PT1453783E

PT1453783E - Aril-cicloalcanos substituídos e a sua utilização como agentes anticancerígenos

Info

Publication number: PT1453783E
Application number: PT02804241T
Authority: PT
Inventors: Patrick Mailliet; Marc Capet; Gilles Tiraboschi; Thomas Caulfield
Original assignee: Aventis Pharma Sa
Priority date: 2001-12-05
Filing date: 2002-12-03
Publication date: 2007-01-31
Also published as: ATE341531T1; CA2469349A1; AR037478A1; DK1453783T3; AU2002365643A1; ES2272816T3; EP1453783A1; JP2005511676A; MXPA04005225A; DE60215217D1; US6887904B2; SI1453783T1; FR2833004A1; US20030149072A1; TW200300756A; EP1453783B1; FR2833004B1; DE60215217T2; WO2003048096A1

Description

DESCRIÇÃO

"ARIL-CICLOALCANOS SUBSTITUÍDOS E SUA UTILIZAÇÃO COMO AGENTES ANTICANCERÍGENOS" A presente invenção refere-se a novos compostos químicos, em particular, novos aril-cicloalcanos, composições contendo-os e sua utilização como medicamentos.

Mais particularmente, a invenção refere-se a novos aril-cicloalcanos que apresentam uma actividade anticancerígena e, em particular, uma actividade inibidora de polimerização da tubulina.

Os aril-cicloalcanos aqui em questão são derivados carbocíclicos de chalconas, cuja cadeia prop-2-en-l-ona está substituída com uma cadeia propanona, cujas posições 2 e 3 estão substituídas com uma cadeia alquilo ou alcenilo ligada simultaneamente às posições 2 e 3 da cadeia propanona.

Michael L. Edwards et al., artigo publicado em J. Med. Chem. 1990, vol. 33, pp 1948-1954, apresentam chalconas utilizáveis como agentes antimitóticos. 0 composto 81, apresentado na tabela IV, é uma chalcona linear reduzida. A sua modesta actividade anticancerígena relativamente ao seu análogo insaturado 36, apresentado na tabela III, levou, naturalmente, os requerentes a desviarem-se dos produtos reduzidos. 1

Além disso, apesar da substituição de um hidrogénio, na posição 2 da cadeia prop-2-en-l-ona, promover um aumento substancial da actividade (composto 63, tabela III), a substituição de um hidrogénio na posição 3 da mesma cadeia elimina a actividade antitumoral (composto 90, tabela IV).

Assim, as chalconas insaturadas são bons candidatos para a preparação de composições anticancerigenas. Infelizmente, foi observado que as chalconas insaturadas apresentavam importantes deficiências em termos de estabilidade. Assim, uma exposição prolongada à luz e/ou ao ar promove uma degradação rápida dos produtos que é dificilmente compatível com uma utilização de medicamentos, após um armazenamento prolongado de uma duração que pode ir, frequentemente, desde alguns meses até um ou vários anos.

Assim, surgiu a necessidade de derivados de chalconas que apresentassem, simultaneamente, uma estabilidade acrescida e uma actividade satisfatória, em particular, perante a inibição da polimerização da tubulina.

Essas exigências são cumpridas pelos produtos da presente invenção, que respondem à seguinte fórmula (I):

na qual: 2 A representa um hidrocarboneto cíclico saturado ou parcialmente insaturado, contendo de 3 a 14 átomos de carbono, eventualmente substituído; X é seleccionado do grupo constituído por 0, Ré seleccionado do grupo constituído por H, halogéneo, CH3, CF3, C2H5, C3-C4 alquilo,

Ari representa um primeiro núcleo fenilo substituído com um substituinte ou um grupo de substituintes seleccionados de entre: (i) 1 a 4 radicais 0CH3, (ii) um radical metilenodioxilo, (iii) um radical etilenodioxilo, (iv) 1 ou 2 radicais 0CH3 e um radical metilenodioxilo, (v) 1 ou 2 radicais 0CH3 e um radical etilenodioxilo.

Ar2 é seleccionado do grupo constituído por 3-hidroxi-4-metoxi-fenilo; 4-hidroxi-3-metoxi-fenilo; 3-hidroxi-4-amino-fenilo; 4-hidroxi-3-amino-fenilo; 3-hidroxi-4-(N,N-dimetilamino)-fenilo; 4-hidroxi-3-(N,N-dimetilamino)- fenilo.

Um dos méritos da invenção é o de ter verificado que é possível obter derivados de chalconas saturadas (contendo uma 3 porção 1,3-diaril-propanona) que apresentam uma actividade satisfatória para a polimerização da tubulina.

Um dos outros méritos da invenção é o de ter verificado que é possível, de um modo surpreendente, substituir a posição 3 da cadeia prop-2-en-l-ona com um radical hidrocarbonado, mantendo uma actividade satisfatória para a polimerização da tubulina, quando o referido radical hidrocarbonado está ligado à posição 2 da prop-2-en-l-ona, e que esta última é reduzida a propanona.

Um dos outros méritos da invenção é o de ter verificado que, contra todas as expectativas, a adição de um substituinte ligado simultaneamente às posições 2 e 3 de uma 1,3-diaril-propanona, considerada inactiva ou muito pouco activa para a polimerização da tubulina, conduz à obtenção de compostos que inibem a polimerização da tubulina.

De um modo preferido, A será seleccionado de entre os hidrocarbonetos monocíclicos ou bicíclicos, contendo de 3 a 8 átomos de carbono. A pode ser, de um modo mais preferido, um ciclopropilo.

Ari pode estar substituído, de um modo preferido, com um grupo de substituintes seleccionados de entre: (i) 2,5-dimetoxilo, (ii) 3,5-dimetoxilo, (iii) 2,3, 4-trimetoxilo, 4 (iv) 3,4,5-trimetoxilo (v) 2,4,5-trimetoxilo, (vi) 2,3,5-trimetoxilo, (vii) 2,3,4,5-tetrametoxilo, (viii) 3,4-metilenodioxilo, (ix) 3,4-etilenodioxilo. preferido, de entre sendo este último poderá apresentar-se

Ari será seleccionado, de um modo mais 2,5-dimetoxifenilo e 3,4,5-trimetoxifenilo, particularmente preferido.

Um produto de acordo com a invenção sob a forma: 1) racémica , ou 2) enriquecida num estereoisómero, ou 3) enriquecida num enantiómero; e poderá estar eventualmente na forma de sal terá, de um modo

Um produto de acordo com a invençãc vantajoso, a seguinte fórmula (I): 5

(I) X R

Ar;

A

Arç na qual: - A representa um radical monocicloalquilo ou bicicloalquilo, saturado ou parcialmente insaturado, contendo de 3 a 14 átomos de carbono, eventualmente substituído com um ou vários grupos seleccionados de entre os átomos de halogéneo ou os radicais (Cl-C7)alquilo, amino, (C1-C7)alquilamino, (Cl- C7) dialquilamino, hidroxilo, (C1-C7)alcoxilo, (Cl-C7)alquiltio, carbonilo, ciano, trifluorometilo, carboxilo, (C1-C7)alcoxicarbonilo, carboxamido, N-[(C1-C7) alquil]carboxamido ou N,N-[(C1- C7) dialquil]carboxamido, eventualmente substituído com um grupo (C6-C10)arilo condensado, por exemplo, fenilo, naftilo, ou com um grupo (C2-C13)heteroarilo condensado, por exemplo, 1,2,3-triazolo[c]-, pirido-, carbazolo-, acridino-.

Um produto de acordo com a invenção será utilizado, de um modo preferido, como agente que inibe a polimerização da tubulina.

Um produto de acordo com a invenção será utilizado, de um modo preferido, para favorecer a desagregação de agregados de células provenientes de um tecido vascular. 6

Um produto de acordo com a invenção poderá ser utilizado para a preparação de um medicamento útil para tratar um estado patológico, em particular, um cancro. A presente invenção refere-se também às composições terapêuticas contendo um composto de acordo com a invenção, em associação com um excipiente farmaceuticamente aceitável, de acordo com o modo de administração seleccionado. A composição farmacêutica pode apresentar-se sob a forma sólida, liquida ou de lipossomas.

De entre as composições sólidas, pode citar-se os pós, cápsulas, comprimidos. De entre as formas orais, também se pode incluir as formas sólidas protegidas perante o meio ácido do estômago. Os suportes utilizados para as formas sólidas são constituídos por, nomeadamente, suportes minerais, como fosfatos, carbonatos ou por suportes orgânicos, como lactose, celuloses, amido ou polímeros. As formas líquidas são constituídas por soluções, suspensões ou dispersões. Contêm, como suporte de dispersão, água, um solvente orgânico (etanol, NMP ou outros) ou misturas de agentes tensioactivos e solventes ou de agentes complexantes e solventes.

As formas líquidas serão, de um modo preferido, injectáveis e, consequentemente, terão uma formulação aceitável para uma tal utilização.

As vias de administração por injecção aceitáveis incluem as vias intravenosa, intraperitoneal, intramuscular e subcutânea, sendo preferida a via intravenosa. 7 A dosagem administrada dos compostos da invenção será adaptada pelo médico em função da via de administração, do doente e do estado deste último.

Os compostos da presente invenção podem ser administrados isolados ou em mistura com outros anticancerigenos. De entre as associações possíveis, pode citar-se: • agentes alquilantes e, nomeadamente, ciclofosfamida, melfalano, ifosfamida, clorambucilo, bussulfano, tiotepa, prednimustina, carmustina, lomustina, semustina, estreptozocina, dacarbazina, temozolomida, procarbazina e hexametilmelamina • derivados de platina como, nomeadamente, cisplatina, carboplatina ou oxaliplatina agentes antibióticos como, nomeadamente, bleomicina, mitomicina, dactinomicina agentes antimicrotúbulos como, nomeadamente, vimblastina, vincristina, vindesina, vinorelbina, taxóides (paclitaxel e docetaxel) antraciclinas como, nomeadamente, doxorrubicina, daunorrubicina, idarrubicina, epirrubicina, mitoxantrona, losoxantrona topoisomerases dos grupos I e II, tais como etoposido, teniposido, amsacrina, irinotecano, topotecano e tomudex fluoropirimidinas, tais como 5-fluorouracilo, UFT, floxuridina análogos de citidina, tais como 5-azacitidina, citarabina, gemcitabina, 6-mercaptomurina, 6-tioguanina análogos da adenosina, tais como pentostatina, citarabina ou fosfato de fludarabina metotrexato e ácido folínico enzimas e vários compostos, tais como L-asparaginase, hidroxiureia, ácido trans-retinóico, suramina, dexrazoxano, amifostina, herceptina, bem como as hormonas estrogénicas, androgénicas agentes antivasculares, tais como derivados da combretastatina ou da colchicina e seus pró-fármacos.

Também é possível associar, aos compostos da presente invenção, um tratamento por radiações. Esses tratamentos podem ser administrados em simultâneo, separadamente ou sequencialmente. 0 tratamento será adaptado pelo médico em função do doente a tratar.

Um produto de acordo com a invenção poderá favorecer a desagregação de agregados de células provenientes de um tecido vascular. Mais particularmente, os produtos da presente invenção serão utilizados, na sua primeira aplicação terapêutica, para inibir o crescimento das células cancerígenas e, ao mesmo tempo, 9 a destruição dos vasos existentes. A inibição da vascularização é determinada por um ensaio de separação celular, tal como descrito a seguir.

Ensaio que permite determinar a inibição da vascularização

Foi estabelecido um ensaio de determinação da separação das células endoteliais para seleccionar os produtos com base na sua actividade in vitro. Este ensaio de determinação da separação das células endoteliais é caracterizado por as células endoteliais, inoculadas em placas cujo fundo foi revestido com um agente ligante seleccionado, de um modo preferido, de entre gelatina, fibronectina ou vitronectina, após cultura, serem adicionadas de um meio contendo o composto a ensaiar, depois, as células serem marcadas com uma substância fluorescente, as células que se separaram serem eliminadas por lavagem e a fluorescência das células restantes ser determinada no fluorimetro.

Este ensaio consiste em determinar a separação das células endoteliais cultivadas em substratos com base num agente ligante seleccionado, de um modo preferido, de entre fibronectina, vitronectina ou gelatina. De um modo preferido, um dia após a inoculação das células em placas contendo, por exemplo, 96 poços, o meio de cultura é substituído por um meio contendo o composto a ensaiar na ausência de soro. Prepara-se seis vezes a mesma preparação, a três concentrações diferentes (0,1, 0,3 e 0,6 μΜ) e seis vezes o controlo sem adição de produto antivascular. Após duas horas de tratamento com a substância a ensaiar, as células são marcadas com calceina-AM (1,6 yg/mL) em meio de cultura com um suplemento de BSA a 0,1%. As células que 10 se separaram são eliminadas por lavagem com o meio de cultura contendo albumina de soro bovino a 0,1% ; adiciona-se 100 pL de meio a cada poço. A fluorescência das células restantes é determinada no fluorimetro. Os dados obtidos são expressos relativamente ao controlo (células não tratadas). A avaliação da separação das células endoteliais in vitro é determinada do seguinte modo. As células HDMEC (Human Dermal Microvascular Endothelial Cells, Promocell, c-122102) são cultivadas em meio ECGM-MV contendo soro fetal de bovino a 5%, factores de crescimento (EGF a 10 ng/mL, hidrocortisona a 1 pg/mL, suplemento de crescimento com heparina a 0,4%) e antibióticos (anfotericina a 50 ng/mL, gentamicina a 50 pg/mL). Para o ensaio de separação, as HDMEC são inoculadas a 5000 células em placas de 96 poços de fundo transparente (Costar) pré-revestidas com fibronectina (10 pg/mL) ou vitronectina (1 pg/mL) ou gelatina. Após vinte e quatro horas, o meio de cultura é substituído por meio ECGM-MV BSA a 0,1% contendo os produtos indicados. As concentrações ensaiadas são 0,1-0,3 e 1 pM para cada produto. Após duas horas de tratamento, as células são marcadas durante uma hora com calceína (1,6 pg/mL, Molecular Probes) em meio ECGM-MV BSA a 0,1%. Em seguida, as células separadas são eliminadas por lavagem com meio ECGM-MV BSA a 0,1%; é adicionado, a cada poço, 100 pL de meio. A fluorescência das células que permanecem ligadas ao substrato de cada poço é determinada com o auxílio de um fluorimetro, Spectrafluor Plus (Tecan, excitação a 485 nm e emissão a 535 nm) . Os dados são a média de seis amostras diferentes e são expressos em percentagem do controlo (células não tratadas).

Um efeito de separação celular superior ou igual a 15% é considerado como significativo. 11

Um produto de acordo com a invenção poderá ser útil para inibir a polimerização da tubulina in vitro.

Avaliação da inibição de polimerização de tubulina A tubulina é purificada a partir de cérebros de porco de acordo com métodos publicados (Shelanski et al.r 1973, Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 70, 765-768. Weingarten et al., 1975,

Proc. Natl. Acad.Sei. USA, 72, 1858-1862).

Resumidamente, os cérebros são triturados e centrifugados num tampão de extraeção. A tubulina, contida no sobrenadante do extracto é submetida a dois ciclos consecutivos de polimerização a 37 °C e despolimerização a 4 °C, antes de ser separada das MAPs (Microtubule Associated Proteins) por cromatografia em coluna de fosfocelulose Pll (Whatman). A tubulina assim isolada tem uma pureza superior a 95%. É mantida num tampão designado RB/2 glicerol a 30%, cuja composição é MES-NaOH [ácido 2-(N-morfolino) -etanossulfónico] a 50 mM, pH 6,8; MgCl2 a 0,25 mM; EGTA a 0,5 mM; glicerol a 30% (v/v) , GTP (guanosina-5'-tri- fosfato) a 0,2 mM. A polimerização da tubulina em microtúbulos é seguida por turbidimetria como se segue: a tubulina é ajustada a uma concentração de 10 μΜ (1 mg/mL) no tampão RB/2 glicerol a 30%, ao qual se adiciona GTP a 1 mM e MgCl2 a 6 mM. A polimerização é iniciada por um aumento da temperatura de 6 °C a 37 °C numa célula de 1 cm de percurso óptico, colocada num espectrofotómetro UVIKON 931 (Kontron) equipado com um suporte de célula termostatizado. O aumento da turbidez da solução é seguido a 350 nm. 12

Os produtos são dissolvidos em solução a 10 mM em DMSO e adicionados, a várias concentrações (0,5 a 10 μΜ) , à solução de tubulina antes da polimerização. A IC5o é definida como a concentração de produto que inibe em 50% a velocidade de polimerização. Considera-se como muito activo um produto cuja IC50 é inferior ou igual a 3 μΜ.

Avaliação da inibição de proliferação de células HeLa

Avalia-se a proliferação das células HeLa por determinação da incorporação de [14C]-timidina do seguinte modo. As células HeLa (células epiteliais tumorais de origem humana) são cultivadas em meio DMEM (Gibco) contendo soro fetal de bovino a 10% e antibióticos (penicilina a 1%, estreptomicina a 1%) . Para realizar o ensaio de proliferação, inoculam-se as células em microplacas cytostar de 96 poços (Amersham), numa razão de 5000 células por poço. Em seguida, adiciona-se a [14C]-timidina (0,1 pCi/poço) e os produtos a avaliar. Utilizam-se concentrações variáveis de produtos até 10 μΜ; o DMSO (solvente utilizado para solubilizar os produtos) não deve exceder 0,5% no meio. 48 horas após incubação a 37 °C, determina-se a radioactividade incorporada nas células por contagem da placa num contador TRI-LUX (Wallac). A IC50 é definida como a concentração de produto que diminui em 50% a radioactividade relativamente a um controlo não tratado. Considera-se citotóxico um produto cuja IC50 é inferior a 1 μΜ. 13

Avaliação do efeito de separação de células endoteliais

HDMEC A avaliação da separação das células endoteliais in vitro é determinada do seguinte modo: Células HDMEC (Human Dermal Microvascular Endothelial Cells, Promocell, c-122102) são cultivadas num meio ECGM-MV contendo soro fetal de bovino a 5%, factores de crescimento (EGF a 10 ng/mL, hidrocortisona a 1 pg/mL, suplemento de crescimento com heparina a 0,4%) e antibióticos (anfotericina a 50 ng/mL, gentamicina a 50 pg/mL). Para o ensaio de separação, as HDMEC são inoculadas a 5000 células, em placas de 96 poços com fundo transparente (Costar), pré-revestidas com fibronectina (10 pg/mL) ou vitronectina (1 pg/mL) ou gelatina. Após vinte e quatro horas, o meio de

cultura é substituído por meio ECGM-MV BSA a 0,1% contendo os produtos indicados. As concentrações ensaiadas são 0,1-0,3 e 1 μΜ para cada produto. Após duas horas de tratamento, as células são marcadas durante uma hora com calceína (1, 6 pg/mL, Molecular Probes) num meio ECGM-MV BSA a 0,1%. Em seguida, as células separadas são eliminadas por lavagem com meio ECGM-MV BSA a 0,1%; é adicionado, a cada poço, 100 pL de meio. A fluorescência das células que permanecem ligadas ao substrato do poço é determinada com o auxilio de um fluorimetro, Spectrafluor Plus (Tecan, excitação a 485 nm e emissão a 535 nm) . Os dados são a média de seis amostras diferentes e são expressos em percentagem do controlo (células não tratadas).

Um efeito de separação celular superior ou igual a 15% é considerado como significativo. 14

Definigões "Halogéneo" é um elemento seleccionado de entre F, Cl, Br e I. "Cicloalquilo" pode ser um substituinte seleccionado de entre ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclo-hexilo, ciclo-heptilo, biciclo[2.2.1]heptilo, biciclo[2.2.2]octilo. "Cicloalquilalquilo" é um substituinte alquilo, o próprio substituído com um grupo cicloalquilo, por exemplo, tal como definido acima.

Um substituinte definido por "Heterociclo azotado contendo de 5 a 12 átomos de carbono" pode ser seleccionado do grupo constituído por: piridin-3-ilo, piridin-4-ilo, pirimidin-4-ilo, quinolein-6-ilo, quinolein-7-ilo, isoquinolein-6-ilo, isoquinolein-7-ilo, quinazolin-6-ilo, quinoxalin-6-ilo, N-alquil-indol-5-ilo, N-alquil-indol-6-ilo, N-alquil-tetra-hidro-1,2,3,4-quinolein-6-ilo, N-alquil-tetra-hidro-1,2,3,4-quinolein-7-ilo, acridin-2-ilo, acridin-3-ilo, N-alquil-carbazol-2-ilo ou N-alquilcarbazol-3-ilo. "Arilo" é um substituinte compreendendo, pelo menos, um ciclo aromático, este último compreendendo, eventualmente, um ou vários heteroátomos que participam na aromaticidade. Um exemplo de grupo arilo pode ser um substituinte seleccionado de entre fenilo, naftilo, indenilo, piridilo, pirimidinilo, pirazinilo, tienilo, furilo, pirolilo, tiazolilo, oxazolilo, tiadiazolilo, oxadiazolilo, 15 imidazolilo, quinoleílo, isoquinoleílo, benzotienilo, benzofurilo, indolilo, benzotiazolilo, benzoxazolilo, benzimidazolilo, indazolilo, azaindolilo. "Heteroarilo" é um grupo arilo compreendendo, pelo menos, um heteroátomo que participa na aromaticidade. Assim, os grupos arilo, tais como fenilo, naftilo, antracenilo, pirenilo, que estão desprovidos de heteroátomos intraciclicos, não fazem parte do grupo dos heteroarilo. "Aralquilo" é um substituinte alquilo, o próprio substituído com um grupo arilo. Um grupo benzilo é um exemplo de substituinte aralquilo. 0 termo "substituído" nomeadamente presente nas expressões "alquilo substituído" e "aralquilo substituído" refere-se, necessariamente, a um substituinte diferente de H, que pode ser seleccionado de entre alquilo, F, Cl, Br, I, N(R7,R8), N(0)(R7,R8), NO, N02, 0(R7), S(R7), S0(R7), S02(R7), 0S02(R7), P03(R7) , 0P03 (R7) , C0(R7), COO-(R7), CONH-(R7), CON(R7,R8), CN, C=c-(R7), N=C-(R9), arilo, aralquilo; no qual R7, R8 são independentemente seleccionados do grupo constituído por H, alquilo, alquileno, arilo, aralquilo, C(0)-(R7), C(S)-(R7), alquil-0(R7), alquil-S(R7), alquil-N(R7,R8), no qual quando R7, R8 estão simultaneamente presentes, podem estar ligados entre eles para formar um ciclo, R9 é seleccionado do grupo constituído por alquilo, alquileno, arilo, aralquilo, alquil-0(R7), alquil-S(R7), alquil-N(R7,R8); e todos os outros substituintes aceitáveis conhecidos pelo perito na técnica à data de pedido da invenção. 16 "Aminoácido" compreende os aminoácidos naturais e artificiais, sob a forma enantiomericamente pura ou em mistura. "Aminoácido" ou "amino-ácido" são sinónimos de "ácido aminado". "Heterociclo azotado de 5 a 12 membros" pode ser um heterociclo seleccionado do grupo constituído por: piridin-3-ilo, piridin-4-ilo, pirimidin-4-ilo, quinolin-6-ilo, quinolin-7-ilo, isoquinolin-6-ilo, isoquinol-7-ilo, quinazolin-6-ilo, quinoxalin-6-ilo, N-alquil-indol-5-ilo, N-alquil-indol-6-ilo, N-alquil-tetra-hidro-1,2,3,4-quinolin-6-ilo, N-alquil-tetra-hidro-1,2,3,4-quinolin-7-ilo, acridin-2-ilo, acridin-3-ilo, N-alquil-carbazol-2-ilo, N-alquilcarbazol-3-ilo.

Os produtos de fórmula geral (I),

definidos anteriormente podem ser obtidos por reacção de cicloadição, do tipo 2 + 1 ou 2+2 ou 2 + 3 ou 2 + 4, a partir de uma chalcona de fórmula geral (II) , na qual R, Ari e Ar2 são definidos tais como acima e X representa um átomo de oxigénio de acordo com o esquema geral (I) a seguir, para dar os produtos de fórmula geral (I), nos quais X representa um átomo de oxigénio. 17

(II) (I)

Esquema geral (I) É possível utilizar os métodos de cicloadição, do tipo 2+1 ou 2 + 2 ou 2 + 3 ou 2 + 4 conhecidos pelo perito na técnica e, mais particularmente, os descritos em:

Advances in cycloaddition Vol I (1988) (editor D. Curran),

Advances in cycloaddition Vol II (1990) (editor D. Curran),

Advances in cycloaddition Vol III (1993) (editor D.

Curran),

Advances in cycloaddition Vol IV (1997) (editor M.

Lauters), 18

Advances in cycloaddition Vol I (1999) (editor M. Harmaka), 1,3 Dipolar cycloaddition Vol I & Vol II (1984) (editor A.

Padwa).

Quando Ar2 representa um núcleo fenilo substituído com um radical hidroxilo ou amino, é particularmente vantajoso proteger esta função antes da reacção de cicloadição, depois, desprotegê-la nas condições descritas em Protective Groups in Organic Chemistry 1981 (T. Greene, editor Wiley) . No caso em que o referido substituinte é um radical hidroxilo, utilizar-se-á, de um modo preferido, um grupo sililado, tal como o grupo terc-butildimetilsililo (TBDMS), quando o referido substituinte representa um radical aminado, utilizar-se-á, de um modo preferido, um radical nitro ou um grupo alquiloxicarbonilo, tal como terc-butiloxicarbonilo (Boc) ou benziloxicarbonilo (Cbz).

No caso em que A representa um radical ciclopropilo, é particularmente vantajoso fazer reagir a chalcona de fórmula geral (II) com um reactivo como, a título não limitativo, um ileto de sulfoxónio ou de sulfónio ou um ileto de fosfónio ou um derivado de diazometano ou um derivado malónico ou um carbeno gerado in situ.

No caso em que A representa um radical ciclobutilo, é particularmente vantajoso fazer reagir a chalcona de fórmula geral (II) com um derivado etilénico rico em electrões como, a título não limitativo, um 1,1-dialquilo-etileno ou 1,1-dialcoxi-etileno ou um trialquilsililoxi-etileno ou um 3-trialquilestanil-propeno. 19

No caso em que A representa um radical ciclopentilo, é particularmente vantajoso fazer reagir a chalcona de fórmula geral (II) com um derivado "equivalente de trimetilenometano", na presença de catalisador de paládio como, a titulo não limitativo, o descrito em J. Amer. Chem. Soc. (1983), 105, 2315.

No caso em que A representa um radical ciclopentilo, é particularmente vantajoso fazer reagir a chalcona de fórmula geral (II) com um derivado de butadieno.

No caso em que A representa um radical biciclo[2.2.1]heptilo ou de biciclo[2.2.2]octilo, é particularmente vantajoso fazer reagir a chalcona de fórmula geral (II) com um derivado de ciclopentadieno ou de 1,3-ciclo-hexadieno, respectivamente.

Entende-se que as reacções de cicloadição numa chalcona podem ser realizadas de modo enantiosselectivo ou enantioespecifico utilizando ou um reactivo ou um catalisador portador de quiralidade.

Entende-se também que, na medida em que a cicloadição conduz à obtenção de um produto que apresenta uma insaturação, esta última pode ser reduzida por um dos métodos correntes amplamente descritos, por exemplo, uma hidrogenação catalítica utilizando um metal de transição, nomeadamente, paládio, eventualmente na presença de um interferente de actividade que permite uma hidrogenação selectiva, num suporte aceitável, por exemplo, carvão activado, alumina ou amianto.

As chalconas de fórmula geral (I) são geralmente preparadas por acoplamento, na presença de uma base e de um agente de 20 desidratação, entre uma cetona aromática de fórmula geral (III) e um aldeido aromático de fórmula geral (IV), de acordo com, por exemplo e a titulo não limitativo, J. Med. Chem., 1990, 33, 1948.

As cetonas aromáticas de fórmula geral (III) e os aldeidos de fórmula geral (IV) ou são comerciais ou estão descritos na literatura ou são preparados por métodos clássicos de síntese das cetonas ou aldeídos aromáticos conhecidos pelo perito na técnica.

De acordo com um segundo esquema geral de síntese, os produtos de fórmula geral (I) podem ser preparados a partir de derivados de 2-aril-cicloalcanocarboxilatos de fórmula geral (V), nos quais A, R e Ar2 são definidos tais como anteriormente. Duas vias diferentes são, então, possíveis: acilação, do tipo Friedel-Crafts, de um produto de fórmula geral AriH com um derivado de fórmula geral (V), no qual X representa um átomo de halogéneo, de um modo preferido, um átomo de cloro, ou um radical hidroxilo, na presença de um catalisador ácido, ou mineral, como o ácido polifosfórico ou ácido trifluoroacético ou ácido trifluorometanossulfónico, ou um ácido de Lewis como tricloreto de alumínio, tetracloreto de estanho ou de titânio ou trifluoreto de boro complexado com óxido de dietilo. Este método é particularmente interessante na medida em que a parte Ari dos produtos de fórmula geral (I) corresponde a núcleos aromáticos ricos em electrões e, assim, muito reactivos em reacções de acilação do tipo Friedel-Crafts; 21 ou reacção de um organometálico, de um modo preferido, um organomagnésio ou um organolítio, com um derivado de fórmula geral (V) , no qual X representará um átomo de halogéneo, de um modo preferido, um átomo de cloro, ou um radical hidroxilo, ou um radical NRiR2, no qual Ri e R2 são preferencialmente diferentes de um átomo de hidrogénio e no qual, de um modo muito preferido, Ri representa um radical metilo e R2 representa um radical metoxilo, para formar o derivado conhecido sob o nome de "amida de Weinreb".

AriH/Friedel-Crafts

X = Cl, OH

Αιι,Μ X = CI, OH, NR.,R2> OR, M = MgBr (Cl), Li....

Esquema geral (II)

Os produtos de fórmula geral (V) ou são conhecidos ou preparados de acordo com os métodos de síntese conhecidos dos 2-aril-cicloalcanocarboxilatos. 22 A título de exemplos não limitativos: os 2-aril-ciclopropanocarboxilatos podem ser preparados por cicloadição do tipo 2 + 1 de um derivado de cinamato, utilizando os métodos descritos no esquema geral (I), ou por acoplamento electroquímico de um derivado de cinamato com dibromometano, de acordo com J. Org. Chem., 1990, 55, 2503, ou por reacção de um derivado de estilbeno com diazoacetato de etilo, de acordo com J. Chem. Soc., Chem. Commun., 1985, 328; os 2-aril-ciclobutanocarboxilatos podem ser preparados por cicloadição do tipo 2+2 de um derivado de cinamato, utilizando os métodos descritos no esquema geral (I), ou por acoplamento electroquímico de um derivado de cinamato com um 1,2-dibromoetano, de acordo com J. Org. Chem., 1990, 55, 2503, ou por descarboxilação de um 2-aril-ciclobutano-l, 1- dicarboxilato, de acordo com J. Het. Chem., 1995, 1493; os 2-aril-ciclopropanocarboxilatos podem ser preparados por cicloadição do tipo 2 + 1 de um derivado de cinamato, utilizando os métodos descritos no esquema geral (I), ou por acoplamento electroquímico de um derivado de cinamato com um 1,3-dibromopropano, de acordo com J. Org. Chem., 1990, 55, 2503, ou por arilação enantiosselectiva de um ciclopent-l-eno-carboxilato com um aril-lítio, de acordo com J. Org. Chem., 1992, 57,4300; os 2-aril-ciclo-hexanocarboxilatos podem ser preparados por cicloadição do tipo 2 + 1 de um derivado de cinamato, 23 utilizando os métodos descritos no esquema geral (I), ou por acoplamento electroquímico de um derivado de cinamato com um 1,4-dibromobutano, de acordo com J. Org. Chem., 1990, 55, 2503, ou por arilação enantiosselectiva de um ciclo-hex-l-eno-carboxilato com um aril-lítio, de acordo com J. Org. Chem., 1992, 57, 4300, ou por cicloadição do tipo Diels-Alder entre um 4-aril-butadieno e um acrilato, de acordo com a patente US 5866513.

Os compostos aromáticos de fórmula geral AriH ou são comerciais ou preparados de acordo com os métodos descritos na literatura, os compostos organometálicos de fórmula geral AriM ou são comerciais ou preparados a partir dos derivados halogenados, de um modo preferido, bromados ou clorados, correspondentes, os próprios comerciais ou preparados de acordo com os métodos descritos na literatura.

Exemplo 1:_[2-(3-Hidroxi-4-metoxi-fenil)-ciclopropil]- (3,4,5-trimetoxi-fenil)-metanona, racemato trans

Passo 1: Num balão de 250 mL, de três tubuladuras, são dissolvidos em 75 mL de DMF, 5 g de E-3- (3-hidroxi-4-metoxi-fenil)-1-(3,4,5-trimetoxi-fenil)-propenona, que podem ser obtidos de acordo com Bioorg. Med. Chem. Lett. (1998), 8, 1051.

Adiciona-se, então, 2,4 g de terc-butildimetilclorossilano e 1,08 g de imidazole. Após 20 horas de agitação à temperatura ambiente, o meio reaccional é vertido em 400 mL de água. Extrai-se 3 vezes com 75 mL de acetato de etilo, depois, as fases orgânicas reunidas são lavadas com água, secas sobre sulfato de magnésio e concentradas sob pressão reduzida. Obtém-se então 6,6 g de E-3-(3-terc-butildimetilsililoxi-4-metoxi-fenil)-1-(3,4,5-trimetoxi-fenil)-propenona, utilizada tal e qual no passo seguinte.

Passo 2: Num balão de 50 mL, de três tubuladuras, adiciona-se, sob atmosfera de árgon, 124 mg de hidreto de sódio em suspensão de óleo a 60% e 10 mL de DMSO. Adiciona-se, então, em porções, 660 mg de iodeto de trimetilsulfoxónio e agita-se durante 1 hora, após o término de libertação de gás. Em seguida, adiciona-se, em porções, em 15 minutos, 1,38 g de E-3-(3-terc-butildimetilsililoxi-4-metoxi-fenil)-1-(3,4,5-trimetoxi-fenil)-propenona e agita-se, durante 20 horas, à temperatura ambiente. O meio reaccional é então vertido sobre 200 mL de água e 100 g de gelo picado, depois, extraido 3 vezes com 75 mL de acetato de etilo. As fases orgânicas reunidas são lavadas com água e secas sobre sulfato de magnésio. Após concentração sob pressão reduzida, o residuo oleoso laranja obtido é purificado por cromatografia flash em silica gel (70-230 Mesh) eluindo com uma mistura de ciclo-hexano e de acetato de etilo (70-30 em volume). Obtém-se, assim, 0,9 g de uma goma amarela que é recristalizada em 5 mL de óxido de diisopropilo, para dar 650 mg de [2-(3-Hidroxi-4-metoxi-fenil)-ciclopropil]-(3,4,5-trimetoxi-fenil) -metanona, racemato trans puro, cujas caracteristicas são as seguintes:

ponto de fusão (Kofler) = 75 °C análise elementar: %C = 66,43%; %H = 6,15%. 25

Exemplo 2: [2-(4-dimetilamino-fenil)-ciclopropil]-(3,4,5- trimetoxi-fenil)-metanona, racemato trans

Procedendo como no passo 2 do exemplo 1, mas a partir de 1 g de E-3-(4-dimetilamino-fenil)-1-(3,4,5-trimetoxi-fenil)-propenona, que pode ser obtida de acordo com J. Med. Chem. (1990), 33, 1948, obtém-se, após purificação por cromatografia flash em sílica gel (70-230 Mesh) eluindo com uma mistura de ciclo-hexano e de acetato de etilo (70-30 em volume), 650 mg de [2-(4-dimetilamino-fenil)-ciclopropil]-(3,4,5-trimetoxi-fenil)-metanona, racemato trans puro, sob a forma de um óleo cuja característica é a seguinte:

Espectro de RMN. 1H (300 MHz, (CD3)2SO, δ em ppm) : 1,51 (mt: 1H) ; 1,64 (mt: 1H); 2,47 (mt: 1H); 2,88 (s: 6H); 3,11 (mt: 1H) ; 3,76 (s: 3H) ; 3,86 (s: 6H) ; 6,69 (d largo, J = 9 Hz: 2H); 7,11 (d largo, J = 9 Hz: 2H)/ 7,34 (s: 2H).

Exemplo 3:_[2- (3-Hidroxi-4-metoxi-fenil) - biciclo[2.2.1]hept-4-enil]-(3,4,5-trimetoxi-fenil)-metanona, racemato trans

Passo 1: Num balão de 25 mL, de três tubuladuras, adiciona-se, sob atmosfera de árgon, 566 mg de ciclopentadieno, acabado de destilar, e 1 mL de diclorometano, depois, arrefece-se a 0 °C e adiciona-se 1,07 g de tetracloreto de estanho, sob a forma de penta-hidrato. Depois, adiciona-se, gota a gota a 0 °C, 1,38 g de E-3-(3-terc-butildimetilsililoxi-4-metoxi-fenil)-1-(3, 4,5-trimetoxi-fenil)-propenona, preparada no passo 1 do exemplo 1, em solução em 4 mL de diclorometano. Após 4 horas de agitação a 0 °C, deixa-se atingir novamente a temperatura ambiente e agita- 26 se durante 16 horas adicionais à temperatura ambiente. Após adição de 10 mL de água e de 5 mL de diclorometano, ajusta-se o pH a 8, por adição de uma solução saturada de bicarbonato de sódio. A fase orgânica é separada, depois, a fase aquosa é novamente extraída 2 vezes com 10 mL de diclorometano. As fases orgânicas reunidas são lavadas com água, secas sobre sulfato de sódio e concentradas sob pressão reduzida. O produto em bruto é purificado por cromatografia flash em silica gel (70-230 Mesh) eluindo com uma mistura de ciclo-hexano e de acetato de etilo (80-20 em volume). Obtém-se, assim, 700 mg de [2-(3-terc-butildimetilsililoxi-4-metoxi-fenil)-biciclo[2.2.1]hept-4-enil]-(3,4,5-trimetoxi-fenil)-metanona, racemato trans contendo cerca de 10% de racemato cis, sob a forma de um óleo amarelo utilizado tal e qual no passo seguinte.

Passo 2; Num balão de 25 mL, de três tubuladuras, uma solução de 700 mg de [2-(3-terc-butildimetilsililoxi-4-metoxi-fenil)-biciclo[2.2.1]hept-4-enil]-(3,4,5-trimetoxi-fenil) -metanona em 10 mL de THF é arrefecida a 0 °C. Adiciona-se, então, 1,49 mL de uma solução a 1 M de fluoreto de tetrabutilamónio em THF. Após uma hora de agitação a 0 °C, deixa-se atingir novamente a temperatura ambiente e agita-se 5 horas adicionais à temperatura ambiente. Em seguida, o meio reaccional é vertido em 50 mL de água, depois, extrai-se 3 vezes com 20 mL de acetato de etilo. As fases orgânicas reunidas são lavadas com água, secas sobre sulfato de magnésio e concentradas sob pressão reduzida. O produto em bruto é purificado por cromatografia flash em sílica gel (70-230 Mesh) eluindo com uma mistura de ciclo-hexano e de acetato de etilo (70-30 em volume). Obtém-se, assim, 270 mg de [2-(3-hidroxi-4-metoxi-fenil)-biciclo[2.2.1]hept-4-enil]-(3,4,5-trimetoxi-fenil)-metanona, 27 racemato trans contendo cerca de 5% de racemato cis, sob a forma de um pó creme cujas características são as seguintes:

ponto de fusão (Kofler) = 152 °C análise elementar: %C = 70,38; %H = 6,09.

RESULTADOS BIOLÓGICOS

Exemplo N° Tubulina: Inibição de polimerização ICso (μΜ) Células HeLa: Inibição de proliferação IC50 (μΜ) Células HDMEC: Inibição de proliferação IC50 (μΜ) Percentagem de separação de células HDMEC induzida pelo composto referido no exemplo, a uma concentração de 1 μΜ 1 1,0 < 0,0019 0,017-0,018 36-37 2 2,5 1,35/1,45 4 nd 3 4,5 0,52-1,06 nd nd nd: não determinado

Lisboa, 30 de Novembro de 2006 28

Claims

REIVINDICAÇÕES 1. Produto que responde à seguinte fórmula (I):

na qual: -A representa um hidrocarboneto cíclico saturado ou parcialmente insaturado, contendo de 3 a 14 átomos de carbono, eventualmente substituído; -X é seleccionado do grupo constituído por 0, -R é seleccionado do grupo constituído por H, halogéneo, CH3, CF3, C2H5, C3-C4 alquilo, -Ari representa um primeiro núcleo fenilo susbtituido com um substituinte ou um grupo de substituintes seleccionados de entre: (i) 1 a 4 radicais 0CH3, (ii) um radical metilenodioxilo, (iii) um radical etilenodioxilo, 1 (iv) 1 ou 2 radicais OCH3 e um radical metilenodioxilo, (v) 1 ou 2 radicais OCH3 e um radical etilenodioxilo. -Ar2 é seleccionado do grupo constituído por 3-hidroxi-4-metoxi-fenilo; 4-hidroxi-3-metoxi-fenilo; 3-hidroxi-4-amino-fenilo; 4-hidroxi-3-amino-fenilo; 3-hidroxi-4-(N,N-dimetilamino)-fenilo; 4-hidroxi-3-(N,N- dimetilamino)-fenilo.
2. Produto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por A ser um hidrocarboneto monocíclico ou bicíclico, contendo de 3 a 8 átomos de carbono.
3. Produto de acordo com a reivindicação 2, caracterizado por A ser um ciclopropilo.
4. Produto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por Ari estar substituído com um grupo de substituintes seleccionados de entre: (i) 2,5-dimetoxilo, (ii) 3,5-dimetoxilo, (iii) 2,3,4-trimetoxilo, (iv) 3,4,5-trimetoxilo, (v) 2,4,5-trimetoxilo, 2 (vi) 2,3,5-trimetoxilo (vii) 2,3,4,5-tetrametoxilo, (viii) 3,4-metilenodioxilo, (ix) 3,4-etilenodioxilo.
5. Produto de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado por estar sob a forma: 4) racémica, ou 5) enriquecida num estereoisómero, ou 6) enriquecida num enantiómero; e por estar, eventualmente, na forma de sal.
6. Composição farmacêutica compreendendo um produto de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, em combinação com um excipiente farmaceuticamente aceitável.
7. Utilização de um produto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, como agente que inibe a polimerização da tubulina in vitro.
8. Utilização de um produto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, para favorecer a desagregação de agregados de células provenientes de um tecido vascular in vitro. 3 Utilização de um produto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, para a preparação de um medicamento útil para tratar um estado patológico. qual o Utilização de acordo com a reivindicação 9, na estado patológico é o cancro. Lisboa, 30 de Novembro de 2006