PT2467153E - Uso de mimótopos de epítopos de alfa-sinucleína para o tratamento de doencas dos corpos de lewy - Google Patents

Description

USO DE MIMÓTOPOS DE EPÍTOPOS DE ALFA-SINUCLEÍNA PARA O TRATAMENTO DE DOENÇAS DOS CORPOS DE LEWY

DESCRIÇÃO A presente invenção diz respeito a um medicamento para uso na prevenção e/ou tratamento de sinucleinopatias.

As sinucleinopatias são um grupo diversificado de doenças neurodegenerativas que partilham uma caracteristica patológica comum: em exames neuropatológicos podem ser detetadas lesões caracteristicas contendo agregados anormais de proteínas alfa-sinucleínas (alfa-syn, asyn) em populações selecionadas de neurónios e células gliais. A alfa-syn (inicialmente identificada como PARK1 e PARK4) é uma proteína de 140 aminoácidos, amplamente expressa no neocórtex, hipocampo, giro dentado, bulbo olfatório, corpo estriado, tálamo e cerebelo. A alfa-Syn também é altamente expressa em células hematopoiéticas, incluindo células B-, T- e NK, bem como monócitos e plaquetas. O papel exato nestas células não é conhecido mas tem sido implicado na diferenciação dos megacariócitos (precursores de plaquetas).

As sinucleinopatias mais comuns incluem, mas não se limitam a, distúrbios dos corpos de Lewy (LBDs) tais como a doença de Parkinson (PD), doença de Parkinson com demência (PDD) e demência com corpos de Lewy (DLB) , bem como atrofia multi-sistémica (MSA) ou Neurodegeneração com acumulação de ferro no cérebro tipo I (NBIA Tipo I) . As opções atuais de tratamento para estas doenças incluem medicamentos para os sintomas tais como L-dopa, fármacos anticolinérgicos, bem como inibidores da monoamina oxidase. No entanto, todas as oportunidades de tratamento atualmente disponíveis conduzem apenas ao alívio dos sintomas, mas não induzem um efeito modificador da doença de longa duração nos pacientes.

Os distúrbios dos corpos de Lewy (LBD) são doenças neurodegenerativas progressivas, caracterizadas por tremor, rigidez, bradicinesia e por perda de neurónios dopaminérgicos no cérebro. No caso de DLB e PDD, os sinais também incluem perturbação cognitiva. Até 2% da população acima de sessenta anos de idade em parses ocidentais desenvolvem os sinais típicos de PD/LBD.

Atualmente, apenas se encontra disponível o tratamento dos sintomas. Infelizmente, estas terapias apenas proporcionam alívio temporário dos sintomas precoces e não impedem a progressão da doença. A patogénese da PD/LBD ainda não se encontra completamente compreendida, mas parece que a suscetibilidade genética e fatores ambientais estão envolvidos no desenvolvimento da doença. Apesar de todos os avanços da genética, a PD/LBD é primariamente um distúrbio esporádico sem causa conhecida (também chamado PD/LBD idiopático). [0006] Pacientes que sofrem desta doença desenvolvem inclusões intracelulares ubiquitinadas características designadas corpos de Lewy (LBs) nas áreas corticais e subcorticais do cérebro. Especialmente as regiões com elevado conteúdo de neurónios dopaminérgicos ou projeções neuronais apresentam esta característica patológica. Recentemente, vários estudos demonstraram que a proteína sináptica alfa-syn desempenha um papel central na patogénese da LBD. Na LBD, a alfa-syn acumula nos LBs através das áreas cerebrais atingidas. Além disso, pode ser demonstrado que mutações pontuais únicas, bem como duplicações ou multiplicações no gene alfa-syn estão associadas com raras formas familiares de parkinsonismo. De relevância, com base nos resultados dos estudos de sobre-expressão em murganhos transgénicos (TG) bem como em Drosophila melanogaster, o seu papel chave na patogénese da PD/LBD é sublinhado, uma vez que estes modelos animais mimetizam várias características da PD.

Outra sinucleinoptia muito importante é a atrofia multi- sistémica (MSA). A MSA é um distúrbio esporádico neurodegenerativo que se caracteriza por sintomas de parkinsonismo L-DOPA-resistente, ataxia cerebelar e disautonomia. Os pacientes que sofrem de perda neuronal multi-sistémica afetando várias áreas do cérebro, incluindo o corpo estriado, substância nigra, cerebelo, ponte de Varólio, bem como as olivas inferiores e a medula espinal. A MSA é caracterizada por alfa-syn positiva glial citoplasmática (GCI) e raras inclusões neuronais através do sistema nervoso central. Estas inclusões estão associadas com a degeneração estriatonigral, atrofia olivopontocerebelar e envolvimento dos núcleos autónomos na medula e medula espinal. A importância de GCIs para a patogénese da MSA é geralmente reconhecida e sublinhada pela recente análise de modelos de rato transgénicos, analisando o efeito da sobre-expressão de alfa-syn na oligodendroglia. Em murganhos TG com sobre-expressão de alfa-syn humana, foram observados ambos agregados semelhantes a GCI e marcadores bioquímicos de MSA.

Embora os mecanismos exatos através dos quais a acumulação de alfa-syn leva a características específicas de neurodegeneração em sinucleopatias não serem totalmente compreendidos, estudos recentes indicam que a formação anormal e a acumulação de alfa-syn está envolvida nos processos degenerativos subjacentes à sinucleinopatia. Recentemente, diferentes formas de alfa- syn foram identificadas em LBs. Além do comprimento total da forma da proteína, diferentes formas de alfa-syn modificadas foram identificadas, incluindo alfa-syn fosforilada, nitrada e mono-, di- ou tri-ubiquitinada. Além disso, as formas C-terminalmente truncadas de proteína, tais como alfa-syn 1-119, alfa-syn 1-122 e alfa-syn 1-123, foram detetadas em tecido cerebral de ambos murganhos transgénicos e casos de PD. Atualmente, acredita-se que até 15% de alfa-syn detectada em LBs e neuritos de Lewy é truncada. Estudos in vitro anteriores usando alfa-syn truncada, podem demonstrar que a alfa-syn carecendo dos aminoácidos 20-30 C-terminais demonstrou ter uma tendência aumentada para agregar e formar filamentos encontrados em neuritos de Lewy e LBs. Estas versões truncadas poderiam assim agir de uma forma semelhante às formas truncada e modificada de amilóide beta (AB)na doença de Alzheimer (AD). Pensa-se que estas formas truncada e modificada de Αβ atuam como moléculas semente para a deposição da placa bacteriana e demonstram uma maior propensão para agregação, bem como uma elevada neurotoxicidade e sinapto-toxicidade in vivo e in vitro. Assim, o comprimento total alfa-syn, bem como as formas truncadas e/ou modificadas de alfa-syn, que demonstram efeitos de semeadura potenciais, pensa-se que acumulam, levando à formação de oligómeros. Com base em estudos recentes acredita-se que tal formação de oligómeros, por exemplo nos terminais sináticos e axónios, desempenha um papel importante no desenvolvimento de PD/LBD e pode assim ser potenciada pela presença de formas truncadas de alfa-syn. Por conseguinte, a redução da deposição e oligomerização de alfa-syn devem ser benéficas no tratamento de sinucleopatias, especialmente de LBD/PD idiopática e MSA e pode constituir a primeira estratégia para o tratamento destas doenças neurodegenerativas, para além da mera atenuação dos sintomas resultantes das atuais estratégias de tratamento, tais como aplicação L-DOPA.

Em Iwatsubo T. (Neuropathology 27 (5) (2007): 474-478) a correlação de deposições de alfa-sinucleina, assim como a sua fosforilação com uma patogénese de alfa-sinucleopatias é examinada. O autor da presente publicação verificou que a serina 129 da alfa-sinucleina depositada nas lesões de sinucleopatia é extensivamente fosforilada. O documento US 2007/213253 diz respeito à alfa-sinucleina humana, bem como a péptidos dai derivados que podem ser utilizados para inibir a agregação de alfa-sinucleina humana nativa. No documento WO 2004/041067, são divulgados meios e métodos para a prevenção ou tratamento de doenças associadas à agregação de alfa-sinucleina, que compreendem o uso de fragmentos de alfa-sinucleina. No documento US 2003/166558 são descritos péptidos que podem ser utilizados para induzir uma resposta imune a depósitos de proteína. O documento US 2005/198694 diz respeito a fragmentos de alfa-sinucleína compreendendo pelo menos 100 aminoácidos e tendo uma deleção C-terminal de 1 a 23 aminoácidos.

Liang et al. (J. Neurochem. 99 (2006): 470-482) estudaram a regulação de alfa-sinucleína em ratos. Eles observaram que em ratos que preferem álcool, a taxa de expressão de alfa-sinucleína é superior, quando comparada com a de ratos de não preferem álcool.

Em Hamilton BA (Genomics 83(2004): 739-742) a distribuição de alfa-sinucleína 53Thr e 53Ala em primatas é examinada.

No documento WO 2004/041067 os fragmentos imunogénicos de alfa-sinucleína são divulgados como sendo capazes de induzir uma resposta imune contra um epítopo específico nos resíduos de alfa-sinucleína 70-140. O documento WO 2006/045037 diz respeito a moléculas de alfa-sinucleína truncadas C-terminalmente que podem ser usadas para rastrear agentes que tenham uma atividade farmacológica útil para o tratamento de uma doença do corpo de Lewy.

Apesar das terapias experimentais utilizando fatores neurotróficos e enxertos de células dopaminérgicas terem produzido resultados promissores, são necessárias abordagens alternativas designadas para reduzir a acumulação neuronal de alfa-syn. Existem evidências fortes acumuladas de que os agregados de alfa-syn podem ser alvo de imunoterapia. De facto, foi demonstrado recentemente potencial para o tratamento de sinucleopatias. Murganhos Tg com sobre-expressão de alfa-syn humana foram foram vacinados com proteína alfa-syn humana. Em murganhos que produziram anticorpos com afinidade relativa elevada aquando da vacinação, houve diminuição da acumulação de alfa-syn agregada em corpos celulares e sinapses neuronais que foi associada com redução da neurodegeneração. Além disso, os anticorpos produzidos por animais imunizados também detetaram formas agregadas anormais de alfa-syn associadas à membrana neuronal e promoveram a degradação destes agregados, provavelmente por meio de vias lisossómicas. Efeitos semelhantes foram observados utilizando imunoterapia passiva com um anticorpo especifico de alfa-syn aplicado exogenamente. Estes resultados sugerem que a vacinação é eficaz na redução da acumulação neuronal de agregados de alfa-syn e que desenvolvimentos adicionais desta abordagem podem desencadear efeitos benéficos no tratamento de LBD e sinucleinopatias. É um objeto da presente invenção proporcionar medicamentos para prevenir e tratar sinucleinopatias com base numa vacina. A presente invenção diz respeito ao fornecimento de pelo menos um péptido ou polipéptido compreendendo a sequência de aminoácidos

em que

Xi é qualquer resíduo de aminoácido, X2 é um resíduo de aminoácido selecionado do grupo consistindo em lisina (K), arginina (R), alanina (A) e histidina (H), X3 é um resíduo de aminoácido selecionado do grupo consistindo em asparagina (N) , glutamina (Q) , serina (S) , glicina (G) e alanina (A), preferencialmente asparagina (N), serina (S), glicina (G) e alanina (A), X4 é um resíduo de aminoácido selecionado a partir do grupo consistindo em ácido glutâmico (E) , ácido aspártico (D) e alanina (A) , X5 é um resíduo de aminoácido selecionado a partir do grupo consistindo em ácido glutâmico (E) e ácido aspártico (D) , X6 é um resíduo de aminoácido selecionado do grupo consistindo em alanina (A) e tirosina (Y), X7 é qualquer resíduo de aminoácido, nem, independentemente, são 0 ou um número inteiro superior a 0, e em que a sequência de aminoácidos de acordo com a Fórmula I não é idêntica a, ou não compreende o fragmento 7-mer do polipéptido de alfa-sinucleína tendo a sequência de aminoácidos KNEEGAP, o referido, pelo menos um, péptido ou polipéptido tendo uma capacidade de ligação a um anticorpo que é específica para um epítopo de alfa-sinucleína compreendendo a sequência de aminoácidos KNEEGAP, para uso na prevenção e/ou tratamento de sinucleinopatias. Estes péptidos ou polipéptidos de acordo com a presente invenção podem ser fornecidos em composições adequadas para o uso pretendido de prevenir e/ou tratar sinucleinopatias, especialmente em composições farmacêuticas, preferencialmente combinados com um veículo farmaceuticamente aceitável. Tais composições farmacêuticas podem ser administradas a um paciente com necessidade das referidas composições numa quantidade eficaz para obter os efeitos preventivos e/ou terapêuticos. Os péptidos e polipéptidos de acordo com a presente invenção são capazes de induzir a formação in vivo de anticorpos direcionados (para ligação) à alfa-sinucleína e seus fragmentos, em particular aos fragmentos de alfa- sinucleína compreendendo a sequência de aminoácidos KNEEGAP. Anticorpos direcionados (para ligação) aos referidos péptidos e polipéptidos, no entanto não demonstram essencialmente nenhuma reatividade imune à beta-sinucleína. Portanto, ao contrário da alfa-sinucleina original ou seus fragmento(s), os péptidos e polipéptidos de acordo com a presente invenção proporcionam uma especificidade para o agente relacionado com a doença e evitam a reatividade cruzada com sinucleinas não relacionadas com a doença. Isto sugere fortemente uma superioridade significativa em relação à eficácia e segurança, a última em particular devido a caracteristicas neuroprotetoras que têm sido descritas para a beta-sinucleina (Hashimoto M. et al, J Biol Chem. 2004 May 10 28; 279 (22) :23622-9. Hashimoto M, Neuron. 2001 Oct 25; 32 (2) :213-23) .

Os anticorpos especificos da alfa-sinucleina induzidos por administração de compostos da presente invenção podem não só ligar-se a formas monoméricas de alfa-sinucleina mas também a formas multiméricas. Isto permite reduzir a quantidade de oligómeros de alfa-sinucleina no corpo de um indivíduo a ser tratado. A redução de alfa-sinucleina é particularmente benéfica no tratamento de sinucleopatias. A sequência de aminoácidos (Xi) 0X2X3X4X56X6? (X7) m é considerada como sendo um mimótopo do epítopo da alfa-sinucleina compreendendo a sequência de aminoácidos KNEEGAP. De acordo com a presente invenção o termo "mimótopo" refere-se a uma molécula que tem uma conformação com uma topologia equivalente à do epitopo do qual é um agente mimético. O mimótopo liga-se à mesma região de ligação ao antigénio de um anticorpo que se liga imunoespecificamente a um antigénio desejado. O mimótopo irá desencadear uma resposta imunológica num hospedeiro que é reativo relativamente ao antigénio relativamente ao qual é um agente mimético. O mimótopo também pode atuar como um concorrente para o epítopo do qual é um agente mimético em ensaios de inibição in vitro (ex. Ensaios de inibição ELISA) que envolvem o epítopo e uma ligação de anticorpos ao referido epítopo. No entanto, um mimótopo da presente invenção pode não necessariamente impedir ou competir com a encadernação do epítopo do qual é um agente mimético num ensaio de inibição in vitro, embora seja capaz de induzir uma resposta imune específica quando administrado a um mamífero.

Tal como aqui usado, o termo "epítopo" refere-se a uma região imunogénica de um antigénio que é reconhecido por uma determinada molécula de anticorpo. Em geral, um antigénio possui um ou mais epítopos cada um capaz de se ligar a um anticorpo que reconhece um determinado epítopo.

Os mimótopos da presente invenção podem ser produzidos sinteticamente por métodos de síntese química que são bem conhecidos na arte, quer como um péptido isolado ou como parte de outro péptido ou polipéptido. Alternativamente, o mimótopo do péptido pode ser produzido num microrganismo que produz o mimótopo do péptido, o qual é então isolado e, se desejado, posteriormente purificado. 0 mimótopo do péptido pode ser produzido em microrganismos tais como bactérias, leveduras ou fungos, em células eucarióticas tais como mamíferos ou células de inseto ou num vetor de vírus recombinante como adenovirus, varíola, herpes, vírus da floresta Simliki, baculovírus, bacteriófagos, vírus Sindbis ou vírus Sendai. As bactérias adequadas para produzir o mimótopo do péptido incluem E.coli, B. subtilis ou qualquer outra bactéria que seja capaz de expressar péptidos tais como o mimótopo do péptido. Os tipos de leveduras adequadas para expressar o mimótopo do péptido incluem Saccharomyces cerevisiae, Schizosaccharomyces pombe, Candida, Pichia pastoris ou qualquer outra levedura capaz de expressar péptidos. Os métodos correspondentes são bem conhecidos na arte. Também os métodos para o isolamento e purificação dos péptidos produzidos recombinantemente são bem conhecidos na arte e incluem, por exemplo, a filtração em gel, cromatografia de afinidade e cromatografia de permuta iónica, etc.

Para facilitar o isolamento do mimótopo do péptido, um polipéptido de fusão pode ser feito, em que o mimótopo do péptido é fundido por translação (covalentemente ligado) a um polipéptido heterólogo que permite o isolamento por cromatografia de afinidade. Os polipéptidos heterólogos comuns são His-Tag (ex. His6; 6 resíduos de histidina), GST-Tag (Glutationo-S-transferase) etc. 0 polipéptido de fusão facilita não só a purificação dos mimótopos mas também pode impedir o mimótopo do polipéptido de ser degradado durante a purificação. Se for desejado remover o polipéptido heterólogo após a purificação, o polipéptido de fusão pode compreender um local de clivagem na junção entre o mimótopo do péptido e o polipéptido heterólogo. 0 local de clivagem consiste numa sequência de aminoácidos que é clivada com uma enzima específica para a sequência de aminoácidos no local (por exemplo proteases).

De acordo com uma forma preferida de realização da presente invenção, X2 é um resíduo de aminoácido selecionado do grupo consistindo em lisina (K) e arginina (R) e/ou X6 é alanina (A).

De acordo com uma forma de realização particularmente preferida da presente invenção, o péptido ou polipéptido compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste em (Xi) nKNDEGAP (X7) m, (Xi) nANEEGAP (X7) m, (Xi) nKAEEGAP (X7)m, (X7) nKNAEGAP (X7) m, (X7) nRNEEGAP (X7)m, (Xi) nHNEEGAP (X7)m, (X7) nKNEDGAP (X7) m, (X7) nKQEEGAP (X7) m, (Xi) nKSEEGAP (X7)m, (Xx) nKNDDGAP (X7) m, (X7) nRNDEGAP (X7) m, (Xi) nRNEDGAP (X7)m, (Xi) nRQEEGAP (X7) m, (Xi) nRSEEGAP (X7) m, (Xi) nANDEGAP (X7)m, (Xi) nANEDGAP (X7) m, (Xi) nHSEEGAP (X7) m, (Xi) nASEEGAP (X7)m, (Xi) nHNEDGAP (X7) m, (Xi) nHNDEGAP (X7) m, (Xi) nRNAEGAP (X7)m, (X7) nHNAEGAP (X7) m, (X7) nKSAEGAP (X7) m, (Xi) nKSDEGAP (X7)m, (Xx) nKSEDGAP (X7) m, (Xx) nRQDEGAP (X7) m, (Xi) nRQEDGAP (X7)m, (Xx) nHSAEGAP (X7) m, (Xx) nRSAEGAP (X7) m, (Xi) nRSDEGAP (X7)m, (Xx) nRSEDGAP (X7) m, (Xx) nHSDEGAP (X7) m, (Xx) nHSEDGAP (X7)m, (Xx) nRQDDGAP (X7) m, preferencialmente (Xx) nKNDEGAP (X2)m, (Xx) nRNEEGAP (X2) m, (Xx) nRNDEGAP (X2) m, (Xx) nKNAEGAP (X2)m, (Xx) nKSDEGAP (X2) m, (Xx) nRNAEGAP (X2) m ou (Xx) nRSEEGAP (X2)m.

Os péptidos e polipéptidos da presente invenção também podem ser modificados na, ou próximo da, sua terminação N-e/ou C- de modo a que nas referidas posições se ligue um resíduo de cisterna. Numa forma preferida de realização terminalmente posicionada (localizada nas terminações N- e C-do péptido) os resíduos de cisteína são usados para ligação cruzada das referidas moléculas com moléculas transportadoras tais como KLH ou para ciclizar os péptidos através de uma ligação dissulfídica. Portanto, n e/ou m são preferencialmente 1 e Xl e/ou são preferencialmente cisteína (C).

Os mimótopos da presente invenção podem também ser utilizados em vários ensaios e kits, nomeadamente em ensaios imunológicos e kits. Portanto, é particularmente preferido que os péptidos e polipéptidos da presente invenção possam ser parte de outro péptido ou polipéptido, particularmente uma enzima que é usada como um repórter em ensaios imunolóqicos. Tais enzimas repórter incluem por exemplo fosfatase alcalina ou peroxidase de rábano.

Os mimótopos de alfa-sinucleína de acordo com a presente invenção preferencialmente são polipéptidos antigénicos cuja sequência de aminoácidos deriva da sequência de aminoácidos de alfa-sinucleína ou de fragmentos da alfa- sinucleína. A este respeito, os mimótopos da invenção podem não só compreender substituições de aminoácidos em um ou mais de resíduos de aminoácidos que ocorrem naturalmente, mas também de um ou mais aminoácidos não naturais (i.e., não dos 20 aminoácidos "clássicos") ou podem ser completamente agregados a partir desses aminoácidos não-naturais. Adicionalmente, os antigénios da invenção que induzem anticorpos anti-alfa-sinucleina podem ser agregados a partir de D- ou L- aminoácidos ou de combinações de DL-aminoácidos e, opcionalmente, eles podem ter sido alterados por modificações adicionais, encerramentos ou derivatizações de anel. Podem ser fornecidos antigénios adequados indutores de anticorpos anti-alfa-sinucleina a partir de um banco de péptidos comercialmente disponíveis. Preferencialmente, estes péptidos têm pelo menos 7 aminoácidos e comprimentos preferidos até 16, preferencialmente até 14 ou 20 resíduos de aminoácidos (p.ex. 7 ou 8 a 20, 7 ou 8 a 16 etc.) .

Assim, o péptido ou polipéptido da presente invenção compreende 7 a 30, preferencialmente 7 a 20, mais preferencialmente 7 a 16, mais preferencialmente 8, resíduos de aminoácidos. De acordo com a invenção, contudo, também péptidos mais longos podem ser empregues como antigénios indutores de anticorpos anti-alfa-sinucleína. Além disso os mimótopos da presente invenção também podem ser parte de um polipéptido e consequentemente compreendendo na sua terminação N- e/ou C- pelo menos mais um resíduo de aminoácidos.

Para a preparação de mimótopos de alfa-sinucleina (i.e., antigénios indutores de anticorpos anti-alfa-sinucleina), claro que também bancos de fagos, bancos de péptidos são adequados, por exemplo produzidos por meio de química combinatorial ou obtidos por meio de técnicas de triagem de alta resolução (HTS) para as mais variadas estruturas (Display: A Laboratory Manual by Carlos F. Barbas (Editor), et al. ; Willats WG Phage display: practicalities and prospects. Plant Mol. Biol. 2002 Dec.; 50(6):837-54). Adicionalmente, de acordo com a invenção, também os antigénios indutores de anticorpos anti-alfa-sinucleina com base em ácidos nucleicos ("aptâmeros") podem ser empregues, e estes também podem ser encontrados nos bancos com maior variabilidade (de oligonucleótidos), (p.ex., com 2-180 residuos de ácidos nucleicos) (e.g. Burgstaller et al., Curr. Opin. Drug Discov. Dev. 5(5) (2002), 690-700; Famulok et al., Acc. Chem. Res. 33 (2000), 591-599; Mayer et al., PNAS 98 (2001), 4961-4965, etc.). Nos antigénios indutores de anticorpos anti-alfa-sinucleina com base em ácidos nucleicos, o esqueleto de ácido nucleico pode ser fornecido, p.ex., por compostos naturais fosfo-diéster ou também por fosforotioatos ou combinações ou variações quimicas (p.ex., como PNA), em que as bases, de acordo com a invenção primariamente U, T, A, C, G, H e mC podem ser empregues. Os residuos 2' dos nucleótidos que podem ser usados de acordo com a presente invenção são preferencialmente H, OH, F, Cl, NH2, O-metil, O-etil, 0-propilo or O-butilo, em que os ácidos nucleicos também podem ser modificados de um modo diferente, i.e., por exemplo com grupos protetores, pois eles são comumente empregues na sintese de oligonucleótidos. Assim, os antigénios indutores de anticorpos anti-alfa-sinucleina baseados em aptâmeros também são antigénios indutores de anticorpos anti-alfa-sinucleina preferidos no âmbito da presente invenção.

De acordo com a presente invenção, o termo "sinucleinopatia" inclui todos os distúrbios neurodegenerativos caracterizados por agregações de sinucleina patológicas. Vários distúrbios neurodegenerativos, incluindo a Doença de Parkinson (PD), Doença do Corpo de Lewy (LBD), Doença Difusa do Corpo de Lewy (DLBD), Demência com Corpos de Lewy (DLB), Parkinsonismo com Demência (PDD), Atrofia Sistémica Múltipla (MSA) e Neurodegeneração com Acumulação de Ferro no Cérebro tipo I (NBIA Tipo I) são coletivamente agrupados como sinucleinopatias.

Os péptidos e polipéptidos de acordo com a presente invenção podem ser empregues não só para tratar sinucleinopatias mas também para prevenir as referidas doenças em individuos em risco de desenvolver uma sinucleinopatia (p.ex., predisposto, por exemplo geneticamente predisposto, a desenvolver uma sinucleinopatia).

As abreviaturas para os resíduos de aminoácidos divulgadas na presente invenção seguem s recomendações IUPAC:

Os péptidos e polipéptidos da presente invenção também podem ser parte de um polipéptido compreendendo 7 a 30 resíduos de aminoácidos. Consequentemente, nem podem independentemente ser um número inteiro selecionado de entre 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 20 e 25. O, pelo menos um, péptido ou polipéptido de acordo com a presente invenção pode consistir numa sequência de aminoácidos (X]_)n X2 x3 x4 x5 GX5 P(X7)m, em que nem são, de um modo independente, 0 ou 1 ou fazendo parte de um polipéptido que compreende pelo menos 7 resíduos de aminoácidos, preferencialmente, pelo menos 10 resíduos de aminoácidos, mais preferencialmente pelo menos 15 resíduos de aminoácidos e/ou um máximo de 50 resíduos de aminoácidos, preferencialmente um máximo de 30 resíduos de aminoácidos, mais preferencialmente 16 resíduos de aminoácidos.

Surpreendentemente, verificou-se que os compostos de acordo com a presente invenção compreendendo ou consistindo nas sequências de aminoácidos descritos na lista acima são particularmente adequados para serem usados na produção de um medicamento para uso no tratamento ou prevenção de sinucleinopatias. Estes péptidos (mimótopos) são capazes de induzir a formação de anticorpos in vivo direcionada para o epítopo original da alfa-sinucleina humana compreendendo a sequência de aminoácidos KNEEGAP e a própria proteína alfa-sinucleína humana. Os referidos péptidos (mimótopos) não são, no entanto, capazes de induzir a reatividade imunológica contra a proteína beta-sinucleína humana. Os anticorpos induzidos pelos péptidos são responsáveis pela remoção de alfa-sinucleína (que está envolvida na formação de agregados de alfa-sinucleína, corpos de Lewy) e/ou para a dissolução de agregados de alfa- sinucleína (corpos de Lewy) num indivíduo.

Os péptidos e polipéptidos de acordo com a presente invenção podem ser utilizados para a preparação de um medicamento, em particular uma vacina que pode ser usada para o tratamento de alfa-sinucleinopatia, em que o medicamento é particularmente adequado para tratar a sinucleinopatia selecionada do grupo consistindo em doença de Parkinson (PD), doença dos Corpos de Lewy (LBD), Doença dos Corpos de Lewy difusos (DLBD), Demência com Corpos de Lewy (DLB), Doença de Parkinson com demência (PDD), Atrofia Sistémica Múltipla (MSA) e Neurodegeneração comAcumulação de Ferro no Cérebro tipo I (NBIA Tipo I).

De acordo com uma forma de realização preferida da presente invenção o, pelo menos um, péptido encontra-se acoplado a um transportador farmaceuticamente aceitável, preferencialmente KLH (Hemocianina Keyhole Limpet), toxóide do tétano, proteina de ligação à albumina, albumina do soro bovina, um dendrimero (MAP; Biol. Chem. 358: 581), ligantes peptidicos (ou regiões de flanqueamento), bem como as substâncias adjuvantes descritas em Singh et al., Nat. Biotech. 17 (1999), 1075-1081 (em particular as da Tabela 1 do referido documento) e O'Hagan et al., Nature Reviews, Drug Discovery 2 (9) (2003), 727-735 (em particular os compostos imunopotenciadores endógenos e sistemas de distribuição nele descritos) e outros ou suas misturas. A química de conjugação (por exemplo através de compostos hetero-bifuncionais, tais como GMBS e naturalmente também outros tais como descritos em "Bioconjugate Techniques", Greg T. Hermanson) neste contexto, pode ser selecionada a partir de reações conhecidas do especialista na arte. Além disso, a composição da vacina pode ser formulada com um adjuvante, preferencialmente uma composição de alumínio de solubilidade reduzida, em particular o hidróxido de alumínio. Evidentemente, também adjuvantes tais como o fosfato de alumínio MF59, fosfato de cálcio, citocinas (por exemplo, IL-2, IL-12, GM-CSF), saponinas (por exemplo, QS21), derivados de MDP, oligos CpG, IC31, LPS, MPL, polifosfazenos, emulsões (por exemplo, Freund, SAF) , lipossomas, virossomas, iscoms (complexos de estimulação imunológica), coqueleatos, micropartículas PLG, partículas de poloxâmero, partículas semelhantes a vírus, enterotoxina termolábil (LT), toxina da cólera (TC) , toxinas mutantes (por exemplo, LTK63 e LTR72), micropartículas e/ou lipossomas polimerizados podem ser utilizados. 0 péptido ou polipéptido da presente invenção encontra-se preferencialmente ligado ao transportador ou adjuvante através de um ligante, que é selecionado a partir do grupo consistindo em NHS-poli (óxido de etileno) (PEO) (p.ex. NHS-PE04-maleimida).

Uma vacina que compreende o presente composto (mimótopo) e o transportador farmaceuticamente aceitável pode ser administrada por qualquer modo adequado de aplicação, por exemplo i.d, i.p., i.m., intranasal, oralmente, por via subcutânea, etc. e em qualquer dispositivo de distribuição adequado (0'Hagan et al., Nature Reviews, Drug Discovery 2 (9), (2003), 727-735). 0 composto do presente invenção é preferencialmente formulado para administração subcutânea, intradérmica ou intramuscular (ver por exemplo "Handbook of Pharmaceutical Manufacturing Formulations", Sarfaraz Niazi, CRC Press Inc, 2004).

Normalmente, a vacina contém o composto de acordo com a invenção numa quantidade de 0,1 ng a 10 mg, preferencialmente 10 ng a 1 mg, em particular 100 ng a 100 mg ou, alternativamente, por exemplo 100 fmol a 10 mmol, preferencialmente 10 pmol a 1 mmol, em particular 100 pmol a 100 nmol. Normalmente, a vacina também pode conter substâncias auxiliares, por exemplo tampões, estabilizadores etc. Preferencialmente, essas substâncias auxiliares, por exemplo um excipiente farmaceuticamente aceitável, tal como a água, tampão e/ou estabilizadores, estão contidas numa quantidade de 1 a 99% (peso) , mais preferencialmente 5 a 80% (peso), especialmente 10 a 70% (peso). Os regimes de administração possíveis incluem um tratamento semanal, quinzenal, de quatro em quatro semanas (mensal) ou bimestral durante cerca de 1 a 12 meses; no entanto, também 2 a 5, especialmente 3 a 4, administrações iniciais da vacina (em um ou dois meses) , seguidas por vacinações booster nos seis a doze meses seguintes ou mesmo nos anos seguintes são preferidas - além de outros regimes já sugeridos para outras vacinas.

Outro aspeto da presente invenção refere-se a um péptido tendo uma sequência de aminoácidos selecionados a partir do grupo consistindo em (Xi)nKNDEGAP(X7)m/ (Xl)nANEEGAP(X7)m, (Xi) nKAEEGAP (X7) m, (Xp) nKNAEGAP (X7) m, (Xl)nRNEEGAP(X7)m, (Xi)nHNEEGAP(X7)m, (Xp) nKNEDGAP (X7) m, (Xl)nKQEEGAP(X7)m, (Xi)nKSEEGAP(X7) m, (Xp)nKNDDGAP(X7)m, (Xl)nRNDEGAP(X7)m, (Xp )nRNEDGAP(X7)m, (Xp)nRQEEGAP(X7)m, (Xp)nRSEEGAP(X7)m, (Xp)nANDEGAP(X7)m, (Xp)nANEDGAP(X7)m, (Xp)nHSEEGAP(X7)m, (Xp)nASEEGAP(X7)m, (Xp)nHNEDGAP(X7)m, (Xp)nHNDEGAP(X7)m, (Xp)nRNAEGAP(X7)m, (Xp)nHNAEGAP(X7)m, (Xp)nKSAEGAP(X7 ) m, (Xp)nKSDEGAP(X7)m, (Xp)nKSEDGAP(X7) m, (Xp)nRQDEGAP(X7)m, (Xp)nRQEDGAP(X7)m, (Xp)nHSAEGAP(X7)m, (Xp)nRSAEGAP(X7)m, (Xp)nRSDEGAP(X7)m, (Xp)nRSEDGAP(X7)m, (Xp)nHSDEGAP(X7)m, (Xp)nHSEDGAP(X7)n e (Xp)nRQDDGAP(X7)m, em que Xp e X7 é cisteina e n e m, independente, são 0 ou 1.

De acordo com uma forma de realização preferida da presente invenção, o péptido é acoplado a um transportador farmaceuticamente aceitável, preferencialmente KLH (Hemocianina Keyhole Limpet). A formulação farmacêutica de acordo com a presente invenção, que pode ser formulada como uma vacina para, por exemplo, administração subcutânea intradérmica e/ou administração intramuscular, pode ser utilizada no tratamento de qualquer tipo de sinucleinopatia. A presente invenção está adicionalmente ilustrada nas figuras seguintes e os exemplos, no entanto, não são limitados ao âmbito das figuras. A Fig.l apresenta a sequência do comprimento total alfa-sinucleína (140 aa; entrada Swiss prot: P37840) e a sequência usada para criar um anticorpo monoclonal para deteção da sequência inteira da alfa-sinucleina, bem como C-terminalmente truncado e suas versões modificadas. O péptido na posição 100-109 utilizado para a geração do anticorpo monoclonal está sublinhado. O péptido (p4453) foi acoplado a uma C na posição C-terminal. A Fig.2 apresenta a deteção de alfa-sinucleina por ELISA utilizando o anticorpo monoclonal especifico gerado para a alfa-sinucleina humana na posição 100-109. O anticorpo monoclonal 12-9-9 foi gerado e testado relativamente à sua especificidade para sinucleinas em ELISA. A alfa-sinucleina (p4446) e p4453 o epitopo humano são detetados. A proteina de controlo negativo p4447 (beta-sinucleina) não é detetado. A Fig. 3 apresenta a definição do epitopo minimo do anticorpo monoclonal 12-9-9 por ELISA.

Os péptidos p4446 (alfa-sinucleina), p4453 (epitopo humano usado para criar o anticorpo testado) são detetados pelo anticorpo. 0 epitopo original p4453foi N- ou C-terminalmente truncado e usado em ELISA para definir o epitopo minimo necessária para a ligação especifica. Os péptidos p5399 e P5403 perderam a ligação ao anticorpo monoclonal 12-9-9.

Assim, a sequência minima necessária para a ligação de 12-9-9 está prevista como KNEEGAP localizada na posição 102-108 da alfa-sinucleina, enquanto truncamento de um dos aminoácidos flanqueadores, aboliu a ligação. Os dados são apresentados numa escala linear. A Fig. 4 apresenta a deteção de epítopos e mimótopos por ELISA utilizando um anticorpo monoclonal especifico para alfa-sinucleina humana na posição 100-109. A alfa-sinucleina, assim como os péptidos p5436 (epitopo minimo humano) e os mimótopos p5439, são detetados da mesma forma pelo anticorpo monoclonal 12-9-9. 0 mimótopo p5440 não é detetado, enquanto o mimótopo p5444 é detetado de um modo muito mais fraco do que o epítopo humano através do anticorpo monoclonal 12-9-9. A Fig. 5 apresenta a indução de resposta imune contra a alfa-sinucleina após imunização pelo péptido. Os soros de murganhos imunizados (p5436 a p5590) apresentam anticorpos contra alfa-sinucleina após 3 vacinações. Os soros de murganhos imunizados (p5463 a p5466) não detetam alfa-sinucleína (concentrações de anticorpo medidas com ELISA são cerca de, ou abaixo de, 1:50 metade-máxima) . A classe de imunogenicidade foi definida como se segue: Classe 2: os péptido induzem uma resposta imune com OD metade-máxima superior a 1:1000. Classe 1: os péptidos induzem uma resposta imune com OD metade-máxima compreendida entre 1000 and 51. Classe 0: os péptidos não induzem nenhuma ou induzem uma resposta imune muito reduzida com DO metade-máxima cerca de 50 ou inferior. EXEMPLOS:

Para identificar péptidos e polipéptidos que podem ser usados para tratar e/ou prevenir sinucleopatias, foi utilizado um anticorpo, que é capaz de detetar a sequência de aminoácidos derivada da alfa-sinucleina LGKNEEGAPQ (= epitopo original, SEQ ID NO: 3, p4453) e da alfa-sinucleína humana inteira (SEQ ID NO: 1, p4446) . Não reconhece beta-sinucleina humana (SEQ ID NO: 2, p4447; referência de acesso Q16143: mdvfmkglsm akegvvaaae ktkqgvteaa ektkegvlyv gsktregvvq gvasvaektk eqashlggav fsgagniaaa tglvkreefp tdlkpeevaq eaaeepliep lmepegesye dppqeeyqey epea). O anticorpo pode ser uma preparação de anticorpo monoclonal ou policlonal ou qualquer outra parte de anticorpo ou seu derivado e ligar-se especificamente ao epitopo LGKNEEGAPQ da alfa-sinucleina humana, i.e. não se liga ao péptido nem à proteína inteira mas não se liga à beta-sinucleína humana. Os mimótopos são identificados e adicionalmente caracterizados com os referidos anticorpos monoclonais (detetando uma sequência nos aminoácidos 100-109 da proteína alfa-sinucleína humana) e bancos de péptidos.

Exemplo 1: Geração de anticorpos monoclonais para detetar especificamente o epitopo de alfa-sinucleína humana original LG- KNEEGAPQC SEQ ID NO: 3, p4453 e alfa- sinucleína humana mas não beta-sinucleína humana.

Um anticorpo monoclonal derivado da fusão "AFFiRiS 6": Murganhos Balb/c mice (Charles River) foram imunizados com o epitopo original de alfa-sinucleína LGKNEEGAPQ-C acoplado a BTG (tioroglobulina de bovino) e CFA (adjuvante completo de Freund; primeira injeção) assim como IFA (adjuvante incompleto de Freund; 3 injeções booster) como adjuvante. Hibridomas produtores de anticorpos, específicos dos péptidos, LGKNEEGAPQ- são detetados por ELISA (placas ELISA com revestimento peptídico LGKNEEGAPQC). A alfa-sinucleína humana (proteína recombinante, p4446) é usada como péptido de controlo positivo: hibridomas reconhecendo a proteína recombinante imobilizada em placas ELISA são incluídos porque se ligam a ambos péptidos e alfa-sinucleína inteira, de um modo específico. A beta-sinucleína humana (proteína recombinante, p4447) é usada como péptido de controlo negativo: hibridomas reconhecendo ambas as proteínas recombinantes imobilizadas em placas ELISA são excluídos porque não distinguem entre as duas proteínas sinucleína diferentes. O clone de hibridoma (12-9-9; IgGl, kappa) foi analisado para deteção específica do epitopo da alfa-sinucleína humana natural LGKNEEGAPQ. O 12-9-9 reconhece o epitopo injetado assim como a proteína alfa-sinucleína inteira (proteína recombinante; obtida a partir de rPeptide, Bogart, GA, USA) em ELISA (ver Fig. 2) . No entanto, não deteta a proteína beta-sinucleína (proteína recombinante, obtida a partir de rPeptide, Bogart, GA, USA) em ELISA (ver Fig. 2) . Subsequentemente, o epítopo mínimo necessário para ligar ao anticorpo foi definido por ELISA usando os péptidos p4446, p4453, p5397, p5398, p5399, p5400, p5401, p5402f p5403, p5404f P5405, p5406 (ver Fig. 3) e p5436 (ver Fig. 4). p4446, p4453, p5397, p5398 e p5402 assim como p5436 retiveram totalmente a capacidade de ligação enquanto que p5399, p5400, p5401, p5403, p5404, p5405 e p5406 perderam a ligação a 12-9-9. Asssim, o epítopo minimo necessário para ligação foi definido como sendo KNEEGAP.

Exemplo 2: Visualização do fago, ligação in vitro e

inibição por ELISA

Os bancos de fagos utilizados neste exemplo foram: Ph.D. 7: New England BioLabs E8102L (linear 7mer library), Ph.D. 12: New England BioLabs E8111L (linear 12mer library) and Ph.D. C7C: New England BioLabs E8120L (um banco de heptapéptidos com ligação dissulfido) A visualização dos fagos foi efetuada de acordo com as instruções do fabricante (www. neb. com) . Após 2 ou 3 rondas de recuperação subsequentes, foram recolhidos clones de fagos simples e sobrenadantes dos fagos, e sujeitos a ELISA em placas revestidas com o anticorpo que foi usado no processo de recuperação. Os clones dos fagos positivos neste ensaio ELISA (com sinal forte para o alvo, mas sem sinal para o controlo não específico) foram sequenciados. As sequências peptídicas foram deduzidas a partir das sequências de DNA. Estes péptidos foram sintetizados e caracterizados por ELISA em termos de ligação e inibição. Para alguns péptidos, foram associados AA adicionais à terminação C. Adicionalmente, alguns mimótopos novos foram criados através da combinação de informação da sequência dos mimótopos identificados no ensaio. Ambos os grupos contendo novos mimótopos desenhados foram usados para suportar a identificação de uma sequência consensus para uma vacinação por mimótopo. 1. Ensaio de ligação in vitro (ELISA)

Os péptidos resultantes da Visualização de Fagos, assim como as suas variantes truncadas N-terminalmente, foram acoplados a BSA e ligados a placas de ELISA (lmM) e subsequentemente incubados com o anticorpo monoclonal que foi usado no processo de análise para verificar a capacidade de ligação dos péptidos identificados (ver Fig. 4) . 2. Ensaio de inibição in vitro (ELISA)

Quantidades diferentes de péptidos (concentrações variando de 400 mg/mL a 3 mg/mL (diluições em série), resultantes da Visualização dos Fagos foram incubados com o anticorpo monoclonal que foi usado no processo de análise. Os péptidos diminuindo a ligação subsequente do anticorpo ao epitopo de alfa-sinucleina original (p5436) e a proteína de alfa-sinucleína humana (p4446) revestidos nas placas de ELISA foram considerados como inibidores neste ensaio.

Exemplo 3: testes in vivo dos mimótopos: análise de imunogenicidade 1. Testes in vivo dos mimótopos

Os péptidos inibidores, assim como os não inibidores, foram acoplados a KLH e injetados em murganhos (murganhos wildtype C57/B16 ou BalbC; injeção subcutânea no flanco) juntamente com um adjuvante apropriado (hidróxido de aluminio). Os animais foram vacinados 3 vezes em intervalos quinzenais e os soros foram recolhidos também quinzenalmente. Os titulos dos péptidos injetados, assim como os dos péptidos irrelevantes foram determinados para cada soro. Os titulos contra a proteína alfa-sinucleína humana recombinante e a beta-sinucleína humana recombinante foram determinados começando com o Soro 2, respetivamente. Em geral, os soros foram analisados por reação contra péptidos acoplados à Albumina do Soro Bovina (BSA) e as proteínas recombinantes inteiras que foram imobilizadas nas placas de ELISA. Os títulos foram determinados usando anticorpos anti-murganho IgG específicos. Para exemplos de imunogenicidade contra péptidos injetados e alfa-sinucleína, consultar a Tabela 5 e a Tabela 6. 2. Resultados 2.1. Identificação de uma alfa-sinucleína específica mAB: A Figura 2 representa a caracterização de um anticorpo monoclonal específico da alfa-sinucleína 12-9-9 (IgGl, kappa) derivado de Affiris 6 de fusão. 2.2. Análise dos Mimótopos específicos da alfa-sinucleína: 2.2.1. Visualização de Fagos PhD 7, PhD12 e PhD C7C e Análise Mutacional

2.2.1.1. Análise com anticorpo monoclonal direcionado contra LGKNEEGAPQ

Analisando os bancos de visualização de fagos PhD 7, PhD12 e PhD C7C e o deslocamento seletivo de aminoácidos pontuais, foram identificadas um total de 60 sequências (consultar Tabela 1; ID18-77). A Tabela 1 apresenta exemplos de todos os péptidos usados

A Tabela 2 apresenta exemplos de péptidos e da sua capacidade de ligação, comparativamente com o epítopo original.

2.3. Caracterização in vitro de mimótopos identificados no écran (Visualização de Fagos e análise dos péptidos) com um anticorpo monoclonal direcionado contra alfa-sinucleina:

As Fig. 2 e 3 mostram exemplos representativos da ligação e ensaios de inibição usados para caracterizar mimótopos in vitro. Os dados obtidos estão resumidos nas Tabelas 2 e 3, respetivamente.

Tabela 3: Ensaio de inibição

Tabela 4: Péptidos e proteínas não mimótopos

2.4. Caracterização in vivo dos mimótopos identificados na triagem dos Bancos de Visualização de Fagos com um Anticorpo monoclonal direcionado contra alfa-sinucleína: Murganhos fêmea C57/B16 ou BalbC, 5-6 murganhos por grupo, foram imunizados subcutaneamente com 30 mg de péptido acoplado a KLH. Os grupos de controlo foram injetados com PBS ou o epítopo original. Foi utilizado Alum como adjuvante. Os péptidos administrados foram todos capazes de ligar aos anticorpos monoclonais, especificamente ligando os 100-109 aa da alfa-sinucleína humana, embora alguns dos péptidos inibam a ligação do epítopo original ao seu anticorpo parental in vitro apenas de um modo fraco (num ensaio de inibição in vitro) . O teste de ELISA in vitro para determinar o título do anticorpo foi realizado com soros de murganhos pontuais (Consultar Tab. 5) após cada vacinação com um intervalo de duas semanas. Os poços da placa ELISA foram revestidos com conjugados mimótopo-BSA. 0 controlo positivo foi realizado por reação do anticorpo parental com o respetivo conjugado mimótopo-BSA. A deteção foi realizada com anti-murganho IgG. Além disso, as proteínas recombinantes foram imobilizadas em placas ELISA e soros reagiram em conformidade. Para todos os mimótopos testados em murganhos C57/B16 ou BalbC, os anticorpos que reagiram ao péptido injetado em particular, puderam ser detetados após vacinação repetida. Embora nem todos os murganhos tenham induzido títulos elevados de anticorpos contra a alfa-sinucleína (consultar tab. 5 para exemplos).

Tabela 5: A indução da resposta imune é indicada pelo título contra o péptido injetado (p4446). 0 título foi medido por ELISA e indicado como OD metade-máxima.

Tabela 6: Classe de imunogenicidade de mimótopos contra uma Syn

Lisboa, 2 de Junho de 2016.

Claims (15)

1. REIVINDICAÇÕES

   1. Composição compreendendo pelo menos um péptido ou polipéptido compreendendo a sequência de aminoácidos (xl)nx2x3x4x5cx6p(x7)m (Fórmula I), em que Xl é qualquer residuo de aminoácido, X2 é um residuo de aminoácido selecionado do qrupo consistindo em lisina (K) , arginina (R) , alanina (A) e histidina (H), X3 é um residuo de aminoácido selecionado a partir do grupo constituido em asparagina (N), glutamina (Q) , serina (S) , glicina (G) e alanina (A) , de preferência asparagina (N) , serina (S) , glicina (G) e alanina (A), X4 é um residuo de aminoácido selecionado a partir do grupo consistindo em ácido glutâmico (E), ácido aspártico (D) e alanina (A) , X5 é um residuo de aminoácido selecionado a partir do grupo consistindo em ácido glutâmico (E) e ácido aspártico (D), X5 é um residuo de aminoácido selecionado do grupo consistindo em alanina (A) e tirosina (Y), X7 é qualquer residuo de aminoácido, nem, independentemente, são 0 ou um número inteiro superior a 0, e em que a sequência de aminoácidos de acordo com a Fórmula I não é idêntica a, ou não compreende, o fragmento 7-mer do polipéptido de alfa-sinucleina, tendo a sequência de aminoácidos KNEEGAP, o referido, pelo menos um, péptido ou polipéptido tendo uma capacidade de ligação a um anticorpo que é especifica para um epitopo de alfa-sinucleina compreendendo a sequência de aminoácidos KNEEGAP para uso na prevenção e/ou tratamento de sinucleinopatias.
2. 2. Composição para uso de acordo com a reivindicação 1 em que X2 é um residuo de aminoácido selecionado do grupo consistindo em lisina (K) e arginina (R) e/ou Xô é alanina (A).
3. 3. Composição para uso de acordo com a reivindicação 1 or 2 caracterizada por o péptido ou o polipéptido compreender uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste em (Xi)nKNDEGAP(X7) m, (Xl)nANEEGAP(X7)m, (Xl)nKAEEGAP(X7) m, (Xl)nKNAEGAP(X7)m, (Xl)nRNEEGAP(X7)m, (Xl)nHNEEGAP(X7)m, (Xl)nKNEDGAP(X7)m, (Xl)nKQEEGAP(X7)m, (Xl)nKSEEGAP(X7)m, (Xl)nKNDDGAP(X7)m, (Xl)nRNDEGAP(X7)m, (Xl)nRNEDGAP (X7 ) m, (Xl)nRQEEGAP(X7)m, (Xl)nRSEEGAP(X7)m, (Xl)nANDEGAP(X7)m, (Xl)nANEDGAP(X7)m, (Xl)nHSEEGAP(X7)m, (Xl)nASEEGAP(X7)m, (Xl)nHNEDGAP(X7)m, (Xl)nHNDEGAP(X7)m, (Xl)nRNAEGAP(X7)m, (Xl)nHNAEGAP (X7) m, (Xl)nKSAEGAP(X7)m, (Xl)nKSDEGAP(X7)m, (Xl)nKSEDGAP(X7)m, (Xl)nRQDEGAP(X7)m, (Xl)nRQEDGAP (X7 ) m, (Xl)nHSAEGAP(X7)m, (Xl)nRSAEGAP(X7)m, (Xl)nRSDEGAP(X7)m, (Xl)nRSEDGAP(X7)m, (Xl) nHSDEGAP (X7 ) m, (X]_) nHSEDGAP (X7) m, (Xl) nRQDDGAP (X7) m, preferencialmente (X]_) nKNDEGAP (X2) m, (Xl)nRNEEGAP(X2)m/ (Xl)nRNDEGAP(X2)m, (Xl)nKNAEGAP(X2)m, (Xl)nKSDEGAP(X2)m/ (Xl)nRNAEGAP(X2)m ou (Xl)nRSEEGAP(X2)m·
4. 4. Composição para uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizada por n e/ou m serem 1 e Xl e/ou X7 ser cisteina (C).
5. 5. Composição para o uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizada por o péptido ou polipéptido compreender 7 a 30, preferencialmente 7 a 20, mais preferencialmente 7 a 16, mais preferencialmente 8, residuos de aminoácidos.
6. 6. Composição para o uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizada por a sinucleinopatia ser selecionada a partir do grupo consistindo em Distúrbios do Corpo de Lewy (LBDs), preferencialmente doença de Parkinson (PD), Doença de Parkison com Demência (PDD) e Demência com Corpos de Lewy (DLB) , bem como Atrofia Sistémica Múltipla (MSA) ou neuro-degeneração com Acumulação de Ferro no Cérebro do tipo I (NBIA Tipo I).
7. 7. Composição para o uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizada por o, pelo menos um, péptido ou polipéptido ser acoplado a um veículo farmaceuticamente aceitável, preferencialmente KLH (Hemocianina de Keyhole limpet).
8. 8. Composição para o uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizada por o, pelo menos um, péptido ou polipéptido ser formulado para administração intravenosa, subcutânea, intradérmica ou intramuscular.
9. 9. Composição para o uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizada por o, pelo menos um, péptido ou polipéptido ser formulado com um adjuvante, preferencialmente hidróxido de alumínio.
10. 10. Composição para o uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizada por o, pelo menos um, péptido ou polipéptido se encontrar contido numa quantidade de 0,1 ng a 10 mg, preferencialmente 10 ng a 1 mg, em particular 100 ng de 100 mg.
11. 11. Péptido tendo uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo consistindo em (Xi)nKNDEGAP(X7)m, (Xi)nA NEEGAP(X7)m, (Xi)nKAEEGAP(X7)m, (Xi)nKNAEGAP(X7)m, (X] _) nRNEEGAP (X7) m, (Xl)nHNEEGAP (X7) m, (XI) nKNEDGAP(X7) m, (Xl)nKQEEGAP(X7)m, (Xl)nKSEEGAP(X7)m, (Xl)nKNDDGAP(X7)m, (Xl)nRNDEGAP (X7 ) m, (Xl)nRNEDGAP(X7)m, (Xl)nRQEEGAP(X7)m, (Xl)nRSEEGAP(X7)m, (Xl)nANDEGAP(X7)m, (Xl)nANEDGAP(X7) m, (Xl)nHSEEGAP(X7)m, (Xl)nASEEGAP(X7)m, (Xl)nHNEDGAP(X7)m, (Xl)nHNDEGAP(X7)m, (Xl)nRNAEGAP (X7)m, (Xl)nHNAEGAP(X7)m, (Xl)nKSAEGAP(X7)m, (Xl)nKSDEGAP(X7)m, (Xl)nKSEDGAP(X7)m, (Xl)nRQDEGAP(X7 ) m, (Xl)nRQEDGAP(X7)m, (Xl)nHSAEGAP(X7)m, (Xl)nRSAEGAP(X7)m, (Xl)nRSDEGAP(X7)m, (Xl)nRSEDGAP(X7) m, (Xl)nHSDEGAP(X7)m, (Xl) nHSEDGAP (X7)m e (Xl) nRQDDGAP (X7) m, em que Xi e X7 são cisteína e n e m, independentemente, são 0 ou 1.
12. 12. Péptido de acordo com a reivindicação 11, caracterizado por o péptido ser acoplado a um transportador farmaceuticamente aceitável, preferencialmente KLH (Hemocianina Keyhole Limpet).
13. 13. Péptido de acordo com a reivindicação 11 ou 12 para uso na prevenção e/ou tratamento de sinucleinopatias.
14. 14. Formulação farmacêutica compreendendo pelo menos um péptido de acordo com a reivindicação 11 ou 12.
15. 15. Formulação farmacêutica de acordo com a reivindicação 14 para uso como vacina. Lisboa, 2 de Junho de 2016.