ± 2,73 32,39 (28,5 -8,75) 32,77 ± 2,83 32,93 (27,7 -38,8) 33,23 ± 3,81 32,9 (28,02 -38,65) 0,157 Variável Fórmula activa (n=30) HCA activo (n=32) Placebo (n=29) p- valor HR (batimentos/min) 79,10 ± 9,27 76 (66 - 104) 79,09 ± 10,68 78 (59 - 100) 80,28 ± 8,34 80 (66 - 100) 0, 860 PS sistólica mm Hg 123,87 ± 13,77 120 (95 - 154) 122,19 ± 12,63 120 (104 - 160) 123,26 ± 11,81 120 (106-160) 0,871 PS diastólica mm Hg 83,63 ± 8,87 80 (69 - 100) 83,00 ± 9,91 80 (60 -100) 80,34 ± 9,29 80 (65 - 100) 0,365 ECG Normal Anormal 30 (100%) 32 (100%) 29 (100%) Valores de segurança de laboratório Hematócrito 39,71 ± 3,69 38 (34,1-47,2) 39,24 ± 3,71 39,2 (31,5-46, 6) 40,45 ± 3,64 40 (34,50- 51,30) 0,442 Hemoglobina 13,07 ± 2,02 12,4 (10,7-17,1) 13,14 ± 1,74 13,5 (9,9-16,8) 13,80 ± 2,01 13,8 (11,20-18,4) 0,279 Na 141,07 ± 3,20 142 (127-145) 141,81 ± 2,78 142 (135-149) 140,21 ± 3,74 140 (130-148) 0, 162 Valores de segurança de laboratório K 4,53 ± 0,38 4,5 (3,8-5,3) 4,51 ± 0,39 4,6 (3,70- 5,30) 4,55 ± 0,36 4,5 (4,0-5,40) 0,920 Cl 105,30 ± 7,32 101,5 (99-135) 105,72 ± 4,39 105,5 (100-113) 106,14 ± 4,43 107,0 (98-113) 0, 845 Creatinina 0,87 ± 0,17 0,9 (0,4-1,1) 0,87 ± 0,19 0,9 (0,50- 1,20) 0,89 ± 0,21 0,9 (0,4-1,30) 0,949 BUN 17,44 ± 5,22 16,5 (6,28-32) 17,48 ± 3,87 17,5 (9,30-26, 0) 18,34 ± 7,19 16 (10,0- 36,0) 0,778 Ca 9,01 ± 0,35 9,1 (8,2-9,6) 9,25 ± 1,46 9,1 (8,10- 17,0) 9,03 ± 0,49 9,0 (8,10- 10,00) 0,460 AST 27,87 ± 10,69 27 (12-69) 27,41 ± 6,76 27 (17-40) 28,17 ± 6,98 29 (12-43) 0, 936 ALT 31,42 ± 12,30 28 (19-63) 34,72 ± 12,14 32 (17-71) 42,07 ± 17,16 38 (17-82) 0,016 Fosf. alc. 95,63 ± 21,91 101,5 (48-152) 95,41 ± 21,02 100,0 (45-123) 90,45 ± 19,03 96 (52-122) 0,555 Bilirrubina total 0,43 ± 0,32 0,23 (0,1-1,0) 0,36 ± 0,25 0,21 (0,1-1,20) 0,67 ± 0,65 0,6 (0,10- 3,20) 0,018 40 ΕΡ2484345Β1 Ácido úrico 4,78 ± 0,91 4,45 (3,8-7,3) 4,62 ± 1,06 4,3 (3,3-7,6) 5,10 ± 1,36 4,8 (1,8-8,3) 0,241 TSH 1,72 ± 1,33 1,60 (0,15-5,53) 2,18 ± 1,47 1,78 (0,3-6,4) 2,19 ± 1,24 1,78 (0,3-5,2) 0,299 Amilase 45,21 ± 13,17 42 (30-81) 45,31 ± 15,09 41,5 (30-89) 45,79 ± 14,69 42 (23-87) 0,986 Variável Fórmula activa (n=30) HCA activo (n=32) Placebo (n=29) p- valor WBC 8993,33 ± 1364,81 8900 (6800- 13200) 9034,38 ± 1580,45 8500 (7000- 13700) 8951,72 ± 1452,98 8800 (5900- 13100) 0, 976 Variáveis de eficácia primária Peso Kg 84,20 ± 11,64 83,37 (68,8-106,9) 83,07 ± 10,92 82,38 (66,57-112,0) 87,63 ± 12,14 85,46 (68,10-109,8) 0,285 Massa de gordura Em G 32810,37+7024, 79 32364,5 (19908,0-46185,0) 30942,46 ± 5916,88 31180,35 (16682,5-42065,5) 33399,41 ± 8457,21 33355,9 (17978,0-47647,30) 0,376 Variáveis de eficácia secundária Massa magra Em G 46388,4669334, 98 43496,6 (33651,0-62982) 47389,06610755, 03 44565,5 (30390-69278,10) 49707,0568748,72 50189,40 (38870,0-67210,0) 0,407 Densidade óssea 1,144 ± 0,102 1,15 (0,985-1,307) 1,154 ± 0,119 1,17 (0,934-1,382) 1,205 ± 0,143 1,18 (0,956-1,597) 0, 133 Perímetro abdominal 98,90 ± 13,40 99,75 (72,5-130) 99,28 ± 12,17 99,75 (81,0-127,0) 100,50 ± 13,39 99,0 (75,50-129,0) 0, 945 colesterol Total 181,97 ± 25,64 183 (117-256) 172,00 ± 29,52 177 (108-221) 183,93 ± 30,68 183 (126-249) 0,220 Triglicéridos 155,30 ± 40,42 145 (82-269) 155,25 ± 45,19 146,5 (69-274) 164,41 ± 62,39 143 (59-319) 0,719 Variáveis de eficácia secundária LDL 112,33 ± 18,87 108,5 (67-161) 103,94 ± 25,71 106 (51-168) 113,07 ± 26,77 109 (78-170) 0,256 VLDL 30,78 ± 8,03 28,5 (16,4-53,8) 30,95 ± 9,05 29,1 (13,80-54,80) 32,71 ± 12,47 32,0 (11,80-63,80) 0,713 HDL 38,30 ± 7,06 41,5 (21-48) 35,93 ± 8,14 40,0 (15,0-44,0) 37,83 ± 6,16 41,0 (26,0- 46,0) 0,395 Glicose sanguínea 83,90 ± 19,38 85,5 (70-124) 87,09 ± 8,22 85,0 (70-106) 87,72 ± 10,51 87,0 (70-113) 0,909 Insulina 19,47 ± 9,59 17,50 (6,8-45) 19,19 ± 10,53 17,25 (6,20-47,0) 19,8 ± 613,74 15,70 (4,40-54, 0) 0,974 HOMA-IR 4,22 ± 2,21 3,813 (1,39-10,98) 4,15 ± 2,37 3,61 (1,25-11,11) 4,26 ± 3,03 3,18 (1,00- 13,04) 0,987 41 ΕΡ2484345Β1

Apetite (VAS-pontuação) 7,47 ± 3,87 7,10 (1-12) 8,20 ± 4,05 8,80 (0-12) 8,94 ± 3,98 12,20 (1-12) 0,370 Pontuação de Qualidade de vida (Total) 34,50 ± 16,94 36,0 (2-72) 35,22 ± 25,55 35,0 (0-76) 32,41 ± 622,86 35,0 (0-74) 0,879 7.3.3 Interpretação

Uma vez que não produto foi administrado em quaisquer das avaliações iniciais, espera-se que as caracteristicas de avaliação inicial do sujeito sejam similar entre grupos, e isto é geralmente o que se encontrou.

As únicas diferenças significativas entre os grupos de produto foram ALT e Bilirrubina total ligeiramente menores nos grupos activos em comparação com o grupo de placebo (Fórmula activa ALT 31,42 U/L e Bilirrubina total 0,43 mg/dL, HCA activo ALT 34,72 U/L e Bilirrubina total 0,36 mg/dL, Placebo ALT 42,07 U/L e Bilirrubina total 0,67 mg/dL, p=0,016 e 0,018 respectivamente). Esta diferença pode ser devido a flutuações randómicas - 2 diferenças não seriam uma ocorrência inesperada em 41 testes significativos.

Os grupos activos tiveram um menor peso corporal (Fórmula activa 84,20 kg, HCA activo 83,07 Kg e Placebo 87, 63 Kg) , mas a diferença foi não estatisticamente significativo (P=0,285). 7.4 Análise de Segurança 7.4.1 Eventos adversos Não foram notados eventos adversos graves neste estudo. O Quadro 19 lista cada um dos eventos adversos 42 ΕΡ2484345Β1 relataram durante este estudo para sujeitos que completaram o estudo. Os Quadros 20, 21, e 22 listam a gravidade e provável relação com cada grupo de cada evento adverso.

Quadro 19. Eventos adversos Relatados por Cada Grupo para Sujeitos que completaram o estudo EVENTOS ADVERSOS Fórmula activa HCA activo Placebo Total Constipação 1 1 Dor de cabeça precoce 1 1 Dor no tornozelo e pé 1 1 Dor nas costas 1 1 2 Furúnculos das pernas devido ao calor 1 1 Constipação 1 1 Tosse seca, resfriado forte e nariz entupido 1 1 Boca seca 1 1 Febre durante 2 dias 1 1 Problema gástrico 1 1 Gastrite 1 1 Gastrite, dor nas costas 1 1 Apetite aumentado 1 1 Regra irregular 1 1 Irritação no peito 1 1 Dor na articulação, gastrite 1 1 Dor no joelho 1 1 Dor nas pernas e nas costas 1 1 Dor nas pernas 1 1 2 Dor nas pernas, tontura 1 1 Intestino solto 2 2 Intestino solto e perturbação gástrica 1 1 Dor no pescoço 1 1 Palpitação 5-10 minutos todos os dia de manhã 1 1 Irritação cutânea, asma 1 1 Cansaço 1 1 2 Cansaço, dor de cabeça, tontura 2 2 Cansaço, tensão, gastrite 1 1 Fraqueza 1 1 43 ΕΡ2484345Β1

Quadro 20. Eventos adversos, por Grupo de produto -Fórmula activa

Sl. Ns NS de Suj. Descrição do Evento Gravidade Relação 1 49 Dor nas pernas e nas costas Leve Não relacionado 2 6 Cansaço Leve Provável 3 13 Gastrite, dor nas costas Grave Certo 4 39 Dor no pescoço Moderado Não relacionado 5 40 Irritação cutânea, asma Grave Não relacionado 6 41 Dor nas costas Moderado Provável 7 87 Palpitação 5-10 minutos todos os dia de manhã e constipação Leve Certo 8 97 Dor nas pernas Moderado Provável 9 111 Dor nas pernas, tontura Leve Provável

Quadro 21. Eventos adversos, por Grupo de produto -HCA activo

Sl. NS Ns de Suj. Descrição do Evento Gravidade Relação 1 48 Irritação no peito Moderado Provável 2 50 Gastrite Moderado Provável 3 12 Febre durante 2 dias Moderado Não relacionado 4 14 Intestino solto Moderado Não relacionado 5 16 Intestino solto Moderado Não relacionado 6 42 Dor nas costas Moderado Provável 7 47 Cansaço, tensão, gastrite Grave Provável 8 44 Tosse seca, resfriado forte e nariz entupido Grave Não relacionado 9 110 Constipação Grave Provável 10 83 Apetite aumentado Moderado Provável 44 ΕΡ2484345Β1

Quadro 22. Eventos adversos, por Grupo de produto -Placebo

Sl. No N2 de Su j. Descrição do Evento Gravidad e Relação 1 8 Weakens Moderado Não relacionado 2 7 Regra irregular Moderado Não relacionado 3 37 Boca seca Moderado Provável 4 46 Dor no tornozelo e pé Grave Não relacionado 5 86 Cansaço Leve Provável 6 53 Dor no joelho Very Grave Provável 7 80 Dor na articulação, gastrite Moderado Provável 8 89 Problema gástrico Moderado Provável 9 98 Dor nas pernas Moderado Provável 10 74 Constipação Moderado Provável 11 77 Cansaço, dor de cabeça, tontura Leve Provável 12 78 Cansaço, dor de cabeça, tontura Leve Provável 13 75 Intestino solto e perturbação gástrica Moderado Provável 14 76 Dor de cabeça precoce Moderado Não relacionado 15 85 Furúnculos das pernas devido ao calor Grave Provável

Um total de 34 eventos adversos foram experimentados pelos sujeitos na população por protocolo. Destes, o grupo de placebo relataram 15 eventos adversos. 0 grupo de fórmula activa relataram 9 eventos adversos e o grupo de HCA activo relataram 10 eventos adversos. Não houve significância entre os três grupos (p=0,193) nem houve significância quando comparado o grupo de fórmula activa com placebo (p=0,089) e HCA activo com placebo (p=0,179). Não obstante não ter havido diferença significativa entre os três grupos, uma tendência geral foi observada 45 ΕΡ2484345Β1 pela qual os eventos adversos podem ser agrupados em dois categorias principais - dor na articulação e gastrite. No entanto, estes eventos apareceram em todos os três grupos e não puderam ser atribuídos a qualquer um grupo.

Os eventos adversos não foram responsáveis por qualquer das terminações antecipadas para qualquer dos sujeitos para qualquer dos grupos. 7.4.2 Valores de segurança de laboratório e Sinais vitais

Os quadros 23, 24, 25, e 26 resumem a mudança em valores de segurança de laboratório desde a avaliação inicial até o final do estudo (semana 12) para cada grupo de produto. A avaliação inicial é definida como a média de valores disponíveis desde o rastreio e/ou visita de randomização (antes de dispensação do produto de estudo) .

As variáveis são resumidas no formato: Média ± Desvio padrão

Para os quadros que correspondem ao Exame físico e sinais vitais os dados de significância são reapresentados na fila mais abaixo dos quadros - isto foi calculado por medições repetidas de ANOVA. Para os quadros que correspondem a segurança de laboratório valores sobrescritos não idênticos são significativos a p<0,05, sobrescritos idênticos não são significativos usando o teste t de student com correcção de Bonferroni.

Este sumário baseia-se nos sujeitos que completaram o estudo. 46 ΕΡ2484345Β1

Quadro 23. Hemodinâmica (Frequência de pulso

Período de tempo Fórmula activa (n=30) HCA activo (n=32) I Placebo (n=29) Avaliação inicial 79,10 ± 9,27 79,09 ± 10,68 80,28 ± 8,35 Em 2 semanas 77,27 ± 10,80 77,75 ± 10,06 78,7 ± 69,03 Em 4 semanas 77,37 ± 10,93 80,44 ± 8,36 79, 32 ± 9,81 Em 6 semanas 76,80 ± 7,85 76,75 ± 7,91 77,52 ± 7,51 Em 8 semanas 76,33 ± 8,21 76,28 ± 10,89 77,75 ± 10,05 Em 10 semanas 76,17 ± 8,29 76,78 ± 8,85 75, 97 ± 8,66 Em 12 semanas 75,20 ± 7,22 74,0 ± 67,93 74,7 ± 66,25 Significância por meio de medições repetidas ANOVA p=0,582 p=0,0 31 p=0,115

Quadro 24. Hemodinâmica (Pressão sanguínea sistólica)

Período de tempo Fórmula activa (n=30) HCA activo (n=32) Placebo (n=29) Avaliação inicial 123,87 ± 13,77 122,19 ± 12, 64 123,28 ± 11, 81 Em 2 semanas 121,97 ± 10,89 122.56 ± 10.56 122,38 ± 12, 01 Em 4 semanas 122,27 ± 11,41 121,13 ± 10, 05 124,04 ± 12,82 Em 6 semanas 119,30 ± 12,15 118,63 ± 12,32 119,41 ± 11,66 Em 8 semanas 118,43 ± 11,05 118,66 ± 12,79 121,71 ± 9,06 Em 10 semanas 118,80 ± 9,41 118,56 ± 12, 06 120,00 ± 11,51 Em 12 semanas 122,53 ± 12,83 117,97 ± 9,23 120,45 ± 12,05 Significância por meio de medições repetidas ANOVA p=0,125 p=0,302 p=0,158 47 ΕΡ2484345Β1

Quadro 25. Hemodinâmica (Pressão sanguínea diastólica)

Período de tempo Fórmula activa (n=30) HCA activo (n=32) Placebo (n=29). Avaliação inicial 83,63 ± 8,86 83,00 ± 9,91 80,34 ± 9,29 Em 2 semanas 78,73 ± 9,68 79,88 ± 7,62 80,28 ± 10,94 Em 4 semanas 83,13 ± 9,41 79,06 ± 9,19 81,79 ± 8,49 Em 6 semanas 79, 87 ± 9,83 79,22 ± 9,85 79,24 ± 9,25 Em 8 semanas 78,00 ± 9,63 78,31 ± 10,16 79,11 ± 8,49 Em 10 semanas 78,27 ± 8,58 78,31 ± 10,16 78,41 ± 7,82 Em 12 semanas 79,63 ± 9,81 77,00 ± 6,85 78,41 ± 10,64 Significância por meio de medições repetidas ANOVA p=0,012 p=0,016 p=0,755

Quadro 26. Valores de Segurança de Laboratório Variável/período de tempo Fórmula activa (n=30) HCA activo (n=32) Placebo (n=29) Hematócrito Avaliação inicial 39,71 ± 3,69a 39,24 ± 3,71a 40,45 ± 3,64a Em 12 semanas 40,88 ± 4,01b 40,33 ± 3,60a 41,84 ± 4,02a FBS Avaliação inicial 83, 90 ± 19,38a 87,09 ± 8,22a 87,72 ± 10,51a Em 12 semanas 86,27 ± 7,79a 83,94 ± 7,81a 85,17 ± 8,22a Insulina Avaliação inicial 19,47 ± 9,59a 19,19 ± 10,53a 19,86 ± 13,74a Em 12 semanas 21,73 ± 12,31a 21,07 ± 12,04a 28,17 ± 17,99b Densidade óssea Avaliação inicial 1,144 ± 0,102a 1,154 ± 0,119a 1,205 ± 0,143a Em 12 semanas 1,154 ± 0,087a 1,151 ± 0,111a 1,203 ± 0,131a HOMA-IR Avaliação inicial 4,22 ± 2,21a 4,15 ± 2,37a 4,26 ± 3,03a Em 12 semanas 4,71 ± 2,79a 4,18 ± 2,59a 5,85 ± 3,60b Hemoglobina Avaliação inicial 13,07 ± 2,02a 13,14 ± 1,74a 13,80 ± 2,01a Em 12 semanas 13,24 ± 1,94a 13,09 ± 1,68a 13,67 ± 2,01a WBC Avaliação inicial 8993,33 ± 1364,81a 9034,38 ± 1580,45a 8951,72 ± 1452,98a Em 12 semanas 8590,00 ± 1176,01a 8125,81 ± 855,17b 8803,45 ± 1868,82a 48 ΕΡ2484345Β1

Na Avaliação inicial 141,07 ± 3,20a 141,81 ± 2,78a 140,21 ± 3,74a Em 12 semanas 138,87 ± 2,32b 139,26 ± 2,76b 140,00 ± 2,66a K Avaliação inicial 4,53 ± 0,38a 4,51 ± 0,39a 4,55 ± 0,36a Em 12 semanas 4,48 ± 0,27a 4,43 ± 0,38a 4,53 ± 0,35a Cl Avaliação inicial 105,30 ± 7,32a 105,72 ± 4,39a 106,14 ± 4,43a Em 12 semanas 104,53 ± 4,04a 104,45 ± 3,92a 104,2863,37b Creatinina Avaliação inicial 0,87 ± 0,17a 0,87 ± 0,19a 0,89 ± 0,21a Em 12 semanas 0,89 ± 0,16a 0,84 ± 0,19a 0,93 ± 0,17a BUN Avaliação inicial 17,44 ± 5,22a 17,48 ± 3,87a 18,34 ± 7,19a Em 12 semanas 16,73 ± 3,52a 17,05 ± 4,16a 16,14 ± 4,49a AST Avaliação inicial 27,87 ± 10,69a 27,41 ± 6,76a 28,17 ± 6,98a Em 12 semanas 24,40 ± 6,45a 23,29 ± 7,26b 25,07 ± 7,29a ALT Avaliação inicial 31,42 ± 12,30a 34,72 ± 12,14a 42,07 ± 17,16a Em 12 semanas 30,71 ± 12,74a 31,61 ± 11,29a 39,00 ± 17,41a Fosf. alc. Avaliação inicial 95,63 ± 21,91a 95,41 ± 21,02a 90,45 ± 19,03a Em 12 semanas 95,06 ± 16,94a 93,58 ± 17,29a 93,03 ± 18,18a Bilirrubina total Avaliação inicial 0,43 ± 0,32a 0,36 ± 0,25a 0,67 ± 0,65a Em 12 semanas 0,38 ± 0,30a 0,34 ± 0,24a 0,60 ± 0,47a Ácido úrico Avaliação inicial 4,78 ± 0,91a 4,62 ± 1,06a 5,10 ± 1,36a Em 12 semanas 4,76 ± 1,11a 4,56 ± 1,04a 4,89 ± 1,40a TSH Avaliação inicial 1,72 ± 1,33a 2,18 ± 1,47a 2,19 ± 1,24a Em 12 semanas 1,65 ± 0,83a 1,92 ± 0,76a 1,94 ± 0,84a Amilase Avaliação inicial 45,21 ± 13,17a 45,31 ± 15,09a 45,79 ± 14,69a Em 12 semanas 43,72 ± 15,48a 46,13 ± 19,54a 45,55 ± 16,22a

Três dos exames físicos variáveis passaram por mudanças estatisticamente significativas desde a avaliação inicial até o final do estudo: 49 ΕΡ2484345Β1 a. 3,9 batimentos/min de diminuição em frequência de pulso no Grupo de fórmula activa b. 4 mm Hg de diminuição em Pressão sanguínea diastólica no Grupo de fórmula activa c. 6 mm Hg de diminuição em Pressão sanguínea diastólica no Grupo de HCA activo A mudança observada na frequência de pulso não foi clinicamente significativa já que os valores médios estão dentro do intervalo normal para todos os três grupos ao final do estudo. Não obstante, houve uma diminuição significativa na frequência de pulso do HCA activo isto pode ser atribuído a flutuações randómicas. Desde uma perspectiva de segurança, não existiam mudanças clinicamente significativas na pressão sanguínea diastólica no grupo de fórmula activa e o grupo de HCA activo.

Além disso, a comparação entre as variáveis anteriores às correspondentes variáveis de placebo não foram estatisticamente significativas.

Oito das variáveis de segurança de laboratório passaram por mudanças estatisticamente significativas desde a avaliação inicial até o final do estudo: a. 2,2 mEq/L de diminuição em Na no Grupo de fórmula activa b. 2,55 mEq/L de diminuição em Na no Grupo de HCA activo c. 1,86 mEq/L de diminuição em Cl no Grupo de placebo d. 4,12 U/L de diminuição em AST no Grupo de HCA activo e. 1,17% de aumento em Hematócrito no Grupo de fórmula activa f. 8,31 mu/ml de aumento em Insulina no Grupo de placebo g. 1,59 aumento em HOMA—IR no Grupo de placebo h. 908,57 milhares/mL de diminuição em WBC no Grupo de 50 ΕΡ2484345Β1 HCA activo

Quando se comprara as variáveis anteriores às correspondentes variáveis de placebo encontrou-se que não houve significância estatística para Na, Cl, Hematócrito, ou AST. No entanto, o grupo de HCA activo mostrou uma diminuição significativa em WBC.

Desde uma perspectiva de segurança as mudanças observadas não foram clinicamente significativas já que os valores médios para o Na, Cl, AST e WBC estão dentro do normal intervalo para todos os três grupos ao final do estudo. 0 aumento em Hematócrito no grupo de fórmula activa pode ser atribuído a variabilidade intra-inter observador e, portanto, também não é clinicamente significativa desde uma perspectiva de segurança. 0 aumento em Insulina e o consequente aumento em HOMA-IR no grupo de placebo pode ser atribuído a algumas pessoas com valores diferentes no grupo de placebo. Três pessoas com valores diferentes foram identificadas e seus detalhes são como segue:

Valor de final do Valor de final do Valor de final do retiradas tornarão a. Sujeito N°. 54 teve uma avaliação inicial de insulina de 31 mu/ml e um valor de insulina ao estudo de 66 mu/ml b. Sujeito N°. 89 teve uma avaliação inicial de insulina de 14,2 mu/ml e um valor de insulina ao estudo de 49,2 mu/ml c. Sujeito N°.113 teve uma avaliação inicial de insulina de 20 mu/ml e um valor de insulina ao estudo de 46 mu/ml

Se estas pessoas com valores diferentes são então o aumento de insulina e HOMA-IR também se insignificantes para o grupo de placebo. 51 ΕΡ2484345Β1 7.4.3 Conclusões de Segurança

Quatro valores de segurança mostraram mudanças médias nominalmente significativas desde a avaliação inicial até o final do estudo no grupo de fórmula activa (Diminuição em Pulso, Pressão sanguínea diastólica, Na, e um aumento em Hematócrito).

Quatro valores de segurança mostraram mudanças médias nominalmente significativas desde a avaliação inicial até o final do estudo no grupo de HCA activo (Diminuição em Pressão sanguínea diastólica, AST, Na e WBC).

Três valores de segurança mostraram mudanças médias nominalmente significativas desde a avaliação inicial até o final do estudo no grupo de placebo (aumento em Insulina e HOMA-IR e uma diminuição em Cl). Não existiram diferenças significativas entre o grupos activos e placebo para todas as variáveis excepto WBC. 0 grupo de HCA activo mostrou uma diminuição em WBC em comparação com placebo. No entanto, esta mudança não foi de uma magnitude clinicamente importante.

Geralmente, este estudo não forneceu motivos para preocupações com a segurança. 7.4.4 Análise de eficácia

Além disso, o grupo de fórmula activa e grupo de HCA activo também mostraram uma redução significativa em perímetro abdominal que foi listado como um objectivo de eficácia secundário. 52 ΕΡ2484345Β1

Além disso, ambos os grupos activos também mostraram uma diminuição em pressão sanguínea diastólica e AST amplamente indicando uma melhoria no perfil metabólico. 7.5 Conformidade A conformidade foi analisada desde a avaliação inicial até o final do estudo e também para cada período de duas semanas. A percentagem de conformidade para o total e período de tempo de 2 semana (da avaliação inicial ao final do estudo) foi calculada da seguinte maneira: a. 0 número de pílulas retornadas foi dividido pelo total pílulas dispensadas durante o período correspondente. b. 0 número anterior foi então subtraído do número 1 e o número resultante foi multiplicado por 100. O quadro 27 resume estas medições de conformidade e as compares entre os grupos de produtos. Dados numéricos são apresentados no formato: Média ± Desvio padrão

Quadro 27. Conformidade (%) por Produto (a partir da contagem de Produto Retornado)

Período de estudo Fórmula activa (n=30) HCA activo (n=32) Placebo (n=29) Semana 2 84,53 ± 17,71 84,11 ± 10,64 85, 68 ± 16,45 Semana 4 84,44 ± 17,57 86, 02 ± 8,27 88,36 ± 10,97 semana6 79, 39 ± 22,49 84, 67 ± 11,97 89,60 ± 10,92 Semana 8 90,74 ± 7,34 88, 88 ± 8,86 89, 89 ± 9,71 Semana 10 87,22 ± 10,17 85,89 ± 16,99 94,06 ± 6,85 Semana 12 90,16 ± 15,85 90, 75 ± 11,33 88,50 ± 21,04 Da avaliação inicial ao final do estudo 86, 08 ± 6, 10 86,72 ± 5,88 89,35 ± 7,60 53 ΕΡ2484345Β1

Todos os três grupos tiveram um alto nível de conformidade em uma base de 2 semanas. Isto foi também observado quando se considera o período de tempo desde a avaliação inicial até o final do estudo.

Em geral, a conformidade foi muito boa e adequada para o propósitos deste estudo. 7.6 Informação Adicional sobre estudo

Esta secção descreve o desenho do estudo, os métodos de gestão de dados, os parâmetros estudados, e os métodos estatísticos utilizados. Apresenta os resultados na forma de sumário de quadros e gráficos com níveis de significância, tamanho de efeito e interpretações. 7.6.1 Descrição do desenho do estudo 7.6.1.1 Propósito, Objectivo e Critérios de avaliação do estudo 0 propósito de este estudo é testar a eficácia e segurança de dois produtos experimentais para a perda de peso como em comparação com placebo ao longo de um período de 12 semanas em adultos obesos e com sobrepeso saudáveis.

Os objectivos específicos e os critérios de avaliação correspondentes são resumidos aqui. Todos os efeitos que são definidos como mudanças em 12 semanas desde a avaliação inicial até o final do estudo. Todos os objectivos de eficácia e segurança envolvem comparar os suplementos activos com placebo, com relação a cada um dos seguintes critérios de avaliação. 54 ΕΡ2484345Β1

Critérios de avaliação de eficácia Primários • Massa de gordura reduzida no rastreio de absorciometria de raios x de energia dual (DEXA) entre a avaliação inicial e visita da 12a semana e perda de 5% ou mais de peso corporal em 12 semanas

Critérios de avaliação de eficácia secundários • Composição corporal melhorada, aumento de massa magra e densidade óssea melhorada medida por meio de rastreio de absorciometria de raios x de energia dual (DEXA) • Perímetro abdominal reduzido • Perfis lipídicos melhorados • Resistência à insulina reduzida calculada pelo método de HOMA-IR. • Capacidade de manter uma dieta de perda de peso e/ou diminuição do apetite • Qualidade de vida melhorada com base num questionário de qualidade de vida (QLQ)

Critérios de avaliação de segurança primários • Exame físico (HR, SBP, DBP) • Valores de segurança de laboratório (Contagem completa do sangue (CBC), BUN, electrólitos, glucose, creatinina, cálcio, AST, ALT, Fosfatase alcalina, bilirrubina total, ácido úrico, análise de urina, colesterol, triglicéridos, TSH, HbAlc, teste de gravidez (mulheres), amilase)

Parâmetros de Segurança Secundários • Eventos adversos 7.6.1.2 Estrutura do estudo

Isto é um ensaio clínico de três grupos, prospectivo, 55 ΕΡ2484345Β1 paralelo, randomizado, de dupla ocultação controlado por placebo. 7.6.1.3 Descrição do estudo 0 estudo recrutou homens e mulheres adultos saudáveis na faixa etária de 18 a 60 anos, que tinham valores de IMC entre 28 e 40 kg/m2.

Todos os sujeitos foram pré-rastreados em visitas locais; os candidatos potenciais foram chamados para um rastreio e avaliação inicial após obter o consentimento informado. Os sujeitos aceitáveis foram recrutados e randomizados para os três ramos (razão 1:1:1) para receber fórmula activa, HCA activo ou placebo durante 12 semanas. Como protocolo, as avaliações eficácia e segurança foram realizadas na avaliação inicial, semana 2, semana 4, semana 6, semana 8, semana 10 e semana 12.

Os respectivos Comités de IRB/ Ética dos centros onde o estudo foi levado a cabo aprovaram este estudo: 1. St. Johns Medicai College Hospital, Bangalore, índia, e 2. M. S. Ramiah Medicai College Hospital, Bangalore, índia. 7.6.1.4 Protocolo de teste O Quadro 28 resume as actividades realizadas a cada visita do estudo. Uma descrição completa de cada actividade das visitas é fornecida no protocolo. 56 ΕΡ2484345Β1 ΕΡ2484345Β1 Quadro 28. Actividades realizadas a cada Visita Rastreio Semana -1 Avaliação inicial Semana 0 Semana +2 Semana + 4 Semana + 6 Semana + 8 Semana +10 Semana + 12 consetiraento X Demografia X Exclusão/ Inclusão X X Histórico/Medicação concomitante X Exame físico X X EKG X X instruções dietéticas X Peso, perímetro, IMC, BP, Pulso (IMC) X X X X X X X DEX X X Rotina de lab1 X X Perfil lipídico X X Insulina/glucose X X Apetite/saciedade VAS X X Qualidade de vida (QOL) X nível de exercício X X X X X X X Revisão do diário/ conformidade X X X X X X Eventos adversos/ medicações concomitantes X X X X X X Contagem de pílulas X X X X X X Dispensação do composto do estudo X X X X X X As visitas Após o rastreio terão uma janela de +/- 7 dias 7.6.2 Métodos de gestão de dados

Todos os dados elementos registados durante o período de estudo foram inseridos e validados por K. P. Suresh (Estatístico) em Microsoft Excel. As definições dos elementos de dados inseridos são mostrados no Quadro 29. A chave de randomização foi transmitida electronicamente pelo vendedor ao estatístico e cada designação grupo de produto de suplemento do sujeito foi transferida electronicamente na planilha electrónica de dados com base nos números de randomização dos sujeitos. 0 altura índice de massa corporal foi calculado a partir da e peso. Todas as variáveis e mudanças foram 57 ΕΡ2484345Β1 transferidas no software estatístico SPSS, SYSTAT, resumido (Contagens, Mínimo, Máximo, Média, Mediana, Desvio padrão) dentro de cada grupo de tratamento, transferidas ao relatório estatístico e então reformatadas. Os gráficos adequados foram gerados para representar as mudanças nos parâmetros de eficácia chave e então transferidos ao to the relatório estatístico. 1Contagem completa do sangue (CBC), BUN, electrólitos, glucose, creatinina, cálcio, AST, ALT, Fosfatase alcalina, bilirrubina total, ácido úrico, análise de urina, colesterol, triglicéridos, TSH, HbAlc, teste de gravidez (mulheres), amilase. 7.6.3 Elementos Dados, Parâmetros de Eficácia e Segurança

Quadro 29. Elementos de Dados

Elementos de Dados Definição Inicial Sujeito Inicial Code Designação do número de randomização Visita Quais visita os dados foi colhidos, por protocolo Género Masculino ou Feminino Idade Idade em anos Raça Qual Etnicidade o sujeito circulou na demografia ou outra planilha relacionada Altura Altura em metros Peso Peso em quilogramas IMC Peso em Quilogramas/ Altura em Metros quadrados Gordura Gordura corporal total como medido por corporal meio de DEXA em g Massa magra Massa magra corporal total como medida por meio de DEXA em g Colesterol Colesterol total mg/dL Triglicérido s Total Triglicéridos mg/dL LDL Lipoproteína de baixa densidade mg/dL VLDL Lipoproteína de muito baixa densidade mg/ dL HDL Lipoproteína de alta densidade mg/dL Glucose Açúcar no Sangue Em jejum mg/dL 58 ΕΡ2484345Β1

Insulina Insulina Em jejum mu/ml Hematócrito Nível de hematócrito% Hemoglobina Nível de Hemoglobina g/dL Contagem de células brancas Contagem de células brancas no sangue milhares/micro litre Creatinina Nível de Creatinina mg/dL BUN Ureia Azoto no Sangue mg/dL Na Sódio em jejum - valor de electrólito, mEq/L K Potássio em jejum valor de electrólito, mEq/L Cl Cloreto em jejum valor de electrólito, mEq/L Ca Cálcio em jejum, mg/dL AST Aspartato Amino Transaminase, U/L ALT Alanina Amino Transferase, U/L Fosf. alc. Fosfatase alcalina, U/L Bilirrubina total Bilirrubina em jejum total, mg/dL Ácido úrico Ácido úrico em jejum, mg/dL TSH Hormona Estimulante da tiróide, mlu/ml Amilase Amilase em jejum, U/L Kcal Ingestão de alimentos no teste de apetite, Kcals Apetite Medida em escala análoga visual. 0-12,2 Pressão sanguínea Pressão sanguínea Sistólica/ diastólica, mm Hg Pulso Pulso em repouso, batimentos/min QOL Perda de peso questionário de qualidade de vida Medição de sintoma Medição de sintoma relacionado com o peso Conformidade % de Conformidade com a ingestão do produto designado 7.6.4 Métodos estatísticos 7.6.4.1 Definição de População de Estudo A população por protocolo é definida como todos sujeitos recrutados que completaram todas as visitas 59 ΕΡ2484345Β1 programadas e uma taxa de conformidade do produto global de pelo menos 75%. A análise de segurança e eficácia foi realizada nesta população. 7.6.4.2 Estatística descritiva

Estatística descritiva para cada variável numérica foi resumida como a média e desvios padrão para todos os sujeitos a cada intervalo de tempo em cada grupo de estudo. 7.6.4.3 Mudanças ao longo do tempo

Medições repetidas ANOVA de uma via avaliaram as mudanças ao longo do tempo desde a avaliação inicial até cada visita subsequente dentro de cada grupo de produto. A significância em par com Correcção de Bonferroni avaliado mudanças sobre dois pontos (da avaliação inicial ao final do estudo) para cada grupo de estudo.

Os Efeitos do tratamento foram avaliados pela comparação dos parâmetros da semana 12 entre produtos activos e Placebo mantendo a avaliação inicial de Valores como covariáveis pela Análise de Covariância (ANCOVA). 7.6.4.4 Eventos adversos

Todos os eventos adversos/complicações foram registados para cada visita para cada produto e as frequências obtidas foram tabuladas e testadas para significância com Placebo por testes qui-quadrado/exacto de Fisher. 60 ΕΡ2484345Β1 7.6.4.5 Controlo de Erro do tipo 1

Todos os testes estatísticos foram conduzidos ao nível alfa 0,05, significando que Pb 0,05 foi considerado "nominalmente significativo". O ajuste para testes múltiplos foi feito aplicando a correcção de Bonferroni aos valores de p. O valor de p para a comparação dos critérios de avaliação de eficácia primários entre grupo de activo e placebo foi considerado que é conclusivo. 7.6.4.6 Software O software estatístico, a saber, SPSS 11.0 e Systat 8.0 foram utilizadas para a análise dos dados e Microsoft Word e Excel foram utilizados para gerar os gráficos e quadros. REFERENCIAS CITADAS 3.764.692 6.399.089 6.784.206 6.830.765 424/279 424/439 514/557 424/729

Lowenstein et al Yegorova, et al Udell, et al Rombi 10/1973 4/2002 8/2004 12/2004 2004 / 0259937 4/2000 Samuel et al 514/460 WO/2005/014020 7/2005 KROTKIEWSKI et al WO/2005/067952 2/2005 BAGCHI et al

Arion WJ, et al. (1997) Chlorogenic Acid Analogue S 3483: A

Potent Competitive Inhibitor of the Hepatic and Renal

Glucose- 6- Phosphatase Systems. Archives of Biochemistry and Biophysics; 339 (2) : 315- 322.

Hayamizu, K., Ishii Y., Knaeko, I., Shen, M., Okuhara, Y., Shigematsu, N., Tomi, H., Furuse, M., Yohsino, G., and Shimasaki, H.; (2003) Effects of Garcinia cambogia (Hydroxycitric acid) on Visceral fat accumulation: A double blind, randomized, placebo controlled trial, Curr Ther Res Clin Exp. 64: 551-567 61 ΕΡ2484345Β1

Hemmerle H, et al. (1997) Chlorogenic acid and synthetic chlorogenic acid derivatives: novel inhibitors of hepatic glucose- 6- phosphate translocase.Journal of Medicinal Chemistry 40 (2) : 137- 145.

Hertog, M.G., Kromhout, D., Aravanis, C., Blackburn, H., Buzina, R., Fidanza F, Giampaoli, S., Jansen, A., Menotti, A., Nedeljkovic, S., Pekkarinen, M., Simic, B.S., Toshima, H., Feskens, Hollman, P.C.H., Katan, M.B. (1995)

Flavonoid intake and long-term risk of coronary heart disease and câncer in the Seven Countries Study. Arch. Intern. Med., 155, 381-386 [abstract]

Heymsfield, S.B., Allison, D., Vasselli, J. . Pietrobelli, A, Greenfield, D. and Nunez, C. (1998) Garcinia cambogia (Hydroxycitric Acid) as a Potential Antiobesity Agent: A Randomized Controlled Trial. JAMA: The Journal of the American Medicai Association. 280(18): 1596-1600. Heymsfield, SB, Allison, DB, Vasselli, JR, Pietrobelli, A, Greenfield, D, and Nunez, C. (1998) Garcinia cambogia (hydroxycitric acid) as a potential antiobesity agent: a randomized controlled trial. JAMA. 280,1596-600. Hollman, P.C.H., Feskens, E.J.M. & Katan, M.B. (1999) Tea flavonols in cardiovascular disease and câncer epidemiology. Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 220, 198-202

Ikeda Y et al. (1999) Effectiveness and safety of Banabamin tablets containing an extract from banaba in patients with mild type 2 diabetes. Japan Pharmacol Ther 27:67-73. Johnston KL et al. Coffee acutely modifies gastrointestinal hormone secretion and glucose tolerance in humans: glycemic effects of chlorogenic acid and caffeine. Am J Clin Nutr. Oct; 78 (4) : 728- 33, 2003 Juneja LR, Chu D-C, Okubo T, et al. (1999) L-theanine a unique amino acid of green tea and its relaxation effect in humans. Trends Food Sei Tech. 10:199-204. Knowler WC, Barrett-Connor E, Fowler SE, et al. (2002) Reduction in the incidence of type 2 diabetes with 62 ΕΡ2484345Β1 lifestyle intervention or Metformin. New England Journal of Medicine. 346:393-403

Loe YC et al. (2001) Gas chromatography/mass spectrometry method to quantify blood hydroxycitrate concentration." Annal Biochem 292, 1:148-54.

Loe YC et al. (2001) Time course of hydroxycitrate clearance in fasting and fed humans. FASEB J 15, 4:632, Abs. 501.1.

Mahendran, P., Shymala Devi, C.S. (2001) The Modulating effect of Garcinia cambogia extract on ethanol induced peroxidative damage in rats, Indian J of Pharmacology, 33: 87-91

Mason R. (2001) 200 mg of Zen; L-theanine boosts alpha waves, promotes alert relaxation. Alternative & Complementary Therapies,April; 7:91-9.

Murakami C et al. (1993) Screening of plant constituents for effect on glucose transport activity in Ehrlich ascites tumour cells. Chem and Pharm Bulletin (Tokyo) Dec; 41 (12) : 2129- 31.

Nathan DM. (1993) Long-term complications of diabetes mellitus. New England Journal of Medicine, 328:1676-1685. National Cholesterol Education Program Expert Panei on Detection, Evaluation, and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult Treatment Panei III) , NIH Publication No. 02-5215, September 2002. Preuss H.G., D. Bagchi, C.V.S. Rao, B.W. Echard, S. Satyanarayana, and M. Bagchi (2002) Effect of hydroxycitric acid on weight loss, body mass index and plasma leptin leveis in human subjects. FASEB J. 16(5) :A 1020. Preuss, H. G. (2004) Bagchi, D., Bagchi, M., Rao, C.V.S, Satyanarayana , S., Dey, D. K. Efficacy of a novel, natural extract of (- )- hydroxycitric acid (HCA- SX) and a combination of HCA- SX, niacin- bound chromium and Gymnema sylvestre extract in weight management in human volunteers: A pilot study. Nutrition Research 24 45- 58. Schaefer B. Coffee consumption and type 2 diabetes 63 ΕΡ2484345Β1 mellitus [letter]. (2004) Ann Intern Med. 141:321 1 Shirai M. et al. (1994) Single Forced Oral Administration Toxicity

Test on Mouse by Banaba Extract Jpn Pharmacol Ther, 22(11) : 119 121.

Sullivan C., and Triscari J. (1977) Metabolic regulation as a control for lipid disorders. I. Influence of (— )- hydroxycitrate on experimentally induced obesity in the rodent. Am J Clin Nutr 30: 767- 76.

Suzuki Y et al. (1999) Antiobesity activity of extracts from Lagerstroemia speciosa L. leaves on female KIC- Ay mice. J Nutr Sei Vitaminol (Tokyo) 45 (6) : 791- 5.

Tommasi ND et al. (1991) Hypoglycemic effects of sesquiterpene glycosides and polyhydroxylated triterpenoids of Eriobotrya japonica. Planta Medica 57: 414 - 416. Tuomilehto J, Lindstrom J, Eriksson JG, et al. (2001) Prevention of type 2 diabetes mellitus by changes in lifestyle among subjects with impaired glucose tolerance. New England Journal of Medicne. 344:1343-1350. van Dam, R.M. and F.B. Hu (2005) Coffee Consumption and Risk of Type 2 Diabetes A Systematic Review; J. Am.

Med. Assoe. 294: 97 van Loon, Luc JC, Johannes JM van Rooijen, Bas Niesen, Hans Verhagen, Wim HM Saris, and Anton JM (2000 Wagenmakers. Effects of acute (- )- hydroxycitrate supplementation on substrate metabolism at rest and during exercise in humans. Am J Clin Nutr 72; 1445- 50.

Weisburger, J.H. (1999) Tea and health: the underlying mechanisms. Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 220, 271-275 Wild S, Roglic G, Green A, Sicree R, King H. (2004) Global prevalence of diabetes: estimates for the year 2000 and projections for 2030. Diabetes Care. 27:1047-1053 64 ΕΡ2484345Β1

REFERÊNCIAS CITADAS NA DESCRIÇÃO

Esta lista de referências citadas pelo requerente é apenas para a conveniência do leitor. A mesma não faz parte do documento de Patente Europeia. Embora tenha sido tomado muito cuidado na compilação das referências, não se poderão excluir erros e omissões e o IEP nao assume qualquer responsabilidade neste sentido.

Documentos de Patente citados na descrição • US 3764692 A [0010] • US 20040259937 AI [0023] • US 20040259937 A [0041] • WO 3764692 A [0159] • WO 6399089 A [0159] • WO 6784206 A [0159] • WO 6830765 A [0159] • WO 20040259937 A [0159] • WO 2005014020 A [0159] • WO 2005067952 A [0159]

Literatura não relacionada com patentes referida na descrição: • National Cholesterol Education Program Expert Panei on

Detection, Evaluation, and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult Treatment Panei III. NIH Publication No. 02-5215, September 2002 [0085] [0159]

• ARION WJ et al. Chlorogenic Acid Analogue S 3483: A

Potent Competitive Inhibitor of the Hepatic and Renal Glucose-6-Phosphatase Systems. Archives of

Biochemistry and Biophysics, 1997, vol. 339 (2), 315- 322 [0159] • HAYAMIZU, K. ; ISHII Y. ; ΚΝΑΕΚΟ, I. ; SHEN, M. ; OKUHARA, Y. ; SHIGEMATSU, N. ; TOMI, H. ; FURUSE, M. ; 65 ΕΡ2484345Β1 YOHSINO, G. ; SHIMASAKI, H. Effects of Garcinia cambogia (Hydroxycitric acid) on Visceral fat accumulation: A double blind, randomized, placebo controlled trial. Curr Ther Res Clin Exp., 2003, vol. 64, 551-567 [0159] • HEMMERLE H et al. Chlorogenic acid and synthetic chlorogenic acid derivatives: novel inhibitors of hepatic glucose-6-phosphate translocase. Journal of Medicinal Chemistry, 1997, vol. 40 (2), 137-145 [0159] • HERTOG, M.G. ; KROMHOUT, D. ; ARAVANIS, C. ; BLACKBURN, H. ; BUZINA, R. ; FIDANZA F ; GIAMPAOLI, S. ; JANSEN, A. ; MENOTTI, A. ; NEDELJKOVIC, S. Flavonoid intake and long-term risk of coronary heart disease and câncer in the Seven Countries Study. Arch. Intern. Med., 1995, vol. 155, 381-386 [0159] • HEYMSFIELD, S.B. ; ALLISON, D. ; VASSELLI, J. ; PIETROBELLI, A ; GREENFIELD, D. ; NUNEZ, C. Garcinia cambogia(Hydroxycitric Acid) as a Potential Antiobesity Agent: A Randomized Controlled Trial. JAMA: The Journal of the American Medicai Association, 1998, vol. 280 (18), 1596-1600 [0159] • HEYMSFIELD, SB ; ALLISON, DB ; VASSELLI, JR ; PIETROBELLI, A ; GREENFIELD, D ; NUNEZ, C. Garcinia cambogia (hydroxycitric acid) as a potential antiobesity agent: a randomized controlled trial. JAMA, 1998, vol. 280, 1596-600 [0159] • HOLLMAN, P.C.H. ; FESKENS, E.J.M. ; KATAN, M.B. Tea flavonols in cardiovascular disease and câncer epidemiology. Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 1999, vol. 220, 198-202 [0159] • IKEDA Y et al. Effect iveness and safety of Banabamin tablets containing an extract from banaba in patients with mild type 2 diabetes. Japan Pharmacol Ther, 1999, vol. 27, 67-73 [0159] • JOHNSTON KL et al. Coffee acutely modifies 66 ΕΡ2484345Β1 gastrointestinal hormone secretion and glucose tolerance in humans: glycemic effects of chlorogenic acid and caffeine. Am J Clin Nutr., October 2003, vol. 78 (4), 728-33 [0159] • JUNEJA LR ; CHU D-C ; OKUBO T et al. L-theanine a unigue amino acid of green tea and its relaxation effect in humans. Trends Food Sei Tech., 1999, vol. 10, 199-204 [0159] • KNOWLER WC ; BARRETT-CONNOR E ; FOWLER SE et al.

Reduction in the incidence of type 2 diabetes with lifestyle intervention or Metformin. New England Journal of Medicine, 2002, vol. 346, 393-403 [0159] • LOE YC et al. Gas chromatography/mass spectrometry method to guantify blood hydroxycitrate concentration. Annal Biochem, 2001, vol. 292 (1), 148-54 [0159] • LOE YC et al. Time course of hydroxycitrate clearance in fasting and fed humans. FASEB J, 2001, vol. 15 (4), 632 [0159] • MAHENDRAN, P. ; SHYMALA DEVI, C.S. The Modulating effect of Garcinia cambogia extract on etanol induced peroxidative damage in rats. Indian J of Pharmacology, 2001, vol. 33, 87-91 [0159] • MASON R. 200 mg of Zen; L-theanine boosts alpha waves, promotes alert relaxation. Alternative & Complementary Therapies, April 2001, vol. 7, 91-9 [0159] • MURAKAMI C et al. Screening of plant constituents for effect on glucose transport activity in Ehrlich ascites tumour cells. Chem and Pharm Bulletin (Tokyo, December 1993, vol. 41 (12), 2129-31 [0159] • NATHAN DM. Long-term complications of diabetes mellitus. New England Journal of Medicine, 1993, vol. 328, 1676-1685 [0159] • PREUSS H.G. ; D. BAGCHI ; C.V.S. RAO ; B.W. ECHARD ; S. SATYANARAYANA ; M. BAGCHI. Effect of hydroxycitric acid on weight loss, body mass index and plasma leptin 67 ΕΡ2484345Β1 leveis in human subjects. FASEB J., 2002, vol. 16 (5), A 1020 [0159] • PREUSS, H. G. ; BAGCHI, D. ; BAGCHI, M. ; RAO, C.V.S ; SATYANARAYANA , S. ; DEY, D. K. Efficacy of a novel, natural extract of (-)-hydroxycitric acid (HCA-SX) and a combination of HCA-SX, niacin- bound chromium and Gymnema sylvestre extract in weight management in human volunteers: A pilot study. Nutrition Research, 2004, vol. 24, 45-58 [0159] • SCHAEFER B. Coffee consumption and type 2 diabetes mellitus [letter. Ann Intern Med., 2004, vol. 141, 321 [0159] • SHIRAI M. et al. Single Forced Oral Administration Toxicity Test on Mouse by Banaba Extract. Jpn Pharmacol Ther, 1994, vol. 22 (11), 119-121 [0159] • SULLIVAN C. ; TRISCARI J. Metabolic regulation as a control for lipid disorders. I. Influence of (—)-hydroxycitrate on experimentally induced obesity in the rodent. Am J Clin Nutr, 1977, vol. 30, 767-76 [0159] • SUZUKI Y et al. Antiobesity activity of extracts from

Lagerstroemia speciosa L. leaves on female KK-Ay mice. J Nutr Sei Vitaminol (Tokyo, 1999, vol. 45 (6), 791-5 [0159] • TOMMASI ND et al. Hypoglycemic effects of sesquiterpene glycosides and polyhydroxylated triterpenoids of Eriobotrya japonica. Planta Medica, 1991, vol. 57, 414-416 [0159] • TUOMILEHTO J; LINDSTROM J ; ERIKSSON JG et al.

Prevention of type 2 diabetes mellitus by changes in lifestyle among subjects with impaired glucose tolerance. New England Journal of Medicne, 2001, vol. 344, 1343-1350 [0159] • VAN DAM, R.M. ; F.B. HU. Coffee Consumption and Risk of Type 2 Diabetes A Systematic Review. J. Am. Med. 68 ΕΡ2484345Β1

Assoe., 2005, vol. 294, 97 [0159] VAN LOON ; LUC JC ; JOHANNES JM VAN ROOIJEN ; BAS NIESEN ; HANS VERHAGEN ; WIM HM SARIS ; ANTON JM.

Wagenmakers. Effects of acute (-)-hydroxycitrate supplementation on substrate metabolism at rest and during exercise in humans. Am J Clin Nutr, 2000, vol. 72, 1445-50 [0159] WEISBURGER, J.H. Tea and health: the underlying mechanisms. Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 1999, vol. 220, 271-275 [0159] WILD S; ROGLIC G ; GREEN A ; SICREE R ; KING H. Global prevalence of diabetes: estimates for the year 2000 and projections for 2030. Diabetes Care, 2004, vol. 27, 1047-1053 [0159]

Lisboa, 8 de Maio 2014 69

Claims (17)

1. ΕΡ2484345Β1 REIVINDICAÇÕES 1. Uma composição herbal para uso na redução de peso em um mamífero, a composição compreendendo extracto de Garcinia, extracto de chá verde, extracto de café verde e extracto de Banaba, e opcionalmente que contém um ou mais excipientes e/ou conservantes, em que a redução de peso corporal cumpre o critério de avaliação clínica primário seguindo 12 semanas de tratamento.
2. 2. A composição herbal de acordo com a reivindicação 1 em que o extracto de Garcinia é um sal de metal complexo de ácido (- )hidroxicítrico.
3. 3. A composição herbal para utilização de acordo com a reivindicação 2, em que o sal de metal complexo de Garcinia contém mais de 60% de ácido (-) hidroxicítrico.
4. 4. A composição herbal para utilização de acordo com a reivindicação 2 ou 3, em que o sal de metal complexo é sal de cálcio, magnésio, potássio e zinco de ácido (-)hidroxicítrico.
5. 5. A composição herbal para utilização de acordo com a reivindicação 2 ou 3, em que o sal de metal complexo de ácido (-)hidroxicítrico tem a estrutura:

   em que cada (X, X) é independemente selecionado a partir de (Ca), (Mg), (Zn), (K, K), (Na, Na), ou (K, Na), e pelo menos um (X, X) é (Ca) , (Mg) , (Zn) 1 ΕΡ2484345Β1
6. 6. A composição herbal para utilização de acordo com qualquer reivindicação anterior, em que o extrato de chá verde compreende polifenóis de catequina, cafeína e L-teanina ou em que o extrato de café verde compreende ácidos clorogênicos, cafeína e polifenóis ou em que o extrato de Banaba compreende ácido corosólico.
7. 7. A composição herbal para utilização de acordo com qualquer reivindicação anterior, em que uma dose diária para adulto da composição compreende de 1950 mg a 4875 mg de extracto de Garcinia.
8. 8. A composição herbal para utilização de acordo com qualquer reivindicação anterior, em que uma dose diária para adulto da composição compreende de 225 mg a 600 mg de extracto de chá verde.
9. 9. A composição herbal para utilização de acordo com qualquer reivindicação anterior, em que uma dose diária para adulto da composição compreende de 345 mg a 865 mg de extracto de café verde.
10. 10. A composição herbal para utilização de acordo com qualquer reivindicação anterior, em que uma dose diária para adulto da composição herbal compreende de 75 mg a 190 mg de extracto de Banaba.
11. 11. A composição herbal para utilização de acordo com a reivindicação 1, em que uma dose diária da composição herbal compreende cerca de 3900 mg de extracto de Garcinia, cerca de 450 mg de extracto de café verde, cerca de 600 mg de extracto de chá verde, e cerca de 150 mg de extracto de Banaba. 2 ΕΡ2484345Β1
12. 12. A composição herbal para utilização de acordo com qualquer reivindicação anterior, em que a composição herbal é administrada numa forma farmacêutica que compreende 975 g de extrato de garcinia ou compreende 150 mg de extrato de chá verde ou compreende 112 mg de extrato de café verde ou compreende 37 mg de extrato de Banaba.
13. 13. A composição herbal para utilização de acordo com qualquer reivindicação anterior, que compreende ainda um excipiente.
14. 14. A composição herbal para utilização de acordo com a reivindicação 13, em que o excipiente é seleccionado a partir do grupo que consiste em um amido, amido pré-gelatinizado, fosfato de dicálcio, polivinilo povidina, estearato de magnésio, talco, álcool isopropílico, carboximetil celulose, hidroximetilcelulose, etil celulose ou outros materiais de celulose ou uma mistura dos mesmos, álcool isopropílico e misturas dos mesmos.
15. 15. A composição herbal para utilização de acordo com qualquer reivindicação anterior, que compreende ainda um conservante.
16. 16. A composição herbal para utilização de acordo com a reivindicação 15, em que o conservante é seleccionado a partir do grupo que consiste em propilparabeno, metilparabeno, 2-bromo-2-nitropropano-l,3-diol, sais dos mesmos, e mistura dos mesmos.
17. 17. A composição herbal para utilização de acordo com qualquer reivindicação anterior, em que a composição herbal é administrada entre 30 e 60 minutos antes de um refeição, ou entre 30 e 120 minutos antes de um ou mais refeições em um dia. Lisboa, 8 de Maio 2014 3