PT1082338E - 17b-nitro-11b-arilesteróides e seus derivados com propriedades de agonista ou antagonista hormonal - Google Patents

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PT1082338E
PT1082338E PT99924208T PT99924208T PT1082338E PT 1082338 E PT1082338 E PT 1082338E PT 99924208 T PT99924208 T PT 99924208T PT 99924208 T PT99924208 T PT 99924208T PT 1082338 E PT1082338 E PT 1082338E
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Gary S Bartley
C Edgar Cook
Rupa S Shetty
David Yue-Wei Lee
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Description

ΕΡ 1 082 338 /PT
DESCRIÇÃO "17p-Nitro-lip-arilesteróides e seus derivados com propriedades de agonista ou antagonista hormonal"
ANTECEDENTES DO INVENTO
Campo do invento:
Este invento refere-se a uma nova classe de esteróides que se crê que se ligam ao receptor de progestina e que exibem uma actividade antiprogestacional potente. Estes compostos são úteis para tratamento de fibromas, de endometriose e de certos tumores, para provocar o amadurecimento cervical antes do parto, em terapia de hormonas de substituição e no controlo de fertilidade e reprodução.
Discussão dos antecedentes: A progesterona desempenha um papel principal na saúdo e funcionamento reprodutores. Os seus efeitos, por exemplo, no útero, mama, cérvix e unidade hipotálamo-hipofisária estão bem estabelecidos. Tem também actividades extra reprodutoras que estão menos bem estudadas, tais como efeitos sobre o cérebro, o sistema imunitário, o sistema endotelial vascular e no metabolismo de lípidos. Dado este vasto conjunto de efeitos, é evidente que compostos que mimetizam alguns dos efeitos da progesterona (agonistas), antagonizam estes efeitos (antagonistas) ou exibem efeitos mistos (agonistas parciais ou agonista/antagonista misto) podem ser úteis no tratamento de uma variedade de estados de doença e condições.
As hormonas esteróides exercem os seus efeitos, em parte, por se ligarem a receptores intracelulares. São conhecidos desde há muito compostos que se ligam aos receptores apropriados e são antagonistas ou agonistas parciais das hormonas estrogénicas e androgénicas, mas foi apenas em 1982 que foi anunciada a descoberta de compostos que se ligam ao receptor de progesterona e antagonizam os efeitos da progesterona. Desde então, têm sido noticiados vários destes compostos na literatura cientifica e de patentes e têm sido estudados os seus efeitos in vitro, em 2
ΕΡ 1 082 338 /PT animais e em humanos. Ainda que compostos tais como os estrogénios e certos inibidores de enzima possam prevenir os efeitos fisiológicos da progesterona endógena, nesta discussão "antiprogestina" está confinado àqueles compostos que se ligam ao receptor de progestina.
Está agora disponível informação indicando que as antiprogestinas seriam eficazes em várias condições médicas. Esta informação foi resumida num relatório do Institute of Medicine (Donaldson, Molly S.; Dorflinger, L.; Brown, Sarah S.; Benet, Leslie Z., Editors, Clinicai Applications of Mifepristone (RU 486) and Other Antiprogestins, Committee on Antiprogestins: Assessing the Science, Institute of Medicine, National Academy Press, 1993). Considerando o papel fulcral que a progesterona desempenha na reprodução, não é surpreendente que as antiprogestinas possam desempenhar um papel no controlo da fertilidade, incluído contracepção (de longo prazo e de emergência ou pós-coito), indução da menstruação e interrupção médica da gravidez, mas existem muitas outras utilização potenciais que têm sido suportadas por pequenos estudos clínicos ou pré-clínicos.
Entre estas estão as seguintes: 1. Trabalho de parto e parto - as antiprogestinas podem ser utilizadas para amadurecimento cervical antes da indução do trabalho de parto tal como no final da gravidez ou quando o trabalho de parto tem de ser induzido devido a morte fetal. Podem também ser utilizadas para ajudar a induzir o trabalho de parto em gravidezes dentro do prazo ou fora do prazo. 2. Tratamento de leiomiomas uterinos (fibromas) - estes tumores não malignos podem afectar até 20% das mulheres com mais de 30 anos de idade e são uma das razões mais comuns para cirurgia em mulheres durante os seus anos reprodutivos. A histerectomia, o tratamento comum para sintomas persistentes, resulta obviamente em esterilidade. 3. Tratamento de endometriose - esta condição comum (5 a 15% de incidência, muito superior em mulheres estéreis) e frequentemente dolorosa é agora tratada com drogas tais como danazol ou análogos de hormona de 3
ΕΡ 1 082 338 /PT libertação de gonadotrofina que têm efeitos secundários, ou tem que ser tratada cirurgicamente. 4. Terapia com hormonas de substituição, onde podem ser administradas para interromper ou reduzir a actividade de progestinas. 5. Cancros, particularmente cancros da mama - a presença de receptores de progestina em muitos cancros da mama tem sugerido a utilização de antiprogestinas no tratamento de cancro metastático ou na prevenção da recorrência ou desenvolvimento inicial do cancro. 6. Outros tumores tais como meningiomas - estes tumores da membrana cerebral, ainda que não malignos, resultam na morte do paciente e faltam tratamentos não cirúrgicos. 7. Contracepção masculina - as antiprogestinas podem interferir com a viabilidade do esperma, ainda que seja controverso se esta é ou não um efeito ant iprogestacional, na medida em que esta pode estar relacionada com a actividade antiglucocorticóide destes compostos. 8. Efeitos antiestrogénicos - pelo menos algumas antiprogestinas opõem-se à acção de estrogénios em certos testes, mas aparentemente através de um mecanismo que não envolve receptores de hormona clássicos. Isto abre uma variedade de possibilidades para a sua utilização médica. 9. Efeitos antiglucocorticóides - este é um efeito secundário comum das antiprogestinas, que pode ser útil em alguns casos, tal como no tratamento da sindrome de Cushing, e pode desempenhar um papel em desordens imunitárias, por exemplo. Noutros casos, é desejável minimizar estes efeitos.
Os efeitos e utilizações de agonistas de progesterona têm sido bem documentados. Adicionalmente, foi recentemente mostrado que certos compostos estruturalmente relacionados com as antiprogestinas conhecidas têm uma forte actividade agonista em certos sistemas biológicos (e.g., os efeitos 4
ΕΡ 1 082 338 /PT clássicos da progestina no útero do coelho imaturo iniciado com estrogénio; cf. C.E. Cook et al., Life Sciences, 52, 155-162 (1993)). Estes compostos são agonistas parciais em sistemas de receptor derivados de células humanas, onde se ligam a um sitio distinto de ambos os sítios de progestina e antiprogestina (Wagner et al., Proc. Natl. Acad. Sei., 93, 8739-8744 (1996)). Assim, a classe geral de antiprogestinas pode ter subclasses, que podem variar nos seus perfis clínicos.
As primeiras antiprogestinas, para além de terem um substituinte Ιΐβ-arilo, estavam substituídas com um grupo 17p-hidroxilo e com vários substituintes 17a. (Ver por exemplo, Teutsch, Jean G.; Costerousse, Germain; Philibert, Daniel, e Deraedt, Roger, "Novel esteroids" Patente U.S. N° 4386085, 1983; Philibert, Daniel; Teutsch, Jean G.; Costerousse, Germain, e Deraedt, Roger, "3-Keto-19-nor-A-4,9-esteroids", Patente U.S. N° 4477445, 1983; Teutsch, Jean G.; Pantin, Germain; Costerousse, Saint-Maurice; Daniel Philibert; La Varenne Saint Hilaire; Roger Deraedt, inventores. "Steroid derivatives" Roussel Uclaf, cessionário. Patente U.S. N° 4447424, 1984; Cook, C. Edgar; Tallent, C. Ray; Reel, Jerry R., e Wani, Mansukh C. "17a-(Substituted-methyl)-17β-hydroxy/esterified hydroxy esteroids and pharmaceutical compositions containing them", Patente U.S. N° 4774236 (1988) e 4 861 763 (1989)). Constatou-se depois que um grupo 17β-3θθΔί1,17a-aciloxi na presença de Ιΐβ-arilo podia também gerar compostos com efeitos antiprogestacionais (Cook, C. Edgar; Lee, Y.-W.; Reel, Jerry R.; Wani, Mansukh C., Rector, Douglas, "11β-Substituted Progesterone Analogs", Patentes U.S. Nos 4954490 (1990) e 5073548 (1991)), e foram também realizadas várias permutações destas constatações. Contudo, é noticiado que a introdução de um grupo 16a-etilo ou de um substituinte hidrogénio na posição 17a na série de compostos 17β-3θί1ο conduz a actividade de agonista ou agonista parcial (C.E. Cook et al., Life Sciences, 52, 155-162 (1993)). O Pedido de Patente U.S. N° 4634695 revela derivados de 17-oxima,11β-aril-estrano com actividade de antiprogestina.
Geralmente, a actividade antiprogestacional tem sido associada à presença de um substituinte Ιΐβ-arilo no núcleo esteróide, em conjunto com uma porção Δ4'9-3-cetona ou Δ4-3- 5
ΕΡ 1 082 338 /PT cetona. No entanto, tem sido mostrado que substituintes no anel D do esteróide podem ter uma influência acentuada no perfil biológico destes compostos (ver acima). Assim, mudanças no anel D do esteróide resultam numa ampla variedade de efeitos na actividade biológica.
Pode-se observar que a posição 17β das antiprogestinas actuais tem sido caracterizada por substituição com um carbono ou um átomo de oxigénio. Não têm existido quaisquer relatos do efeito de um substituinte nitro ou relacionado com nitro tal como uma espironitrona na posição 17β em esteróides portadores de um substituinte Ιΐβ-arilo. Este invento proporciona um grupo de novos 17β-nitro-esteróides, que são caracterizados por uma substituição 11β, particularmente uma substituição Ιΐβ-arilo. Têm sido noticiados muito poucos 17β-nitro-esteróides e nenhum com uma substituição 11β quer na literatura geral quer em patentes. Cf. por exemplo, Patchett, Arthur A.; Metuchen, Glen E.; Arth, Cranford, e Hoffman, Francês G., "Alkanoylthio and pyrazolo androstane derivatives", Patente U.S. N° 3094521, 1963. Esta patente descreve uma síntese de 17-nitro-esteróides e a sua reacção de Michael com acrilato de metilo, mas não foi reportada qualquer actividade biológica associada com os compostos de nitro.
Adicionalmente, este invento proporciona um grupo de novos esteróides de nitrona 17,17-espirocíclicos. Ainda que sejam conhecidos alguns esteróides de nitrona 17,17-espirocíclicos (cf. Keana, John F.W.; Tamura, Toshinari; McMillen, Debra A., e Jost, Patrícia C., "Synthesis and characterization of a novel cholesterol nitroxide spin label. Application to the molecular organization of human high-density lipoprotein." J. Am. Chem. Soc. 103: 4904-4912 (1981)), estes foram utilizados para desenvolver marcadores de spin e não pelas suas propriedades biológicas. Não têm sido noticiados estes compostos com substituintes Ιΐβ-arilo.
Apesar da promessa clínica das antiprogestinas, à data de 1 de Maio de 1998, não existiam quaisquer drogas antiprogestina comercializadas nos E.U.A. nem em muitos outros países. Apenas uma droga antiprogestina está aprovada e disponível para utilização clínica em qualquer local do Mundo e essa droga, a mifepristona, é principalmente utilizada para interrupção médica da gravidez. Vários 6
ΕΡ 1 082 338 /PT factores são a causa desta situação, mas existe certamente uma necessidade de novas drogas antiprogestacionais que possam ser utilizadas para as condições anteriormente descritas. Deste modo, subsiste também uma necessidade de compostos antiprogestina que exibam especificidade mais elevada. É deste modo o propósito do presente invento proporcionar novos e potentes antagonistas de progestina (antiprogestinas) e agonistas de progestina mistos ou parciais, e proporcionar métodos para a sua utilização médica em mamíferos, incluindo humanos.
SUMÁRIO DO INVENTO
Este invento proporciona um grupo de novos 17p-nitro-esteróides, que são caracterizados por uma substituição 11β, particularmente uma substituição Ιΐβ-arilo. Adicionalmente, este invento proporciona um grupo de novos esteróides de nitrona 17,17-espirocíclicos. Deste modo, o presente invento dirige-se a compostos que têm potencial para redução de efeitos secundários e, adicionalmente, exibem uma ligação forte ao receptor de progestina e têm actividade progestacional ou antiprogestacional potente.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
Uma apreciação mais completa do invento e de muitas das suas vantagens associadas será prontamente obtida à medida que as mesmas se tornarem melhor compreendidas por referência à descrição detalhada seguinte quando considerada em associação com os desenhos em anexo, onde: a Figura 1 ilustra a preparação de compostos 17β-ηί^ο-substituídos; a Figura 2 ilustra a preparação de compostos de nitrona espirocíclicos Ci7; e a Figura 3 ilustra a preparação de compostos de nitroalcinilo. 7
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DESCRIÇÃO DETALHADA DAS CONCRETIZAÇÕES PREFERIDAS
Compostos esteróides de acordo com o presente invento podem ter a estrutura I,
2 7 R7 (I)
Rw onde R1 é (R2R3N (O) r) —, onde r é 0 ou 1 e R2 e R3 são cada um independentemente H, Ci-6 alquilo, C3^8 cicloalquilo, C2-6 alcenilo ou C2-6 alcinilo, qualquer dos quais pode estar opcionalmente substituído; ou
R 1 é
CH2n Γ N CH2y onde q é 0 ou 1, Y é -(CH2)m- onde m é um inteiro de 0 a 5, ou Y é - (CH2) n-Z-(CH2) P-, onde n é um inteiro de 0 a 2, p é um inteiro de 0 a 2, e Z é um heteroátomo (opcionalmente substituído); e onde os grupos CH2 podem estar opcionalmente substituídos; ou r1 é N-imidazolil-, N-pirrolil-, halo-, HO-, CF3S020-, C1-6 alquil-0-, Ci_6 alquil-S-, Ci_6 alquil-S (O)-, Ci_6 alquil-S (02)-, Ci_6 alquil-CO-, Ci_6 alquil-CH (OH)-, NC-, HCC-, CgHsCC-, 2'-furil-, 3'-furil-, 2 '-tiofenil-, 3 '-tiofenil-, 2'-piridil-, 3'-piridil-, 4'-piridil-, 2'-tiazolil-, 2 '-N-metilimidazolil-, 5'-pirimidinil-, C6H5-, H2C=CH-, Ci^6 alquilo ou MeC(=CH2)-; e r12 é H ou halo; ou 8
ΕΡ 1 082 338 /PT R1 e R12 combinam-se para formar um anel
R
I N- < w· onde W é CH2, CH, NH, N, 0 ou S, e R4 é H ou C1-6 alquilo; e X é 0 ou NOR5, onde R5 é H ou C1-6 alquilo, C3-8 cicloalquilo, C2-6 alcenilo, C2-6 alcinilo, C6-12 arilo ou heteroarilo, qualquer dos quais pode estar opcionalmente substituído; ou X é (Η, Η), (H, OH), (H, OSi (C1-6 alquilo)3) OU (H, OCOR5) , onde R5 é Ci_6 alquilo, C3-8 cicloalquilo, C2-6 alcenilo, C2-6 alcinilo, C6-12 arilo, aralquilo, aralcenilo, aralcinilo, heteroarilo, heteroaralquilo, heteroaralcenilo ou heteroaralcinilo, qualquer dos quais pode estar opcionalmente substituído; ou X e
CHoO ch2o- onde Y é -(CH2)m- onde m é um inteiro de 0 a 3, ou Y é - (CH2) n-Z-(CH2) P- onde n é um inteiro de 0 a 2, pé um inteiro de 0 a 2 e Z é um heteroátomo (opcionalmente substituído) ou Z é um átomo de carbono substituído com um ou dois grupos C1-6 alquilo; R6 é H, Ci—6 alquilo ou halogéneo; R7 é H, C1-6 alquilo, C2-6 alcenilo ou C2-6 alcinilo, C3-8 cicloalquilo, C6-12 arilo, aralquilo, aralcenilo, aralcinilo, heteroarilo, heteroaralquilo, heteroaralcenilo ou heteroaralcinilo, qualquer dos quais pode estar opcionalmente substituído, e seus sais farmaceuticamente aceitáveis. 9
ΕΡ 1 082 338 /PT
Compostos esteróides de acordo com o presente invento podem compreender uma unidade de nitrona cíclica, da estrutura II,
R (Π) onde R1 é (R2R3N (0) r) - , onde r é 0 ou 1 e R2 e R3 são cada um independentemente H, Ci_6 alquilo, C3-8 cicloalquilo, C2-6 alcenilo ou C2_6 alcinilo, qualquer dos quais pode estar opcionalmente substituído; ou
onde q é 0 ou 1, Y é -(CH2)m- onde m é um inteiro de 0 a 5, ou Y é - (CH2) n-Z-(CH2) P-, onde n é um inteiro de 0 a 2, p é um inteiro de 0 a 2, e Z é um heteroátomo (opcionalmente substituído) e onde os grupos CH2 podem estar opcionalmente substituídos; ou R1 é N-imidazolil-, N-pirrolil-, halo-, HO-, CF3S020-, Ci_6 alquil-0-, Ci_6 alquil-S-, C1-6 alquil-S (0)-, C1-6 alquil-S (02)-, Ci_6 alquil-CO-, Ci_6 alquil-CH (OH)-, NC-, HCC-, CgHsCC-, 2'-furil-, 3'-furil-, 2'-tiofenil-, 3’-tiofenil-, 2'-piridil-, 3'-piridil-, 4'-piridil-, 2'-tiazolil-, 2 '-N-metilimidazolil-, 5'-pirimidinil-, C6H5-, H2C=CH-, C1-6 alquilo ou MeC(=CH2)-; e r12 é H ou halo; ou 10
ΕΡ 1 082 338 /PT R1 e R12 combinam-se para formar um anel R4 i onde W é CH2, CH, NH, N, 0 ou S, e R4 é H ou C1-6 alquilo; e X é 0 ou NOR5, onde R5 é H ou Cx_6 alquilo, C3-8 cicloalquilo, C2-6 alcenilo, C2-6 alcinilo, C6-12 arilo ou heteroarilo, qualquer dos quais pode estar opcionalmente substituído; ou X é (Η, Η) , (H, OH), (H, OSi(Ci_6 alquilo) 3) ou (H, OCOR5) , onde R5 é Ci_6 alquilo, C3_8 cicloalquilo, C2-6 alcenilo, C2-6 alcinilo, C6-12 arilo, aralquilo, aralcenilo, aralcinilo, heteroarilo, heteroaralquilo, heteroaralcenilo ou heteroaralcinilo, qualquer dos quais pode estar opcionalmente substituído; ou X é CHjO— < ch2o— onde Y é -(CH2)m- onde m é um inteiro de 0 a 3, ou Y é - (CH2) n~Z-(CH2) P- onde n é um inteiro de 0 a 2, pé um inteiro de 0 a 2 e Z é um heteroátomo (opcionalmente substituído) ou Z é um átomo de carbono substituído com um ou dois qrupos C1-6 alquilo; R6 é H, Ci_6 alquilo ou haloqéneo; e R8 é H, C1-6 alquilo, C2-6 alcenilo ou C2-6 alcinilo, C3-8 cicloalquilo, C6-12 arilo, aralquilo, aralcenilo, aralcinilo, heteroarilo, heteroaralquilo, heteroaralcenilo ou heteroaralcinilo, qualquer dos quais pode estar opcionalmente substituído, e seus sais farmaceuticamente aceitáveis.
Os compostos acima identificados de fórmula I e II incluem especificamente compostos que estão substituídos no 11
ΕΡ 1 082 338 /PT anel A na posição 3 com dois átomos de hidrogénio. Crê-se que estes compostos são submetidos a oxidação in vivo para dar o composto de carbonilo correspondente.
Dentro do âmbito do presente invento, o termo heteroátomo significa oxigénio, azoto, enxofre, silicio ou boro. Halogéneo significa flúor, cloro, bromo ou iodo e halo significa fluoro, cloro, bromo ou iodo. Aralquilo, aralcenilo ou aralcinilo significam um grupo C1-C4 alquilo, C2-C4 alcenilo ou C2-C4 alcinilo portador de um substituinte arilo. Alquilo inferior significa um grupo C1-C4 alquilo. Heteroarilo significa uma unidade de 5 a 12 átomos não hidrogénio consistindo de uma ou mais estruturas cíclicas que podem estar fundidas ou ligadas em conjunto, que contêm 1 a 5 heteroátomos e que são geralmente aceites pelos peritos na especialidade como possuindo um carácter electrónico aromático.
Heteroaralquilo, heteroaralcenilo ou heteroaralcinilo significam um grupo Ci~C4 alquilo, C2-C4 alcenilo ou C2-C4 alcinilo portador de um substituinte heteroarilo. "Opcionalmente substituído" significa não substituído ou substituído com um ou mais heteroátomos e/ou halogéneos e/ou grupos alquilo de 1 a 4 átomos de carbono e/ou grupos alcenilo e/ou alcinilo de 2 a 4 átomos de carbono e/ou grupos cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono e/ou grupos arilo de 6 a 12 átomos de carbono e/ou grupos heteroarilo, e em que o grupo alquilo, alcenilo, alcinilo, cicloalquilo, arilo ou heteroarilo pode estar opcionalmente substituído com um ou mais heteroátomos e/ou halogéneos. A substituição pode ocorrer directamente em grupos CH2 de heterociclos de amina cíclica. Onde a sua valência o permite, os heteroátomos podem estar substituídos quer dentro da cadeia de carbono quer por ligação a esta por ligações simples ou dupla. Por exemplo, -CH2CH2C (=0) H, -CH2C (=0) CH3, -CH2CH2OCH3, -CH2CH2CH2OH, CH3CH2CH20-, -CH2CH2C (=0) NH2, CH3CH2C (=0) NH-, CH2COOCH3, CH3CH2COO- e CF3CC- caem todos dentro desta definição.
Em todos os casos onde as considerações de valência e de estereoquímica o permitem, os grupos alquilo, alcenilo, alcinilo e cicloalquilo podem conter ligações duplas ou triplas adicionais e/ou cadeias ramificadas. 12
ΕΡ 1 082 338 /PT Ο grupo R6 em Cõ conforme aparece nas estruturas I e II pode estar em qualquer das posições α ou β. Numa concretização preferida, o grupo R6 está localizado na posição a.
Noutra concretização, o grupo β-arilo Cu pode estar substituído por um grupo piridina substituído com grupos R1 e R12 conforme anteriormente descrito.
Numa concretização preferida, o composto de estrutura I está substituído, onde R2-Ph é 4-aminofenilo, 4-(N-metilamino)fenilo, 4-(N,N-dimetilamino)fenilo, 4-(N-piperidino)fenilo, 4-(N-pirrolidino)fenilo, 4-(N-morfolino)fenilo, 1- metilindol-5-ilo ou l-metil-2,3-di-hidroindol-5-ilo; X é O, NOH ou NOCH3; R6 é H, CH3, F ou Cl; R7 é H, metilo, etinilo, 1-propinilo, 3-propinilo, 3-hidroxipropilo, 3-hidroxi-l-propenilo (E- ou Z-) , 3,3,3-trifluropropin-l-ilo, 3-hidroxipropin-l-ilo, (CH2) 2COOCH3, (CH2) 2COOC2H5, (CH2)2COCH3, CC-C6H5 ou ch2c6h5.
Noutra concretização preferida, o esteróide de estrutura II está substituído como se segue: R1-Ph é 4-aminofenilo, 4-(N-metilamino)fenilo, 4-(N,N-dimetilamino)fenilo, 4-(N-piperidino)fenilo, 4-(N- pirrolidino)fenilo, 4-(N-morfolino)fenilo, 1- metilindol-5-ilo ou l-metil-2,3-di-hidroindol-5-ilo); X é 0, NOH ou N0CH3; R6 é H, ch3 , F ou Cl; R8 é H, ch3 ou CH2C6H5.
Dentro do contexto do presente invento, os grupos -CH2-individuais que constituem R1 e, mais especificamente, os 13
ΕΡ 1 082 338 /PT grupos -CH2- dos grupos (CH2)mí (CH2) n e (CH2) p podem estar substituídos conforme anteriormente descrito.
Exemplos específicos não limitantes incluem os compostos: 11β-(4-acetilfenil)-17a-(1-propinil)-17β- nitroestra-4,9-dien-3-ona; 11β-(4-(N,N-dimetilamino)fenil)-17a-(1-propinil)-17β-ηίύΓ0Θ3ύ^-4,9-dien-3-ona; 3',4'-di- hidro-ΙΙβ-(4-(N,N-dimetilamino)fenil)-5'-meti1-1'-oxo-espiro[estra-4,9-άίθη-17β,2'(2 Ή)-pirrole]-3-ona; 3',4'-di- hidro-ΙΙβ-(4-(N,N-dimetilamino)fenil)-1'-oxo-espiro[estra-4, 9^ίθη-17β, 2 ' (2 Ή) -pirrole] -3-ona; 11β- (4-acetilf enil) - 17a-(Ε-3-hidroxi-l-propenil)-17β-ηί^θ63ΐ^-4,9-dien-3-ona; 11β-(4-acetilfenil)-17a-(3-hidroxipropil)-17β-ηί^οθ3ύ^-4,9-dien-3-ona; 11β-(4-(N,N-dimetilamino)fenil)-17α-(E-3- hidroxi-l-propenil)-17β-ηί^θθ3ΐ^-4,9-dien-3-ona; 17β- nitro-ΙΙβ-(4-(N-piperidino)fenil)-17a-propinil-estra-4,9-dien-3-ona; 3',4'-di-hidro-11β-(4-(N-piperidino)fenil)-5'-meti1-1'-oxo-espiro[estra-4,9-άίθηο-17β,2'(2'H)-pirrole]-3-ona e 11β-(4-(N,N-dimetilamino)fenil)-17a-(3-hidroxipropil)-17β-ηίίηοθ3ΐ^-4, 9-dien-3-ona.
Os compostos do presente invento que são portadores de um grupo amino no grupo fenilo Cu podem deste modo compreender um sal formado com a amina. Sais farmaceuticamente aceitáveis adequados são conhecidos dos vulgares peritos na especialidade e compreendem carboxilatos, sulfatos, fosfatos e halogenetos.
Os esteróides com actividade progestacional, antiprogestacional e/ou antiglucocorticóide têm utilização no controlo da fertilidade em humanos e mamíferos não humanos tais como primatas, animais domésticos de estimação e animais de criação, e no tratamento de condições médicas em animais ou humanos nas quais estes actividades são benéficas. Assim, podem ser úteis no tratamento de condições tais como fibroma, síndrome de Cushing, glaucoma, endometriose, amadurecimento cervical antes do parto, terapia de hormonas de substituição, síndrome pré-menstrual 14
ΕΡ 1 082 338 /PT e cancro, para além da sua utilização no controlo de fertilidade e reprodução.
Os compostos do presente invento podem ser administrados por vários métodos. Assim, os produtos do invento que são activos pela via oral podem ser administrados em soluções, suspensões, emulsões, comprimidos, incluindo comprimidos sublinguais e intrabucais, cápsulas de gelatina mole, incluindo soluções utilizadas em cápsulas de gelatina mole, suspensões aquosas ou oleosas, emulsões, pílulas, rebuçados, trociscos, comprimidos, xaropes ou elixires e outros. Os produtos do invento activos por administração parentérica podem ser administrados por injecção depot, implantes incluindo Silastic™ e implantes biodegradáveis, injecções intramusculares e intravenosas.
As composições podem ser preparadas de acordo com qualquer método conhecido na especialidade para a fabricação de composições farmacêuticas e estas composições podem conter um ou mais agentes seleccionados de entre o grupo consistindo de agentes edulcorantes, agentes aromatizantes, agentes corantes e agentes conservantes. São aceitáveis comprimidos contendo o ingrediente activo em mistura com excipientes farmaceuticamente aceitáveis não tóxicos que são adequados para fabricação de comprimidos. Estes excipientes podem ser, por exemplo, diluentes inertes, tais como carbonato de cálcio, carbonato de sódio, lactose, fosfato de cálcio ou fosfato de sódio; agentes de granulação e de desintegração, tais como amido de milho, ou ácido algínico; agentes aglutinantes, tais como amido, gelatina ou goma-arábica; e agentes lubrificantes, tais como estearato de magnésio, ácido esteárico ou talco. Os comprimidos podem ser não revestidos ou podem ser revestidos por técnicas conhecidas para retardar a desintegração e a adsorção no tracto gastrintestinal e desse modo proporcionar uma acção retardada por um período mais longo. Por exemplo, pode-se utilizar um material retardador tal como monoestearato de glicerilo ou diestearato de glicerilo sozinho ou com uma cera.
As formulações para utilização oral podem também ser apresentadas como cápsulas de gelatina dura onde o ingrediente activo está misturado com um diluente sólido 15
ΕΡ 1 082 338 /PT inerte, por exemplo carbonato de cálcio, fosfato de cálcio ou caulino, ou como cápsulas de gelatina mole onde o ingrediente activo está misturado com água ou com um meio oleoso, tal como óleo de amendoim, parafina liquida ou azeite.
As suspensões aquosas do invento contêm os materiais activos em mistura com excipientes adequados para a fabricação de suspensões aquosas. Tais excipientes incluem um agente de suspensão, tal como carboximetilcelulose sódica, metilcelulose, hidroxipropiletilcelulose, alginato de sódio, polivinilpirrolidona, goma adragante e goma-arábica, e agentes dispersantes ou molhantes tais como um fosfatideo de ocorrência natural (e.g., lecitina), um produto de condensação de um óxido de alquileno com um ácido gordo (e.g., poli(oxietileno-estearato) , um produto de condensação de óxido de etileno com um álcool alifático de cadeia longa (e.g., heptadecaetileno-oxicetanol) , um produto de condensação de óxido de etileno com um éster parcial derivado de um ácido gordo e um hexitol (e.g., polioxietileno-mono-oleato de sorbitol), ou um produto de condensação de óxido de etileno com um éster parcial derivado de um ácido gordo e um anidrido de hexitol (e.g., polioxietileno-mono-oleato de sorbitano). A suspensão aquosa pode também conter um ou mais conservantes tais como p-hidroxibenzoato de etilo ou n-propilo, um ou mais agentes corantes, um ou mais agentes aromatizantes e um ou mais agentes edulcorantes, tais como sacarose, aspartame ou sacarina. As formulações oftálmicas, como é conhecido na especialidade, serão ajustadas quanto à pressão osmótica.
As suspensões oleosas podem ser formuladas por suspensão do ingrediente activo num óleo vegetal, tal como óleo de amendoim, azeite, óleo de sésamo ou óleo de coco, ou num óleo mineral tal como parafina liquida. As suspensões em óleo podem conter um agente espessante, tal como cera de abelha, parafina dura ou álcool cetilico. Podem-se adicionar agentes edulcorantes para proporcionar uma preparação oral de sabor agradável. Estas composições podem ser conservadas pela adição de um antioxidante tal como ácido ascórbico.
Os pós e grânulos dispersáveis do invento, adequados para preparação de uma suspensão aquosa pela adição de água, podem ser formulados a partir dos ingredientes activos em 16
ΕΡ 1 082 338 /PT mistura com um agente dispersante, de suspensão e/ou molhante, e um ou mais conservantes. Agentes dispersantes ou molhantes e agentes de suspensão adequados são exemplificados pelos anteriormente revelados. Podem também estar presentes excipientes adicionais, por exemplo agentes edulcorantes, aromatizantes e corantes. A composição farmacêutica do invento pode também estar na forma de emulsões de óleo em água. A fase oleosa pode ser um óleo vegetal, tal como azeite ou óleo de amendoim, um óleo mineral, tal como parafina liquida, ou uma mistura destes. Agentes emulsionantes adequados incluem gomas de ocorrência natural, tais como goma-arábica e goma adragante, fosfatídeos de ocorrência natural, tais como lecitina de soja, ésteres ou ésteres parciais derivados de ácidos gordos e de anidridos de hexitol, tais como monooleato de sorbitano, e produtos de condensação destes ésteres parciais com óxido de etileno, tais como polioxietileno-monooleato de sorbitano. A emulsão pode também conter agentes edulcorantes e aromatizantes.
Os xaropes e elixires podem ser formulados com agentes edulcorantes, tais como glicerol, sorbitol ou sacarose. Estas formulações podem também conter um demulcente, um conservante, um aromatizante ou um agente corante.
As composições farmacêuticas do invento podem estar na forma de uma preparação injectável estéril, tal como uma suspensão injectável estéril, aquosa ou oleaginosa. Esta suspensão pode ser formulada de acordo com a especialidade conhecida utilizando os agentes dispersantes ou molhantes e agentes de suspensão que foram mencionados anteriormente. A preparação injectável estéril pode também ser uma solução ou suspensão injectável estéril num diluente ou solvente parentericamente aceitável não tóxico, tal como uma solução 1,3-butanodiol. Entre os veículos e solventes aceitáveis que podem ser usados estão a água e solução de Ringer, um cloreto de sódio isotónico. Adicionalmente, podem-se utilizar convencionalmente óleos essenciais esterilizados como um solvente ou meio de suspensão. Para este propósito pode-se utilizar qualquer óleo essencial suave incluindo mono- ou diglicéridos sintéticos. Adicionalmente, ácidos gordos tais como ácido oleico podem do mesmo modo ser utilizados na preparação de injectáveis. A esterilização 17
ΕΡ 1 082 338 /PT pode ser realizada por métodos convencionais conhecidos dos vulgares peritos na especialidade tais como por filtração asséptica, irradiação ou esterilização terminal (e.g. em autoclave).
As formulações aquosas (i.e. emulsões de óleo em água, xaropes, elixires e preparações injectáveis) podem ser formuladas para conseguir o pH de estabilidade óptimo. A determinação do pH óptimo pode ser realizada por métodos convencionais conhecidos dos vulgares peritos na especialidade. Podem-se também utilizar tampões adequados para manter o pH da formulação.
Os compostos deste invento podem também ser administrados na forma de supositórios para administração rectal da droga. Estas composições podem ser preparadas por mistura da droga com um excipiente não irritante adequado que é sólido às temperaturas usuais mas liquido às temperaturas rectais e deste modo derreterá no recto para libertar a droga. Exemplos não limitantes destes materiais são manteiga de cacau e polietilenoglicóis.
Eles podem também ser administrados pelas vias intranasal, intraocular, intravaginal e intra-rectal incluindo formulações de supositórios, insuflação, pós e aerossol.
Os produtos do invento que são preferivelmente administrados pela via tópica podem ser administrados como batons aplicadores, soluções, suspensões, emulsões, géis, cremes, pomadas, pastas, geleias, pinturas, pós e aerossóis.
Os produtos com actividade antiglucocorticóide são de valor particular em condições patológicas caracterizadas por glucocorticóide endógeno em excesso tais como sindrome de Cushing, hirsutismo e, em particular, quando associadas com a sindrome adrenogenital, condições oculares associadas a excesso de glucocorticóide tais como glaucoma, sintomas de stress associados com secreção de glucocorticóide em excesso e outros.
Os produtos com actividade progestacional são de valor particular como agentes progestacionais, inibidores da ovulação, reguladores da menstruação, agentes 18
ΕΡ 1 082 338 /PT contraceptivos, agentes para sincronização dos períodos de fertilidade no gado, endometriose e outros. Quando utilizados para efeitos contraceptivos, podem ser convenientemente misturados com agentes estrogénicos, tais como por exemplo etinilestradiol ou ésteres de estradiol.
Os produtos com actividade antiprogestacional são caracterizados por antagonizarem os efeitos da progesterona. Como tal, são de valor particular no controlo de irregularidades hormonais no ciclo menstrual e para sincronização dos períodos de fertilidade no gado.
Os compostos do invento podem ser utilizados para controlo de fertilidade durante todo o ciclo reprodutivo. São de valor particular como contraceptivos pós-coito, para tornar o útero hostil à implantação, e como agentes contraceptivos de "uma vez por mês". Podem ser utilizados em conjunto com prostaglandinas, oxitócicos, estrogénios e outros.
Uma utilidade importante adicional para os produtos do invento reside na sua capacidade para retardar o crescimento de cancros dependentes de hormonas. Estes cancros incluem cancros de rim, mama, endométrio, ovário e próstata que são caracterizados por possuírem receptores de progesterona e pode-se esperar que respondam aos produtos deste invento. Outras utilidades de agentes antiprogestacionais incluem tratamento da doença fibrocística da mama. Certos cancros e, em particular, melanomas podem responder favoravelmente à terapia corticóide/anticorticóide.
Os compostos de acordo com o presente invento podem ser administrados a qualquer mamífero de sangue quente tal como humanos, animais domésticos de estimação e animais de criação. Os animais domésticos de estimação incluem cães, gatos, etc.. Os animais de criação incluem vacas, cavalos, porcos, ovelhas, cabras, etc.. A quantidade de ingrediente activo que pode ser combinada com um material transportador para produzir uma forma de dosagem individual variará dependendo da doença tratada, da espécie de mamífero e do modo particular de administração. Uma quantidade terapeuticamente eficaz pode ser determinada por experimentação de rotina e por analogia 19
ΕΡ 1 082 338 /PT a partir das quantidades utilizadas para tratar os mesmos estados de doença com compostos esteróides análogos. Por exemplo, uma dose unitária do esteróide pode conter preferivelmente entre 0,1 miligrama e 1 grama do ingrediente activo. Uma dose unitária mais preferida está entre 0,001 e 0,5 gramas. Para o tratamento especifico de endometriose ou de fibromas pode-se administrar uma quantidade de 0,01 a 10 mg/kg de peso corporal, preferivelmente de 0,1 a 3 mg/kg. Podem-se utilizar dosagens similares para os outros fins terapêuticos destes compostos. Vulgarmente, os compostos podem ser administrados diariamente de 1 a 4 vezes por dia, preferivelmente 1 a 2 vezes por dia, mas para utilizações, por exemplo, em terapia de hormonas de substituição, podem ser administrados num regime ciclofásico. Em qualquer caso, a frequência e o momento da dosagem dependerão de factores tais como a semivida do composto especifico no corpo, a formulação de dosagem e a via de administração. Será entendido, porém, que o nivel de dose especifico para qualquer paciente particular dependerá de vários factores incluindo a actividade do composto especifico usado; a idade, peso corporal, saúde geral, sexo e dieta do indivíduo que está a ser tratado; o momento e a via de administração; a taxa de excreção; outras drogas que foram anteriormente administradas; e a gravidade da doença particular que está a ser submetida a terapia, como é bem compreendido pelos peritos na especialidade.
Estes compostos são úteis no tratamento de endometriose, leiomiomas uterinos (fibromas) e certos cancros e tumores, em terapia de hormonas de substituição bem como no controlo de vários passos em reprodução e fertilidade, tais como emcontracepção. Uma descrição mais detalhada das utilizações potenciais destes compostos é apresentada em Donaldson, Molly S.; Dorflinger, L.; Brown, Sarah S.; Benet, Leslie Z., Editors, Clinicai Applications of Mifepristone (RU486) and Other Antiprogestines, Committee on Antiprogestines: Assessing the Science, Institute of Medicine, National Academy Press, 1993.
Os compostos do presente invento podem ser preparados por métodos convencionais conhecidos dos vulgares peritos na especialidade. Como exemplo, é proporcionado o procedimento de síntese geral seguinte. 20
ΕΡ 1 082 338 /PT
Os compostos deste invento podem ser preparados de acordo com os procedimentos delineados nos Esquemas A-C (Figuras 1-3), começando com 3,3-[1,2-etanodi-ilbis(oxi)]-estra-5(10),9(11)-dieno-17-ona (A—1). Este composto é convertido no 5(10)α-epóxido A—2 por vários métodos, incluindo preferivelmente tratamento de A-l com H2O2, hexafluoroacetona e Na2HPC>4 em CH2CI2, e depois no composto de Ιΐβ-arilo A-3 por tratamento com um reagente de Grignard de arilo misturado com um sal de cobre (1), preferivelmente CuCl (ver Teutsch, G., et al., Esteroids 59: 22-26 (1994)). A formação de oxima com cloridrato de hidroxilamina em piridina dá o composto A- 4 com um rendimento excelente. O tratamento de A-4 com N-bromo-succinimida (NBS) dá um composto intermediário de 17-bromo-17-nitro, que é prontamente reduzido por tratamento com NaBtU no composto de 17-nitro A-5. A adição de Michael (1,4) do composto nitro na presença de uma base a ésteres a,β-insaturados (método de Patchett, et al., J. Org. Chem., 27, 3822 (1962)) proporciona os adutos correspondentes A-6. Quando por exemplo se utilizam acrilato de metilo ou propiolato e metilo como o éster insaturado, o aduto A-6 é formado com R7 quer CH2CH2COOMe ou CH=CHC00Me, respectivamente. O aduto com propiolato de metilo é principalmente o isómero E. Os compostos do tipo A- 5 ou A-6 podem ser tratados com ácido moderado (preferivelmente ácido trifluoroacético e água em CH2CI2) para formar as dienonas A-8. O grupo R7 em compostos do tipo A-6 pode ser submetido a outras reacções. Assim, os grupos éster podem ser reduzidos em álcoois primários com hidreto de di-isobutilaluminio (DIBAL-H) para dar, por exemplo, A-7 (R7 = CH2CH2CH2OH) e A-7 (R7 = CH=CHCH20H), respect ivamente. 0 tratamento com ácido, preferivelmente com ácido trifluoroacético e água em CH2CI2, resulta em descetalização e desidratação nas dienonas correspondentes A-8.
Quando o anel aromático de A—4 contém substituintes que tornam o anel arilo particularmente susceptível a ataque electrófilo, tal como por exemplo N-dialquilamino ou N-heterocicloalquilo, o tratamento com NBS resulta na bromação na posição orto em relação ao substituinte doador de electrões bem como na conversão no composto del7-bromo-l7-nitro. 0 brometo de arilo resultante pode ser processado através dos restanes dos procedimentos ou o brometo de arilo 21
ΕΡ 1 082 338 /PT pode ser substituído por um átomo de hidrogénio em qualquer momento antes de se obter o produto final A-8 por tratamento do composto apropriado com t-butil-lítio seguido por uma fonte de iões hidrogénio (ver por exemplo Kobrich e Buck, J. Amer. Chem. Soc., 103, 1412 (1970)). Se se utilizarem compostos de trítio ou deutério como a fonte de iões hidrogénio, obtém-se um composto marcado isotopicamente, que é útil em estudos com marcadores, tais como por exemplo estudos de metabolismo, farmacocinética ou de ligação a receptor.
Se não for desejado ter um grupo arilo halogenado, então a necessidade para substituição do bromo por hidrogénio reduz o rendimento global do processo. Uma das constatações deste invento é que se R1 for um grupo amino tal que R1-Ar é uma amina terciária, o anel Ar pode ser desactivado no que se refere a substituição oxidando primeiro o azoto num N-óxido de amina terciária.
Deste modo, alternativamente e preferivelmente, quando um substituinte amino terciário está presente no núcleo aromático, o anel pode ser desactivado no que se refere a bromação por conversão da amina terciária num óxido de amina (A-4, R1 = R2N(O)-). Podem-se utilizar vários agentes oxidantes conhecidos na especialidade. Por exemplo, o dimetildioxirano dá rendimentos excelentes. Obtêm-se rendimentos ligeiramente inferiores por tratamento com H202 e hexafluoroacetona, mas a conveniência deste último procedimento torna este geralmente preferível. O óxido de amina é outra vez reduzido na amina após a reacção de NBS simplesmente agitando a mistura reaccional com sulfato ferroso aquoso, que é normalmente utilizado no processamento da reacção de NBS. 0 composto de 17-bromo-l7-nitro resultante é depois reduzido no composto de 17-nitro A-5 com NaBH4, tal como anteriormente assinalado. No caso de A-5, o substituinte 17-nitro está principalmente na posição 17β, mas podem-se utilizar no passo seguinte quer o composto α quer o composto β, na medida em que o anião gerado na reacção de Michael se equilibra prontamente e a adição de éster insaturado ocorre a partir do lado α da molécula.
Quando A-5 é submetido a adição de Michael para dar um composto de carbonilo a,β-insaturado, tal como por exemplo metilvinilcetona, como se mostra na Figura 2, o produto de 22
ΕΡ 1 082 338 /PT carbonilo resultante B-l pode ser reduzido e ciclizado, por exemplo por tratamento com zinco e NH4C1, para formar a nitrona B-2 (ver o método de Bonnett, et al., J. Chem. Soc., 2094-2102 (1959)). Se R12 em B-2 for um bromo, o produto pode ser reduzido para dar B-2 (R12 = H) pelo tratamento com t-butil-litio anteriormente descrito. 0 tratamento com ácido de cetais B-2 conduz às dienonas B-3. Por exemplo, se a cetona a,β-insaturada for metilvinilcetona, o produto final resultante é metilnitrona B-3 (R8 = CH3) . As aldonitronas (B-2, R8 = H) são preferivelmente preparadas por redução do éster A-6 (R7 = CH2CH2COOR) no aldeido (A-6 R7 = CH2CH2CHO) com DIBAL-H limitado (ver o procedimento de Miller, et al., J.
Org. Chem., 24, 627 (1959)), seguido pela redução com zinco/NíUCl e ciclização para dar a nitrona B-2 (R = H) e descetalização/desidratação para dar a dienona B-3 (R8 = H).
Os substituintes no carbono 17a podem também ser introduzidos no composto de nitro A-5 através de residuos alcinilo. Por exemplo, quando se trata o anião de A-5 em dimetilsulfóxido (DMSO) com um composto de triacetato de alcinilchumbo (IV) (procedimento de Pinhey, J.T., et al., J. Chem. Soc. Perkin Trans., 1, 333 (1989)), obtém-se o composto de 17a-alcinil-l7β-ηί^ο correspondente C-l (Esquema C, Figura 3). O tratamento com ácido conforme descrito anteriormente conduz às dienonas C-2.
Tendo descrito geralmente este invento, pode-se obter uma melhor compreensão por referência a certos exemplos específicos que são aqui proporcionados apenas para fins de ilustração e não se pretende que sejam limitantes a não ser onde especificado de outro modo.
Procedimentos gerais. A não ser onde afirmado de outro modo, os produtos químicos de grau de reagente foram obtidos a partir de fontes comerciais e foram utilizados sem qualquer purificação adicional. O éter e o tetra-hidrofurano (THF) foram destilados de fresco a partir do par sódio-benzofenona-cetilo sob azoto. Todas as reacções sensíveis e transferências de reagentes sensíveis à humidade e ao ar foram realizadas sob azoto seco ou árgon. A cromatografia de camada fina (TLC) foi realizada em placas F-254 pré-revestidas a sílica gel 60 EM Science. Os compostos foram visualizados normalmente por luz UV (254 nm) ou pulverização 23
ΕΡ 1 082 338 /PT com p-anisaldeído. A cromatografia em coluna preparativa utilizou sílica gel EM Science, 60 Ã (230-400 mesh) . As soluções foram concentradas pela utilização de um evaporador rotativo sob pressão de sifão de água à temperatura ambiente. Os pontos de fusão foram determinados num Mel-Temp II e estão não corrigidos. A não ser onde assinalado de outro modo, os espectros de ΚΜΝ^Η foram obtidos a 250 MHz num espectrómetro Bruker AC 250 em CDCI3 como solvente com tetrametilsilano (TMS) como padrão interno. Os desvios químicos são apresentados em unidades de ppm a jusante no campo a partir do TMS. Os espectros de massa foram obtidos normalmente por impacto de electrões a 70 eV num instrumento Hewlett Packard 5989A. As análises elementares foram realizadas pela Atlantic Microlab Inc., Atlanta, GA.
Exemplo 1. Síntese de lip-[4-(N,N-dimetilamino)fenil]-17p-nitroestra-4,9-dien-3-ona [A-8 (R1 = 4-Me2N, R7 = R12 = H) ] . 3,3-[1,2-etanodi-ilbis(oxi)]-5a,10a-(oxido)estr-9(11)-en-17-ona (A-2) . A uma solução de 32,0 g (102 mmol) de 3,3-[1,2-etanodi-ilbis(oxi)]estra-5(10),9(11)-dien-17-ona em 192 ml de CH2CI2 a 0°C, adicionaram-se 7,04 ml (50,9 mmol) de hexafluoroacetona tri-hidratada (Lancaster Synthesis, Inc.) seguindo-se 2,46 g (17,3 mmol) de Na2HP04, e depois, à mistura agitada eficazmente (agitador mecânico suspenso), adicionaram-se gota a gota 8,64 ml (153 mmol) de H2O2 a 50%. Continuou-se a agitação eficiente durante 18 h, período durante o qual se deixou a temperatura subir gradualmente até à temperatura ambiente e depois adicionaram-se 192 ml de Na2S203 aquoso saturado. Após agitação durante 20 minutos, combinou-se a mistura com outro lote (32,0 g) que tinha sido preparado de modo idêntico até este ponto, em paralelo. Separou-se a fase aquosa (de fundo) e extraiu-se três vezes com 80 ml de EtOAc. Diluiu-se a solução orgânica combinada com 240 ml de EtOAc e lavou-se duas vezes com 80 ml de NaHC03 aquoso saturado, duas vezes com 80 ml de salmoura, secou-se sobre MgS04, filtrou-se e removeu-se o solvente sob pressão reduzida. Triturou-se o sólido amarelo (76,1 g) com 320 ml de dietiléter com agitação magnética durante 12 h num balão fechado. Combinou-se a suspensão branca resultante com três outros lotes (3 χ 32,0 g) que tinham sido preparados de modo idêntico (e proporcionalmente) até este ponto, em paralelo, filtrou-se por aspiração através de um funil de vidro sinterizado de porosidade grosseira, enxaguou-se três vezes 24
ΕΡ 1 082 338 /PT com 40 ml de dietiléter, e depois deixou-se aspirar até à secura durante 1,5 h. Raspou-se suavemente o bolo de filtração branco resultante para dar um pó branco fino e secou-se in vacuo para proporcionar o epóxido A-2 (89,5 g, 53% de rendimento). RMN-1]! (250 MHz, CDCI3) δ 6,06 (s largo, 1), 3,98-3,88 (m, 4), 2,52-2,44 (m, 2), 1,32-1,12 (m, 1), 0,88 (s, 3). 11β—[4—(N,N-dimetilamino)fenil]-3,3-[1,2-etanodi- ilbis(oxi)]-5a-hidroxiestr-9-eno-17-ona [A-3 (R1 = 4-ΜΘ2Ν-, R12 = H) ] . Um balão equipado com um agitador mecânico suspenso e carregado com 11,6 g (475 mmol) de aparas de magnésio foi seco à chama sob uma corrente de azoto seco. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, adicionaram-se 400 ml de THF, seguindo-se alguns cristais de iodo, conferindo assim uma ligeira coloração castanha. À mistura agitada eficazmente, adicionaram-se 35 ml de uma solução de 91,4 g (457 mmol) de 4-bromo-N,N-dimetilanilina em 400 ml de THF. Após aquecimento da mistura ao refluxo durante aprox. 5 minutos, a cor do iodo desvaneceu-se rapidamente até ficar incolor, momento em que se deixou a mistura arrefecer até à temperatura ambiente. Adicionou-se o restante da solução de brometo gota a gota durante um período de 2 h. Arrefeceu-se depois a mistura num banho de água-gelo durante 1,8 h, e depois adicionaram-se numa porção 18,1 g (183 mmol) de CuCl em pó finamente dividido. Após se ter agitado a mistura eficientemente durante 60 segundos, adicionou-se uma solução de 60,4 g (183 mmol) de A-2 em 453 ml de THF (verteu-se) durante 25 segundos, causando a formação de um precipitado volumoso amarelo-claro. Após 15 minutos, adicionaram-se 300 ml de NH4CI aquoso saturado, seguindo-se 755 ml de EtOAc. Após agitação durante 10 minutos, separou-se a fase aquosa e extraiu-se três vezes com 300 ml de EtOAc. Lavou-se a solução orgânica combinada oito vezes com 300 ml de salmoura (até as lavagens com salmoura terem uma opacidade relativamente baixa), secou-se sobre MgS04, filtrou-se e removeu-se o solvente sob pressão reduzida. Retomou-se o óleo viscoso negro em 30 ml de CH2CI2 e cromatografou-se em sílica gel (eluição de subproduto de reagente de anilina com CH2CI2 e depois eluição do produto com EtOAc) para proporcionar o aduto A—3 (R1 = 4-Me2N-, R12 = H) (75,4 g, 91% de rendimento). RMN-1H (250 MHz, CDCI3) δ 7,06 (d, 2, J = 8,3 Hz), 6,64 (d, 2, J = 8,8 Hz), 4,37 (s, 1), 4,24 (d, 1, J = 7,3 Hz), 4,02-3,90 (m, 4), 2,91 (s, 6), 0,52 (s, 3). 25
ΕΡ 1 082 338 /PT 11β—[4-(Ν,N-dimetilamino)fenil]-3,3-[1,2-etanodi- ilbis(oxi)]-5a-hidroxiestr-9-en-17-oxima [A-4 (R1 = 4-Me2N-, R12 = H) ] . A uma solução de 44,3 g (98,1 mmol) de cetona A-3 (R1 = 4-Me2N-, R12 = H) em 333 ml de piridina anidra à temperatura ambiente sob azoto, adicionaram-se 11,3 g (162 mmol) de cloridrato de hidroxilamina. Após agitação durante 17 h, adicionaram-se 1,10 1 de água e 333 ml de EtOAc. Após agitação durante 10 minutos, separou-se a fase aquosa e extraiu-se três vezes com 160 ml de EtOAc. Lavou-se a solução orgânica combinada duas vezes com salmoura, secou-se sobre Na2S02, filtrou-se e removeu-se o solvente sob pressão reduzida. Evaporou-se a espuma resultante iterativamente, num evaporador rotativo sob pressão reduzida, três vezes com 160 ml de tolueno a 40°C. Removeu-se solvente adicional in vácuo, proporcionando assim uma espuma castanha (48,4 g) isenta de piridina por análise de ΗΜΝ^Η. O material podia ser utilizado sem purificação adicional. ΚΜΝ^Η (250 MHz, CDCls) δ 8,62 (s largo, 1), 7,07 (d, 2, J = 9,4 Hz), 6,63 (d, 2, J = 9,0 Hz), 4,38 (s, 1), 4,22 (d, 1, J = 6,6 Hz), 4,03- 3.88 (m, 4), 2,89 (s, 6), 0,56 (s, 3). 11β-[4-(N,N-dimetil-N-(oxi)amino)fenil]-3,3-[1,2-etanodi-il-bis(oxi)]-5a-hidroxiestr-9-en-17-oxima [A-4 (R1 = 4-Me2N(0)-, R12 = H) . A uma solução de 6,16 g (13,2 mmol) de A-4 (R1 = 4-Me2N-, R12 = H) em 26 ml de CH2C12 a 0°C, adicionaram-se 0,92 ml (6,60 mmol) de hexafluoroacetona tri-hidratada. Com agitação vigorosa, adicionaram-se 1,60 ml (27,7 mmol) de H202 a 50% gota a gota. Após 5 h de agitação vigorosa a 0°C, diluiu-se a mistura vermelha resultante com EtOAc e água. Separou-se a fase aquosa e extraiu-se três vezes com EtOAc. Concentrou-se a fase aquosa sob pressão reduzida para proporcionar o óxido de amina A-4 (R1 = 4-Me2N(0)-, R12 = H) como um sólido branco (5,31 g, 83% de rendimento). RMN-1H (250 MHz, CDC13) δ 11,01 (s largo, 1), 7, 89, 7,35 (ABq, 4, J = 8,7 Hz), 4,42 (s largo, 1), 4,33 (d, 1, J = 6,9 Hz), 4,05- 3.89 (m, 4), 3,65 (s, 3), 3,64 (s, 3), 2,61-1,01 (m, 18), 0,483 (s, 3). 17-bromo-lip-[4-(N,N-dimetilamino)fenil]-3,3-[1,2-etanodi-ilbis(oxi)]-5a-hidroxi-17-nitroestr-9-eno. A uma solução de 4,39 g (24,7 mmol) de NBS em 20 ml de 1,4-dioxano e 20 ml de água à temperatura ambiente, adicionou-se uma solução de 2,47 g (24,7 mmol) de KHC03 em 20 ml de água. Após 5 minutos, adicionaram-se 4,60 g (9,86 mmol) de oxima A-4 (R1 26
ΕΡ 1 082 338 /PT 4-Μβ2Ν (Ο)-, R12 = Η) em 35 ml de 1,4-dioxano e 20 ml de água durante 5 minutos, originando uma coloração verde-lima/amarelo que gradualmente se desvaneceu até ficar amarela. Após 16 h, adicionou-se FeS04 aquoso saturado (120 ml) preparado de fresco, originando um precipitado castanho. Após agitação vigorosa durante 15 minutos, extraiu-se a mistura três vezes com EtOAc. Lavaram-se as soluções orgânicas combinadas três vezes com FeS04 aquoso saturado preparado de fresco, duas vezes com salmoura, secou-se sobre Na2S04, filtrou-se e removeu-se o solvente sob pressão reduzida para proporcionar 17-bromo-l1β-[4-(N,N- dimetilamino)-fenil]-3,3-[1,2-etanodi-ilbis(oxi)]-5a-hidroxi-17-nitroestr-9-eno como uma espuma castanha-amarelada (5,57 g) , que foi utilizada directamente no passo seguinte sem purificação adicional. 11 β—[4—(N,N-dimetilamino)fenil]-3,3-[1,2-etanodi- ilbis (oxi) ] -5a-hidroxi-17-nitroestr-9-eno [A-5 (R1 = 4-Me2N-, R12 = H) ] . A uma solução de 5,57 g (9,61 mmol) do álcool 17-bromo-17-nitro anterior em 102 ml de THF e 20 ml de água à temperatura ambiente, adicionaram-se 1,21 g (31,8 mmol) de NaBH4 em várias porções, de cada vez após uma libertação vigorosa de gás. Após 2 h, adicionou-se cuidadosamente uma solução de 7,01 g (101 mmol) de cloridrato de hidroxilamina em 175 ml de água seguindo-se a adição de EtOAc. Após agitação durante 20 minutos, extraiu-se a mistura três vezes com EtOAc. Lavaram-se as soluções orgânicas combinadas três vezes com água, uma vez com NaHC03 aquoso saturado e uma vez com salmoura, secou-se sobre Na2S04, filtrou-se e removeu-se o solvente sob pressão reduzida. Retomou-se a espuma resultante numa quantidade mínima de CH2CI2 e cromatografouse em sílica gel (50% de EtOAc em hexanos) para proporcionar o intermediário de nitro A—5 (R1 = 4-Me2N-, R12 = H) (2,39 g, 50% de rendimento para 3 passos) como um sólido amarelo. RMN-2H (250 MHz, CDCI3) δ 7, 03, 6,63 (ABq, 4, J = 8,8 Hz), 4,39 (s, 1), 4,39-4,30 (m, 1), 4,23 (d, 1, J = 7,0 Hz), 4,02-3,93 (m, 4), 2,90 (s, 6), 0,372 (s, 3). 11 β- [4- (N, Ν' -dimetilamino) fenil] -17β-η±ΐ:ι:οθ3^3-4,9-dien-3-ona [A-8 (R1 = 4-Me2N-, R7 = R12 = H) ] . A uma mistura rapidamente agitada de 300 mg (0,622 mmol) do intermediário de nitro A-6 (R1 = 4-Me2N-, R7 = R12 = H) , 10 ml de CH2C12 e 0,56 ml de água a 0°C, adicionaram-se gota a gota 0,84 ml (10,9 mmol) de ácido trifluoroacético (TFA). Após agitação 27
ΕΡ 1 082 338 /PT vigorosa durante 45 minutos, agitou-se a mistura com NaHCCt aquoso saturado durante 1,5 h. Separou-se a fase aquosa e extraiu-se três vezes com EtOAc. Lavou-se a solução orgânica combinada três vezes com NaHC03 aquoso saturado, duas vezes com salmoura, secou-se sobre Na2S04, filtrou-se e removeu-se o solvente sob pressão reduzida. A cromatografia em sílica gel (45% de EtOAc em hexanos) proporcionou A-8 (R1 = 4-Me2N-, R7 = R12 = H) (235 mg, 90% de rendimento) como uma espuma esbranquiçada. Duas triturações de uma amostra deste material com metanol e concentração das soluções de metanol resultantes proporcionaram uma amostra com >97% de pureza (por análise de HPLC) . RMN-1H (250 MHz, CDC13) δ 7,00, 6,64 (ABq, 4, J = 8,6 Hz), 5,77 (s, 1), 4, 42-4, 33 (m, 2), 2,91 (s, 6), 0, 446 (s, 3). MS m/z (intensidade rei.) 420 (M+, 27), 121 (100). Anál. Cale. para C26H32N2O3.0,25H20: C, 73,47; H, 7,71; N, 6,59. Encontrado: C, 73,11; H, 7,61; N, 6,55.
Exemplo 2. Síntese de lip-[4-(N,N-dimetilamino)fenil]-17a-(3-hidroxipropil)-17p-nitroestra-4,9-dien-3-ona [A-8 (R1 = 4-Me2N, R7 = -(CH2)3OH, R12 = H) ] . 11 β—[3-bromo-4-(N,N-dimetilamino)fenil]-3,3-[1,2-etanodi-ilbis(oxi)]-5a-hidroxi-17-nitroestr-9-eno [A-5 (R1 = 4-Me2N-, R12 = 3-Br). A uma suspensão vigorosamente agitada de 1,28 g de N-bromo-succinimida em pó finamente dividido em 5 ml de água e 5 ml de dioxano, adicionou-se uma solução de 1,07 g de bicarbonato de sódio em 5 ml de água. À suspensão resultante, adicionaram-se 1,28 g de oxima A-4 (R1 = 4-Me2N-, R12 = H) em 10 ml de dioxano. Agitou-se a suspensão resultante durante dois dias no final dos quais se separou um óleo. Adicionou-se água à mistura reaccional seguindo-se extraeção com éter. Lavou-se a fase de éter com água, seguida de solução diluída de sulfato ferroso, e concentrou-se sob pressão reduzida. Dissolveu-se o produto em bruto em 18 ml de THF e 3,5 ml de água. Adicionou-se boro-hidreto de sódio (350 mg) durante um período de 15 minutos. Após agitação durante uma hora à temperatura ambiente, adicionaram-se mais 150 mg de boro-hidreto. Agitou-se a mistura reaccional durante 1,5 h adicionais e depois levou-se até pH 7 com cloridrato de hidroxilamina em água. Extraiu-se a mistura com éter, lavou-se a fase de éter, secou-se, filtrou-se e concentrou-se para dar 1,3 g de produto em bruto. Cromatografou-se este material em sílica gel utilizando hexano/acetato de etilo 2:1 para dar 325 mg 28
ΕΡ 1 082 338 /PT de A-5 (R1 = 4-Me2N-, R12 = 3-Br) como um sólido branco (47% de rendimento). I.V. 3680, 3005, 2860, 1595, 1535, 1412, 1379, 1345, 1109, 836 cirf1; RMN-1H (250 MHz, CDC13) δ 0,38 (s, 3, H C18), 2,91 (s, 6, N(CH3)2), 3,99 (m, 4, 0(CH2)20), 4,12 (d, 1, H Ciia), 4,31 (t, 1, H Ci7a) , 4,42 (s, 1, OH C5), 6,88- 7,37 (m, 3, ArH). 11β-[3-bromo-17a-(2-carbometoxietil)-4-(N,N-dimetilamino)-fenil]-3,3—[1,2-etanodi-ilbis(oxi)]-5a-hidroxi-17p-nitroestr-9-eno [A-6 (R1 = 4-Me2N-, R7 = - (CH2) 2COOMe, R12 = 3-
Br). A uma suspensão de 1,5 g do composto de nitro A-5 (R1 = 4-Me2N-, R12 = 3-Br) em 8,0 ml de t-butanol e 15 ml de acrilato de metilo, adicionaram-se 1,5 ml de Triton B. Agitou-se a mistura à temperatura ambiente de um dia para o outro e depois extinguiu-se vertendo-a em gelo-água fria. Extraiu-se esta três vezes com éter, lavou-se com cloreto de amónio saturado e secou-se sobre sulfato de magnésio anidro para dar 1,2 g (88% de rendimento) de A-6 (R1 = 4-Me2N-, R7 = - (CH2) 2COOMe , R12 = 3-Br). βμν-7η (250 MHz, CDCI3) ; δ 7, 36 (s, 1, ArH), 6, 95 (d, 1, J = 8,4 Hz , ArH), 7,09 (d, 1, J = CO Hz, ArH C5) , 4,36 (s, 1, LO O Π2 O 4,29 (d, 1, J = 6,5 Hz , H Cna) , 3,95 (m, 4, (OCH2)2) 1, 3,68 (s, 3, C02CH3), 2,90 (s, 6, N (CH3) 2) , 0, 39 (s, 3, H Cie ) · 11β—[3-bromo-4-(N,N-dimetilamino)fenil]-3,3-[1,2-etanodi-ilbis (oxi)]-5a-hidroxi-17a-(3-hidroxipropil)-17p-nitroestr-9-eno [A—7 (R1 = Me2N—, R7 = -(CH2)3OH, R12 = 3-Br)] . A uma solução de 1,14 mg (1,75 mmol) de A-6 (R1 = 4-Me2N-, R7 = - (CH2) 2COOMe, R12 = 3-Br) em 6,3 ml de tolueno, adicionaram-se 5,23 ml de uma solução 1 M de hidreto de di-isobutilaluminio (DIBAL-H) em hexano gota a gota à temperatura ambiente. Durante o curso da adição, a temperatura subiu até 45°C e foi mantida a esta temperatura durante mais 2 h após a adição. Extinguiu-se a reacção por adição de 0,63 ml de metanol em 0,93 ml de tolueno seguindo-se 0,26 ml de água e 0,27 ml de metanol. Agitou-se a mistura durante 30 minutos e depois filtrou-se através de Celite e concentrou-se sob pressão reduzida. Purificou-se o produto em bruto por cromatografia em sílica gel utilizando 5% de acetona em diclorometano como eluente para dar 9 45 mg (87% de rendimento) de A- 7 (R1 = 4-Me2N-, R7 = -(CH2)3OH, r12 = 3-Br). RMN-1H (CDCI3) δ 0,39 (s, 3, H Cis ) , 2,76 (s, 6, N(CH3)2) , 3,61-3,68 (m, 2, CH2OH), 3,95 (m, 4, 0(CH2)20), 4,28 (d, 1, H Cn«), 4,42 (s, 1, OH C5) , 6, 88· -7,37 (m, 3, ArH) . 29
ΕΡ 1 082 338 /PT 11β-[4-(Ν,N-dimetilamino)fenil]-3,3-[1,2-etanodi- ilbis (oxi) ] -5<x-hidroxi-17a- (3-hidroxipropil) -17p-nitroestr- 9-eno [A-7 (R1 = Me2N—, R7 = -(CH2)3OH, R12 = H) ] . A uma solução de 615 mg (1,09 mmol) de A-7 (R1 = Me2N-, R7 = - (CH2) 3OH, R12 = 3-Br) dissolvidos em 50 ml de THF a -78°C sob uma atmosfera inerte, adicionaram-se 3,0 ml de t-butil-litio 1,7 M a -78°C durante um período de 30 minutos. Isto resultou numa solução amarela brilhante que foi agitada a -78°C durante 10-15 minutos. Extinguiu-se a mistura reaccional com cloreto de amónio saturado, extraiu-se com acetato de etilo, lavou-se com água seguida de salmoura e secou-se sobre sulfato de magnésio anidro. Filtrou-se a solução seca, concentrou-se em vácuo e cromatografou-se o produto em bruto em sílica gel com hexano/Et0Ac/Et20 10:3:2 para dar 270 mg (49% de rendimento) de A-7 puro (R1 = Me2N-, R7 = -(CH2)3OH, R12 = H) . RMN-1H (250 MHz, CDCI3) ; δ 7,00 (d, 2, J = 8,6 Hz, ArH) , 6,59 (d, 2, J = 8,8 Hz, ArH) , 4,37 (s, 1, OH C5), 4,25 (d, 1, J = 6,3 Hz, H Cn«), 3,88-3,98 (m, 4, (OCH2)2), 3,49-3, 70 (m, 2, CH2OH) , 2,88 (s, 6, N(CH3)2), 0,34 (s, 3, H Cie) · 11β-[4-(N,N-dimetilamino)fenil]-17a-(3-hidroxipropil)-17β-nitroestra-4,9-dien-3-ona [A-8 (R1 = 4-Me2N-, R7 = -(CH2)3OH, R12 = H) ] . Arrefeceu-se uma solução de 270 mg (0,5 mmol) de A-7 (R1 = 4-Me2N-, R7 = -(CH2)3OH, R12 = H) em 25 ml de CH2C12 até 0°C. Adicionaram-se a esta 0,5 ml de água seguidos de 1,5 ml de TFA gota a gota. A mistura reaccional ficou amarela brilhante. Após agitação durante lha 0°C, extinguiu-se a reacção com NaHC03 saturado e extraiu-se com 200 ml de CH2C12. Lavou-se a fase orgânica com água, seguida de salmoura e secou-se sobre MgSCq anidro. Filtrou-se a fase de CH2C12, concentrou-se e cromatograf ou-se o resíduo em sílica gel utilizando 10% de acetona em CH2C12 para dar 167
mg (70% de rendimento) da dienona desejada A-8 (R1 = 4-Me2N-, R7 = - (CH2) 3OH, R12 = H) . Utilizou-se purificação por HPLC preparativa numa coluna de fase reversa YMC C-18 com 80% de metanol em água para se obter um material com uma pureza superior a 97%; RMN-1H (250 MHz, CDC13) δ 6,99 (d, 2, J = 8,6 Hz, ArH), 6,63 (d, 2, J = 8,9 Hz, ArH), 5,77 (s, 1, H C4) , 4,40 (d, 1, J = 6,5 Hz, H Cn„), 3,63-3, 74 (m, 2, CH2OH) , 2,90 (s, 6, N (CH3) 2) , 0,45 (s, 3, H Cis); espectro de massa, m/z (intensidade rei.) 478 (14), 428 (27), 147 (8), 121 (100), 91 (10); Massa exacta; Cale. para C29H38N204: 478,2831, 30
ΕΡ 1 082 338 /PT
Encontrada: 478,2837; Anál. Cale. para C29H38N2O4.H20: C, 70,13; H, 8,12; N, 5,64. Encontrada: C, 69,72; H, 8,01; N, 5, 00.
Exemplo 3. Síntese alternativa de 11β-[4-(N,N-dimetil— amino) fenil] -17a- (3-hidroxipropil) -17β-ηϊίΓθθ3ίΓβ-4,9-dien-3-ona [A-8 (R1 = 4-Me2N-, R7 = -(CH2)3OH, R12 = H) ] . 17a-(2-carbometoxietil)-11β-[4-(N,N-dimetilamino)fenil]-3,3-[1,2-etanodi-ilbis (oxi) ] -5α-1ιϊάΓθχϊ-17β-ηϊίΓθβ3ίΓ-9-βηο [A-6 (R1 = 4-Me2N-, R7 = - (CH2) 2COOMe, R12 = H) ] . A uma solução de 1,5 g (0,047 inmol) de A-5 (R1 = 4-Me2N-, R12 = H) em 8,3 ml de t-butanol, adicionaram-se 16,5 ml de acrilato de metilo. Adicionaram-se depois a esta 1,5 ml de um solução de Triton B em metanol. Agitou-se a mistura reaccional durante 2 h e depois verteu-se em gelo-água fria e extraiu-se com acetato de etilo. Lavou-se a fase orgânica com água seguida de salmoura, secou-se sobre sulfato de magnésio anidro, filtrou-se e concentrou-se sob vácuo. Cromatografou-se o produto em bruto em sílica gel com hexano/acetato de etilo 2:1 como eluente para dar 1,56 g (88% de rendimento) de A-6 (R1 = 4-Me2N-, R7 = - (CH2) 2C00Me, R12 = H) . RMN-1H (250 MHz, CDCI3) ; δ 0,39 (s, 3, H Ci8), 2,90 (s, 6, N(CH3)2), 3,68 (s, 3, CO2CH3), 3,95 (m, 4, 0(CH2)2), 4,29 (d, 1, H Cna), 4,36 (s, 1, OH C5), 6,63 (d, 2, ArH), 7,03 (d, 2, ArH). 11β—[4-(N,N-dimetilamino)fenil]-3,3-[1,2-etanodi- ilbis (oxi)]-5a-hidroxi-17a-(3-hidroxipropil)-17β-ηϊίΓθθ3ίΓ- 9-eno [A—7 (R1 = 4-Me2N-, R7 = -(CH2)3OH, R12 = H) ] . A 83 mg (0,147 mmol) de A-6 (R1 = 4-Me2N-, R7 = - (CH2) 2COOMe, R12 = H) dissolvidos em 3 ml de tolueno e mantidos sob uma atmosfera de azoto, adicionaram-se gota a gota 0,44 ml de uma solução 1 M de DIBAL-H em hexano. Durante a adição, a temperatura subiu para cerca de 45°C. Manteve-se a mistura reaccional a 45°C durante 2 h. Extinguiu-se a reacção por adição de 0,2 ml de metanol em 0,5 ml de tolueno seguindo-se a adição de 0,1 ml de água em 0,3 ml de metanol. Filtrou-se depois através de Celite e concentrou-se. Cromatografou-se o produto em bruto em sílica gel usando 5% de acetona em diclorometano para dar 70 mg de um sólido branco. ΕΜΝ-7Η (250 MHz, CDC13) δ 0,39 (s, 3, H Ci8) , 2,86 (s, 6, N(CH3)2), 3,61- 3,64 (m, 2, CH2OH), 3,95 (m, 4, 0(CH2)2), 4,28 (d, 1, H Cna), 4,42 (s, 1, OH C5), 6,63 (d, 2, ArH), 7,03 (d, 2, ArH). 31
ΕΡ 1 082 338 /PT 11β—[4—(Ν,N-dimetilamino)fenil]-17α-(3-hidroxipropil)-17β-nitroestra-4,9-dien-3-ona [A-8 (R1 = 4-Me2N-, R7 = -(CH2)30H, R12 = H) ] . A uma solução de 70 mg (0,12 mol) de A-7 (R1 = 4-Me2N-, R7 = - (CH2) sOH, R12 = H) em 1 ml de acetona, adicionou-se uma quantidade catalítica de ácido p- toluenossulfónico a -10°C. Aqueceu-se lentamente a mistura reaccional até à temperatura ambiente e agitou-se durante mais 3 h. Extinguiu-se a reacção com bicarbonato de sódio saturado, extraiu-se com diclorometano e lavou-se a fase orgânica com água seguida de salmoura. Secou-se depois a fase de diclorometano sobre sulfato de magnésio anidro, filtrou-se e concentrou-se. Cromatografou-se o produto em bruto em sílica gel com 5% acetona em diclorometano como eluente para dar 35 mg de A-8 (R1 = 4-Me2N-, R7 = -(CH2)3OH, R12 = H) com cerca de 50% de rendimento. ΕΜΝ-1]! (250 MHz, CDCI3) ; igual ao apresentado para o Exemplo 2.
Exemplo 4. Síntese de 11β-[4-(N,N-dimetilamino)fenil]-17a-[1- ^-hidroxi)propenil] -17β-ηϊ^οβ8^β-4, 9-dien-3-ona [A-8 (R1 = 4-Me2N-, R7 = HOCH2CH=CH-, R12 = H) ] . 11β-[3-bromo-17a-(2-(E)-carbometoxietenil)-3,3-[4-(N,N-dimetilamino) fenil] - [1,2-etanodi-ilbis (oxi) ] -5α-1ιίάι:οχί-17β-nitroestr-9-eno [A-6 (R1 = 4-Me2N-, R7 = (E) —CH=CHCOOMe, R12 = 3-Br)]. Agitou-se uma solução de 3,14 g (5,6 mmol) de A-5 (R1 = 4-Me2N-, R12 = 3-Br), 1,632 g (28,0 mmol) de KF e 1,821 g (5,6 mmol) de n-Bu4NBr em 12,5 ml de DMSO durante 30 minutos à temperatura ambiente. Depois, adicionou-se gota a gota 1,0 ml (11,2 mmol) de propiolato de metilo e agitou-se a solução durante 1 h. Diluiu-se a mistura reaccional com água e extraiu-se com acetato de etilo. Lavou-se a fase orgânica com água, seguida de salmoura e secou-se sobre MgS04 anidro. Filtrou-se a fase orgânica, concentrou-se e cromatografou-se o produto em bruto em sílica gel utilizando hexano/acetato de etilo 1:1 para dar 2,02 g de isómero E puro, 0,6 g de isómero Z puro e 0,40 g de uma mistura de isómeros com um rendimento global de 85% de A-6 (R1 = 4-Me2N-, R7 = -CH=CHCOOMe, R12 = H) . O isómero E tem os dados espectrais seguintes: ΗΜΝ^Η (250 MHz, CDCI3) δ 7,36 (d, 1, J = = 15,9 Hz, CH=CHC02Me), 7,35 (s, 1, ArH), 7, 08 (d, 1, J = 8,6 Hz, ArH), 6,96 (d, 1, J = 8,6 Hz, ArH), 5,87 (d, 1, J = 15,9 Hz, CH=CHC02Me) , 4,46 (s, 1, OH C5), 4,21 (d, 1, J = 7,0 Hz, H Ciia), 3,93-4, 02 (m 4, (OCH2)2), 3 ,80 (s, 3, C02CH3), 2,76 (s, 6, N(CH3)2), 0,49 (S, 3, H Ci8) . 0 isómero Z tem os dados 32
ΕΡ 1 082 338 /PT espectrais seguintes: ΒΜΝ^Η (250 MHz, CDC13) δ 7,32 (s, 1,
ArH), 7,05 (d, 1, J = 8,6 Hz, ArH), 6,94 (d, 1, J = 8,2 Hz, ArH), 6,58 (d, 1, J = 12,7 Hz, CH=CHC02Me) , 6,05 (d, 1, J = 12,3 Hz, CH=CHC02Me) , 4,46 (s, 1, OH C5) , 4,31 (d, 1, J = 7, 0 Hz, H Cna), 3,96 — 4,02 (m, 4, (OCH2)2), 3,68 (s, 3, C02CH3) , 2.75 (s, 6, N(CH3)2), 0,44 (s, 3, H C18) , 11β-[3-bromo-4-(n,N-dimetilamino)fenil]-3,3-[1,2-etanodi-ilbis(oxi)]-5a-hidroxi-17a-[(E)-1-(3-hidroxi)propenil]-17β-nitroestr-9-eno [A-7 (R1 = 4-Me2N-, R7 = (E)-CH=CHCH2OH, R12 = 3-Br)]. A uma solução de 2,025 g (3,14 mmol) de A-6 (R1 = 4-Me2N-, R7 = (E)-CH=CHCOOMe, R12 = 3-Br) dissolvido em 25 ml de CH2C12 mantida sob uma atmosfera de azoto a -78°C, adicionaram-se gota a gota 12,96 ml de uma solução de DIBAL-H 1 M em hexano. Aqueceu-se a mistura reaccional lentamente até à temperatura ambiente e agitou-se durante 1 h. Extinguiu-se a reacção por adição de 5 ml de metanol, seguindo-se solução saturada de sal de Rochelle e acetato de etilo. Agitou-se esta mistura até não se observar mais precipitado. Lavou-se a fase orgânica com água, seguida de salmoura, secou-se sobre MgS04 anidro e depois filtrou-se. Concentrou-se o filtrado e cromatografou-se o produto em bruto em sílica gel utilizando 5% de acetona em diclorometano para dar 1,40 g (72% de rendimento) de álcool A—7 (R1 = 4-Me2N-, R7 = (E) -CH=CHCH2OH, R12 = 3-Br). ΒΜΝ-2Η (250 MHz, CDC13) δ 7,36 (s, 1, ArH), 7,08 (d, 1, J = 8,4 Hz, ArH), 6,95 (d, 1, J = 8,2 Hz, ArH), 6,58 (d, 1, J = 15,9 Hz, CH=CHCH20H), 5,80 (dt, 1, J1 = 4,37 Hz, J2 = 15,5 Hz, CH=CHCH2OH), 4,49 (s, 1, OH C5), 4,20-4,26 (d largo, 3, CH2OH, H Ciia) , 3,92-4, 02 (m, 4, (OCH2)2), 3,68 (s, 3, C02CH3) , 2.75 (s, 6, N(CH3)2), 0,46 (s, 3, H Ci8) , 11β—[4—(N,N-dimetilamino)fenil]-3,3-[1,2-etanodi- ilbis (oxi) ] -5<x-hidroxi-17<x- [ (E) -1- (3-hidroxi) propenil] -17β- nitroestr-9-eno [A-7 (R1 = 4-Me2N-, R7 = (E)-CH=CHCH2OH, R12 = H)]. A uma solução de 1,40 g (2,27 mmol) de A-7 (R1 = 4-Me2N-, R7 = (E) -CH=CHCH2OH, R12 = 3-Br), dissolvido em 100 ml de THF a -78°C sob árgon, adicionaram-se 5,5 ml de uma solução 1,7 M de t-butil-lítio a -78°C durante 10 minutos. Extinguiu-se a mistura reaccional com cloreto de amónio saturado, extraiu-se com acetato de etilo, lavou-se com água seguida de salmoura e secou-se sobre sulfato de magnésio anidro. Filtrou-se depois a solução seca, concentrou-se em vácuo e utilizou-se o produto em bruto sem purificação 33
ΕΡ 1 082 338 /PT adicional no passo seguinte. RMN-1H (250 MHz, CDCI3) δ 7,04 (d, 2, J = 8,8 Hz, ArH), 6,64 (d, 2, J = 8,8 Hz, ArH), 6,58 (d, 1, J = 15,9 Hz, CH=CHCH2OH) , 5,80 (dt, 1, Ji = 4,7 Hz, J2 = 15,5 Hz, CH=CHCH2OH) , 4,45 (s, 1, OH C5) , 4,27 (d, 2, J = 4,0 Hz, CH2OH), 4,27 (d, 1, J = 7,4 Hz, H Cn«), 3,90-4,02 (m, 4, (OCH2) 2) , 2,90 (s, 6, N(CH3)2), 0,46 (s, 3, H C18) . 11β-[4-(N,N-dimetilamino)fenil]-17α-[(E)-1-(3-hidroxi)-propenil]-17p-nitroestra-4,9-dien-3-ona [A-8 (R1 = 4-ΜΘ2Ν-, R7 = (E)-CH=CHCH20H, R12 = H) ] . Arrefeceu-se uma solução de 1,08 g (0,5 mmol) de A-7 em bruto (R1 = 4-Me2N-, R7 = (E)- CH=CHCH2OH, R12 = H) em 25 ml de CH2C12 até 0°C. Adicionaram-se a esta 1,0 ml de água seguida de 5,0 ml de TFA gota a gota. A mistura reaccional ficou amarela brilhante. Após agitação durante lha 0°C, extinguiu-se a reacção com NaHC03 saturado e extraiu-se com 250 ml de CH2C12. Lavou-se a fase orgânica com água, seguida de salmoura e secou-se sobre MgS04 anidro. Filtrou-se a solução seca, concentrou-se e cromatografou-se o produto em bruto em sílica gel utilizando 10% de acetona em CH2C12 para dar 515 mg da dienona desejada A-8 (R1 = 4-Me2N-, R7 = (E)-CH=CHCH2OH, R12 = H) com 50% de rendimento. Utilizou-se purificação por HPLC preparativa numa coluna de fase reversa YMC C-18 com 80% de metanol em água para se obter um material com uma pureza superior a 97%; RMN-2H (250 MHz, CDCI3) δ 6,99 (d, 2, J = 8,6 Hz, ArH), 6,64 (d, 2, J = 8,8 Hz, ArH), 6,30 (d, 1, J = 16,0 Hz, CH=CHCH2OH), 5,83 (dt, 1, Ji = 4,7 Hz, J2 = 15,5 Hz, CH=CHCH2OH), 5,76 (s, 1, H C4) , 4,34-4,28 (d largo, 3, CH20H, H Ciia), 2,90 (s, 6, N(CH3)2), 0,53 (s, 3, H Cis); espectro de massa, m/z (intensidade rei.) 476 (9), 429 (16), 415 (18), 143 (17), 121 (100); Massa exacta: Cale. para C29H38N204: 478,2831. Encontrada: 478,2837; Anál. Cale. para C29H3sN204.0,25H20: C, 73,54; H, 7,99; N, 5,62. Encontrado: C, 73,31; H, 8,31; N, 4,96.
Exemplo 5. Síntese de 11β-(4-acetilfenil)-17a-(3-hidroxi-propil)-17β-ηί^ο-β3^α-4,9-dien-3-ona [A-8 (R1 = 4-CH3C(0)-, R7 = -(CH2)3OH, R12 = H) ] . 4-bromoacetofenonaetilenocetal. Aqueceu-se ao refluxo uma mistura bem agitada de 25,0 g (126 mmol) de p- bromoacetofenona, 70,0 ml (1,26 mol) de etilenoglicol e 2,38 g (12,5 mmol) de p-TsOH em 350 ml de tolueno numa montagem de Dean-Stark. Após 22 h, deixou-se a mistura arrefecer até 34
ΕΡ 1 082 338 /PT à temperatura ambiente, adicionou-se cuidadosamente NaHC03 aquoso saturado e extraiu-se a mistura com éter. Lavaram-se as soluções orgânicas combinadas com água e salmoura, secou-se sobre MgSCq, filtrou-se e removeu-se o solvente sob pressão reduzida. Secou-se o sólido resultante in vacuo à temperatura ambiente para proporcionar 4-bromo-acetofenonaetilenocetal (30,2 g, 99% de rendimento) como um sólido esbranquiçado, que foi utilizado sem purificação adicional. ΚΜΝ^Η (250 MHz, CDC13) δ 7,46 (m, 2), 7,36 (m, 2) , 4,03 (m, 2), 3,77 (m, 2), 1,63 (s, 3). 3,3-[1,2-etanodi-ilbis(oxi)]-11β-{4-{1,1-[1,2-etanodi-i.lbis-(oxi)]etil}fenil}-5a-hidroxiestr-9-en-17-ona [A-3 (R1 = 4-CH3C (OCH2) 2-, R12 = H] . A uma mistura de 1,09 g (44,7 mmol) de aparas de magnésio e 50 ml de THF sob azoto à temperatura ambiente, adicionaram-se 15 ml de uma solução de 9,44 g (38,8 mmol) de 4-bromoacetof enonaet ilenocetal em 100 ml de THF. Aqueceu-se suavemente a mistura resultante até se observar uma coloração verde/amarela (aprox. 15 minutos), momento em que se adicionou gota a gota a solução de brometo de arilo restante durante um período de 10 minutos sem aquecimento externo adicional. Após 2 h, arrefeceu-se a suspensão verde-azeitona resultante até entre -10°C e -13°C, e depois adicionaram-se 851 mg (8,60 mmol) de CuCl, numa porção, seguindo-se 15 segundos mais tarde uma solução de 2,85 g (8,60 mmol) de 3,3-[ 1,2-etanodi-ilbis(oxi)]-5a,10a-(óxido)estr-9(11)-en-17-ona (A-2) em 25 ml de THF, seguindo-se enxaguamento com 5 ml de THF. Após 20 minutos, extinguiu-se a mistura amarela-clara resultante com NH4C1 aquoso saturado e deixou-se aquecer até à temperatura ambiente. Adicionaram-se éter e água, e extraiu-se a mistura com éter. Lavaram-se as soluções orgânicas combinadas com salmoura, secou-se sobre MgSCq, filtrou-se e removeu-se o solvente sob pressão reduzida. Retomou-se o sólido resultante numa quantidade mínima de CH2CI2 e cromatografou-se em sílica gel (hexanos/éter, 1:22 até 100% de éter) para proporcionar o aduto 1,4 A-3 (R1 = 4-CH3C (OCH2) 2-, R12 = H) (3,45 g, 81% de rendimento) como um sólido espumoso branco. RMN-1H (250 MHz, CDC13) δ 7,35, 7,19 (ABq, 4, J = 8,3 Hz), 4,39 (s, 1), 4,32 (d, 1, J = 7,4 Hz), 4, 03-3,77 (m, 8), 1,64 (s, 3), 0,47 (s, 3) . 35
ΕΡ 1 082 338 /PT 3,3-[1,2-etanodi-ilbis(oxi)]-11β-{4-{1,1-[1,2-etanodi-ilbis-(oxi)]etil}fenil}-5a-hidroxiestr-9-en-17-oxima [A-4 (R1 = 4- CH3C(OCH2)2-, R12 = H)]. A uma mistura de 3,45 g (6,97 mmol) de cetona A-3 (R1 = 4-CH3C (OCH2) 2~, R12 = H) e 557 mg (8,02 mmol) de cloridrato de hidroxilamina sob azoto à temperatura ambiente, adicionaram-se 25 ml de piridina anidra, e depois, 2,5 h mais tarde, adicionaram-se mais 242 mg (3,49 mmol) de cloridrato de hidroxilamina. Após 12 h, verteu-se a mistura reaccional em 250 ml de água e extraiu-se com éter. Lavou-se a solução orgânica combinada com salmoura, secou-se sobre MgS04, filtrou-se e removeu-se o solvente sob pressão reduzida. Retomou-se o sólido branco resultante numa quantidade minima de CH2CI2 e cromatografou-se em silica gel (14% de Me2CO em CH2CI2) para proporcionar a oxima A-4 (R1 = 4-CH3C (0CH2) 2-r R12 = H) (2,97 g, 84% de rendimento) como uma espuma sólida branca. RMN-1H (250 MHz, CDCI3) δ 7,34, 7,19 (ABq, 4, J = 8,4 Hz), 6,95 (s largo, 1), 4,38 (s, 1), 4,30 (d, 1, J = 6,8 Hz), 4,05-3,77 (m, 4), 1,64 (s, 3), 0,51 (s, 3). 17-bromo-3,3-[1,2-etanodi-ilbis(oxi)]-11β-{4-{1,1-[1,2-etano-di-ilbis(oxi)]etil}fenil}-5a-hidroxi-17-nitroestr-9-eno. A uma mistura com agitação rápida de 523 mg (2,94 mmol) de NBS em 1,7 ml de água e 1,7 ml de dioxano à temperatura ambiente, adicionou-se uma solução de 295 mg (2,94 mmol)de KHCO3 em 1,7 ml de água. À mistura resultante, adicionou-se gota a gota uma solução de 500 mg (0,981 mmol) de oxima A-4 (R1 = 4-CH3C (OCH2) 2-r R12 = H) em 3,4 ml de dioxano, seguindo-se enxaguamento com 0,4 ml de dioxano, originando uma coloração verde-lima clara. Após agitação vigorosa durante 17 h, diluiu-se a mistura esbranquiçada resultante com éter e água, e depois extraiu-se com éter. Lavaram-se as soluções orgânicas combinadas uma vez com água, três vezes com solução aquosa de FeS04 50% saturada, duas vezes com salmoura, secou-se sobre MgSCq, filtrou-se e removeu-se o solvente sob pressão reduzida. Sem demora excessiva, retomou-se a espuma amarela vitrea resultante numa quantidade minima de CH2C12 e cromatografou-se em silica gel (50% de EtOAc em hexanos) para proporcionar o composto de 17-bromo-l7-nitro desejado mas altamente lábil (437 mg, 74% de rendimento) como uma espuma sólida branca. I.V. (CCI4) n 3500, 1548 cm'1; RMN-1H (250 MHz, CDC13) δ 7,35, 7,17 (ABq, 4, J = 8,3 Hz), 4,43 (s, 1), 4,39 (d, 1, J = 7,2 Hz), 4,08-3,75 (m, 8), 3,32 (m, 1), 1,63 (s, 3), 0,45 (s, 3). 36
ΕΡ 1 082 338 /PT 3,3-[1,2-etanodi-ilbis(oxi)]-11β-{4-{1,1-[1,2-etanodi-ilbis-(oxi)]etil}fenil}-5a-hidroxi-17-nitroestr-9-eno [A-5 (R1 = 4-CH3C (OCH2) 2-, r12 = H) ] . A uma solução de 200 mg (0,331 mmol) do composto álcool de 17-nitro-l7-bromo anteriormente descrito em 3,4 ml de THF e 0,6 ml de água à temperatura ambiente, adicionaram-se 39,0 mg (1,03 mmol) de NaBH4 numa porção, seguindo-se uma reacção exotérmica vigorosa. Após 1,4 h, adicionaram-se mais 11,0 mg (0,30 mmol) de NaBH4. Após 2,6 h, duplicou-se o volume da mistura reaccional pela adição de éter e, à mistura reaccional vigorosamente agitada, adicionou-se uma solução de 228 mg (3,28 mmol) de cloridrato de hidroxilamina em 6 ml de água, gota a gota durante 4 minutos. Após agitação durante 5 minutos, extraiu-se a mistura com éter. Lavaram-se as soluções orgânicas combinadas com água, solução aquosa saturada de NaHC03 e salmoura, secou-se sobre MgS04, filtrou-se e removeu-se o solvente sob pressão reduzida. Retomou-se a espuma resultante numa quantidade mínima de CH2CI2 e cromatografouse em sílica gel (50% de EtOAc em hexanos) para proporcionar o nitro-álcool desbromado A-5 (R1 = 4-CH3C (OCH2) 2-, R12 = H) (152 mg, 87% de rendimento) como um sólido branco fofo. RMN-2H (250 MHz, CDCI3) δ 7,34, 7,16 (ABq, 4, J = 8,3 Hz), 4,41 (s, 1), 4,38-4,31 (m, 2), 4,02-3,72 (m, 4), 2,74 (d, 1, J = 13 Hz), 1,63 (s, 3), 0, 32 (s, 3). 17a-(2-carbometoxietil)-3,3-[1,2-etanodi-ilbis(oxi)]-11β-{4-{1,1- [1,2-etanodi-ilbis (oxi) ] β^1)£βη±1}-5α-1ιϊάΓθχ±-17β-nitroestr-9-eno [A-6 (R1 = 4-CH3C (OCH2) 2-, R7 = - (CH2) 2COOMe, R12 = H) ] . A uma mistura de 146 mg (0,278 mmol) de nitro-álcool A-5 (R1 = 4-CH3C (OCH2) 2-, R12 = H) em 0,80 ml de t-BuOH e 1,51 ml (16,7 mmol) de acrilato de metilo à temperatura ambiente, adicionaram-se gota a gota 0,16 ml (0,35 mmol) de Triton B a 40% p/p em metanol, originando uma solução reaccional amarela-pálida homogénea. Após 1 h, adicionaram-se éter e solução aquosa saturada de NH4C1, e extraiu-se a mistura com éter. Lavou-se a solução orgânica combinada com água e depois com salmoura, secou-se sobre MgS04, filtrou-se e removeu-se o solvente sob pressão reduzida. Retomou-se o sólido esbranquiçado resultante numa quantidade mínima de CH2CI2 e cromatograf ou-se em sílica gel (70% de EtOAc em hexanos) para proporcionar o metiléster A-6 (R1 = 4- CH3C (0CH2) 2-, R7 = - (CH2) 2COOMe, R12 = H) (142 mg, 84% de rendimento) como um sólido espumoso branco. RMN-1H (250 MHz, CDCI3) δ 7,34, 7,16 (ABq, 4, J = 8,1 Hz), 4,37 (s largo, 2), 4,01-3,74 (m, 4), 3,69 (s, 3), 1,62 (s, 3), 0,33 (s, 3). 37
ΕΡ 1 082 338 /PT 3,3—[1,2-etanodi-ilbis(oxi)]-11β-{4-{1,1-[1,2-etanodi-il-bis(oxi)]etil}fenil}-5a-hidroxi-17a-(3-hidroxipropil)-17β-nitroestr-9-eno [A-7 (R1 = 4-CH3C (OCH2) 2-, R7 = -(CH2)3OH, R12 = H] . A uma solução de 142 mg (0,232 mmol) de éster A-6 (R1 = 4-CH3C(OCH2)2-, R7 = - (CH2) 2C00Me, R12 = H) em 2,3 ml de THF a -78°C sob azoto, adicionaram-se gota a gota 0,80 ml (0,80 mmol) de DIBAL-H 1,0 M em hexanos. Após 1,25 h, adicionou-se sal de Rochelle aquoso saturado e deixou-se a mistura aquecer até à temperatura ambiente e agitou-se até a emulsão resultante clarificar (aprox. 1,5 h) . Adicionaram-se éter e água, e extraiu-se a mistura resultante com éter. Lavou-se a solução orgânica combinada com salmoura, secou-se sobre MgS04, filtrou-se e removeu-se o solvente sob pressão reduzida para proporcionar uma mistura de éster de partida A-6 (R1 = 4-CH3C(OCH2)2-, R7 = - (CH2) 2COOMe, R12 = H) e de aldeido intermediário por análise de RMN-1H, como um sólido oleoso branco (141 mg). À mistura de produto em bruto anterior (141 mg) em 2,3 ml de THF a -78°C sob azoto, adicionaram-se gota a gota 1,20 ml (1,20 mmol) de DIBAL-H 1,0 M em hexanos. Após 45 minutos, aqueceu-se a mistura reaccional até 0°C em 15 minutos, e depois arrefeceu-se de novo até -78°C e extinguiu-se com sal de Rochelle aquoso saturado, depois deixou-se aquecer até à temperatura ambiente e agitou-se. Extraiu-se a mistura branca resultante com éter. Lavaram-se as soluções orgânicas brancas combinadas com salmoura, sal de Rochelle aquoso saturado, água, duas vezes com salmoura, secou-se sobre MgSCh, filtrou-se e removeu-se o solvente sob pressão reduzida para proporcionar um sólido branco (74 mg). Após repouso durante aprox. 2 h, as fases aquosas combinadas tinham ficado límpidas e extraíram-se outra vez com EtOAc. Lavaram-se os extractos de EtOAc com salmoura, secou-se sobre MgS04, filtrou-se e removeu-se o solvente sob pressão reduzida para proporcionar um sólido branco (54 mg). Combinaram-se os dois produtos em bruto numa quantidade mínima de CH2C12 e cromatograf ou-se em sílica gel (90% de EtOAc em hexanos) para proporcionar o diol A-7 (R1 = 4-CH3C(OCH2)2-, R7 = - (CH2) 3OH, R12 = H) (98 mg, 73% de rendimento) como um sólido branco. RMN-1H (250 MHz, CDC13) δ 7,34, 7,16 (ABq, 4, J = 8,2 Hz), 4,37 (m, 2), 4,02-3,66 (m, 10), 2,83 (m, 1), 2,60 (d, 1, J = 13 Hz), 1,63 (s, 3), 0,33 (s, 3) . 38
ΕΡ 1 082 338 /PT
11β-(4-acetilfenil)-17α-(3-hidroxipropil)-17p-nitroestra-4,9—dien—3—ona [A-8 (R1 = 4-CH3CO-, R7 = -(CH2)3OH, R12 = H) . A uma mistura bem agitada de 67,0 mg (0,115 mmol) do diol A-7 (r1 = 4-CH3C(OCH2)2-, R7 = - (CH2) 3OH, R12 = H), 3,0 ml de CH2C12 e 0,05 ml de H20 a 0°C, adicionaram-se gota a gota 0,50 ml de TFA, originando uma coloração amarela. Após 15 minutos, adicionou-se NaHC03 aquoso saturado, separaram-se as fases e extraiu-se a fase aquosa três vezes com CH2C12. Lavou-se a solução orgânica combinada com salmoura, secou-se sobre Na2S04, filtrou-se e removeu-se o solvente sob pressão reduzida. Retomou-se o produto em bruto numa quantidade mínima de CH2C12 e cromatograf ou-se em sílica gel (85% de EtOAc em hexanos) para proporcionar A-8 (R1 = 4-CH3CO-, R7 = -(CH2)3OH, R12 = H) (47,2 mg, 86% de rendimento). RMN-1H (500 MHz, CDCls) δ 7, 87 f 7,28 (ABq, 4, J = 8,3 Hz) , 5, 80 (s, D , 4,51 (d, 1, J = 7, 1 Hz) , 3, 72 (m, D , 3,62 (m, D, 2 , 86 (t, 1, J = 13,4 Hz ) , 2 , 72 (m, 2) , 2 ,60 (m, 2) , 2,56 (s, 3) , 2,55- 2,51 (m, D f 2, 46-2 ,26 (m , 5) , 2, 09-2 ,04 (m, 1) , 1 , 96- O Oh \—1 (m, 1), 1, 84- -1, , 74 (m, 2), 1, 70-1 ,61 (m, 3) , 1, 53- 1,42 (m, 2 ), 1,21-1 , 1 4 (m, D, 0,39 (s, 3) .
Exemplo 6. Síntese de E- e Z-ΙΙβ-(4-acetilfenil)-17α-[1-(3-hidroxi)propenil] -17|5-nitroestra-4,9-dien-3-ona [A-8 (R1 = 4—CH3CO—, R7 = HOCH2CH=CH-, R12 = H) ] 17α-[(E)-2-carbometoxietenil]-3,3-[1,2-etanodi-ilbis(oxi)]-11β-{4-{1,1-[1,2-etanodi-ilbis(oxi)]etil}fenil}-5a-hidroxi-^-nitroestr-9-eno [A-6 (R1 = 4-CH3C (OCH2) 2, R7 (E)MeOOCCH=CH—, R12 = H) ] e 17α-[(Z)-2-carbometoxietenil]- 3,3-[1,2-etanodi-ilbis(oxi)]-11β-{4-{1,1-[1,2-etanodi-ilbis (oxi) ] βίί1}£βηί1}-5α-1ιίάΓθχί-17β-η^Γθβ8ίι:-9-βηο [A-6 (R1 = 4—CH3C (OCH2) 2, R7 = (Z) MeOOCCH=CH—, R12 = H) ] . A uma mistura de 2000 mg (3,80 mmol) de composto de nitro A—5 (R1 = 4-CH3C (OCH2) 2-, R12 = H), 2,45 g (7,61 mmol) de Bu4NBr, 1,10 g (19,0 mmol) de KF e 10 ml de DMSO num balão seco à chama, sob azoto à temperatura ambiente, adicionaram-se 0,68 ml (7,61 mmol) de propiolato de metilo. Após 1,5 h, lavaram-se as paredes do balão com 3 ml adicionais de DMSO. Após 2,5 h, adicionaram-se EtOAc e H20, separou-se a fase aquosa e extraiu-se com EtOAc. Lavou-se a solução orgânica combinada com salmoura, secou-se sobre MgS04, filtrou-se e removeu-se o solvente sob pressão reduzida. Retomou-se o sólido espumoso castanho resultante numa quantidade mínima de CH2C12 e 39
ΕΡ 1 082 338 /PT cromatografou-se em sílica gel (60% de EtOAc em hexanos) para proporcionar uma mistura 3:1 de A-6 (R1 = 4-CH3C(OCH2) 2-, R7 = (E)MeOOCCH=CH-, R12 = H) e de A-6 (R1 = 4-CH3C (0CH2) 2-, R7 = (Z)MeOOCCH=CH-, R12 = H) (2,13 g, 92%) . A cromatograf ia de média pressão (MPLC) em sílica gel (aplicação com uma quantidade mínima de CH2C12, eluição com THF/hexanos/MeOH 32:67:1) proporcionou A-6 (R1 = 4-CH3C (OCH2) 2, R7 (E)MeOOCCH=CH-, R12 = H) puro (1,104 g) e duas misturas de A-6 (R1 = 4-CH3C (OCH2) 2, R7 = (E) MeOOCCH=CH-, R12 = H) e de A-6 (R1 = 4-CH3C (OCH2) 2, R7 = (Z) MeOOCCH=CH-, R12 = H) (142 mg de aprox. 1:1 e 304 mg de 13:87, respectivamente). Duas recristalizações da mistura 13:87, 304 mg, a partir de THF/hexanos/MeOH 32:67:1 proporcionaram A-6 (R1 = 4- CH3C (OCH2) 2, R7 = (Z) MeOOCCH=CH-, R12 = H) puro (200 mg). RMN-2H (250 MHz, CDC13) de A-6 (R1 = 4-CH3C (OCH2) 2, R7 = (E) MeOOCCH=CH-, R12 = Η) δ 7,35, 7,16 (ABq, 4, J = 8,2 Hz), 7,36 (d, 1, J = 16 Hz), 5,86 (d, 1, J = 16 Hz), 4,44 (s, 1), 4,30 (d, 1, J = 7,5 Hz), 4,05-3,72 (m, 8), 3,81 (s, 3), 2,95 (m, 1), 2,67 (d, 1, J = 13 Hz), 1,63 (s, 3), 0,43 (s, 3); A-6 (R1 = 4-CH3C (OCH2) 2, R7 = (Z) MeOOCCH=CH-, R12 = Η) δ 7,33, 7,13 (ABq, 4, J = 8,2 Hz), 6,60 (d, 1, J = 13 Hz), 5,99 (d, 1, J = 13 Hz), 4,44 (s, 1), 4,39 (s largo, 1), 4,06-3,68 (m, 8), 3,68 (s, 3), 3,34 (m, 1), 1,62 (s, 3), 0,38 (s, 3). 3,3-[1,2-etanodi-ilbis(oxi)]-11β-{4-{1,1-[1,2-etanodi-il-bis (oxi) ] etil}fenil}-5<x-hidroxi-17<x-[ (E)-l-(3-hidroxi)-propenil]-17p-nitroestr-9-eno [A-7 (R1 = 4-CH3C (OCH2) 2-, R7 = (E) HOCH2CH=CH-, R12 = H) ] . A uma solução de 557 mg (0,914 mmol) de éster A-6 (R1 = 4-CH3C (OCH2) 2, R7 = (E) MeOOCCH=CH-, R12 = H) em 9,2 ml de THF a -78°C sob azoto, adicionaram-se gota a gota 4,6 ml (4,57 mmol) de DIBAL-H 1,0 M em hexanos. Após 35 minutos, aqueceu-se a solução até 0°C durante 30 minutos, depois arrefeceu-se de novo até -78°C e extinguiu-se com sal de Rochelle saturado, deixou-se aquecer até à temperatura ambiente e agitou-se durante 12 h. Diluiu-se a mistura límpida resultante com EtOAc e separou-se a fase aquosa, e extraiu-se três vezes com EtOAc. Lavou-se a solução orgânica combinada duas vezes com salmoura, secou-se sobre Na2S04, filtrou-se e removeu-se o solvente sob pressão reduzida. Retomou-se o sólido branco resultante numa quantidade mínima de CH2CI2 e cromatografou-se em sílica gel (EtOAc) para proporcionar o álcool de alilo A-7 (R1 = 4-CH3C (OCH2) 2, R7 = (E) HOCH2CH=CH-, R12 = H) (464 mg, 87%). RMN-1H (250 MHz, CDC13) δ 7,33, 7,16 (ABq, 4, J = 8,1 Hz), 40
ΕΡ 1 082 338 /PT 6,26 (d, 1, J = 16 Hz), 5,80 (dt, 1, J = 16, 4,7 Hz), 5,02 (s, 1), 4,47 (m, 2), (8H, m) , 2,85 (m, 1), 2,65 (d, 1, J = 13 Hz), 1,63 (s, 3), 0,40 (s, 3). 11β-(4-acetilfenil)-17α-[(Z)-1-(3-hidroxi)propenil]-17 β-nitroestra-4,9-dien-3-ona [A-8 (4-CH3CO-, R7 = (Z)HOCH2CH=CH—, R12 = H) ] . A uma solução de 200 mg (0,328 mmol) de éster A-6 (R1 = 4-CH3C (OCH2) 2, R7 = (E) MeOOCCH=CH-, R12 = H) em 6,6 ml de THF a -78°C sob azoto, adicionaram-se 1,7 ml (1,64 mmol) de DIBAL-H 1,0 M em hexanos gota a gota. Aqueceu-se depois a solução até 0°C durante 30 minutos, depois arrefeceu-se de novo até -78°C e extinguiu-se com sal de Rochelle aquoso saturado. Deixou-se a mistura resultante aquecer até à temperatura ambiente e agitou-se durante 12 h. Extraiu-se a mistura límpida resultante com EtOAc. Lavou-se a solução orgânica combinada duas vezes com salmoura, secou-se sobre Na2SC>4, filtrou-se e removeu-se o solvente sob pressão reduzida. A cromatografia do resíduo em sílica gel (EtOAc) proporcionou o álcool alílico A-7 (R1 = 4-CH3C (OCH2) 2-, R7 = (Z) HOCH2CH=CH-, R12 = H) . Suspendeu-se o produto em 7,8 ml de CH2CI2 e 0,14 ml de H20, arrefeceu-se até 0°C e, à mistura rapidamente agitada, adicionaram-se gota a gota 1,3 ml de TFA. Após 20 minutos, adicionou-se solução aquosa saturada de NaHC03 e agitou-se a mistura vigorosamente durante 20 minutos. Separou-se a fase aquosa e extraiu-se três vezes com EtOAc. Lavou-se a solução orgânica combinada duas vezes com salmoura, secou-se sobre Na2S04, filtrou-se e removeu-se o solvente sob pressão reduzida. Por duas vezes, retomou-se o produto numa quantidade mínima de CH2C12 e cromatografou-se em sílica gel (80% de EtOAc em hexanos) para proporcionar o dienona-alcenol A-8 (R1 = 4-CH3CO-, R7 = (Z) HOCH2CH=CH-, R12 = H) (78 mg, 50% de rendimento, dois passos). RMN-1H (250 MHz, CDC13) δ 7, 88, 7, 28 (ABq, 4, J = 7,5 Hz), 6,00 (d, 1, J = 13 Hz), 5,88-5,78 (m, 2), 4,51 (d, 1, J = 7,5 Hz), 4,15-4,08 (m, 2), 3,14 (m, 1), 2,58 (s, 3), 0,41 (s, 3). 11β- (4-acetilfenil) -17α- [ (E) -1- (3-hidroxi)propenil] -17β-ηϊ^ο-estra-4,9-dien-3-ona [A-8 (R1 = 4-CH3CO-, R7 = (E) HOCH2CH=CH, R12 = H) ] . A uma mistura rapidamente agitada de 464 mg (0,798 mmol) de diol A-7 (R1 = 4-CH3C (OCH2) 2, R7 = (E) HOCH2CH=CH-, R12 = H) , 19 ml de CH2C12 e 0,35 ml de H20 a 0°C, adicionaram-se gota a gota 3,25 ml de TFA, originando uma coloração amarela. Após 15 minutos, adicionou-se lentamente solução 41
ΕΡ 1 082 338 /PT aquosa saturada de NaHCCt e agitou-se vigorosamente a mistura resultante durante 20 minutos a 0°C, momento em que se separou a fase aquosa e se extraiu três vezes com EtOAc. Lavou-se o extracto orgânico combinado duas vezes com salmoura, secou-se sobre Na2S04, filtrou-se e removeu-se o solvente sob pressão reduzida. Retomou-se o sólido amarelo resultante numa quantidade mínima de CH2CI2 e cromatografouse em sílica gel (80% de EtOAc em hexanos) para proporcionar o composto alvejado A-8 (R1 = 4-CH3CO-, R7 = (E) HOCH2CH=CH-, R12 = H) (313 mg, 82%). RMN-1H (250 MHz, CDC13) δ 7,88, 7,28 (ABq, 4, J = 8,4 Hz), 6,29 (d, 1, J = 16 Hz), 5,91-5,80 (m, 2), 4,44 (d, 1, J = 7,5 Hz), 4,30 (d, 2, J = 3,1 Hz), 2,90 (m, 1), 2,57 (s, 3), 0,47 (s, 3).
Exemplo 7. Síntese de 17a-(3-hidroxipropil)-lip-[4-(metil-sulfinil)fenil]-17p-nitroestra-4,9-dien-3-ona [A-8 (R1 = 4-CH3S (O) R7 = -(CH2)3OH, R12 = H)] e 17a- (3-hidroxipropil) -11β-[4-(metiltio)fenil]-17p-nitroestra-4,9-dien-3-ona [A-8 (R1 = 4-CH3S-, R7 = -(CH2)3OH, R12 = H) ] . 3,3-[1,2-etanodi-ilbis(oxi)]-5a-hidroxi-lip-[4-(metiltio)-fenil) ] estr-9-en-17-ona [A-3 (R1 = 4-CH3S-, R12 = H) ] . Num balão equipado com barra de agitação, condensador de refluxo, tubo de carga e uma entrada e saída de azoto seco, carregaram-se 2,27 g (93,1 mmol) de aparas de Mg, e depois secou-se a instalação à chama sob uma corrente de azoto seco. Após arrefecimento até à temperatura ambiente sob uma corrente de azoto seco, o restante do protocolo foi realizado sob uma pressão estática de azoto seco e à temperatura ambiente. Às aparas de magnésio, adicionaram-se 100 ml de THF e depois adicionaram-se rapidamente aprox. 10 ml de uma solução de 18,2 g (89,5 mmol) de 4-bromotioanisole em 100 ml de THF, originando assim a iniciação de um reagente Grignard após alguns minutos. Adicionou-se depois gota a gota a solução 4-bromotioanisole restante durante um período de 1,5 h. Após 30 minutos, adicionaram-se 3,54 g (35,8 mmol) de pó de CuCl com agitação eficiente, e depois, 45 segundos mais tarde, adicionou-se rapidamente uma solução de 11,8 g (35,8 mmol) de epóxido A—2 em 100 ml de THF. Após 10 minutos, extinguiu-se cuidadosamente a mistura reaccional com solução aquosa saturada de NH4C1 em excesso, à temperatura ambiente. Diluiu-se a mistura com água e extraiu-se três vezes com EtOAc. Lavaram-se as soluções orgânicas combinadas três vezes com salmoura, secou-se sobre 42
ΕΡ 1 082 338 /PT
Na2S04, filtrou-se e removeu-se o solvente sob pressão reduzida. Cromatografou-se o sólido oleoso castanho resultante (22,6 g) em sílica gel (60% de EtOAc em hexanos) para proporcionar o tioéter A-3 (R1 = 4-CH3S-, R12 = H) como um sólido branco (14,0 g, 86% de rendimento) . RMN-1H (250 MHz, CDC13) δ 7,14 (s, 4), 4,38 (s, 1), 4,28 (d, 1, J = 7,2
Hz), 4,02-3,90 (m, 4), 2,46 (s, 3), 0,498 (s, 3). 3.3- [1,2-etanodi-ilbis (oxi) ] -5<x-hidroxi-ll|3- [4- (metiltio) -fenil] estr-9-en-17-oxima [A-4 (R1 = 4-CH3S-, R12 = H) ] . A uma solução de 15,2 g (33,4 mmol) de cetona A-3 (R1 = 4-CH3S-, R12 = H) em 120 ml de piridina anidra à temperatura ambiente sob azoto, adicionaram-se 3,83 g (55,2 mmol) de H2N0H.HC1. Após 25 h, verteu-se a solução em 500 ml de água. Extraiu-se a mistura três vezes com EtOAc. Lavaram-se as soluções orgânicas combinadas três vezes com salmoura, secou-se sobre Na2S04, filtrou-se e removeu-se o solvente sob pressão reduzida. Três vezes sequenciais, diluiu-se o resíduo com tolueno e depois evaporou-se sob pressão reduzida (para remover piridina). A cromatografia em sílica gel (70% de
EtOAc em hexanos) proporcionou a oxima A-4 (R1 = 4-CH3S-, R12 = H) (15,3 g, 98% de rendimento) como uma espuma branca. RMN-1H (250 MHz, CDC13) δ 8,18 (s largo, 1), 7,14 (s, 4), 4,38 (s, 1), 4,26 (d, 1, J = 6,9 Hz), 4,08-3,89 (m, 4), 2,46 (s, 3), 0,539 (s, 3) . 3.3- [1,2-etanodi-ilbis (oxi) ] -5<x-hidroxi-lip- [4- (metil- sulfinil) fenil]-17-nitroestr-9-eno [A-5 (R1 = 4-CH3S(0)-, R12 = H) . A uma solução de 21,0 g (118 mmol) de NBS em 80 ml de 1.4- dioxano e 80 ml de água à temperatura ambiente, adicionou-se uma solução de 11,8 g (118 mmol) de KHC03 em 80 ml de água. Após 5 minutos, adicionou-se uma solução de 15,8 g (33,7 mmol) de oxima A-4 (R1 = 4-CH3S-, R12 = H) em 120 ml de 1,4-dioxano e 80 ml de água, durante um período de 5 minutos, causando uma coloração verde-lima brilhante, que gradualmente se desvaneceu até ficar amarela. Após 20 h, adicionaram-se FeS04 aquoso saturado preparado de fresco (1000 ml) e EtOAc. Filtrou-se a mistura através de uma almofada de Celite 545, que foi enxaguada com água EtOAc.
Separou-se a fase aquosa verde resultante e extraiu-se duas vezes com EtOAc. Lavou-se a solução orgânica combinada com solução aquosa saturada de FeS04 preparada de fresco, duas vezes com salmoura, secou-se sobre Na2S04, filtrou-se e removeu-se o solvente sob pressão reduzida para proporcionar 43
ΕΡ 1 082 338 /PT ο intermediário de 17-nitro-l7-bromo em bruto (21,6 g) como uma espuma amarela, que foi utilizado sem purificação adicional. RMN-1]! (250 MHz, CDC13) δ 7, 56, 7, 40 (ABq, 4, J = 8,1 Hz), 4,44 (s largo, 2), 4,30-3,93 (m, 4), 3,32 (m, 1), 2,72 (s, 3), 0,454 (s, 3). MS m/z (intensidade rei.) 563 (M+, 3), 561 (M+, 2), 483 (17), 467 (20), 334 (31), 99 (100) . A este produto em bruto em 300 ml de THF e 6 0 ml de água à temperatura ambiente, adicionaram-se cuidadosamente 4,33 g (144 mmol) de NaBH4 em porções durante aprox. 30 minutos. Após 1,5 h à temperatura ambiente, adicionou-se cuidadosamente uma solução de 24,6 g (353 mmol) de H2N0H.HC1 em 500 ml de água. Após 10 minutos de agitação vigorosa, extraiu-se a mistura três vezes com EtOAc. Lavaram-se as soluções orgânicas combinadas duas vezes com salmoura, secou-se sobre Na2S04, filtrou-se e removeu-se o solvente sob pressão reduzida para proporcionar o intermediário de nitro A-5 (R1 = 4-CH3S(0)-, R12 = H) [15,8 g, 94% de rendimento (altamente puro por análise de TLC)]. Num procedimento anterior a uma escala menor (75 mg), a cromatografia em sílica gel (4% de MeOH em EtOAc) proporcionou 49,2 mg (76% de rendimento) do intermediário de nitro A-5 (R1 = 4-CH3S(0)-, R12 = H) . RMN-2H (250 MHz, CDC13) δ 7,50 (dd, 2, J = 3,0, 8,4 Hz), 7,33 (d, 2, J = 8,3 Hz), 4,36-4,31 (m, 3), 3,97- 3,87 (m, 4), 2,66 (s, 3) 0,271 (s, 3). MS m/z (intensidade rei.) 501 (M+, 18), 483 (50), 466 (32), 380 (39), 99 (100). 17a-(2-carbometoxietil)-3,3-[1,2-etanodi-ilbis(oxi)]-5a-hidroxi-ΙΙβ-[4-(metilsulfinil)fenil]-17p-nitroestr-9-eno [A-6 (R1 = 4—CH3S (O) —, R7 = - (CH2) 2COOMe, R12 = H) ] . A uma mistura de 1,00 g (1,99 mmol) de nitro sulfóxido A-5 (R1 = 4-CH3S (0) -, R12 = H) em 5,80 ml de t-BuOH e 11,0 ml (122 mmol) de acrilato de metilo à temperatura ambiente, adicionaram-se gota a gota 1,15 ml (2,51 mmol) de Triton B a 40% p/p em metanol, originando uma solução reaccional amarela-pálida homogénea. Após 3 h, adicionaram-se solução aquosa saturada de NH4C1 e EtOAc, e extraiu-se a mistura três vezes com EtOAc. Lavaram-se as soluções orgânicas combinadas duas vezes com salmoura, secou-se sobre Na2S04, filtrou-se e removeu-se o solvente sob pressão reduzida. Submeteu-se o líquido ligeiramente amarelo resultante a destilação azeotrópica sucessivamente três vezes com tolueno para proporcionar um óleo viscoso amarelo (1,29 g) . Utilizou-se o 44
ΕΡ 1 082 338 /PT óleo na reacçao seguinte sem purificação adicional. RMN-1H δ 7,55 (dd, 2, J = 3,0, 8,4 Hz), 7,38 (d, 2, J = 8,3 Hz), 4,43 (d, 1, J = 7,2 Hz), 4,39 (s, 1), 4,03-3,96 (m, 4), 2,69 (s, 3), 2,71 (d, 3, J = 1,2 Hz), 0,336 (s, 3, H Ci8) . 3, 3- [1,2-etanodi-ilbis (oxi) ] -5a-hidroxi-17a- (3-hidroxipropil) -11β-[4-(metiltio)fenil)]-17p-nitroestr-9-eno [A-7 (R1 = 4-CH3S-, R7 = -(CH2)3OH, R12 = H) ] e 3,3-[1,2-etanodi-ilbis(oxi)]-5a- hidroxi-17a-(3-hidroxipropil)-11β-[4-(metil-sulfinil)fenil)-^-nitroestr-9-eno [A-7 (R1 = 4-CH3S(0)-, R7 = -(CH2)3OH, R12 = H) . A uma solução de 1,29 g (1,99 mmol assumidos) de metiléster A-6 (R1 = 4-CH3S (0) -, R7 = - (CH2) 2COOMe, R12 = H) em 25,0 ml de THF a -78°C, adicionaram-se gota a gota 12,0 ml (12,0 mmol) de DIBAL-H 1,0 M em hexanos. Após 10 minutos, aqueceu-se até 0°C durante 1 h momento em que a análise por TLC mostrou o consumo completo do material de partida e a presença de dois novos compostos. Adicionaram-se sal de Rochelle aquoso saturado e EtOAc, e agitou-se a mistura turva resultante à temperatura ambiente durante 8 h, proporcionando assim uma mistura límpida. Separou-se a fase aquosa e extraiu-se três vezes com EtOAc. Lavou-se a solução orgânica combinada duas vezes com salmoura, secou-se sobre Na2S04, filtrou-se e removeu-se o solvente sob pressão reduzida. A cromatografia (2,5% de MeOH em EtOAc até 5,0% de MeOH em EtOAc) proporcionou o sulfureto diol A-7 (R1 = 4-CH3S-, R7 = - (CH2)3OH, R12 = H) (397 mg, 37% de rendimento para dois passos) como uma espuma branca e o sulfóxido diol A-7 (R1 = 4-CH3S (O) -, R7 = -(CH2)3OH, R12 = H) (310 mg, 28% de rendimento para dois passos) como uma espuma branca. RMN-1H: resultados para o sulfureto A-7 (R1 = 4-CH3S-, R7 = -(CH2)3OH, R12 = Η) δ 7,13 (s, 4, ArH) , 4,40 (s, 1, OH C5), 4,32 (d, 1, J = 5,0 Hz, H Cn), 4, 02-3,90 (m, 4, (OCH2)2), 3,58 (m, 2, CH2OH), 2,83 (m, 1), 2,44 (s, 3, SCH3) , 0,362 (s, 3, H Cie) .
Resultados para o sulfóxido A-7 (R1 = 4-CH3S(0)-, R7 = - (CH2) 3OH, R12 = Η) δ 7,57 (dd, 2, J = 2,2, 8,5 Hz), 7,36 (d, 2, J = 8,3 Hz), 5,81 (s, 1), 4,52 (d, 1, J = 6,7 Hz), 3,71- 3,62 (m, 4), 2,72 (s, 3), 0,395 (s, 3, H C18) . 17a-(3-hidroxipropil)-11β-[4-(metiltio)fenil]-17β-nitroestra-4,9-dien-3-ona [A-8 (R1 = 4-CH3S-, R7 = -(CH2)3OH, R12 = H) ] . A uma mistura vigorosamente agitada de 397 mg (0, 727 mmol) de sulfureto diol A-7 (R1 = 4-CH3S-, R7 = - (CH2) 3OH, R12 = H) , 32,0 ml de CH2C12 e 0,67 ml de água a 0°C, adicionaram-se 0,89 ml de ácido trifluoroacético. Após 3 h, 45
ΕΡ 1 082 338 /PT adicionou-se solução aquosa saturada de NaHC03, e agitou-se a mistura resultante à temperatura ambiente durante 8 h. Extraiu-se a mistura três vezes com EtOAc. Lavaram-se as soluções orgânicas combinadas com salmoura, secou-se sobre Na2S04, filtrou-se e removeu-se o solvente sob pressão reduzida. Cromatografou-se o resíduo (75% de EtOAc em hexanos). A recolha das fracções, que por HPLC se determinou serem >97% puras, proporcionou o composto A-8 (R1 = 4-CH3S-, R7 = -(CH2)3OH, R12 = H) (186 mg, 53% de rendimento) como uma espuma branca. RMN-1H δ 7,16 (d, 2, J = 8,5 Hz, ArH) , 7,08 (d, 2, J = 8,5 Hz, ArH), 5,78 (s, 1, H de vinilo) , 4,43 (d, 1, J = 6,5 Hz, H Cu), 3,69-3,59 (m, 2, CH2OH) , 2,44 (s, 3, SCH3) , 0, 427 (s, 3, H C18) . 17a-(3-hidroxipropil)-11β-[4-(metilsulfinil)fenil]-17β-nitro-estra-4,9-dien-3-ona [A-8 (R1 = 4-CH3S(0)-, R7 = -(CH2)3OH, R12 = H)]. A uma mistura vigorosamente agitada de 310 mg (0,552 mmol) de sulfóxido diol A-7 (R1 = 4-CH3S(0)-, R7 = -(CH2)3OH, R12 = H), 25,0 ml de CH2C12 e 0,51 ml de água a 0°C, adicionaram-se 0,67 ml de ácido trifluoroacético. Após 3 h, adicionou-se solução aquosa saturada de NaHC03 e agitou-se a mistura resultante à temperatura ambiente durante 8 h. Extraiu-se a mistura três vezes com EtOAc. Lavou-se a solução orgânica combinada com salmoura, secou-se sobre Na2S04, filtrou-se e removeu-se o solvente sob pressão reduzida. Cromatografou-se o resíduo (6% de MeOH em EtOAc). A recolha das fracções, que por HPLC se determinou serem >97% puras, proporcionou o composto A-8 (R1 = 4-CH3S(0)-, R7 = - (CH2) 3OH, R12 = H) (175 mg, 63% de rendimento) como uma espuma branca. RMN-1H δ 7,57, 7,35 (ABq, 4, J = 7,7 Hz), 5,81 (s, 1), 4,56 (d, 1, J = 6,7 Hz), 3,75-3,55 (m, 2), 2,72 (s, 3) , 0,393 (s, 3, C18) .
Exemplo 8. Síntese de 11β-(4-acetilfenil)-3',4'-di-hidro-5'-metil-1'-oxo-espiro[estra-4,9-dien-17 β,2'(2'H)-pirrole]-3-ona [B—3 (R1 = 4-CH3CO-, R8 = CH3, R12 = H) ] . 3,3-[1,2-etanodi-ilbis(oxi)]-11β-{4-{1,1-[1,2-etanodi-ilbis-(oxi) ] etil)fenil}-5α-1ιίάΓθχί-17β-ηί^ο-17α- (3-oxobutil) estr-9-eno [B—1 (R1 = 4-CH3C (OCH2) 2-, R8 = CH3, R12 = H) ] . A uma solução de 2,4 g (4,5 mmol) de A-5 (R1 = 4-CH3C (OCH2) 2) , R12 = H) em 10 ml de DMSO, adicionaram-se 1,3 g (22,5 mmol) de KF e 1,45 g (4,5 mmol) de n-Bu4NBr, e agitou-se a mistura durante 30 minutos à temperatura ambiente. A esta mistura, 46
ΕΡ 1 082 338 /PT adicionaram-se gota a gota 0,5 ml (9,0 mmol) de metilvinilcetona e continuou-se a agitação durante mais uma hora. Diluiu-se a mistura reaccional com água e extraiu-se com acetato de etilo. Lavou-se a fase orgânica com água seguida de salmoura, e secou-se sobre MgSCg anidro. Filtrou-se depois a fase orgânica, concentrou-se e cromatografou-se o produto em bruto em silica gel usando dicloro- metano/hexano/acetona 5:5:1 para dar 2,45 g (88% de rendimento) de B-l (R1 = 4-CH3C (OCH2) 2-, R8 = CH3, R12 = H) . RMN-2H (250 MHz, CDC13) δ 0,33 (s, 3, H Ci8) , 1,64 (s, 3,
PhC (0CH2CH20) CH3) , 2,18 (s, 3, COCH3), 3,74-4,01 (m, 8, (OCH2)2), 4,37 (d, 1, H Ciia), 4,34 (s, 1, OH C5) , 7,15 (d, 2, J = 8,1 Hz, ArH), 7,34 (d, 2, J = 8,3 Hz, ArH). 3',4'-di-hidro-3,3-[1,2-etanodi-ilbis(oxi)]-11β-{4-{1,1-[1,2-etanodi-ilbis(oxi)]etil}fenil}-5<x-hidroxi-5'-metil-l'-oxo-espiro[estr-17p,2'(2'H)-pirrole]-9-eno [B-2 (R1 = 4- CH3C(OCH2)2-, R8 = CH3, R12 = η)]. A uma solução de 1,5 g (2,52 mmol) de B-l (R1 = 4-CH3C (OCH2) 2-, R8 = CH3, R12 = H) em 10 ml de etanol aquoso a 50% e 5,0 ml de THF, adicionaram-se 263 mg de cloreto de amónio e 1,3 g de pó de zinco. Agitou-se a mistura reaccional durante 24 h, e depois filtrou-se através de Celite. Cromatografou-se o produto em bruto em sílica gel, por eluição primeiro com hexano/diclorometano/ acetona 5:5:1 e depois com hexano/diclorometano/metanol 5:5:1 para dar 1 ,13 g (80% de rendimento) de B-2 (R1 = 4-CH3C(OCH2)2-, R8 = ch3i , R12 = H) . RMN-1H (250 MHz, CDC13) δ 0 ,56 (s, 3, H Ci8) , 1,64 (S, 3, PhC (0CH2CH20) CH3) , 2,21 (s, 3, ON=C-CH3), 3,68- 4, 02 (m, 8, (OCH2) 2) , 4,35 (d, 1, H Clla) t 5,01 (s, 1, OH), 7, 10 (d, 2, J = 8,3 Hz, ArH), 7,31 (d, 2, J = 8,3 Hz, ArH). 11β-(4-acetilfenil)-3',4'-di-hidro-5'-metil-1'-oxo-espiro-[estra-4,9-dien—17β,2'(2'H)-pirrole]-3-ona [B-3 (R1 = 4—CH3CO-,
R8 = CH3, R12 = H) ] . A uma solução de 300 mg de B-2 (R1 = 4-CH3C (OCH2) 2-, R8 = CH3, R12 = H) em 5 ml de CH2CI2, adicionou-se 1,0 ml de ácido trifluoroacético (TFA) a 0°C e aqueceu-se a mistura até à temperatura ambiente. Extinguiu-se a reacção com solução saturada de NaHC03 e extraiu-se com acetato de etilo. Lavou-se a fase de acetato de etilo com água seguida de salmoura, e secou-se sobre MgS04 anidro. Filtrou-se a solução seca e concentrou-se sob vácuo para dar 255 mg de produto em bruto que foi cromatografado em sílica gel usando hexano/diclorometano/metanol 5:5:1 para dar 177 mg de composto puro que tinha os dados espectrais seguintes: RMN-1H 47
ΕΡ 1 082 338 /PT (250 ΜΗζ, CDC13) δ 0,64 (s, 3, Η C18) , 2,17 (s, 3, ON=C-CH3) , 2,59 (s, 3, PhCOCH3) , 4,44 (d, 1, H Cna) , 5,81 (s, 1, H C4), 7,23 (d, 2, J = 8,3 Hz, ArH) , 7,87 (d, 2, J = 8,4 Hz, ArH) . MS m/z 457 (M+), 441, 371, 324, 204, 96, 83.
Exemplo 9. Síntese de 3' , 4'-di-hidro-l^-[4-(N,N-dimetil-amino)fenil]-5'-metil-1'-oxo-espiro[estra-4,9-dien-17β,2' (2'H)-pirrole]-3-ona [B-3 (R1 = 4-Me2N-, R8 = CH3, R12 = H)] . 11β-[3-bromo-4-(N,N-dimetilamino)fenil]-17a-(3-oxobutil)-3,3-[1,2-etanodi-ilbis(oxi)]-5a-hidroxi-17p-nitroestr-9-eno [B-l (R1 = 4-Me2N-, R8 = CH3, R12 = 3-Br) ] . A uma solução de 1,51 g (2,69 mmol) de A-5 (R1 = 4-Me2N-, R12 = 3-Br) em 5 ml de DMSO, adicionaram-se 785 mg (13,45 mmol) de KF e 876 mg (2,69 mmol) de n-Bu4NBr, e agitou-se a mistura durante 30 minutos. A esta mistura, adicionaram-se gota a gota 0,27 ml (5,38 mmol) de metilvinilcetona, e agitou-se a solução durante uma hora. Diluiu-se a mistura reaccional com água e extraiu-se com acetato de etilo. Lavou-se a fase orgânica com água, seguida de salmoura, e secou-se sobre MgS04 anidro. Filtrou-se a fase orgânica, concentrou-se e cromatografou-se o produto em bruto em silica gel usando diclorometano/hexano/acetona 5:5:1 para dar 1,49 g (88% de rendimento) de B-l (R1 = 4-Me2N-, R8 = CH3, R12 = 3-Br) . I.V. (solução, CDC13) 3485, 2935, 2775, 1707, 1528, 1481, 1437, 1349, 1131, 965, 935, 826 cm-1; RMN-2H (250 ΜΗζ, CDC13) δ 0,39 (s, 3, H C18), 2,14 (s, 3, COCH3) , 2,75 (s, 6, N(CH3)2), 3,91-4,06 (m, 4, (OCH2)2), 4,33 (d, 1, H Clla) , 4,39 (s, 1, OH C5) , 6,95 (d, 1, J = 8,4 Hz, ArH), 7,09 (d, 1, J = 8,5 Hz, ArH), 7,36 (s, 1, ArH). 11 β-[3-bromo-4-(N,N-dimetilamino)fenil]-3',4'-di-hidro-3,3-[1,2-etanodi-ilbis(oxi)]-5a-hidroxi-5'-metil-1'-oxo-espiro-[estr-9-eno-^,2' (2Ή)-pirrole] [B-2 (R1 = 4-Me2N-, R8 = CH3, R12 = 3-Br) ] . Preparou-se uma solução da cetona B-l (R1 =
Me2N-, R8 = CH3, R12 = 3-Br) (1,1 g, 1,599 mmol) em 5,0 ml de etanol aquoso a 50% e 2,5 ml de THF. A esta solução, adicionaram-se 65 mg (1,2 mmol) de NH4C1 e 325 mg (4,9 mmol) de pó de zinco. Agitou-se a mistura reaccional de um dia para o outro e adicionaram-se outros 325 mg de Zn e 65 mg de cloreto de amónio e continuou-se a agitação durante 8 h.
Filtrou-se a mistura reaccional através de Celite e concentrou-se o filtrado. Cromatografou-se o produto em 48
ΕΡ 1 082 338 /PT bruto em sílica gel por eluição com diclorometano/hexano/metanol 7:3:0,3 para dar 600 mg (61% de rendimento) de B—2 puro (R1 = Me2N-, R8 = CH3, R12 = 3-Br) . I.V. (solução, CDCls); 3490, 2936, 2775, 1588, 1481, 1447, 1382, 1214, 966, 887 cm-1; RMN-1H (250 MHz, CDC13) δ 7,34 (s, 1, ArH) , 7,00 (d, 1, J = 8,0 Hz), 6,95 (d, 1, J = 8,5 Hz, ArH) , 4,39 (s, 1, OH C5) , 4,21 (d largo, 1, H Cna) , 3,93-4,02 (m, 4, (OCH2)2), 2,74 (s, 6, N(CH3)2), 2,14 (s, 3, 0N=C-CH3) , 0,61 (s, 3, H C18) . 3' , 4' -di-hidro-ΙΙβ-[4-(N,N-dimetilamino)fenil]-3,3-[1,2-etanodi-ilbis (oxi) ]-5a-hidroxi-5'-metil-1'-oxo-espiro[estr-9-θηο-17β,2' (2'H)-pirrole] [B-2 (R1 = 4-Me2N-, R8 = CH3, R12 = H) ] . Dissolveu-se o brometo de arilo B-2 (R1 = Me2N-, R8 = CH3, R12 = 3-Br) (466 mg, 0,77 mmol) em 50 ml de THF e manteve-se a -78°C sob árgon. A esta solução adicionaram-se gota a gota 1,9 ml de t-BuLi (1,7 M em pentano) . Após a adição estar completa, agitou-se a mistura reaccional durante 10 minutos e extinguiu-se a -78°C com metanol (5 ml), seguido de solução saturada de NH4C1. Extraiu-se a mistura reaccional com acetato de etilo, lavou-se a fase orgânica com salmoura e secou-se sobre MgSCU anidro. Filtrou-se a solução seca e concentrou-se para dar 398 mg de B—2 (R1 = Me2N-, R8 = CH3, R12 = H) que foi utilizado no passo seguinte sem purificação adicional. I.V. (solução, CDC13) 3490, 2950, 2800, 1608, 1516, 1436, 1345, 1216, 943, 840 cirf 1} RMN-1H (250 MHz, CDC13) δ 7,00 (d, 2, J = 8,7 Hz, ArH), 6,62 (d, 2, J = 8,7 Hz, ArH), 4,39 (s, 1, OH C5) , 4,21 (d, 1, J = 5,9 Hz, H Ciia), 3,90-4, 02 (m, 4, (OCH2)2), 2,89 (s, 6, N(CH3)2), 2,13 (s, 3, ON=C-CH3), 0,61 (s, 3, H Ci8) . 3' , 4' -di-hidro-ΙΙβ-[4-(N,N-dimetilamino)fenil]-5'-metil-l'-oxo-espiro[estra-4,9-άϊθη-17β,2'(2'H)-pirrole]-3-ona [B-3 (R1 = 4-Me2N-, R8 = CH3, R12 = H) . A uma solução de 398 mg (0,76 mmol) de B-2 (R1 = Me2N-, R8 = CH3, R12 = H) em 40 ml de CH2C12, adicionaram-se 2 ml de água. Arrefeceu-se a solução até 0°C. À solução arrefecida adicionaram-se gota a gota cerca de 4 ml de TFA. Agitou-se a mistura reaccional a 0°C durante 1 h. Extinguiu-se a reacção com solução saturada de bicarbonato de sódio e extraiu-se com CH2C12. Lavou-se a fase de CH2C12 com água, seguida de salmoura e secou-se sobre MgS04 anidro. Filtrou-se a solução seca e concentrou-se sob vácuo. Cromatografou-se o produto em bruto em silica gel utilizando diclorometano/hexano/metanol 7:3:0,3 como eluente 49
ΕΡ 1 082 338 /PT para dar 251 mg de B-3 (R1 = Μβ2Ν-, R8 = CH3, R12 = H) puro.
Conseguiu-se uma purificação adicional em HPLC preparativa numa coluna C-18 de fase reversa utilizando 50% de acetonitrilo e água. RMN-1H (250 MHz, CDCI3) δ 7,03 (d, 2, J = 8,7 Hz, ArH), 6,81 (d, 2, J = 8, 7 Hz, ArH), 5,78 (s, 1, H C4), 4,33 (d, 1, J = 6,4 Hz, H C„a) , 2,94 (s, 6, N(CH3)2), 2,13 (s, 3, ON=C-CH3) , 0,66 (s, 3, H Cis) ; espectro de massa, m/z (intensidade rei.) 458 (19), 442 (28), 134 (100), 121 (40), 96 (11); Análise Cale. para C30H38N2O2.0,25H20: C, 77, 80; H, 8,38; N, 6,05. Encontrada: C, 77,90 ; H, 8,89; N, 5,51.
Exemplo 10. Síntese de ll^-[4-(N,N-dimetilamino)£βηΐ1]-17β-nitro-17a-(l-propinil)estra-4,9-dien-3-ona [C-2 (R1 = 4-Me2N-, R9 = CH3, R12 = H) ] . 11β-[4-(N,N-dimetilamino)fenil]-3,3-[l,2-etanodi-ilbis(oxi)]-5<x-hidroxi-l^-nitro-17a-(1-propinil) estr-9-eno [C-l (R1 = 4-Me2N-, R9 = CH3, R12 = H) ] e 3,3-[1,2-etanodi-ilbis (oxi) ]-5a-hidroxi-ΙΙβ- [4- (N-metilamino) fenil] -17β-ηϊίΓθ-17α- (1-propinil)-estr-9-eno [C-l (R1 = 4-MeHN-, R9 = CH3, R12 = H) ] . A uma solução de 2,39 g (4,94 mmol) de composto de nitro A—5 (R1 = 4-Me2N-, R12 = H) em 50 ml de DMSO, sob azoto à temperatura ambiente, adicionaram-se 312 mg (12,4 mmol) de NaH. Após 3,5 h, adicionou-se uma solução de 4,89 g (14,8 mmol) de tributil(1-propinil)estanho (preparado por analogia com Pinhey, J.T.; Maloney, M.G.; Roche, E.G. "The a-Alk-1-ynylation of β-Dicarbonyl Compounds and Nitronate Salts by Alk-l-ynyl-lead Triacetates". J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1, 333 (1989)) em 7,0 ml de DMSO rapidamente a uma solução de 6,59 g (14,8 mmol) de Pb(OAc)4 a 99,99% [ProChem Chemical Co. ; antes da sua utilização, agitou-se in vacuo à temperatura ambiente durante 3 h e manuseou-se estritamente sob azoto (para remover todos os vestígios de ácido acético)] em 35 ml de DMSO à temperatura ambiente. Após 30 segundos, à mistura de Sn-Pb resultante adicionou-se rapidamente a solução de nitronato escura anterior, originando um aquecimento moderado. Após 40 minutos, adicionaram-se EtOAc e 400 ml de uma solução aquosa saturada de NH4CI 1:1. Após agitação vigorosa, separou-se a fase aquosa e extraiu-se três vezes com EtOAc. Agitaram-se as soluções orgânicas combinadas com KF aquoso, filtrou-se, separou-se, lavou-se duas vezes com salmoura, secou-se sobre Na2S04, filtrou-se e removeu-se praticamente todo o solvente sob pressão reduzida, proporcionando um óleo castanho ligeiramente viscoso. Sem mais demora, a cromatografia do óleo (50% de EtOAc em hexanos) proporcionou o propino C—1 (R1 50
ΕΡ 1 082 338 /PT = 4-Me2N-, R9 = CH3, R12 = Η) (646 mg, 25% de rendimento) como uma espuma amarela. RMN-1H (250 MHz, CDCI3) δ 7,03, 6,62 (ABq, 4, J = 8,8 Hz), 4,49 (s, 1), 4,29 (s largo, 1), 4,03-3,93 (m, 4), 2,90 (s, 6), 2,89 (m, 1), 1,93 (s, 3), 0,369 (s, 3). A eluição adicional da coluna deu o derivado mono-N-metilado [C-l (R1 = 4-MeHN-, R9 = CH3, R12 = H) ] (497 mg, 20% de rendimento). RMN-1H (250 MHz, CDC13) δ 6,99, 6,50 (ABq, 4, J = 8,6 Hz), 4,49 (s largo, 1), 4,28 (s largo, 1), 4,02 (m, 4), 3,65 (s largo, 1), 2,89 (m, 1), 2,78 (s, 3), 1,92 (s, 3), 0,377 (s, 3) . 11 β— [4— (N, N-dimetilamino) fenil] -17β-η^Γθ-17α- (1-propinil) -estra-4,9-dien-3-ona [C-2 (R1 = 4-Me2N-, R9 = CH3, R12 = H) ] . A uma mistura vigorosamente agitada de 300 mg (0,576 mmol) de C-l (R1 = 4-Me2N-, R9 = CH3, R12 = H) , 9,3 ml de CH2C12 e 0,52 ml de água a 0°C, adicionaram-se gota a gota 0,78 ml (10,1 mmol) de ácido trifluoroacético. Após 45 minutos de agitação vigorosa a 0°C, adicionou-se cuidadosamente solução aquosa saturada de NaHCCq, e agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 2 h. Separou-se a fase aquosa e extraiu-se três vezes com EtOAc. Lavaram-se as soluções orgânicas combinadas duas vezes com salmoura, secou-se sobre Na2SC>4, filtrou-se e removeu-se o solvente sob pressão reduzida. A cromatografia do resíduo em sílica gel (45% de EtOAc em hexanos) proporcionou o composto C-2 (R1 = 4-Me2N-, R9 = CH3, R12 = H) >97% puro (análise por HPLC) (178,5 mg, 68% de rendimento). A partir de fracções posteriores da coluna obteve-se composto C-2 (R1 = 4-Me2N-, R9 = CH3, R12 = H) com uma pureza ligeiramente inferior a 97% (26,4 mg, 10% de
rendimento). RMN-1H (250 MHz, CDC13) δ 7,00, 6,64 (ABq, 4, J = 8,6 Hz), 5,77 (s, 1), 4,40 (d, 1, J = 6,0 Hz), 2,90 (s, 6), 1,94 (s, 3), 0,442 (s, 3). MS m/z (intensidade rei.) 458 (M+, 53), 413 (14), 263 (25), 134 (55), 121 (100). Anál. Cale. para C2gH34N203.0,25H20: C, 75,21; H, 7,51; N, 6,05. Encontrada: C, 75,17; H, 7,49; N, 5,98.
Exemplo 11. Síntese de 11β-(4-acetilfenil)-17α-β^ηί1-17β-nitroestra-4,9-dien-3-ona [C-2 (R1 = 4-CH3CO-, R9 = R12 = H) ] . 3,3-[1,2-etanodi-ilbis(oxi)]-11β-{4-{1,1-[1,2-etanodi-il-bis (oxi) ] etil}fenil}-5α-ΙιίάΓθχί-17<χ-ε^ηί1-17β-η^Γθβ3^-9-eno [C-l (R1 = 4-CH3C (OCH2) 2—, R9 = R12 = H) ] . A uma solução de 1000 mg (1,90 mmol) de composto de nitro A-5 (R1 = 4-CH3C (OCH2) 2-, R12 = H) em 20 ml de DMSO à temperatura ambiente 51
ΕΡ 1 082 338 /PT sob azoto, adicionaram-se de uma vez 101 mg (4,00 mmol) de NaH, originando a libertação de gás e uma coloração castanha opaca. Após 1,2 h, adicionou-se rapidamente uma solução de 1,68 ml (5,70 mmol) de tributil(etinil)estanho (Aldrich Chemical Co. ) em 8 ml de DMSO a uma solução de 2,53 g (5,70 mmol) de Pb(OAc)4 a 99,99% [ProChem Chemical Co.; antes da utilização misturou-se sucessivamente três vezes com tolueno seco, evaporou-se sob pressão reduzida e encheu-se outra vez com azoto (para remover todos os vestígios de ácido acético)] em 10 ml de DMSO sob azoto à temperatura ambiente. Após 30 segundos, à mistura de Sn-Pb resultante adicionou-se rapidamente a solução de nitronato escura anterior, originando um aquecimento moderado. Após 22 h, adicionaram-se 200 ml de uma solução aquosa saturada de NH4C1 1:1, seguindo-se a adição de EtOAc. Após agitação vigorosa, separou-se a fase aquosa e extraiu-se três vezes com EtOAc. Lavou-se a solução orgânica castanha combinada duas vezes com salmoura, secou-se sobre MgS04, filtrou-se e removeu-se o solvente sob pressão reduzida para proporcionar um óleo castanho. Cromatografou-se o produto em bruto sem demora em sílica gel (55% de EtOAc em hexanos) para proporcionar o produto de etinilo C-l (R1 = 4-CH3C (OCH2) 2-, R9 = R12 = H) (586 mg, 56% de rendimento) . RMN-1H (250 MHz, CDCI3) δ 7,34, 7,16 (ABq, 4, J = 8,1 Hz), 4,45 (s, 1), 4,38 (d, 1, J = 4,4 Hz), 4,11-3,77 (m, 8), 3,05 (m, 1), 2,79 (s, 1), 1,62 (s, 3), 0,34 (s, 3). 11 β—(4-acetilfenil)-17a-etinil-17p-nitroestra-4,9-dien-3-ona [C-2 (R1 = 4-CH3CO-, R9 = R12 = H) ] . A uma mistura rapidamente agitada de 75,0 mg (0,136 mmol) do álcool C-l (R1 = 4-CH3C (OCH2) 2-, R9 = R12 = H) , 3,6 ml de CH2C12 e 0,06 ml de H20 a 0°C, adicionaram-se gota a gota 0,58 ml de TFA, originando uma coloração amarela brilhante. Após 20 minutos, adicionou-se solução aquosa saturada de NaHC03 e separou-se a fase aquosa e extraiu-se três vezes com EtOAc. Lavou-se a solução orgânica combinada com salmoura, secou-se sobre
MgS04, filtrou-se e removeu-se o solvente sob pressão reduzida. Cromatografou-se o resíduo em sílica gel (50% de EtOAc em hexanos) para proporcionar C-2 (R1 = 4-CH3CO-, R9 = R12 = H) (38,3 mg, 64% de rendimento). RMN-1H (500 MHz, CDC13) δ 7, 88, 7, 28 (ABq, 4, J = 8,4 Hz), 5,82 (s, 1), 4,53 (s, 1), 3,06 (dt, 1, J = 3,0, 12 Hz), 2,84 (s, 1), 2,57 (s, 3), 0,41 (s, 3) . 52
ΕΡ 1 082 338 /PT
Exemplo 12. Síntese de 11β-(4-acetilfenil)-17β-η±^ο-17α-(1-propinil)-estra-4,9-dien-3-ona [C-2 (R1 = 4-CH3CO-, R8 = CH3, R12 = H) ] . 3,3-[1,2-etanodi-ilbis(oxi)]-11β-{4-{1,1-[1,2-etanodi-il-bis(oxi)]etil}fenil}-5a-hidroxi-17p-nitro-17a-(1-propinil)-estr-9-eno [C-l (R1 = 4-CH3C (OCH2) 2-, R9 = CH3/ R12 = H) . A uma solução de 1000 mg (assumidos 1,90 mmol) de composto de nitro A-5 (R1 = 4-CH3C (OCH2) 2~r R12 = H) impuro em 20 ml de DMSO à temperatura ambiente sob azoto, adicionaram-se 101 mg (4,00 mmol) de NaH numa porção, originando a libertação de gás e uma coloração escura preta/verde. Após 1,6 h, a uma solução de 1,88 ml (5,70 mmol) de tributil(l-propinil)estanho (preparado por analogia com Pinhey, et al., 1989) em 6 ml de DMSO, adicionou-se uma solução de 2,53 g (5,70 mmol) de Pb(0Ac)4 a 99,99% [ProChem Chemical Co.; antes da utilização misturou-se sucessivamente três vezes com tolueno seco, evaporou-se sob pressão reduzida, e encheu-se outra vez com azoto (para remover todos os vestígios de ácido acético) ] em 14 ml de DMSO sob azoto à temperatura ambiente. Após 35 segundos, à mistura de Sn-Pb resultante adicionou-se rapidamente a solução de nitronato escura anterior, originando um aquecimento moderado. Após 24 h, adicionaram-se 200 ml de uma solução aquosa saturada de NH4C1 1:1, seguida pela adição de EtOAc. Após agitação vigorosa, separou-se a fase aquosa e extraiu-se três vezes com EtOAc. Lavou-se a solução orgânica castanha combinada duas vezes com salmoura, secou-se sobre MgS04, filtrou-se e removeu-se o solvente sob pressão reduzida para proporcionar um óleo castanho. Cromatografou-se o produto em bruto sem demora em sílica gel (55% de EtOAc em hexanos), e depois cromatografou-se uma segunda vez em sílica gel (55% de EtOAc em hexanos) para proporcionar o produto de 1-propinilo C—1 (R1 = 4-CH3C (OCH2) 2-, R9 = CH3, R12 = H) (161 mg, 15% de rendimento). RMN-1H (250 MHz, CDC13) δ 7,33, 7,16 (ABq, 4, J = 8,2 Hz), 4,50 (s, 1), 4,38 (s largo, 1), 4,10-3,74 (m, 8), 2,98 (m, 1), 1,93 (s, 3), 0,32 (s, 3). 11 β—(4-acetilfenil)-17β-ηϊ^ο-17α-(1-propinil)estra-4,9-dien-3-ona [C-2 (R1 = 4-CH3CO-, R9 = CH3, R12 = H) ] . A uma mistura bem agitada de 161 mg (0,286 mmol) de C-l (R1 = 4-CH3C (OCH2) 2-, R9 = CH3, R12 = H), 7,6 ml de CH2C12 e 0,13 ml
de H20 a 0°C, adicionaram-se gota a gota 0,5 ml de TFA 53
ΕΡ 1 082 338 /PT originando um ligeiro escurecimento da mistura reaccional. Após 1 h, adicionou-se solução aquosa saturada de NaHC03 com agitação vigorosa. Adicionaram-se água e EtOAc, separou-se a fase aquosa, e extraiu-se três vezes com EtOAc. Lavou-se a solução orgânica combinada três vezes com solução aquosa saturada de NaHC03, duas vezes com salmoura, secou-se sobre MgS04, filtrou-se e removeu-se o solvente sob pressão reduzida. A cromatografia do residuo em silica gel (53% de EtOAc em hexanos) deu o composto alvo C-2 (R1 = 4-CH3CO-, R9 = CH3, R12 = H) (104 mg, 79% de rendimento). RMN-1H (250 MHz, CDC13) δ 7, 88, 7,29 (ABq, 4, J = 8,4 Hz), 5,82 (s, 1), 4,52 (s largo, 1), 2,97 (m, 1), 2,57 (s, 3), 1,95 (s, 3), 0,38 (s, 3).
Exemplo 13. Síntese de 11β-[4-(N,N-dimetilamino)fenil]- 3',4'-di-hidro-1'-oxo-espiro[estra-4,9-dien-17p,2' (2' H) -pirrole]-3-ona [B-3 (R1 = 4-Me2N-, R8 = R12 = H) ] . 11β-[4-(N,N-dimetilamino)fenil]-3,3-[1,2-etanodi-ilbis (oxi) ] -5a-hidroxi-17a- (propan-3-al) -17β-ηί^οβ3^-9-βηο [B-l (R1 = Me2N-, R8 = R12 = Η)]. A 0,500 g (0,883 mmol) do éster A-5 (R1 = 4-Me2N-, R7 = (CH2)2COOMe, R12 = H) dissolvidos em 2,0 ml de tolueno e mantido sob uma atmosfera de azoto a -78°C, adicionaram-se gota a gota 0,97 ml de uma solução de DIBAL-H 1 M em hexano. Após 1 h, adicionaram-se outros 1,7 ml de DIBAL-H e agitou-se a mistura a -78°C durante 30 minutos. Extinguiu-se a reacção por adição de 0,24 ml de metanol em 0,4 ml de tolueno seguindo-se a adição de 0,13 ml de água em 0,22 ml de metanol. Agitou-se a mistura reaccional durante 30 minutos e depois filtrou-se através de
Celite. Concentrou-se o filtrado e cromatografou-se o aldeído em bruto em sílica gel usando EtOAc/hexano 1,5:1 para dar 456 mg de B-l (R1 = Me2N-, R8 = R12 = H) puro com 96% de rendimento. RMN-1H (250 MHz, CDC13) δ 8,76 (s, 1, CHO) , 7,04 (d, 2, J = 8,7 Hz, ArH), 6,63 (d, 2, J = 8,7 Hz, ArH), 4,35 (s, 1, OH C5), 4,28 (d, 1, J = 6,6 Hz, H CUa) , 3,95 (m, 4, 0(CH2)2), 3, 93-4, 02 (m, 2, CH2OH) , 2,90 (s, 6, N(CH3)2), 0, 40 (s, 3, H C18) . 3',4'-di-hidro-11β-[4-(N,N-dimetilamino)fenil]-3,3-[1,2-etano-bis (oxi) ]-5a-hidroxi-l'-oxo-espiro[β8ίΓ-9-βηο-17β, 2' (2Ή)-pirrole] [B—2 (R1 = 4—Me2N—, R8 = R12 = H) ] . Preparou-se uma solução do aldeído B-l (R1 = Me2N-, R8 = R12 = H) (0, 400 g, 0,74 mmol) em 4,0 ml de etanol aquoso a 50% e 2,0 ml de THF. Adicionaram-se a esta 64 mg (1,19 mmol) de cloreto de amónio 54
ΕΡ 1 082 338 /PT e 304 mg (4,65 mmol) de pó de zinco. Agitou-se a mistura reaccional de um dia para o outro e adicionaram-se outros 304 mg de Zn e 64 mg de cloreto de amónio e continuou-se a agitação durante 24 h. Filtrou-se a mistura reaccional através de Celite e concentrou-se o filtrado. Cromatografouse o produto em bruto em sílica gel por eluição com diclorometano/hexano/metanol 5:5:1 para dar 293 mg (78% de rendimento) de B-2 (R1 = 4-ΜΘ2Ν-, R8 = R12 = H) puro; RMN-1H (250 MHz, CDC13) δ 7,00 (d, 1, J = 8,4 Hz, ArH), 6,98 (s, 1, ON=CH), 6,62 (d, 2, J = 8,8 Hz, ArH), 4,40 (s, 1, OH C5) , 4,21 (d, 1, J = 6,4 Hz, H Clla), 3,93-4, 02 (m, 4, (OCH2)2), 2,88 (s, 6, N(CH3)2), 0,62 (s, 3, H Ci8) . 3' , 4'-di-hidro-ΙΙβ-[4-(N,N-dimetilamino)fenil]-1'-oxo-espiro—[estr—4,9—dien—17β,2' (2 Ή)—pirrole]—3—ona [B-3 (R1 = 4-Me2N-, R8 = R12 = H) ] . A uma solução de 12 0 mg (0,23 mmol) de B-2 (R1 = 4-Me2N-, R8 = R12 = H) em 2,5 ml de CH2C12, adicionou-se 0,1 ml de água e arrefeceu-se a mistura até 0°C. À solução arrefecida adicionaram-se gota a gota cerca de 0,5 ml de TFA. Agitou-se a mistura reaccional a 0°C durante 1 h. Extinguiu-se depois a reacção com solução saturada de bicarbonato de sódio, e extraiu-se com CH2C12. Lavou-se a fase de CH2C12 com água, seguida de salmoura e secou-se sobre MgS04 anidro. Filtrou-se a solução seca e concentrou-se sob vácuo. Cromatografou-se o produto em bruto em sílica gel utilizando diclorometano/hexano/metanol 5:5:1 como eluente para dar 79 mg (76% de rendimento) de B—3 (R1 = 4-Me2N-, R8 = R12 = H) puro. RMN-1H (250 MHz, CDC13) , δ 7,00 (s, 1, ON=CH), 6,96 (d, 2, J = 8,4 Hz, ArH), 6,63 (d, 2, J =
8,9 Hz, ArH), 5,77 (s, 1, H C4) , 4,34 (d, 1, J = 6,8 Hz, H
Cna), 2,90 (s, 6, N(CH3)2) , 0,70 (s, 3, H Cis) ; espectro de massa, m/z (intensidade rei.) 444 (43), 428 (62), 278 (12), 134 (86), 121 (100), 91 (12); Anál. Cale. para C29H36N202.1, 25H20: C, 74, 40; H, 8,50; N, 5,98. Encontrada: C, 74, 56; H, 8,50; N, 5,43.
Exemplo 14. Síntese de 3',4'-di-hidro-5'-metil-1'-οχο-11β-[4-(Ν,Ν-piperidino)fenil-espiro[estra-4,9-άχβη-17β, 2'(2' H) -pirrole]-3-ona [B-3 (R1 = 4-(N-piperidino) , R8 = R12 = H) ] . 11β—[4—(N-piperidino)fenil]-3,3-[1,2-etanodi-ilbis(oxi)]-5a-1ιίάΓθχί-17β-ηί^ο-17α- (3-oxobutil) -estr-9-eno [B-l (R1 = 4-(N-piperidino)-, R8 = CH3, R12 = H) ] . Agitou-se uma solução de 0, 750 g (1,44 mmol) de A-5 (R1 = 4-(N-piperidino)-, R12 = H) , 416 mg (7,175 mmol) de KF e 462 mg (1,43 mmol) de n- 55
ΕΡ 1 082 338 /PT
Bu4NBr em 3,5 ml de DMSO durante 30 minutos à temperatura ambiente. Depois, adicionaram-se gota a gota 0,14 ml (2,87 mmol) de metilvinilcetona e agitou-se a mistura durante 1 h. Diluiu-se a mistura reaccional com água e extraiu-se com acetato de etilo. Lavou-se a fase orgânica com água, seguida de salmoura e secou-se sobre MgS04 anidro. Filtrou-se depois a fase orgânica, concentrou-se e cromatografou-se o produto em bruto em silica gel usando hexano/acetato de etilo 1:1 para dar 0,74 g (87% de rendimento) de B-l (R1 = (N-piperidino)-, R8 = CH3, R12 = H) . RMN-1H (250 MHz, CDC13) δ 7,04 (d, 2, J = 8,5 Hz, ArH) , 6,81 (d, 2, J = 8,7 Hz, ArH) , 4,32 (s, 1, OH C5) , 4,32 (d largo, 1, H Cna) , 3, 93-4,00 (m, 4, (OCH2) 2) , 3,09 (t, 4, N(CH2)2), 2,17 (s, 3, COCH3) , 0,37 (s, 3, H Cie) · 3',4'-di-hidro-3,3-[1,2-etanodi-ilbis(oxi)]-5<x-hidroxi-5' -metil-1'-oxo-11β-[4-(N-piperidino)fenil]-espiro[estr-9-eno-17β, 2' (2' H) -pirrole] [B-2 (R1 = 4-(N-piperidino)-, R8 = CH3, R12 = H)]. Preparou-se uma solução da cetona B-l (R1 = 4-(N-piperidino)-, R8 = CH3, R12 = H) (0, 740 g, 1,25 mmol) em 5,0 ml de etanol aquoso a 50% e 2,5 ml de THF. A esta solução, adicionaram-se 56 mg (1,04 mmol) de cloreto de amónio e 283 mg (4,42 mmol) de pó de zinco. Agitou-se a mistura reaccional de um dia para o outro e adicionaram-se outros 283 mg de Zn e 56 mg de cloreto de amónio e continuou-se a agitação durante 8 h. Filtrou-se a mistura reaccional através de Celite e concentrou-se o filtrado. Cromatografouse o produto em bruto em silica gel por eluição com EtOAc/MeOH 5:1 para dar 670 mg (96% de rendimento) de B-2 (R1 = 4-(N-piperidino)-, R8 = CH3, R12 = H) puro. RMN-1H (250 MHz, CDC13) δ 6,99 (d, 2, J = 8,6 Hz, ArH), 6,8 (d, 2, J = 8,6 Hz, ArH), 4,39 (s, 1, OH C5), 4,18 (d, 1, J = 7,8 Hz, H Clla) , 3, 93-4, 02 (m, 4, (OCH2)2), 3,08 (t largo, 4, N(CH2)2), 2,05 (s, 3, ON=C-CH3), 0,60 (s, 3, H Cis) . 3',4'—di—hidro—5'—metil—1'—oxo—11β—[4—(N-piperidino)fenil]-espiro[estr-4,9-άϊβη-17β,2'(2'H)-pirrole]-3-ona [B-3 (R1 = 4-(N-piperidino)-, R8 = CH3, R12 = H) . Dissolveu-se o cetal B-2 (R1 = 4-(N-piperidino)-, R8 = CH3, R12 = H) (3,87 g, 6,9 mmol) em 25 ml de CH2C12. Adicionou-se a esta 1,0 ml de água e arrefeceu-se a mistura até 0°C. À solução adicionou-se gota a gota cerca de 5,0 ml de TFA. Agitou-se a mistura reaccional a 0°C durante um período de 1 h durante o qual esta mudou de cor-de-rosa acastanhado para amarelo-claro. 56
ΕΡ 1 082 338 /PT
Após agitação durante outros 30 minutos, extinguiu-se a reacção com solução saturada de bicarbonato de sódio, e extraiu-se com CH2CI2. Lavou-se a fase orgânica com água, seguida de salmoura e secou-se sobre Na2SC>4 anidro. Filtrou-se a solução seca e concentrou-se sob vácuo. Cromatografouse o produto em bruto em sílica gel utilizando EtOAc/MeOH 5:1 como eluente para dar 1,67 g de B—3 (R1 = 4-(N-piperidino)-, R8 = CH3, R12 = H) puro e outros 1,04 g de material ligeiramente impuro com um rendimento global de 78%. RMN-1H (250 MHz, CDC13) δ 6,96 (d, 2, J = 8,5 Hz, ArH) , 6,80 (d, 2, J = 8,6 Hz, ArH), 5,77 (s, 1, H C4) , 4,32 (d, 1, J = 6,1 Hz, H Ciia), 3,08 (t largo, 4, N(CH2)2), 2,09 (s, 3, ON=C-CH3) , 0,68 (s, 3, CH3 Cis) ; espectro de massa, m/z (intensidade rei.) 498 (49), 481 (54), 320 (22), 174 (100), 161 (40); Anál. Cale. para C3oH38N202.1, 75H20: C, 74, 75; H, 8,65; N, 5,28. Encontrada: C, 74,76; H, 8,56 ; N, 5,26. A actividade biológica dos compostos deste invento foi examinada através de testes in vitro e in vivo.
Ligação a receptor; A afinidade dos compostos por receptores de hormona para progestinas e glucocorticóides de coelhos foi determinada por procedimentos padrão similares aos descritos em C. E. Cook, et al., Human Reproduction, Volume 9, suplemento 1, págs. 32-39 (1994). No entanto, a fonte do receptor de glucocorticóide foi o timo do coelho fêmea imatura iniciada com estrogénio. A afinidade dos compostos pelo receptor de hormona de progesterona de humano foi determinada por procedimentos padrão similares aos descritos em Horwitz, et ai., Cell, 28: 633-42 (1982) e Mockus, et ai., Endocrinology, 110: 1564-71 (1982). O receptor foi obtido em citosol a partir de células de mama T-47D de humano e utilizou-se [3H]-R5020 como o radioligando. Homogeneizaram-se células T47D (1 bilião/ml) em tampão TEDG (Tris 10 mM, EDTA 1,5 mM, ditiotreitol 1 mM, molibdato de sódio 1 mM, e glicol a 10%) usando um pilão A Dounce, e centrifugou-se o homogeneizado a 34 000 x g durante 1 hora. Armazenou-se o sobrenadante a -80°C. Combinou-se uma alíquota da preparação de receptor com composto de teste, [3H]-R5020 0,4 nM, e tampão TEDG até um volume final de 150 μΐ e incubou-se durante 4 horas a 4°C em placas de microtitulação. No final da incubação, adicionaram-se ao 57
ΕΡ 1 082 338 /PT incubado 40 μΐ de polietilenoglicol a 40% e 15 μΐ de globulina gama de humano a 1% e colheram-se os conteúdos de cada poço para tapetes de filtro B de espessura dupla (Wallac LKB) utilizando um equipamento de colheita TomTec. Aplicou-se uma película de cera cintilante Meltilux aos tapetes de filtro secos e contaram-se os tapetes num contador de cintilação para determinar a inibição da ligação de [3H]-R5020. Os resultados são expressos como valores de IC50, i.e., a concentração de composto que inibe a ligação de radioligando em 50%. A Tabela 1 mostra que compostos do presente invento se ligam fortemente ao receptor de progestina mas com graus de afinidade variáveis. Digna de nota é a razão de afinidade surpreendentemente elevada pelo receptor de progestina em comparação com o receptor de glucocorticóide. Estes compostos são vantajosos na diminuição ou eliminação dos efeitos antiglucocorticóides associados com antiprogestinas conhecidas tais como a mifepristona. A Tabela 2 mostra que a afinidade elevada pelo receptor de progestina de coelho se estende também ao receptor de humano.
Foram também realizados testes celulares e em animais para caracterizar adicionalmente a actividade biológica dos compostos do invento.
Determinação da actividade progestacional e anti-progestacional em células humanas:
Incubaram-se células de mama T-47D de humano cultivadas em meios nutrientes com a progestina padrão R5020 sozinha ou com R5020 mais composto de teste, e depois avaliaram-se por procedimentos padrão quanto à proliferação utilizando a incorporação de [3H]-timidina como medida. A Tabela 3 mostra os resultados destes ensaios. Os dados da actividade de antiprogestina estão expressos como a EC50, i.e., a concentração de composto que inibe a proliferação mediada por R502 0 0, 15 nM em 50%. É também apresentada a % de inibição máxima (uma medida da eficácia dos compostos). No formato de agonista deste ensaio, testaram-se os compostos em concentrações na gama de 0,01 a 10 nM e a % de estimulação máxima para qualquer dose é listada na Tabela 3. Neste ensaio, pode-se observar que alguns dos compostos exibem uma actividade antiprogestacional potente, mas que 58
ΕΡ 1 082 338 /PT existe também alguma actividade agonista associada a estes.
Determinação da actividade progestacional e anti-progestacional in vivo:
Determinaram-se a actividade progestacional e a actividade antiprogestacional em coelhos através do teste de McGinty (composto de teste sozinho, procedimento de McGinty et al., Endocrinology, 24: 829-832 (1939)) ou do teste anti-McGinty (composto de teste mais progesterona, procedimento de Tamara et al., Jpn. J. Fértil Steril 24: 48-81 (1979)). Os resultados foram pontuados de acordo com McPhail (McPhail, J. Physiol., 83: 146 (1934)). Estes são procedimentos padrão conhecidos dos peritos na especialidade. Os resultados destes ensaios são apresentados nas Tabelas 4 (actividade agonista) e 5 (actividade antagonista). Pode-se observar que um dos compostos de nitrona (II, R1 = 4-Me2N-, X = 0, R6 = R12 = H, R8 = CH3) , que exibiu uma separação excelente de afinidade de receptor de progestina e receptor de glucocorticóide, era uma a antiprogestina potente no ensaio anti-McGinty. Outros compostos, tais como ο I (R1 = 4-CH3CO-, X = 0, R6 = R12 = H, R7 = CC-CH3) , exibiram um perfil misto (agonista / antagonista) . 0 composto I (R1 = 4-Me2N-, X = 0, R6 = R12 = H, R7 = CC-CH3) era uma antiprogestina potente quando administrado oralmente a coelhos fêmeas imaturas iniciadas com estrogénio em conjunto com progesterona subcutânea no ensaio anti-Clauberg e pontuados pelo índice de McPhail (McPhail, J. Physiol., 83: 146 (1934)).
Os compostos de lip-aril-173-nitro do presente invento ligam-se com boa afinidade ao receptor de progestina (Tabelas 1 e 2) e possuem actividade antiprogestacional in vitro (Tabela 3) ou in vivo (Tabela 5) . Os compostos de 17,17-espironitrona do invento não apenas se ligam fortemente ao receptor de progestina (Tabela 1) e demonstram actividade antiprogestacional (Tabela 5), mas também se ligam fracamente ao receptor de glucocorticóide (Tabela 1), diminuindo assim acentuadamente a probabilidade de terem actividades de glucocorticóide ou antiglucocorticóides significativas. 0 último tem um efeito secundário significativo com antiprogestinas actuais tais como a mifepristona. 59
ΕΡ 1 082 338 /PT
Tabela 1. Ligaçao de receptor (Coelho)
Afinidade de ligação relativa a Estru tura R1 R12 X R5 R7 R8 rPR rGR Razão PR/GR Afinidade relativa (progesterona) Afinidade relativa (de x ame t a z 0 n a) II 4-Me2N H 0 H - ch3 157 2 78,5 II 4-CH3CO H 0 H - ch3 21 - - I 4-Me2N H 0 H -CC-CH3 - 55 36 1,5 I 4-Me2N H 0 H ch=chch2oh - 56 16 3,5 I 4-Me2N H 0 H - (CH2) 3oh - 170 74 2,3 I 4-CH3C0 H 0 H -CC-CH3 - 153 20 7,7 I 4-CH3CO H 0 H ch=chch2oh - 26 4 6,5 I 4-CH3CO H 0 H - (CH2) 3oh - 53 3 17,7 I 4-MeS H 0 H ch=chch2oh - 32 - - I 4-MeS H 0 H - (CH2) 3oh - 61 3 20,3 I 4-MeS(0) H 0 H - (CH2) 3oh - 23 <2 >10 a Os valores são determinados ou dexametasona = 100 (para o em relação à progesterona = 100 (para receptor de glucocorticóide) 0 receptor de progestina)
Tabela 2 . Ligaçao de receptor (Humano) Estru tura R1 R12 X R6 R7 R8 Afinidade de ligação relativa hPR IC50 <nM) II 4-Me2N H 0 H - ch3 10,2 II 4-Me2N H 0 H - H 18 I 4-Me2N H 0 H - (CH2) 3oh - 4, 1 I 4-CH3CO H 0 H -CC-CH3 - co 0 I 4-CH3C0 H 0 H ch=chch2oh - 26,1 I 4-CH3CO H 0 H - (CH2) 3oh - 16
Tabela 3. Actividade de células T47D Proliferação celular Estru tura R1 R12 X R5 R7 R8 Formato de antagonista Agonista EC50 (nM) % de inibição % de estimulação I 4-Me2N H 0 H - (CH2) 3OH - 12 89 33 I 4-CH3CO H 0 H -CC-CH3 - 3,3 90 35 I 4-CH3CO H 0 H ch=chch2oh - 122 86 52 I 4-CH3CO H 0 H - (CH2) 3oh - 175 96 41
Tabela 4. Actividade progestacional Ensaio de McGinty Estru- i R1 tur a (Agonista; R12 X R6 R7 R8 Dose (microgramas) 0,3 3 índice McPhail 30 Veiculo 0 Padrão (Progesterona) 2,45±0,14 II 4-Me2N H 0 H - ch3 0±0 0 + 0 0+0 II 4-Me2N H 0 H - H 0±0 0 + 0 0+0 I 4-Me2N H 0 H - (CH2) 3OH - 0±0 0+0 0, 03+0,057 I 4-CH3CO H 0 H -CC-CH3 - 0,13±0,12 1,33+0,35 0, 97+0,75 I 4-CH3CO H 0 H ch=chch2oh - 0±0 0 + 0 0+0 I 4-CH3CO H 0 H - (CH2) 3oh - 0+0 0+0 0+0 60
ΕΡ 1 082 338 /PT
Tabela 5. Actividade antiprogestacional
Ensaio anti-McGinty (Antagonista) Dose (microgramas) 0,3 3 30 Estru tura R1 R12 X R5 R7 R8 índice McPhail Veículo 0 Padrão (Progesterona) 2,45±0,14 II 4-Me2N H 0 H - ch3 2,03±0,14 1,9±0,85 0±0 II 4-Me2N H 0 H - H 2,0±0,11 1,83±0,2 0,23±0,23 I 4-Me2N H 0 H - (CH2) 3oh - 1,83±0,48 1,87±0,98 0,43±0,31 I 4-CH3CO H 0 H -CC-CH3 - 2,173±0,42 2,47±0,15 0,13+0,12 I 4-CH3CO H 0 H -ch=chch2oh - 1,53±0,68 1,76±0,45 2,3 + 0, 0 I 4-CH3CO H 0 H - (CH2) 3oh - 2,93±0,12 2,43±0,6 1f 60±0r 66
Lisboa,

Claims (14)

  1. ΕΡ 1 082 338 /PT 1/8 REIVINDICAÇÕES 1. Composto esteróide hormonal ou anti-hormonal de estrutura I,
    (*> onde R1 é (R2R3N (O) r)-, onde r é 0 ou 1 e R2 e R3 são cada um independentemente H, Ci_6 alquilo, C3_8 cicloalquilo, C2_6 alcenilo ou C2-6 alcinilo, qualquer dos quais pode estar opcionalmente substituído; ou R1 é
    onde q é 0 ou 1, Y é -(CH2)m- onde m é um inteiro de 0 a 5, ou Y é - (CH2) n-Z-(CH2) p-, onde n é um inteiro de 0 a 2, pé um inteiro de 0 a 2, e Z é um heteroátomo (opcionalmente substituído); e onde os grupos CH2 podem estar opcionalmente substituídos; ou R1 é N-imidazolil-, N-pirrolil-, halo-, HO-, CF3S020-, Ci_6 alquil-0-, Ci_6 alquil-S-, Ci_6 alquil-S (0)-, Ci_6 alquil-S (02)-, Ci-6 alquil-CO-, Ci_6 alquil-CH (OH)-, NC-, HCC-, C6H5CC-, 2'-furil-, 3'-furil-, 2'-tiofenil-, 3 '-tiofenil-, 2 '-piridil-, 3'-piridil-, 4'-piridil-, 2'-tiazolil-, 2'-N-metilimidazolil-, 5' -pirimidinil-, CeH5-, H2C=CH-, C2-6 alquilo ou MeC(=CH2)-; e R12 é H ou halo; ou ΕΡ 1 082 338 /PT 2/8 R1 e R12 combinam-se para formar um anel R4 onde W é CH2, CH, NH, N, O ou S, e R4 é H ou C1-6 alquilo; e X é O ou NOR5, onde R5 é H ou C1-6 alquilo, C3-8 cicloalquilo, C2-6 alcenilo, C2-6 alcinilo, C6-12 arilo ou heteroarilo, qualquer dos quais pode estar opcionalmente substituído; ou X é (Η, Η), (H, OH), (H, OSi (Ci_6 alquilo) 3) OU (H, OCOR5), onde R5 é C1-6 alquilo, C3-8 cicloalquilo, C2-6 alcenilo, C2-6 alcinilo, C6-12 arilo, aralquilo, aralcenilo, aralcinilo, heteroarilo, heteroaralquilo, heteroaralcenilo ou heteroaralcinilo, qualquer dos quais pode estar opcionalmente substituído; ou X é CHfeO— < CH20— onde Y é -(CH2)m- onde m é um inteiro de 0 a 3, ou Y é - (CH2) n-Z-(CH2) P- onde n é um inteiro de 0 a 2, p é um inteiro de 0 a 2 e Z é um heteroátomo (opcionalmente substituído) ou Z é um átomo de carbono substituído com um ou dois grupos Cies alquilo; R6 é H, C1-6 alquilo ou halogéneo; R7 é H, C1-6 alquilo, C2-6 alcenilo ou C2-6 alcinilo, C3-8 cicloalquilo, C6-12 arilo, aralquilo, aralcenilo, aralcinilo, heteroarilo, heteroaralquilo, heteroaralcenilo ou heteroaralcinilo, qualquer dos quais pode estar opcionalmente substituído, e seus sais farmaceuticamente aceitáveis, onde o termo heteroátomo significa oxigénio, azoto, enxofre, silício ou boro, halogéneo significa flúor, cloro, bromo ou iodo e halo significa fluoro, cloro, bromo ou iodo, aralquilo, aralcenilo ou aralcinilo significam um ΕΡ 1 082 338 /PT 3/8 grupo C1-C4 alquilo, C2-C4 alcenilo ou C2-C4 alcinilo portador de um substituinte arilo, heteroarilo significa uma unidade de 5 a 12 átomos não hidrogénio consistindo de uma ou mais estruturas cíclicas que podem estar fundidas ou ligadas em conjunto, que contêm 1 a 5 heteroátomos e que são geralmente aceites pelos peritos na especialidade como possuindo um carácter electrónico aromático, heteroaralquilo, heteroaralcenilo ou heteroaralcinilo significam um grupo C1-C4 alquilo, C2-C4 alcenilo ou C2-C4 alcinilo portador de um substituinte heteroarilo, "opcionalmente substituído" significa não substituído ou substituído com um ou mais heteroátomos e/ou halogéneos e/ou grupos alquilo de 1 a 4 átomos de carbono e/ou grupos alcenilo e/ou alcinilo de 2 a 4 átomos de carbono e/ou grupos cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono e/ou grupos arilo de 6 a 12 átomos de carbono e/ou grupos heteroarilo, e em que o grupo alquilo, alcenilo, alcinilo, cicloalquilo, arilo ou heteroarilo pode estar opcionalmente substituído com um ou mais heteroátomos e/ou halogéneos, onde a substituição pode ocorrer directamente em grupos CH2 de heterociclos de amina cíclica, onde a sua valência o permite, os heteroátomos podem estar substituídos quer dentro da cadeia de carbono quer por ligação a esta por ligações simples ou dupla, em todos os casos onde as considerações de valência e de estereoquímica o permitem, os grupos alquilo, alcenilo, alcinilo e cicloalquilo podem conter ligações duplas ou triplas adicionais e/ou cadeias ramificadas, o grupo R6 em Οε conforme aparece na estrutura pode estar em qualquer das posições α ou β e o grupo β-arilo Cu pode estar substituído por um grupo piridina substituído com grupos R1 e R12 conforme anteriormente descrito. ΕΡ 1 082 338 /PT 4/8
  2. 2. Composto esteróide hormonal ou anti-hormonal de estrutura II,
    onde e R2 e R3 são cada um C3-8 cicloalquilo, C2-6 dos quais pode estar R1 é (R2R3N (0) r)-, onde r é 0 ou 1 independentemente H, Ci_6 alquilo, alcenilo ou C2-6 alcinilo, qualquer opcionalmente substituído; ou R 1 é γ jg·— » xch/ onde q é 0 ou 1, Y é -(CH2)m- onde m é um inteiro de 0 a 5, ou Y é - (CH2) n-Z-(CH2) P-, onde n é um inteiro de 0 a 2, pé um inteiro de 0 a 2, e Z é um heteroátomo (opcionalmente substituído) e onde os grupos CH2 podem estar opcionalmente substituídos; ou R1 é N-imidazolil-, N-pirrolil-, halo-, HO-, CF3SO2O-, C1-6 alquil-0-, Ci-6 alquil-S-, Ci-6 alquil-S (0)-, Ci-6 alquil-S (02)-, C1-6 alquil-CO-, Ci_6 alquil-CH (OH)-, NC-, HCC-, C6H5CC-, 2'-furil-, 3'-furil-, 2'-tiofenil-, 3'-tiofenil-, 2'-piridil-, 3'-piridil-, 4'-piridil-, 2'-tiazolil-, 2'-N-metilimidazolil-, 5'-pirimidinil-, C6H5-, H2C=CH-, C1-6 alquilo ou MeC(=CH2)-; e R12 é H ou halo; ou ΕΡ 1 082 338 /PT 5/8 R1 e R12 combinam-se para formar um anel R4 I
    onde W é CH2, CH, NH, N, 0 ou S, e R4 é H ou Ci_6 alquilo; e X é 0 ou NOR5, onde R5 é H ou Ci-6 alquilo, C3-8 cicloalquilo, C2-6 alcenilo, C2-6 alcinilo, C6-i2 arilo ou heteroarilo, qualquer dos quais pode estar opcionalmente substituído; ou X é (Η, Η), (H, OH), (H, 0Si(Ci-6 alquilo)3) ou (H, OCOR5), onde R5 é Ci_6 alquilo, C3_8 cicloalquilo, C2_6 alcenilo, C2_6 alcinilo, C6-12 arilo, aralquilo, aralcenilo, aralcinilo, heteroarilo, heteroaralquilo, heteroaralcenilo ou heteroaralcinilo, qualquer dos quais pode estar opcionalmente substituído; ou X é ch2o— < ch2o— onde Y é -(CH2)m- onde m é um inteiro de 0 a 3, ou Y é - (CH2) n-Z-(CH2) P- onde n é um inteiro de 0 a 2, p é um inteiro de 0 a 2 e Z é um heteroátomo (opcionalmente substituído) ou Z é um átomo de carbono substituído com um ou dois grupos Ci_ 6 alquilo; R6 é H, C1-6 alquilo ou halogéneo; e R8 é H, C1-6 alquilo, C2-6 alcenilo ou C2-6 alcinilo, C3-8 cicloalquilo, C6-12 arilo, aralquilo, aralcenilo, aralcinilo, heteroarilo, heteroaralquilo, heteroaralcenilo ou heteroaralcinilo, qualquer dos quais pode estar opcionalmente substituído, e seus sais farmaceuticamente aceitáveis, onde o termo heteroátomo significa oxigénio, azoto, enxofre, silício ou boro, halogéneo significa flúor, cloro, bromo ou iodo e halo significa fluoro, cloro, bromo ou iodo, aralquilo, aralcenilo ou aralcinilo significam um grupo C1-C4 alquilo, C2-C4 alcenilo ou C2-C4 alcinilo portador de um substituinte arilo, heteroarilo significa uma unidade ΕΡ 1 082 338 /PT 6/8 de 5 a 12 átomos não hidrogénio consistindo de uma ou mais estruturas cíclicas que podem estar fundidas ou ligadas em conjunto, que contêm 1 a 5 heteroátomos e que são geralmente aceites pelos peritos na especialidade como possuindo um carácter electrónico aromático, heteroaralquilo, heteroaralcenilo ou heteroaralcinilo significam um grupo C1-C4 alquilo, C2-C4 alcenilo ou C2-C4 alcinilo portador de um substituinte heteroarilo, "opcionalmente substituído" significa não substituído ou substituído com um ou mais heteroátomos e/ou halogéneos e/ou grupos alquilo de 1 a 4 átomos de carbono e/ou grupos alcenilo e/ou alcinilo de 2 a 4 átomos de carbono e/ou grupos cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono e/ou grupos arilo de 6 a 12 átomos de carbono e/ou grupos heteroarilo, e em que o grupo alquilo, alcenilo, alcinilo, cicloalquilo, arilo ou heteroarilo pode estar opcionalmente substituído com um ou mais heteroátomos e/ou halogéneos, onde a substituição pode ocorrer directamente em grupos CH2 de heterociclos de amina cíclica, onde a sua valência o permite, os heteroátomos podem estar substituídos quer dentro da cadeia de carbono quer por ligação a esta por ligações simples ou dupla, em todos os casos onde as considerações de valência e de estereoquímica o permitem, os grupos alquilo, alcenilo, alcinilo e cicloalquilo podem conter ligações duplas ou triplas adicionais e/ou cadeias ramificadas, o grupo R6 em C6 conforme aparece na estrutura pode estar em qualquer das posições α ou β, e o grupo β-arilo Cu pode estar substituído por um grupo piridina substituído com grupos R1 e R12 conforme anteriormente descrito.
  3. 3. Esteróide com a estrutura I da reivindicação 1, onde R1-Ph é 4-aminofenilo, 4-(N-metilamino)fenilo, 4-(N,N-dimetil-amino)fenilo, 4-(N-piperidino)fenilo, 4-(N-pirrolidino)fenilo, 4-(N-morfolino)fenilo, l-metilindol-5-ilo ou l-metil-2,3-di-hidroindol-5-ilo; ΕΡ 1 082 338 /PT 7/8 X é Ο, NOH ou NOCH3; R6 é H, CH3, F ou Cl; R7 é H, metilo, etinilo, 1-propinilo, 3-propinilo, 3-hidroxi-propilo, 3-hidroxi-l-propenilo (E- ou Z-) , 3,3,3-trifluro- propin-l-ilo, 3-hidroxipropin-l-ilo, (CH2) 2COOCH3, (CH2) 2COOC2H5, (CH2)2COCH3, CC-C6H5 ou CH2C6H5.
  4. 4. Esteróide de acordo com a reivindicação 2, onde R1-Ph é 4-aminofenilo, 4-(N-metilamino)fenilo, 4-(N,N-dimetil-amino)fenilo, 4-(N-piperidino)fenilo, 4-(N-pirrolidino)fenilo, 4-(N-morfolino)fenilo, l-metilindol-5-ilo ou l-metil-2,3-di-hidroindol-5-ilo); X é O, NOH ou NOCH3; R6 é H, ch3, f ou Cl; co é H, CH3 ou ch2c6h5.
  5. 5. Esteróide de acordo com a reivindicação 1 seleccionado de entre o grupo consistindo de l^-(4-acetilfenil)-17a-(l-propinil) -17β-ηί^οε3^3-4, 9-dien-3-ona; 11β-(4-(N,N- dimetilamino)fenil)-17a-(1-propinil)-17β-nitroestra-4,9-dien-3-ona; 11β-(4-acetilfenil)-17a-(Ε-3-hidroxi-l- propenil)-17β-nitroestra-4,9-dien-3-ona; 11β —(4 — acetilfenil)-17a-(3-hidroxipropil)-17β-nitroestra-4,9-dien-3-ona; 11β —(4-(N,N-dimetilamino)fenil)-17a-(Ε-3-hidroxi-l- propenil) -17β-ηϋηοε3^3-4, 9-dien-3-ona; 11β-(4-(Ν,Ν- dimetilamino) fenil) -17a- (3-hidroxipropil) -17β-ηί^οε3^3- 4,9-dien-3-ona e 17β-ηί^ο-11β-(4-(N-piperidino)fenil)-17a-propinil-estra-4,9-dien-3-ona.
  6. 6. Esteróide de acordo com a reivindicação 2 seleccionado de entre o grupo consistindo de 3',4'-di-hidro-l^-(4-(N,N-dimetilamino)fenil)-5'-meti1-1'-oxo-espiro[estra-4,9-dieno-17β,2'(2 Ή)-pirrole]-3-ona; 3 ',4'-di-hidro-ΙΙβ-(4-(N,N- dimetilamino)fenil)-1'-oxo-espiro[estra-4,9-άίθηο-17β, 2'(2 Ή)-pirrole]-3-ona e 3',4'-di-hidro-ΙΙβ-(4-(N-piperidino)fenil)-5'-meti1-1'-oxo-espiro[estra-4,9-άίεηο-17β,2'(2'H)-pirrole]-3-ona. ΕΡ 1 082 338 /PT 8/8
  7. 7. Composição para tratar terapeuticamente a actividade de progesterona, que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto de acordo com a reivindicação 1 para um fim terapêutico.
  8. 8. Composição de acordo com a reivindicação 7, onde o referido fim terapêutico é o tratamento de endometriose ou de fibromas uterinos.
  9. 9. Composição de acordo com a reivindicação 7, onde o referido fim terapêutico é o amadurecimento cervical preparatório do trabalho de parto e do parto de descendentes.
  10. 10. Composição de acordo com a reivindicação 7, onde o referido fim terapêutico é o controlo ou regulação de fertilidade.
  11. 11. Composição de acordo com a reivindicação 7, onde o referido fim terapêutico é o tratamento de tumores ou cancros.
  12. 12. Composição de acordo com a reivindicação 7, onde o referido fim terapêutico é a terapia de hormonas de substituição.
  13. 13. Composição de acordo com a reivindicação 10, que compreende adicionalmente um composto seleccionado de entre o grupo consistindo de uma prostaglandina, um oxitócico, um estrogénio e uma sua mistura.
  14. 14. Composição para tratar terapeuticamente a actividade de progesterona, que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto de acordo com a reivindicação 2, para um fim terapêutico. Lisboa
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