PT2384334E - Um método para produzir um novo peptídeo opióide - Google Patents

Description

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DESCRIÇÃO "UM MÉTODO PARA PRODUZIR UM NOVO PEPTÍDEO OPIÓIDE" 0 objetivo da presente invenção são peptídeos análogos novos que exibem afinidade para com recetores opióides, os quais possuem a fórmula geral mostrada na figura 1, especialmente para administração no sistema nervoso periférico ou central sob a forma de infusão intravenosa, injeção ou implante no tratamento de forte dor crónica nas condições reumáticas ou gota ou neuropatias associadas à osteoporose, trauma pós-cirúrgico ou pós-acidente assim como dor oncológica.

Um sinal de dor que surge devido a lesão de um órgão ou doença é transmitido para o sistema nervoso onde gera a sensação de dor. A magnitude do estimulo doloroso é regulada por um sistema de recetores nociceptivos e anti-nociceptivos localizados nas membranas das células neuronais. Os recetores das taquicininas localizados nos neurónios do sistema nervoso periférico e central constituem um componente significante de recetores nociceptivos e têm um papel fundamental na transmissão de sinais dolorosos. Os peptideos opióides endógenos são um fator natural responsável por mitigar o sinal de dor através da ativação de recetores anti-nociceptivos. São também ativados recetores opióides através da administração de analgésicos opióides, tais como morfina ou fentanil. Infelizmente a administração de analgésicos disponíveis atualmente causam uma série de efeitos secundários indesejáveis, tais como tolerância e dependência do fármaco. A utilização de peptídeos análogos aos peptídeos opióides naturais com a fórmula geral mostrada na figura 1 torna possível diminuir a tolerância e dependência do 2 fármaco. De acordo com os resultados de experiências em animais apresentados na "International Narcotic Research Conference 1989" e descritos em publicações pós-conferência, B.S. Silbert, A.W. Lipkowski, D.B. Carr, S.K. Szyfelbein, P.F. Osgood, no capitulo "Peptides as potential nociceptive drugs.", pág. 485-488 de "Procc. Int. Narc. Res. Conf. ' 89", editado por R. Quirion, Alan R. Liss Inc, Nova Iorque, 1990, assim como D. Kosson, I. Maszczynska Bonney, D.B. Carr, E. Mayzner-Zawadzka, A.W. Lipkowski, em "Antinociceptive properties of biphalin after intrathecal application in rats: a reevaluation"Pharmacological Report." vol. 57, pág. 545-549, 2005, um peptídeo opióide com o nome comum "biphalin" apresenta atividade analgésica significativa. Este composto apresenta uma atividade indutora de dependência muito menor, como descrito em M. Yamazaki, T. Suzuki, M. Narita, A.W. Lipkowski, "The opioid peptide analogue biphalin induces less physical dependence than morphine", "Life Science", vol. 69, pág. 1023-1028, 2001. por

Quimicamente, o "biphalin" é um dimero de dois farmacóforos opióides tetrapeptideos. Estudos sobre a relação entre a atividade biológica e a estrutura de "biphalin" mostram que um dos fragmentos tetrapeptideo pode ser substituido por um componente lipofilico peptidico ou não peptidico sem quaisquer alterações significativas na sua afinidade para com os peptideos opióides, como descrito em A.W. Lipkowski, A. Misicka, P. Davis, D. Stropova, J. Janders, M. Lachwa, F. Porreca, H.I. Yamamura, V.J. Hruby, em "Biological activity of fragments and analogues of the potent dimeric opioid peptide, biphalin.", "Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters", vol. 9, pág. 2763-2766, 1999. Como resultado da substituição de um dos fragmentos tetrapeptideos de "biphalin" por benzoxicarbonil-L- 3 triptofano, foi produzido um composto com afinidade para com os recetores opióides comparável ao "biphalin", com atividade simultânea como um fraco antagonista dos recetores das taquicininas. Como resultado foi obtido um composto com fortes propriedades analgésicas contra a dor inflamatória, como descrito por I. Maszczynska Bonney, S.E. Foran, J.E. Marchand, A.W. Lipkowski, D.B. Carr em "Spinal antinociceptive effects of ΆΑ501, a novel chimeric peptide with opioid receptor agonist and tachykinin receptor antagonist moieties", "European Journal of Pharmacology", vol. 488, pág. 91-99, 2004.

Inesperadamente foi mostrado que a alteração da quiralidade do radical L-triptofano para um radical D-triptofano causa um aumento significativo da atividade analgésica do peptideo análogo. Ao mesmo tempo, inesperadamente, foi mostrado que a substituição do grupo benzoxicarbonil por outros fragmentos contendo um grupo aromático conserva ou aumenta a sua atividade analgésica.

Assim, o primeiro objetivo da invenção é um novo composto com a fórmula geral:

em que: - L, D indicam uma quiralidade do aminoácido apropriada; 4 - Ri é uma cadeia lateral de um aminoácido selecionado entre: D-alanina, D-leucina, D-arginina, D-lisina, D-serina ou D-treonina, - R2 é uma cadeia lateral de um aminoácido selecionado entre L-fenilalanina ou L-triptofano, - -CO-R3 indica benziloxicarbonil ou cinamoil, alfa-metil-4-(2-metilpropil)benzoacetil, salicil-glicil-, benzoil-glicil-, ou o seu sal farmaceuticamente aceitável.

Particularmente é um composto selecionado entre: Ν'-tirosil-D-alanil-glicil-fenilalanil, N"- benziloxicarbonil-D-triptofanil) hidrazida ou o seu sal, particularmente cloridrato; N'-tirosil-D-alanil-glicil-fenilalanil, N'-salicil-glicil-D-triptofanil) hidrazida ou o seu sal, particularmente cloridrato; - Ν'-tirosil-D-alanil-glicil-fenilalanil, N"-alfa-metil-4-(2-metilpropil)benzoacetil-D-triptofanil) hidrazida ou o seu sal, particularmente cloridrato. 0 seguinte objetivo da invenção é uma utilização de um composto de acordo com a invenção na produção de um fármaco analgésico.

Os novos peptideos análogos com a fórmula geral mostrada na figura 1, caracterizados por uma forte afinidade para com os recetores opióides assim como para outros recetores envolvidos na transmissão ou modulação do estímulo doloroso, podem ser úteis no tratamento da dor, especialmente dor crónica causada por condições 5 patológicas, condições pós-cirúrgicas ou devido a acidentes. Fármacos contendo um composto de acordo com a presente invenção podem ser utilizados para administração periférica ou para administração no sistema nervoso central, preferencialmente no tratamento de forte dor crónica, particularmente aquelas causadas por inflamação. Em particular a dor crónica e inflamação podem ser induzidas por cancro, inflamação reumática, gota, esclerose múltipla, osteoporose, neuropatias pós-cirúrgicas ou pós-traumáticas ou alterações pós-cancro. Os compostos revelados aqui podem também demonstrar afinidade para com os recetores das taquicininas. Foi também observado que a atividade do composto administrado perifericamente é bastante aumentada em condições patológicas nas quais é observado inflamação.

Um método particularmente preferencial de administração de um composto de acordo com a presente invenção é uma infusão intravenosa, um implante subdérmico ou intraperitoneal, e durante a administração no sistema nervoso central, uma infusão subaracnoide ou um implante.

Um composto de acordo com a presente invenção pode ser administrado independentemente, sob a forma de uma solução, ou pode ser um componente de um sistema multicomponente contendo outros princípios ativos.

Um composto de acordo com a presente invenção ou a sua composição com outros fármacos ou agentes de transporte pode ser preparado sob a forma de um liofilizado estéril, o qual deve ser dissolvido antes da administração num volume pré-determinado de solução salina fisiológica. Preferencialmente, um composto ou a sua composição com outros fármacos e/ou agentes de transporte é preparado em 6 combinação com um polímero que é o agente de transporte do principio ativo.

Para melhor ilustrar a natureza da presente invenção, baseado na atividade analgésica de compostos mostrados na figura 1, os exemplos anexados demonstram a dita atividade em modelos animais de dor crónica. 0 âmbito da presente invenção, no entanto, não deve ser limitado ao conteúdo dos exemplos a seguir. A figura 1 representa a fórmula geral dos compostos que são objetivo do pedido de patente, em que L, D indicam as quiralidades dos radicais de aminoácidos, Ri indica cadeias laterais de D-alanina ou D-leucina ou D-arginina ou D-lisina ou D-serina ou D-treonina, R2 indica cadeias laterais de L-fenilalanina ou L-triptofano, e -C0-R3 indica benzoxicarbonil ou cinamoil, alfa-metil-4- (2-metilpropil)benzacetil, salicil-glicil-, benzoil-glicil-.

Exemplo I.

Foi dissolvido t-butiloxicarbonil-tirosil-D-alanil-glicil-fenilalanina (Boc-Tyr-D-Ala-Gly-Phe) (10 mmol) e benzoxicarbonil-D-triptofanil)-hidrazida (Cbz-D-Trp-NHNH2) (10 mmol) assim como hidroxiimida de ácido sucínico (HO-Su) (12 mmol) em dimetilformamida (DMF) (40 cm3) . Após arrefecimento até 0-5°C, foi adicionado à mistura reacional diciclohexilcarboxiimida (10 mmol). A reação foi agitada durante 1 hora a uma temperatura de 5°C, e depois durante 12 horas a temperatura ambiente (20-25°C). Depois, a diciclohexilureia precipitada (DCU) foi filtrada e lavada duas vezes em 10 cm3 DMF. O filtrado foi combinado com 100 cm3 de 5% bicarbonato de potássio (KHC03) . O Boc-Tyr-D-Ala-Gly-Phe-NHNH-(Cbz-D-Trp-) precipitado foi filtrado e lavado duas vezes com 10 cm3 de 5% KHC03, e depois duas vezes em 10 cm3 água. O precipitado foi seco, e a substância resultante foi pulverizada e adicionada a 50cm3 de uma 7 mistura concentrada de ácido clorídrico e etanol (1:1). Durante a reação, foi libertado CO2 e o produto reacional dissolveu-se. Após 30 minutos de agitação a temperatura ambiente, o etanol e ácido clorídrico evaporaram sob pressão reduzida. O precipitado do produto bruto remanescente foi recristalizado através de dissolução em etanol e precipitação com acetato de etilo. Isto resultou num produto, cuja análise elementar assim como espetro de massa corresponde a hidrato de cloral (Ν'-tirosil-D-alanil-glicil-fenilalanil, N"-benzoxicarbonil-D-triptofanil) hidrazida [HC1.Tyr-DAla-Gly-Phe-NHNH-(CBz-D-Trp-)]. Foram obtidos 7,5 mmol de produto. Foi induzida inflamação em ratos através de aplicação de adjuvante de Freund no membro. Foi observada uma inflamação progressiva após dois dias. Após uma semana, foi examinado os efeitos analgésicos na dor aguda do peptideo análogo HC1.Tyr-D-Ala-Gly-Phe-NHNH-(CBz-D-Trp-) via a imersão da cauda em água a 55°C. A injeção intravenosa do peptideo análogo a uma taxa de 20 mg/kg mitigou completamente a reação de dor no rato com inflamação.

Exemplo II.

Foi dissolvido t-butiloxicarbonil-tirosil-D-alanil-glicil-fenilalanina (Boc-Tyr-D-Ala-Gly-Phe) (10 mmol) e salicil-glicil-D-triptofanil (Salic-Gly-D-Trp-NHNH2) (10 mmol) assim como hidroxiimida de ácido sucinico (HO-Su) (12 mmol) em dimetilformamida (DMF) (40 cm3) . Após arrefecimento até 0-5°C, foi adicionado à mistura reacional diciclohexilcarboxiimida (10 mmol). A reação foi agitada durante 1 hora a uma temperatura de 5°C, e depois durante 12 horas a temperatura ambiente (20-25°C). Depois, a diciclohexilureia precipitada (DCU) foi drenada e lavada duas vezes em 10 cm3 DMF. O filtrado foi misturado com 100 cm3 5% bicarbonato de potássio (KHC03). 0 Boc-Tyr-D-Ala-Gly-Phe-NHNH-(Salic-Gly-D-Trp-) precipitado foi filtrado, lavado duas vezes em 10 cm3 5% KHC03, e depois duas vezes com 10 cm3 água. O precipitado foi seco e pulverizado e depois adicionado a 50 cm3 de uma mistura concentrada de ácido cloridrico/etanol (1:1). Durante a reação, foi libertado CO2 e o produto reacional dissolveu-se. Após 30 minutos de agitação a temperatura ambiente, o etanol e ácido clorídrico evaporaram sob pressão reduzida. O produto precipitado bruto remanescente foi recristalizado através de dissolução em etanol e precipitação com acetato de etilo. Isto resultou num produto, cuja análise elementar assim como espetro de massa corresponde a hidrato de cloral (Ν'-tirosil-D-alanil-glicil-fenilalanil, N'-salicil-glicil-D-triptofanil) hidrazida [HC1.Tyr-D-Ala-Gly-Phe-NHNH-(Salic-Gly-DTrp-)]. Foram obtidos 7,1 mmol de produto.

Num modelo animal de metástases, foi induzida inflamação ao administrar cerca de um milhão de células de melanoma murino no membro posterior. Após dois dias, foi observado uma inflamação progressiva, causada pela incorporação do tumor. Após duas semanas de desenvolvimento do tumor, foi examinado a atividade analgésica de (Ν'-tirosil-D-alanil-glicil-fenilalanil, N"-salicil-glicil-D-triptofanil)-hidrazida na dor aguda causada pela imersão da cauda em água aquecida a 55°C. A injeção intraperitoneal do peptídeo análogo a uma taxa de 30 mg/kg mitigou completamente a reação de dor no rato com inflamação.

Exemplo III

Foi dissolvido t-butiloxicarbonil-tirosil-D-alanil-glicil-fenilalanina (10 mmol) e alfa-metil-4-(2-metilpropil)benzenoacetil-D-triptofanil)-hidrazida (10 mmol) assim como hidroxiimida de ácido sucinico (HO-Su) (12 9

mmol) em dimetilformamida (DMF) (40 cm3) . Após arrefecimento até 0-5°C foi adicionado diciclohexilcarboxiimida (10 mmol) à mistura reacional. A reação foi agitada durante 1 hora a uma temperatura de 5°C, e depois durante 12 horas a temperatura ambiente (20-25°C). Depois, a diciclohexilureia precipitada (DCU) foi drenada e lavada duas vezes em 10cm3 DMF. O filtrado foi misturado com 100 cm3 de 5% bicarbonato de potássio (KHCO3) . O t o precipitado foi filtrado, lavado duas vezes em 10 cm 5% KHCO3, e depois duas vezes 10 cm3 com água. O precipitado foi seco e pulverizado e depois adicionado a 50 cm3 de uma mistura concentrada de ácido cloridrico/etanol (1:1). Durante a reação, é libertado CO2 e o produto reacional dissolveu-se. Após 30 minutos de agitação a temperatura ambiente, o etanol e ácido clorídrico evaporaram sob pressão reduzida. O produto precipitado bruto remanescente foi recristalizado através de dissolução em etanol e precipitação com acetato de etilo. Isto resultou num produto, cuja análise elementar assim como espetro de massa corresponde a hidrazida hidrato de cloral (Ν'-tirosil-D-alanil-glicil-fenilalanil, N'-salicil-glicil-D-triptofanil) [HC1.Tyr-D-Ala-Gly-Phe-NHNH-(Salic-Gly-D-Trp-)]. Foram obtidos 8,2 mmol de produto.

Dois dias antes das experiências, foram implantadas nos ratos cânulas na cavidade subaracnóide. Durante a experiência, foi examinado a atividade analgésica ao administrar o peptídeo análogo (Ν'-tirosil-D-alanil-glicilfenilalanil, N"-alfa-metil-4-(2-metilpropil)benzenoacetil-D-triptofanil)-hidrazida. Uma dose de 5 mg do análogo causa a eliminação completa da sensibilidade à dor provocada pela temperatura durante 1 hora. 10 10

Fig. 1

Lisboa, 24 de Maio de 2013

Claims (3)

1/ REIVINDICAÇÕES 1. Um composto com a fórmula geral:

em que: L, D indicam uma quiralidade do aminoácido apropriada, - Ri é uma cadeia lateral de um aminoácido selecionado entre: D-alanina, D-leucina, D-arginina, D-lisina, D-serina ou D-treonina, - R2 é uma cadeia lateral de um aminoácido selecionado entre L-fenilalanina ou L-triptofano, - -CO-R3 indica benziloxicarbonil ou cinamoil, alfa-metil-4-(2-metilpropil)benzoacetil, salicil-glicil-, benzoil-glicil-, ou o seu sal farmaceuticamente aceitável.

2. Um composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por ser um composto selecionado entre: Ν'-tirosil-D-alanil-glicil-fenilalanil, N"- benziloxicarbonil-D-triptofanil) hidrazida ou o seu sal, particularmente cloridrato; 2/ - Ν'-tirosil-D-alanil-glicil-fenilalanil, N'-salicil-glicil-D-triptofanil) hidrazida ou o seu sal, particularmente cloridrato; Ν'-tirosil-D-alanil-glicil-fenilalanil, N"-alfa- metil-4-(2-metilpropil)benzoacetil-D-triptofanil) hidrazida ou o seu sal, particularmente cloridrato.

3. Uma utilização de um composto de acordo com qualquer das reivindicações 1 ou 2 na produção de um fármaco analgésico. Lisboa, 24 de Maio de 2013