PT105489B - Dispositivo, método e sistema de fabrico de microcápsulas - Google Patents

Abstract

A PRESENTE INVENÇÃO DESCREVE UM NOVO DISPOSITIVO PARA A FORMAÇÃO DE MICROCÁPSULAS, SENDO BASEADO NA FORMAÇÃO DE MICROGOTAS NO INTERIOR DE UM TUBO DE SILICONE QUE É PERFURADO COM UMA AGULHA NÃO AFIADA COLOCADA NA POSIÇÃO VERTICAL (1). O DISPOSITIVO PRODUZ GOTAS ATRAVÉS DA INJECÇÃO VERTICAL DE UMA MISTURA HIDROFÍLICA POLÍMERO/CÉLULAS NUM FLUXO DE ÓLEO HIDROFÓBICO QUE É MANTIDO HORIZONTALMENTE NUM TUBO DE SILICONE. A INJECÇÃO DA MISTURA POLÍMERO/CÉLULAS NUM FLUXO DE ÓLEO MINERAL RESULTA NA GERAÇÃO DE GOTAS ESFÉRICAS E NA FORMAÇÃO DE UMA EMULSÃO ÁGUA EM ÓLEO DEVIDA À IMISCIBILIDADE DAS DUAS FASES. POSTERIORMENTE, AS MICROGOTAS NA FASE DE ÓLEO SÃO CONVERTIDAS EM MICROCÁPSULAS ESTÁVEIS POR GELIFICAÇÃO NUMA CÂMARA SEPARADA CONTENDO UMA SOLUÇÃO RETICULANTE IÓNICA COM FORÇA IÓNICA E PH FISIOLÓGICOS.A UTILIDADE DAS MICROCÁPSULAS GERADAS PELO DISPOSITIVO DA PRESENTE INVENÇÃO É VIRTUALMENTE ILIMITADA NAS ÁREAS DE MEDICINA REGENERATIVA, LIBERTAÇÃO CONTROLADA DE FACTORES DE CRESCIMENTO OU DE FÁRMACOS.

Description

DISPOSITIVO, MÉTODO E SISTEMA DE FABRICO DE MICROCÁPSULAS

A presente invenção descreve um novo dispositivo para a formação de microcápsulas, sendo baseado na formação de microgotas no interior de um tubo de silicone que é perfurado com uma agulha não afiada colocada na posição vertical (1). 0 dispositivo produz gotas através da injecção vertical de uma mistura hidrofílica polímero/células num fluxo de óleo hidrofóbico que é mantido horizontalmente num tubo de silicone. A injecção da mistura polímero/células num fluxo de óleo mineral resulta na geração de gotas esféricas e na formação de uma emulsão água em óleo devida à imiscibilidade das duas fases. Posteriormente, as microgotas na fase de óleo são convertidas em microcápsulas estáveis por gelificação numa câmara separada contendo uma solução reticulante iónica com força iónica e pH fisiológicos.

A utilidade das microcápsulas geradas pelo dispositivo da presente invenção é virtualmente ilimitada nas áreas de medicina regenerativa, libertação controlada de factores de crescimento ou de fármacos.

DESCRIÇÃO

DISPOSITIVO, MÉTODO E SISTEMA DE FABRICO DE MICROCÁPSULAS

CAMPO DA INVENÇÃO

A presente invenção refere-se ao encapsulamento de agentes bioactivos e células em microcápsulas de hidrogéis com uma distribuição de tamanhos uniforme. Mais especificamente, a invenção refere-se à produção de microgotas constituídas por misturas de polímero/células com tamanho homogéneo, quando injectadas num fluxo de óleo no interior de tubos elásticos.

ESTADO DA TÉCNICA encapsulamento de células vivas no interior de microcápsulas é de grande relevância em cultura celular, terapia celular e aplicações em engenharia de tecidos. A tecnologia de microencapsulamento de células baseia-se na imobilização de células dentro de uma matriz polimérica, geralmente de alginato, envolvida por uma camada de polilisina. As microcápsulas de hidrogel protegem as células encapsuladas das células do sistema imunológico, formando uma barreira gue blogueia a interacção com imunoglobina e glóbulos brancos. As microcápsulas, produzidas com distribuição de tamanho uniforme e forma esférica, podem ser utilizadas como transportadores celulares e podem facilitar a sua administração através de uma injecção com uma seringa. Acresce ainda que as microcápsulas podem proporcionar um ambiente tridimensional adequado para a cultura de células in vitro. Microcápsulas com diâmetro médio compreendido entre 300 e 600 pm são geralmente consideradas óptimas para o encapsulamento de células.

Diferentes métodos de fabrico de microcápsulas têm sido descritos na literatura. Estes métodos incluem a utilização de diferentes sistemas capazes de gerar gotas, tais como a técnica de formação de gotas por extrusão (manual ou com ajuda de uma bomba de seringa) (K. Ohkawa,

T.

Kitagawa,

H.

Yamamoto,

Preparation and characterization of chitosan-gellan hybrid capsules formed by self-assembly at an aqueous solution interface,

Macromol. Mater. Eng., 2004,

289:33-40) processos de electrospray pulverização eléctrica (Y. Fukuia,

T.

Maruyama, Y.

Iwamatsua, A.

Fujiia, T.

Tanakaa,

Y.

Ohmukaia, H.

Matsuyam, Preparation of monodispersed polyelectrolyte microcapsules with high encapsulation efficiency by an electrospray technique,

Coll.

Surf. A,

2010, 370 (1-3) : 28-34) ; técnicas de co-extrusão (ponta de co-extrusão) (Μ. V. Sefton, J.R. Hwang, J. E.

Babensee,

Selected aspects of microencapsulation of mammalian cells in HEMA-MMA. Bioartif. Organs, 1997, 831: 260-270) ou ainda dispositivos com maior grau de sofisticação como os

G.-B. Lee, Micro-droplet formation utilizing microfluidic flow focusing and controllable moving-wall chopping techniques.

J. Micromec. Microeng.,

2006, 16:2403-2410) .

Embora possam ser preparadas cápsulas com algum grau de sucesso usando os métodos acima referidos, a maioria apresenta diversos problemas e limitações, tais como dificuldade em controlar o diâmetro da microcápsula e em gerar cápsulas com óptima combinação de propriedades em termos de estabilidade, permeabilidade, biocompatibilidade, entre outras. Os dispositivos de microfluidicos surgiram recentemente como novo método de encapsulamento. Estes dispositivos têm sido aplicados na formação de regimes de fluxo em sistemas multi-fásicos de água em óleo contendo gotas monodispersas. (S. Abraham, Y. H. Park, J. K. Lee, C. S. Ha, I. Kim, Micro fluidic synthesis of reversibly swelling porous polymeric microcapsules with controlled morphology. Adv. Mater., 2008, 20:2177-2182) . Recentemente, a tecnologia de microfluidicos tem sido aplicada no encapsulamento de células animais em microcápsulas de polissacarídeos. (L. Capretto, S. Mazzitelli, G. Luca, C. Nastruzzi, Preparation and characterization of polysaccharidic microbeads by a microfluidic technique: Application to the encapsulation of Sertoli cells. Acta Biomater., 2010, 6:429-435).

fabrico de dispositivos de microfluidicos é, por outro lado, bastante laborioso e requer técnicas de microfabricação sofisticadas. Nestas técnicas, usa-se tipicamente um substrato de silício cristalino, ou lâmina de vidro, que é revestido com um polímero fotosensível (fotoresistência) . Aplica-se uma máscara, contendo um determinado padrão desenhado na micro-escala, sobre a fotoresistência seguido de uma exposição de feixe de electrões ou radiação UV. Finalmente, procede-se a uma processo de decapagem do substrato para obter microcanais com uma profundidade reprodutível. 0 substrato decapado deverá ser perfurado de modo a permitir a entrada e saída de fluidos, sendo os tubos conectores montados nas perfurações feitas no substrato. Tem havido enorme interesse no desenvolvimento de métodos de encapsulamento que sejam rápidos, fáceis de manusear, reprodutíveis e que permitam simultaneamente um controlo sobre as propriedades das microcápsulas.

dispositivo de tubos da presente invenção não requer todas as etapas de microfabricação e perfuração descritas para obtenção dos dispositivos de microfluídicos. 0 tubo elástico usado na presente invenção, disponível comercialmente numa ampla gama de diâmetros internos, garante regimes de escoamento convenientes. Este dispositivo de tubos exige apenas a montagem de uma parte central e uma agulha com ponta não afiada apoiada num suporte colocado na posição vertical. 0 dispositivo quando montado é bastante flexível e pode ser ligado a bombas peristálticas e de seringa por tubos conectores. A presente invenção é bastante adequada para aplicações à escala laboratorial e piloto.

transplante de células encapsuladas em microesferas ou microcápsulas é uma abordagem promissora para o tratamento de doenças metabólicas e endócrinas (F. Lim, A. M. Sun, Microencapsulated Islets as bioartificial endocrine pancreas, Science, 1980, 210:908-910; Μ. V. Sefton, F17. T. K. Stevenson, Microencapsulation of live animal cells using Polyacrylates, Adv. Polym. Sei., 1993, 107:143-197) .

Microcápsulas para encapsulamento de células vivas têm também aplicações nas áreas de cultura de células in vitro e engenharia de tecidos. Existe um interesse considerável na produção de microcápsulas ou microesferas de tamanho uniforme para encapsular células vivas. Para uma utilização clínica ou de laboratório bem sucedida, a microcápsula deverá ser produzida com uma distribuição de tamanho estreita e morfologia esférica. Preferivelmente, os dispositivos de produção de microcápsulas deverão ser reutilizáveis, de fácil limpeza e esterilizáveis por técnicas convenientes, tais como autoclavagem.

Recentemente, a tecnologia de microfluídicos tem providenciado métodos alternativos para preparar microcápsulas com morfologia controlada e tamanho uniforme. A maioria dos sistemas de micofluídicos foi concebida para aplicação em encapsulamento de fármacos. Nos últimos anos tem havido diversos estudos referindo esta técnica para encapsulamento de células. Contudo, a complexidade dos procedimentos de microfabricação usados na preparação destes sistemas poderá limitar a sua utilização prática em aplicações de microencapsulamento celular.

objectivo da presente invenção é o desenvolvimento de um dispositivo para encapsulamento de células baseado na formação de microgotas constituídas por misturas de polímero/células quando injectadas num fluxo cruzado de óleo que circula num tubo estreito. 0 dispositivo é autoclavável e produzido com materiais biocompatíveis; a sua configuração permite uma fácil conexão a bombas de seringa e peristáltica, seringa adequada e respectivos conectores/adaptadores.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

A presente invenção refere-se a um dispositivo para microencapsulamento baseado na geração de microgotas dentro de um tubo através da injecção de uma mistura de polímero-hidrogel num fluxo de óleo. 0 dispositivo pode produzir microgotas com uma distribuição de tamanhos estreita em condições de injecção constante de misturas de polímero/células ou polímero/agente bioactivo num fluxo de óleo, mantidos por uma bomba de seringa e peristáltica, respectivamente.

gerador de microgotas descrito é capaz de dispensar uma solução de polímero num fluxo de óleo através de uma agulha hipodérmica com ponta não afiada posicionada verticalmente no centro do tubo. A junção estável da agulha no local de punção do tubo é assegurada por um suporte da agulha elástico que pode fixar a agulha na posição vertical e fixá-la ao tubo de forma firme.

gerador de microcápsulas para encapsulamento de agentes bioactivos é composto por uma plataforma, tubos elásticos, agulha hipodérmica com ponta não afiada, suporte da agulha e adaptadores para a seringa e extremidades dos tubos. A plataforma, de preferência feita de poli- (tetrafluoretileno) (PTFE), possui um espaço aberto de forma semi-circular na posição horizontal para segurar e orientar o tubo numa posição recta e duas pinças ajustáveis para fixar o tubo no local. A agulha hipodérmica é inserida até metade do diâmetro do tubo em profundidade, através de um pegueno furo, e a junção agulha/tubo é estabilizada e assegurada pelo suporte da agulha. 0 mencionado suporte da agulha tem uma parte cilíndrica oca gue permite a passagem da agulha através do canal e suporta o encaixe plástico da agulha na parte superior. A parte cilíndrica do suporte da agulha é côncava na parte inferior para permitir um melhor ajuste ao tubo, segurar firmemente o tubo, e assim vedar eficientemente o orifício. Adicionalmente, o suporte da agulha estabiliza o tubo e a agulha, através das suas abas semi-circulares, gue podem ser coladas na superfície do tubo.

A injecção da solução de polímero na agulha hipodérmica é efectuada pela bomba de seringa através de um tubo extensor que é conectado à agulha e seringa através de adaptadores canhão seringa-tubo e tuboseringa, respectivamente.

A perfusão de óleo para a entrada do tubo, que é fixado numa plataforma horizontal, é feita através de uma bomba peristáltica. A saída do tubo é conectada a um vaso colector que contém uma solução de gelificação com um agente emulsificante para a formação de microcápsulas. A solução no recipiente colector pode ser agitada durante o processo de gelificação usando um agitador magnético convencional.

Agentes superficiais activos biocompativeis, como o Tween-80®, podem ser utilizados na solução gelificante para impedir a agregação das microgotas da mistura polimero/células quando saem da parte terminal do tubo e entram em contacto com a solução gelificante. De acordo com a presente invenção, uma solução de polímero com capacidade de formar um gel é utilizado para formar microcápsulas que podem encapsular vários materiais. 0 material deverá ter um tamanho suficientemente pequeno para ser adequado no encapsulamento através do método de formação de gotas descrito na presente invenção, mas cujo diâmetro poderá variar desde menos de 100 micrómetros até vários milímetros. Um dos aspectos mais relevantes da presente invenção é a possibilidade do dispositivo gerar microgotas com distribuição de tamanho uniforme e controlado. O presente processo permite que células viáveis sejam encapsuladas em microcápsulas. Deste modo, será reconhecido que o processo desta invenção é particularmente adequado para uso em encapsulamento de materiais biológicos. Por conseguinte, uma das modalidades preferidas da presente invenção enquadra-se no contexto do encapsulamento de materiais biológicos. Os materiais biológicos a serem encapsulados poderão ser tecidos, organelos, células vegetais ou animais, bactérias, entre outros. A presente invenção utiliza uma linha celular de condrócitos de rato (células ATDC5) nas experiências de encapsulamento de células. As células a encapsular não se limitam apenas a células condrocíticas, mas poderão incluir outro tipo de células, como culturas primárias (ilhéus pancreáticos, hepatócitos, fibroblastos, osteoblastos, condrócitos articulares, células estaminais mesenquimais) bem como outras linhas celulares estabelecidas.

polímero formador de gel pode ser qualquer polímero não tóxico, solúvel em água que deverá gelificar quando em contacto com uma solução indutora de gelificação (solução de iões multivalentes ou polímeros carregados - polímeros polielectrólitos). 0 polímero formador de gel poderá ser um polissacarídeo solúvel em água. Polissacarídeos adequados incluem alginato de sódio, goma de guar, goma arábica, carragenina, pectina, goma xantana, goma gelana, quitosano. Após o contacto com a solução indutora de gelificação, as moléculas de polissacarídeo formam uma membrana de gel insolúvel em água com forma de microcápsula. Outros polissacarídeos incluem, por exemplo, ácido hialurónico, sulfato de condroitina, sulfato de dextrano, heparina, sulfato de heparina, heparan-sulfato. Estes polímeros podem formar cápsulas por complexação entre polímeros polielectrólitos. Os polímeros com capacidade de formar géis que podem ser usados com a presente invenção não se limitam apenas a soluções aquosas de polímeros hidrofílicos, mas também podem ser utilizados polímeros anfifílicos com propriedades de auto-organização molecular em soluções fisiológicas. Além disso, polímeros hidrofóbicos solúveis em solventes orgânicos podem ser usados no dispositivo da presente invenção, bastando ter uma solução aquosa imiscível na fase contínua nos tubos de modo a obter uma emulsão do tipo óleo em água.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

Figura 1 ilustra uma projeção isométrica do dispositivo de tubos para formação de microgotas mostrando o dispositivo com as suas partes montadas e separadas.

Figura 2 ilustra o corte de secção da parte central do dispositivo numa vista frontal, onde a agulha é inserida no tubo e vedada pelo suporte da agulha.

Figura 3 ilustra o dispostitivo de encapsulamento, incluindo o sistema de tubos que geram as microcápsulas, conjuntamente com os dispositivos de perfusão de óleo por uma bomba peristáltica e injecção da mistura polímero/células através de uma bomba de seringa.

Figura 4 apresenta uma fotografia de microscopia de fluorescência de células (linha celular de condrócitos de rato ATDC5) encapsuladas em microcápsulas de carboximetilxantana mostrando que as células encapsuladas se mantêm viáveis após 21 dias de cultura.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO aparelho microencapsulador (1) é composto principalmente por um tubo horizontal (5) e uma agulha vertical (7) suportados por uma plataforma de tubos (2) e suporte da agulha (6), respectivamente.

A parte vertical do presente dispositivo consiste num suporte da agulha (6), agulha com ponta não afiada (7) e um adaptador (8) gue conecta o canhão da agulha (parte plástica colorida com sistema de encaixe universal) e um tubo extensor (9). Na extremidade do tubo extensor, o adaptador tubo-seringa (10) faz a conexão com a seringa (11) gue é montada numa bomba de seringa (12). O tubo horizontal, no gual a agulha é inserida, é suportado por uma plataforma (2). A plataforma contém um canal aberto semi-circular (3) e pinças ajustáveis (4) para fixação do tubo na forma extendida e horizontal. Para esterilização do dispositivo por procedimentos convenientes de autoclavagem, podem ser seleccionados materiais de tetrafluoroetileno (PTFE) para a plataforma e elastómero de silicone resistente ao calor (Novosil®) para o tubo. O diâmetro do tubo e o calibre da agulha podem variar de acordo com as necessidades específicas do processo de encapsulamento. Os exemplos descritos utilizam tubos de 1 mm de diâmetro interno e seringa de calibre 21G para produzir microgotas de soluções viscosas de polissacarídeos com diâmetros próximos de 400 pm, proporcionando um encapsulamento de células estável. O tamanho das microgotas poderá ser reduzido usando uma agulha de menor calibre e tubo com menor diâmetro interno. Por outro lado, o tamanho das microgotas poderá ser aumentado pelo processo reverso.

A agulha de ponta não afiada é inserida no tubo horizontal através do suporte da agulha. A inserção da agulha pode ser facilitada fazendo um orifício estreito (menor que o diâmetro da agulha) através de punção do tubo antes de inserida. A agulha pode-se mover facilmente no centro do tubo, através do alargamento do orifício no suporte da agulha e parede do tubo, dado que são usados materiais elásticos. Este método de inserção veda fisicamente a agulha no local de inserção. Após inserção, o suporte da agulha pode ser colocado à volta do tubo para melhor fixação. 0 suporte da agulha tem dupla função: fixa a agulha em posição vertical, evitando o seu deslocamento do local de punção e proporciona uma vedação eficaz no tubo, evitando fuga de líquidos. A vedação é mais eficiente se for aplicada uma camada de cola de silicone nas abas do suporte da agulha previamente à inserção da agulha no tubo. Por conseguinte, a disposição das abas em torno do tubo e a cura da cola de silicone permite uma vedação permanente em torno do local de punção.

tubo extensor (9) permite uma conexão flexível entre a seringa (11) que é montada numa bomba de seringa (12) e a agulha (7), usando adaptadores Luer macho (8) e fêmea (10) . Ao permitir uma operação fácil de conexão da seringa ao encaixe plástico da agulha, serão evitados possíveis deslocamentos e danos da montagem.

óleo mineral bioinerte, que pode ser autoclavado, é guardado estéril num frasco de vidro (13) que é montado com uma agulha de pipetagem com um encaixe do tipo Luer e uma membrana de filtro (0.22 pm) na sua tampa para manter a pressão atmosférica no frasco em condições estéreis. O óleo é bombeado para fora do reservatório e levado para o dispositivo de tubos através de uma bomba peristáltica com batentes ajustáveis usando tubos estéreis (15). As tensões de corte geradas dentro do dispositivo de tubos actuam na extremidade da agulha, formando as microgotas compostas por polímero/células. As microgotas em óleo podem ser transportadas até ao frasco colector (17) com a solução indutora de gelificação usando um tubo largo e inerte (de preferência PTFE) (16) que garante uma interacção mínima da micro-gota com a superfície. As microgotas gelificam quando saem do tubo e entram na solução indutora de gelificação. A agitação deverá ser suficiente mas moderada de modo a evitar a agregação das microcápsulas gelifiçadas. Nesta etapa, uma agitação mais drástica poderá danificar as paredes prematuras das microcápsulas formadas, em particular quando são utilizadas barras magnéticas para agitar. O uso de agentes biocompatíveis emulsificadores, como Tween 80®, a baixas concentrações, impede a agregação das microcápsulas na solução indutora de gelificação. A composição da solução indutora de gelificação poderá variar, dependendo do método de gelificação pretendido (como por exemplo técnicas de reticulação iónica, complexação iónica ou gelificação por auto-organização molecular). A solução de gelificação pode ser preparada numa concentração adequada usando sais divalentes, como o CaCÍ2, para polímeros aniónicos. É essencial que a força iónica da solução reticulante seja mantida à concentração iónica fisiológica (NaCl 0.9%) e pH 7.4 para assegurar a viabilidade das células encapsuladas.

A solução poli-iónica deverá ser constituída por um electrólito de carga oposta à do polielectrólito das microcápsulas. A reacção de complexação ocorre quando os polímeros de cargas opostas reagem (com por exemplo interacções polissacarídeo-polissacarídeo, polissacrídeoproteínas/péptidos). No caso de complexação de péptidos/proteínas com polissacarídeos, o pH deverá ser ligeiramente inferior ao ponto isoeléctrico, enquanto o pH do polissacarídeo deverá ser mantido a pH fisiológico. A solução indutora de gelificação para biopolímeros com propriedades de auto-organização molecular poderá ser qualquer tipo de solução fisiológica (como por exemplo, solução tampão fosfatada salina ou meio de cultura celular), que deverá induzir a formação de gel por processos de auto-organização molecular.

A descrição desta invenção é complementada com os seguintes exemplos que visam proporcionar uma melhor compreensão da mesma. Contudo, estes exemplos não deverão ser tratados com uma natureza restritiva.

Exemplo 1 - Este exemplo demonstra a preparação de microcápsulas por reticulação iónica do biopolímero polianiónico (carboximetilxantana - derivado da goma xantana) na presença de contra-iões. Neste método, a mistura de bioactivo (suspensão de células ATDC5 contendo 5% de carboximetilxantana) é do dispositivo de formação de gotas gelificante contendo 1.5% CaCl₂ e 0.9% Ca²⁺ reticulam a matriz de quase instantaneamente um esferas são depois tratadas superfície externa das apresentam forma pm (Figura 4) .

material cultura através solução catiões formando esfera. As para reforçar microcápsulas médio de 500 celular Live/Dead assay que as células permanecem 21 dias em cultura.

das em meio de extrudida para uma NaCl. Os carboximetilxantana gel na forma de com poli-L-lisina microcápsulas. As esférica com um diâmetro Um teste de viabilidade células encapsuladas mostra viáveis nas microcápsulas até

Exemplo 2 - Este exemplo demonstra um método moderado de encapsulamento de células desencadeado pela autoorganização molecular de um polímero anfifílico composto por um polissacarídeo aniónico (goma xantana) conjugado com um grupo hidrofóbico de ácido palmitico. Neste método, a mistura de material de células

ATDC5 em meio de cultura contendo 1% de palmitoil-xantana) extrudida através do dispositivo de formação de gotas para uma solução tampão fosfatada salina. Nesta solução, as gotas de palmitoil-xantana auto-organizam-se na forma de cápsula.

As microcápsulas formadas são ocas sendo depois tratadas com poli-L-lisina para reforçar a sua superfície externa.

As microcápsulas apresentam forma esférica com um diâmetro médio de 450 pm. A capacidade das microcápsulas de palmitoil-xantana para manter a viabilidade e proliferação das células encapsuladas foi confirmada pelos testes de AlamarBlue® e quantificação do ácido desoxirribonucleico (ADN) das células .

Lisboa, de Janeiro de 2011

Claims (6)

1. REIVINDICAÇÕES

   1. Dispositivo de micro-encapsulamento caracterizado por compreender um tubo elástico horizontal (5) suportado por uma plataforma de tubos (2) e uma parte vertical contendo um suporte da agulha (6), uma agulha não afiada na extremidade (7) e um adaptador (8) que deverá estar conectado entre o canhão (encaixe plástico) da agulha e o tubo extensor (9), estando a dita agulha (7) inserida no tubo horizontal através do mencionado suporte da agulha (6) que permite uma vedação estanque entre o tubo perfurado e a agulha através das suas abas fixadas com cola de silicone contendo um agente de cura.
2. 2. Dispositivo de micro-encapsulamento de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por ter uma plataforma (2)

   para alinhar o tubo na posição horizontal com um canal semi- -aberto (3) e fixação por duas pinças (4) em cada lado da mencionada plataforma para manter o tubo esticado e na posição horizontal.
3. 3.

   Dispositivo de micro-encapsulamento de acordo com as reivindicações 1 e

   2, caracterizado por compreender um tubo extensor (9) que permite uma operaçao fácil e a ligaçao entre a seringa (11) montada numa bomba de seringa (12) e uma agulha inserida no tubo horizontal através de um suporte da agulha (6) sendo a conexão do tubo extensor à agulha e seringa realizada com o adaptador canhão seringa-tubo (8) e adaptador de tuboseringa (10), respectivamente, permitindo um mínimo de distorção no dispositivo montado (1) que necessita da agulha em posição vertical e sem problemas de vedação entre o tubo e o suporte da agulha.
4. 4. Dispositivo de micro-encapsulamento de acordo com as reivindicações anteriores, caracterizado por gerar microgotas no dispositivo de tubos que são transportadas em tubos de PTFE e libertadas numa solução gelificante com agente emulsificante sob agitação moderada em condições fisiológicas.
5. 5. Dispositivo de micro-encapsulamento, de acordo com as reivindicações anteriores, caracterizado pelo facto dos seus principais componentes serem fabricados com matérias inertes, biocompatíveis e autoclaváveis, permitindo um fácil e rápido processo de esterilização.
6. 6. Método de preparação de microcápsulas, caracterizado por formação de gotas obtidas através da injecção vertical de uma mistura hidrofílica de polímerohidrogel/células num fluxo hidrofóbico de óleo, mantido horizontalmente no tubo de silicone do dispositivo descrito na reivindicação 1, em que a injecção da mistura polímero/célula numa corrente de óleo mineral resulta na formação de gotas esféricas e de emulsões de água em óleo, sendo as ditas gotas numa fase de óleo convertidas em microcápsulas estáveis por gelificação numa câmara separada contendo uma solução reticulante iónica com força iónica e pH fisiológicos.

   Lisboa, 18 de Março de 2011