PT1631298E - Glicosaminoglicanos destinados ao tratamento das disfunções emocionais - Google Patents

Description

DESCRIÇÃO

GLICOSAMINOGLICANOS DESTINADOS AO TRATAMENTO DAS DISFUNÇÕES

EMOCIONAIS

Campo da Invenção A presente invenção refere-se a novas aplicações farmacológicas dos glicosaminoglicanos, em especial aqueles que têm um peso molecular médio de 2400 (± 200) de D. Técnica Actual

Os distúrbios emocionais pertencem à área de doenças psiquiátricas que se encontram incluídas em síndromas depressivos, de ansiedade, os psicóticos e os maníacos e são expressados principalmente sob a forma de uma reacção anormal ao meio envolvente, variando entre a agressividade, e um estado da confusão e de apatia.

Os distúrbios emocionais são tratados farmacologicamente de várias maneiras dependendo de sua origem. As perturbações afectivas unipolares são tratadas com os anti depressivos triciclicos tais como a imipramina ou os anti depressivos heterocíclicos tais como inibidores selectivos da assimilação da serotonina como o sejam a fluoxetina, ou com os inibidores da monoamina - oxidase tais como a fenelzina (as drogas deste tipo são incluídas preferivelmente na base farmacológica do livro "The pharmacological basis of therapeutics", Capítulo 19, edição X de 2001).

Por outro lado, as perturbações afectivas bipolares são tratadas com lítio, com ácido valpróico ou com outros medicamentos com acção de anti convulsivo (as drogas deste 1 tipo são incluídas preferivelmente no Capítulo 20 do livro de farmacologia acima mencionado).

As perturbações de ansiedade primárias, tais como os síndromas generalizados de ansiedade e os síndromas obsessivos-compulsivos, são tratados com as categorias de produtos mencionados acima ou com as benzodiazepinas e/ ou com a buspirona.

No entanto, todas as circunstâncias descritas têm a conotação dos síndromas e são definidas no Manual de Estatística e de Diagnóstico de Perturbações Mentais (Manuale diagnostico e statistico dei disturbi mentali, DMS-IV-R). O tratamento de todas estas condições é fortemente recomendado e considera-se que aproximadamente 75% dos pacientes obtêm sob o ponto de vista clínico, um benefício significativo dos mesmos. O tratamento farmacológico das perturbações emocionais, entretanto, é acompanhado por um número de efeitos colaterais incluindo, entre outros, a alteração do estado normal de consciência.

Considera-se que determinados distúrbios emocionais, tais como a agressividade, o estado de confusão e a incapacidade para se adaptar a um ambiente novo, são devido à alteração da matriz extra celular (ECM) no cérebro, nos termos da fluidez e do volume, com efeitos consequentes nas sinapses do cérebro e no nível da transmissão intra cerebral (também em termos do volume da transmissão).

Consequentemente, os produtos que podem modificar a fluidez e o volume do ECM podem ser úteis para melhorar a transmissão intra cerebral. 2

De um modo adicional, é sabido que os glicosaminoglicanos apresentam um efeito hiperaxiogénico quando injectados de um modo intra cerebral. A benzodiazepina e a amitriptilina e os agentes anti escleróticos foram usados no tratamento de pacientes idosos com síndromas depressivos e com demência senil.

Os melhores resultados foram conseguidos através da administração continuada de benzodiazepina com um agente anti esclerótico (como seja a heparina, a vitamina E, a papaverina, o inositol e a colina), os bons resultados foram obtidos com a associação de benzodiazepina e de amitriptilina, e una resultados bastante bons foram obtidos através da associação de benzodiazepina, de amitriptilina e do agente anti esclerótico. (Ricotti M.P. Riforma Medica 1973, vol. 97, n° 27, 1973, páginas 1078 - 1087). A Patente n° EP 1 181 024 revela o uso de glicosaminoglicanos tendo um peso molecular igual a 2 400 ± 200 para a preparação de composições farmacêuticas adequadas para o tratamento da doença de Alzheimer ou de SDAT (Demência Senil do Tipo de Alzheimer) e das lesões neurológicas cerebrais dos enfartes e dos traumas.

Resumo da Invenção

Agora, de um modo surpreendente, descobriu-se in vivo que os glicosaminoglicanos com um peso molecular médio de 2400 (± 200) D podem corrigir as disfunções emocionais sem alterar o estado normal de consciência, por causa de sua capacidade para impedir ou para reduzir a alteração da matriz extra celular (ECM) no cérebro. 3

Consequentemente a fracção dos glicosaminoglicanos que têm um peso molecular médio de 2400 (± 200) D pode ser usada para a preparação das composições farmacêuticas apropriadas para o tratamento de disfunções emocionais.

Descrição detalhada da invenção A presente invenção refere-se consequentemente ao uso de uma fracção dos glicosaminoglicanos com um peso molecular médio de 2400 (± 200) D para a preparação das composições farmacêuticas capazes de impedir ou de reduzir mudanças patológicas da matriz extra celular no cérebro. A referida composição pode consequentemente ser usada no tratamento de disfunções emocionais e em particular em perturbações depressivas, em perturbações de ansiedade, em neuroses de ansiedade, em estados de agitação e de confusão.

Como é bem sabido, os glicosaminoglicanos (GAGs) são os heteropolisacaridos os mais abundantes no corpo humano e são compostos por várias unidades de disacaridos que são por sua vez formados por um ou por dois açúcares modificados de N-acetilgalactosamina ou de N-acetilglucosamina e de um ácido urónico, por exemplo glucuronato ou o iduronato. A presente invenção refere-se em particular às fracções glicosaminoglicano com um peso molecular médio de 2400 (± 200) D.

Preferencialmente, as GAGs da presente invenção são obtidas a partir dos hialuronatos, dos sulfatos de dermatano, dos sulfatos de condroitina, dos sulfatos de heparina e do heparano, ou dos sulfatos queratano.

As referidas fracções podem ser produzidas por despolimerização do(s) glicosaminoglicano (s) 4 correspondente(s) em várias etapas compreendendo: irradiação do(s) glicosaminoglicano(s) com radiação gamma, seguido pela filtragem de gel e pela ultra filtragem. Os métodos para obter os glicosaminoglicanos de acordo com a invenção actual são conhecidos na técnica.

De acordo com uma forma de realização particularmente preferida da presente invenção, as fracções de GAGs da presente invenção são obtidas do heparino, por exemplo de acordo com o método descrito na Patente n° EP 1 181 024.

Testes farmacológicos

Para a investigação farmacológica da fracção dos glicosaminoglicanos de acordo com a presente invenção, um modelo experimental foi aplicado no rato para as seguintes avaliações: 1) a reacção ao ambiente, com o teste de "campo aberto" ou o teste OF; 2) aprendendo no labirinto da água, com o "teste de água de Morris "(MWM); 3) condicionando a um ambiente hostil, com o teste de "condicionamento do medo dependente do contexto " (CDFC) .

Materiais usados nas experiências

Treze ratazanas da raça Brown Norway (BN) adquiridos em Harlan Sprague-Dawley Inc. (Indianapolis In. ) com um peso de 300 - 350 g e com uma idade de 11 meses.

Os animais foram adaptados ao novo ambiente durante duas semanas antes de começar qualquer tratamento ou teste biológico. A atribuição ao tratamento com a droga (7 animais) ou com o veiculo sozinho (6 animais) foi feita ao acaso. Os 5 animais foram mantidos em gaiolas individuais e avaliados de acordo com os padrões da Association for Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care (AAALAC) num ambiente com temperatura controlada (22 - 26° C) e com ritmos circadianos de luz de 12 h (com a luz a começar às 7:00 horas). Os animais receberam comida e água ad libitum. Todas as avaliações do comportamento foram realizadas em um ambiente à prova de som junto dos locais onde estes vivem e entre as horas de 09:00 e 13:00. No fim da experiência, isto é após 42 - 44 dias de tratamento com o produto sob investigação ou com o veiculo, os animais foram sacrificados com uma dose elevada de pentobarbital de sódio numa dose elevada (100 mg/kg intra-peritonialmente). Todos os procedimentos foram aprovados pelo Institutional Animal Care and Use Committee (IAUC) da Loyala University Medicai Center(IACUC).

Uma fracção de glicosaminoglicano com um peso molecular médio de 2400 (± 200) D (identificado em seguida com o símbolo C3) foi obtida por despolimerização do heparino através de irradiação de raios gamma e pelo fraccionamento sucessivo para obter o peso molecular desejado, como descrito na Patente n° ep 1 118 024, e consistia por um pó branco solúvel em água. Este foi dissolvido na água potável em uma concentração tal que os animais receberam uma administração diária de 25 mg/kg durante um período que varia entre 42 a 44 dias. O consumo de água dos animais individuais foi medido durante as duas primeiras semanas da adaptação. Durante a experiência, a água potável que contém C3 foi renovada cada 3 - 4 dias. O procedimento experimental para a análise do comportamento é mostrado no seguinte esquema, subdividido em semanas. 6

Semana Procedimento 1 Chegada dos animais e adaptação em gaiolas individuais 2 Início da medição da quantidade de água consumida 3 Início da administração de C3 (25 mg/kg) ou do veículo 5 Teste de campo aberto (OF) - 12 minutos 6-7 Labirinto de água de Morris (MWM) Aquisição (6 dias) Inversão (3 dias) 8 Condicionamento de medo dependente do contexto (CDFC) Adaptação (2 dias) Condicionamento (3 dias) 9 Sacrifício dos animais

Após duas semanas (uma da adaptação e uma para avaliar o consumo da água) os animais foram submetidos à série de três testes: OF, MWM, CDFC OF (campo aberto) 0 comportamento que resulta da exposição a um ambiente novo (durante 12 minutos) permite a medição de uma resposta neofobica (medo de ambientes novos) e da resposta exploratória. 0 teste OF foi realizado numa plataforma com as dimensões de 100 cm x 100 cm x 40 cm de altura. As paredes foram construídas de madeira pensada envernizada. O soalho foi pintado branco e dividido em 25 quadrados (25 cm x 25 cm) marcados com uma linha preta fina. Nos cantos situados nas bordas do quadrado formados pelos nove quadrados centrais da plataforma havia quatro furos de 3,5 cm de diâmetro. 7 A plataforma estava localizada numa sala com isolamento sonoro e com iluminação indirecta.

Os animais foram colocados no centro da plataforma e foram observados durante 12 minutos. 0 seu comportamento foi gravado numa cassete de vídeo. Os seguintes elementos comportamentais foram avaliados: 1) o tempo, em segundos, consumidos para deixar o centro do quadrado (medida o medo ou "paragem" inicial) e do momento incorporar um dos quadrados ao lado da parede (thigmotaxis); 2) o número dos quadrados pisados (exploração horizontal); 3) o número dos levantamentos, isto é quantas vezes o rato se levanta a si próprio com as suas patas posteriores (exploração vertical); 4) o número de vezes que põe seu focinho num dos furos do soalho.

Após cada uma das sessões, o QF foi lavado com ma solução de 70% de etanol de modo a remover quaisquer estímulos olfactivos associados com o animal individual. MWM (Labirinto de água de Morris) A aprendizagem e a memória espacial podem ser avaliadas usando o labirinto de água, em que é medida a capacidade do animal para aprender e recordar a posição de uma plataforma que lhe permita sair da água. De um modo adicional, o teste pode avaliar o estado da excitação ou de sedação dos animais. O labirinto foi construído a partir de um cilindro de plástico (152 cm de diâmetro e 74 cm de altura) pintado de branco cheio com água a uma altura de 56 cm e divisível em quadrantes. A meio do caminho entre o centro e a borda, 1,5 [cm] abaixo da superfície da água, havia uma plataforma de 9cm2. A água foi feita opaca adicionando leite em pó e sua temperatura foi mantida compreendida entre 22 - 26° C. Os pontos de referência fora do labirinto foram mantidos constantes. 0 comportamento de cada animal foi gravado em video SMART Video Tracking System, San Diego Instruments, San Diego, CA). A câmara video ligada ao computador estava situada acima do centro do labirinto. 0 computador calculou: 1) o comprimento do trajecto (cm) feito pelo animal para alcançar a plataforma escondida; 2) a pausa (segundos) e a distância (cm) decorridos em cada quadrante; 3) a latência (segundos) para encontrar e escalar na plataforma.

Os animais foram submetidos ao teste 4 vezes por dia. Em cada teste os animais foram colocados na borda do labirinto. A plataforma estava sempre situada no mesmo lugar (o quadrante 1) durante os primeiros 6 dias (aprendizagem) e foi posto então numa posição diferente (quadrante 3) para o teste "inverso" realizado nos três dias seguintes 7-9.

No primeiro teste os animais foram postos no quadrante 2, ao lado do que contém a plataforma, isto é quadrante 1. Durante os três testes seguintes do dia os animais foram colocados nos quadrantes adjacentes no sentido dos ponteiros do relógio. 0 teste durou até que o animal alcançou a plataforma ou até um máximo de 60 segundos. Se o animal não conseguir alcançar a plataforma em 60 segundos foi colocado delicadamente na plataforma e deixado imperturbado durante 60 segundos. Cada animal foi deixado na plataforma durante 60 segundos e repetiu o teste imediatamente a seguir. No final dos quatro testes o animal foi secado delicadamente com uma toalha e posto de novo no interior da sua gaiola. CDFC (condicionamento do medo dependente do contexto) 9

Este teste mede a capacidade de um animal para aprender e recordar um estimulo condicionado (CS) emparelhado com um estimulo incondicional adverso (UCS) . 0 teste, para ser executado em cinco dias consecutivos, permite fazer a análise das capacidades do animal para aprender e recordar a relação entre os eventos ("primeiro plano") que são condicionados (CS ou luz) e os incondicionais (choque eléctrico suave do UCS) e o ambiente ("fundo").

Os animais foram adaptados a um primeiro contexto ambiental (contexto A) durante dois dias consecutivos. 0 comportamento do animal no terceiro dia foi analisado durante três estímulos sucessivos que consistem na luz seguida por choque (passagem ligeira da corrente sob as patas com intensidade moderada mas suficiente para produzir dor) que representou o CS e o UCS respectivamente; estes estímulos causaram um estado do medo que foi manifestado no fenómeno de "paralisação" (as paralisações dos animais num momento característico) que mediu precisamente o grau de medo. Esta sequência dos estímulos de facto representa o designado "pano de fundo dos eventos" que foram realizados no contexto A.

No quarto dia, os animais foram postos de novo no contexto A sem que nenhum dos estímulos do CS ou do UCS sejam produzidos. Isto tornou possível analisar o comportamento do animal nos "antecedentes ou fundo" (isto é, o ambiente em que os eventos de CS-UCS ocorreram previamente). As experiências precedentes indicam que as lesões do hipocampo envolvem a incapacidade total para recordar que estes "antecedentes" se encontram associados com um condicionamento, isto é com o "primeiro plano". A ausência completa de paralisação no quarto dia é indicativa de disfunções da memória; isto é o animal não recorda o contexto em que os eventos ocorreram. 10

No quinto dia, o animal foi colocado num ambiente diferente (o contexto B) e somente os estímulos de luz (CS) foram aplicados, para determinar se o animal recordou que este estimulo representou um evento de uma natureza adversa, independentemente do ambiente (nenhum estimulo do tipo do UCS foi aplicado nesta sessão). A capacidade do animal para responder com uma paralisação a este contexto diferente indicou que ele percebeu o significado negativo do estimulo de luz, que foi seguido pelo estimulo doloroso.

Os contextos A e B foram representados por câmaras pequenas (48 cm de comprimento x 25 cm de profundidade x 28 cm de altura). A experiência durou 8 minutos.

No contexto A o soalho consistiu por um gradeamento formado por tubos de metal com um diâmetro de 2.5 milímetros, com uma separação de 10 milímetros (centro a centro). As paredes da câmara eram todas em Plexiglas™, a parede dianteira era transparente, a parede traseira era preta, e a outra era branca. A lâmpada de 7.5 W para o estímulo de luz estava no centro de uma das paredes laterais da câmara, posicionadas a 14 cm da parte traseira da câmara. O condicionamento de "primeiro plano" do terceiro dia era como se segue. Após um intervalo de 2 minutos, a luz (CS) era ligada e 20 segundos mais tarde um choque eléctrico foi aplicado às patas dos animais ("choque das patas"), através da grade de metal, durando 2 segundos com uma força de 0.8 miliamperes em corrente alterna, fornecida a partir de um gerador de Grason-Stadler, modelo E1064GS. Os animais foram submetidos a outras duas sessões do CS e o UCS cada uma com um intervalo de 2 minutos, dando um total de 3 CS-UCS emparelhadas. Todas as sessões eram gravadas em vídeo e avaliadas mais tarde. 11 A extensão da "paralisação" nas quatro sessões (para um total de 2 x 4 minutos = 8 min/dia) foi medida em segundos com base nas gravações de video usando um cronómetro.

No quarto dia o contexto A foi usado outra vez, mas os animais não foram submetidos a nenhum estímulo e, consequentemente, o teste serviu para avaliar a resposta ao fundo sozinho, isto é à memória do ambiente hostil. A paralisação foi medida como no terceiro dia.

No quinto dia, foi usado o contexto B. As dimensões da câmara eram idênticas às do contexto A. Entretanto, as grades e a parede traseira foras substituídas com um painel de madeira prensada. A câmara foi limpa usando PetZyme™ (que remove a cor e o odor) imediatamente depois de cada sessão. 0 PetZyme™ causa os estímulos olfactivos diferentes daqueles da solução de etanol de 70% usada no contexto A nos dias de 1 a 5. Após um intervalo de dois minutos o CS foi aplicado (luz durante 20 segundos) três vezes com intervalos de dois minutos. Nenhum UCS foi aplicado. Consequentemente o quinto dia serviu para medir o primeiro plano que condiciona, isto é a associação entre o ambiente e a hostilidade. A paralisação foi medida como no terceiro dia. A análise estatística dos dados foi baseada no cálculo dos valores médios e do erro padrão (SE) visto que as comparações entre os dois grupos foram feitas usando estatística sem parâmetros (Teste "U" de Mann-Whitney).

Resultados A quantidade de líquido consumido pelos animais diariamente era de 35,7 ± 1,1 ml e o C3 não teve nenhum efeito neste consumo. 12

Campo aberto 1) tempo para deixar o centro (segundos): média ± SE (desvio padrão) (exploração horizontal)

Controlos 25,0 ±8,0 C3 12,6 ± 2,5 Teste U: p < 0,05 2) Número total de quadrados caminhados: média ± SE Controlos 56,5 ±3,4 C3 76 ± 8,4 Teste U: p < 0,05

Estes resultados mostram que o tratamento com o C3 reduz o medo do ambiente e aumenta consequentemente a atitude exploratória dos animais. MWM (labirinto de água de Morris)

No que diz respeito a este teste, nenhumas diferenças dignas de nota foram observadas entre animais tratados e animais do grupo de controlo. O perfil de aquisição e o da "inversão" revelaram ser sobreponiveis (dados não relatados). Dado que a avaliação deste teste é baseada no comprimento do trajecto e no tempo demorado a alcançar a plataforma, pode-se indicar que C3 não altera a aprendizagem ou a mobilidade e consequentemente não exerce nenhuma acção de estimulação. Em outras palavras, os animais tratados com C3 não apresentam nem sedação nem estimulação. CDFC (Condicionamento de medo dependente do contexto) 1) Tempo de paralisação (segundos): média de SE nas 4 sessões do dia 3 13

Sessão Tempo de paralização C3 Controlos 1 6 ± 2,7 5 ± 1,1 2 30 ± 5,0* 48 ± 3,7 3 61 ± 8,5* 88 ± 1,8 4 -J 1+ O * 86 ± 6,4 * Teste de U: p < 0,05

Os resultados mostram que C3 reduz significativamente se paralisar em todas as sessões onde os estímulos do CS e do UCS foram aplicados, indicando uma acção no primeiro plano, consistindo na redução do pânico quando enfrentado com o ambiente hostil. 2) Como indicado no método, no quarto dia de CDFC os animais foram colocados na câmara de teste durante um período de 8 minutos em que as sessões de 2 minutos cada uma não tiveram nenhum estímulo.

Nestas circunstâncias, no entanto, o animal tende a ligar o ambiente (fundo) com a memória dos eventos hostis (primeiro plano) e desenvolve consequentemente a condição de medo.

Os resultados são mostrados na tabela que se segue.

Tempo de paralisação (segundos) : média ± SE nas 4 sessões do dia 4

Sessão Tempo de paralização C3 Controlos 1 23 ± 7,6* 60 ± 9,5 2 76 ± 11,2* 94 ± 9,1 3 Oh 1+ * 80 ± 6,5 4 70 ± 6,4* 84 ± 9,2 14 *

Teste de U: p < 0,05

Os valores médios daqueles tratados com o C3 na primeira sessão são significativamente mais reduzidos em relação aos dos grupos de controlo, um indicador geral de um medo mais controlado quando enfrentados com um ambiente hostil. Nas últimas sessões as diferenças entre grupos já não permanecem e os tempos de paralisação estabelecem-se em valores que não são significativamente diferentes entre os dois grupos, indicando que em ambos os grupos há ainda a memória de um ambiente que foi hostil. 3) os resultados para o quinto dia, isto é quando o contexto ambiental for mudado e somente o estímulo de luz é aplicado mas não o estimulo doloroso (deste modo na ausência da grade), são apresentados na seguinte tabela.

Tempo de paralisação (segundos): média ± SE nas sessões do dia 5

Sessão Tempo de paralização C3 Controlos 1 18 ± 6,2 12 ± 4,0 2 90 ± 4,0 74 ± 5,3 3 110 ± 4,5 80 ± 12,0* 4 110 ± 4,2 106 ± 6,2 * Teste de U: p < 0,05

Os resultados mostram que o comportamento de paralisação é similar nos dois grupos, isto é há um aumento constante em ambos os grupos. No grupo tratado com o C3 há uma atenuação da paralisação que é significativamente diferente de zero no 15 sexto minuto assim como é basicamente mais ser reduzida na totalidade da sessão.

Conclusões 0 tratamento com o C3, com uma dose de 25 mg/kg/dia durante um periodo de 42 - 44 dias, apresenta os seguintes efeitos. 1) Redução no OF da resposta emotiva e aumento na exploração. 2) Redução na paralisação durante o CDFC no período de aquisição (dia 3), sua atenuação na exposição ao ambiente hostil sozinho, muito embora sem produzir hostilidade (dia 4) e finalmente a sua atenuação na exposição num contexto novo similar e com estímulos parciais (dia 5).

Todos estes três elementos, em particular no que se relaciona com o período de aquisição, são os indicadores não ambíguos da melhor adaptação ao ambiente e à sua possível hostilidade. 3) Não são colocados em risco nem a aprendizagem nem a memória espacial deste que as fases (de aprendizagem e de inversão) possam ser acedidas por intermédio do labirinto de água. 4) Ausência de efeitos estimulantes ou depressivos de CNS que possam ser revelados através de mudanças na actividade motora.

Deste modo, os resultados obtidos demonstram que C3 melhora a resposta emocional ao ambiente sem agir como um depressivo ou como um estimulante do CNS.

Os glicosaminoglicanos com um peso molecular médio de 2400 (± 200) D podem, deste modo, ser usados para a preparação de 16 composições farmacêuticas que são adequadas para o tratamento das disfunções emocionais.

As referidas composições incluem uma quantidade farmacologicamente eficaz do principio activo em conjunto com diluentes ou com excipientes farmacologicamente aceitáveis e podem estar sob as formas que são adequadas para a administração subcutânea, intramuscular, intravenosa e oral.

Os exemplos de diluentes ou de excipientes farmacologicamente aceitáveis são, por exemplo: uma solução saline fisiológica, silica coloidal.

As referidas composições contêm normalmente uma quantidade de glicosaminoglicanos compreendida entre 10 mg e 100 mg. 0 tratamento das disfunções emocionais compreende a administração ao paciente de aproximadamente entre 10 mg e 400 mg/dia principio activo.

Em particular, a administração de 10 - 50 mg/dia é preferida para a administração subcutânea, intramuscular e intravenosa, considerando que a administração de 50 - 100 mg/dia é preferida no caso de administração por via oral. 17

Claims (3)

1. REIVINDICAÇÕES 1. O uso de uma fracção de glicosaminoglicano tendo um peso molecular médio de 2400 (± 200) D obtida por intermédio de despolimerização de um glicosaminoglicano seleccionado do grupo que consiste por heparina e por sulfato de heparano para a preparação de composições farmacêuticas para o tratamento de disfunções emocionais seleccionadas de entre o grupo que consiste por perturbações depressivas, perturbações de ansiedade, neuroses de ansiedade, agitação, confusão.
2. 2. 0 uso de acordo com a reivindicação 1, em que a referida fracção de glicosaminoglicano é obtida através da despolimerização da heparina.
3. 3. O uso de acordo com as reivindicações 1 - 2 em que as referidas composições farmacêuticas contêm entre 10 e 100 mg da referida fracção de glicosaminoglicano tendo um peso molecular médio de 2400 (± 200) D.