PT100367A - Metodo para o tratamento de infeccoes provocadas por hiv-1 em mamiferos utilizando um derivado de purina e composicoes farmaceuticas contendo esse derivado - Google Patents

Description

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Este invento diz respeito a um método de tratamento de infecções provocadas por HIV-1 em seres humanos e em animais, e à utilização de compostos na preparação de um medicamento para utilização no tratamento de tais infecções. A EP-A-242482 (Beecham Group p.l.c.) revela o ' BRL 44385, o composto de fórmula (A): 0

(A) ho(ch2)3o e os seus sais, como agentes antivirais.

Os pró-medicamentos do composto de fórmula (A) revelado na EP-A-242482 têm a fórmula (B):

X

H0(CH2)30 e os seus sais e derivados, tal como são definidos no âmbito da fórmula (A); em que X representa C1_g alcoxi, NH2 ou hidrogénio. Pró-medicamentos alternativos apresentam-se sob a forma de derivados acetal da cadeia lateral, descritos na EP-A-413544 (Beecham Group p.l.c.), em especial 2-amino-9-[3-(isopropoximeto-xi)propoxi)purina, que corresponde ao composto BRL 55792. O composto de fórmula (A) e os seus derivados foram já descritos como sendo úteis no tratamento de infecções provocadas por vírus do tipo herpes, tais como vírus herpes simplex tipo l, herpes simplex tipo 2, "varicella-zoster" e Epstein-Barr.

Descobriu-se agora que este composto possui uma activi-dade potencial contra o vírus da imunodeficiência humana ("human immunodeficiency virus" ou HIV-1) em doentes infectados também com vírus do tipo herpes, tendo por isso uma utilização potencial no tratamento de infecções provocadas por HIV em tais doentes.

Esta descoberta está relacionada com a capacidade do derivado trifosfato de BRL 44385 para inibir a actividade RNA-di-rigida da polimerase de DNA (transcriptase reversa) do vírus da imunodeficiência humana tipo 1 (HIV-1). A transcriptase reversa de HIV-1 é uma enzima codificada pelo vírus essencial para a conversão do RNA genómico em ds-DNA pró-viral, sendo, por conseguinte, um excelente alvo molecular para a quimioterapia antivi-ral. A capacidade de HIV para penetrar em células previamen-te infectadas com vírus do tipo herpes é conhecida (por exemplo, i B-linfõcitos infectados com EBV ). A presença simultânea de vírus do tipo herpes e de imunodeficiência humana na mesma célula tem consequências específicas. 1. BRL 44385 seria fosforilado por quinase de timidi-na codificada pelo vírus do tipo herpes, proporcionando um nível elevado de trifosfato de BRL 44385. 0 trifosfato formado consti tui não apenas uma agente inibidor da polimerase de DNA do vírus do tipo herpes, mas este trabalho indica que ele inibe também a transcriptase reversa de HIV. 5

2. A replicação de HIV pode ser fomentada por facto-res de transactivação de vírus do tipo herpes. Um produto de HSV, ICP-4 ("infected cell protein", proteína de célula infectada) pode alimentar a iniciação da transcrição de HIV. 3. A dupla infecção por vírus do tipo herpes e HIV pode resultar numa mistura de características fenotípicas e na produção de partículas "pseudotipo" HIV possuindo glicoproteínas no invólucro de vírus do tipo herpes . Pensa-se que também ocorre o envolvimento de RNA genómico de HIV por proteínas de cápside de HSV. Qualquer uma destas situações pode dar origem â infecção por HIV de células CD4-negativas, permissivas relativamente a vírus do tipo herpes, que não eram previamente susceptí-veis à entrada daquele vírus. Isto pode igualmente dar origem a células duplamente infectadas.

Em conformidade, o presente invento proporciona um método de tratamento de infecções provocadas por HIV-1-em mamíferos, incluindo seres humanos, método esse que inclui a administração ao mamífero necessitando de tal tratamento de uma dose eficaz de um composto de fórmula (A):

H0(CH2)30 ou de um pró-medicamento, ou de um sal farmaceuticamente aceitável, de qualquer um dos anteriormente referidos.

Exemplos de pró-medicamentos, sais farmaceuticamente aceitáveis e derivados são tal como são descritos nas Patentes 6

Europeias atrás referidas, cujos conteúdos são aqui incluídos a título de referência.

Pró-medicamentos específicos que apresentam interesse são tal como são descritos na EP-A-413544. 0 composto de fórmula (A), pró-medicamentos, sais e derivados podem ser preparados tal como se indica nas Patentes Europeias atrás referidas. 0 composto pode ser administrado por via oral a seres humanos e pode ser formulado sob a forma de xarope, comprimidos ou cápsula. Quando formulado sob a forma de um comprimido, qualquer suporte farmaceuticamente aceitável para a formulação de tais composições sólidas pode ser usado, por exemplo estearato de magnésio, amido, lactose, glucose, arroz, farinha e giz. 0 composto pode também ser formulado sob a forma de uma cápsula ingerível, por exemplo de gelatina, para conter o composto, ou sob a forma de um xarope, solução ou suspensão. Os suportes farmacêuticos líquidos adequados incluem álcool etílico, glicerina, solução salina e água aos quais podem ser adicionados agentes aromatizantes ou corantes para a formação de xaropes.

Com a finalidade de proceder a administração por via parentérica, preparam-se doses unitárias fluidas contendo a composto e um veículo estéril. 0 composto, em função do veículo e da concentração, pode ser suspenso ou dissolvido. As soluções parentéricas são normalmente preparadas dissolvendo o composto num veículo e esterilizando por meio de um filtro antes de encher um frasco ou ampola adequados e de selar estes. Há vantagem em dissolver também no veículo adjuvantes tais como um anestésico local, conservantes e agentes-tampão. A fim de melhorar a 7

estabilidade, a composição pode ser congelada ápós enchimento dos frascos e a água pode ser removida sob vácuo.

As suspensões parentéricas são preparadas de um modo substancialmente idêntico com a excepção de que o composto é suspenso no veículo em vez de ser dissolvido e esterilizado por | exposição a óxido de etileno antes da suspensão no veículo estéril. Há vantagem na inclusão de um agente surfactante ou molhante na composição, a fim de facilitar a distribuição uniforme do composto do invento. j As formulações parentéricas preferidas incluem formula ções aquosas utilizando água estéril ou solução salina normal.

Tal como é habitual, as composições serão geralmente acompanhadas por indicações escritas ou impressas para serem usadas no tratamento médico em questão.

Uma quantidade eficaz para tratar a infecção virai depende da natureza e gravidade da infecção e do peso do mamífero.

Uma unidade de dosagem adequada pode conter 50 mg a 1 g de ingrediente activo, por exemplo 100 a 500 mg. Essas doses podem ser administradas l a 4 vezes por dia ou, mais comummente 2 ou 3 vezes por dia. A dose eficaz de composto situar-se-á, de um modo geral, na gama de valores entre 0,2 e 40 mg por quilograma de peso corporal por dia ou, mais comummente, entre 10 e 20 mg/kg por dia. O presente invento proporciona também a utilização de um composto de fórmula (A) ou de um pró-medicamento, ou de um sal farmaceuticamente aceitável de qualquer um dos anteriormente δ

referidos, na preparação de um medicamento pãra ser usado no tratamento de infecções provocadas por HIV-1 em mamíferos, incluindo seres humanos, mamíferos esses que estão infectados com vírus do tipo herpes. >

Esse tratamento pode ser levado a cabo do modo atrás descrito. 0 presente invento proporciona ainda uma composição farmacêutica para ser usada no tratamento de infecções provocadas por HIV-1 em mamíferos, incluindo seres humanos, infectados com vírus do tipo herpes, que inclui uma quantidade eficaz de um composto de fórmula (A) ou de um pró-medicamento, ou de um sal farmaceuticamente aceitável de qualquer um dos anteriormente referidos, e um suporte farmaceuticamente aceitável. Essas composições podem ser preparadas do modo atrás descrito. 0 composto de fórmula (A) e os seus pró-medicamentos apresentam um efeito antiviral sinergístico em conjunto com interferons; e os tratamentos recorrendo a produtos de combinação que incluam estes dois componentes para administração sequencial ou simultânea, pela mesma via ou por vias diferentes, estão, por conseguinte, incluídos no âmbito do presente invento.

Deve ter-se em conta que o tratamento de doentes infectados com vírus do tipo herpes pode incluir a profilaxia de ataques episódicos de vírus do tipo herpes (tratamento de supressão) . Em doentes sofrendo apenas de infecção provocada por HIV, o tratamento de supressão seria provavelmente ministrado apenas àqueles doentes que apresentassem recorrências frequentes. pelo contrário, a descoberta atrás referida relativamente a HIV-1 indica a necessidade de tratamento de supressão contínuo com BRL 44385 ou com um pró-medicamento em todos os doentes infectados com HIV-l com recorrências devidas a vírus do tipo herpes, em particular recorrências devidas a HSV-1, HSV-2 e VZV, mesmo que estas recorrências possam ser pouco frequentes. 0 composto de fórmula (A) e os seus pró-medicamentos podem igualmente ser administrados numa combinação com outros agentes antivirais, em especial agentes anti-HIV tais como AZT.

Os dados bioquímicos que se seguem ilustram o invento. DADOS BIOQUÍMICOS

Materiais e Métodos Produtos químicos [ H]dGTP foi adquirido a Amersham International, Aylesbury, Reino Unido. Padrões iniciadores ("template primers")

Poli (rc) . p(dG) 12-18 e Po1^- (dc) * P(dG) X2-18 forain obtidos de Pharmacia Ltd., Milton Keynes, Reino Unido. Trifosfato de BRL 44385 (BRL 44385-TP) foi preparado nos laboratórios de SmithKline Beecham Pharmaceuticals, Great Burgh, Reino Unido.

Transcriotase reversa

Transcriptase reversa ("reverse transcriptase" ou RT) de HIV-l expressa em E. coli e purificada foi fornecida pelo Departamento de Bioquímica das Proteínas de SmithKline Beecham Pharmaceuticals, Upper Merion, E.U.A. A enzima foi armazenada e diluída numa solução-tampão contendo Tris-HCl 50mM (pH 8,0), Hepes 10 mM, NaCl 110 mM, DTT 5,7 mM, EDTA 0,3 mM, Triton X-100 a 0,06%, glicerol a 50%.

Teste de actividade da transcrintase reversa A mistura de reacção para o teste de RT de HIV-1 continha num volume de 120 μΐ: Tris HCl 33 mM (pH 8,0), KC1 100 mM, MgCl2 3,3 mM, ditiotreitol 3,3 mM, glutationa 0,2 mM, EGTA 0,33 mM (ácido etileno-glicol-bis-(éter β-aminoetil) N,N-tetra--acético), Triton X-100 a 0,033%, [3H]dGTP 4,0 μΜ (4,16 Ci/mmol, 16,7 MCi/ml), BRL 44385-TP 0-50 μΜ, 0,3 unidades A260/ml Poli (rC) . P)dG)12-is ou Poli (dC) * P(dG)i2-i8 e 167 n9/ml RT (equivalente a 1,43 nM para uma mistura equimolar de polipéptidos p66 e p51). As misturas de reacção sem RT foram preparadas nas microcavidades de uma placa de 96 cavidades e pré-incubadas a 37°C antes de as reacções terem sido iniciadas mediante a adição de 20 μΐ da solução de enzima. As reacções foram terminadas mediante a adição de 40 μΐ de solução de EDTA (0,2 M, pH 6,5). As misturas de reacção individuais foram transferidas para uma almofada-filtro DEAE ("DEAE filter mat", 1205-405, LKB Wallac, Finlândia), pré-molhada com NaCl 0,3 M/citrato de Na 0,03 M, usando um dispositivo de colheita de células ("cell harvester", 1295-001, LKB Wallac). A almofada-filtro foi lavada por três vezes na solução-tampão NaCl/citrato de Na e depois uma vez em etanol a 95%. Adicionou-se líquido de cintilação (Beta Plate Scint, LKB Wallac) ao filtro seco, e as misturas de reacção foram analisadas relativamente à incorporação de dGMP radioactivo num aparelho LKB 1205 Beta Plate Liquid Scintillation Counter.

Resultados A partir de um gráfico da % de inibição versus concentração do agente inibidor, obtiveram-se valores IC50 aproximados para BRL 44385-TP, como se segue: 11

Experiência 1

Foi usado padrão - iniciador Poli (rC) . p(dG)12_lg ICcn BRL 44385-TP = 3,7 μΜ.

DU ) Experiência 2

Foi usado padrão - iniciador Poli (rC) . P(âG)^2-18 IC_. BRL 44385-TP = 1,9 μΜ.

DU i

Foi usado padrão - iniciador Poli (dC) . p (^G)12-i8 IC5Q BRL 44385-TP =1,2 μΜ.

Conclusão

Estes resultados indicam que a concentração de trifos-fato de BRL 44385 necessária para se obter uma inibição a 50% da transcriptase reversa de HIV-1 usando um padrão de RNA se situa no intervalo de valores 1,9 - 3,7 μΜ. Quando se utilizou DNA como padrão para a transcriptase reversa, o valor ICj-q obtido era de 1,2 μΜ. Estes níveis de BRL 44385-TP deverão ser obtidos em células infectadas com vírus do tipo herpes.

Referências l. Complement Receptor 2 Mediates Enhancement of Human

Immunodeficiency virus infection in Epstein-Barr virus-carrying B cells.

Tremblay et al., J. Exp. med. 171. 1791 (1990). 12 2. Phenotypic mixing between human immunodeficiency virus and vesicular stomatitis virus or herpes simplex virus. Zhu et al.. J. of AIDS, 3, 215 (1990).

Lisboa, 10 de Abril de 1992

J. PEREIRA DA CRUZ

Agente Oficial da Propriedade Industrial RUA VICTOR CORDON, 10-A 3.a 1200 LISBOA

Claims (1)

1. REIVINDICAÇÕES ia - Método de tratamento de infecções provocadas por HIV-1 em mamíferos, estando esses mamíferos infectados com vírus do herpes, caracterizado por compreender a administração ao mamífero necessitando de tal tratamento de uma quantidade eficaz de um composto de fórmula (A):

   ou de uma pró-droga, ou de um sal farmaceuticamente aceitável, éster fosfato e/ou derivado de acilo de qualquer um dos anteriores . 2a - Utilização de um composto de fórmula (A): 2 ο

   ΝΗ ho(ch2)3o (A) ou de uma pró-droga, ou de um sal farmaceuticamente aceitável, éster fosfato e/ou derivado de acilo de qualquer um dos anteriores, caracterizada por o referido medicamento ser empregado na preparação de um medicamento para ser usado no tratamento de infecções provocadas por HIV-1 em mamíferos, estando esses mamíferos infectados com o vírus do herpes. 3a - Composição farmacêutica para ser usada no trata- mento de infecções provocadas por HIV-1 em mamíferos, estando esses mamíferos infectados com o vírus do herpes, caracterizada por compreender um composto de fórmula (A): 0

   H0(CH2)30 (A) ou uma pró-droga, ou um sal farmaceuticamente aceitável, éster fosfato e/ou derivado de acilo de qualquer um dos anteriores, e um veículo farmaceuticamente aceitável. 3 4a - Método, utilização ou composição de acordo com a Reivindicação 1, 2 ou 3, caracterizado por o composto ser BRL 44385, de fórmula (A). 5a - Método, utilização ou composição de acordo com a Reivindicação 1, 2 ou 3, caracterizados por o composto ser uma pró-droga do composto de fórmula (A), tal como se descreve na EP-A-413544 (Beecham Group p.l.c.)· 6a - Método, utilização ou composição de acordo com a Reivindicação 5, caracterizados por a pró-droga do composto de fórmula (A) ser 2-amino-9-(3-(isopropoximetoxi)propoxi)purina, conhecida como BRL 55792. 7a - Método, utilização ou composição de acordo com a Reivindicação 5 ou 6, caracterizados por o medicamento estar adaptado para administração oral. 8a - Método, utilização ou composição de acordo com a Reivindicação 1, 2 ou 3, caracterizados por o composto administrado se encontrar sob a forma de uma dose unitária de 50 mg a 1 g· 9a - BRL 44385, ou um pró-droga para este, caracterizado por se destinar a ser usado em tratamento de supressão continuo em doentes infectados com HIV com recorrências de HSV ou VZV. Lisboa, 10 de Abril de 1992

   J. PEREIRA DA CRUZ Agente Oficial da Propriedade Industrial RUA VtCTOR CORDON, 10-A 3“ 1200 LISBOA